CN113416756B - 一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法 - Google Patents
一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113416756B CN113416756B CN202110793668.6A CN202110793668A CN113416756B CN 113416756 B CN113416756 B CN 113416756B CN 202110793668 A CN202110793668 A CN 202110793668A CN 113416756 B CN113416756 B CN 113416756B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tetrahydropyran triol
- akr
- adh
- triol
- hydroxypropyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- KOGFZZYPPGQZFZ-QVAPDBTGSA-N (2s,3r,4s,5r)-2-(2-hydroxypropyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound CC(O)C[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KOGFZZYPPGQZFZ-QVAPDBTGSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 38
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 claims abstract description 28
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 102000005751 Alcohol Oxidoreductases Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108010031132 Alcohol Oxidoreductases Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- QDHDQJXBEOUAGE-UHFFFAOYSA-N oxane-2,3,4-triol Chemical compound OC1CCOC(O)C1O QDHDQJXBEOUAGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 6
- 238000010926 purge Methods 0.000 claims description 6
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 6
- -1 acetone tetrahydropyran triol Chemical compound 0.000 claims description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 4
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 claims description 4
- 101150067366 adh gene Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 9
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 12
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001251200 Agelas Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010062049 chirobiotic T Proteins 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000734 protein sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
- C12Y101/01001—Alcohol dehydrogenase (1.1.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
- C12Y101/01002—Alcohol dehydrogenase (NADP+) (1.1.1.2), i.e. aldehyde reductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于有机合成、精细化学品、日用化学品领域，具体涉及一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法。该方法使用包含醛酮还原酶(AKR)和乙醇脱氢酶(ADH)的双酶循环催化系统，在氧化型辅酶II(NADP)的存在下，以异丙醇为还原剂，实现羟丙基四氢吡喃三醇的合成。由于采用了生物酶催化，该方法条件温和，操作简便，污染小，绿色安全，无金属残留，且产物的纯度高，特别适合医药和化妆品活性物的合成。
