CN113281513A - 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 - Google Patents
一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113281513A CN113281513A CN202110533200.3A CN202110533200A CN113281513A CN 113281513 A CN113281513 A CN 113281513A CN 202110533200 A CN202110533200 A CN 202110533200A CN 113281513 A CN113281513 A CN 113281513A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mmp
- reagent
- latex
- kit
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract 21
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 title claims abstract 21
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 title claims abstract 21
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims abstract description 56
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims abstract description 56
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 39
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 26
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 6
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 claims description 5
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 5
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 claims description 4
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 abstract description 2
- 102000000422 Matrix Metalloproteinase 3 Human genes 0.000 description 29
- 108010016160 Matrix Metalloproteinase 3 Proteins 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 17
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 17
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 12
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 8
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 8
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 208000024519 eye neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96486—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- G01N2333/96491—Metalloendopeptidases (3.4.24) with definite EC number
- G01N2333/96494—Matrix metalloproteases, e. g. 3.4.24.7
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
- G01N2800/102—Arthritis; Rheumatoid arthritis, i.e. inflammation of peripheral joints
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于生物领域,尤其涉及一种MMP‑3试剂盒及其制备方法和应用。所述MMP‑3试剂盒包括试剂R1和试剂R2;所述试剂R2中的抗人MMP‑3抗体胶乳颗粒制备方法包括:S1:活化胶乳微球颗粒;S2:加入抗人MMP‑3抗体使其与活化后的胶乳颗粒结合;S3:将已经结合了抗体的胶乳颗粒进行封闭,得到胶乳体系;S4:使用切向流系统将所述胶乳体系进行换液;S5:使用均质机对换液后产生聚集的胶乳颗粒进行分散。本发明专利提供了一种切向流过滤+均质机分散的制备方式,用于替代离心机和超声仪,可节省操作时间以及设备成本。
Description
技术领域
本发明属于生物领域,尤其涉及一种MMP-3试剂盒及其制备方法和应用。
技术背景
基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3),是基质金属蛋白酶家族的一员。综合近年来关于MMP-3的文献及相关研究,发现MMP-3是优于各项传统指标,针对类风湿关节炎(RA)的早期诊断、病情活动监测、药物指导及预后方面存在着巨大的潜在价值,且血清MMP-3易于检测,无疑会在减轻患者负担的同时,也是帮助临床医生调整治疗决策的有力工具,应将其纳入类风湿关节炎(RA)人群的日常评估、监测和治疗中。此外,MMP-3属于基质溶解酶中的一种,能够降解多种基质成分,与肿瘤浸润与转移密切相关,不少研究发现MMP-3与神经胶质瘤、眼部肿瘤、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、肝癌等十几种肿瘤有着密切的关系,监测血清MMP-3有望成为肿瘤早期诊断和监测复发的有效手段。
现有的MMP-3体外诊断试剂盒制备方法多为胶乳增强免疫比浊法,这种方法在操作时都会用到离心设备与超声设备,但是离心设备与超声设备的运用需要大量的时间与人力成本,,因此不利于工业化的应用。
发明内容
为了解决上述现有的技术问题,本发明专利提供了一种切向流过滤+均质机分散的制备方式,用于替代离心机和超声仪,可节省操作时间以及设备成本。
具体的,本发明的技术方案如下:
本发明第一个方面公开了一种MMP-3试剂盒,所述MMP-3试剂盒包括试剂R1和试剂R2;所述试剂R2中的抗人MMP-3抗体胶乳颗粒制备方法包括:
S1:活化胶乳微球颗粒;
S2:加入抗人MMP-3抗体使其与活化后的胶乳颗粒结合;
S3:将已经结合了抗体的胶乳颗粒进行封闭,得到胶乳体系;
S4:使用切向流系统将所述胶乳体系进行换液;
S5:使用均质机对换液后产生聚集的胶乳颗粒进行分散。
应当理解,本发明的步骤并不限于上述步骤,在步骤S1之前、步骤S1和S2之间、步骤S2和S3之间、步骤S3和S4之间、步骤S4和S5之间,步骤S5之后还可以包括其他额外的步骤,且均在本发明的保护范围之内。
优选的,所述试剂R1包括三羟甲基氨基甲烷、电解质、高分子促聚剂、表面活性剂和保护剂。
所述R2包括缓冲液、电解质、抗人MMP-3抗体胶乳颗粒、保护剂和稳定剂。
优选地,所述试剂R1中的高分子促聚剂为聚乙二醇6000;所述试剂R1中的表面活性剂为吐温-20;所述试剂R1和R2中的电解质均为氯化钠;所述试剂R1和R2中的保护剂均为BSA;所述试剂R2中的稳定剂为甘油。
更优选的,所述试剂R1包括TRIS、氯化钠、BSA、PEG6000、吐温-20和叠氮钠。
更优选的,所述试剂R2包括TRIS、氯化钠、BSA、甘油、抗人MMP-3抗体胶乳颗粒和叠氮钠。
优选地,本发明中使用的胶乳颗粒不含表面活性剂,可不用清洗直接使用,减少了操作工序。
优选地,本发明中使用的抗体为鼠抗人MMP-3抗体,效价高,灵敏度与线性范围更优。
优选的,在S4中,所述切向流系统由中空纤维膜柱、蠕动泵以及称重天平组成,设备之间以软管连接;更优选的,所述中空纤维膜柱的孔径为750kD,材质为mPES,内径纤维为1mm,膜面积为0.51cm²,长度为65cm;
优选地,所用蠕动泵的转速能达到650rpm/min,可为切向流系统提供足够动力。
本发明的一些具体实施例中,使用的切向流采用的是中空纤维膜柱,相对于普通膜包,其膜面积更大,孔径更宽,流速更快不易堵塞。
更优选的,所述称重天平称量误差在0.01g以内;
更优选的,所述软管型号为25#。
优选的,在S5中,所述的均质机为胶乳分散专用均质机,处理量为40L/h,施加的最大工作压力为1000bar。根据不同的胶乳粒径来选择合适的工作压力。
优选的,在S1中,使用EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)活化胶乳微球颗粒;优选的,所述的EDC需要配置成水溶液使用,即配即用。
优选的,在S1中,胶乳微球颗粒的粒径为100-120nm,固含量为5%。
本发明第二个方面公开了一种MMP-3试剂盒的制备方法,所述MMP-3试剂盒包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1的制备方法为:将TRIS、氯化钠、BSA(牛血清白蛋白)、PEG6000、吐温-20和叠氮钠依次加入纯水中,搅拌至完全溶解后,调整pH至7.4;
所述试剂R2的制备方法为:将TRIS、氯化钠、BSA、甘油和叠氮钠加入纯水中至完全溶解后,调整pH至7.4得到R2保存液;接着制备抗人MMP-3抗体胶乳颗粒并换液;用均质机将换液完成的抗人MMP-3抗体胶乳颗粒进行均质,得到试剂R2。
本发明第三个方面公开了上述的试剂盒或上述的方法在医学领域中的应用;优选的,根据上述的试剂盒或上述的方法在类风湿关节炎早期诊断领域中的应用。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明通过胶乳增强免疫比浊法制备得到MMP-3试剂盒,该MMP-3试剂盒具有灵敏度高,线性范围广,重复性好,稳定性优良等优点;使用切向流与均质设备帮助试剂盒的生产,减少了需使用多台离心机的高昂设备成本,降低了需多名操作人员的人力成本。
附图说明
图1为三个实施例与比较例在定标曲线的拟合图。
具体实施方式
下面通过详细的实施例对本申请进行进一步的阐述,应该理解,下述实施例仅是为了用于说明本申请,并不对发明内容进行限定。
实施例中所用仪器、设备、试剂均可通过各种渠道获得,例如购买得到,或可以制备而得。
试剂R1的制备:
TRIS 12g/L;
氯化钠 8.5g/L;
BSA 10g/L;
PEG6000 30g/L;
吐温-20 1g/L;
叠氮钠 1g/L;
根据上述的配方,称取准确的量,依次投入纯化水中,搅拌至完全溶解,然后调整pH=7.4即可。
试剂R2保存液的制备:
TRIS 12g/L;
氯化钠 8.5g/L;
BSA 2g/L;
甘油 0.5g/L;
叠氮钠 0.5g/L;
根据上述的配方,称取准确的量,依次投入纯化水中,搅拌至完全溶解,然后调整pH=7.4即可。
试剂R2胶乳颗粒的制备(1L量):
实施例1-3所使用的的过滤设备参数:
表1
实施例 1
(1)取100ml胶乳与50mM MES(pH=6.0)混匀,使其固含量为1%;
(2)配制5ml 10mg/ml的EDC水溶液,将其投入上述胶乳混合液中,在摇床上(120rpm,26℃)活化15min;
(3)待15min活化时间到后,将抗人MMP-3抗体投入上述混合液中,浓度为0.2g/L,之后在摇床上(120rpm,26℃)偶联2h;
(4)偶联完成后,在上述混合液中加入BSA,使溶液中BSA浓度为1%,在摇床上(120rpm,26℃)封闭1h;
(5)使用表1中的超滤膜包与蠕动泵使用软管连接之后,使用R2保存液对封闭完成的胶乳颗粒进行换液;
(6)使用均质机对换液完成的胶乳颗粒进行均质,工作压力为600bar,粒径分散后的液体即为试剂R2。
实施例 2
(1)取100ml胶乳与50mM MES(pH=6.0)混匀,使其固含量为1%;
(2)配制5ml 10mg/ml的EDC水溶液,将其投入上述胶乳混合液中,在摇床上(120rpm,26℃)活化15min;
(3)待15min活化时间到后,将抗人MMP-3抗体投入上述混合液中,浓度为0.2g/L,之后在摇床上(120rpm,26℃)偶联2h;
(4)偶联完成后,在上述混合液中加入BSA,使溶液中BSA浓度为1%,在摇床上(120rpm,26℃)封闭1h;
(5)使用表1中的中空纤维膜柱与蠕动泵使用软管连接之后,使用R2保存液对封闭完成的胶乳颗粒进行换液;
(6)使用均质机对换液完成的胶乳颗粒进行均质,工作压力为600bar,粒径分散后的液体即为试剂R2。
实施例 3
(1)取100ml胶乳与50mM MES(pH=6.0)混匀,使其固含量为1%;
(2)配制5ml 10mg/ml的EDC水溶液,将其投入上述胶乳混合液中,在摇床上(120rpm,26℃)活化15min;
(3)待15min活化时间到后,将抗人MMP-3抗体投入上述混合液中,浓度为0.2g/L,之后在摇床上(120rpm,26℃)偶联2h;
(4)偶联完成后,在上述混合液中加入BSA,使溶液中BSA浓度为1%,在摇床上(120rpm,26℃)封闭1h;
(5)使用表1中的中空纤维膜柱与蠕动泵使用软管连接之后,使用R2保存液对封闭完成的胶乳颗粒进行换液;
(6)使用均质机对换液完成的胶乳颗粒进行均质,工作压力为600bar,粒径分散后的液体即为试剂R2。
比较例
(1)取100ml胶乳与50mM MES(pH=6.0)混匀,使其固含量为1%;
(2)配制5ml 10mg/ml的EDC水溶液,将其投入上述胶乳混合液中,在摇床上(120rpm,26℃)活化15min;
(3)待15min活化时间到后,将抗人MMP-3抗体投入上述混合液中,浓度为0.2g/L,之后在摇床上(120rpm,26℃)偶联2h;
(4)偶联完成后,在上述混合液中加入BSA,使溶液中BSA浓度为1%,在摇床上(120rpm,26℃)封闭1h;
(5)由于离心机一次处理量有限,将封闭完成的胶乳颗粒分成5批,取其中1批分成六管,两两配平,将其放入超高速冷冻离心机后,设置转速为20000RPM,时间为30min,开始离心;
(6)离心结束后,小心倒掉管内上清液,在管中加入5ml R2保存液,使用移液枪对其进行吹打,最终无明显结块即可结束吹打;
(7)将吹打完成的胶乳颗粒,放在超声波破碎仪下进行超声至粒径不再变化;
(8)将剩下的4批,按照(5)-(7)步骤进行操作,最终超声完全后使用R2保存液稀释即可。
比对测试:
测试仪器:日立7180生化分析仪/UV-2450紫外分光光度计
操作步骤:
(1)使用紫外分光光度计测试三个实施例与比较例的空白吸光度,使用R2保存液调整至大致相同,计算损耗率以及整个R2包被过程所用的时间;
(2)在日立7180生化分析仪上使用MMP-3校准品,定标三个实施例与比较例,查看定标曲线的差异。如表2和表3所示。
表2
/ | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 比较例 |
制备R2耗时 | 5小时 | 4小时30分钟 | 4小时30分钟 | 7小时 |
理论产量 | 1L | 1L | 1L | 1L |
实际产量 | 0.91L | 0.96L | 0.99L | 0.88L |
损耗率 | 9% | 4% | 1% | 12% |
表3
标准浓度ng/ml | 实施例1 ΔA | 实施例2 ΔA | 实施例3 ΔA | 比较例 ΔA |
0 | 223 | 231 | 228 | 242 |
100 | 1654 | 1702 | 1687 | 1774 |
200 | 3312 | 3423 | 3359 | 3523 |
400 | 6542 | 6710 | 6661 | 6931 |
800 | 12470 | 12897 | 12636 | 13125 |
1600 | 18368 | 18637 | 18547 | 18991 |
表3对应的结果如图1所示,从这些数据可知,切向流法相对于离心法,所用时间更短,损耗率更低,试剂性能基本一致。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种MMP-3试剂盒,其特征在于,所述MMP-3试剂盒包括试剂R1和试剂R2;所述试剂R2中的抗人MMP-3抗体胶乳颗粒制备方法包括:
S1:活化胶乳微球颗粒;
S2:加入抗人MMP-3抗体使其与活化后的胶乳颗粒结合;
S3:将已经结合了抗体的胶乳颗粒进行封闭,得到胶乳体系;
S4:使用切向流系统将所述胶乳体系进行换液;
S5:使用均质机对换液后产生聚集的胶乳颗粒进行分散。
2.根据权利要求1所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,所述试剂R1包括三羟甲基氨基甲烷、电解质、高分子促聚剂、表面活性剂和保护剂;
所述R2包括缓冲液、电解质、抗人MMP-3抗体胶乳颗粒、保护剂和稳定剂。
3.根据权利要求2所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,所述试剂R1包括TRIS、氯化钠、BSA、PEG6000、吐温-20和叠氮钠。
4.根据权利要求2所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,所述试剂R2包括TRIS、氯化钠、BSA、甘油、抗人MMP-3抗体胶乳颗粒和叠氮钠。
5.根据权利要求1所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,在S4中,所述切向流系统由中空纤维膜柱、蠕动泵以及称重天平组成,设备之间以软管连接;优选的,所述中空纤维膜柱的孔径为750kD,材质为mPES,内径纤维为1mm,膜面积为0.51cm²,长度为65cm;
优选的,所述称重天平称量误差在0.01g以内;
优选的,所述软管型号为25#。
6.根据权利要求1所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,在S5中,所述的均质机为胶乳分散专用均质机,处理量为40L/h,施加的最大工作压力为1000bar。
7.根据权利要求1所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,在S1中,使用EDC活化胶乳微球颗粒;优选的,所述的EDC需要配置成水溶液使用,即配即用。
8.根据权利要求1所述的MMP-3试剂盒,其特征在于,在S1中,胶乳微球颗粒的粒径为100-120nm,固含量为5%。
9.一种MMP-3试剂盒的制备方法,其特征在于,所述MMP-3试剂盒包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1的制备方法为:将TRIS、氯化钠、BSA、PEG6000、吐温-20和叠氮钠依次加入纯水中,搅拌至完全溶解后,调整pH至7.4;
所述试剂R2的制备方法为:将TRIS、氯化钠、BSA、甘油和叠氮钠加入纯水中至完全溶解后,调整pH至7.4得到R2保存液;接着制备抗人MMP-3抗体胶乳颗粒并换液;用均质机将换液完成的抗人MMP-3抗体胶乳颗粒进行均质,得到试剂R2。
10.根据权利要求1-8所述的试剂盒或权利要求9所述的方法在医学领域中的应用;优选的,根据权利要求1-8所述的试剂盒或权利要求9所述的方法在类风湿关节炎早期诊断领域中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110533200.3A CN113281513B (zh) | 2021-05-17 | 2021-05-17 | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110533200.3A CN113281513B (zh) | 2021-05-17 | 2021-05-17 | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113281513A true CN113281513A (zh) | 2021-08-20 |
CN113281513B CN113281513B (zh) | 2024-05-28 |
Family
ID=77279409
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110533200.3A Active CN113281513B (zh) | 2021-05-17 | 2021-05-17 | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113281513B (zh) |
Citations (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10027683A1 (de) * | 2000-05-22 | 2001-11-29 | Rudolf Ehwald | Verfahren zur Bestimmung von Analyten mit Hilfe eines Affinitätssensors |
JP2003026807A (ja) * | 2001-07-16 | 2003-01-29 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ポリオルガノシロキサンラテックスの製造方法 |
CN1481272A (zh) * | 2001-10-04 | 2004-03-10 | ������������ʽ���� | 中空纤维膜及其制造方法 |
JP2006071297A (ja) * | 2004-08-31 | 2006-03-16 | Denka Seiken Co Ltd | 抗原の測定方法及びそのための試薬 |
WO2008103276A2 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-28 | Merck & Co., Inc. | Compositions and methods for potentiated activity of biologicaly active molecules |
WO2009072441A1 (ja) * | 2007-12-05 | 2009-06-11 | Konica Minolta Medical & Graphic, Inc. | 検出方法および検出キット |
US20090281211A1 (en) * | 2006-12-21 | 2009-11-12 | Kraton Polymers U.S. Llc | Process for the preparation of an artificial latex |
CN102585001A (zh) * | 2005-12-12 | 2012-07-18 | 拜尔健康护理有限责任公司 | 抗mn抗体和使用它们的方法 |
CN102621296A (zh) * | 2012-01-06 | 2012-08-01 | 天津医科大学 | 一种带有间隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶联蛋白质的方法 |
CN102998468A (zh) * | 2012-09-20 | 2013-03-27 | 武汉华美生物工程有限公司 | 25-羟基维生素d3检测试剂盒及其制备方法和应用 |
JP2014015411A (ja) * | 2012-07-06 | 2014-01-30 | Asahi Kasei Medical Co Ltd | タンパク質の製造方法 |
CN104792982A (zh) * | 2015-03-10 | 2015-07-22 | 山东盛百灵医药科技有限公司 | 一种阿司匹林耐药性监测试剂 |
CN105974105A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-09-28 | 河北艾驰生物科技有限公司 | 基质金属蛋白酶-3(mmp3)检测试剂盒 |
CN106932589A (zh) * | 2015-12-30 | 2017-07-07 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 测定人体血清视黄醇结合蛋白含量的试剂盒及其制备方法 |
CN106950382A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-07-14 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 基质金属蛋白酶‑3测定试剂及其制备方法 |
CN108663516A (zh) * | 2018-03-22 | 2018-10-16 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 一种致敏胶乳的制备方法及试剂盒 |
CN109085333A (zh) * | 2018-08-22 | 2018-12-25 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种类风湿因子抗原的制备、检测试剂盒及制备方法 |
CN109738626A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 上海复星长征医学科学有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
WO2019140318A1 (en) * | 2018-01-11 | 2019-07-18 | N-Fold Llc | Nanoparticle systems |
CN110824160A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-21 | 迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司 | 抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒及其制备方法 |
CN111320696A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-23 | 上海捷门生物技术有限公司 | 基于链霉亲和素化胶乳的mmp-3抗体复合物及其试剂盒 |
CN111458497A (zh) * | 2020-03-23 | 2020-07-28 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种偶联抗体乳胶的分散方法及免疫比浊试剂盒 |
CN111521822A (zh) * | 2020-05-14 | 2020-08-11 | 武汉市长立生物技术有限责任公司 | 一种用于检测血清中胱抑素c含量的试剂盒及其制备方法 |
CN111796089A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-10-20 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 一种基于辐射技术制备的试剂及其制备方法 |
CN111812336A (zh) * | 2020-08-10 | 2020-10-23 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 用于检测冠状病毒抗体的检测试剂盒及其制备方法 |
CN111856009A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定mmp-3的试剂盒及其制备使用方法 |
CN111999489A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-11-27 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 用于连续生产胶乳免疫比浊法的过滤分散设备和方法 |
CN111999506A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-11-27 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种d-二聚体检测试剂盒及其制备方法 |
CN112098647A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-12-18 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定ck-mb的试剂盒及其制备使用方法 |
-
2021
- 2021-05-17 CN CN202110533200.3A patent/CN113281513B/zh active Active
Patent Citations (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10027683A1 (de) * | 2000-05-22 | 2001-11-29 | Rudolf Ehwald | Verfahren zur Bestimmung von Analyten mit Hilfe eines Affinitätssensors |
JP2003026807A (ja) * | 2001-07-16 | 2003-01-29 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ポリオルガノシロキサンラテックスの製造方法 |
CN1481272A (zh) * | 2001-10-04 | 2004-03-10 | ������������ʽ���� | 中空纤维膜及其制造方法 |
JP2006071297A (ja) * | 2004-08-31 | 2006-03-16 | Denka Seiken Co Ltd | 抗原の測定方法及びそのための試薬 |
CN102585001A (zh) * | 2005-12-12 | 2012-07-18 | 拜尔健康护理有限责任公司 | 抗mn抗体和使用它们的方法 |
US20090281211A1 (en) * | 2006-12-21 | 2009-11-12 | Kraton Polymers U.S. Llc | Process for the preparation of an artificial latex |
WO2008103276A2 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-28 | Merck & Co., Inc. | Compositions and methods for potentiated activity of biologicaly active molecules |
WO2009072441A1 (ja) * | 2007-12-05 | 2009-06-11 | Konica Minolta Medical & Graphic, Inc. | 検出方法および検出キット |
CN102621296A (zh) * | 2012-01-06 | 2012-08-01 | 天津医科大学 | 一种带有间隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶联蛋白质的方法 |
JP2014015411A (ja) * | 2012-07-06 | 2014-01-30 | Asahi Kasei Medical Co Ltd | タンパク質の製造方法 |
CN102998468A (zh) * | 2012-09-20 | 2013-03-27 | 武汉华美生物工程有限公司 | 25-羟基维生素d3检测试剂盒及其制备方法和应用 |
CN104792982A (zh) * | 2015-03-10 | 2015-07-22 | 山东盛百灵医药科技有限公司 | 一种阿司匹林耐药性监测试剂 |
CN106932589A (zh) * | 2015-12-30 | 2017-07-07 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 测定人体血清视黄醇结合蛋白含量的试剂盒及其制备方法 |
CN105974105A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-09-28 | 河北艾驰生物科技有限公司 | 基质金属蛋白酶-3(mmp3)检测试剂盒 |
CN106950382A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-07-14 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 基质金属蛋白酶‑3测定试剂及其制备方法 |
WO2019140318A1 (en) * | 2018-01-11 | 2019-07-18 | N-Fold Llc | Nanoparticle systems |
CN108663516A (zh) * | 2018-03-22 | 2018-10-16 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 一种致敏胶乳的制备方法及试剂盒 |
CN109085333A (zh) * | 2018-08-22 | 2018-12-25 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种类风湿因子抗原的制备、检测试剂盒及制备方法 |
CN109738626A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 上海复星长征医学科学有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
CN110824160A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-21 | 迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司 | 抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒及其制备方法 |
CN111320696A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-23 | 上海捷门生物技术有限公司 | 基于链霉亲和素化胶乳的mmp-3抗体复合物及其试剂盒 |
CN111856009A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定mmp-3的试剂盒及其制备使用方法 |
CN112098647A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-12-18 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定ck-mb的试剂盒及其制备使用方法 |
CN111458497A (zh) * | 2020-03-23 | 2020-07-28 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种偶联抗体乳胶的分散方法及免疫比浊试剂盒 |
CN111521822A (zh) * | 2020-05-14 | 2020-08-11 | 武汉市长立生物技术有限责任公司 | 一种用于检测血清中胱抑素c含量的试剂盒及其制备方法 |
CN111796089A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-10-20 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 一种基于辐射技术制备的试剂及其制备方法 |
CN111812336A (zh) * | 2020-08-10 | 2020-10-23 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 用于检测冠状病毒抗体的检测试剂盒及其制备方法 |
CN111999506A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-11-27 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种d-二聚体检测试剂盒及其制备方法 |
CN111999489A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-11-27 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 用于连续生产胶乳免疫比浊法的过滤分散设备和方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
J Z XU 等: "A new method, distribution-analyzing latex immunoassay (DALIA), to measure specific immunoglobulin G against mite and wheat allergen in human sera", ALLERGY, vol. 49, no. 5, 31 May 1994 (1994-05-31), XP008061692 * |
S ARUMUGAM 等: "Global orientation of bound MMP-3 and N-TIMP-1 in solution via residual dipolar couplings", BIOCHEMISTRY, vol. 42, no. 26, 8 July 2003 (2003-07-08) * |
康波 等: "微射流均质制备乳铁蛋白纳米乳液的研究", 食品工业科技, no. 008, 31 December 2009 (2009-12-31) * |
靳颖 等: "β2微球蛋白胶乳增强免疫比浊试剂制备的影响因素", 武警后勤学院学报(医学版), no. 01, 15 January 2018 (2018-01-15) * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113281513B (zh) | 2024-05-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP4092417A1 (en) | Lectin-macromolecule carrier coupling complex for separating glycosylated exosome in clinical sample | |
CN109738626B (zh) | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 | |
CN107356744B (zh) | 一种循环肿瘤细胞分选和/或富集的方法及其试剂盒 | |
US20220372173A1 (en) | Lectin-magnetic carrier coupling complex for separating glycosylated exosomes from clinical sample | |
Grigor’Eva et al. | Exosomes in tears of healthy individuals: Isolation, identification, and characterization | |
Fang et al. | A magnetic bead-mediated selective adsorption strategy for extracellular vesicle separation and purification | |
CN110255573A (zh) | 一种二氧化硅纳米微球的制备方法及应用方法 | |
CN102068965A (zh) | 一种适于蛋白纯化的壳聚糖分离介质的制备方法 | |
CN112745837A (zh) | 碳量子点及其应用 | |
CN111135308A (zh) | 一种聚多巴胺包裹介孔二氧化硅/榄香烯复合纳米粒制剂的制备方法及应用 | |
CN113281513A (zh) | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN104906565A (zh) | 一种胰酶肠溶微丸及其制备方法 | |
CN111413176A (zh) | 一种尿液有形成分分析用红细胞和白细胞质控物质及其制备方法 | |
CN104263717B (zh) | β‑葡萄糖苷酶磁性分子印迹材料及其在知母皂苷BII转化中的应用 | |
CN112285341A (zh) | 一种α2-巨球蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
CN105744996A (zh) | 发酵饮料的稳定 | |
CN110339373A (zh) | 一种纳米复合胶束及其制备方法和应用 | |
CN112980006A (zh) | 蛋白交联纳米亲和微球及制备方法和应用 | |
CN109206538A (zh) | 一种环氧氨基层析介质及其制备方法 | |
CN111912977A (zh) | 一种光敏检测系统及其制作方法和应用 | |
CN112014383A (zh) | 一种用于均相化学发光的光敏剂及其制备方法和应用 | |
CN110763840A (zh) | 纤溶酶原激活物抑制剂的检测试剂盒及制备方法 | |
CN115501379B (zh) | 一种具有抑制肿瘤血管生成和抑制肿瘤转移功能的血管栓塞微球的制备方法及其应用 | |
CN109750025A (zh) | 一种水凝胶包覆树枝状二氧化硅固定化cpo酶反应器及其制备方法和应用 | |
CN114558529B (zh) | 一种内毒素胶乳微球及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |