CN113456643A - 一种含普那布林的药物组合及其应用 - Google Patents
一种含普那布林的药物组合及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及癌症化疗药物技术领域，公开了一种含普那布林的药物组合及其应用。该药物组合的活性成分包括普那布林和粉防已碱。粉防己碱和普那布林联用可抑制和杀灭各种恶性肿瘤细胞，并可以减少用药量、缩短治疗周期，减少毒副作用，由毒副作用所带来的不良反应也就随之降低。在避免抗药性或耐药性方面就又多了一种新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及癌症化疗药物技术领域，具体涉及一种含普那布林的药物组合及其应用。
背景技术
癌症是当今严重危害人们健康的疾病之一，化疗是治疗恶性肿瘤(癌症)的方法之一，它是利用化学药物来阻止癌细胞的增殖、浸润和转移，直至最终杀灭癌细胞的一种治疗方式。但化疗对癌症的治疗效果常因以下几个方面导致化疗失败：1)化疗药物限制性剂量太大，病人无法耐受足够的治疗剂量及疗程；2)化疗药物选择性差，会产生严重的毒副作用；3)瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)。
普那布林(Plinabulin)是在从海洋焦曲霉菌中分离得到的天然产物Phenylahistin结构基础上，经构效关系研究,合成出的二酮哌嗪类微管蛋白抑制剂。普那布林注射液(也称注射针剂)可潜在用于治疗肺癌、乳腺癌、白血病，目前正处于三期临床试验阶段。但是，普那布林与其他化疗药物一样，对肿瘤细胞的选择性较差，在杀灭癌细胞的同时也会不可避免地损伤人体的正常细胞，从而出现药物的不良反应，而且，这些毒副反应与普那布林用量成正相关。同时，治疗恶性肿瘤时间相对较长，在长时间治疗过程中，必然会逐渐产生抗药性或耐药性，人们还必须时常更换不同的药物来避免抗药性或耐药性。
因此，如何增强普那布林药效同时，减少毒副作用和耐药性是亟待解决的问题。
发明内容
本发明意在提供一种含普那布林的药物组合及其应用，以解决增强普那布林药效同时，减少毒副作用和耐药性的技术问题。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种含普那布林的药物组合，所述药物组合的活性成分包括普那布林和粉防已碱。
本方案的原理及优点是：
发明人前期研究中，经过多种药物的筛选发现，粉防己碱协同普那布林，对普纳布林抑制和杀灭多种肿瘤细胞的能力具有显著地提升作用。粉防己碱(Tetrandrine、汉防已甲素)，化学名6,6,7,12-四甲氧基-2,2-二甲基小檗胺，分子式为C33H42N2O6，分子量为622.73，是从防已科植物粉防已(Steohamia tetrandra S.Moore)的根块中提取的双苄基异喹啉类生物碱，是一种常用的抗高血压药物。实验验证表明，对于耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR，人胃癌细胞SGC-7901,人乳腺癌细胞MDA-MB-231,耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR，人组织细胞淋巴瘤细胞U-937，粉防己碱在正常剂量下，该药物组合不仅提高了抑制和杀灭肿瘤细胞的效果，明显优于单用普那布林和单用粉防已碱的效果，达到“1+1＞2”的协同作用；而且在获得等同疗效的情况下，普纳布林的给药量明显减少，进而减少了普那布林的毒副作用。在正常剂量情况下，粉防己碱是基本没有毒副的药品，所以本方案的药物组合的副作用较小。
除此之外，发明人还发现，药物组合具有逆转肿瘤细胞耐药的功效，比如对耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR、耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR具有明显的抑制效果。
因此，粉防己碱和普那布林联用在抑制和杀灭各种恶性肿瘤细胞的情况下，可以减少用药量、缩短治疗周期，减少毒副作用，以及由毒副作用所带来的不良反应也就随之降低。本发明的这种药物组合是治疗癌症的实践操作中的避免抗药性或耐药性产生的新选择的。
优选的，作为一种改进，普那布林和粉防已碱的质量比为14-21:25。
