CN113484457B - 中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法及应用，对同一份中药复方制剂，采用不同极性试剂进行系统提取处理，得到不同极性部位的样品供试品溶液A、B、C、D，同时制备对照药材溶液，不同极性部位的供试品溶液以对照药材溶液为对照，进行鉴别，找出适合鉴别该药材的供试品溶液制备方法，建立该药材的薄层鉴别方法。与传统薄层鉴别方法相比，本方法既降低了检测样品的使用量，节约了试剂用量，缩短了样品处理时间，又节省了中药生产企业大量的检测成本，具有可操作性强，方法简单。本发明适用于绝大多数中药复方制剂中单味药的薄层鉴别，对中药复方制剂更加全面的质量控制具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法及应用。
背景技术
薄层色谱鉴别是《中国药典》中药复方制剂中重要的定性鉴别手段，《中国药典》收载中药成方制剂都需要进行薄层色谱鉴别。已上市中成药品种约有6万个批准文号，9000多个质量标准。在现有中药复方制剂薄层鉴别中，由于需要鉴别的药味数量多，供试品溶液制备不系统，常常是每味药都需要一种单独的供试品溶液的制备方法，这样造成两个后果，一方面需要检测的样品较多，造成样品的浪费和试剂的浪费，另一方面制备供试品溶液需要花费较长的时间，不利于中药复方制剂生产的时效性。
鉴于此，本发明公开一种中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法及应用，对同一份检测样品，采用不同极性试剂进行系统提取处理，得到不同极性部位的样品供试品溶液，同时制备对照药材溶液，不同极性部位的供试品溶液以对照药材溶液为对照，进行鉴别，找出适合鉴别该药材的供试品溶液制备方法，建立该药材的薄层鉴别方法。
与传统薄层鉴别方法相比，本方法既降低了检测样品的使用量，节约了试剂用量，缩短了样品处理时间，又节省了中药生产企业大量的检测成本，具有可操作性强，方法简单。本发明适用于绝大多数中药复方制剂中单味药的薄层鉴别，对中药复方制剂更加全面的质量控制具有重要的意义。
发明内容
针对现有薄层色谱鉴别技术中存在的样品供试品溶液制备不系统，成本高、耗时长的问题，本发明提供了一种中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法及应用，该方法对同一份样品进行系统处理，得到4种不同极性大小的供试品溶液，然后对不同极性部位的供试品溶液进行鉴别，极大的节省了中药复方中单味药鉴别所需样品制备时间和成本。
本发明通过以下技术方案实现：
一种中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法，包括以下步骤：
（1）取中药复方制剂，用甲醇或乙醇提取处理，滤过，滤液蒸干后加水溶解或直接加水，然后用有机溶剂萃取提取，上层有机溶剂层蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液A，下层水层溶液备步骤（2）使用；
所述的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯中的一种或混合溶剂；
（2）取步骤（1）中的水层溶液，用水饱和的正丁醇溶液萃取提取，收集正丁醇层溶液，分成两份；
（3）步骤（2）中部分正丁醇层溶液加水洗涤，弃去水液后加入石油醚振摇，静置分层，分取下层溶液备用，上层溶液加入适量甲醇水溶液振摇提取，静置分层，分取下层溶液备用，上层溶液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液B；加入石油醚后的下层溶液和加入甲醇水溶液后的下层溶液合并，蒸干，残渣用甲醇溶解得供试品溶液C；
（4）取步骤（2）中剩余的正丁醇层溶液，用氨试剂洗涤，弃去氨层后加水洗涤，正丁醇层溶液蒸干，残渣加甲醇溶解得供试品溶液D。
进一步地，所述的中药复方制剂的取样量为5~50g；所述的供试品溶液A、供试品溶液B、供试品溶液C和供试品溶液D的体积为1~5mL。
进一步地，步骤（1）中所述的提取方式为溶解，回流提取，醇沉，放置过夜或超声10~40min。
进一步地，步骤（1）中所述的中药复方制剂与甲醇或乙醇的质量比为1:2~8；所述的水的加入量为15~30mL；所述的有机溶剂的提取次数为1~3次，每次15~30mL。
进一步地，步骤（2）中所述的水饱和的正丁醇溶液的提取次数为1~3次，每次的使用量为20~30mL。
进一步地，步骤（3）中所述的石油醚的用量与正丁醇层的体积比约为1:1；所述的甲醇水溶液为10%的甲醇水溶液，使用量为10~30mL。
进一步地，所述的石油醚的沸程为60~90℃。
进一步地，所述的蒸干方式为水浴蒸干。
本发明中，所述的中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法在建立中药复方薄层鉴别方法中的应用。对同一份检测样品，采用不同极性试剂进行系统提取处理，得到不同极性部位的样品供试品溶液，同时制备对照药材溶液，不同极性部位的供试品溶液以对照药材溶液为对照，进行鉴别，找出适合鉴别该药材的供试品溶液制备方法，建立该药材的薄层鉴别方法。
有益效果
（1）本发明采用简单、易操作的处理方法制备供试品溶液，处理一次样品即可得到4种不同极性大小的供试品溶液，然后对不同极性部位的供试品溶液以对照药材溶液为对照，进行鉴别，找出适合鉴别各个单味药材的极性部位供试品溶液，可建立该药材的薄层鉴别方法，极大的节省了中药复方中单味药鉴别所需样品制样时间；
（2）由于大多数对照品专属性不强，采用对照品做对照存在诸多弊端，而本发明中鉴别方法大多数采用对照药材做对照，即可对制剂中个药进行有效鉴别，不需要大量的对照品，一般对照药材价格仅是对照品价格的5%～30%，节省了中药生产企业的检测成本。
附图说明
图1为中药复方中单味药材提取的流程示意图；
图2为实施例1中药复方中连翘鉴别特征图（其中1为连翘阴性对照溶液，2为连翘对照溶液，3-12为供试品溶液A）；
图3为实施例1中药复方中薄荷鉴别特征图（其中1为薄荷阴性对照溶液，2为薄荷对照溶液，3-12为供试品溶液A）；
图4为实施例1中药复方中荆芥穗鉴别特征图（其中1为荆芥穗阴性对照溶液，2为荆芥穗对照溶液，3-12为供试品溶液B）；
图5为实施例1中药复方中牛蒡子鉴别特征图（其中1为牛蒡子阴性对照溶液，2为牛蒡子对照溶液，3-12为供试品溶液B）；
图6为实施例1中药复方中淡豆豉鉴别特征图（其中1为淡豆豉阴性对照溶液，2为淡豆豉对照溶液，3-12为供试品溶液B）；
图7为实施例1中药复方中甘草鉴别特征图（其中1为甘草阴性对照溶液，2为甘草对照溶液，3-12为供试品溶液C）；
图8为实施例1中药复方中金银花鉴别特征图（其中1为金银花阴性对照溶液，2为金银花对照溶液，3-12为供试品溶液C）；
图9为实施例2中药复方中陈皮鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液B，6为陈皮阴性对照溶液，7为陈皮对照溶液，8-12为供试品溶液B）；
图10为实施例2中药复方中太子参鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液C，6为太子参阴性对照溶液，7为太子参对照溶液，8-12为供试品溶液C）；
图11为实施例2中药复方中白芍鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液C，6为白芍阴性对照溶液，7为白芍对照溶液，8-12为供试品溶液C）；
图12为实施例2中药复方中甘草鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液C，6为甘草阴性对照溶液，7为甘草对照溶液，8-12为供试品溶液C）；
图13为实施例2中药复方中黄芪鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液D，6为黄芪阴性对照溶液，7为黄芪对照溶液，8-12为供试品溶液D）；
图14为实施例3中药复方中金银花鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液C，6为金银花阴性对照溶液，7为金银花对照溶液，8-12为供试品溶液C）；
图15为实施例3中药复方中甘草鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液C，6为甘草阴性对照溶液，7为甘草对照溶液，8-12为供试品溶液C）；
图16为实施例3中药复方中黄芪鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液D，6为黄芪阴性对照溶液，7为黄芪对照溶液，8-12为供试品溶液D）；
图17为实施例3中药复方中鱼腥草鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液D，6为鱼腥草阴性对照溶液，7为鱼腥草对照溶液，8-12为供试品溶液D）；
