CN114397392B - 一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于包括有以下步骤：(1)绘制标准曲线；(2)样品前处理：(3)离子色谱检测：采用离子色谱分析法对检测溶液进行分析检测，得到检测溶液的离子色谱谱图，计算得到该检测溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积，代入对应的线性方程得到检测溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的浓度。与现有技术相比，本发明的分析方法检测精度和灵敏度高。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，具体指一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法。
背景技术
玻色因是由羟丙基四氢吡喃三醇(CAS：439685-79-7)、丙二醇和水的复配物共同组成的一种原料，其核心成分为羟丙基四氢吡喃三醇，是一种人工合成的木糖衍生物，能够促进人体内糖胺聚糖(GAG)、透明质酸和胶原蛋白的合成，改善真皮与表皮间的粘合度，维持真皮弹性，达到抗皱、抗衰老的作用。
玻色因最初由欧莱雅集团自主研发并用于兰蔻产品中，是欧莱雅产品的核心功效成分，欧莱雅旗下的赫莲娜面霜，宣称其玻色因有效成分的含量在30％左右。作为抗皱、抗老化的核心活性物，玻色因中的羟丙基四氢吡喃三醇含量及异构体比例决定了产品的实际功效。随着玻色因合成工艺专利到期，目前，市面上已出现许多宣称含有玻色因成分的化妆品，但其玻色因含量参差不齐，存在夸大宣传，以原料含量偷换产品宣称含量的情况，同时玻色因有效物羟丙基四氢吡喃三醇存在2种异构体，2种异构体的比例决定了产品的活性。因此，如何准确有效地测得化妆品中玻色因有效物的实际含量和比例，对产品的功效具有重要意义。
专利申请号为CN201911396367.9(公布号为CN111189800A)的中国发明专利《一种运用折光率测试确定玻色因含量浓度的方法》利用玻色因溶液的折光率与其浓度成线性关系的特点，通过测量一系列不同浓度玻色因溶液的折光率，再绘制折光率与浓度关系线性图，并得出浓度与折光率的函数关系，最后通过测定未知浓度玻色因溶液的折光率，然后基于浓度与折光率的函数关系计算玻色因的浓度。但是从该专利公布的曲线上来看只能测试10％以上的玻色因含量，并且由于采用折光率测试，容易受到干扰导致假阳性。
专利申请号为CN202011397334.9(公布号为CN112697933A)的中国发明专利《一种测定羟丙基四氢吡喃三醇含量及其非对映异构体比例的方法》提供了一种高效液相色谱-电喷雾检测器(ELSD)法测定玻色因中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体含量的方法，但该专利未提供实际样品的检测方法，需要液相色谱配备电喷雾检测器，电喷雾检测器的灵敏度不高，检测限为27ug/mL。
专利申请号为CN202011584631.4(公布号为CN112730720A)的中国发明专利《一种化妆品中玻色因的液相检测方法》提供了一种液相色谱-示差折光法检测化妆品中玻色因含量的检测方法，同样示差折光检测器灵敏度较低，检出限为0.2g/100g(较高)，需要液相色谱配备示差折光检测器。
另外，对于化妆品来说，不同样品之间的物性差距较大，若采用同样的前处理方式，无法对玻色因有效物进行较好地提取，影响检测精度。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种检测精度和灵敏度高的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于包括有以下步骤：
(1)绘制标准曲线：
配制至少5种不同浓度的玻色因标准工作溶液，采用离子色谱分析法对各玻色因标准工作溶液进行分析检测，得到各玻色因标准工作溶液的离子色谱标准谱图，计算得到对应玻色因标准工作溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积，以玻色因标准工作溶液的浓度为横坐标，分别以羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程；
(2)样品前处理：
若待测样品为水性样品，则称取0.2～1g待测样品，用10mL的水涡旋分散，加入0.1mL质量分数为10％的亚铁氰化钾溶液和0.1mL质量分数为20％的乙酸锌溶液，涡旋2min，定容至20mL，10000rmp/min离心3min，取上清液过C18小柱和Na柱，去滤液作为检测溶液；