有益效果：该比例范围内，两者可以达到更好的协同作用。根据普那布林的二期临床数据，普那布林的每日推荐用量为32-48mg,连续用药4周，停药2周，6周为一疗程。根据粉防己碱的说明书，粉防己碱的每日推荐用量为200mg,每周用药2次，连用2周，停药1周，如此重复2次，6周为一疗程。本方案的一个疗程内普那布林的总用药量和粉防已碱的总用药量的质量比，依照两种药物的推荐用量换算。即，一个疗程内，普那布林的总用药量为：32×28＝896mg(小剂量)、48×28＝1344mg(大剂量)，粉防己碱的总用药量：200×8＝1600mg。故，普那布林和粉防已碱的质量比为14-21:25。本发明中普那布林、粉防已碱的用量比例，可以根据不同患者的需要而变化，如果患者病情较轻时，可采用低剂量的普那布林协同粉防已碱；如果患者病情较重时，可采用高剂量的普那布林协同粉防已碱。
优选的，作为一种改进，所述活性成分以游离形式或可药用盐的形式存在。
有益效果：活性成分或其可药用的盐可以依据施用情况的需求来选择，均可达到本发明中的抗肿瘤效果。可药用盐是指保留化合物的生物有效性和性质的盐，并且其在生物学上或其他方面适合用于药物中。
另一方面，本发明还提供一种复方制剂，包括普那布林制剂和粉防己碱制剂；所述普那布林制剂包括普那布林和药剂学上可接受的载体；所述粉防己碱制剂包括粉防己碱和药剂学上可接受的载体。
有益效果：该药物组合可制备成各种剂型，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮剂、乳剂、注射剂、冻干粉针剂、气雾剂、微囊、微球、纳米制剂等，便于应用。药剂学上可接受的载体包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣等。此类介质或试剂的用途是本领域熟知的。除非任何常规的介质或试剂与活性成分不相容，否则所述介质或试剂在组合物中的用途是可预期的。此外，可以包括各种辅料，例如本领域中常用的辅料。
优选的，作为一种改进，普那布林制剂和粉防己碱制剂均为注射液。
有益效果：采用注射液的形式可方便患者给药，并且提高药物的生物利用度。
优选的，作为一种改进，普那布林制剂由如下方法配制：将普那布林溶于二乙二醇单乙醚中，获得普那布林储液，将所述普那布林储液用生理盐水稀释获得所述普那布林制剂；粉防己碱制剂由如下方法配制：将粉防己碱溶于0.1mol/L HCl中，获得粉防己碱储液，将所述粉防己碱储液用生理盐水稀释获得所述粉防己碱制剂。
有益效果：采用上述成分配制，可得到溶解性能良好的注射液。
又一方面，本发明还提供一种含普那布林的药物组合或其复合制剂在制备抗肿瘤药物或逆转肿瘤耐药性药物中的应用。
优选的，作为一种改进，所述肿瘤为胃癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤中的一种。
有益效果：药物组合对多种肿瘤细胞均具有明显的治疗效果，并且可以逆转多种肿瘤细胞的耐药性，为肿瘤治疗和逆转肿瘤耐药提供了新的选择。我们在实验中选取耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR，人胃癌细胞SGC-7901,人乳腺癌细胞MDA-MB-231,耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR，人组织细胞淋巴瘤细胞U-937。发现，本药物组合对上述几种细胞均有明显的抑制作用。并且，该药物组合对耐药细胞SGC-7901/VCR、K-562/ADR的抑制作用尤其明显，说明该药物组合不仅可以抑制肿瘤生长，而且还可以逆转肿瘤耐药。
优选的，作为一种改进，含普那布林的药物组合或复合制剂的给药方式为静脉、肌肉或口服给药。
有益效果：可根据患者不同情况，选择不同的给药方式；静脉注射效果更快，更适用于病情较重患者；肌肉注射、口服给药更方便，更适用于病情较轻患者。
优选的，作为一种改进，普那布林的用药量为0.53-0.8mg/kg体重/天；粉防已碱的用药量为3.33mg/kg体重/天。
有益效果：在该用药剂量范围内，两者可以达到更好的协同作用。根据不同患者的病情和耐受情况，施加不同剂量的药物。
附图说明
图1为实验例一2.1中普那布林组和联合用药组方案一的细胞存活率图；
图2为实验例一2.1中粉防己碱组和联合用药组方案二的细胞存活率图；
图3为实验例一2.2中普那布林组和联合用药组方案一的细胞存活率图；
图4为实验例一2.2中粉防己碱组和联合用药组方案二的细胞存活率图；
图5为实验例一2.3中对照组、普那布林组、粉防己碱组、联合用药组的细胞存活率图；
图6为实验例二3.1中裸鼠生存曲线图，其中A为阴性对照组，B为阳性对照组，C为普那布林组，D为粉防己碱组，E为粉防己碱和普那布林的药物组合组；
图7为实验例二3.2中裸鼠移植瘤切片染色图,其中，A为阳性对照组，B为粉防己碱组，C为普那布林组，D为粉防己碱和普那布林的药物组合组；
