CN113462599B - 一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂及其在防治植物线虫病中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂及其在防治根结线虫病中的应用，属于生物农药技术领域。本发明提供了一株保藏编号为CCTCC No.M2021375的耐冷假单胞菌菌株SJ5，对线虫具有较强杀伤作用。同时本发明还提供了一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，包括苦参印楝素乳油、耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌的发酵液、枯草芽孢杆菌的发酵液。本发明采用所述生物制剂防治植物线虫病，不仅能达到噻唑膦和棉隆等化学药剂的生物防效，还能有效促进植物的生长，更具应用价值。

Description

一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂及其在防治 植物线虫病中的应用
技术领域
本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂及其在防治根结线虫病中的应用。
背景技术
植物线虫病由植物寄生线虫侵袭和寄生引起的植物病害。针对根结线虫的传统防治方法有农业防治、化学防治。农业防治如深耕、轮作、培育抗性品种等，但由于根结线虫寄主范围十分广泛，且国内缺乏高抗作物品种，农业防治的效果并不理想。目前市场上的防治线虫产品仍以化学药剂为主，噻唑膦和棉隆等常见化学药剂在市场容量中占比共达69.12％，化学农药的大量使用导致土壤恶化、作物产量与品质下降、病害加重，对生态环境和食品安全造成了严重威胁。生物防治是利用植物或微生物，通过在土壤中添加植株提取液、微生物发酵液等方式达到防治线虫的目的，随着近几年“两减”战略的有力推行，进一步扩大研发安全高效、环境友好的生物制剂势必更能满足人民对绿色、高端农产品的需求。当前生物防治根结线虫病的研究主要集中在单一组分防治上，单一植物源制剂防治效果不稳定，而单一菌剂具有防治根结线虫的作用，但是防治效果不理想，这无疑给植物线虫病的防治提出挑战。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种单一生防菌-耐冷假单胞菌(Pseudomonaspsychrotolerans)菌株SJ5对线虫具有较强的杀伤作用。
本发明提供了一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂及其在防治植物线虫病中的应用，对防治植物线虫病具有较高的防效。
本发明提供了一种对线虫具有杀伤作用的耐冷假单胞菌(Pseudomonaspsychrotolerans)菌株SJ5，所述耐冷假单胞菌菌株的保藏编号为CCTCC No.M2021375。
本发明提供了一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，所述植物源成分包括苦参印楝素乳油；所述微生物源成分包括所述耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌(Chryseobacterium gleum)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)3种生防菌的菌体或发酵液。
优选的，耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌的发酵液、枯草芽孢杆菌的发酵液的体积比为1～10:1～10:1～10。
优选的，耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌发酵液或枯草芽孢杆菌发酵液是将耐冷假单胞菌菌株SJ5菌液、粘金黄杆菌菌液或枯草芽孢杆菌接种至LB液体培养基中，在150～200rpm转速下培养48～72h，收集菌液得到。
本发明提供了所述耐冷假单胞菌菌株SJ5或所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂在防治植物线虫病中的应用。
优选的，所述植物线虫病包括根结线虫引起的植物线虫病；
所述植物包括茄科植物。
本发明提供了一种基于所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂防治植物线虫病的方法，包括以下步骤：
在植物栽培时，将所述生物制剂中微生物源成分和植物源成分施入植物根部，覆土。
优选的，所述微生物源成分的施用量60～200ml/株。
优选的，所述植物源成分的施用量为90～120ml苦参印楝素乳油500～1000倍稀释液；
所述苦参印楝素乳油的质量浓度为0.5％～1％。
优选的，根据土壤中线虫病害严重程度还包括在栽培前施用所述生物制剂和/或栽培管理过程中补充施用所述生物制剂。
