CN114441491B - 一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及蛋白核小球藻技术领域，提出了一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，在植物油条件下利用蛋白核小球藻检测阿特拉津生物毒性，所述植物油为甲基化和乙基化植物油，包括以下步骤：取系列浓度阿特拉津标准液，加入植物油溶液，再加入到蛋白核小球藻藻液中，混匀，控制蛋白核小球藻藻液、植物油溶液和阿特拉津标准溶液的体积比为1：(1‑2)：(1‑2)，经暗置10min后，测定蛋白核小球藻的各叶绿素荧光动力学参数，测定阿特拉津的生物毒性。通过上述技术方案，解决了相关技术中检测阿特拉津生物毒性的方法测定周期长的问题。

Description

一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法
技术领域
本发明涉及蛋白核小球藻技术领域，具体的，涉及一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法。
背景技术
阿特拉津(Simetryn)属均三嗪类除草剂，化学名称为2-甲硫基-4,6二(乙氨基)-1,3,5-三嗪，分子式为C8H15N5S。是1959年由瑞士嘉基(Geigy)公司研发的一种内吸传导型选择性芽前土壤处理剂，能通过杂草根、叶吸收，并传导至植株全身，抑制杂草光合作用，从而达到除草目的。
阿特拉津适用于水稻、玉米、大豆、小麦、花生、棉花等作物田间除草。是内吸选择性除草剂。能通过根、叶吸收并传导全株对稻田恶性杂草眼子菜有特效，对早期稗草、牛毛草均有显著效果，持效期长。目前，阿特拉津残留量的标准检测有国家标准《GB 23200.8-2016水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》。广泛使用阿特拉津不仅会导致植物上的农药残留，而且还会通过食物链积累在人体中，对人体健康有潜在的危害，研究这种除草剂在水稻中的农药残留水平对安全生产有重要意义。
阿特拉津造成污染日益严重，目前检测阿特拉津使用较多的包括化学发光法、伏安法、分光光度法、毛细管电泳、气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC/MS)和高效液相色谱-质谱联用法(HPLC/MS)等，其中，HPLC/MS应用最为广泛。但是，这类方法固有的前处理繁琐、耗时长、辅助试剂用量大、运行费用高和投入大等诸多缺点仍无法克服。更突出的是，传统理化检测法只能定量分析有毒污染物的含量，不能综合反映污染物对环境的生物毒性效应。随着阿特拉津生物毒性检测技术的发展，生物毒性检测方法使用更为广泛。目前使用生物毒性方法是检测除草剂危害的一种综合、筛查型的检测技术，能够直观与全面地反应污染物对生物种群的生物毒性及对环境的综合影响，是污染物监控预警重要技术手段。如今，生物毒性检测除草剂的方法包括鱼类毒性法、蚤类毒性法、发光细菌法和藻生长抑制法等。藻生长抑制法采用微藻作为生物毒性实验材料，藻类具有个体小、繁殖快、易于分离与培养、保存稳定、对除草剂等特定污染物的响应敏感，并可直接观察细胞水平上的中毒症状，该方法测定拉特拉津生物毒性时准确可靠，但是测定周期长。
发明内容
本发明提出一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，解决了相关技术中检测阿特拉津生物毒性的方法测定周期长的问题。
本发明的技术方案如下：
一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，在植物油条件下利用蛋白核小球藻检测阿特拉津生物毒性，所述植物油为甲基化和乙基化植物油。
作为进一步的技术方案，包括以下步骤：取系列浓度阿特拉津标准液，加入植物油溶液，再加入到蛋白核小球藻藻液中，混匀，控制蛋白核小球藻藻液、植物油溶液和阿特拉津标准溶液的体积比为1：(1-2)：(1-2)，经暗置10min后，测定蛋白核小球藻的各叶绿素荧光动力学参数，测定阿特拉津的生物毒性。
作为进一步的技术方案，所述植物油溶液与所述阿特拉津标准液的体积比为1：1、1：2或2：1。
作为进一步的技术方案，所述蛋白核小球藻液为将蛋白核小球藻藻种接种至培养基后置于恒温光照培养箱中培养至对数期得到。
作为进一步的技术方案，所述培养基由以下组分组成：NaNO3 1.5g/L、K2HPO40.04g/L、MgSO4·7H2O 0.075g/L、CaCl2·2H2O 0.036g/L、柠檬酸0.006g/L、柠檬酸铁铵0.006g/L、EDTA 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、H3BO4 2.86g/L、MnCl2·4H2O 1.86g/L、ZnSO4·7H2O 0.22g/L、Na2MoO4.2H2O 0.39g/L、CuSO4·5H2O 0.079g/L、Co(NO3)2·6H2O 0.049g/L、维生素B12 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L。