Description
技术领域
本发明属于有机合成、精细化学品、日用化学品领域，具体涉及一种生物酶催化的化妆品活性物羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法。
背景技术
羟丙基四氢吡喃三醇(CAS号439685-79-7)是一种生物活性物质，可以对抗皮肤老化、脱水等症状，被广泛应用于食品、生物、医药、化妆品等诸多领域。对于羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法，目前公开的文献主要通过丙酮基四氢吡喃三醇(CAS号439685-73-1)的还原实现(如下式)。其中，主要的还原条件包括硼氢化钠还原和过渡金属催化下的氢化反应等。这些常规化学还原反应存在以下的一些问题:立体选择性不高；三废排放较高，环境污染严重；一些试剂较为昂贵；一些反应需要高压氢气，存在安全隐患等。特别值得提出的是，一些使用过渡金属催化的反应，在产品中会存在金属残留，这对于医药和化妆品活性物尤为不利。
本发明提供一种生物酶催化的化妆品活性物羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法。该方法的特点在于使用包含醛酮还原酶(AKR)和乙醇脱氢酶(ADH)的双酶循环催化系统，在氧化型辅酶II(NADP)的存在下，以异丙醇为还原剂，实现羟丙基四氢吡喃三醇的高选择性、高效合成。该生物酶催化的方法，条件温和，操作简便，污染小，绿色安全，无金属残留，产物的非对映异构体比例高，特别适合医药和化妆品活性物的合成，具有良好的工业应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法，该方法使用包含醛酮还原酶(AKR)和乙醇脱氢酶(ADH)的双酶循环催化系统，在氧化型辅酶II(NADP) 的存在下，以异丙醇为还原剂，实现羟丙基四氢吡喃三醇的合成。其中，AKR主导丙酮基四氢吡喃三醇的还原，ADH主导NADPH的循环反应，示意式如下：
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法，其以丙酮基四氢吡喃三醇和异丙醇为原料，在含有醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)和氧化型辅酶II(NADP)的水相缓冲溶液中反应，从而制备羟丙基四氢吡喃三醇。
优选地，所述醛酮还原酶(AKR)和乙醇脱氢酶(ADH)通过外源基因在大肠杆菌中表达合成。
优选地，在起始反应体系中，所述丙酮基四氢吡喃三醇、异丙醇、醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)和氧化型辅酶II(NADP)的投料质量比为1：(0.5～2)：(0.05～0.2)： (0.05～0.2)：(0.05～0.2)。
优选地，所述的缓冲溶液为磷酸缓冲盐溶液(PBS)，pH为7.0～8.0。
优选地，具体实施过程如下：在反应容器中依次加入所述的水相缓冲溶液、丙酮基四氢吡喃三醇、异丙醇、醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)和氧化型辅酶II(NADP)搅拌均匀，在25-45℃和氮气吹扫的条件下，HPLC检测反应进程，当转化率达90-99％时，调节反应体系pH至2-3，硅藻土过滤，并在滤液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，旋转蒸发脱去溶剂后得到羟丙基四氢吡喃三醇。
由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：本发明采用了生物酶催化的方法，底物稳定性好，酶转化率高，产物的非对映异构体比例高，条件温和，操作简便，污染小，绿色安全，无金属残留，且产物的纯度高，特别适合医药和化妆品活性物的合成。
附图说明：
图1为所合成羟丙基四氢吡喃三醇的非对映异构体比例的测定。
具体实施方式
实施例1(培养基与试剂配置)
(1)Luria-Bertani(LB)培养基：Tryptone 10g·L-1，Yeast extract 5g·L-1，NaCl 10 g·L-1，Agarose 20g·L-1(固体培养基用)，5.0mol·L-1NaOH调pH至7.0(约加入1‰的量)，121℃灭菌20min.
(2)50mg·mL-1氨苄青霉素溶液(Amp)：1g氨苄青霉素溶于20mL灭菌去离子水，用0.22 μm滤膜(Agela)过滤除菌，分装至灭菌eppendorf管，每只1mL，-20℃保存备用。使用前，加入1‰的量，即终浓度为50μg·mL-1。
(3)50mg·mL-1卡那霉素溶液(Kan)：1g卡那霉素溶于20mL灭菌去离子水，用0.22μm滤膜(Agela)过滤除菌，分装至灭菌eppendorf管，每只1mL，-20℃保存备用。使用前，加入1‰的量，即终浓度为50μg·mL-1。
(4)200mg·mL-1异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)：2g IPTG溶于灭菌去离子水，用0.22μm滤膜过滤除菌，分装至灭菌eppendorf(EP)管，每只1mL，-20℃保存备用。
(5)蛋白质电泳电级缓冲液：3g三羟甲基氨基甲烷(Tris)，14.4g甘氨酸，1.0gSDS，pH＝8.3，用去离子水定容至1L，室温保存。
(6)蛋白质电泳染色缓冲液：2.5g考马斯亮蓝R250，454mL无水乙醇，46mL冰醋酸，454mL去离子水，搅拌使充分溶解，抽滤出去颗粒。室温避光保存。
(7)蛋白质电泳脱色液：50mL无水乙醇，75mL冰醋酸，875mL去离子水，混匀，须现配现用。
(8)16％SDS-PAGE分离胶(10mL)：3.3mL去离子水，4mL Acr(40％)，2.5mL 1MTris-HCl (pH 8.8)，100μL 10％SDS，100μL 10％APS，10μL TEMED。
(9)5％SDS-PAGE浓缩胶(5ml)：2.42mL去离子水，0.5mL Acr(40％)，1.0mL，0.5MTris- HCl(pH 6.8)，40μL 10％SDS，40μL 10％APS，5μL TEMED。
(10)0.2mol·L-1，pH＝7.0的PBS(磷酸盐缓冲液)：
A试液：0.2mol·L-1磷酸二氢钠水溶液：31.20g NaH2PO4·2H2O，去离子水定容至1L。
B试液：0.2mol·L-1磷酸氢二钠水溶液：28.40g Na2HPO4·2H2O，去离子水定容至1L。最终将A试液加入至B试液中调至pH至7.0。
(11)0.2mol·L-1，pH＝8.0的PBS(磷酸盐缓冲液)：
A试液：0.2mol·L-1磷酸二氢钠水溶液：31.20g NaH2PO4·2H2O，去离子水定容至1L。
B试液：0.2mol·L-1磷酸氢二钠水溶液：28.40g Na2HPO4·2H2O，去离子水定容至1L。最终将A试液加入至B试液中调至pH至8.0。
实施例2(目的基因的扩增)
设计醛酮还原酶AKR和乙醇脱氢酶ADH的PCR所需的引物，通过PCR方法在目标基因的碳端和氮端分别插入NdeI以及XhoI酶切位点。
引物的设计
设计引物并进行PCR操作，PCR操作时，采用50μL的总反应体系，体系组成如下
PCR条件：①预变性98℃,2min；
②变性98℃,10s；退火58℃,5s；延伸72℃,5s/kb；循环35次；
③延伸72℃,5min；
④4℃,1h(此阶段可随时终止PCR)。
实施例3(pET-28a(+)-adh和pET-28a(+)-akr重组质粒的构建)
PCR产物(ADH基因和AKR基因))经双酶切(NdeII和XhoI)后，与同样双酶切的质粒pET- 28a(+)在22℃条件下连接2h；运用热激法将酶连产物转入E.coli DH5α感受态，经测序鉴定正确后，接着将重组质粒转入E.coli BL21(DE3)，重组质粒命名为pET-28a(+)-adh和 pET-28a(+)-akr，之后将菌种放至-80℃冰箱中保存。
实施例4(菌种的诱导表达及保存)
(1)醛酮还原酶的诱导
挑取并过夜培养测序正确的菌种，待其过夜摇菌后加入1‰的抗性卡那霉素以及1％的过夜培养菌种，37℃、220rpm振荡培养至OD600值为0.6-0.8后，加入36μL的IPTG诱导剂 (异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)，再迅速降温到22℃，以180rpm的振荡速度连续振荡培养15h。
(2)乙醇脱氢酶的诱导
挑取并过夜培养测序正确的菌种，待其过夜摇菌后加入1‰的抗性卡那霉素以及1％的过夜培养菌种，37℃、220rpm振荡培养至OD600值为0.6-0.8后，加入60μL的IPTG诱导剂 (异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)，再迅速降温到18℃，以220rpm的振荡速度连续振荡培养8h。
(3)诱导产物的保存
首先将诱导后的酶液平均分成四小管，在8000rpm，5min条件下离心，去掉上清液，在试管中加入4mL的水，进行重旋和超声波破壁，在10000rpm，20min条件下离心操作后，通过过滤得到上清液，放置在-20℃条件下保存。
实施例5(酶蛋白的纯化)
重组菌因构建在pET-28a中，产生的目标蛋白带有His-tag标签，因此目的蛋白(醛酮还原酶和乙醇脱氢酶)可以采取镍柱进行亲和层析纯化。具体纯化过程如下。
(1)冲洗：在进行纯化前先用低浓度咪唑以v＝1000μL/min冲洗镍柱1小时。
(2)过滤：将实施例4破壁及离心后的菌液加入带有0.22μm过滤膜的50mL注射器中，滤液过滤至离心管，准备上样。
(3)上样：上样前先用止水夹夹住橡皮管，后暂停仪器，将已过滤好的上清液代替低浓度咪唑，调节流速至v＝239μL/min，再开启机器，打开止水夹进行上样。注意计算好上样的时间，防止柱子吸空影响纯化。
(4)静置：待上样完全，夹紧止水夹，关闭开关，静置1小时，让酶吸附充分。
(5)冲洗蛋白：用低浓度咪唑以v＝1000μL/min冲洗柱子，观察核酸蛋白检测仪的读数从而判断杂蛋白是否洗脱干净。待冲洗干净后，换高浓度咪唑进行冲洗，观察核酸蛋白显示仪指数，收集高浓度蛋白。
(6)透析：将收集好的蛋白置于透析袋中，在纯净的冰水中进行透析。每隔3h换一次水，一共透析12h。