图18为实施例3中药复方中辛夷鉴别特征图（其中1-5为供试品溶液D，6为辛夷阴性对照溶液，7为辛夷对照溶液，8-12为供试品溶液D）。
具体实施方式
为了使本领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其它类同实施例，都应当属于本申请保护的范围。
采用本发明中单味药鉴别的样品制备共性技术对三个中药复方进行了实验，具体情况如下，中药复方中单味药材提取的流程示意图如图1所示：
实施例1
中药复方（甲）由金银花、连翘、薄荷、荆芥、桔梗、淡竹叶、牛蒡子、淡豆豉、甘草、芦根10味中药组成，剂型为散剂，运用本申请供试品溶液的制备方法，结合薄层色谱分析方法成功鉴别出了中药复方（甲）中金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、淡豆豉、甘草7种单味药；
具体方法如下：
（一）供试品溶液制备：
（1）称取中药复方（甲）10g，加甲醇30mL溶解，超声提取30min，放置至室温，滤过，滤液加水10mL，然后用石油醚（30～60℃）20ml和乙酸乙酯5mL的混合溶剂提取两次，振摇，静置，分离出下层溶液供步骤（2）使用，有机层（石油醚和乙酸乙酯层）水浴挥干，残渣加甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液A；
（2）取步骤（1）中的下层水溶液，水浴蒸干，加水20mL加热溶解，用水饱和的正丁醇溶液提取两次，每次30mL，收集正丁醇层溶液，并分成两份；
（3）取步骤（2）中的一份正丁醇层溶液，加水洗涤两次，弃去水液，加入石油醚（60～90℃）（与正丁醇层的体积比约为1:1），振摇，静置，分离出下层溶液，上层溶液加入10%甲醇溶液10mL，振摇，静置，分取上层溶液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液B；上述加入石油醚后的下层溶液与加入甲醇水溶液后的下层溶液合并，蒸干，残渣用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液C；
（4）取步骤（2）中另一份正丁醇层溶液，用氨试液洗涤，弃去氨洗液，加水洗涤一次，弃去水液，分取的正丁醇层溶液蒸干，残渣用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液D；
（二）阴性对照溶液的制备：按样品制备方法，制备缺金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、淡豆豉、甘草等各味药材的阴性样品，根据其所在可鉴别出的供试品溶液的位置，制备缺金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、淡豆豉、甘草各味药材的阴性对照溶液；
（三）对照药材溶液的制备：取对照药材（金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、淡豆豉、甘草）各1.00g，分别加甲醇2 ml浸泡过夜，上清液作为对照药材溶液；
（四）分别取供试品溶液A、B、C、D，缺金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、淡豆豉、甘草各味药材的阴性对照溶液，对照药材溶液，用薄层色谱的方法进行鉴别，中药复方（甲）中7种单味药鉴别展开结果如图2～图8所示，由图可知，供试品溶液A可用于鉴别出连翘和薄荷，如图2和图3所示；供试品溶液B可用于鉴定荆芥穗、牛蒡子和淡豆豉，如图4、图5、图6所示；供试品溶液C可用于鉴定甘草、金银花，如图7和图8所示；供试品溶液D未鉴别出中药复方（甲）中的单味药，在建立标准时可以省略供试品D的制备步骤，因此在建立该中药复方（甲）时采用步骤（1）～（3）提取出3种极性不同的供试品溶液供薄层色谱检测，成功鉴别出中药复方（甲）中金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、淡豆豉、甘草7种单味药。
实施例2
中药复方（乙）由白芍、太子参、黄芪、黄精、陈皮、甘草、大枣7味药组成，剂型为口服液，运用本申请供试品溶液的制备方法，结合薄层色谱分析方法成功鉴别出了中药复方（乙）中的白芍、太子参、黄芪、陈皮、甘草5种单味药。
具体方法如下：
（一）供试品溶液制备：