本发明提供了一种对线虫具有杀伤作用的耐冷假单胞菌(Pseudomonaspsychrotolerans)菌株SJ5，所述耐冷假单胞菌菌株的保藏编号为CCTCC No.M2021375。线虫毒力检测实验结果表明，对照组采用LB培养基处理根基线虫物死亡现象，而菌株SJ5的发酵液处理后，线虫大量死亡，死亡率为89％以上。说明本发明提供的菌株SJ5具有杀灭线虫的作用，为生物防治植物线虫病提供新的思路。
本发明提供的包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，所述植物源成分包括苦参印楝素乳油；所述微生物源成分包括所述耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌(Chryseobacterium gleum)的发酵液、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的发酵液。线虫毒力实验证明，苦参印楝素乳油以及耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌和枯草芽孢杆菌的发酵液均具有消灭线虫的作用，苦参印楝素乳油1000倍稀释液的校正死亡率为70％左右，而三种微生物的校正死亡率为87％以上。同时关于植物线虫病害的防效实验表明，化学药剂氟吡菌酰胺(T1)和噻唑膦(T2)处理组防治效果较高，分别达到71.24％和69.73％，而施用所述生物制剂组(T5)防效为67.75％，与化学药剂处理组相比无显著性差异，而苦参印楝素处理组T3防效最低，为46.40％。同时根据观察植物根系发育状态，未施用药组根系被线虫侵害严重，根短且不满根结，而施用所述生物制剂组根部发育状态良好，根结数量少且不明显，说明所述生物制剂具有理想的防治线虫病害的作用。
同时，所述生物制剂还有促进植物生长的作用。与空白对照组和化学药剂氟吡菌酰胺(T1)和噻唑膦(T2)处理组以及苦参印楝素处理组相比，施用所述生物制剂组的作物在株高、苗鲜重、苗干重、根鲜重等方面均有显著提高。说明所述生物制剂不仅具有提高植物抗根结线虫病的能力，同时可以促进作物生长。
附图说明
图1为本发明涉及的菌株SJ5的菌落形态图；
图2为本发明实施例中革兰氏染色SJ5菌株细胞形态；
图3为本发明实施例中菌株SJ5的系统发育树；
图4为普通光学显微镜下观察线虫毒力测定结果；其中线虫虫体弯曲表示处于活体状态，弧形或直线形状代表已死亡或者僵直濒临死亡状态；
图5为普通光学显微镜下观察线虫毒力测定统计结果；*代表显著性差异水平0.01<p<0.05，**代表p<0.01，n.s.代表无显著性差异；
图6为不同处理对番茄根结线虫病的防治效果(45d)；注：不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；
图7为不同处理对番茄根系的影响(45d)；注：箭头指向处代表番茄根部产生根结，即根结线虫寄生形成的瘤状突起；
图8为不同处理对番茄植株长势的影响(45d)；
图9为生防菌与植物源制剂苦参印楝素之间相容性拮抗测试结果，其中9A为SJ5进行涂板，分别将SJ17和SJ19点涂在平板上的结果；图9B为SJ17进行涂板，分别将SJ5和SJ19点涂在平板上的结果。
生物材料保藏信息
耐冷假单胞菌(Pseudomonas psychrotolerans)，保藏于中国典型培养物保藏中心，单位简称为CCTCC，地址为中国武汉，武汉大学，保藏时间为2021年04月14日。保藏编号为CCTCC NO:M2021375，菌株编号为SJ5。
具体实施方式
本发明提供了一种对线虫具有杀伤作用的耐冷假单胞菌(Pseudomonaspsychrotolerans)菌株SJ5，所述耐冷假单胞菌菌株的保藏编号为CCTCC No.M2021375。
本发明提供了一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，所述植物源成分包括苦参印楝素乳油；所述微生物源成分包括所述耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌和枯草芽孢杆菌3种生防菌的菌体或发酵液。
在本发明中，所述植物源成分和微生物源成分可以混合或单独分装。所述苦参印楝素乳油的质量浓度优选为1％。本发明对所述苦参印楝素乳油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的苦参印楝素乳油的来源即可。在本发明实施例中，所述1％苦参印楝素乳油由云南绿戎生物产业开发股份有限公司惠赠。
在本发明中，耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌的发酵液、枯草芽孢杆菌的发酵液的体积比优选为1～10:1～10:1～10，更优选为2～8:3～7:4～7，进一步优选为(4～6):5:5，最优选为1:1:1。本发明对粘金黄杆菌和枯草芽孢杆菌的菌株种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的粘金黄杆菌和枯草芽孢杆菌的常见菌株即可。所述粘金黄杆菌不仅对根结线虫病有较好的防效作用，而且能在盐胁迫土壤中生存，并能够促进植物生长；枯草芽孢杆菌对植物根结线虫病有一定的防效作用。耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌发酵液或枯草芽孢杆菌发酵液优选是将耐冷假单胞菌菌株SJ5菌液、粘金黄杆菌菌液或枯草芽孢杆菌接种至LB液体培养基中，在150～200rpm转速下培养48～72h，收集菌液得到。所述接种后培养液中活菌浓度≥3.0亿个/mL，更优选为3.2～5亿个/mL，最优选为3.5亿个/mL。所述培养的转速优选为180rpm。所述培养的时间优选为54～68h，更优选为64h。
本发明提供了所述耐冷假单胞菌菌株SJ5或所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂在防治植物线虫病中的应用。所述植物线虫病优选包括根结线虫引起的植物线虫病。所述根结线虫优选包括南方根结线虫。本发明对所有植物的线虫病的防治均适用，本发明为了举例说明具体的防治方法，实施例中以茄科植物为例加以说明，但不能理解为对本发明保护范围的限制。
本发明提供了一种基于所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂防治植物线虫病的方法，包括以下步骤：
在植物栽培时，将所述生物制剂中微生物源成分和植物源成分施入植物根部，覆土。
在本发明中，所述微生物源成分的施用量优选为60～200ml/株。所述植物源成分的施用量优选为90～120ml苦参印楝素乳油500～1000倍稀释液。所述苦参印楝素乳油的质量浓度优选为0.5％～1％。
在本发明中，根据土壤中线虫病害严重程度优选还包括在栽培前施用所述生物制剂和/或栽培管理过程中补充施用所述生物制剂。当栽培前施用时，优选在栽培前1周向土壤施用所述生物制剂。所述生物制剂的施用量没有特殊限制，例如60～200ml/株即可。所述补充施用所述生物制剂优选与上次施用间隔15～30d施用。
在本发明中，所述生物制剂优选联合其他线虫防菌剂应用植物线虫病害的防治中。当与其他线虫防菌剂联合施用时，优选测试所述生物制剂中3种微生物与所述线虫防菌剂是否发生拮抗，若无拮抗作用的发生则可一同施用，若发生拮抗作用则不允许联合施用。
在本发明中，所述方法不仅能够有效提高线虫病害，尤其是根结线虫引起的病害，而且还能有效促进植物作物的生长。本发明的方法不仅替换了噻唑膦和棉隆等常见化学药剂，减少了污染，而且对线虫病害取得了相似的防效作用，而且还能促进植物作物的生长，具有较高的应用价值。
下面结合实施例对本发明提供的一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂及其在防治植物线虫病中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
耐冷假单胞菌菌株SJ5的筛选方法以及鉴定方法
1.生防菌的分离与筛选
采用稀释平板涂布法对耐冷假单胞菌菌株SJ5进行分离和筛选，具体步骤如下：对发病番茄根际土壤细菌进行分离，取100μL稀释液依次涂布在NA培养基上，每个梯度3个重复，于30℃培养40h，观察挑取形态特征不同的单菌落，纯化后保存在4℃冰箱中备用。在NA培养基上采用点接法对分离、纯化后的菌株进行筛选，挑取菌株接种NA培养基，27℃培养72h后，观察细菌形态，SJ5菌落呈乳白色，圆形，表面明亮，微透明(见图1)。革兰氏染色结果显示，SJ5菌株形态呈菌体呈杆状，无芽孢，同时SJ5菌株呈现淡红色，证明该菌株为革兰氏阴性菌(见图2)。
2.菌株的纯化与保存
将挑取的单菌落在NA板上连续划线分离以进行纯化，再将纯化的菌株进行平板划线备用。菌株分离纯化后及时进行保存，方法如下：
2.1配制60％甘油于蓝口瓶中，高压蒸汽灭菌(121℃，15min),自然冷却后备用；
2.2用接种环挑取单菌落接种于25mL三角瓶中摇瓶培养(30℃，24h)；
2.3在超净工作台中吸取培养好的菌液1mL于无菌1.5mL离心管中进行离心(10000r/min)2min，弃上清，再加入等量ddH2O充分吸打混匀，吸取0.5mL于新的1.5mL离心管中；
2.4向1.5mL离心管中再加入0.5mL 60％无菌甘油，使甘油浓度为30％，震荡混匀；
2.5将1.5mL离心管中菌株编号SJ5，放入-80℃冰箱保存。
3.菌株SJ5分子生物学鉴定
提取菌株SJ5基因组DNA，采用16S rRNA通用引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物进行测序(北京擎科生物科技有限公司昆明分公司)。测序得到的序列在NCBI Blast中进行对比，于数据库(GenBank)中检索下载近源菌株序列，利用MEGAX软件进行菌株系统发育分析，用邻接法(neighbour-joining)构建系统发育树，检验自举支持率(Bootstrap)重复抽样次数为1000，根据构建的系统发育树鉴定菌种。
