TWI674894B - 治療黑色素瘤之藥劑及其應用 - Google Patents
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Abstract
一種使用一活性成分於製造一藥劑的用途,其中,該藥劑係用於治療黑色素瘤,且該活性成分係選自以下群組:式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合,
Description
本發明係關於式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合的應用,尤其是關於彼等於以治療黑色素瘤的應用:
黑色素瘤係發展自黑色素細胞的癌症,容易藉由淋巴系統或血液轉移及擴散且臨床上治療難度高,故在皮膚癌當中是致死率最高的一種。紫外線暴露是造成黑色素瘤的主因,其他包含家族遺傳、免疫力低下等因素亦可能導致黑色素瘤。關於黑色素瘤的治療,目前臨床上主要是以外科手術的方式進行切除。針對無法完全切除腫瘤、或是無法承受手術治療的患者,一般則是採取免疫療法或化學療法等方式。然而,免疫療法及化學療法的費用高昂,亦容
易對患者造成嚴重的副作用(包括嘔吐、禿髮、倦態、出血以及貧血等),且對於部分晚期的患者的治療效果並不佳。因此,持續開發可有效治療黑色素瘤的藥物或方法係有相當的必需性及迫切性。
本案發明人研究發現,N-trans-克羅醯胺(N-trans-grossamide;即,本發明式(I)化合物)可有效誘發惡性黑色素瘤細胞凋亡,故可用於治療黑色素瘤。
本發明之一目的,在於提供一種使用一活性成分於製造一藥劑之用途,其中該藥劑係用於治療黑色素瘤,且該活性成分係選自以下群組:式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合,
於根據本發明之一較佳實施態樣中,該活性成分係以萃取物的形式提供;更佳地,係以冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)萃取物的形式提供;尤其較佳地,係以冰花之極性溶劑萃取物的形式提供,其中該極性溶劑可以為例如選自水、C1-C4醇類、及前述之組合。
較佳地,該藥劑係以如下一或多種投藥方式施用:口服、塗抹、及注射。
本發明之另一目的,在於提供一種治療黑色素瘤的方法,其係包含對一有需要之個體投予一有效量之活性成分,其中該活性成分係選自以下群組:式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合,
本發明之詳細技術內容及部分具體實施態樣,將描述於以下內容中,以供本發明所屬領域具通常知識者據以明瞭本發明之特徵。
圖1係顯示以MTT檢定法檢測,經不同劑量之本發明式(I)化合物處理之人類皮膚惡性黑色素瘤細胞(A375.S2細胞株)的存活率的長條圖,包括控制組、高劑量組、中劑量組、及低劑量組的結果。
以下將描述根據本發明之部分具體實施態樣;惟,在不背離本發明精神下,本發明尚可以多種不同形式之態樣來實踐,不應將本發明保護範圍解釋為限於說明書所陳述者。此外,除非文中有另外說明,於本說明書中(尤其是在後述專利申請範圍中)所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式;所謂「有效量」,是指投予至個體時,可至少部分改善懷疑個體的病情的化合物用量;所謂「個體」是指人類或非人的哺乳動物;所謂
「治療」,不應被解釋為治療一個體直至完全恢復,而應包括將一個體之疾病進展或症狀維持在一實質上靜態之程度、增加一個體之恢復速率、降低一具體病況的嚴重性、或提高一患者之生命品質
冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)在分類學上屬於番杏科、松葉菊屬的雙子葉一年生植物。本案發明人研究發現,冰花萃取物中含有如下之式(I)化合物,且該式(I)化合物具有誘發人類皮膚惡性黑色素瘤細胞凋亡的效果,故可用於治療黑色素瘤:
因此,本發明係提供治療黑色素瘤之藥劑及方法。其中,該藥劑係包含一活性成分,該方法係包含將一有效量之活性成分投予至有需要之個體中。於根據本發明之藥劑及方法中,該活性成分係選自以下群組:如上所述之式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合。
根據本發明之式(I)化合物可由任何合宜之來源提供,舉例言之,可由市面上購得,或由植物之萃取物純化分離而來,亦可透過化學合成方法獲得。舉例言之,可由冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)萃取、純化而獲得式(I)化合物。
根據本發明,所採用之活性成分亦可以例如植物萃取物之混合物的形式提供。舉例言之,該植物萃取物可以為冰花萃取物;較佳地,該植物萃取物係冰花之極性溶劑萃取物。當以冰花之極性萃取物的形式提供本發明所需之活性成分時,所採用之極性溶劑可以是例如水、C1-4醇、或其組合。舉例言之,可以乙醇水溶液對冰花進行萃取,以提供所欲之萃取物。視需要地,可於震盪操作下進行該萃取操作,以提升萃取效果。較佳地,可在進行萃取之前,先對該植物(例如:冰花)進行一乾燥處理。
