CN113413394A - 5’-单磷酸核苷酸及其混合物在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用 - Google Patents

5’-单磷酸核苷酸及其混合物在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及5’‑单磷酸核苷酸及其混合物在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用。5’‑单磷酸核苷酸是核糖核酸为原料经酶法降解生产的，纯度在99％以上的5’‑单磷酸腺苷和5’‑尿苷酸二钠，5’核苷酸混合物包括：CMP 23‑78％、AMP 6‑44％、UMP 7‑40％、GMP 7‑51％、IMP为0、或大于0且不高于2.5％。本发明发现，5’‑单磷酸核苷酸及其混合物可以改善H2O2诱导的衰老成纤维细胞的线粒体功能。

Description

5’-单磷酸核苷酸及其混合物在制备改善线粒体功能药物或 食品中的应用
技术领域
本发明属于医药保健领域，涉及一种核苷酸产品及其新用途，具体涉及以核糖核酸为原料经酶法降解生产的2种5’-单磷酸核苷酸及其混合物在药物或食品中的用途。
背景技术
近十年大量研究证据表明，线粒体功能障碍与衰老相关的主要表型之间存在因果联系。线粒体稳态的扰动是细胞衰老的一个重要特征。自从自由基衰老学说和线粒体衰老学说的提出，线粒体已成为衰老研究的焦点。自由基学说认为代谢过程中不断产生的ROS引发DNA链式自由基反应，引起DNA、核酸、蛋白质和脂类，特别是多不饱和脂肪酸等大分子物质变性和交联，损伤DNA、生物膜、重要的结构蛋白和功能蛋白，使细胞不能发挥正常功能，从而引起衰老的发生。线粒体衰老学说认为线粒体是自由基浓度最高的细胞器，线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)裸露与基质，易发生突变。
线粒体对生命至关重要，参与ATP的产生、细胞凋亡、脂肪酸的β氧化等重要生理过程。哺乳动物线粒体基因组编码13种蛋白质，22种tRNAs和2种rRNAs。哺乳动物线粒体蛋白质组包括1200多种蛋白质，而几乎所有这些都是由核DNA编码，释放至细胞质后再导入到线粒体。线粒体DNA仅编码线粒体蛋白质组的1.1％，但这些蛋白质是氧化磷酸化(oxidativephosphorylation，OXPHOS)复合物的关键成分，对线粒体发挥正常功能必不可少。随着年龄的增长，线粒体的形态、丰度和OXPHOS活性发生变化。研究报道，衰老的细胞中线粒体体积增大、数量增加、mtDNA突变、拷贝数增加2～4倍，减少线粒体或mtDNA含量可以拮抗衰老和SASP。研究认为mtDNA损伤的持续积累可能与衰老有关，mtDNA的突变会导致细胞能量转换的严重损害和组织功能障碍，这种损害包括线粒体脆性增加、膜电位紊乱、呼吸链功能障碍、电子传递链复合物活性下降，氧化损伤升高。mtDNA突变使呼吸链功能受损，进一步引起自由基堆积，导致衰老。中国专利(CN 108697722 B)公布了通过β-烟酰胺单核苷酸营养补充剂或药物可以预防或治疗线粒体功能障碍相关疾病。中国专利(CN105073766A)公布了特浓黄酮中所含的20％～35％的核苷酸、寡核苷酸可以修复细胞及其线粒体的基因。然而，尚未见通过生物酶解技术获得5’-单磷酸核苷酸或其不同比例混合物在改善细胞线粒体功能作用的相关专利。
核苷酸由戊糖、碱基和磷酸构成，是核酸的基本构成单位。核苷酸可以来源于人体内源性合成以及通过生物酶解技术等外源性合成。外源性核苷酸在特定的生理条件下是不可缺少的营养成分。在代谢旺盛的组织器官或者当机体受到应激、免疫挑战、肝损伤、饥饿以及快速生长的情况下，核苷酸能被组织吸收利用，节省机体从头合成或者补救合成的消耗，从而可以优化组织功能。此外，在体外通过酶解方式将核酸降解成为核苷酸后可以省略体内的分解过程，更加容易被人体消化吸收。目前对于酶解技术获得的外源性核苷酸在改善衰老细胞线粒体功能方面作用的研究尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供2种分子量较低、吸收快的5’-单磷酸核苷酸及其混合物在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明一方面提供了5’-单磷酸核苷酸在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用，所述5’-单磷酸核苷酸为2种5’-单磷酸核苷酸，分别为5’-单磷酸腺苷或5’-尿苷酸二钠。
进一步地，5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠是以核糖核酸为原料经酶法降解生产，纯度在99％以上的外源性核苷酸5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠。
本发明另一方面提供了核苷酸混合物在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用，所述核苷酸混合物由五种外源核苷酸或者其钠盐形式组成，各种核苷酸折合成CMP、AMP、UMP、GMP、IMP酸型的质量比分别为：CMP 23-78％、AMP 6-44％、UMP 7-40％、GMP 7-51％、IMP为0、或大于0且不高于2.5％。
进一步地，所述核苷酸混合物中各核苷酸折合成CMP、AMP、UMP、GMP、IMP酸型的质量比分别为：CMP 25.80％、AMP 22.80％、UMP 20.40％、GMP30.20％、IMP 0.8％。
进一步地，5’-单磷酸核苷酸及其混合物在改善细胞线粒体功能药物或食品中的应用，5’-单磷酸核苷酸及其混合物(5’-单磷酸核苷酸或核苷酸混合物)的浓度为100-200μmol/L。
进一步地，所述药物为粉剂、片剂、软硬胶囊或口服液。
进一步地，所述食品为粉剂、液体饮料，优选奶粉、奶制品或烘焙制品。
进一步地，5’-单磷酸核苷酸及其混合物显著改善H2O2诱导衰老细胞线粒体基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备。
本发明发现2种5’-单磷酸核苷酸及其混合物，具有改善H2O2诱导的衰老成纤维细胞的线粒体功能的作用，发现了其在制备改善线粒体功能药物或食品中的用途。细胞实验证实，上述2种5’-单磷酸核苷酸及其混合物可以显著改善H2O2诱导的衰老细胞的线粒体基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备。
附图说明
图1为实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体耗氧率的影响；
图2为实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体基础呼吸的影响；
图3为实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体最大呼吸值的影响；
图4为实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体ATP产生能力的影响；
图5为实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体呼吸储备的影响。
图6为实施例3-6中5’-单磷酸核苷酸混合物对衰老细胞线粒体最大呼吸值的影响。
图7为实施例2中5’-单磷酸核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体基础呼吸的影响；
图8为实施例2中5’-单磷酸核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体最大呼吸值的影响；
图9为实施例2中5’-单磷酸核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体ATP产生能力的影响；
图10为实施例2中5’-单磷酸核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体呼吸储备的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施方案对本发明作进一步的说明,这些实例应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
1.本实施例中所使用的2种5’-单磷酸核苷酸分别是5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠。
2.生产流程：纯度为90％的核糖核酸(RNA)经热变性→核酸酶P1酶解→超滤→吸附于阴树脂→分步洗脱→纳滤脱盐→薄膜浓缩→碳粉脱色→结晶→干燥制成。对上述2种5’-单磷酸核苷酸分别进行检测，合格后使用。
实施例2
1.本实施例中所使用的5’-单磷酸核苷酸混合物是由五种5’-单核苷酸或者其钠盐的形式的核苷酸混合物，核苷酸混合物按照CMP 25.80wt％、AMP22.80wt％、UMP20.40wt％、GMP 30.20wt％、IMP 0.8wt％比例混合。
2.具体制备方式如下：
将五种5’单核苷酸或者其钠盐分别进行检测，合格后备用；
将质检合格的五种5’单核苷酸或者其钠盐过60目筛备用；
按比例计算称取所需的各单核苷酸样品量，全部加入后进行总混，混合时间不低于40分钟。所得样品常温保存。
实施例3
本实施例中所使用的5’-单磷酸核苷酸混合物是由五种5’-单核苷酸或者其钠盐的形式的核苷酸混合物，核苷酸混合物按照CMP 78wt％、AMP 6wt％、UMP7wt％、GMP 7wt％、IMP 2wt％比例混合。制备方法同实施例2。
实施例4
本实施例中所使用的5’-单磷酸核苷酸混合物是由五种5’-单核苷酸或者其钠盐的形式的核苷酸混合物，核苷酸混合物按照CMP 23wt％、AMP 44wt％、UMP25wt％、GMP7wt％、IMP 1.0wt％比例混合。制备方法同实施例2。
实施例5
本实施例中所使用的5’-单磷酸核苷酸混合物是由五种5’-单核苷酸或者其钠盐的形式的核苷酸混合物，核苷酸混合物按照CMP 23wt％、AMP 17wt％、UMP40wt％、GMP19wt％、IMP 1wt％比例混合。制备方法同实施例2。
实施例6
本实施例中所使用的5’-单磷酸核苷酸混合物是由五种5’-单核苷酸或者其钠盐的形式的核苷酸混合物，核苷酸混合物按照CMP 24wt％、AMP 17wt％、UMP7wt％、GMP51wt％、IMP 1wt％比例混合。制备方法同实施例2。
实施例7
一、材料与方法
1.样品：上述实施例1-6中所得的5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠、5’-单磷酸核苷酸混合物样品。
2.实验分组与剂量：本实施例中使用实施例1中5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠浓度分别为100μmol/L和200μmol/L，分别记作AMP100和UMP200组，实施例2-6中核苷酸混合物的浓度为200μmol/L，记作核苷酸配伍组；模型对照组为经过过氧化氢干预的衰老细胞模型组，空白对照组为无5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠和5’-单磷酸核苷酸混合物的未经过过氧化氢干预。
3.实验细胞：实施例中所使用的细胞均为小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3，购自中国科学院细胞库。
4.衰老细胞模型的建立：细胞培养于含1％青霉素/链霉素10％胎牛血清的DMEM高糖培养基中，在5％CO2培养箱37℃饱和湿度条件下培养。衰老细胞模型的建立如下：细胞生长贴壁后，不同浓度的过氧化氢进行干预，浓度分别为50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L，孵育4h后弃掉含有过氧化氢的培养基，加入正常完全培养基(含1％青霉素/链霉素10％胎牛血清的DMEM高糖培养基)孵育24h，使用CCK-8细胞活性试剂盒检测细胞活性，检测β-半乳糖苷酶表达情况，western blot法检测衰老标志物p16INK4A和p21Waf1 /Cip1的表达情况。根据衰老结果选取200μmol/L为最佳浓度进行后续试验。
5.实验方法
本实施例中对线粒体耗氧率(OCR)、基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备均通过Seahorse XFe96(Agilent)线粒体应激检测实验完成。96孔细胞培养板(Nunc，165306)除四个角的背景孔外其余孔每孔接种2万个NIH/3T3细胞，过夜细胞生长贴壁后200μmol/L过氧化氢干预4h，后弃掉含有过氧化氢的培养基，加入正常及含有不同浓度核苷酸的完全培养基(含1％青霉素/链霉素10％胎牛血清的DMEM高糖培养基，及5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠浓度分别为100μmol/L和200μmol/L，核苷酸混合物的浓度为200μmol/L)培养24h；提前一天水化液(XF Calibrant Solution，Agilent，100840-000)水化探针板(XFe96FluxPak，Agilent，102353-100)，放入37℃无CO2培养箱中孵育12h以上；实验当天配制实验培养液，100ml基础培养基(Seahorse XF BaseMedium，Agilent，102353-100)中各加入1ml 2.5mM葡萄糖(Glucose，Sigma，G7528)、2mM谷氨酰胺(L-glutamine，Sigma，G8540)和1mM丙酮酸钠(Sodium pyruvate，Sigma，S8636)，用1N NaOH将溶液pH调至7.4±0.05；细胞培养板换液，弃掉40μL/well原培养基，加入160μL/well实验培养液稀释，然后吸出160μL/well，重复2-3次，最终每孔体积为175μL，37℃静置1h；探针板加药25μL/well，A孔加入2μM寡霉素(Oligomycin，abcam，ab141829)，B孔加入1μM羰基-氰-对-三氟甲氧基苯肼(FCCP，Sigma，C2920)，C孔加入1μM的Antimycin A(abcam，ab141904)/Rotenone(Sigma，R8875)；探针板上机校正；细胞培养板上机检测。空白对照组是未经过200μmol/L过氧化氢干预的，模型对照组经过200μmol/L过氧化氢干预，然后加入正常完全培养基的，。
本实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的实验方法或条件或者按照试剂盒说明书进行。本实施例中所用的材料、试剂、仪器等均可从商业途径得到。实验结果用均数±标准差(x±SD)表示。运用SPSS软件对数据进行行方差齐性分析，方差齐性采用单因素方差分析(one-way ANOVA)；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，满足正态性或者方差齐性要求后进行统计；若变量转换后仍未达到要求，采用非参数检验进行统计，实验组与对照组两两组间比较采用最小显著差异法(LSD)，以P<0.05为差异显著性标准。
二、实施例1-6实验结果
1.实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体耗氧率的影响
经试验测试，与空白对照组比较，衰老组(模型对照组)细胞耗氧率(OCR)降低，核苷酸配伍组(实施例2)、AMP100及UMP200组细胞线粒体耗氧恢复至正常水平，UMP200组基础呼吸水平显著高于模型对照组(如图1)。
2.实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体基础呼吸的影响
经试验测试，与空白对照组比较，衰老组(模型对照组)细胞基础呼吸水平显著降低(P＜0.05)，核苷酸配伍组(实施例2)、AMP100及UMP200组细胞基础水平恢复至正常水平，UMP200组基础呼吸水平显著高于模型对照组(P＜0.05)(如图2)。图2中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
3.实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体最大呼吸值的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组的H2O2诱导的衰老细胞线粒体最大呼吸值显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，核苷酸配伍组(实施例2)、AMP100及UMP200组细胞线粒体最大呼吸值均显著升高(P＜0.05)(如图3)。图3中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
4.实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体ATP产生能力的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组线粒体ATP产生能力显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，核苷酸配伍组(实施例2)、AMP100及UMP200组细胞线粒体ATP产生能力均显著升高(P＜0.05)(如图4)。图4中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
5.实施例1、实施例2中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体呼吸储备的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组线粒体呼吸储备值显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，核苷酸配伍组(实施例2)、AMP100及UMP200组细胞线粒体呼吸储备值均显著升高(P＜0.05)(如图5)。图5中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
6.实施例3-6中5’-单磷酸核苷酸及其混合物对衰老细胞线粒体最大呼吸值的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组的H2O2诱导的衰老细胞线粒体最大呼吸值显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，实施例3-6中核苷酸配伍组细胞线粒体最大呼吸值均显著升高(P＜0.05)(如图6)。图6中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
三、实验结论
本发明通过设立空白对照组、模型对照组作为对照组，探讨2种5’-单磷酸核苷酸及其混合物的改善线粒体功能作用。细胞实验证实，上述2种5’-单磷酸核苷酸及其混合物均可以显著改善H2O2诱导衰老细胞线粒体基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备，表明其具有显著的改善线粒体功能的作用，具有作为一种新型改善线粒体功能药物、食品的潜力。
实施例8
一、材料与方法
1.样品：上述实施例2中所得核苷酸混合物样品。
2.实验分组与剂量：本实施例中使用实施例2中核苷酸混合物的浓度为200μmol/L，记作核苷酸配伍组；模型对照组为经过过氧化氢干预的衰老细胞模型组，空白对照组为无5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠和核苷酸混合物的未经过过氧化氢干预；单一种类核苷酸分别为5’-单磷酸胞苷、5’-鸟苷酸二钠、5’-肌苷酸二钠，其浓度分别为200μmol/L。
3.实验细胞：实施例中所使用的细胞均为小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3，购自中国科学院细胞库。
4.衰老细胞模型的建立：细胞培养于含1％青霉素/链霉素10％胎牛血清的DMEM高糖培养基中，在5％CO2培养箱37℃饱和湿度条件下培养。衰老细胞模型的建立如下：细胞生长贴壁后，不同浓度的过氧化氢进行干预，浓度分别为50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L，孵育4h后弃掉含有过氧化氢的培养基，加入正常完全培养基(含1％青霉素/链霉素10％胎牛血清的DMEM高糖培养基)孵育24h，使用CCK-8细胞活性试剂盒检测细胞活性，检测β-半乳糖苷酶表达情况，western blot法检测衰老标志物p16INK4A和p21Waf1 /Cip1的表达情况。根据衰老结果选取200μmol/L为最佳浓度进行后续试验。
5.实验方法
本实施例中对线粒体耗氧率(OCR)、基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备均通过Seahorse XFe96(Agilent)线粒体应激检测实验完成。96孔细胞培养板(Nunc，165306)除四个角的背景孔外其余孔每孔接种2万个NIH/3T3细胞，过夜细胞生长贴壁后200μmol/L过氧化氢干预4h，后弃掉含有过氧化氢的培养基，加入正常及含有不同浓度核苷酸的完全培养基(含1％青霉素/链霉素10％胎牛血清的DMEM高糖培养基，及核苷酸混合物的浓度为200μmol/L，浓度分别为200μmol/L的5’-单磷酸胞苷、5’-鸟苷酸二钠、5’-肌苷酸二钠)培养24h；提前一天水化液(XF Calibrant Solution，Agilent，100840-000)水化探针板(XFe96FluxPak，Agilent，102353-100)，放入37℃无CO2培养箱中孵育12h以上；实验当天配制实验培养液，100ml基础培养基(Seahorse XF BaseMedium，Agilent，102353-100)中各加入1ml 2.5mM葡萄糖(Glucose，Sigma，G7528)、2mM谷氨酰胺(L-glutamine，Sigma，G8540)和1mM丙酮酸钠(Sodium pyruvate，Sigma，S8636)，用1N NaOH将溶液pH调至7.4±0.05；细胞培养板换液，弃掉40μL/well原培养基，加入160μL/well实验培养液稀释，然后吸出160μL/well，重复2-3次，最终每孔体积为175μL，37℃静置1h；探针板加药25μL/well，A孔加入2μM寡霉素(Oligomycin，abcam，ab141829)，B孔加入1μM羰基-氰-对-三氟甲氧基苯肼(FCCP，Sigma，C2920)，C孔加入1μM的Antimycin A(abcam，ab141904)/Rotenone(Sigma，R8875)；探针板上机校正；细胞培养板上机检测。空白对照组是未经过200μmol/L过氧化氢干预的，模型对照组经过200μmol/L过氧化氢干预，然后加入正常完全培养基的。
本实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的实验方法或条件或者按照试剂盒说明书进行。本实施例中所用的材料、试剂、仪器等均可从商业途径得到。实验结果用均数±标准差(x±SD)表示。运用SPSS软件对数据进行行方差齐性分析，方差齐性采用单因素方差分析(one-way ANOVA)；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，满足正态性或者方差齐性要求后进行统计；若变量转换后仍未达到要求，采用非参数检验进行统计，实验组与对照组两两组间比较采用最小显著差异法(LSD)，以P<0.05为差异显著性标准。
二、实验结果
1.实施例2中核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体基础呼吸的影响
经试验测试，与空白对照组比较，模型对照组细胞基础呼吸水平显著降低(P＜0.05)；与模型对照组比较，核苷酸配伍组(实施例2)细胞基础水平恢复至正常水平，CMP组、GMP组、IMP组基础呼吸水平有所降低，但明显低于核苷酸配伍组(P＜0.05)(如图5)。图5中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
2.实施例2中核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体最大呼吸值的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组的H2O2诱导的衰老细胞线粒体最大呼吸值显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，CMP组、GMP组、IMP组细胞线粒体最大呼吸值有所升高，但明显低于核苷酸配伍组(实施例2)(P＜0.05)(如图6)。图6中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
3.实施例2中核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体ATP产生能力的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组线粒体ATP产生能力显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，CMP组、GMP组、IMP组细胞线粒体ATP产生能力有所升高，但明显低于核苷酸配伍组(实施例2)(P＜0.05)(如图7)。图7中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
4.实施例2中核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)对衰老细胞线粒体呼吸储备的影响
经试验测试，与空白对照组，模型对照组线粒体呼吸储备值显著下降(P＜0.05)；与模型对照组比较，CMP组、GMP组、IMP组细胞线粒体呼吸储备值有所升高，但明显低于核苷酸配伍组(实施例2)(P＜0.05)(如图8)。图8中，#表示与空白对照组比较差异有显著性；*表示与模型对照组比较差异有显著性。
三、实验结论
本实施例通过设立空白对照组、模型对照组作为对照组，探讨核苷酸混合物与单一种类核苷酸(CMP、GMP、IMP)改善线粒体功能作用。细胞实验证实，核苷酸混合物可以显著改善H2O2诱导衰老细胞线粒体基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备，而单一的CMP、GMP、IMP对H2O2诱导衰老细胞线粒体基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备影响不大，表明5’-单磷酸核苷酸混合物具有显著的改善线粒体功能的作用。
对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (7)

1.5’-单磷酸核苷酸在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用，其特征在于，所述5’-单磷酸核苷酸为5’-单磷酸腺苷或5’-尿苷酸二钠。
2.5’-单磷酸核苷酸混合物在制备改善线粒体功能药物或食品中的应用，其特征在于，所述核苷酸混合物由五种5’单核苷酸或者其钠盐形式组成，各种核苷酸折合成CMP、AMP、UMP、GMP、IMP酸型的质量比分别为：CMP 23-78％、AMP 6-44％、UMP 7-40％、GMP 7-51％、IMP为0、或大于0且不高于2.5％。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，5’-单磷酸腺苷和5’-尿苷酸二钠是以核糖核酸为原料经酶法降解生产，纯度在99％以上。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核苷酸混合物中各核苷酸折合成CMP、AMP、UMP、GMP、IMP酸型的质量比分别为：CMP 25.80％、AMP 22.80％、UMP 20.40％、GMP30.20％、IMP 0.8％。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物为粉剂、片剂、软硬胶囊或口服液。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述食品为粉剂、液体饮料，优选奶粉、奶制品或烘焙制品。
7.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，5’-单磷酸核苷酸及其混合物改善H2O2诱导衰老细胞线粒体基础呼吸、最大呼吸值、ATP产生能力及呼吸储备。
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