根据菌株SJ5的16S rDNA测序序列通过NCBI进行同源性比对并检索下载近源物种序列，用标准菌株序列构建系统发育树。如图3所示，菌株SJ5与耐冷假单胞菌(Pseudomonaspsychrotolerans)聚为一支，序列同源性为100％，因此SJ5被鉴定为耐冷假单胞菌，将SJ5保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No.M2021375。
实施例2
三种微生物发酵液的制备方法
1)配制LB液体培养基，经过121℃灭菌20min，得到灭菌后的LB液体培养基，调节pH值至7.4后，将LB液体培养基分装至摇瓶中，每瓶300mL培养基，冷却备用。
2)将耐冷假单胞菌菌株SJ5菌种接种1mL至摇瓶中，将接种后的摇瓶置于摇床上，在180rpm、28℃下培养60h，收集菌液，得到耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液。
3)将粘金黄杆菌菌种接种1mL至摇瓶中，将接种后的摇瓶置于摇床上，在200rpm、30℃下培养54h，收集菌液，得到粘金黄杆菌的发酵液。
4)将枯草芽孢杆菌菌种接种1mL至摇瓶中，将接种后的摇瓶置于摇床上，在200rpm、30℃下培养54h，收集菌液，得到粘金黄杆菌的发酵液。
实施例3
三种微生物发酵液对南方根结线虫的毒力测定方法
1)将实施例2制备的三种微生物发酵液分别经无菌滤膜(滤膜孔径0.22μm)过滤，分别得到三种微生物的发酵滤液。
2)设置五个处理，每处理设置5个培养皿(直径35mm)，每皿20μL根结线虫(J2)悬液(约100条)，每皿添加利福平至终浓度为100μg/mL，添加青霉素至终浓度为20μg/mL，添加链霉素至终浓度为50μg/mL。处理①为3000μLLB液体培养基(对照组)；②3000μL菌株SJ5发酵滤液；③3000μL粘金黄杆菌发酵滤液；④3000μL枯草芽孢杆菌发酵滤液；⑤3000μL苦参印楝素乳油稀释液(1000倍，母液浓度1％)。超净工作台中放置12h，观察南方根结线虫的形态，并统计死亡数量，根据公式I计算校正死亡率，重复三次。
校正死亡率(％)＝(处理组致死率-对照组致死率)/(1-对照组致死率)×100％公式I。
不同处理组的南方根结线虫经过12h处理后虫体状态见图4。由图4可知，LB液体培养基处理组中南方根结线虫体态全部呈弯曲状，表明活力较高。而苦参印楝素乳油稀释液和3种微生物发酵滤液处理的南方根结线虫大部分呈弧形或直线形，表明苦参印楝素稀释液和3种微生物发酵滤液均对南方根结线虫具有毒性。
不同处理组南方根结线虫的校正死亡率结果见图5。由图5可知，处理①中南方根结线虫J2在12h内无死亡现象。苦参印楝素乳油处理组12h后线虫的校正死亡率达70.81％，而耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌、枯草芽孢杆菌发酵上清滤液处理后12h线虫大量死亡，耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌、枯草芽孢杆菌对J2校正死亡率分别达89.23％、87.95％、88.97％。表明耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌、枯草芽孢杆菌均对南方根结线虫具有较高的毒力，而苦参印楝素乳油也具有一定的毒力作用，但效果不及三种微生物的效力。
实施例4
番茄根结线虫病的防治效果
1.将实施例2制备的耐冷假单胞菌发酵液、粘金黄杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液按照1:1:1的比例混合，得到三种液体菌剂。
2.选择对根结线虫易感病的番茄作为盆栽材料，盆栽土使用泥炭基质土，用30d苗龄的番茄苗进行盆栽试验，番茄苗移栽3d后，设置7个处理，每个处理5盆，试验重复3次；
CK0：不接种线虫，不施用任何杀线虫药剂的阴性对照；
CK1：每盆接种根结线虫3000条，不施用任何杀线虫药剂的阳性对照；
T1：每盆接种根结线虫3000条，施用200mL氟吡菌酰胺稀释液(1000倍)；
T2：每盆接种根结线虫3000条，施用200mL噻唑膦稀释液(1000倍)；
T3：每盆接种根结线虫3000条，施用200mL苦参印楝素乳油稀释液(1000倍)；
T4：每盆接种根结线虫3000条，各施用20mL三种液体菌剂，15天后重复一次；
T5：每盆接种根结线虫3000条，各施用20mL三种液体菌剂和100mL苦参印楝素稀释液(1000倍)，15d后重复一次。每盆栽种一颗番茄，每个处理5盆。重复3次也就是15盆。
统计不同处理组番茄的跟结线虫病级指数，并根据公式II和公式III分别计算根结指数和相对防效。
根结线虫病级指数：0级，根系未被侵染，无根结，健康完整；1级，有极少数根结，根结占根系体积10％以下；3级，少量根结，根结占根系体积的11％～25％；5级，根结明显，根结占根系体积26％～50％；7级，根系相连，根结占全根系的51％～75％；9级，多数主根和侧根结瘿并呈畸形，甚至腐烂，根结占全根系的75％以上。
根结指数[％]＝∑(各级病株数×各级严重度)/(调查总株数×最高等级数9)×100％ 公式II；
相对防效(％)＝(对照组根结指数-处理组根结指数)/对照组根结指数×100％公式III。