根據本發明之藥劑係可呈任何合宜的型式,並無特殊限制,端視所欲採取之投藥方式而呈對應的合宜劑型。舉例言之,但不以此為限,該藥劑可以口服或非經口服(例如:皮下、靜脈內、或經皮)之投藥方式施用至有需要之個體上,以治療黑色素瘤。
以適於經皮投藥方式為例,該藥劑可呈供直接外用之乳液、乳霜、凝膠(例如水凝膠)、膏狀物(例如分散膏、軟膏)、噴霧劑、或溶液(例如洗液、懸浮液)等形式,但不以此為限。視使用形式及用途而定,可選用合宜之載劑以提供該藥劑。其中,該載劑可以為例如賦形劑、稀釋劑、輔助劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、及/或吸濕劑等。
以適於口服投藥之藥劑形式為例,該藥劑中可含有任何不會不利影響本發明活性成分(即,式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合)之所欲效益的醫藥上可接受之載劑,該載劑可以例如選自以下群組:水、食鹽水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其類似物、纖維素、澱粉、糖膨潤
土(sugar bentonite)、及前述之組合。可利用任何合宜之方法,以適於口服投藥的劑型提供該藥劑,例如:錠劑(例如糖衣錠)、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、酊劑等。
至於適於皮下、或靜脈內注射之針劑或點滴劑型,則可於該藥劑中含有一或多種例如等張溶液、鹽類緩衝液(如磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液)、增溶劑、乳化劑、5%糖溶液、以及其他載劑等成分,以靜脈輸注液、乳劑靜脈輸注液、乾粉注射劑、懸液注射劑、或乾粉懸液注射劑等劑型提供該藥劑。或者,將該藥劑製備成一注射前固體,以可溶於其他溶液或懸浮液中之劑型、或可乳化之劑型提供該注射前固體,並於投予至有需要之個體之前,將該注射前固體溶於其他溶液或懸浮液中或將其乳化,以提供所欲之注射劑。
視需要地,可於根據本發明所提供之藥劑中另外含有合宜用量之添加劑,例如可提高該藥劑於服用時的口適感及視覺感受之調味劑、調色劑、著色劑等,以及可改善該藥劑的穩定性及儲存性之緩衝劑、保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等。此外,該藥劑可視需要另含一或多種其他活性成分(例如,日沛樂(Zelboraf)、泰伏樂(Tafinlar)、益伏(Yervoy)等),或者與含該一或多種其他活性成分之藥物併用,以進一步加強該藥劑之功效或增加製劑配方的運用靈活性與調配度。原則上,只要所添加的其它成分或添加劑不會對本發明藥劑之所欲功效沒有不利的影響即可。
可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同投藥頻率施用本發明所提供之藥劑,端視投予個體之需求、年齡、體重、及健康況狀而異。
於根據本發明之治療黑色素瘤的方法中,有關該活性成分(即,式(I)化合物、其醫藥上可接受之鹽、及前述之組合)的來源、投予途徑、投予形式、適用劑量及應用,均如上述之說明。
茲以下列實施例進一步例示說明本發明。其中該等實施例僅提供作為說明,而非用以限制本發明之保護範圍。本發明保護範圍係如後附申請專利範圍所示。
於以下實施例中,所使用之物料來源如下:
1. 冰花種子:購自台灣蔬菜之家園藝資材行,產品編號00K20。
2. 人類皮膚惡性黑色素瘤細胞(A375.S2細胞株):購自ATCC,產品編號CRL-6475。
3. MEM-NEAA培養基:購自Gibco,產品編號41500-034。
4. FBS:購自Gibco,產品編號10437-028。
將冰花種子培育成冰花植株,並以下列步驟進行處理:
1. 自冰花植株取出20克之組織樣本,將其冷凍乾燥。
2. 粉碎步驟1經乾燥之組織樣本,以提供冰花組織粉末。
3. 將步驟2之冰花組織粉末與200克之70%乙醇混合,並在70℃下對前述獲得之混合物進行超音波震盪萃取,歷時45分鐘,以獲得粗萃取物。
4. 對步驟3之粗萃取物進行減壓濃縮,以提供乙醇萃取物(約5.35克)。
5. 於步驟4之乙醇萃取物中添加乙酸乙酯及水(乙酸乙酯與水之體積比為1:1),以提供混合溶液(總體積為200毫升),並對前述獲得之混合溶液進行液液分配,然後移除水層而留下乙酸乙酯層萃取物(約2.29克)。
