CN113368127B - 一种硒多糖及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于肺损伤修复技术领域，提供了一种硒多糖及其制备方法和应用。本发明提供的硒多糖，包括果胶类多糖和负载在所述果胶类多糖上的硒单质。本发明的果胶类多糖具有显著地抗氧化活性，并且能够络合重金属铅；同时果胶类多糖具有较大的比表面积，其表面能够负载的硒单质含量多，硒单质的大量负载，进一步提高了硒多糖的生物活性。实施例的数据表明，本发明提供的硒多糖对铅化合物所致肺损伤的治疗作用；对于硫酸铅造成的大鼠亚急性肺损伤具有显著治疗作用；对于乙酸铅所致的肺泡上皮细胞(ATⅡ)损伤具有显著保护作用。

Description

一种硒多糖及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及肺损伤修复技术领域，尤其涉及一种硒多糖及其制备方法和应用。
背景技术
铅Pb是作为雾霾天气中主要的重金属污染元素，可对人体多个系统造成损伤，主要包括神经系统、心血管系统、生殖系统、呼吸系统等，还具有一定的致癌性。研究表明，雾霾中的铅化合物经呼吸系统导入肺部，可引起肺脏的实质性损伤、氧化损伤以及炎性损伤，并能快速进入血液循环，导致血铅含量上升，并表现出临床性肺慢阻症状。而且，铅造成的肺泡上皮细胞氧化应激损伤，被证实通过其旁观者效应而被放大，造成更严重的肺组织损伤。前期研究发现，铅化合物能够显著增加肺泡上皮细胞内ROS自由基的产生、降低抗氧化关键酶活性、破坏线粒体功能、抑制Caspase级联反应活化，进而导致肺泡上皮细胞死亡。而肺泡上皮细胞死亡被认为是肺组织功能结构损伤的重要原因之一。因此，铅化合物所造成的肺损伤将成为PM2.5健康危害防治的重点研究方向。
近年来研究表明，硒多糖作为一种有机硒化合物，能充分发挥硒和多糖的生理活性，使两者的作用相互协调并增强，使得生物活性普遍高于多糖和硒的单独作用。同时，硒多糖能有效提高硒的生物可利用度及其作为生物必需微量元素的生理功能，使其毒性和副作用较无机硒大大降低。由于硒多糖在植物及微生物中含量较低且结构复杂，从天然产物中不足以得到大量的硒化多糖以满足制药行业的需要。因此，利用分子结构修饰技术对活性多糖进行硒化修饰，获得更佳活性和安全性的硒化多糖，已成为活性多糖增效研究的热点方向。
但是现有技术中通过分子结构修饰技术获得的硒化多糖的生物活性有待进一步提高。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种硒多糖及其制备方法和应用。本发明提供的硒多糖有很好的生物活性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种硒多糖，包括果胶类多糖和负载在所述果胶类多糖上的硒单质。
优选地，1g硒多糖中，所述硒单质的负载量为30～100mg。
优选地，所述果胶类多糖的总糖质量百分含量为90～100％，半乳糖醛酸质量百分含量为90～100％，蛋白质质量百分含量为0～1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→。
本发明还提供了上述技术方案所述的硒多糖的制备方法，包括以下步骤：
将果胶类多糖、二氧化硒粉末、还原剂和水混合，进行还原反应，得到所述硒多糖。
优选地，所述果胶类多糖和二氧化硒粉末的用量比为(0.1～1)g：(0.0005～0.01)mol。
优选地，所述还原剂为维生素C；所述二氧化硒粉末和维生素C的摩尔比为(0.5～10)：(1～50)。
优选地，所述还原反应的温度为18～25℃。
优选地，所述还原反应后，还包括将所得还原反应料液依次进行透析和浓缩，将所得浓缩液进行冷冻干燥，得到所述硒多糖。
优选地，所述透析的透析袋的截留分子量为500～10000Da。
本发明还提供了上述技术方案所述的硒多糖或上述技术方案所述的制备方法得到的硒多糖在制备治疗铅引起的肺病的药物中的应用。
本发明提供了一种硒多糖，包括果胶类多糖和负载在所述果胶类多糖上的硒单质。相比可溶性淀粉等其他类型多糖，本发明的果胶类多糖具有的抗氧化活性更加显著，并且络合重金属铅的能力更强；同时果胶类多糖具有较大的比表面积，其表面能够负载的硒单质含量多，硒单质的大量负载，进一步提高了硒多糖的生物活性。而硒的抗氧化性是它最基础、最重要的生物学功能，此外还可以与其他的一些重金属元素有拮抗作用，能够预防人体重金属元素中毒。因此，单质硒能够通过增强果胶类多糖的抗氧化活性和重金属络合作用等途径，增强其对环境重金属铅所造成的肺损伤的治疗作用。实施例的数据表明，本发明提供的硒多糖对铅化合物所致肺损伤的治疗作用；对于硫酸铅造成的大鼠亚急性肺损伤具有显著治疗作用；对于乙酸铅所致的肺泡上皮细胞(ATⅡ)损伤具有显著保护作用。
本发明还提供了上述技术方案所述的硒多糖的制备方法，将果胶类多糖、二氧化硒粉末、还原剂和水混合，进行还原反应，得到所述硒多糖。本发明的制备方法简单、易操作。
本发明还提供了上述技术方案所述的硒多糖或上述技术方案所述的制备方法得到的硒多糖在制备治疗铅引起的肺病的药物中的应用。由于本发明提供的硒多糖对铅化合物所致肺损伤的治疗作用；对于硫酸铅造成的大鼠亚急性肺损伤具有显著治疗作用；对于乙酸铅所致的肺泡上皮细胞(ATⅡ)损伤具有显著保护作用；因此其能够用于制备治疗铅引起的肺病的药物。
具体实施方式
本发明提供了一种硒多糖，包括果胶类多糖和负载在所述果胶类多糖上的硒单质。
在本发明中，1g硒多糖中，所述硒单质的负载量优选为30～100mg。
在本发明中，所述果胶类多糖的总糖质量百分含量优选为90～100％，半乳糖醛酸质量百分含量优选为90～100％，蛋白质质量百分含量优选为0～1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→。
在本发明中，所述果胶类多糖优选通过以下步骤制备得到：
(1)将植物果实加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，该提取液经离心去除沉淀，收集上清液A；所述上清液A在60～80℃的条件下浓缩至原体积的20～40％后，得到浓缩液，该浓缩液用其质量3～4倍且体积浓度为95～100％的乙醇沉淀得到多糖沉淀；所述多糖沉淀经冷冻干燥得果实多糖；
(2)将所述果实多糖按其质量的10～20倍加水复溶，经离心去除沉淀，得到上清液B，该上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用2～3倍柱体积的蒸馏水和0.5mol/LNaCl水溶液洗脱，并根据糖含量分布曲线收集0.5mol/LNaCl水溶液的洗脱液A；所述洗脱液A依次经透析除盐、冷冻干燥，得到果实酸性多糖；
(3)将所述果实酸性多糖按其质量的5～10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化，并根据糖含量分布曲线收集4.4～180.7kDa分子量范围的洗脱液B；所述洗脱液B依次经透析除盐、冷冻干燥，得到所述果胶类多糖。
在本发明中，步骤(1)中，所述果实优选为成熟果实；所述微波-超声波协同提取条件是指料液质量比为1：15～25，微波功率为340～400W，超声波功率为800～860W，提取总时间为20～32min，温度为90～100℃；所述离心的条件优选为离心转速为4000～10000rpm，离心时间为10～60min；所述冷冻干燥优选为真空度10～100Pa、温度为-55℃～-70℃的条件下冷冻干燥24～72h。
在本发明中，步骤(2)中，所述离心的操作优选与步骤(1)一致，在此不再赘述；所述透析除盐条件优选是指透析袋截留分子量500～3500Da，蒸馏水中透析24～48h；所述DEAE-纤维素层析柱层析的条件优选是指色谱柱直径10～30cm、长度50～100cm，流动相依次为蒸馏水和0.5mol/LNaCl，流速为20～40cm/h；所述冷冻干燥的参数优选与步骤(1)一致，在此不再赘述。
在本发明中，步骤(3)中，所述透析除盐条件优选均是指透析袋截留分子量500～3500Da，蒸馏水中透析24～48h；所述SepharoseCL-6B层析柱纯化条件优选是指色谱柱直径1～5cm、长度80～120cm，流动相为0.05～0.5mol/LNaCl水溶液，流速为10～20cm/h。
本发明还提供了上述技术方案所述的硒多糖的制备方法，包括以下步骤：
将果胶类多糖、二氧化硒粉末、还原剂和水混合，进行还原反应，得到所述硒多糖。
在本发明中，如无特殊说明，本发明所用原料均优选为市售产品。
在本发明中，所述果胶类多糖和水优选以果胶类多糖溶液的形式使用，所述果胶类多糖溶液中果胶类多糖和水的用量比优选为1g：(10～1)L。在本发明中，所述水优选为去离子水。在本发明中，所述果胶类多糖溶液优选通过以下步骤制备得到：
将果胶类多糖和水混合，得到果胶类多糖溶液。在本发明中，所述混合优选在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速优选为200～500rpm，时间优选为5～30min。
在本发明中，所述还原剂优选为维生素C。
在本发明中，所述果胶类多糖和二氧化硒粉末的用量比优选为(0.1～1)g：(0.0005～0.01)mol，进一步优选为1g：0.01mol。在本发明中，所述二氧化硒粉末和维生素C的摩尔比优选为(0.5～10)：(1～50)，进一步优选为1：5。
在本发明中，所述果胶类多糖、二氧化硒粉末、还原剂和水混合的顺序优选包括：将果胶类多糖和水混合，得到果胶类多糖溶液；将所述果胶类多糖溶液依次和二氧化硒粉末和还原剂混合。在本发明中，所述混合优选在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速100～1000rpm。
在本发明中，所述还原反应的温度优选为18～25℃，本发明对所述还原反应的时间不做具体限定，只要还原反应体系中出现的红色不再加深，即可停止还原反应。在本发明中，所述还原反应优选在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速优选为100～1000rpm。
所述还原反应后，本发明优选还包括将所得还原反应料液依次进行透析和浓缩，将所得浓缩液进行冷冻干燥，得到所述硒多糖。
在本发明中，所述透析的渗透袋的截留分子量优选为500～10000Da；所述渗透的渗透袋的材质优选为再生纤维素或纤维素酯。
在本发明中，所述透析包括依次进行流水透析和蒸馏水透析；所述流水透析的时间优选为12～48h；所述蒸馏水透析的时间优选为12～24h。在本发明中，所述透析能够除去未反应的还原剂、亚硒酸盐等小分子副产物。
本发明对所述浓缩的参数不做具体限定，只要使所得浓缩液的体积优选为初始溶液体积的1/5～1/10即可。
在本发明中，所述冷冻干燥的参数优选包括：冷阱温度＜-60℃，真空度<15Pa；时间优选为24～72h。在本发明中，所述冷冻干燥优选在北京博医康实验仪器有限公司的FD-1型真空冷冻干燥机上进行。
本发明中，将二氧化硒粉末首先与果胶类多糖溶液混合，使二氧化硒粉末充分分散在果胶类多糖的体系中，再利用还原剂对二氧化硒粉末进行还原，将二氧化硒转化为硒单质负载在果胶类多糖一级结构表面和高级结构内部。
本发明还提供了上述技术方案所述的硒多糖或上述技术方案所述的制备方法得到的硒多糖在制备治疗铅引起的肺病的药物中的应用。
由于本发明提供的硒多糖对铅化合物所致肺损伤的治疗作用；对于硫酸铅造成的大鼠亚急性肺损伤具有显著治疗作用；对于乙酸铅所致的肺泡上皮细胞(ATⅡ)损伤具有显著保护作用；因此其能够用于制备治疗铅引起的肺病的药物。
下面结合实施例对本发明提供的一种硒多糖及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)果胶类多糖(来源：沙棘果实，实验室自制：总糖质量百分含量92.3％，半乳糖醛酸质量百分含量含量90.5％，蛋白质质量百分含量0.2％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→)，按照料液比1：10(g/L)，加入去离子水，于200rpm搅拌5min，得到果胶类多糖溶液。
(2)向所述果胶类多糖溶液中加入SeO2粉末，边加边搅拌(100rpm)，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到0.5mM。
(3)向溶液中加入维生素C粉末，边加边搅拌(100rpm)，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到1mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌。
(4)还原反应液装入透析袋(材质再生纤维素膜，截留分子量为500Da)，流水透析12h，随后蒸馏水透析24h；
(5)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/5，冷冻干燥(冷阱温度-62℃，真空度10.3Pa，北京博医康实验仪器有限公司，FD-1型真空冷冻干燥机)得到硒多糖。
所述果胶类多糖的制备方法：
(1)将沙棘果加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，该提取液经离心去除沉淀，收集上清液A；所述上清液A在温度为60℃的条件下浓缩至原体积的20％后，得到浓缩液，该浓缩液用其质量4倍且体积浓度为100％的乙醇沉淀得到多糖沉淀；所述多糖沉淀经冷冻干燥得沙棘多糖；
(2)将所述沙棘多糖按其质量的20倍加水复溶，经离心去除沉淀，得到上清液B，该上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用3倍柱体积的蒸馏水和0.5mol/LNaCl水溶液洗脱，并根据糖含量分布曲线收集0.5mol/LNaCl水溶液的洗脱液A；所述洗脱液A依次经透析除盐、冷冻干燥，得到沙棘酸性多糖；
(3)将所述沙棘酸性多糖按其质量的5～10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化，并根据糖含量分布曲线收集4.4～180.7kDa分子量范围的洗脱液B；所述洗脱液B依次经透析除盐、冷冻干燥，即得沙棘HG果胶型膳食纤维。
所述步骤(1)中的沙棘果是指沙棘的成熟果实。
所述步骤(1)中的微波-超声波协同提取条件是指料液质量比为1：15，微波功率为340W，超声波功率为800W，提取总时间为25min，温度为90℃。
所述步骤(1)和所述步骤(2)中的离心条件均是指离心转速为10000rpm，离心时间为10min。
所述步骤(1)和所述步骤(2)及所述步骤(3)中的冷冻干燥条件均是指真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h。
所述步骤(2)的DEAE-纤维素层析柱层析的条件是指色谱柱直径10cm、长度50cm，流动相依次为蒸馏水和0.5mol/LNaCl，流速为20cm/h。
所述步骤(2)和所述步骤(3)中的透析除盐条件均是指透析袋截留分子量3500Da，蒸馏水中透析48h。
所述步骤(3)中的SepharoseCL-6B层析柱纯化条件是指色谱柱直径1cm、长度80cm，流动相为0.05mol/LNaCl水溶液，流速为10cm/h。
采用苯酚-硫酸方法测试所得硒多糖的总糖质量百分含量，采用间羟基联苯法方法测试所得硒多糖的半乳糖醛酸质量百分含量，采用考马斯亮蓝方法测试所得硒多糖的蛋白质质量百分含量，采用红外光谱法和核磁共振波谱法方法测试所得硒多糖的糖残基的构型和糖苷键的形式。
实施例2
(1)果胶类多糖(来源：苹果，实验室自制：总糖质量百分含量97.5％，半乳糖醛酸质量百分含量95.3％，蛋白质质量百分含量0.1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→)，按照料液比1：1(g/L)，加入去离子水，搅拌(500rpm)30min，得到果胶类多糖溶液。
(2)向果胶类多糖水溶液中加入SeO2粉末，边加边搅拌(1000rpm)，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到10mM。
(3)向溶液中加入维生素C粉末，边加边搅拌(1000rpm)，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到50mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌。
(4)反应溶液装入透析袋(材质为纤维素酯膜，截留分子量为10000Da)，流水透析48h，随后蒸馏水透析24h。
(5)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/10，冷冻干燥(冷阱温度-73.5℃，真空度5.5Pa，北京博医康实验仪器有限公司，FD-1型真空冷冻干燥机)得到硒多糖。
所述果胶类多糖的制备与实施例1相同，只是将沙棘果实替换为苹果。
实施例3
(1)果胶类多糖(来源：柑橘，实验室自制：总糖质量百分含量95.7％，半乳糖醛酸质量百分含量大于93.8％，蛋白质质量百分含量0.1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→)，按照料液比1：5(g/L)，加入去离子水，搅拌(300rpm)15分钟，得到果胶类多糖溶液。
(2)向果胶类多糖水溶液中加入SeO2粉末，边加边搅拌(500rpm)，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到5mM。
(3)向溶液中加入维生素C粉末，边加边搅拌(500rpm)，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到25mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌。
(4)反应溶液装入透析袋(材质为再生纤维素膜，截留分子量为3500Da)，流水透析24h，随后蒸馏水透析18h；
(5)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/8，冷冻干燥(冷阱温度-69.5℃，真空度3.2Pa，北京博医康实验仪器有限公司，FD-1型真空冷冻干燥机)得到硒多糖。
所述果胶类多糖的制备与实施例1相同，只是将沙棘果实替换为柑橘。
实施例4
(1)果胶类多糖(来源：枸杞子，实验室自制：总糖质量百分含量93.7％，半乳糖醛酸质量百分含量92.1％，蛋白质质量百分含量0.1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→)，按照料液比1：8(g/L)，加入去离子水，搅拌(230rpm)17min，得到果胶类多糖溶液。
(2)向果胶类多糖水溶液中加入SeO2粉末，边加边搅拌(400rpm)，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到4mM。
(3)向溶液中加入维生素C粉末，边加边搅拌(200rpm)，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到20mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌。
(4)反应溶液装入透析袋(材质为纤维素酯膜，截留分子量为5000Da)，流水透析26h，随后蒸馏水透析17h。
(5)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/6，冷冻干燥(冷阱温度-82℃，真空度3Pa，北京博医康实验仪器有限公司，FD-1型真空冷冻干燥机)得到硒多糖。
所述果胶类多糖的制备与实施例1相同，只是将沙棘果实替换为枸杞子。
实施例5
(1)果胶类多糖(来源：白刺果实，实验室自制：总糖质量百分含量99.2％，半乳糖醛酸质量百分含量97.5％，蛋白质质量百分含量0.02％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→)，按照料液比1：2(g/L)，加入去离子水，搅拌(400rpm)28min，得到果胶类多糖溶液。
(2)向果胶类多糖水溶液中加入SeO2粉末，边加边搅拌(900rpm)，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到8mM。
(3)向溶液中加入维生素C粉末，边加边搅拌(820rpm)，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到45mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌。
(4)反应溶液装入透析袋(材质为再生纤维素膜，截留分子量为1000Da)，流水透析44h，随后蒸馏水透析23h。
(5)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/9，冷冻干燥(冷阱温度-65.5℃，真空度14.7Pa，北京博医康实验仪器有限公司，FD-1型真空冷冻干燥机)得到硒多糖。
所述果胶类多糖的制备与实施例1相同，只是将沙棘果实替换为白刺果实。
对比例1
与实施例1类似，区别为将果胶类多糖替换为可溶性淀粉。
采用原子荧光光谱法测定实施例1～5及对比例1所得硒多糖的硒含量，结果如表1所示。
采用激光纳米粒度仪测定实施例1～5及对比例1所得硒多糖的粒径，结果如表1所示。
采用激光衍射法测定实施例1～5及对比例1所得硒多糖的多分散指数，结果如表1所示。
表1实施例1～5及对比例1所得硒多糖的硒含量等测试结果
Figure BDA0003159925900000101
从表1可以看出：采用淀粉制备单质硒多糖复合物，与果胶类多糖相比，其硒含量更低，平均粒径更大，多分散指数更大，说明与果胶类多糖相比，淀粉不利于单质硒的分散，单质硒以可溶性淀粉为软模板，更容易聚集成大颗粒，不利于多糖纳米硒复合物的制备。
硒多糖对乙酸铅造成的肺泡Ⅱ型上皮细胞A549损伤具有显著的保护作用的研究
将实施例1～5及对比例1所得硒多糖或其对应的未修改的果胶类多糖和乙酸铅加入细胞培养基中使二者终浓度分别为0.1～5000ng/mL和0.4mM，在37℃、5％CO2浓度条件下共同孵育A549细胞24h，计算硒多糖对乙酸铅诱导的A549细胞损伤保护作用EC50，对乙酸铅诱导的A549细胞损伤的细胞毒作用IC50，结果如表2所示。
表2硒多糖与其对应的未修饰果胶类多糖对乙酸铅造成的肺泡Ⅱ型上皮细胞A549损伤的保护作用测试结果
Figure BDA0003159925900000111
从表2可以看出：硒化果胶多糖与其对应的未修饰果胶类多糖对乙酸铅造成的肺泡Ⅱ型上皮细胞A549损伤的保护作用均显著优于可溶性淀粉及其硒化修饰产物。
硒多糖对硫酸铅诱导的大鼠亚急性肺损伤具有显著的治疗作用的研究
大鼠非暴露性气管滴注0.5mg/kg.bw硫酸铅，连续染毒3次，每次间隔24h后，口服灌胃给予50mg/kg.bw实施例1～5及对比例1所得硒多糖或硒多糖对应的未修饰果胶类多糖，连续给药7天。与不给与硒多糖的大鼠亚急性肺损伤模型对照组相比，结果如表3～5所示。
表3硒多糖与其对应的未修饰果胶类多糖对硫酸铅诱导的大鼠亚急性肺损模型的肺功能的影响
Figure BDA0003159925900000112
Figure BDA0003159925900000121
表4硒多糖与其对应的未修饰果胶类多糖对硫酸铅诱导的大鼠亚急性肺损模型的支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量的影响
Figure BDA0003159925900000122
表5硒多糖与其对应的未修饰果胶类多糖对硫酸铅诱导的大鼠亚急性肺损模型的支气管肺泡灌洗液(BALF)中乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)、丙二醛(MDA)含量的影响
Figure BDA0003159925900000123
Figure BDA0003159925900000131
从表3～5可以看出：硒化果胶多糖与其对应的未修饰果胶类多糖对乙酸铅诱导的大鼠亚急性肺损伤的治疗作用均优于可溶性淀粉及其硒化修饰产物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种硒多糖，其特征在于，包括果胶类多糖和负载在所述果胶类多糖上的硒单质；
所述的硒多糖按照以下步骤制备得到：
(1)将苹果的成熟果实加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，所述提取液经10000rpm离心10min去除沉淀，收集上清液A；所述上清液A在温度为60℃的条件下浓缩至原体积的20％后，得到浓缩液，所述浓缩液用其质量4倍且体积浓度为100％的乙醇沉淀得到多糖沉淀；所述多糖沉淀在真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h，得苹果多糖；其中，微波-超声波协同提取条件是指料液质量比为1：15，微波功率为340W，超声波功率为800W，提取总时间为25min，温度为90℃；
(2)将所述苹果多糖按其质量的20倍加水复溶，经10000rpm离心10min去除沉淀，得到上清液B，所述上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用3倍柱体积的蒸馏水和0.5mol/LNaCl水溶液洗脱，并根据糖含量分布曲线收集0.5mol/LNaCl水溶液的洗脱液A；所述洗脱液A经截留分子量为3500Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，然后在真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h，得到苹果酸性多糖；其中，DEAE-纤维素层析柱层析的条件是指色谱柱直径10cm、长度50cm，流动相依次为蒸馏水和0.5mol/LNaCl，流速为20cm/h；
(3)将所述苹果酸性多糖按其质量的5～10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化，并根据糖含量分布曲线收集4.4～180.7kDa分子量范围的洗脱液B；所述洗脱液B经截留分子量为3500Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，然后在真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h，得到苹果HG果胶型膳食纤维；其中，SepharoseCL-6B层析柱纯化条件是指色谱柱直径1cm、长度80cm，流动相为0.05mol/LNaCl水溶液，流速为10cm/h；所述苹果HG果胶型膳食纤维的总糖质量百分含量97.5％，半乳糖醛酸质量百分含量95.3％，蛋白质质量百分含量0.1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→；
(4)按照料液比1g：1L，向所述苹果HG果胶型膳食纤维中加入去离子水，500rpm条件下搅拌30min，得到果胶类多糖溶液；
(5)向果胶类多糖水溶液中加入SeO2粉末，边加边在1000rpm条件下搅拌，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到10mM；
(6)向溶液中加入维生素C粉末，边加边在1000rpm条件下搅拌，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到50mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌；
(7)反应溶液装入材质为纤维素酯膜、截留分子量为10000Da的透析袋，流水透析48h，随后蒸馏水透析24h；
(8)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/10，在真空度5.5Pa、冷阱温度-73.5℃条件下冷冻干燥，得到硒多糖。
2.权利要求1所述的硒多糖的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：
(1)将苹果的成熟果实加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，所述提取液经10000rpm离心10min去除沉淀，收集上清液A；所述上清液A在温度为60℃的条件下浓缩至原体积的20％后，得到浓缩液，所述浓缩液用其质量4倍且体积浓度为100％的乙醇沉淀得到多糖沉淀；所述多糖沉淀在真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h，得苹果多糖；其中，微波-超声波协同提取条件是指料液质量比为1：15，微波功率为340W，超声波功率为800W，提取总时间为25min，温度为90℃；
(2)将所述苹果多糖按其质量的20倍加水复溶，经10000rpm离心10min去除沉淀，得到上清液B，所述上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用3倍柱体积的蒸馏水和0.5mol/LNaCl水溶液洗脱，并根据糖含量分布曲线收集0.5mol/LNaCl水溶液的洗脱液A；所述洗脱液A经截留分子量为3500Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，然后在真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h，得到苹果酸性多糖；其中，DEAE-纤维素层析柱层析的条件是指色谱柱直径10cm、长度50cm，流动相依次为蒸馏水和0.5mol/LNaCl，流速为20cm/h；
(3)将所述苹果酸性多糖按其质量的5～10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化，并根据糖含量分布曲线收集4.4～180.7kDa分子量范围的洗脱液B；所述洗脱液B经截留分子量为3500Da的透析袋在蒸馏水中透析48h，然后在真空度10Pa、温度为-70℃的条件下冷冻干燥72h，得到苹果HG果胶型膳食纤维；其中，SepharoseCL-6B层析柱纯化条件是指色谱柱直径1cm、长度80cm，流动相为0.05mol/LNaCl水溶液，流速为10cm/h；所述苹果HG果胶型膳食纤维的总糖质量百分含量97.5％，半乳糖醛酸质量百分含量95.3％，蛋白质质量百分含量0.1％，糖残基的构型和糖苷键主要为→1)-β-D-GalpA-(4→；
(4)按照料液比1g：1L，向所述苹果HG果胶型膳食纤维中加入去离子水，500rpm条件下搅拌30min，得到果胶类多糖溶液；
(5)向果胶类多糖水溶液中加入SeO2粉末，边加边在1000rpm条件下搅拌，室温充分溶解，使溶液中SeO2浓度达到10mM；
(6)向溶液中加入维生素C粉末，边加边在1000rpm条件下搅拌，室温充分溶解，使溶液中维生素C浓度达到50mM，待反应溶液中出现的红色不再加深，停止搅拌；
(7)反应溶液装入材质为纤维素酯膜、截留分子量为10000Da的透析袋，流水透析48h，随后蒸馏水透析24h；
(8)透析袋内溶液浓缩至原体积的1/10，在真空度5.5Pa、冷阱温度-73.5℃条件下冷冻干燥，得到硒多糖。
3.权利要求1所述的硒多糖或权利要求2所述的制备方法得到的硒多糖在制备治疗铅引起的肺病的药物中的应用。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117430728B (zh) * 2023-12-20 2024-03-22 青岛海大生物集团股份有限公司 一种高纯度硒化浒苔多糖的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102643361A (zh) * 2012-04-25 2012-08-22 山西大学 纳米硒小分子微生物多糖及其制备方法和应用
CN106084080A (zh) * 2016-06-01 2016-11-09 石河子大学 一种甘草硒多糖及其制备方法
CN107586347A (zh) * 2017-09-27 2018-01-16 西北师范大学 一种以酸性离子液体为催化剂合成圆头蒿多糖衍生物的方法
CN108477618A (zh) * 2018-02-05 2018-09-04 江苏大学 一种果胶纳米硒的可控制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102895258A (zh) * 2011-07-25 2013-01-30 香港理工大学 具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶及其制备方法
CN104987433B (zh) * 2015-07-23 2017-04-12 中国科学院西北高原生物研究所 一种具有抗衰老活性的rg‑i型枸杞果胶的制备方法
KR20180058251A (ko) * 2016-11-23 2018-06-01 충남태안영농조합법인 굼벵이를 이용한 체내 미네랄 균형 유지, 중금속의 생체 내 흡수 방지 및 체외 배출을 위한 기능성 식품 조성물
CN109136412B (zh) * 2018-09-07 2021-09-17 海南古遵科技有限公司 一种富硒红糖的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102643361A (zh) * 2012-04-25 2012-08-22 山西大学 纳米硒小分子微生物多糖及其制备方法和应用
CN106084080A (zh) * 2016-06-01 2016-11-09 石河子大学 一种甘草硒多糖及其制备方法
CN107586347A (zh) * 2017-09-27 2018-01-16 西北师范大学 一种以酸性离子液体为催化剂合成圆头蒿多糖衍生物的方法
CN108477618A (zh) * 2018-02-05 2018-09-04 江苏大学 一种果胶纳米硒的可控制备方法

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