相对防效结果见图6。由图6可知，不同药剂处理的番茄根结线虫根结指数与对照组相比显著降低。氟吡菌酰胺(T1)和噻唑膦(T2)处理组相对防治效果较高，达到71.24％和69.73％，二者无显著性差异。处理组T5相对防效为67.75％，与处理组T1、T2无显著性差异。而苦参印楝素乳油处理组T3相对防效最低，为46.40％，与处理组T5呈显著性差异。
观察接入根结线虫45d后不同处理组番茄根部情况，结果见图7。盆栽番茄生长45d后，对照组T1被根结线虫侵害严重，根短且布满根结，处理组T5根部发育状态较好，根结数量少且不明显。
统计接入根结线虫45d后不同处理组番茄株高、茎围、植株鲜质量、根鲜重、苗干重和根干重等数据，并分析各处理组相同指标的差异情况。结果见图8。处理组T5番茄株高、植株鲜质量、苗干重、根鲜重与其他处理组相比，显著性增高，但茎围、根干重各组无显著性差异。这表明本发明提供的含三种微生物发酵液和苦参印楝素乳油稀释液的生物制剂不仅能够有效防治根结线虫病，还能促进植物生长。
实施例5
生防菌株之间以及生防菌与植物源制剂之间相容性拮抗测试
方法：LB培养基灭菌降温至50℃后加入稀释1000倍的1％苦参印楝素，倒板静置。调节生防细菌(耐冷假单胞菌菌株SJ5或粘金黄杆菌菌株SJ17)菌悬液浓度为5×106CFU/mL，吸取50μL均匀涂布在平板，再分别吸取5μL另外两株生防菌悬液(粘金黄杆菌菌株SJ17和枯草芽孢杆菌菌株SJ19或者耐冷假单胞菌菌株SJ5和枯草芽孢杆菌菌株SJ19)点板，封膜后置于28℃恒温箱倒置培养24h，观察有无抑菌圈产生，有抑菌圈代表菌株不能共同生长，无抑菌圈表示两菌株相容，能共同生长。
结果：生防菌株SJ5、SJ17、SJ19均能在含有苦参印楝素的LB培养基上生长，且共同培养的菌株之间均未产生抑菌圈(图9)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种对线虫具有杀伤作用的耐冷假单胞菌(Pseudomonas psychrotolerans)菌株SJ5，其特征在于，所述耐冷假单胞菌菌株的保藏编号为CCTCC No.M2021375。
2.一种包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，其特征在于，所述植物源成分包括苦参印楝素乳油；所述微生物源成分包括权利要求1所述耐冷假单胞菌菌株SJ5、粘金黄杆菌(Chryseobacteriumgleum)和枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis)3种生防菌的菌体或发酵液。
3.根据权利要求2所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，其特征在于，耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌的发酵液、枯草芽孢杆菌的发酵液的体积比为1～10:1～10:1～10。
4.根据权利要求2所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂，其特征在于，耐冷假单胞菌菌株SJ5的发酵液、粘金黄杆菌发酵液或枯草芽孢杆菌发酵液是将耐冷假单胞菌菌株SJ5菌液、粘金黄杆菌菌液或枯草芽孢杆菌接种至LB液体培养基中，在150～200rpm转速下培养48～72h，收集菌液得到。
5.权利要求1所述耐冷假单胞菌菌株SJ5或权利要求2～4任意一项所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂在防治植物线虫病中的应用。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述植物线虫病包括根结线虫引起的植物线虫病；所述植物包括茄科植物。
7.一种基于权利要求2～4任意一项所述包含植物源成分和微生物源成分的生物制剂防治植物线虫病的方法，其特征在于，包括以下步骤：
在植物栽培时，将所述生物制剂中微生物源成分和植物源成分施入植物根部，覆土。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述微生物源成分的施用量60～200ml/株。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述植物源成分的施用量为90～120ml苦参印楝素乳油500～1000倍稀释液；
所述苦参印楝素乳油的质量浓度为0.5％～1％。
10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，根据土壤中线虫病害严重程度还包括在栽培前施用所述生物制剂和/或栽培管理过程中补充施用所述生物制剂。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114717138B (zh) * 2021-12-28 2022-11-18 江苏省农业科学院 一种设施番茄的绿色栽培方法

Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009031874A1 (es) * 2007-09-04 2009-03-12 Jorge Olmos Soto Cepa de bacillus subtilis para uso agrícola
EP2806739A1 (en) * 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
WO2015114552A1 (en) * 2014-01-29 2015-08-06 University Of Pretoria Plant growth promoting rhizobacterial strains and their uses
EP2925144A2 (en) * 2012-12-03 2015-10-07 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
CN107674850A (zh) * 2017-11-15 2018-02-09 沈阳农业大学 一种杀根结线虫的莓实假单孢菌Sned811、代谢产物及应用
CN109161506A (zh) * 2018-09-20 2019-01-08 宁国市百立德生物科技有限公司 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN109169710A (zh) * 2018-10-08 2019-01-11 山西农业大学 一种防治根结线虫生防菌剂及其应用
CN109953059A (zh) * 2017-12-26 2019-07-02 营口富里实业有限公司 一种防治稻飞虱的植物源农药
CN110628664A (zh) * 2019-08-15 2019-12-31 华中农业大学 防治根结线虫的远东假单胞菌及其制备方法与应用
CN110771631A (zh) * 2019-12-10 2020-02-11 云南大学 一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法
CN112063558A (zh) * 2020-09-17 2020-12-11 湖南农业大学 一种假单胞菌属菌株及其应用
WO2021028911A1 (en) * 2019-08-14 2021-02-18 Lavie Bio Ltd. Bacterial strains having fungicidal activity, compositions comprising same and use thereof
KR102237327B1 (ko) * 2020-02-12 2021-04-07 전남대학교산학협력단 다양한 식물에 저항성을 유도하는 바실러스 서브틸리스 jck-1398 균주, 이를 이용한 소나무재선충병 방제용 조성물 및 방제방법
CN112831443A (zh) * 2021-02-22 2021-05-25 青岛农业大学 一株枯草芽孢杆菌、菌剂及其在防治植物病害中的应用
CN113151065A (zh) * 2021-03-30 2021-07-23 山东蔚蓝生物科技有限公司 一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其应用
WO2021204967A1 (en) * 2020-04-08 2021-10-14 Eligo Bioscience Modulation of microbiota function by gene therapy of the microbiome to prevent, treat or cure microbiome-associated diseases or disorders
CN113817615A (zh) * 2021-11-10 2021-12-21 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种利用双黄连药渣发酵生产的复合生防菌剂及其应用
CN114231420A (zh) * 2021-11-29 2022-03-25 云南大学 一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用
CN114507626A (zh) * 2022-03-15 2022-05-17 贵州省烟草公司毕节市公司 一株对根结线虫有毒杀活性的枯草芽孢杆菌2jq3及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2378040B1 (es) * 2010-03-31 2013-02-18 Probelte, S.A Un preparado biológico bionematicida y estimulador del crecimiento vegetal y cultivos puros de las cepas denominadas n11, sr11 y alo1, contenidas en el mismo.