图8为对比试验2.1中的细胞存活率图；A1为单用粉防己碱组，A2为单用氯喹组，A3为单用莲心碱组，B1为联用普那布林和粉防己碱组，B2为联用普那布林和氯喹组，B3为联用普那布林和莲心碱组；
图9为对比试验2.2中的细胞存活率图；A1为单用粉防己碱组，A2为单用氯喹组，A3为单用莲心碱组，B1为联用普那布林和粉防己碱组，B2为联用普那布林和氯喹组，B3为联用普那布林和莲心碱组。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
实施例1
将普那布林和粉防已碱组成的药物组合应用与人体治疗中，两种药物的用量根据二期临床数据或者说明书确定，具体情况为：根据普那布林的二期临床数据，普那布林的每日推荐用量为32-48mg,连续用药4周，停药2周，6周为一疗程。根据粉防己碱的说明书，粉防己碱的每日推荐用量为200mg,每周用药2次，连用2周，停药1周，如此重复2次，6周为一疗程。依照成人平均体重60kg，将普那布林的每日推荐用量换算成临床每日每千克体重用药量，普那布林每日用药量为：0.53-0.8mg/kg体重/天。依照成人平均体重60kg将粉防己碱的每日推荐用量换算成临床每日每千克体重用药量，粉防己碱每日用药量为：3.33mg/kg体重/天。每周静脉注射2次粉防己碱注射液，连续注射2周(即在第1、4、8和11天注射)后停药10天(即从第12至第21天)，如此重复两次，共6周一个疗程。在第1天注射粉防已碱的同时，开始注射普那布林，每日静脉注射一次普那布林注射液，连续注射4周，然后间歇2周。共6周一个疗程。
粉防己碱注射液按照如下方法配制：将粉防己碱溶于0.1mol/L HCl中，终浓度为15mg/mL，获得粉防己碱储液，将粉防己碱储液用0.9％氯化钠溶液稀释40倍，获得粉防己碱注射液；普那布林注射液按照如下方法配制：将普那布林溶于二乙二醇单乙醚中，终浓度为20mg/mL，获得普那布林储液，将普那布林储液用0.9％氯化钠溶液稀释40倍，获得普那布林注射液。普那布林每日用药量以及粉防己碱每日用药量是按照活性成分普那布林和粉防己碱的质量来计算，粉防己碱注射液和普那布林注射液的用量按照其中溶解的活性成分的量进行换算。
其中，普那布林的化学结构如下：
粉防已碱的化学结构如下：
实验例1细胞实验
1.细胞选择与活性培养
实验选择有耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR，人胃癌细胞SGC-7901,人乳腺癌细胞MDA-MB-231,耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR，人组织细胞淋巴瘤细胞U-937。耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR，人胃癌细胞SGC-7901,人乳腺癌细胞MDA-MB-231培养在DMEM+10％FBS完全培养基中。人组织细胞淋巴瘤细胞U-937培养在1640+10％FBS完全培养基中。耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR培养在IMDM+10％FBS完全培养基中。以上细胞均在37℃，5％浓度的CO2，饱和湿度的细胞培养箱中培养。
2.实验方法
各肿瘤细胞系状态稳定后，将细胞铺于96孔板中，耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR，人胃癌细胞SGC-7901，人乳腺癌细胞MDA-MB-231每孔3000个细胞。耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR，人组织细胞淋巴瘤细胞U-937每孔8000个细胞。每孔含完全培养基90μL。
2.1耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR按以下方式分组并处理：
(1)对照组：完全培养基溶液10μL处理；
(2)普那布林组：用完全培养基配制浓度为0、20、40、60、80、100nM(nmol/L)的普那布林溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为0、2、4、6、8、10nM；
(3)粉防己碱组：用完全培养基配制浓度为0、20、40、60、80μM(μmol/L)的粉防己碱溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为0、2、4、6、8μM；
(4)联合用药组：普那布林和粉防己碱组合药物组.
