CN111856009A - 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定mmp-3的试剂盒及其制备使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP‑3的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2;反应缓冲液R1包括缓冲液、无机盐、增浊剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂;胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP‑3与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种组成液之间的混合比例为1:1;此外,每种胶乳试剂组成液还分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中的胶乳微球,胶乳保存液包括缓冲液、无机盐、稳定剂、防腐剂、表面活性剂。本发明还提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP‑3的试剂盒的制备使用方法。本发明试剂盒线性范围可达到1600ng/mL,并且具有很好的灵敏度、特异性及准确度,具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测试剂制备领域,尤其涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒及其制备使用方法。
背景技术
基质金属蛋白酶3(MMP-3)是由关节滑膜细胞、纤维母细胞、巨噬细胞等产生的一种蛋白质分解酶。MMP-3因可分解蛋白多糖、各种胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白而被认为与关节破坏有着密切的关系。在风湿性关节炎患者的滑膜组织中发现MMP-3过剩表达,患者血液中的浓度可反映其风湿性关节炎的活动性。
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性、多关节炎症为主要表现的慢性、全身性自身免疫性疾病。RA的靶器官主要是关节滑膜,病理改变是慢性滑膜炎,出现滑膜炎症、增厚、血管翳形成、软骨及软骨下骨质破坏,终导致关节畸形及强直而致残。其中,软骨和骨的进行性、不可逆性破坏是一个不可忽视的特点,造成RA关节破坏的发病机制目前尚未完全阐明。新近研究表明,基质金属蛋白酶3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)的高表达及在滑膜、软骨和软骨下骨的细胞外间质的降解中均发挥着重要作用。
2000年左右,国际医学界研究发现,RA增生的滑膜细胞及软骨细胞在多种细胞因子激活下分泌产生的基质降解酶(如基质金属蛋白酶、组织蛋白酶)是软骨降解、破坏的重要原因之一。MMP-3是RA早期疾病活动的一个重要预测因子,是导致软骨降解的最重要的蛋白酶,是系统性的炎症标志物,可作为类风湿关节炎患者滑膜损害和预后的指标。
首先实现MMP-3浓度测定的是酶联免疫法,将具有免疫活性的MMP-3单抗结合到固相载体表面,利用具有抗体免疫活性、同时也具有酶活性的酶标抗体,与结合在固相载体表面的MMP-3单抗结合,加底物后,酶标抗体的酶催化底物成为有色产物,结合在固相载体上的酶量与标本中MMP-3的量成一定的比例,产物的量与标本中MMP-3的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅对 MMP-3进行定量。但该法对仪器条件要求高,常规应用有困难,也不适用自动化检测。基于分光光度计检测的生化试剂盒的研发也受到各国体外诊断试剂企业关注。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法,其基本原理是:样本加入到试剂中以后,其中的MMP-3和试剂中包被了抗人MMP-3抗体的胶乳颗粒发生抗原-抗体的特异性结合反应,产生浑浊现象,其浊度与样本中MMP-3浓度成正比。使用光学方法测定浊度,便可计算出样本中MMP-3浓度。然而,目前的基于免疫比浊法的的MMP-3测定试剂盒在线性范围、灵敏度、特异性与准确度上仍表现出了一定的不足,不能完全满足临床需求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种线性范围宽、灵敏度特异性好、准确度高的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒及其制备使用方法。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题:
一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,包括反应缓冲液R1 和胶乳试剂R2;
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:缓冲液5-10g/L,无机盐6-17 g/L,增浊剂10-30g/L,防腐剂1-3mL/L,稳定剂20-35g/L,表面活性剂0.5-2.5 mL/L,溶剂为纯化水;
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.8-2.0mg/mL的相应MMP-3单抗标记的胶乳微球;所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为:缓冲液2-10g/L,无机盐5-15g/L,稳定剂10-40g/L,防腐剂1-3mL/L,表面活性剂1-3mL/L,溶剂为纯化水;其中,在所述胶乳试剂R2中,每种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
作为本发明的优选方式之一,在所述反应缓冲液R1中:
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇 8000中的一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种;
所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种或多种;