通过以上方法可分别获得醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)；而氧化型辅酶 II(NADP)可商业购买获得。
经过基因和蛋白测序，上述述醛酮还原酶(AKR)的基因序列为：
ATGCTGTACAAAGAACTGGGCCGTACCGGTGAAGAAATTCCGGCCTTAGGC TTAGGCACCTGGGGTATTGGCGGCTTTGAAACCCCGGATTATTCTCGCGATGAAGAAATGGTGGAACTGTTAAAAACCGCAATTAAAATGGGCTATACCCATA TTGATACCGCAGAATATTATGGCGGCGGTCATACCGAAGAACTGATTGGTAAAGCCATTAAAGATTTTCGTCGCGAGGATCTGTTTATTGTGTCTAAAGTGTGG CCGACCCATCTGCGCCGTGATGATCTGCTGCGCTCTCTGGAAAATACCCTG AAACGTTTAGATACCGATTATGTGGATCTGTATCTGATTCATTGGCCGAATCCGGAAATTCCGCTGGAAGAAACCCTGAGTGCAATGGCAGAAGGCGTGCGTC AGGGCTTAATTCGCTATATTGGTGTGAGTAATTTTGATCGTCGCCTGCTGGAAGAAGCCATTTCTAAATCACAGGAACCGATTGTTTGTGATCAGGTTAAATAT AATATTGAAGATCGCGATCCGGAACGCGATGGTTTACTGGAATTTTGTCAG AAAAATGGCGTGACCTTAGTTGCCTATAGTCCGTTACGTCGTACCTTACTGAGTGAAAAAACCAAACGCACCTTAGAAGAAATTGCCAAAAATCATGGTGCCACCATATACCAGATTATGTTAGCATGGCTGTTAGCCAAACCGAATGTGGTTGCAATTCCGAAAGCAGGTCGTGTTGAACATCTGCGCGAAAATCTGAAAGCA ACCGAAATTAAACTGAGCGAAGAAGAGATGAAACTGCTGGATAGTCTGGGTTAA；
AKR蛋白质序列为：
MLYKELGRTGEEIPALGLGTWGIGGFETPDYSRDEEMVELLKTAIKMGYTHID TAEYYGGGHTEELIGKAIKDFRREDLFIVSKVWPTHLRRDDLLRSLENTLKRLDTDYVDLYLIHWPNPEIPLEETLSAMAEGVRQGLIRYIGVSNFDRRLLEEAISK SQEPIVCDQVKYNIEDRDPERDGLLEFCQKNGVTLVAYSPLRRTLLSEKTKRTL EEIAKNHGATIYQIMLAWLLAKPNVVAIPKAGRVEHLRENLKATEIKLSEEEM KLLDSLG
ADH基因序列为：
ATGAGCAATCGTCTGGATGGTAAAGTTGCAATTATTACCGGCGGAACTTTAG GTATTGGTCTGGCCATTGCAACCAAATTTGTGGAAGAAGGTGCCAAAGTTA TGATTACCGGTCGTCATAGCGATGTGGGTGAAAAAGCAGCCAAATCAGTGGGCACCCCGGATCAGATTCAGTTTTTCCAGCATGATAGTAGCGATGAAGATG GTTGGACCAAACTGTTTGATGCAACCGAAAAAGCCTTTGGTCCGGTGAGTACCTTAGTTAACAACGCAGGCATTGCCGTTAACAAGTCAGTGGAAGAAAC CACCACCGCAGAATGGCGTAAACTGCTGGCCGTGAACTTAGATGGTGTGTT TTTCGGCACCCGCTTAGGCATTCAGCGTATGAAAAATAAGGGTTTAGGCGCCTCAATTATTAATATGTCTAGCATTGAAGGCTTTGTGGGCGATCCGAGCTTA GGTGCCTATAATGCAAGTAAAGGCGCCGTTCGCATTATGTCTAAATCCGCAGCCCTGGATTGTGCACTGAAAGATTATGATGTTCGCGTTAATACCGTTCATCC GGGCTATATTAAAACCCCGCTGGTTGATGATCTGCCGGGCGCAGAAGAAGC CATGTCACAGCGTACCAAAACCCCGATGGGTCATATTGGCGAACCGAATGATATTGCCTATATTTGTGTGTATCTGGCCTCTAATGAGTCTAAATTTGCCACCG GTAGTGAATTTGTTGTTGATGGCGGCTATACCGCACAGTAA；
ADH蛋白质序列为：
MSNRLDGKVAIITGGTLGIGLAIATKFVEEGAKVMITGRHSDVGEKAAKSVGT PDQIQFFQHDSSDEDGWTKLFDATEKAFGPVSTLVNNAGIAVNKSVEETTTAEWRKLLAVNLDGVFFGTRLGIQRMKNKGLGASIINMSSIEGFVGDPSLGAYNAS KGAVRIMSKSAALDCALKDYDVRVNTVHPGYIKTPLVDDLPGAEEAMSQRTKTPMGHIGEPNDIAYICVYLASNESKFATGSEFVVDGGYTAQ
