CN114366761B - 一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法。包括：取银杏叶粉碎，加入乙醇水溶液提取；浓缩提取液并回收乙醇，加水稀释，冷却离心，得上柱液；上柱液加在阳离子交换树脂上，水洗，合并收集上柱流出液和水洗液得合并液1；将合并液1加在大孔吸附树脂上，依次用水及不同浓度乙醇洗脱，合并收集上柱流出液与水洗液得合并液2，收集相应的乙醇洗脱液；将合并液2加在阴离子交换树脂上，水洗后，用酸水溶液交换，收集相应的交换液；向乙醇洗脱液中加入一定量的交换液得合并液3，合并液3脱除银杏酸，真空干燥，即得，其有机酸总含量≥17％。本发明方法操作简单，产品中各活性成分全面、比例均衡，收率高，适用于工业化生产。

Description

一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法，属于植物有效成分提取纯化领域。

背景技术

银杏叶提取物(Ginko Biloba Extract，EGB)是以银杏的叶为原料，采用适当的溶剂提取、精制富集有效成分的一类产品。以银杏叶提取物为原料制成的各种制剂，广泛应用于药品、保健食品、食品添加剂、功能性饮料、化妆品等领域。其药物制剂具有改善心脑血管循环，治疗心脑血管疾病，提高记忆，清除自由基，延缓衰老的作用。银杏叶提取物的药理作用是多成分的综合效应，其各种化学成分是一个整体，各类成分起着互补和协同作用，任何一种(或一类)有效成分均不能代表其整体的疗效。从银杏叶中提取药用成分始于20世纪50年代，EGB原为德国Schwabe公司制定的企业标准，后被德国E委员会采纳，于1994年以法律形式公布，作为国家标准，随后大多欧共体成员国采纳其标准，该标准也被北美、日韩等国家所采纳。

目前，对于银杏叶提取物有效成分的质量控制，主要为总黄酮醇苷和萜类内酯化合物。其中，EGB761与EP10.0规定总黄酮醇苷含量为22-27％、萜类内酯含量为5.4-6.6％(其中白果内酯含量为2.6-3.2％、银杏内酯A+银杏内酯B+银杏内酯C之和含量为2.8-3.4％)，USP34规定总黄酮醇苷含量为22-27％、萜类内酯含量为5.4-12.0％(其中白果内酯含量为2.6-5.8％、银杏内酯A+银杏内酯B+银杏内酯C之和含量为2.8-6.2％)，2020版中国药典规定总黄酮醇苷含量≥24％、萜类内酯含量≥6.0％。另外一款银杏叶提取物“银杏酮酯”标准规定总黄酮醇苷含量为24-35％(另规定总黄酮以芦丁计，应为44-55％)，萜类内酯含量为6-10％。以上可以看出，质量指标控制部分占其全部组成的35％以下。

经过多年数据的积累，EGB761各组份的比例大致为：黄酮醇苷类25％、萜类内酯类7％、原花青素类7％、儿茶素类2％、有机酸类17％、其他黄酮类20％、大分子化合物5％、无机物5％、水分溶剂3％、其他9％，即已知成分约91％。通过检测表明，国内银杏叶提取物总黄酮醇苷和萜类内酯含量普遍高于EGB761标准，而有机酸类含量低于3％。如申请号为201510826946.08，名称为“一种银杏叶提取物中有机酸含量测定方法”的发明专利，表明不同批次的银杏叶提取物中含有莽草酸、没食子酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸、对羟基苯甲酸，这5种有机酸的总含量约为2.2-3.0％。EGB761中莽草酸含量大于15％、奎宁酸含量大于1％、原儿茶酸含量大于1％、6-羟基犬尿喹啉酸含量大于0.3％。