作为进一步的技术方案，所述恒温光照培养箱的培养条件为：在光照度2000-2500lx、温度25±2℃、湿度75％RH、光暗周期12h：12h的条件下静置培养，所述对数期的蛋白核小球藻，为转接过程中由初始值OD680＝0.1于培养箱中培养生长，随后选定OD680＝1.0即通过显微镜镜检得出藻细胞密度，此时细胞密度范围在(1-1.2)×106ind/mL的蛋白核小球藻藻液浓度作为检测阿特拉津生物毒性的藻的浓度，用于阿特拉津生物毒性的测定。
作为进一步的技术方案，所述测定蛋白核小球藻的各叶绿素荧光动力学参数时，使用荧光光谱仪进行测试，荧光激发波长发射波长为680nm。
作为进一步的技术方案，所述测定阿特拉津的生物毒性时，以培养基代替阿特拉津标准溶液作为空白对照组。
作为进一步的技术方案，所述动力学参数包括PSⅡ最大光能转化效率、PSⅡ实际光能转化效率、光合电子传递效率、光化学淬灭、非光化学淬灭。
作为进一步的技术方案，所述系列浓度的阿特拉津标准液的浓度依次为20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L。
本发明的工作原理及有益效果为：
1、本发明中，利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性，与现有的常规藻类如斜生栅藻、铜绿微囊藻相比，阿特拉津对于蛋白核小球藻的各荧光动力学参数的抑制效果更显著，使得对阿特拉津毒性测定效果更为直观和快速，测定周期更短，采用本发明的检测方法可短时间内检测出水体中残留的痕量阿特拉津，解决了相关技术中检测阿特拉津生物毒性的方法测定周期长的问题。
2、本发明中，利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性，在添加甲基化和乙基化植物油的条件下进行，甲基化和乙基化植物油的加入，增加了阿特拉津与蛋白核小球藻藻液的接触面积，显著提高了阿特拉津对蛋白核小球藻的影响效果，提升了对阿特拉津生物毒性的检测灵敏度，从而更全面、直观的了解阿特拉津的生物毒性。
3、本发明中，利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性，通过叶绿素荧光动力学方法可以快速、灵敏地研究各种逆境对蛋白核小球藻光合生理的影响，通过各种荧光参数的分析，可以得到蛋白核小球藻光合作用的多种信息。
4、本发明中，蛋白核小球藻的培养中，在目前所使用的BG-11培养基的基础上添加维生素B12和维生素B1，可有效提升蛋白核小球藻的生长，从而实现了蛋白核小球藻快速稳定生长，进而为蛋白核小球藻后续用于测定阿特拉津生物毒性提供了便利。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明实施例1阿特拉津对蛋白核小球藻光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)影响曲线；
图2为本发明实施例1阿特拉津对蛋白核小球藻光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))影响曲线；
图3为本发明实施例1阿特拉津对蛋白核小球藻的光合电子传递效率(ETR)影响曲线；
图4为本发明实施例1阿特拉津对蛋白核小球藻的光化学淬灭(qP)影响曲线；
图5为本发明实施例1阿特拉津对蛋白核小球藻的非光化学淬灭(qN)影响曲线；
图6为本发明实施例2阿特拉津对蛋白核小球藻光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)影响曲线；
图7为本发明实施例2阿特拉津对蛋白核小球藻光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))影响曲线；
图8为本发明实施例2阿特拉津对蛋白核小球藻的光合电子传递效率(ETR)影响曲线；
图9为本发明实施例2阿特拉津对蛋白核小球藻的光化学淬灭(qP)影响曲线；
图10为本发明实施例2阿特拉津对蛋白核小球藻的非光化学淬灭(qN)影响曲线；
图11为本发明实施例3阿特拉津对蛋白核小球藻光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)影响曲线；
图12为本发明实施例3阿特拉津对蛋白核小球藻光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))影响曲线；