实施例6(羟丙基四氢吡喃三醇的合成)
于100mL三口烧瓶中，依次加入0.1M pH 7.0PBS缓冲溶液40mL，丙酮基四氢吡喃三醇5克、异丙醇3克、醛酮还原酶(AKR)0.3克、乙醇脱氢酶(ADH)0.3克、以及氧化型辅酶II(NADP)0.3克，于25℃，200rpm搅拌桨搅拌，0.01MPa氮气吹扫的条件下，反应24h， HPLC检测转化率95％。加入盐酸调节pH至2-3，硅藻土过滤，加入等体积乙酸乙酯萃取两次，旋转蒸发得到产物4.2克。
实施例7(羟丙基四氢吡喃三醇的合成)
于100mL三口烧瓶中，依次加入0.1M pH 8.0PBS缓冲溶液40mL，丙酮基四氢吡喃三醇5克、异丙醇3克、醛酮还原酶(AKR)0.5克、乙醇脱氢酶(ADH)0.3克、以及氧化型辅酶II(NADP)0.3克，于25℃，200rpm搅拌桨搅拌，0.01MPa氮气吹扫的条件下，反应24h， HPLC检测转化率95％。加入盐酸调节pH至2-3，硅藻土过滤，加入等体积乙酸乙酯萃取两次，旋转蒸发得到产物4.4克。
实施例8(羟丙基四氢吡喃三醇的合成)
于100mL三口烧瓶中，依次加入0.1M pH 7.0PBS缓冲溶液40mL，丙酮基四氢吡喃三醇5克、异丙醇3克、醛酮还原酶(AKR)0.5克、乙醇脱氢酶(ADH)0.5克、以及氧化型辅酶II(NADP)0.3克，于25℃，200rpm搅拌桨搅拌，0.01MPa氮气吹扫的条件下，反应24h， HPLC检测转化率95％。加入盐酸调节pH至2-3，硅藻土过滤，加入等体积乙酸乙酯萃取两次，旋转蒸发得到产物4.5克。
实施例9(羟丙基四氢吡喃三醇的合成)
于100mL三口烧瓶中，依次加入0.1M pH 7.0PBS缓冲溶液40mL，丙酮基四氢吡喃三醇5克、异丙醇3克、醛酮还原酶(AKR)0.5克、乙醇脱氢酶(ADH)0.5克、以及氧化型辅酶II(NADP)0.5克，于25℃，200rpm搅拌桨搅拌，0.01MPa氮气吹扫的条件下，反应24h， HPLC检测转化率95％。加入盐酸调节pH至2-3，硅藻土过滤，加入等体积乙酸乙酯萃取两次，旋转蒸发得到产物4.6克。
实施例10(所合成羟丙基四氢吡喃三醇的非对映异构体比例的测定)
1.1仪器和设备
高效液相色谱仪(HPLC)，四元泵，自动进样器，柱温箱，蒸发光散射检测器(ELSD)。分析天平，精度0.1mg，超声波清洗器，移液器，容量瓶10mL。
1.2试剂和材料
流动相的配制：超纯水。
1.3分析步骤
1.3.1样品处理
1.3.1.1供试品溶液配制：
精密称取上述实施例制备的羟丙基四氢吡喃三醇100.00mg(精确至0.01mg)，置于10mL 容量瓶中，用超纯水超声溶解并稀释至刻度，0.45μm过滤膜过滤。
1.3.2色谱条件
色谱柱：ASTEC Chirobiotic T手性柱786615(0.46mm×250mm，5μm)
柱温：35℃；
流速：0.5mL/min
流动相：A乙腈，B水
洗脱程序：0-20min，98％A-2％B等度洗脱
1.3.3测定
取供试品溶液5μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积大概计算S和R非对映异构体的含量。
如说明书附图1所示，其中S构型的非对映异构体含量达94.6％，表明本发明提供的合成方法具有优异的非对映选择性。
Claims (7)
1.一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法，其以丙酮基四氢吡喃三醇和异丙醇为原料，在含有醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)和氧化型辅酶II(NADP)的水相缓冲溶液中反应，从而制备羟丙基四氢吡喃三醇。
2.根据权利要求1所述所合成羟丙基四氢吡喃三醇的方法，其特征在于，所述醛酮还原酶(AKR)和乙醇脱氢酶(ADH)通过外源基因在大肠杆菌中表达合成。
3.根据权利要求1和2所述所合成羟丙基四氢吡喃三醇的方法，其特征在于，所述醛酮还原酶(AKR)的基因序列为：
ATGCTGTACAAAGAACTGGGCCGTACCGGTGAAGAAATTCCGGCCTTAGGCTTAGGCACCTGGGGTATTGGCGGCTTTGAAACCCCGGATTATTCTCGCGATGAAGAAATGGTGGAACTGTTAAAAACCGCAATTAAAATGGGCTATACCCATATTGATACCGCAGAATATTATGGCGGCGGTCATACCGAAGAACTGATTGGTAAAGCCATTAAAGATTTTCGTCGCGAGGATCTGTTTATTGTGTCTAAAGTGTGGCCGACCCATCTGCGCCGTGATGATCTGCTGCGCTCTCTGGAAAATACCCTGAAACGTTTAGATACCGATTATGTGGATCTGTATCTGATTCATTGGCCGAATCCGGAAATTCCGCTGGAAGAAACCCTGAGTGCAATGGCAGAAGGCGTGCGTCAGGGCTTAATTCGCTATATTGGTGTGAGTAATTTTGATCGTCGCCTGCTGGAAGAAGCCATTTCTAAATCACAGGAACCGATTGTTTGTGATCAGGTTAAATATAATATTGAAGATCGCGATCCGGAACGCGATGGTTTACTGGAATTTTGTCAGAAAAATGGCGTGACCTTAGTTGCCTATAGTCCGTTACGTCGTACCTTACTGAGTGAAAAAACCAAACGCACCTTAGAAGAAATTGCCAAAAATCATGGTGCCACCATATACCAGATTATGTTAGCATGGCTGTTAGCCAAACCGAATGTGGTTGCAATTCCGAAAGCAGGTCGTGTTGAACATCTGCGCGAAAATCTGAAAGCAACCGAAATTAAACTGAGCGAAGAAGAGATGAAACTGCTGGATAGTCTGGG TTAA；