方案一：用完全培养基配制浓度为0、40、80、120、160、200nM的普那布林溶液及80μM的粉防己碱混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液共10μL)处理，使其作用终浓度分别为0、2、4、6、8、10nM与4μM。
方案二：用完全培养基配制浓度为0、40、80、120、160μM的粉防己碱溶液及200nM的普那布林混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液10μL)处理，使其作用终浓度分别为0、2、4、6、8μM与10nM；
2.2胃癌细胞SGC-7901按以下方式分组并处理：
(1)对照组：同2.1；
(2)普那布林组：用完全培养基配制浓度为0、20、40、60、80、100、120nM(nmol/L)的普那布林溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为0、2、4、6、8、10、12nM；
(3)粉防己碱组：同2.1；
(4)联合用药组：普那布林和粉防己碱组合药物组.
方案一：用完全培养基配制浓度为0、40、80、120、160、200、240nM的普那布林溶液及160μM的粉防己碱混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液共10μL)处理，使其作用终浓度分别为0、2、4、6、8、10、12nM与8μM。
方案二：用完全培养基配制浓度为0、40、80、120、160μM的粉防己碱溶液及200nM的普那布林混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液10μL)处理，使其作用终浓度分别为0、2、4、6、8μM与10nM；
2.3人乳腺癌细胞MDA-MB-231,耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR，人组织细胞淋巴瘤细胞U-937按以下方式处理：
(1)对照组：同2.1；
(2)普那布林组：用完全培养基配制浓度为0、100nM(nmol/L)的普那布林溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为0、10nM；
(3)粉防己碱组：用完全培养基配制浓度为0、40μM(μmol/L)的粉防己碱溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为0、4μM；
(4)联合用药组：普那布林和粉防己碱组合药物组。
用完全培养基配制浓度为0、200nM的普那布林溶液及80μM的粉防己碱混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液共10μL)处理，使其作用终浓度分别为0、10nM与4μM。
以上分组及加药处理48小时后，每孔加CCK8试剂10μL继续培养1小时，用酶标仪在A450处检测吸光度值，细胞存活率根据以下公式计算：
细胞存活百分率＝(处理组吸光度－空白孔吸光度)÷(对照组吸光度－空白孔吸光度)×100％。
3.实验结果：如图1-图5所示。其中，纵坐标表示细胞存活率，即处理组相对于对照组的细胞存活率。横坐标为对应的药物作用浓度。
由图1可以看出，单用普那布林组，耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR的细胞存活率随着普那布林浓度的增大略有下降，在普那布林浓度为10nm时，细胞存活率在91.56％左右；而联合用药组(在不同浓度的普那布林中加入4μM粉防已碱),细胞存活率随着普那布林浓度的增大明显下降，且明显低于同浓度的普那布林组，在普那布林浓度为10nm时，细胞存活率在42.1％左右。
由图2可以看出，单用粉防己碱组，耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR的细胞存活率在各个浓度均无明显下降；而联合用药组(在不同浓度的粉防己碱中加入10nM普那布林)，细胞存活率随着粉防已碱浓度的增大明显下降，且明显低于同浓度的粉防己碱组，在粉防已碱浓度为8μM时,细胞存活率在40.3％左右。