6. 對步驟5所留下之乙酸乙酯層萃取物進行管柱層析分離(使用70至230網目(mesh)的矽膠;約80克),其中,先以二氯甲烷進行沖提,接著逐漸增加甲醇在沖提液中的比例,以提高沖提液的極性,並依序獲得以下四個分劃(fraction):(i)第1分劃(A1):160毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為90:1;(ii)第2分劃(A2):160毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為80:1;(iii)第3分劃(A3):140毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為70:1;以及(iv)第4分劃(A4):200毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為50:1。
7. 對步驟6所提供之第4分劃進行管柱層析分離(使用70至230網目的矽膠;約80克),其中,係以乙酸乙酯與三氯甲烷之體積比為5:1的混合溶液進行沖提,並依序獲得十個次分劃(A4-1至A4-10,各30毫升)。
8. 以製備型薄層層析法(使用70至230網目的矽膠,約80克;以及二氯甲烷與丙酮之體積比為2:1的混合溶液)對步驟7所提供之A4-2次分劃進行純化,以獲得下式(I)化合物(約4.7毫克,Rf=0.55):
於人類皮膚惡性黑色素瘤細胞(A375.S2細胞株)穩定培養24小時後,將其分為四組(每組5 x 103個細胞)並分別以如下培養基進行培養,歷時48小時:1. 控制組:含有1毫莫耳濃度丙酮酸鈉、及10%FBS的MEM-NEAA培養基;2. 高劑量組:含有1毫莫耳濃度丙酮酸鈉、10%FBS、及1毫克/毫升由實施例1獲得之式(I)化合物的MEM-NEAA培養基;3. 中劑量組:含有1毫莫耳濃度丙酮酸鈉、10%FBS、及0.5毫克/毫升由實施例1獲得之式(I)化合物的MEM-NEAA培養基;以及4. 低劑量組:含有1毫莫耳濃度丙酮酸鈉、10%FBS、及0.25毫克/毫升由實施例1獲得之式(I)化合物的MEM-NEAA培養基。
接著,以MTT檢定法,檢測各組在570奈米波長下的吸光值(OD)。
重複上述培養與MTT檢定分析步驟,共四次。取平均吸光值,並以控制組之結果為基準,計算其他各組之相對細胞存活率。結果示於表1及圖1。
表1
由表1及圖1可知,當式(I)化合物的濃度高於0.25毫克/毫升時,惡性黑色素瘤細胞的存活率係與式(I)化合物的使用濃度呈反比。此結果顯示,式(I)化合物可有效誘發惡性黑色素瘤細胞凋亡,故可用於治療黑色素瘤。
Claims (6)
- 如請求項1之用途,其中該活性成分係以萃取物的形式提供,且該萃取物係透過將冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)種子培育成冰花植株,並以下列步驟進行處理:1. 自冰花植株取出20克之組織樣本,將其冷凍乾燥;2. 粉碎步驟1經乾燥之組織樣本,以提供冰花組織粉末;3. 將步驟2之冰花組織粉末與200克之70%乙醇混合,並在70℃下對前述獲得之混合物進行超音波震盪萃取,歷時45分鐘,以獲得粗萃取物;4. 對步驟3之粗萃取物進行減壓濃縮,以提供乙醇萃取物(5.35克);5. 於步驟4之乙醇萃取物中添加乙酸乙酯及水(乙酸乙酯與水之體積比為1:1),以提供混合溶液(總體積為200毫升),並對前述獲得之混合溶液進行液液分配,然後移除水層而留下乙酸乙酯層萃取物(2.29克);6. 對步驟5所留下之乙酸乙酯層萃取物進行管柱層析分離(使用70至230網目(mesh)的矽膠;80克),其中,先以二氯甲烷進行沖提,接著逐漸增加甲醇在沖提液中的比例,以提高沖提液的極性,並依序獲得以下四個分劃(fraction):(i)第1分劃(A1):160毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為90:1;(ii)第2分劃(A2):160毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為80:1;(iii)第3分劃(A3):140毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為70:1;以及(iv)第4分劃(A4):200毫升之混合溶液,其中,二氯甲烷與甲醇之體積比為50:1;7. 對步驟6所提供之第4分劃進行管柱層析分離(使用70至230網目的矽膠;80克),其中,係以乙酸乙酯與三氯甲烷之體積比為5:1的混合溶液進行沖提,並依序獲得十個次分劃(A4-1至A4-10,各30毫升);8. 以製備型薄層層析法(使用70至230網目的矽膠,80克;以及二氯甲烷與丙酮之體積比為2:1的混合溶液)對步驟7所提供之A4-2次分劃進行純化,以獲得式(I)化合物(4.7毫克,Rf=0.55)。
- 如請求項1或2之用途,其中該藥劑係以如下一或多種投藥方式施用:口服、塗抹、及注射。
- 如請求項3之用途,其中該藥劑係以口服之投藥方式施用。
- 如請求項3之用途,其中該藥劑係以塗抹之投藥方式施用。
- 如請求項3之用途,其中該藥劑係以注射之投藥方式施用。
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