AKR蛋白质序列为：
MLYKELGRTGEEIPALGLGTWGIGGFETPDYSRDEEMVELLKTAIKMGYTHIDTAEYYGGGHTEELIGKAIKDFRREDLFIVSKVWPTHLRRDDLLRSLENTLKRLDTDYVDLYLIHWPNPEIPLEETLSAMAEGVRQGLIRYIGVSNFDRRLLEEAISKSQEPIVCDQVKYNIEDRDPERDGLLEFCQKNGVTLVAYSPLRRTLLSEKTKRTLEEIAKNHGATIYQIMLAWLLAKPNVVAIPKAGRVEHLRENLKATEIKLSEEEM KLLDSLG。
4.根据权利要求1和2所述所合成羟丙基四氢吡喃三醇的方法，其特征在于，ADH基因序列为：ATGAGCAATCGTCTGGATGGTAAAGTTGCAATTATTACCGGCGGAACTTTAGGTATTGGTCTGGCCATTGCAACCAAATTTGTGGAAGAAGGTGCCAAAGTTATGATTACCGGTCGTCATAGCGATGTGGGTGAAAAAGCAGCCAAATCAGTGGGCACCCCGGATCAGATTCAGTTTTTCCAGCATGATAGTAGCGATGAAGATGGTTGGACCAAACTGTTTGATGCAACCGAAAAAGCCTTTGGTCCGGTGAGTACCTTAGTTAACAACGCAGGCATTGCCGTTAACAAGTCAGTGGAAGAAACCACCACCGCAGAATGGCGTAAACTGCTGGCCGTGAACTTAGATGGTGTGTTTTTCGGCACCCGCTTAGGCATTCAGCGTATGAAAAATAAGGGTTTAGGCGCCTCAATTATTAATATGTCTAGCATTGAAGGCTTTGTGGGCGATCCGAGCTTAGGTGCCTATAATGCAAGTAAAGGCGCCGTTCGCATTATGTCTAAATCCGCAGCCCTGGATTGTGCACTGAAAGATTATGATGTTCGCGTTAATACCGTTCATCCGGGCTATATTAAAACCCCGCTGGTTGATGATCTGCCGGGCGCAGAAGAAGCCATGTCACAGCGTACCAAAACCCCGATGGGTCATATTGGCGAACCGAATGATATTGCCTATATTTGTGTGTATCTGGCCTCTAATGAGTCTAAATTTGCCACCGGTAGTGAATTTGTTGTTGATGGCGGCTATACCGCACAGTAA；
ADH蛋白质序列为：
MSNRLDGKVAIITGGTLGIGLAIATKFVEEGAKVMITGRHSDVGEKAAKSVGTPDQIQFFQHDSSDEDGWTKLFDATEKAFGPVSTLVNNAGIAVNKSVEETTTAEWRKLLAVNLDGVFFGTRLGIQRMKNKGLGASIINMSSIEGFVGDPSLGAYNASKGAVRIMSKSAALDCALKDYDVRVNTVHPGYIKTPLVDDLPGAEEAMSQRTKTPMGHIGEPNDIAYICVYLASNESKFATGSEFVVDGGYTAQ。
5.根据权利要求1所述所合成羟丙基四氢吡喃三醇的方法，其特征在于，在起始反应体系中，所述丙酮基四氢吡喃三醇、异丙醇、醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)和氧化型辅酶II(NADP)的投料质量比为1：(0.5～2)：(0.05～0.2)：(0.05～0.2)：(0.05～0.2)。
6.根据权利要求1所述所合成羟丙基四氢吡喃三醇的方法，其特征在于，所述的缓冲溶液为磷酸缓冲盐溶液(PBS)，pH为7.0～8.0。
7.根据权利要求1所述所合成羟丙基四氢吡喃三醇的方法，其特征在于，具体实施过程如下：在反应容器中依次加入所述的水相缓冲溶液、丙酮基四氢吡喃三醇、异丙醇、醛酮还原酶(AKR)、乙醇脱氢酶(ADH)和氧化型辅酶II(NADP)搅拌均匀，在25-45℃和氮气吹扫的条件下，HPLC检测反应进程，当转化率达90-99％时，调节反应体系pH至2-3，硅藻土过滤，并在滤液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，旋转蒸发脱去溶剂后得到羟丙基四氢吡喃三醇。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110793668.6A CN113416756B (zh) | 2021-07-12 | 2021-07-12 | 一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110793668.6A CN113416756B (zh) | 2021-07-12 | 2021-07-12 | 一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113416756A CN113416756A (zh) | 2021-09-21 |