由图3可以看出，单用普那布林组，胃癌细胞SGC-7901的细胞存活率随着普那布林浓度的增大略有下降，在普那布林浓度为12nm时，细胞存活率在82.63％左右；而联合用药组(在不同浓度的普那布林中加入8μM粉防已碱),细胞存活率随着普那布林浓度的增大明显下降，且明显低于同浓度的普那布林组，在普那布林浓度为12nm时，细胞存活率在31.97％左右。
由图4可以看出，单用粉防己碱组，胃癌细胞SGC-7901的细胞存活率在各个浓度均无明显下降；而联合用药组(在不同浓度的粉防己碱中加入10nM普那布林)，细胞存活率随着粉防已碱浓度的增大明显下降，且明显低于同浓度的粉防己碱组，在粉防已碱浓度为8μM时,细胞存活率在36.7％左右。
由图5可以看出，对照组对细胞存活率无明显影响，单用普那布林组，人乳腺癌细胞MDA-MB-231、耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR、人组织细胞淋巴瘤细胞U-937的细胞存活率分别为87.99％、82.51％、82.77％；单用粉防已碱组，MDA-MB-231、K-562/ADR、U-937的细胞存活率分别为83.57％、85.85％、82。91％；联合用药组，MDA-MB-231、K-562/ADR、U-937的细胞存活率分别为62.88％、54.94％、55.79％。
综上，可得出如下结论：粉防己碱协同普那布林组与单独使用普那布林组相比较，粉防己碱协同普那布林组的肿瘤细胞存活率均明显低于单独使用普那布林组，两者联用的效果大于单独应用普那布林和粉防己碱的效果总和。而且本药物组合对上述几种细胞均有明显作用。说明粉防己碱和普那布林在抗肿瘤方面具有协同增效的作用。
实验例2裸鼠移植瘤实验
在本实验过程中，注射剂量根据美国食品药品监督管理局(FDA)在《药物临床实验中健康成人受试对象安全给药剂量的估算》(Estimating the Safe Starting Dose inClinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)中给出的，达到相同生物学效应所需的人体与裸鼠(即实验验证中的裸鼠)的注射剂量换算比1∶12.3进行计算。依此换算比，对照人体剂量来换算出实验用裸鼠的用药剂量。数据用GraphpadPrism8.0软件进行分析，P＜0.05为差异有显著性(*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001)。
各实施例中，粉防已碱的剂量为：按裸鼠体重40.96mg/kg(3.33mg/kg×12.3)，普那布林的剂量为：按裸鼠体重9.84mg/kg(0.8mg/kg×12.3)。
1.裸鼠移植瘤模型建立
选取实验对象为5周龄裸鼠，培养于动物实验中心SPF级动物房间，小鼠使用的饲料、垫料、饮用水等均经过高温灭菌处理，每2天换一次垫料，及时补充水与食物，适应性饲养一周。
2.实验分组及给药剂量
裸鼠随机分为五组，每组10只，阴性对照组、阳性对照组、粉防己碱组、普那布林组、粉防己碱联合普那布林组。除阴性对照组外，将耐长春新碱SGC-7901/VCR细胞与基质胶1:1混匀，以5×106个/只的细胞量(耐长春新碱胃癌SGC-7901/VCR的培养与前述“细胞实验”相同)注射到裸鼠右股皮下。并开始按以下方式给药。
(1)阴性对照组：未做任何处理、阳性对照组：与处理组体积相同的生理盐水腹腔注射，1次/日；
(2)粉防己碱组：按裸鼠体重40.96mg/kg的剂量，通过腹腔每周注射2次粉防己碱注射液，连续注射2周(即在第1、4、8和11天注射)后停药10天(即从第12至第21天)。如此重复两次，共6周一个疗程。
(3)普那布林组：按裸鼠体重9.84mg/kg的剂量，通过腹腔每日注射一次普那布林注射液；连续注射4周，间歇2周，共6周一个疗程。
(4)粉防己碱和普那布林的药物组合组：按裸鼠体重40.96mg/kg的剂量，通过腹腔每周注射2次粉防己碱注射液，连续注射2周(即在第1、4、8和11天注射)后停药10天(即从第12至第21天)。如此重复两次，共6周一个疗程。按裸鼠体重9.84mg/kg的剂量，在第1天注射粉防已碱同时，通过腹腔每日注射一次普那布林注射液；连续注射4周，间歇2周，共6周一个疗程。
3.实验结果
3.1裸鼠生存曲线记录
每日早晚监控裸鼠状况，每五天测量、记录一次各组裸鼠的体重；每五天用游标卡尺测量肿瘤的长度和宽度、记录一次各组裸鼠肿瘤体部分的体积；肿瘤体积按照以下公式计算：肿瘤体积(mm3)＝肿瘤长度(mm)×肿瘤宽度的平方(mm2)。最终使用GraphpadPrism8.0进行汇总分析。生存曲线结果如图6所示。
由图6可知：通过生存曲线可以看出，粉防己碱联合普那布林组生存时间明显长于阳性对照组、普那布林组、粉防己碱组。时序检验(Log-rank Test)发现粉防己碱联合普那布林组与阳性对照组、普那布林组、粉防己碱组组间差异明显(***P＜0.001)。
3.2裸鼠移植瘤切片染色
(1)注射空气杀死裸鼠后，完整取出移植瘤。
(2)固定后处理：多聚甲醛固定肿瘤组织，用双蒸水漂洗24h，去除残留的固定液。
(3)脱水与透明：采用梯度脱水的方式，利用不同浓度乙醇溶液做脱水剂，从30％的乙醇开始，从低到高浓度，脱去组织中水分，然后将组织置于透明剂二甲苯中进行透明，浸换出组织中的酒精。
(4)浸泡包埋：用石蜡溶液浸泡组织样品30min以置换出二甲苯，再将样品放在包埋器中，用石蜡浇筑并迅速冷却，将包埋好的石蜡块放置并固定在切片机上。
(5)切片：用切片机将组织块切成4μm厚度的片，用毛笔笔尖挑出切片，置于45℃温水面上，待切片舒展开后将其贴于防脱载玻片上，烘箱37℃烘干过夜。
(6)脱蜡：用二甲苯浸泡切片30min，再按照梯度浓度的乙醇溶液洗涤，以此为100％，95％，80％，75％，50％，每个浓度漂洗2min，转移切片至蒸馏水中。
(7)苏木精染色：苏木精染液对对切片染色15min，自来水清洗组织至组织呈现蓝色，然后将组织放入分色液中(1％HCL，70％乙醇)3s，待组织呈现红色后再用细微自来水洗涤切片至蓝色，将切片放入双蒸水中。
(8)伊红染色：组织切片从双蒸水取出后，一次用50％，75％，80％，95％乙醇溶液脱水，每个浓度2min，然后将组织切片放入伊红染液中染色3min，再将切片放入95％乙醇中分色或脱水3min。
(9)光学显微镜下观察染色并拍照。移植瘤切片染色结果如图7所示。
由图7可知：对各组肿瘤包埋切片进行HE染色，阳性对照组病理变化最明显，组织结构被破坏，有大量肿瘤细胞浸润，粉防己碱组和普那布林组略有减少但不明显，联合用药组浸润的肿瘤细胞明显减少。
通过多种肿瘤细胞实验和耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR细胞的裸鼠移植瘤实验，能够证明，粉防己碱协同普那布林化疗的药物组合对胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞MDA-MB-231,耐多柔比星人慢性粒细胞白血病细胞K-562/ADR，人组织细胞淋巴瘤细胞U-937也有同样的效果。
对比例1：普那布林和氯喹联用
对比例2：普那布林和莲心碱联用
对比试验：
1.细胞培养
同实验例一。
2.实验方法：
2.1耐长春新碱人胃癌细胞SGC-7901/VCR按以下方式分组并处理：
(1)对照组：同实施例1中的2.1；
(2)单用普那布林组：用完全培养基配制浓度为100nM(nmol/L)的普那布林溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为10nM；
(3)单用粉防己碱组：用完全培养基配制浓度为40μM(μmol/L)的粉防己碱溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为4μM；
(4)单用氯喹组：用完全培养基配制浓度为100μM(μmol/L)的氯喹溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为10μM；
(5)单用莲心碱组：用完全培养基配制浓度为100μM(μmol/L)的莲心碱溶液，每孔中加10μL处理，使其作用终浓度为10μM；
(6)联用组：联用普那布林和粉防己碱组：
用完全培养基配制浓度为200nM的普那布林溶液及80μM的粉防己碱混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液共10μL)处理，使其作用终浓度分别为10nM与4μM。