（1）取中药复方（乙）口服液50ml，加入乙醇200ml，边加边搅拌，超声处理15min，4℃冷藏放置30分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20mL加热溶解，放凉，加入石油醚（60～90℃）提取两次，每次20ml，分离出的水层溶液供步骤（2）使用，合并两次提取的石油醚层，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至2ml，作为供试品溶液A；
（2）取步骤（1）中的水层溶液，水浴挥散石油醚，加水补充至20ml，用水饱和的正丁醇溶液提取两次，每次30ml，收集正丁醇层溶液，并分成两份；
（3）取步骤（2）中的一份正丁醇层溶液，加水洗涤两次，弃去水液，加入石油醚（60～90℃）30ml，振摇，静置，分离出下层溶液，上层溶液加入10%甲醇溶液10ml，振摇，静置，分取上层溶液水浴蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液B；加入甲醇后的下层溶液与加入石油醚后的下层溶液合并，蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液C；
（4）取步骤（2）中另一份正丁醇层溶液，用氨试液洗涤，弃去氨洗液，加水洗涤一次，弃去水液，正丁醇层溶液蒸干，甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液D；
（二）阴性对照溶液的制备：按样品制备方法，制备缺白芍、太子参、黄芪、陈皮、甘草等各味药材的阴性样品，根据其所在可鉴别出的供试品溶液的位置，制备缺白芍、太子参、黄芪、陈皮、甘草各味药材的阴性对照溶液：
（三）对照药材溶液的制备：黄芪对照药材2g，加甲醇30ml，加热回流提取1小时，按药典方法制成对照药材溶液；取白芍、太子参、陈皮、甘草对照药材1g，加甲醇2ml，放置过夜，取上清液作为对照药材溶液；
（四）分别取供试品溶液A、B、C、D，缺白芍、太子参、黄芪、陈皮、甘草各味药材的阴性对照溶液，对照药材溶液，用薄层色谱的方法进行展开，中药复方（乙）中5种单味药鉴别展开结果如图9～图13所示，由图可知，供试品溶液A未鉴别出中药复方（乙）中的单味药，在建立标准时可以省略供试品A的制备步骤；供试品溶液B可用于鉴定陈皮，如图9所示；供试品溶液C可用于鉴定太子参、白芍、甘草，如图10、图11和图12所示；供试品溶液D可用于鉴别黄芪，如图13所示；因此在建立该中药复方（乙）时省略步骤（1）中供试品溶液A的提取步骤，其它3种极性不同的供试品溶液供薄层色谱检测，成功鉴别出中药复方（乙）中白芍、太子参、黄芪、陈皮、甘草5种单味药。
实施例3
中药复方（丙）由黄芪、防风、辛夷、金银花、鱼腥草、桔梗、甘草7味药组成，剂型为口服液，运用本申请供试品溶液的制备方法，结合薄层色谱分析方法成功鉴别出了中药复方（丙）中黄芪、金银花、鱼腥草、辛夷、甘草5种单味药。
具体方法如下：
（一）供试品溶液制备：
（1）取中药复方（丙）口服液50ml，加入乙醇200ml，边加边搅拌，超声处理15min，4℃冷藏30分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣用20mL水加热溶解，放至室温，加入石油醚（30～60℃）提取两次，每次20mL，分离出水层溶液供步骤（2）使用，合并两次提取的石油醚层，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液A；
（2）取步骤（1）中分离出的水层溶液，水浴挥散石油醚，加水至约20ml，用水饱和的正丁醇溶液提取两次，每次30ml，收集正丁醇层溶液，并分成两份；
（3）取步骤（2）中一份正丁醇层溶液，加水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，加入石油醚（60～90℃）20ml，振摇，静置，分理出下层溶液，上层溶液加入10%甲醇溶液10ml振摇，静置，分取上层溶液蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液B；加入甲醇后的下层溶液和加入石油醚后的下层溶液合并，蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液C；
（4）取步骤（2）中另一份正丁醇层溶液，用氨试液20ml洗涤，弃去氨洗液，加水洗涤一次，弃去水液，正丁醇溶液层溶液蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，作为供试品溶液D；
（二）阴性对照溶液的制备：按样品制备方法，制备缺黄芪、金银花、鱼腥草、辛夷、甘草各味药材的阴性样品，根据其所在可鉴别出的供试品溶液的位置，制备缺黄芪、金银花、鱼腥草、辛夷、甘草各味药材的阴性对照溶液；
（三）对照药材溶液的制备：黄芪对照药材2g，加甲醇30ml，加热回流提取1小时，按药典方法制成对照药材溶液；金银花对照药材粉末0.5g，加甲醇3ml，放置过夜，取上清液作为对照药材溶液；鱼腥草对照药材1g，加甲醇30ml浸泡30分钟，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氨试液20ml使溶解，乙酸乙酯萃取两次，每次20ml，弃去水液，合并乙酸乙酯溶液，加水洗涤两次，每次20ml，洗液弃去，乙酸乙酯部分蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。辛夷对照药材0.5g，加甲醇2ml浸泡过夜，取上清液作为对照药材溶液。取甘草对照药材1g，加甲醇2ml浸泡过夜，取上清液作为对照药材溶液；
（四）分别取供试品溶液A、B、C、D，缺白芍、太子参、黄芪、陈皮、甘草各味药材的阴性对照溶液，对照药材溶液，用薄层色谱的方法进行展开，中药复方（丙）中5种单味药鉴别展开结果如图14～图18所示：由图可知，供试品溶液A未鉴别出中药复方（丙）中的单味药，在建立标准时可以省略供试品A的制备步骤；供试品溶液B未鉴别出中药复方（丙）中的单味药，在建立标准时可以省略供试品B的制备步骤；供试品溶液C可用于鉴定金银花、甘草，如图14和图15所示；供试品溶液D可用于鉴别黄芪、鱼腥草、辛夷，如图16、图17和图18所示；因此在建立该中药复方（丙）时省略步骤（1）中供试品溶液A和步骤（2）中供试品溶液B的提取步骤，其它2种极性不同的供试品溶液供薄层色谱检测，成功鉴别出中药复方（丙）中黄芪、金银花、鱼腥草、辛夷、甘草5种单味药。
Claims (8)
1.一种中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取中药复方制剂，用甲醇或乙醇提取处理，滤过，滤液蒸干后加水溶解或直接加水，然后用有机溶剂萃取提取，上层有机溶剂层蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液A，下层水层溶液备步骤（2）使用；
所述的有机溶剂为石油醚或石油醚和乙酸乙酯中的混合溶剂，石油醚和乙酸乙酯的体积比为4:1；
（2）取步骤（1）中的水层溶液，用水饱和的正丁醇溶液萃取，收集正丁醇层溶液，分成两份；
（3）步骤（2）中部分正丁醇层溶液加水洗涤，弃去水液后加入石油醚振摇，静置分层，分取下层溶液备用，上层溶液加入适量甲醇水溶液振摇提取，静置分层，分取下层溶液备用，上层溶液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液B；加入石油醚后的下层溶液和加入甲醇水溶液后的下层溶液合并，蒸干，残渣用甲醇溶解得供试品溶液C；
（4）取步骤（2）中剩余的正丁醇层溶液，用氨试剂洗涤，弃去氨层后加水洗涤，正丁醇层溶液蒸干，残渣加甲醇溶解得供试品溶液D。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的中药复方制剂的取样量为5~50g；所述的供试品溶液A、供试品溶液B、供试品溶液C和供试品溶液D的体积为1~5mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的中药复方制剂与甲醇或乙醇的质量比为1:2~8；所述的水的加入量为15~30mL；所述的有机溶剂的提取次数为1~3次，每次15~30mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的水饱和的正丁醇溶液的萃取次数为1~3次，每次的使用量为20~30mL。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的石油醚的用量与正丁醇层的体积比约为1:1；所述的甲醇水溶液为10%的甲醇水溶液，使用量为10~30mL。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的石油醚的沸程为60~90℃。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的蒸干为水浴蒸干。
8.一种权利要求1~7任一项所述的中药复方制剂薄层色谱检测中供试品溶液的制备方法在建立中药复方薄层鉴别方法中的应用。
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