图13为本发明实施例3阿特拉津对蛋白核小球藻的光合电子传递效率(ETR)影响曲线；
图14为本发明实施例3阿特拉津对蛋白核小球藻的光化学淬灭(qP)影响曲线；
图15为本发明实施例3阿特拉津对蛋白核小球藻的非光化学淬灭(qN)影响曲线；
图16为本发明实施例1、对比例1-2阿特拉津对蛋白核小球藻、斜生栅藻、铜铝微囊藻光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))影响曲线；
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
通过用蛋白核小球藻测定，发现阿特拉津影响蛋白核小球藻的光合作用，通过其对蛋白核小球藻光合作用的影响，可直观反应其在生物体上的毒性表现。
1、材料
藻种：蛋白核小球藻藻种购自中国科学院野生生物质库—淡水藻种库；
仪器：光照培养箱(E-30B0美国Percival)、Water-PAM水样叶绿素荧光仪(Walz，Germany)、荧光显微镜(德国蔡司)、UV-6100S紫外分光光度计；
甲基化和乙基化植物油：即英伏腾，购自澳大利亚维多利亚化学品公司；
2、蛋白核小球藻的培养
选取蛋白核小球藻藻种，于无菌条件下将蛋白核小球藻藻种接种至装有高温高压灭菌培养基的锥形瓶中，接种完成，置于恒温光照培养箱中培养至对数期。光照度为2000～2500lx，温度为25±2℃，湿度为75％RH，光暗周期为12h：12h，静置培养，每日定时摇瓶2-3次，同时更换锥形瓶的位置，使其受光均匀，培养至对数期，备用；
培养基组分如下表：
表1培养基组分
Figure BDA0003487042880000041
Figure BDA0003487042880000051
表2表1中A5(微量元素溶液)组分
Figure BDA0003487042880000052
注：配制好的培养基需用1M NaOH或1M HCl调节pH为7.1。
1M NaOH：取40g NaOH用蒸馏水稀释至1L。
1M HCl：取84mL密度为1.18g/mL用蒸馏水稀释至1L。
3、蛋白核小球藻藻液的制备
将在蛋白核小球藻藻种的培养过程中得到的对数期的蛋白核小球藻，即转接过程中由初始值OD680＝0.1于培养箱中培养生长，随后选定OD680＝1.0即通过显微镜镜检得出藻细胞密度，此时细胞密度范围在(1-1.2)×106ind/ml的蛋白核小球藻藻液浓度作为检测阿特拉津生物毒性的藻的浓度，用于阿特拉津生物毒性的测定。
4、阿特拉津标准液的制备：
20000μg/L阿特拉津储备液：取1ml浓度为100μg/mL阿特拉津标准液，加去离子水稀释至5mL，得到阿特拉津储备液；
200μg/L阿特拉津中间液：取2.0mL阿特拉津储备液于100mL容量瓶中，加去离子水定容，得到阿特拉津中间液；
系列浓度的阿特拉津标准液：分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL阿特拉津中间液于5个10mL容量瓶中，去离子水定容，其阿特拉津浓度分别是20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L。
5、英伏腾溶液的制备
取2.5mL甲基化和乙基化植物油和适量去离子水于烧杯中使用搅拌器混合均匀后倒入100mL容量瓶中，去离子水定容，得到英伏腾溶液。
实施例1
阿特拉津对蛋白核小球藻荧光效应影响的测定：
在蛋白核小球藻生长对数期(即OD680＝1.0)取蛋白核小球藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和培养基按体积比为1：2：1进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定蛋白核小球藻藻液叶绿素荧光动力学参数，包括光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(QN)，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光参数的影响效果。
甲基化和乙基化植物油条件下对蛋白核小球藻荧光效应影响的测定：
在阿特拉津生长对数期(即OD680＝1.0)取蛋白核小球藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和英伏腾溶液按体积比1：2：1进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定藻液叶绿素荧光动力学参数，包括光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(QN)，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光参数的影响效果。
藻液叶绿素荧光动力学参数测试结果见图1-5。
实施例2
在蛋白核小球藻生长对数期(即OD680＝1.0)取蛋白核小球藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和培养基按体积比为1：1：1进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定蛋白核小球藻藻液叶绿素荧光动力学参数，包括光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(QN)，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光参数的影响效果。
甲基化和乙基化植物油条件下对蛋白核小球藻荧光效应影响的测定：
在阿特拉津生长对数期(即OD680＝1.0)取蛋白核小球藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和英伏腾溶液按体积比1：1：1进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定藻液叶绿素荧光动力学参数，包括光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(QN)，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光参数的影响效果。
藻液叶绿素荧光动力学参数测试结果见图6-10。
实施例3
在蛋白核小球藻生长对数期(即OD680＝1.0)取蛋白核小球藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和培养基按体积比为1：1：2进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定蛋白核小球藻藻液叶绿素荧光动力学参数，包括光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(QN)，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光参数的影响效果。
甲基化和乙基化植物油条件下对蛋白核小球藻荧光效应影响的测定：
在阿特拉津生长对数期(即OD680＝1.0)取蛋白核小球藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和英伏腾溶液按体积比1：1：2进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定藻液叶绿素荧光动力学参数，包括光系统Ⅱ的最大光能转化效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(QN)，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光参数的影响效果。
藻液叶绿素荧光动力学参数测试结果见图11-15。
从图1-15中可以看出，
(1)随着阿特拉津标准液浓度的增加，阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数Fv/Fm、Y(Ⅱ)、ETR、qP和QN的抑制效果增加；在阿特拉津标准液浓度为100μg/L的条件下，阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数的抑制效果最强；
(2)甲基化和乙基化植物油的加入，显著增强了阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数Fv/Fm、Y(Ⅱ)、ETR、qP和QN的抑制效果；在阿特拉津标准液浓度为100μg/L的条件下，加入甲基化和乙基化植物油后，阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数的抑制效果增强现象尤为显著；
(3)随着甲基化和乙基化植物油溶液与阿特拉津标准液的体积比发生变化，阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数的抑制效果也发生变化；当系列浓度的阿特拉津标准液和植物油溶液的体积比为1：1时，阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数的抑制效果最强。
综上所述，甲基化和乙基化植物油的加入，显著增强了阿特拉津对蛋白核小球藻的各荧光动力学参数Fv/Fm、Y(Ⅱ)、ETR、qP和QN的抑制效果，因此，甲基化和乙基化植物油的加入，显著提高了阿特拉津对蛋白核小球藻的影响效果，使得对阿特拉津毒性的测定效果更为直观、更为全面、更为快速，测定周期更短。
对比例1