联用普那布林和氯喹组：
用完全培养基配制浓度为200nM的普那布林溶液及200μM的粉防己碱混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液共10μL)处理，使其作用终浓度分别为10nM与10μM。
联用普那布林和莲心碱组：
用完全培养基配制浓度为200nM的普那布林溶液及200μM的莲心碱混合药液，每孔中加入两种药液各5μL(即混合药液共10μL)处理，使其作用终浓度分别为10nM与10μM。
以上分组及加药处理48小时后，每孔加CCK8试剂10μL继续培养1小时，用酶标仪在A450处检测吸光度值，细胞存活率根据以下公式计算：
细胞存活百分率＝(处理组吸光度－空白孔吸光度)÷(对照组吸光度－空白孔吸光度)×100％。
2.2SGC7901细胞按以下方式分组并处理：
同本对比试验中的2.1。
3.实验结果：2.1中实验结果如图8所示、2.2中实验结果如图9所示。
由图8、9可知：联用普那布林和粉防己碱组与联用普那布林和氯喹组、联用普那布林和莲心碱组相比较，联用普那布林和粉防己碱组的肿瘤细胞存活率均明显低于联用普那布林和氯喹组和联用普那布林和莲心碱组，粉防已碱和普那布林联用的协同效果大于氯喹和普那布林联用、莲心碱和普那布林联用的协同。而且本药物组合对上述两种肿瘤细胞均有明显作用。说明粉防己碱和普那布林在抗肿瘤方面具有明显的协同增效作用，明显好于普那布林与氯喹或连心碱的协同作用。这可能是因为粉防已碱诱导诱导细胞凋亡的途径与普那布林对肿瘤细胞的作用形成很好的互补，从而使粉防已碱和普那布林达到最好的协同作用效果，并优于普那布林与其他药物的组合。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (10)
1.一种含普那布林的药物组合，其特征在于：所述药物组合的活性成分包括普那布林和粉防已碱。
2.根据权利要求1所述的一种含普那布林的药物组合，其特征在于：普那布林和粉防已碱的质量比为14-21:25。
3.根据权利要求1所述的一种含普那布林的药物组合，其特征在于：所述活性成分以游离形式或可药用盐的形式存在。
4.一种复方制剂，其特征在于：包括普那布林制剂和粉防己碱制剂；所述普那布林制剂包括普那布林和药剂学上可接受的载体；所述粉防己碱制剂包括粉防己碱和药剂学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的一种复方制剂，其特征在于：普那布林制剂和粉防己碱制剂均为注射液。
6.根据权利要求5所述的一种复方制剂，其特征在于：普那布林制剂由如下方法配制：将普那布林溶于二乙二醇单乙醚中，获得普那布林储液，将所述普那布林储液用生理盐水稀释获得所述普那布林制剂；粉防己碱制剂由如下方法配制：将粉防己碱溶于0.1mol/LHCl中，获得粉防己碱储液，将所述粉防己碱储液用生理盐水稀释获得所述粉防己碱制剂。
7.权利要求1-3任一项所述的一种含普那布林的药物组合或权利要求4-6任一项所述的一种复合制剂在制备抗肿瘤药物或逆转肿瘤耐药性药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的一种含普那布林的药物组合或其复合制剂在制备抗肿瘤药物或逆转肿瘤耐药性药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤为胃癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤中的一种。
9.根据权利要求7所述的一种含普那布林的药物组合或其复合制剂在制备抗肿瘤药物或逆转肿瘤耐药性药物中的应用，其特征在于：含普那布林的药物组合或其复合制剂的给药方式为静脉、肌肉或口服给药。
10.根据权利要求7所述的一种含普那布林的药物组合或其复合制剂在制备逆转肿瘤耐药性药物中的应用，其特征在于：普那布林的用药量为0.53-0.8mg/kg体重/天；粉防已碱的用药量为3.33mg/kg体重/天。
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