| CN113416756B true CN113416756B (zh) | 2023-10-31 |
Family
ID=77720943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110793668.6A Active CN113416756B (zh) | 2021-07-12 | 2021-07-12 | 一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113416756B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114019048A (zh) * | 2021-11-02 | 2022-02-08 | 成都格纯生物医药有限公司 | 一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法 |
| CN113717997B (zh) * | 2021-11-04 | 2022-02-08 | 深圳瑞德林生物技术有限公司 | 一种酶组合物及化学酶法合成玻色因的方法 |
| CN114397392B (zh) * | 2022-01-18 | 2023-08-11 | 宁波中盛产品检测有限公司 | 一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法 |
| CN114381490A (zh) * | 2022-02-09 | 2022-04-22 | 阜阳欣奕华制药科技有限公司 | 一种(β,S)构型羟丙基四氢吡喃三醇的结晶方法 |
| CN114835666A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-08-02 | 天津泰普制药有限公司 | 一种羟丙基四氢吡喃三醇的连续合成方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102925501A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-02-13 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种(s)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法 |
| CN104152506A (zh) * | 2014-08-08 | 2014-11-19 | 江南大学 | 醛酮还原酶的重组菌粗酶体系催化合成(s)-n,n-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺的方法 |
| CN109706191A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-03 | 南京欧信医药技术有限公司 | 一种托莫西汀中间体的酶催化合成方法 |
| CN110467591A (zh) * | 2019-08-23 | 2019-11-19 | 上海克琴科技有限公司 | 稀土金属配合物促进的一锅法合成化妆品活性物玻色因 |
| CN111704595A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-09-25 | 江苏瑞蓓丽生物科技有限公司 | 一种从酶反应液中分离纯化玻色因的方法 |
| CN111876452A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-11-03 | 江苏瑞蓓丽生物科技有限公司 | 一种利用生物酶一锅法制备玻色因的方法 |
-
2021
- 2021-07-12 CN CN202110793668.6A patent/CN113416756B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102925501A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-02-13 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种(s)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法 |
| CN104152506A (zh) * | 2014-08-08 | 2014-11-19 | 江南大学 | 醛酮还原酶的重组菌粗酶体系催化合成(s)-n,n-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺的方法 |