若待测样品为油包水样品，则称取0.2～1g待测样品，用5mL的正己烷涡旋分散，再用10mL的水涡旋分散，分层后吸取下层的水相，上层正己烷相再用10mL的水涡旋分散，分层后吸取下层的水相，然后合并两次吸取的水相，加入0.1mL质量分数为10％的亚铁氰化钾溶液和0.1mL质量分数为20％的乙酸锌溶液，涡旋2min，定容至20mL，10000rmp/min离心3min，取上清液过C18小柱和Na柱，去滤液作为检测溶液；
(3)离子色谱检测：
采用离子色谱分析法对检测溶液进行分析检测，得到检测溶液的离子色谱谱图，计算得到该检测溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积，代入对应的线性方程得到检测溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的浓度；
所述离子色谱分析法的工艺参数包括有：
色谱柱：CarboPac MA1，4*250mm，1.6μm；
流动相：体积比为60:40的600mmol的氢氧化钠溶液和水，采用等度洗脱。
优选地，步骤(1)中，所述玻色因标准工作溶液的配制方法具体为：准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成浓度为1000μg/mL的玻色因标准贮备液，再用空白样品基质溶液逐步稀释成浓度为0.050～200μg/mL的玻色因标准工作溶液。
进一步，所述浓度为0.050～200μg/mL的玻色因标准工作溶液为浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的玻色因标准工作溶液。
优选地，所述离子色谱分析法的工艺参数还包括有：
进样量：2μL；
进样体积：25μL；
色谱柱柱温：30℃；
流动相流速：0.4mL/min；
采用电化学检测器进行测定。
优选地，所述羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰对应的保留时间分别为12.584min和18.110min。
优选地，还包括有以下步骤：
(4)液质质谱确诊：
当检出阳性样品时，采用高效液相色谱串联质谱法确认样品中的玻色因。
进一步，所述高效液相色谱串联质谱法的工艺参数包括有：
离子源：电喷雾离子源负源模式；
检测离子对：191.1/110.0和191.1/83.0。
更进一步，所述高效液相色谱串联质谱法的工艺参数还包括有：
气帘气流速：35L/min；
碰撞气流速：9L/min；
离子源气1流速：50L/min；
离子源气2流速：50L/min；
离子源加热温度：500℃；
离子化电压为：-4500V；
离子扫描模式：多重反应监测模式。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明提供的分析方法可以测定玻色因有效物羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的含量，通过选择合适的色谱柱，可以有效地分离玻色因有效物羟丙基四氢吡喃三醇的两个异构体，同时该色谱柱也在一定程度上消除了化妆品中其它物质的干扰，检测结果准确，检测范围可以覆盖各种类型的市售化妆品，且样品前处理简单，结果准确；
(2)针对水性样品和油包水样品的不同物性，本发明提出了不同基质化妆品产品(膏霜、乳液)中玻色因的提取方法，同时建立提取液的净化方法，使得提取液可以用离子色谱分析且不污染色谱柱；
(3)本发明的分析方法可以分析护肤品中玻色因有效物的含量，比对玻色因中羟丙基四氢吡喃三醇的含量可以初步判断玻色因的来源，建立的质谱方法可以准确定性玻色因。
附图说明
图1为本发明中玻色因标准工作溶液的离子色谱标准谱图；
图2为本发明中玻色因中异构体1的线形拟合回归方程图；
图3为本发明中玻色因中异构体2的线形拟合回归方程图；
图4为本发明中基质效应评价的样品离子色谱谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
本发明提供了一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法。
(1)绘制标准曲线：
准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成浓度为1000μg/mL的玻色因标准贮备液，再用空白样品基质溶液逐步稀释成浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的玻色因标准工作溶液，采用离子色谱分析法对各玻色因标准工作溶液进行分析检测，得到各玻色因标准工作溶液的离子色谱标准谱图(如图1所示)，其中保留时间在12.584min和18.110min处的响应峰为玻色因中的羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体，分别记为异构体1和异构体2，计算得到对应玻色因标准工作溶液中异构体1和异构体2的响应峰面积，以玻色因标准工作溶液的浓度为横坐标，分别以异构体1和异构体2的响应峰面积纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程(如图2和图3所示)；
(2)样品前处理：
若待测样品为水性样品，则称取0.2～1g待测样品，用10mL的水涡旋分散，加入0.1mL质量分数为10％的亚铁氰化钾溶液和0.1mL质量分数为20％的乙酸锌溶液，涡旋2min，定容至20mL，10000rmp/min离心3min，取上清液过C18小柱和Na柱，去滤液作为检测溶液；
若待测样品为油包水样品，则称取0.2～1g待测样品，用5mL的正己烷涡旋分散，再用10mL的水涡旋分散，分层后吸取下层的水相，上层正己烷相再用10mL的水涡旋分散，分层后吸取下层的水相，然后合并两次吸取的水相，加入0.1mL质量分数为10％的亚铁氰化钾溶液和0.1mL质量分数为20％的乙酸锌溶液，涡旋2min，定容至20mL，10000rmp/min离心3min，取上清液过C18小柱和Na柱，去滤液作为检测溶液；
(3)离子色谱检测：
采用离子色谱分析法对检测溶液进行分析检测，得到检测溶液的离子色谱谱图，计算得到该检测溶液中异构体1和异构体2的响应峰面积，代入对应的线性方程得到检测溶液中异构体1和异构体2的浓度；
(4)液质质谱确诊：
当检出阳性样品时，采用高效液相色谱串联质谱法确认样品中的玻色因有效物；
上述离子色谱分析法的工艺参数如下：进样量为2μL；进样体积为25μL；色谱柱为CarboPac MA1(4*250mm，1.6μm)；色谱柱柱温为30℃；流动相为体积比为60:40的600mmol的氢氧化钠溶液和水，采用等度洗脱；流动相流速为0.4mL/min；采用电化学检测器进行测定；
上述高效液相色谱串联质谱法的工艺参数如下：气帘气流速为35L/min；碰撞气流速为9L/min；离子源气1流速为50L/min；离子源气2流速为50L/min；离子源加热温度为500℃；离子化电压为-4500V(负离子模式)；离子扫描模式为多重反应监测模式(MRM)，其监测条件如表1所示。
表1：多重反应监测条件
为了考察分析方法中基质干扰对待测组分检测的影响，本发明采用加标回收的方法对基质效应进行评价，最终得到的样品离子色谱谱图如图4所示。
从图4可以看出：其中10.385min为干扰的色谱峰，是样品中的基体干扰，在强碱性条件下，不同的醇类与大孔阴离子交换树脂的作用不同有效分离消除干扰。
为了衡量分析方法的正确度和精密度，本发明采用添加回收方法来进行试验，分别向不同的样品基体中添加玻色因标准贮备液，其测试结果如表2所示。
表2：不同样品基体中玻色因有效物的添加回收试验结果
从表2可以看出：该分析方法中异构体1和异构体2的回收率均较高，精密性良好。
为了衡量分析方法的灵敏度，采用逐级稀释的方法，以不同浓度的标准玻色因溶液进行分析，在信噪比(S/N)为3的情况下，测得溶液中玻色因中异构体1和异构体2的最低检测浓度为0.03μg/L。
可见，建立的方法可以准确地对化妆品中玻色因的含量进行定量，当称样量为0.2g，定容体积为25mL时，可以检测到化妆品中含量0.0004％以上的玻色因。
实施例1～3：通过上述离子色谱分析方法对3个标识有玻色因的样品进行测试，其测试结果如表3所示：
表3：实施例1～3中样品的测试结果
| 样品 | 是否标识含玻色因 | 波色因有效物含量％ | 异构体比例 | |
| 实施例1 | A | 是 | 0.29 | 46:54 |
| 实施例2 | B | 是 | 未检出 | / |
| 实施例3 | C | 是 | 未检出 | / |
从表3可以看出：建立的方法不仅可以检测化妆品中波色因含量，还可以通过玻色因有效物羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的比例初步分析该化妆品的保湿效果。
Claims (8)
1.一种化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于包括有以下步骤：
(1)绘制标准曲线：