Patent Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009031874A1 (es) * 2007-09-04 2009-03-12 Jorge Olmos Soto Cepa de bacillus subtilis para uso agrícola
EP2806739A1 (en) * 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
EP2925144A2 (en) * 2012-12-03 2015-10-07 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2015114552A1 (en) * 2014-01-29 2015-08-06 University Of Pretoria Plant growth promoting rhizobacterial strains and their uses
CN107674850A (zh) * 2017-11-15 2018-02-09 沈阳农业大学 一种杀根结线虫的莓实假单孢菌Sned811、代谢产物及应用
CN109953059A (zh) * 2017-12-26 2019-07-02 营口富里实业有限公司 一种防治稻飞虱的植物源农药
CN109161506A (zh) * 2018-09-20 2019-01-08 宁国市百立德生物科技有限公司 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN109169710A (zh) * 2018-10-08 2019-01-11 山西农业大学 一种防治根结线虫生防菌剂及其应用
WO2021028911A1 (en) * 2019-08-14 2021-02-18 Lavie Bio Ltd. Bacterial strains having fungicidal activity, compositions comprising same and use thereof
CN110628664A (zh) * 2019-08-15 2019-12-31 华中农业大学 防治根结线虫的远东假单胞菌及其制备方法与应用
CN110771631A (zh) * 2019-12-10 2020-02-11 云南大学 一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法
KR102237327B1 (ko) * 2020-02-12 2021-04-07 전남대학교산학협력단 다양한 식물에 저항성을 유도하는 바실러스 서브틸리스 jck-1398 균주, 이를 이용한 소나무재선충병 방제용 조성물 및 방제방법
WO2021204967A1 (en) * 2020-04-08 2021-10-14 Eligo Bioscience Modulation of microbiota function by gene therapy of the microbiome to prevent, treat or cure microbiome-associated diseases or disorders
CN112063558A (zh) * 2020-09-17 2020-12-11 湖南农业大学 一种假单胞菌属菌株及其应用
CN112831443A (zh) * 2021-02-22 2021-05-25 青岛农业大学 一株枯草芽孢杆菌、菌剂及其在防治植物病害中的应用
CN113151065A (zh) * 2021-03-30 2021-07-23 山东蔚蓝生物科技有限公司 一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其应用
CN113817615A (zh) * 2021-11-10 2021-12-21 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种利用双黄连药渣发酵生产的复合生防菌剂及其应用
CN114231420A (zh) * 2021-11-29 2022-03-25 云南大学 一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用
CN114507626A (zh) * 2022-03-15 2022-05-17 贵州省烟草公司毕节市公司 一株对根结线虫有毒杀活性的枯草芽孢杆菌2jq3及其应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Consortia of anti-nematode fungi and bacteria in the rhizosphere of soybean plants attacked by root-knot nematodes;Hirokazu Toju等;《R. Soc. open sci.》;20190327;第1-20页 *
Induction of trap formation in nematode-trapping fungi by a bacterium;Lei Li等;《FEMS Microbiol Lett》;20110901;第322卷;第157-165页 *
假单孢菌属细菌防治植物寄生线虫的研究进展;赵丹等;《中国线虫学研究》;20161027;第5卷;第299-304页 *
北部湾徐闻海域红树内生细菌物种多样性及其杀线虫活性研究;李蜜等;《广西植物》;20201215(第03期);第21-30页 *
印楝素与不同杀虫剂混配对根结线虫的防治效果;高玉红等;《江苏农业科学》;20140725;第42卷(第7期);第133-135页 *
植物源与微生物源生物制剂复配防治根结线虫病;舒洁等;《生物技术通报》;20210726;第37卷(第7期);第164-174页 *

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