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。
作为本发明的优选方式之一,所述反应缓冲液R1的pH为7.1-7.6。
作为本发明的优选方式之一,在所述胶乳保存液中:
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中的一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种或多种;
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。
作为本发明的优选方式之一,所述胶乳保存液的pH为6.5-8.0。
作为本发明的优选方式之一,所述MMP-3单抗标记的胶乳微球中使用的胶乳微球粒径范围为100-300nm。
作为本发明的优选方式之一,所述胶乳试剂R2的制备方法为:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种MMP-3单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各MMP-3单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
(1)配制反应缓冲液R1:
按照反应缓冲液R1的组分含量,将各组分物质于同一容器中混合,混合均匀后,制得反应缓冲液R1;
(2)配制胶乳试剂R2:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种MMP-3单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各MMP-3单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
作为本发明的优选方式之一,在所述步骤①中,所述清洗缓冲液与活化缓冲液采用MES缓冲液;所述偶联缓冲液采用磷酸盐缓冲液;所述活化剂采用 EDAC/NHS;在所述步骤③中,所述封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种,封闭时间1h。
一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的使用方法,包括如下具体步骤:
(1)吸取3μL样本,加入150μL试剂R1,37℃孵育3-5min;
(2)加入50μL试剂R2,置37℃孵育;
(3)孵育60s后读取吸光值A1;再孵育5min,读取吸光值A2;最后,计算ΔA,△A=A2-A1,根据ΔA测算样本中MMP-3含量。
作为本发明的优选方式之一,本发明中采用的各种MMP-3单抗抗体均来源于本领域可直接购买得到的常规MMP-3单抗抗体。
本发明采用上述试剂盒用于检测人血清中MMP-3的含量,其反应原理如下:
样本中的MMP-3蛋白与试剂中特异性的胶乳MMP-3蛋白抗体结合,形成抗原抗体复合物而产生浊度,其浊度高低与标本中MMP-3蛋白成正比。通过测定特定波长下的吸光度值,参照校准曲线即可计算出标本中MMP-3蛋白的含量。
本发明相比现有技术的优点在于:
(1)本发明试剂盒利用胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3,不仅操作简单、检测速度快,而且选择性好、特异性佳、准确度高、重复性与一致性好;
(2)本发明可在全自动生化分析仪上使用,成本低廉,且自动化高,可节省检测时间,便于临床应用;
(3)通过本发明方法制备出的试剂盒,可以同时提高检测的灵敏度和特异性,使得试剂盒的线性范围更宽(线性范围可达到1600ng/mL),准确度更高,更好满足临床的需求;
(4)在胶乳增强免疫比浊法应用中,若采用多抗进行标记可以有效提高试剂灵敏度,但会造成特异性不强,使检测结果准确度下降;若采用一株单抗对胶乳进行标记,可以使特异性提高,但灵敏度又会受到影响;针对上述问题,本发明试剂盒中,选择采用至少两株特异性较强的MMP-3单抗对胶乳进行分别标记,然后混合在一起,可以在保持灵敏度情况下,特异性也较强。
附图说明
图1是实施例6中MMP-3的试剂盒的拟合曲线图。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明,本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2。
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:甘氨酸缓冲液5g/L,氯化钠或氯化镁6g/L,聚乙二醇1000 10g/L,Proclin300 1mL/L,BSA 20g/L,吐温-80 0.5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.1。
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.8mg/mL的相应MMP-3单抗标记的胶乳微球。其中,胶乳保存液包括的成分及相应含量为:三羟甲基氨基甲烷缓冲液2g/L,氯化镁或氯化钾5g/L,BSA10g/L,Proclin300 1mL/L,吐温-80 1mL/L,溶剂为纯化水,pH 6.5。
进一步地,在胶乳试剂R2中,每种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
进一步地,在胶乳试剂R2中,使用的胶乳微球粒径范围为100nm。
实施例2
本实施例的一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2。
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液或3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液10g/L,氯化锌或氯化钙17g/L,聚乙二醇 2000或聚乙二醇6000 30g/L,硫柳汞3mL/L,蔗糖35g/L,曲拉通X-100 2.5 mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.6。
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为2.0mg/mL的相应MMP-3单抗标记的胶乳微球。其中,胶乳保存液包括的成分及相应含量为:甘氨酸缓冲液或3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液10g/L,氯化锌或氯化钙15g/L,甘露醇40g/L,硫柳汞3mL/L,曲拉通X-100 3mL/L,溶剂为纯化水,pH 8.0。
进一步地,在胶乳试剂R2中,每种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
进一步地,在胶乳试剂R2中,使用的胶乳微球粒径范围为300nm。
实施例3
本实施例的一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2。
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:三羟甲基氨基甲烷缓冲液 8.76g/L,氯化钾11.3g/L,聚乙二醇8000 25g/L,Proclin300 1.4mL/L,蔗糖26 g/L,吐温-201.5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.4。
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为1.4mg/mL的相应MMP-3单抗标记的胶乳微球。其中,胶乳保存液包括的成分及相应含量为:2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液5.6g/L,氯化钠8.7g/L,BSA15g/L,蔗糖16g/L,Proclin3001.4mL/L,吐温-20 1.5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.5。
进一步地,在胶乳试剂R2中,每种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
进一步地,在胶乳试剂R2中,使用的胶乳微球粒径范围为200nm。
实施例4
本实施例的一种上述实施例1-3中基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
(1)配制反应缓冲液R1:
按照反应缓冲液R1的组分含量,将各组分物质于同一容器中混合,混合均匀后,制得反应缓冲液R1。
(2)配制胶乳试剂R2:
清洗:取固含量为10%的胶乳微粒0.5mL,并加至3.0mL的清洗缓冲液中; 20000r/min下离心30min,去上清;用3.0mL活化缓冲液对胶乳微粒沉淀物重悬超声。该步骤中,清洗缓冲液和活化缓冲液采用MES缓冲液。
活化:量取一定量的活化剂加入到上述清洗好的胶乳微粒中,混匀,对胶乳微粒进行活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球。该步骤中,偶联缓冲液采用磷酸盐缓冲液;活化剂采用2%EDAC 0.1mL与4%NHS 0.2mL,活化时间0.5h;相应胶乳微粒与活化剂的比例为1: (10-20)(重量比),优选为1:15。
偶联:取至少两株经筛选好的特异性强的MMP-3单抗各自与活化好的胶乳微粒进行偶联,制取偶联后的胶乳微球。该步骤中,活化好的胶乳微粒与各 MMP-3单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),优选为1:5.5,偶联时间为2h。
封闭:偶联时间结束后开始离心,20000r/min下离心30min,去上清;取 5.0mL的封闭缓冲液对胶乳微粒沉淀物重悬超声,然后进行封闭,时间为1h。该步骤中,封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种,优选为1%Gly。
定溶:封闭结束后开始离心,20000r/min下离心30min,去上清;加入40 mL的胶乳保存液对胶乳微粒进行重悬超声,然后定溶,制取各自的胶乳试剂组成液;最后,将制取的各胶乳试剂组成液按照1:1比例混合,即得所需的胶乳试剂R2。
实施例5
本实施例的一种上述实施例1-3中基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的使用方法。
检测仪器:日立7180;
温度:37℃;
比色杯:1cm;
分析方法:两点终点法;
测光点:19-34;
主副波长:570/800;
样本量/R1/R2:3uL/150uL/50uL;
反应方向:(+)。
使用步骤:参见表1。
表1本发明试剂盒的使用步骤
校准方式为样条函数Spline。采用多点校准模式,用纯化水为零点,建立工作曲线。
计算方法:以校准品浓度对相应△A拟合校准曲线,样本浓度值通过校准曲线得出。
实施例6
本实施例用以评价上述实施例1-3中基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3 的试剂盒:
(1)线性相关性验证
线性相关系数:在[10.0ng/mL-1600.0ng/mL]范围内用接近线性区间下限的低值标本稀释接近线性区间上限的高值标本,混合成至少5个不同浓度(Xi) 的标本,每个标本重复测定3次,分别计算测定结果的均值(yi),见表2。以稀释浓度(Xi)为自变量,以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。按公式(1)计算线性回归的相关系数r,所得结果应满足线性相关系数r≥0.9900。
表2本发明试剂盒的线性相关性比对值
图1是本发明试剂盒的拟合曲线图,如图1所示,本试剂盒的直线拟合曲线为:y=0.99175x+2.0608,R2=1.0,R2>0.99,满足临床要求。
(2)精密度、重复性验证
重复性:在重复条件下,取(50.0±10.0)ng/mL和(300.0±60.0)ng/mL浓度的样本(质控品、校准品或其他定值样本),用同一批号试剂重复测定10次,分别计算测定值的平均值和标准差,按公式(2)计算批内变异系数(CV),所得结果CV应≤8.0%。
xn为同水平各次所测值;
结果如表3所示:
表3本发明试剂盒的重复性检测结果总结表
由检测结果可以看出,低值样本的CV为4.8%,高值样本的CV为1.0%,均小于8%,满足临床要求。
(3)准确度验证