取斜生栅藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和培养基按体积比为1：1：1进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定斜生栅藻藻液叶绿素荧光动力学参数中光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对斜生栅藻藻液的各荧光参数的影响效果。
对比例2
取铜铝微囊藻藻液、系列浓度的阿特拉津标准液和培养基按体积比为1：1：1进行混合并摇匀，并同时设置空白组(培养基代替阿特拉津)对照。混合液经暗置10min后，用水样叶绿素荧光仪测定铜铝微囊藻藻液叶绿素荧光动力学参数中光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))，进行3组平行对照实验，取其平均值并记录，得出空白组和实验组各荧光参数的变化，判断阿特拉津对铜铝微囊藻的各荧光参数的影响效果。
实施例2和对比例1-2的藻液叶绿素荧光动力学参数中光系统Ⅱ的实际光能转化效率(Y(Ⅱ))测试结果见图16。
从图16可以看出，与斜生栅藻、铜绿微囊藻相比，阿特拉津对于蛋白核小球藻的各荧光动力学参数的抑制效果更显著，说明与斜生栅藻、铜绿微囊藻相比，蛋白核小球藻对阿特拉津的毒性更为敏感，从而使得对阿特拉津毒性测定效果更为直观和快速，测定周期更短。
说明：申请文件中提交的图1-16为黑白图，实际的实验结果表现的并不十分清楚，因此额外提交证明文件，证明文件1-16为图1-16的原图(彩色图)。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，其特征在于，在植物油条件下利用蛋白核小球藻检测阿特拉津生物毒性，所述植物油为甲基化和乙基化植物油；
所述方法包括以下步骤：取系列浓度阿特拉津标准液，加入植物油溶液，再加入到蛋白核小球藻藻液中，混匀，控制蛋白核小球藻藻液、植物油溶液和阿特拉津标准溶液的体积比为1：(1-2)：(1-2)，经暗置10min后，测定蛋白核小球藻的各叶绿素荧光动力学参数，测定阿特拉津的生物毒性；
所述蛋白核小球藻液为将蛋白核小球藻藻种接种至培养基后置于恒温光照培养箱中培养至对数期得到；
所述培养基由以下组分组成：NaNO31.5g/L、K2HPO40.04g/L、MgSO4·7H2O0.075g/L、CaCl2·2H2O0.036g/L、柠檬酸0.006g/L、柠檬酸铁铵0.006g/L、EDTA0.001g/L、Na2CO30.02g/L、H3BO42.86g/L、MnCl2·4H2O1.86g/L、ZnSO4·7H2O0.22g/L、Na2MoO4·2H2O0.39g/L、CuSO4·5H2O0.079g/L、Co(NO3)2·6H2O0.049g/L、维生素B120.5mg/L、维生素B10.1mg/L；
所述恒温光照培养箱的培养条件为：在光照度2000-2500lx、温度25±2℃、湿度75％RH、光暗周期12h：12h的条件下静置培养，所述对数期的蛋白核小球藻，为转接过程中由初始值OD680＝0.1于培养箱中培养生长，随后选定OD680＝1.0即通过显微镜镜检得出藻细胞密度，此时细胞密度范围在(1-1.2)×106ind/mL的蛋白核小球藻藻液浓度作为检测阿特拉津生物毒性的藻的浓度，用于阿特拉津生物毒性的测定。
2.根据权利要求1所述的一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，其特征在于，所述植物油溶液与所述阿特拉津标准液的体积比为1：1、1：2或2：1。
3.根据权利要求1所述的一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，其特征在于，所述测定蛋白核小球藻的各叶绿素荧光动力学参数时，使用荧光光谱仪进行测试，荧光激发波长发射波长为680nm。
4.根据权利要求1所述的一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，其特征在于，所述测定阿特拉津的生物毒性时，以培养基代替阿特拉津标准溶液作为空白对照组。
5.根据权利要求1所述的一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，其特征在于，所述动力学参数包括PSⅡ最大光能转化效率、PSⅡ实际光能转化效率、光合电子传递效率、光化学淬灭、非光化学淬灭。
6.根据权利要求1所述的一种利用蛋白核小球藻荧光检测阿特拉津生物毒性的方法，其特征在于，所述系列浓度的阿特拉津标准液的浓度依次为20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L。
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