| CN109706191A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-03 | 南京欧信医药技术有限公司 | 一种托莫西汀中间体的酶催化合成方法 |
| CN110467591A (zh) * | 2019-08-23 | 2019-11-19 | 上海克琴科技有限公司 | 稀土金属配合物促进的一锅法合成化妆品活性物玻色因 |
| CN111704595A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-09-25 | 江苏瑞蓓丽生物科技有限公司 | 一种从酶反应液中分离纯化玻色因的方法 |
| CN111876452A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-11-03 | 江苏瑞蓓丽生物科技有限公司 | 一种利用生物酶一锅法制备玻色因的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| QVQ68836.1;Anonymous;GenBank;第1-2页 * |
| WP_004082270.1;Anonymous;GenBank;1-2 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113416756A (zh) | 2021-09-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113416756B (zh) | 一种生物酶催化的羟丙基四氢吡喃三醇的合成方法 | |
| Li et al. | New chemistry with old functional groups: on the reaction of isonitriles with carboxylic acids—a route to various amide types | |
| CN108690854B (zh) | 一种利用化学-酶法生产l-草铵膦的方法 | |
| CN112175918A (zh) | 7α-羟基类固醇脱氢酶突变体St-2-2 △C10及其应用 | |
| Xie et al. | Discovery of quorum quenchers targeting the membrane-embedded sensor domain of the Staphylococcus aureus receptor histidine kinase, AgrC | |
| CN110656077B (zh) | 一种生产蔗糖磷酸化酶的方法及其应用 | |
| CN110904132B (zh) | D-阿洛酮糖3-差向异构酶的编码基因、载体、重组细胞以及它们的应用 | |
| CN112322596B (zh) | 7α-羟基类固醇脱氢酶突变体J-1-1 △C6及其应用 | |
| GB2589278A (en) | Benzeneboronic Acid Solid-phase Extraction Column Packing and Preparation Method Thereof | |
| CN113699195B (zh) | 一种生物合成木糖的方法 | |
| CN112175980B (zh) | 通过定点突变提高聚合酶大片段活性的方法及应用 | |
| CN111019852B (zh) | 一种提高酿酒酵母工程菌株合成葡萄糖二酸效率的方法 | |
| CN113832196B (zh) | 生物酶催化的手性2,3-蒎烷二醇的合成 | |
| CN116287050A (zh) | 亚胺还原酶、突变体及其在四氢-β-咔啉类衍生物合成中的应用 | |
| CN111944774B (zh) | 醇脱氢酶及其编码基因和在催化合成(r)-苯基乙二醇中的应用 | |
| CN116018407A (zh) | 改性的萜烯合酶及其用于生产伪蕨素中间体和/或伪蕨素的用途 | |
| CN113604446A (zh) | 7α-羟基类固醇脱氢酶St-2-2的突变体R16Q | |
| US10907145B2 (en) | Chemotherapeutic drug-conjugated resins and their preferential binding of methylated DNA | |
| CN110964705A (zh) | (R)-ω-转氨酶突变体的新应用 | |
| CN112251418A (zh) | 一种专一性催化cdca及其缀合物的酶及其应用 | |
| CN110791483A (zh) | 一种短链还原酶及其制备方法和应用 | |
| CN114807071B (zh) | 一种托法替布关键中间体的酶法制备方法 | |
| CN113322289B (zh) | 制备(2r,3s)-2-氨基-3-羟基-3-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙酸的方法 | |
| CN117126823A (zh) | 一种酮还原酶突变体及其应用 | |
| CN114990097B (zh) | L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |