CN113491721A - 一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：S1、取银杏叶提取液，浓缩得到上柱液；将上柱液上大孔吸附树脂柱，依次进行水洗、除杂洗脱、一次洗脱、二次洗脱处理，收集一次洗脱液和二次洗脱液；S2、将一次洗脱液上氢型阳离子交换树脂柱，收集流出液；S3、将S1中的二次洗脱液和S2中的流出液合并，浓缩，干燥得到银杏叶提取物。本发明在有效脱除了银杏叶提取物中的银杏毒素的同时，还能回收保留有效成分，保持其收率和品质。

Description

一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法
技术领域
本发明涉及化合物提纯技术领域，尤其涉及一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法。
背景技术
银杏是世界上最古老的物种之一，生长缓慢，寿命极长，有活化石的美称。其强大的生命力吸引着人们对其在健康、食品、营养补充物等应用前景方面的更多探索。银杏具有极大药用价值的部位是叶，具有独特的药用价值及应用价值。几十年来，人们使用银杏叶提取物作为药物，因其含有用于治疗痴呆，脑血栓等病症相关的黄酮类，萜类内酯等相关有效成分。但随着研究的不断深入，人们发现银杏叶提取物中存在有机酸、黄酮醇苷、萜类内酯等有效成分。有机酸为小分子，药理活性丰富，具有抑制谷氨酸的过度释放，保护脑组织的作用；黄酮醇苷和萜类内酯，对心脑血管疾病，高血脂，高血压，清除氧自由基具有显著的疗效，并具有抗氧化、抗衰老、降血糖血脂的功效。但银杏叶提取物中也含有不具有治疗功效，并且会导致危险及副作用的成分，比如银杏酸、银杏毒素等有毒物质，银杏酸具有致敏性、胚胎毒性、免疫毒性和细胞毒性等生物毒性。银杏毒素可引起诸如抽搐发作和无意识的中毒症状，中毒症状轻者表现为全身不适、嗜睡，中毒重者表现为呕吐、抽筋、嘴唇青紫、恶心、呼吸困难等症状。因此，在制备银杏叶提取物过程中，应尽最大可能脱除银杏酸和银杏毒素类物质。
银杏毒素其化学名称为4’-O-甲基吡哆醇，英文名为Ginkgotoxin(4'-O-methylpyridoxine)，CAS号为1464-33-1，分子式为C9H13NO3，分子量为183.2，其结构式如下：
Figure BDA0002417384100000021
检测发现，未经脱除银杏毒素处理的银杏叶提取物，银杏毒素的含量达到300-600ppm。在银杏叶提取物制备过程中，通过对银杏毒素进行检测跟踪，发现上柱液上大孔吸附树脂柱后，水洗，稀乙醇除杂只能脱除少量银杏毒素，大部分银杏毒素仍然被保留在大孔吸附树脂上。
通过增加稀乙醇洗脱的步骤，能将银杏毒素脱除，但是稀乙醇洗脱在脱除银杏毒素的同时，部分有效成分也被脱除，虽然制备得到的银杏叶提取物中银杏毒素含量＜5ppm，但是有效成分含量和收率降低。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，本发明在有效脱除了银杏叶提取物中的银杏毒素的同时，还能回收保留有效成分，保持其收率和品质。
本发明提出的一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：
S1、取银杏叶提取液，浓缩得到上柱液；将上柱液上大孔吸附树脂柱，依次进行水洗、除杂洗脱、一次洗脱、二次洗脱处理，收集一次洗脱液和二次洗脱液；
S2、将一次洗脱液上氢型阳离子交换树脂柱，收集流出液；
S3、将S1中的二次洗脱液和S2中的流出液合并，浓缩，干燥得到银杏叶提取物。
按照2015版《中华人民共和国药典》第一部第416页银杏叶提取物中的方法制备银杏叶提取液。
优选地，在S2中，氢型阳离子交换树脂为强酸性阳离子交换树脂或弱酸性阳离子交换树脂。
优选地，在S2中，氢型阳离子交换树脂为732型阳离子交换树脂或001×7型阳离子交换树脂。
本发明所述大孔吸附树脂和氢型阳离子交换树脂柱在使用前均需进行预处理，此为本领域常识，预处理方法为本领域常规方法。
本发明所述氢型阳离子交换树脂柱活化后可以重复使用。
本发明所述732型阳离子交换树脂和001×7型阳离子交换树脂，均可从市场上购得，使用前需进行预处理使其转化为氢型。732型、001×7型为本领域通用的阳离子交换树脂的分类型号。
优选地，在S1中，用体积分数为5-15％的乙醇水溶液进行除杂洗脱，其用量为1-2BV。
优选地，在S1中，用体积分数为17-30％的乙醇水溶液进行一次洗脱，其用量为1-3BV。
优选地，在S1中，用体积分数为50-80％的乙醇水溶液进行二次洗脱，其用量为2-3BV。
优选地，在S1中，水洗的水用量为0.5-2BV。
优选地，在S2中，氢型阳离子交换树脂柱进行再生处理后，重复使用。
优选地，再生处理的步骤为：对氢型阳离子交换树脂柱依次进行银杏毒素洗脱、活化、水洗脱即可。
优选地，用质量分数为3-5％的氢氧化钠水溶液进行银杏毒素洗脱，其用量为1.5-2BV。
优选地，用体积分数为3-5％的无机酸水溶液进行活化，其用量为1.5-2BV。
优选地，无机酸为硫酸或盐酸。
优选地，当氢型阳离子交换树脂柱流出的水洗脱液的pH＝6-7时，停止水洗脱。
本发明所述BV指柱体积，2BV为2倍柱体积，BV为本领域技术人员常用计量单位。
优选地，在S3中，银杏叶提取物中银杏毒素的含量＜5ppm。
优选地，在S3中，干燥为真空干燥或喷雾干燥。
优选地，真空干燥的真空度＜-0.09MPa，温度为70-90℃，时间为6-8h。
优选地，喷雾干燥的进风温度为160-190℃，出风温度为70-90℃。
本发明所述水均为纯化水或去离子水。
有益效果：
本发明选用不同体积分数的乙醇水溶液洗脱上柱液，洗脱分离了银杏叶提取物中银杏毒素和有效成分，分别收集得到含有银杏毒素和部分有效成分的一次洗脱液、含有有效成分的二次洗脱液；然后选用合适的氢型阳离子交换树脂柱，过柱收集获得流出液，并与二次洗脱液合并，从而回收保留了一次洗脱液中的有效成分，从而在有效脱除了银杏叶提取物中的银杏毒素的同时，还能回收保留有效成分，保持其收率不降低；另外本发明对氢型阳离子交换树脂柱选用合适的再生方法，可以重复使用；
且本发明操作方便，设备投资小，易于实现工业化生产；另外本发明仅仅将银杏毒素富集的一次洗脱液过氢型阳离子交换树脂柱，减少了料液处理量，降低生产成本，减少了设备投入，本发明制得的银杏叶提取物中银杏毒素含量＜5ppm，显著提高银杏叶提取物的质量。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：
S1、取银杏叶1000g，粉碎，用稀乙醇加热回流提取2次，合并提取液得到银杏叶提取液；浓缩银杏叶提取液得到上柱液3000ml；
将上柱液加在预处理后的柱体积为1000ml的大孔吸附树脂柱上，依次用500ml水洗、2000ml体积分数为5％的乙醇水溶液除杂洗脱、3000ml体积分数为17％的乙醇水溶液一次洗脱、3000ml体积分数为50％的乙醇水溶液二次洗脱，收集一次洗脱液和二次洗脱液；
S2、将一次洗脱液上预处理后的柱体积为100ml的001×7氢型阳离子交换树脂柱，收集流出液；然后对氢型阳离子交换树脂柱依次用150ml质量分数为5％的氢氧化钠水溶液洗脱银杏毒素、用150ml体积分数为5％的盐酸水溶液活化、用水洗脱，当氢型阳离子交换树脂柱流出的水洗脱液的pH＝6-7时，停止水洗脱；
S3、将S1中的二次洗脱液和S2中的流出液合并，浓缩，调节真空度＜-0.09MPa，温度为70℃，真空干燥8h得到银杏叶提取物27.9g，银杏毒素含量为3.7ppm。
实施例2
一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：
S1、取银杏叶1000g，粉碎，用稀乙醇加热回流提取2次，合并提取液得到银杏叶提取液；浓缩银杏叶提取液得到上柱液3000ml；
将上柱液加在预处理后的柱体积为1000ml的大孔吸附树脂柱上，依次用1000ml水洗、1500ml体积分数为10％的乙醇水溶液除杂洗脱、2000ml体积分数为25％的乙醇水溶液一次洗脱、2500ml体积分数为65％的乙醇水溶液二次洗脱，收集一次洗脱液和二次洗脱液；
S2、将一次洗脱液上预处理后的柱体积为100ml的732氢型阳离子交换树脂柱，收集流出液；然后对氢型阳离子交换树脂柱依次用200ml质量分数为3％的氢氧化钠水溶液洗脱银杏毒素、用200ml体积分数为3％的盐酸水溶液活化、用水洗脱，当氢型阳离子交换树脂柱流出的水洗脱液的pH＝6-7时，停止水洗脱；
S3、将S1中的二次洗脱液和S2中的流出液合并，浓缩，调节真空度＜-0.09MPa，温度为90℃，真空干燥6h得到银杏叶提取物28.5g，银杏毒素含量为3.2ppm。
实施例3
一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：
S1、取银杏叶1000g，粉碎，用稀乙醇加热回流提取2次，合并提取液得到银杏叶提取液；浓缩银杏叶提取液得到上柱液3000ml；
将上柱液加在预处理后的柱体积为1000ml的大孔吸附树脂柱上，依次用2000ml水洗、1000ml体积分数为15％的乙醇水溶液除杂洗脱、1000ml体积分数为30％的乙醇水溶液一次洗脱、2000ml体积分数为80％的乙醇水溶液二次洗脱，收集一次洗脱液和二次洗脱液；
S2、将一次洗脱液上预处理后的柱体积为100ml的732氢型阳离子交换树脂柱，收集流出液；然后对氢型阳离子交换树脂柱依次用200ml质量分数为4％的氢氧化钠水溶液洗脱银杏毒素、用150ml体积分数为3％的硫酸水溶液活化、用水洗脱，当氢型阳离子交换树脂柱流出的水洗脱液的pH＝6-7时，停止水洗脱；
S3、将S1中的二次洗脱液和S2中的流出液合并，浓缩，调节进风温度为160℃，出风温度为70℃，喷雾干燥得到银杏叶提取物26.8g，银杏毒素含量为2.5ppm。
对比例1
一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：
无一次洗脱和S2步骤，其他同实施例2，得到银杏叶提取物28.7g，银杏毒素含量为451ppm。
对比例2
一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，包括如下步骤：
无S2步骤，其他同实施例2，得到银杏叶提取物21.3g，银杏毒素含量为2.2ppm。
由实施例2和对比例1-2的结果可以看出，本发明能有效脱除银杏叶提取物中的银杏毒素，且其收率能保持不降低。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、取银杏叶提取液，浓缩得到上柱液；将上柱液上大孔吸附树脂柱，依次进行水洗、除杂洗脱、一次洗脱、二次洗脱处理，收集一次洗脱液和二次洗脱液；
S2、将一次洗脱液上氢型阳离子交换树脂柱，收集流出液；
S3、将S1中的二次洗脱液和S2中的流出液合并，浓缩，干燥得到银杏叶提取物。
2.根据权利要求1所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S2中，氢型阳离子交换树脂为强酸性阳离子交换树脂或弱酸性阳离子交换树脂；优选地，在S2中，氢型阳离子交换树脂为732型阳离子交换树脂或001×7型阳离子交换树脂。
3.根据权利要求1或2所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S1中，用体积分数为5-15％的乙醇水溶液进行除杂洗脱，其用量为1-2BV。
4.根据权利要求1-3任一项所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S1中，用体积分数为17-30％的乙醇水溶液进行一次洗脱，其用量为1-3BV。
5.根据权利要求1-4任一项所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S1中，用体积分数为50-80％的乙醇水溶液进行二次洗脱，其用量为2-3BV。
6.根据权利要求1-5任一项所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S1中，水洗的水用量为0.5-2BV。
7.根据权利要求1-6任一项所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S2中，氢型阳离子交换树脂柱进行再生处理后，重复使用。
8.根据权利要求7所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，再生处理的步骤为：对氢型阳离子交换树脂柱依次进行银杏毒素洗脱、活化、水洗脱即可。
9.根据权利要求8所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，用质量分数为3-5％的氢氧化钠水溶液进行银杏毒素洗脱，其用量为1.5-2BV；优选地，用体积分数为3-5％的无机酸水溶液进行活化，其用量为1.5-2BV；优选地，无机酸为硫酸或盐酸；优选地，当氢型阳离子交换树脂柱流出的水洗脱液的pH＝6-7时，停止水洗脱。
10.根据权利要求1-9任一项所述脱除银杏叶提取物中银杏毒素的方法，其特征在于，在S3中，银杏叶提取物中银杏毒素的含量＜5ppm；优选地，在S3中，干燥为真空干燥或喷雾干燥；优选地，真空干燥的真空度＜-0.09MPa，温度为70-90℃，时间为6-8h；优选地，喷雾干燥的进风温度为160-190℃，出风温度为70-90℃。
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