配制至少5种不同浓度的玻色因标准工作溶液，采用离子色谱分析法对各玻色因标准工作溶液进行分析检测，得到各玻色因标准工作溶液的离子色谱标准谱图，计算得到对应玻色因标准工作溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积，以玻色因标准工作溶液的浓度为横坐标，分别以羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程；
(2)样品前处理：
若待测样品为水性样品，则称取0.2～1g待测样品，用10mL的水涡旋分散，加入0.1mL质量分数为10％的亚铁氰化钾溶液和0.1mL质量分数为20％的乙酸锌溶液，涡旋2min，定容至20mL，10000rmp/min离心3min，取上清液过C18小柱和Na柱，去滤液作为检测溶液；
若待测样品为油包水样品，则称取0.2～1g待测样品，用5mL的正己烷涡旋分散，再用10mL的水涡旋分散，分层后吸取下层的水相，上层正己烷相再用10mL的水涡旋分散，分层后吸取下层的水相，然后合并两次吸取的水相，加入0.1mL质量分数为10％的亚铁氰化钾溶液和0.1mL质量分数为20％的乙酸锌溶液，涡旋2min，定容至20mL，10000rmp/min离心3min，取上清液过C18小柱和Na柱，去滤液作为检测溶液；
(3)离子色谱检测：
采用离子色谱分析法对检测溶液进行分析检测，得到检测溶液的离子色谱谱图，计算得到该检测溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰面积，代入对应的线性方程得到检测溶液中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的浓度；
所述离子色谱分析法的工艺参数包括有：
色谱柱：CarboPac MA1，4*250mm，1.6μm；
流动相：体积比为60:40的600mmol的氢氧化钠溶液和水，采用等度洗脱。
2.根据权利要求1所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于：步骤(1)中，所述玻色因标准工作溶液的配制方法具体为：准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成浓度为1000μg/mL的玻色因标准贮备液，再用空白样品基质溶液逐步稀释成浓度为0.050～200μg/mL的玻色因标准工作溶液。
3.根据权利要求2所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于：所述浓度为0.050～200μg/mL的玻色因标准工作溶液为浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的玻色因标准工作溶液。
4.根据权利要求1所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于：所述离子色谱分析法的工艺参数还包括有：
进样量：2μL；
进样体积：25μL；
色谱柱柱温：30℃；
流动相流速：0.4mL/min；
采用电化学检测器进行测定。
5.根据权利要求1所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于：所述羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体的响应峰对应的保留时间分别为12.584min和18.110min。
6.根据权利要求1至5种任一权利要求所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于还包括有以下步骤：
(4)液质质谱确诊：
当检出阳性样品时，采用高效液相色谱串联质谱法确认样品中的玻色因有效物。
7.根据权利要求6所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱串联质谱法的工艺参数包括有：
离子源：电喷雾离子源负源模式；
检测离子对：191.1/110.0和191.1/83.0。
8.根据权利要求7所述的化妆品中玻色因有效物的离子色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱串联质谱法的工艺参数还包括有：
气帘气流速：35L/min；
碰撞气流速：9L/min；
离子源气1流速：50L/min；
离子源气2流速：50L/min；
离子源加热温度：500℃；
离子化电压为：-4500V；
离子扫描模式：多重反应监测模式。
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