银杏叶中含有约3％的莽草酸、约3％的奎宁酸、约0.05％的原儿茶酸、约0.03％的6-羟基犬尿喹啉酸、约0.01％的没食子酸、约0.01％的对羟基苯甲酸，其中部分有机酸以盐的形式存在。中国药典中银杏叶提取物的制备方法为稀乙醇提取后，用大孔吸附树脂纯化，但此类有机酸是一类极性很大的小分子物质，在中国药典的银杏叶提取物生产过程中大量流失。由于EGB761的专利工艺为采用合适的有机溶剂提取后，用丙酮、1-丁醇萃取纯化，大量的有机酸与黄酮、内酯等有效成分一同被萃取到溶剂层，使有机酸部分富集于银杏叶提取物中。

针对国内银杏叶提取物制备工艺中有机酸大量损失，产品组分中有机酸含量远低于EGB761的问题，迫切需要研发一种能够保留绝大多数有机酸的银杏叶提取物的制备工艺。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明基于保证银杏叶提取物中主要有效成分含量不低于中国药典标准的考虑，提出一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法。

本发明所提供的富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法，包括如下步骤：

1)取银杏叶，粉碎，用乙醇水溶液进行提取，过滤，得提取液；

2)取步骤1)中提取液，浓缩回收乙醇，加水，离心分离除去不溶物，得上柱液；

3)取步骤2)中上柱液，加在H型阳离子交换树脂上，再用水洗阳离子交换树脂柱，合并收集流出液与水洗液，得合并液1；

4)取步骤3)中合并液1，加在大孔吸附树脂上，依次用水及不同浓度乙醇洗脱，合并收集上柱流出液与水洗液，得合并液2，以及收集相应的乙醇洗脱液；

5)取步骤4)中合并液2，加在OH型阴离子交换树脂上，先用水洗，再用酸水溶液进行阴离子交换，分两段大致均等收集交换液，得交换液1和交换液2，当尾柱流出的交换液中开始检测到酸水中的酸根离子时，停止收集交换液；

6)分别检测步骤4)中乙醇洗脱液的干物质占比C₁和步骤5)中交换液1的干物质占比C₂，取步骤4)的乙醇洗脱液，加入体积为V的交换液1，其中V＝乙醇洗脱液体积V₁×C₁×0.25÷C₂，得合并液3；

7)取步骤6)中合并液3，经脱除银杏酸处理，真空干燥，即得富含有机酸的银杏叶提取物。

上述方法步骤1)中，所述银杏叶可为总黄酮醇苷含量大于0.9％、萜类内酯含量大于0.25％的银杏叶。

所述提取包括加入40-90％浓度乙醇水溶液，在20-70℃下搅拌提取1-12小时，乙醇水溶液的体积与银杏叶质量的比为2-20。

优选的，乙醇水溶液的浓度可为50-80％。本发明中，所述乙醇的浓度均指体积浓度。

优选的，乙醇水溶液的体积与银杏叶质量的比可为3-10，优选4-8。本发明中，但凡涉及到质量与体积的比时，均指单位质量的量与单位体积的量的比，质量的单位为g时，体积的单位为ml；质量的单位为Kg时，体积的单位为l；以此类推。

优选的，可在25-70℃下搅拌提取4-6小时。

上述方法步骤2)中，水的量为加至体系的总体积为银杏叶质量的2-7倍，优选3-5倍。优选的，在加水之后冷却至5-30℃，优选冷却至10-25℃。

上述方法步骤3)中，所述H型阳离子交换树脂由阳离子交换树脂转换成H型制得，其中所述阳离子交换树脂可为732型、HD115、LSD001树脂中的一种或多种，优选为732型、LSD001。

所述阳离子交换树脂的体积为0.5-1倍银杏叶质量，优选为0.5-0.8倍；其水洗量为2-3BV，优选为2-2.5BV。

上述方法步骤4)中，所述大孔吸附树脂可为DM131、HPD-417、LX-32树脂中的一种或多种，优选为DM131、LX-32。

所述大孔吸附树脂的体积为1-1.5倍银杏叶质量，优选为1-1.2倍；其水洗量为0.5-1.5BV，优选为0.5-1BV。

步骤4)中，不同浓度乙醇洗脱包括：先用5-20％浓度乙醇除杂，再用50-70％浓度乙醇洗脱，其中除杂乙醇用量可为1-3BV，优选为2-2.5BV，洗脱乙醇用量可为2-3BV，优选为2-2.5BV。

上述方法步骤5)中，所述OH型阴离子交换树脂由阴离子交换树脂转换成OH型制得，其中所述阴离子交换树脂可为D380、HPD-130、LX-94H树脂中的一种或多种，优选为D380、HPD130。

所述阴离子交换树脂的体积为0.5-1倍银杏叶质量，优选为0.5-0.8倍；其水洗量为2-3BV，优选为2-2.5BV。

优选地，所述阴离子交换树脂为两组或两组以上装柱，串联使用。

优选的，所述酸水溶液可为质量浓度为3-7％的硫酸、盐酸、磷酸水溶液中的一种或多种；优选为质量分数为3-5％的盐酸水溶液、质量分数为5-7％的硫酸水溶液；

所述酸水溶液的使用量为，当阴离子尾柱流出交换液中开始检测到酸水中的酸根离子时，停止进酸水溶液。

本发明中，所述交换液1含有大部分莽草酸和少部分奎宁酸，所述交换液2含有少部分莽草酸和大部奎宁酸。

上述方法步骤6)中，所述向步骤4)中(大孔吸附树脂的)相应的乙醇洗脱液中加入的交换液为步骤5)中阴离子交换树脂收集的前段交换液(即交换液1)，其加入的体积V＝V₁×C₁×0.25÷C₂，其中，V₁为乙醇洗脱液的体积；C₁为步骤4)中乙醇洗脱液的干物质占比；C₂为步骤5)中前段交换液(即交换液1)的干物质占比。其中，所述干物质是指溶液脱除溶剂后的残渣，干物质占比是指残渣质量相对于溶液体积的百分比，单位为g/ml或Kg/l。

本发明中，由于交换液1含有大部分莽草酸，因此步骤6)中剩余的交换液1可用于制备莽草酸，由于交换液2含有大部奎宁酸，因此交换液2可用于制备奎宁酸。

上述方法中所述浓缩或真空干燥是指在真空度小于-0.09MPa，蒸发温度小于70℃条件下进行，时间可为1-12小时，优选6-8小时。

本发明所述的H型阳离子交换树脂、OH型阴离子交换树脂、大孔吸附树脂的再生与离子转型均为本领域技术常识。例如，H型阳离子交换树脂可由阳离子交换树脂用酸水溶液转化；OH型阴离子交换树脂可由阴离子交换树脂用碱水溶液转化。

本发明的上述方法中，所得富含有机酸的银杏叶提取物中总有机酸含量≥≥17％。其中，有机酸组成为莽草酸含量可≥15％、奎宁酸(奎尼酸)含量可≥1％、原儿茶酸含量可≥1％、6-羟基犬尿喹啉酸含量(6-HKA)可≥0.3％。其他主要指标含量：总黄酮醇苷为24-27％、萜类内酯为6.0-6.6％、总银杏酸≤1mg/kg、银杏毒素≤10mg/kg。

本发明的有益技术效果是：

(1)利用乙醇提取-多种树脂纯化的方法实现了有机酸组分的富集，本方法制备的银杏叶提取物与原研EGB761的溶剂提取-多种溶剂萃取法制备的银杏叶提取物有效组分基本一致；(2)制备过程中未使用有毒有害溶剂或多种溶剂，只涉及到乙醇水溶液，减少产品中的溶剂残留种类，提高了产品质量安全；(3)所使用的层析材料均为吸附树脂，易再生循环使用；(4)生产过程不仅对环境相对友好，同时能够有效提高操作人员的健康保障；(5)制备的目标产品总有机酸含量≥17％、总黄酮醇苷含量为24-27％、萜类内酯含量为6-6.6％、总银杏酸≤1mg/kg、银杏毒素≤10mg/kg。可完全满足EGB761、EP10.0、USP34、CP2020的标准要求。

需另外说明的是，随着国内银杏育种以及小苗银杏叶种植技术的提高与推广，银杏叶中总黄酮醇苷和萜类内酯含量持续走高，尤以云南、贵州等地银杏叶中含量更甚，其叶中总黄酮醇苷含量大于1.5％、萜类内酯含量大于0.4％。所以本发明所需的银杏叶(总黄酮醇苷含量大于0.9％、萜类内酯含量大于0.25％)能得到有效保证。由于银杏小苗叶(其总黄酮醇苷与萜类内酯含量均较高)种植规模的逐年扩大，导致最终产品银杏叶提取物中总黄酮醇苷含量超出27％或萜类内酯含量超出6.6％，虽然符合CP2020药典规定，但超出了EGB761、EP10.0、USP34的标准范围，不利于国内银杏叶提取物在国际法规市场的推广，所以需要一部分有机酸组分补充到银杏叶提取物中，以确保银杏叶提取物中各组分全面、均衡。

总之，本发明方法利用H型阳离子交换树脂，将银杏叶提取水液中的有机酸盐转化为有机酸，利用大孔吸附树脂吸附黄酮、内酯等有效成分，利用OH型阴离子交换树脂吸附有机酸成分，再合并大孔吸附树脂相应醇洗脱液与阴离子树脂相应部分交换液，制备富含有机酸的银杏叶提取物。本发明克服了大孔吸附树脂不能有效吸附有机酸，以及EGB761工艺中涉及到多种溶剂使用、工序繁杂等缺点。本发明工艺操作简单，适用于工业化生产。制备过程中只涉及到乙醇溶剂，乙醇可反复回收使用，树脂可反复再生使用，对环境影响较小。本发明对于银杏叶提取物的有效成分研究具有重要意义，为国内银杏叶提取物及其制剂的质量控制以及药理作用提出新的思考。

附图说明

图1为EGB761原研银杏叶提取物中有机酸液相色谱图；

图2为本发明实施例1银杏叶提取物中有机酸液相色谱图；

图3为目前国内企业银杏叶提取物中有机酸液相色谱图；

图4为本发明实施例1阴离子树脂交换液瞬时有机酸含量趋势图；

具体实施方式

以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。如无特殊说明，操作方法均为常规方法。

实施例1

步骤1：取500g银杏叶(总黄酮醇苷含量为1.0％、萜类内酯含量为0.28％)，粉碎，加入2000ml的50％浓度乙醇水溶液，在25℃下搅拌提取4小时，过滤，得提取液1550ml。

步骤2：取步骤1中提取液1550ml，在-0.09MPa，温度为65℃下，浓缩回收乙醇至完全，加水至总体积为1500ml，冷却至10℃，离心分离除去不溶物，得上柱液1460ml。

步骤3：取步骤2中上柱液1460ml，加在732型阳离子交换树脂上(预先用酸水溶液将树脂转化为H型)，树脂体积为250ml。再用500ml水洗树脂柱，合并收集流出液与水洗液1950ml，得合并液1。

步骤4：取步骤3中1950ml合并液1，加在DM131树脂上，树脂体积为500ml，依次用250ml水洗、1500ml浓度为5％乙醇除杂、1000ml浓度为70％乙醇洗脱，合并收集上柱流出液与水洗液2200ml，得合并液2，以及收集70％乙醇洗脱液950ml。

步骤5：取步骤4中2200ml合并液2，加在D380树脂上，树脂体积为250ml(等分装于2根柱中，串联上柱，树脂预先用氢氧化钠水溶液将树脂转化为OH型)。先用500ml水串联水洗去除杂质，再用质量分数为3％的盐酸水溶液串联进行阴离子交换，每100ml收集交换液，当收集至总体积为850ml时，在尾柱流出交换液中检测到氯离子，停止收集交换液。合并前四份交换液得400ml交换液1(经检测含有12.59g莽草酸，1.14g奎宁酸)，合并后四份交换液得400ml交换液2(经检测含有2.15g莽草酸，11.67g奎宁酸)。

步骤6：经检测，步骤4中70％乙醇洗脱液的干物质占比为1.47％(g/ml)，步骤5中交换液1的干物质占比3.82％(g/ml)，向70％乙醇洗脱液中加入91ml的交换液1，其中加入的体积V＝950×1.47％×0.25÷3.82％＝91ml，得1035ml合并液3。剩余的交换液1经浓缩结晶、重结晶可制备莽草酸，交换液2经浓缩结晶、重结晶可制备奎宁酸。

步骤7：取步骤6中1035ml合并液3，过脱银杏酸专用大孔吸附树脂，收集流出液，在-0.09MPa，温度为65℃下，浓缩回收乙醇至完全。在-0.095MPa，温度为65℃下，真空干燥8小时，即得富含有机酸的银杏叶提取物17.2g，收率为3.44％。经检测其总有机酸含量为19.65％(其中莽草酸16.6％、奎宁酸1.5％、原儿茶酸1.2％、6-羟基犬尿喹啉酸0.35％)、总黄酮含量为24.5％、萜类内酯含量为6.2％(其中白果内酯3.0％、银杏内酯A+银杏内酯B+银杏内酯C＝3.2％)、总银杏酸为0.4mg/kg、银杏毒素为4.2mg/kg。

实施例2

步骤1：取500g银杏叶(总黄酮醇苷含量为1.3％、萜类内酯含量为0.35％)，粉碎，加入3000ml的65％浓度乙醇水溶液，在50℃下搅拌提取5小时，过滤，得提取液2540ml。

步骤2：取步骤1中提取液2540ml，在-0.092MPa，温度为60℃下，浓缩回收乙醇至完全，加水至总体积为2000ml，冷却至20℃，离心分离除去不溶物，得上柱液1950ml。

步骤3：取步骤2中上柱液1950ml，加在HD115阳离子交换树脂上(预先用酸水溶液将树脂转化为H型)，树脂体积为400ml。再用1000ml水洗树脂柱，合并收集流出液与水洗液2920ml，得合并液1。

步骤4：取步骤3中2920ml合并液1，加在HPD-417树脂上，树脂体积为600ml，依次用600ml水洗、1200ml浓度为10％乙醇除杂、1500ml浓度为60％乙醇洗脱，合并收集上柱流出液与水洗液3550ml，得合并液2，以及收集60％乙醇洗脱液1420ml。

步骤5：取步骤4中3550ml合并液2，加在HPD130树脂上，树脂体积为400ml(等分装于4根柱中，串联上柱，树脂预先用氢氧化钠水溶液将树脂转化为OH型)。先用1000ml水串联水除杂，再用质量分数为5％的硫酸水溶液串联进行阴离子交换，每100ml收集交换液，当收集至总体积为970ml时，尾柱流出交换液中检测到硫酸根离子，停止收集交换液。合并前四份交换液得400ml交换液1(经检测含有11.74g莽草酸，1.09g奎宁酸)，合并后五份交换液得500ml交换液2(经检测含有2.96g莽草酸，12.47g奎宁酸)。

步骤6：经检测，步骤4中60％乙醇洗脱液的干物质占比为1.05％(g/ml)，步骤5中交换液1的干物质占比3.38％(g/ml)，向60％乙醇洗脱液中加入110ml的交换液1，其中加入的体积V＝1420×1.05％×0.25÷3.38％＝110ml，得1520ml合并液3。剩余的交换液1经浓缩结晶、重结晶可制备莽草酸，交换液2经浓缩结晶、重结晶可制备奎宁酸。

步骤7：取步骤6中1520ml合并液3，过脱银杏酸专用大孔吸附树脂，收集流出液，在-0.092MPa，温度为60℃下，浓缩回收乙醇至完全。在-0.095MPa，温度为68℃下，真空干燥7小时，即得富含有机酸的银杏叶提取物18.4g，收率为3.68％。经检测其总有机酸含量为20.50％(其中莽草酸17.5％、奎宁酸1.6％、原儿茶酸1.0％、6-羟基犬尿喹啉酸0.40％)、总黄酮含量为26.2％、萜类内酯含量为6.6％(其中白果内酯3.2％、银杏内酯A+银杏内酯B+银杏内酯C＝3.4％)、总银杏酸为0.3mg/kg、银杏毒素为5.1mg/kg。

实施例3

步骤1：取500g银杏叶(总黄酮醇苷含量为1.2％、萜类内酯含量为0.34％)，粉碎，加入4000ml的80％浓度乙醇水溶液，在70℃下搅拌提取6小时，过滤，得提取液3530ml。

步骤2：取步骤1中提取液3530ml，在-0.09MPa，温度为60℃下，浓缩回收乙醇至完全，加水至总体积为2500ml，冷却至25℃，离心分离除去不溶物，得上柱液2460ml。

步骤3：取步骤2中上柱液2460ml，加在LSD001阳离子交换树脂上(预先用酸水溶液将树脂转化为H型)，树脂体积为500ml。再用1500ml水洗树脂柱，合并收集流出液与水洗液3900ml，得合并液1。

步骤4：取步骤3中3900ml合并液1，加在LX-32树脂上，树脂体积为750ml，依次用1125ml水洗、750ml浓度为20％乙醇除杂、2250ml浓度为50％乙醇洗脱，合并收集上柱流出液与水洗液4950ml，得合并液2，以及收集50％乙醇洗脱液2200ml。

步骤5：取步骤4中4950ml合并液2，加在LX-94H树脂上，树脂体积为500ml(等分装于4根柱中，串联上柱，树脂预先用氢氧化钠水溶液将树脂转化为OH型)。先用1500ml水串联水洗除杂，再用质量分数为7％的硫酸水溶液串联进行阴离子交换，每100ml收集交换液，当收集至总体积为830ml时，检测出尾柱流出交换液中检测到硫酸离子，停止收集交换液。合并前四份交换液得400ml交换液1(经检测含有12.43g莽草酸，1.21g奎宁酸)，合并后四份交换液得400ml交换液2(经检测含有2.84g莽草酸，11.53g奎宁酸)。

步骤6：经检测，步骤4中50％乙醇洗脱液的干物质占比为0.68％(g/ml)，步骤5中交换液1的干物质占比3.78％(g/ml)，向50％乙醇洗脱液中加入99ml的交换液1，其中加入的体积V＝2200×0.68％×0.25÷3.78％＝99ml，得2289ml合并液3。剩余的交换液1经浓缩结晶、重结晶可制备莽草酸，交换液2经浓缩结晶、重结晶可制备奎宁酸。

步骤7：取步骤6中2289ml合并液，过脱银杏酸专用大孔吸附树脂，收集流出液，在-0.09MPa，温度为70℃下，浓缩回收乙醇至完全。在-0.09MPa，温度为70℃下，真空干燥6小时，即得富含有机酸的银杏叶提取物18.6g，收率为3.72％。经检测其总有机酸含量为19.62％(其中莽草酸16.5％、奎宁酸1.6％、原儿茶酸1.1％、6-羟基犬尿喹啉酸0.42％)、总黄酮含量为25.7％、萜类内酯含量为6.5％(其中白果内酯3.2％、银杏内酯A+银杏内酯B+银杏内酯C＝3.3％)、总银杏酸为0.3mg/kg、银杏毒素为5.7mg/kg。

由以上实施例可知，本发明提供了一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法，从附图2本发明实施例1制得的产品银杏叶提取物的有机酸液相色谱(色谱条件为：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um)，以0.1％磷酸水溶液为流动相，流速为1.0ml/min，柱温35℃，紫外检测器(波长为0-3.4分钟215nm，3.4-30分钟为254nm))，与附图1EGB761银杏叶提取物(溶剂提取-多种溶剂萃取法，如申请号为：201580005342.5的发明专利)的有机酸液相色谱对比，可以明显看出莽草酸、奎宁酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸峰。从附图3目前国内银杏叶提取物(乙醇提取-大孔树脂纯化制得，《中国药典》中银杏叶提取物制法：取银杏叶，粉碎，用稀乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量，加在已处理好的大孔吸附树脂柱上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥；或者回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得)的有机酸色谱图可以看出，基本不含有莽草酸与奎宁酸，但含有一定量原儿茶酸和6-羟基犬尿喹啉酸。由此表明，仅使用大孔吸附树脂纯化银杏叶提取液，所得产品中含有极少量的有机酸，其含量小于3％。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神和基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (2)

1.一种富含有机酸的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，包括：

1）取银杏叶，粉碎，用乙醇水溶液进行提取，过滤，得提取液；

2）取步骤1）中提取液，浓缩回收乙醇，加水，离心分离除去不溶物，得上柱液；

3）取步骤2）中上柱液，加在H型阳离子交换树脂上，再用水洗阳离子交换树脂柱，合并收集流出液与水洗液，得合并液1；

4）取步骤3）中合并液1，加在大孔吸附树脂上，依次用水及不同浓度乙醇洗脱，合并收集上柱流出液与水洗液，得合并液2，以及收集相应的乙醇洗脱液；

5）取步骤4）中合并液2，加在OH型阴离子交换树脂上，先用水洗，再用酸水溶液进行阴离子交换，分两段均等收集交换液，得交换液1和交换液2，当尾柱流出的交换液中开始检测到酸水中的酸根离子时，停止收集交换液；

6）分别检测步骤4）中乙醇洗脱液的干物质占比C₁和步骤5）中交换液1的干物质占比C₂，取步骤4）的乙醇洗脱液，加入体积为V的交换液1，其中V=乙醇洗脱液体积V₁×C₁×0.25÷C₂，得合并液3；

7）取步骤6）中合并液3，经脱除银杏酸处理，真空干燥，即得富含有机酸的银杏叶提取物；

所得富含有机酸的银杏叶提取物中总有机酸含量≥17%；

其有机酸组成为莽草酸含量≥15%、奎宁酸含量≥1%、原儿茶酸含量≥1%、6-羟基犬尿喹啉酸含量≥0.3%；

步骤1）中，所述银杏叶为总黄酮醇苷含量大于0.9%、萜类内酯含量大于0.25%的银杏叶；所述提取包括加入40-90%浓度乙醇水溶液，在20-70℃下搅拌提取1-12小时，乙醇水溶液的体积与银杏叶的质量比为2-20；

步骤2）中，水的量为加至体系的总体积为银杏叶质量的2-7倍，在加水之后冷却至5-30℃；

步骤3）中，所述H型阳离子交换树脂由阳离子交换树脂转换成H型制得，其中所述阳离子交换树脂为732型、HD115、LSD001树脂中的一种或多种；

所述阳离子交换树脂的体积为0.5-1倍银杏叶质量，其水洗量为2-3BV；

步骤4）中，所述大孔吸附树脂为DM131、HPD-417、LX-32树脂中的一种或多种；

所述大孔吸附树脂的体积为1-1.5倍银杏叶质量，其水洗量为0.5-1.5BV；

步骤4）中，所述不同浓度乙醇洗脱包括：先用5-20%浓度乙醇除杂，再用50-70%浓度乙醇洗脱，其中除杂乙醇用量为1-3BV，洗脱乙醇用量为2-3BV；

步骤5）中，所述OH型阴离子交换树脂由阴离子交换树脂转换成OH型制得，其中所述阴离子交换树脂为D380、HPD-130、LX-94H树脂中的一种或多种；

所述阴离子交换树脂的体积为0.5-1倍银杏叶质量，其水洗量为2-3BV；

步骤5）中，所述酸水溶液为质量浓度为3-7%的硫酸、盐酸、磷酸水溶液中的一种或多种；

当阴离子尾柱流出的交换液中开始检测到酸水中的酸根离子时，停止进酸水溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所得富含有机酸的银杏叶提取物中：总黄酮醇苷为24-27%、萜类内酯为6.0-6.6%、总银杏酸≤1mg/kg、银杏毒素≤10mg/kg。

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