取高、低两个水平的质控品,按照说明书操作步骤进行测定,用同一批号试剂重复测定3次,测试结果记为(xi),按公式(3)求出相对偏差(Bi),3次结果均应符合测定值与质控品靶值相对偏差≤15.0%;如果3次结果中有2次符合要求,1次不符合要求,应重新连续测试20次,并分别按照公式(3)计算相对偏差(Bi),当大于等于19次结果符合要求,准确度被验证,即符合测定值与质控品靶值相对偏差≤15.0%的要求。
式中:xi为测定结果;
T为靶值。
结果如表4所示。
表4本发明试剂盒的准确度检测结果总结表
从检测结果可以看出,低值质控的相对偏差为2.2%,高值质控的相对偏差为1.2%,均小于15%,故满足临床要求。
综上所述,本发明提供一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒及其制备方法,能有效的提升MMP-3检测试剂的灵敏度与特异性。本发明采用了创新的用至少两珠特异性强的单抗通过标记胶乳微粒偶联然后混合在一起的技术来制备检测MMP-3的试剂盒,实现了上全自动生化仪,自动检测,并有效提高试剂的灵敏度与特异性,具有极高的应用价值与广阔的市场前景。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2;
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:缓冲液5-10g/L,无机盐6-17g/L,增浊剂10-30g/L,防腐剂1-3mL/L,稳定剂20-35g/L,表面活性剂0.5-2.5mL/L,溶剂为纯化水;
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.8-2.0mg/mL的相应MMP-3单抗标记的胶乳微球;所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为:缓冲液2-10g/L,无机盐5-15g/L,稳定剂10-40g/L,防腐剂1-3mL/L,表面活性剂1-3mL/L,溶剂为纯化水;其中,在所述胶乳试剂R2中,每种通过MMP-3单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
2.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,在所述反应缓冲液R1中:
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种;
所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种或多种;
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液R1的pH为7.1-7.6。
4.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,在所述胶乳保存液中:
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中的一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种或多种;
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,所述胶乳保存液的pH为6.5-8.0。
6.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,所述MMP-3单抗标记的胶乳微球中使用的胶乳微球粒径范围为100-300nm。
7.根据权利要求1-6任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒,其特征在于,所述胶乳试剂R2的制备方法为:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种MMP-3单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各MMP-3单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
8.一种如权利要求1-7任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)配制反应缓冲液R1:
按照反应缓冲液R1的组分含量,将各组分物质于同一容器中混合,混合均匀后,制得反应缓冲液R1;
(2)配制胶乳试剂R2:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种MMP-3单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各MMP-3单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
9.根据权利要求8所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的制备方法,其特征在于,在所述步骤①中,所述清洗缓冲液与活化缓冲液采用MES缓冲液;所述偶联缓冲液采用磷酸盐缓冲液;所述活化剂采用EDAC/NHS;在所述步骤③中,所述封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种,封闭时间1h。
10.一种如权利要求1-7任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒的使用方法,其特征在于,包括如下具体步骤:
(1)吸取3μL样本,加入150μL试剂R1,37℃孵育3-5min;
(2)加入50μL试剂R2,置37℃孵育;
(3)孵育60s后读取吸光值A1;再孵育5min,读取吸光值A2;最后,计算ΔA,△A=A2-A1,根据ΔA测算样本中MMP-3含量。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112595853A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-04-02 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于重组单克隆抗体制备的il-6免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
CN113281513A (zh) * | 2021-05-17 | 2021-08-20 | 上海执诚生物科技有限公司 | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 |
CN113433317A (zh) * | 2021-06-23 | 2021-09-24 | 湖北民族大学附属民大医院 | 一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒及其制备方法 |
CN116773826A (zh) * | 2023-08-21 | 2023-09-19 | 迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司 | 一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030119073A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-06-26 | Stephen Quirk | Sensors and methods of detection for proteinase enzymes |
CN103874925A (zh) * | 2011-11-22 | 2014-06-18 | 株式会社博米乐 | 根据乳胶凝集法检测基质金属蛋白酶-3的方法 |
CN106872685A (zh) * | 2017-03-31 | 2017-06-20 | 上海华臣生物试剂有限公司 | Mmp3试剂盒的制备方法 |
CN106950382A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-07-14 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 基质金属蛋白酶‑3测定试剂及其制备方法 |
FI20165730A (fi) * | 2016-09-29 | 2018-03-30 | Oy Medix Biochemica Ab | Sydän- ja verisuonitauteihin liittyvien riskien arviointimenetelmä |
-
2020
- 2020-02-28 CN CN202010128346.5A patent/CN111856009A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030119073A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-06-26 | Stephen Quirk | Sensors and methods of detection for proteinase enzymes |
CN103874925A (zh) * | 2011-11-22 | 2014-06-18 | 株式会社博米乐 | 根据乳胶凝集法检测基质金属蛋白酶-3的方法 |
FI20165730A (fi) * | 2016-09-29 | 2018-03-30 | Oy Medix Biochemica Ab | Sydän- ja verisuonitauteihin liittyvien riskien arviointimenetelmä |
CN106950382A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-07-14 | 苏州普瑞斯生物科技有限公司 | 基质金属蛋白酶‑3测定试剂及其制备方法 |
CN106872685A (zh) * | 2017-03-31 | 2017-06-20 | 上海华臣生物试剂有限公司 | Mmp3试剂盒的制备方法 |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112595853A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-04-02 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于重组单克隆抗体制备的il-6免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
CN113281513A (zh) * | 2021-05-17 | 2021-08-20 | 上海执诚生物科技有限公司 | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 |
CN113281513B (zh) * | 2021-05-17 | 2024-05-28 | 上海执诚生物科技有限公司 | 一种mmp-3试剂盒及其制备方法和应用 |
CN113433317A (zh) * | 2021-06-23 | 2021-09-24 | 湖北民族大学附属民大医院 | 一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒及其制备方法 |
CN113433317B (zh) * | 2021-06-23 | 2024-02-02 | 湖北民族大学附属民大医院 | 一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒及其制备方法 |
CN116773826A (zh) * | 2023-08-21 | 2023-09-19 | 迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司 | 一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒 |
CN116773826B (zh) * | 2023-08-21 | 2023-11-17 | 迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司 | 一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒 |
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