CN116773826A - 一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒 - Google Patents
一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒。该胶乳比浊生化试剂盒包括R1试剂、R2试剂和标准品，R2试剂包括胶乳微球‑蛋白酶3偶联物，胶乳微球‑蛋白酶3偶联物由第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3与胶乳微球混合孵育得到，第一生物素为能够与蛋白酶3的伯胺基相连的生物素，第二生物素为能够与蛋白酶3的羧基相连的生物素，第三生物素为能够与蛋白酶3的巯基相连的生物素。本发明试剂盒稳定性好、灵敏度和准确度高，操作简单，测试时间短，应用场景广。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断生化检测技术领域，具体涉及一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒。
背景技术
自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是由机体自身产生的抗体或致敏淋巴细胞破坏、损伤自身的组织和细胞成分导致组织损害和器官功能障碍的原发性免疫性疾病，是目前世界上主要的致残性疾病之一。自身免疫性疾病发病率高，发病率为全球总人口的3％-5％。
自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中包括抗核抗体、抗心磷脂抗体、中性粒细胞胞浆抗体、抗线粒体抗体、抗红细胞抗体、抗血小板抗体、抗内皮细胞抗体、抗神经原抗体、类风湿因子、抗甲状腺球蛋白抗体、抗胰岛素受体抗体等。正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体而不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。
自身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）识别的靶抗原主要见于中性粒细胞和单核细胞胞浆颗粒内。ANCA包括cANCA（胞浆型）和pANCA（核周型）。其中胞浆型ANCA（cANCA）的主要靶抗原是蛋白酶3（PR3），抗PR3抗体主要见于韦格纳肉芽肿（WG，阳性率占80%），抗PR3抗体在临床上主要用于WG血管炎等抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）相关性血管炎的辅助诊断。
抗蛋白酶3抗体目前在临床及实验室的测定方法主要是酶联免疫法（ELISA）和间接免疫荧光法。ELISA检测抗PR3抗体，方便易行，特异性高，但检测范围和灵敏度都较低，检测所需时间较长，试剂多，操作繁琐，存在交叉污染影响检测结果以及试剂混用造成结果判读无效等问题。间接免疫荧光法灵敏度较高，但难以区分非特异性识别，易出现假阳性，操作难度相对更高，需要价格较昂贵的荧光显微镜，并且结果判定需要有经验的专业人员。另外，荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵敏度和准确度高，稳定好的用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒，所述胶乳比浊生化试剂盒包括R1试剂、R2试剂和标准品，所述R2试剂包括胶乳微球-蛋白酶3偶联物，所述胶乳微球-蛋白酶3抗原偶联物由第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3与胶乳微球混合孵育得到，所述第一生物素为能够与蛋白酶3的伯胺基相连的生物素，所述第二生物素为能够与蛋白酶3的羧基相连的生物素，所述第三生物素为能够与蛋白酶3的巯基相连的生物素。
根据一些具体实施方式，所述第一生物素为N-羟基琥珀酰亚胺酯-四聚乙二醇-生物素。
根据一些具体实施方式，所述第二生物素为烷氧基胺-四聚乙二醇-生物素。
根据一些具体实施方式，所述第三生物素为马来酰亚胺-聚乙二醇-生物素。
优选地，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：1。
进一步优选地，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为（0.8~1.2）：（0.8~1.2）：1。
根据一些具体实施方式，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为1：1：1。
优选地，所述R2试剂中的胶乳微球和蛋白酶3的质量比为1：（0.01~0.5），例如1：0.01、1：0.05、1：0.1、1：0.15、1：0.2、1：0.25、1：0.3、1：0.35、1：0.4、1：0.45、1：0.5。
优选地，所述R2试剂还包括保存缓冲液，所述保存缓冲液为含有0.1wt%~1wt% 牛血清白蛋白、5g/L~15g/L蔗糖、0.05wt%~0.2wt% ProClin 300的浓度为40mM ~60mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.4~7.8。
进一步优选地，所述R2试剂还包括保存缓冲液，所述保存缓冲液为含有0.4wt%~0.6wt% 牛血清白蛋白、8g/L~12g/L蔗糖、0.08wt%~0.15wt% ProClin 300的浓度为40mM~60mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.4~7.8。
优选地，在所述R2试剂中，所述胶乳微球-蛋白酶3偶联物的浓度为0.1mg/mL~1mg/mL，例如0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL。
优选地，所述胶乳微球为采用链霉亲和素预处理后的胶乳微球。
优选地，预处理前的胶乳微球的平均粒径为50nm~500nm，例如50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、150nm、200nm、250nm、300nm、350nm、400nm、450nm、500nm。
优选地，预处理前的胶乳微球的表面含有羧基基团。
优选地，所述R1试剂为含有400mM~600mM氯化钠、0.1g/L~1g/L吐温-20、0.01g/L~0.05g/L聚氧乙烯月桂醚、5g/L~15g/L聚乙二醇-6000、0.01wt％~0.05wt％叠氮钠的浓度为40mM~60mM的Tris缓冲液，pH值为7.4~7.8。
进一步优选地，所述R1试剂为含有450mM~550mM氯化钠、0.4g/L~0.6g/L吐温-20、0.01g/L~0.05g/L聚氧乙烯月桂醚、8g/L~12g/L聚乙二醇-6000、0.01wt％~0.03wt％叠氮钠的浓度为40mM~60mM的Tris缓冲液，pH值为7.4~7.8。
优选地，所述标准品包括浓度范围为5AU/mL~300AU/mL的抗PR3抗体梯度标准品。
根据一些实施方式，所述R2试剂由如下制备方法制备得到：
（1）采用第一生物素标记蛋白酶3得到第一生物素化蛋白酶3，采用第二生物素标记蛋白酶3得到第二生物素化蛋白酶3，采用第三生物素标记蛋白酶3得到第三生物素化蛋白酶3；
（2）采用链霉亲和素预处理胶乳微球，然后保存在保存缓冲液中得到胶乳微球溶液；
（3）将所述第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3分批加入所述胶乳微球溶液中进行混合孵育。
优选地，步骤（3）中，控制所述孵育的温度为10℃~30℃，例如10℃、15℃、20℃、25℃、30℃。
根据一些实施方式，步骤（3）中，先将所述第一生物素化蛋白酶3与所述胶乳微球溶液混合孵育10min~20min，然后加入所述第二生物素化蛋白酶3混合孵育10~20min，最后加入第三生物素化蛋白酶3混合孵育1~3h。
根据一些实施方式，步骤（3）中，所述孵育在室温下进行。
进一步优选地，胶乳微球的预处理方法为：将经EDC·HCl活化的胶乳微球与链霉亲和素在室温下孵育，然后采用封闭缓冲液在室温下封闭，最后保存于保存缓冲液中，所述封闭缓冲液为含有100mg/L~300mg/L牛血清白蛋白的浓度为5mM~15mM的甘氨酸缓冲液，pH值为7.0~7.5。
再进一步优选地，所述封闭缓冲液为含有150mg/L~250mg/L牛血清白蛋白的浓度为8mM~12mM的甘氨酸缓冲液，pH值为7.0~7.4。
本发明与现有技术相比具有如下优势：
本发明的用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒具有稳定好、灵敏度和准确度高，所需临床样本少，操作简单，测试时间短，对人员技术水平要求低，应用场景广等优点。
具体实施方式
由于间接免疫荧光法试剂成本高，仪器价格高昂且维护费用较高，应用场景受限，而ELISA检测所需仪器成本低，应用场景更广，试剂成本也相对更低，因此更多的还是选择使用ELISA检测抗PR3抗体，但是ELISA检测操作烦琐、检测通量低，定量检测结果准确定不太高。乳胶比浊方法可以快速、低成本检测抗原或抗体的含量，但是目前市面上用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒较少，前期研究发现，采用乳胶比浊法定量检测抗蛋白酶3抗体的灵敏度和准确度不是很高。分析其原因，蛋白酶3与胶乳微球偶联时，大量抗体识别位点被遮蔽，导致灵敏度和准确度较低。
基于上述研究，本发明通过生物素-亲和素将抗原蛋偶联在胶乳微球，相比抗原直接与胶乳微球偶联的方式，可以在一定程度上减少抗原抗体识别、连接的空间位阻，暴露更多识别位点，提高试剂的稳定性及检测的灵敏度。进一步地，通过选择三种不同生物素来偶联抗原上的三种不同基团，然后分批依次与胶乳微球偶联，可以进一步有效避免因生物素连接导致的抗原识别位点封闭而带来的灵敏度降低，提高定量检测结果准确度，从而对临床样本量要求降低。而且胶乳比浊试剂盒的生产周期短，成本低，设备要求不高，易于实现量产化。胶乳比浊试剂盒检测时间短、操作简单、使用便捷、对人员技术水平要求低、应用场景广。
下面结合实施例对本发明作进一步描述。但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
以下实施例和对比例中，室温是指25±5℃。
以下实施例和对比例中，若无特殊说明，所使用的原料、试剂等均为常规市售产品。
以下实施例和对比例中，N-羟基琥珀酰亚胺酯-四聚乙二醇-生物素（NHS-PEG4-Biotin）、烷氧基胺-四聚乙二醇-生物素（烷氧基胺-PEG4-Biotin）、马来酰亚胺-聚乙二醇-生物素（Maleimide-PEG2-Biotin）采购自赛默飞世尔（Thermo Scientific）；1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）采购自西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)；蛋白酶3（PR3）采购自AROTEC，ATP02-10；脱盐柱采购自美国GE，型号17-0851-01；胶乳微球采购自日本JSR，IMMUTEX Carboxy Series（货号P0220），平均粒径约为220nm，表面含有羧基基团。
实施例1
本实施例提供一种用于抗PR3抗体定量检测的胶乳比浊生化试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和标准品，制备方法如下：
R1试剂：
含有500mM氯化钠、0.5g/L吐温-20、0.03g/L聚氧乙烯月桂醚、10g/L聚乙二醇-6000、0.02wt％叠氮钠的浓度为50mM的Tris缓冲液，pH值为7.5。
R2试剂：
胶乳微球预处理：将2mg胶乳微球与200倍胶乳微球体积的活化缓冲液（浓度为10mM的MES缓冲液，pH值为6）混合，然后加入0.05wt% EDC·HCl，室温混匀30分钟后，离心弃掉上清溶液，加入4mL偶联缓冲液（浓度为10mM的PBS缓冲液，pH 值为7.6）重悬，得到活化后的胶乳微球重悬液。将活化后的胶乳微球重悬液与0.05mg 链霉亲和素在室温下混动孵育18小时。孵育结束后离心弃掉上清溶液，加入封闭缓冲液（含有200mg/L牛血清白蛋白的浓度为10mM的甘氨酸缓冲液，pH值为7.2）重悬，室温下混动封闭2小时。封闭结束后离心弃掉上清溶液，加入4mL保存缓冲液（含有0.5wt% 牛血清白蛋白、10g/L蔗糖、0.1wt% ProClin300的浓度为50mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.6），超声打散，获得预处理的胶乳微球溶液。
蛋白酶3预处理：分别使用不同生物素标记PR3，分别得到预处理的生物素化PR3。
第一生物素化蛋白酶3：针对伯胺基，使用NHS-PEG4-Biotin标记PR3。使用pH值为7.2，浓度为10mM的PBS缓冲液将PR3稀释至1mg/mL。使用DMSO将NHS-PEG4-Biotin稀释至50mM。取1mg 稀释后的PR3，加入13.3μL稀释后的NHS-PEG4-Biotin，充分混匀后在混匀仪上滚动孵育1h。孵育完成后使用脱盐柱800×g离心去除未偶联的生物素。
第二生物素化蛋白酶3：针对羧基，使用烷氧基胺-PEG4-Biotin标记PR3。使用 pH值为4.98，浓度为0.1M的MES缓冲液将PR3稀释至1mg/mL。使用DMSO将烷氧基胺-PEG4-Biotin稀释至25mM。使用 pH值为4.98，浓度为0.1M的MES缓冲液将 EDC·HCl稀释至50mg/mL。取1mg稀释后的 PR3，加入10μL稀释后的烷氧基胺-PEG4-Biotin和10μL稀释后的EDC·HCl，充分混匀后在混匀仪上滚动孵育3h。孵育完成后使用脱盐柱800×g离心去除未偶联的生物素。
第三生物素化蛋白酶3：针对巯基，使用Maleimide-PEG2-Biotin标记PR3。使用pH值为7.2，浓度为10mM的PBS缓冲液将PR3稀释至1mg/mL。使用纯水配制100mM TCEP溶液，现配现用。使用TCEP溶液将Maleimide-PEG2-Biotin 稀释至50mM。取1mg稀释后的 PR3，加入13.3μL稀释后的Maleimide-PEG2-Biotin，充分混匀后在混匀仪上滚动孵育2h。孵育完成后使用脱盐柱800×g离心去除未偶联的生物素。
将第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3分别按照胶乳微球和PR3的质量比为1：0.05的比例依次与预处理的胶乳微球溶液（使用前摇匀）进行层层递进孵育。首先将第一生物素化蛋白酶3加入预处理的胶乳微球溶液中，混合孵育15分钟，然后加入第二生物素化蛋白酶3混合孵育15分钟，最后加入第三生物素化蛋白酶3充分混匀后在混匀仪上室温滚动孵育2h，获得R2试剂。
对比例1
本对比例提供另一种用于抗PR3抗体定量检测的胶乳比浊生化试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和标准品，其中R1试剂、标准品同实施例1，R2试剂的制备方法如下：
将2mg胶乳微球与200倍胶乳微球体积的活化缓冲液（浓度为10mM的MES缓冲液，pH值为6）混合，然后加入0.05wt% EDC·HCl，室温混匀30分钟后，离心弃掉上清溶液，加入4mL偶联缓冲液（浓度为10mM的PBS缓冲液，pH 值为7.6）重悬，得到活化后的胶乳微球重悬液。将活化后的胶乳微球重悬液与0.05mg PR3在室温下混动孵育18小时。孵育结束后离心弃掉上清溶液，加入封闭缓冲液（含有200mg/L牛血清白蛋白的浓度为10mM的甘氨酸缓冲液，pH值为7.2）重悬，室温下混动封闭2小时。封闭结束后离心弃掉上清溶液，加入4mL保存缓冲液（含有0.5wt% 牛血清白蛋白、10g/L蔗糖、0.1wt% ProClin 300的浓度为50mM的HEPES缓冲液，pH值为7.6），超声打散，获得R2试剂。
对比例2
本对比例提供另一种用于抗PR3抗体定量检测的胶乳比浊生化试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和标准品，其中R1试剂、标准品同实施例1，R2试剂基本同实施1的R2试剂，区别仅在于只使用NHS-PEG4-Biotin标记的PR3与预处理的胶乳微球按照胶乳微球和PR3的质量比为1:0.05比例混合孵育制备R2试剂。
对比例3
本对比例提供另一种用于抗PR3抗体定量检测的胶乳比浊生化试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和标准品，其中R1试剂、标准品同实施例1，R2试剂基本同实施1的R2试剂，区别仅在于只使用烷氧基胺-PEG4-Biotin标记PR3与预处理的胶乳微球按照胶乳微球和PR3的质量比为1:0.05比例混合孵育制备R2试剂。
对比例4
本对比例提供另一种用于抗PR3抗体定量检测的胶乳比浊生化试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和标准品，其中R1试剂、标准品同实施例1，R2试剂基本同实施1的R2试剂，区别仅在于只使用Maleimide-PEG2-Biotin标记PR3与预处理的胶乳微球按照胶乳微球和PR3的质量比为1:0.05比例混合孵育制备R2试剂。
（1）线性比较：将10AU/mL和300AU/mL的标准品，按照0:10、2:8、4:6、6:4、8:2和10:0的比例混匀，制成线性标准品。分别采用实施例1、对比例1~4的试剂盒测定线性标准品，将5μL待测线性标准品、150μL R1试剂、50μL R2试剂混合，然后采用全自动生化分析仪（HITACHI 7170）读取不同浓度线性标准品的OD值，检测波长为600nm，每个标准品各检测3次，取平均值，以标准品浓度为横坐标，以OD值为纵坐标绘制标准曲线得到线性回归方程及R2值，结果见表1。
表1显示，实施例1的线性R2为0.9998，明显优于对比例1~4。
（2）重复性：按照上述检测方法分别采用实施例1、对比例1~4的试剂盒和全自动生化分析仪检测浓度为150 AU/mL、37.5 AU/mL的抗PR3抗体标准品，将测得的OD值代入各试剂盒对应的线性回归方程，计算实测浓度，每个标准品分别重复检测10次，计算变异系数CV（%），结果如表2所示。
表2显示，实施例1的高浓度标准品和低浓度标准品的CV值分别为0.78%和1.85%，均低于对比例1~4的高浓度标准品和低浓度标准品的CV值，说明实施例1的重复性最好。
（3）分析灵敏度：按照上述检测方法分别采用实施例1、对比例1~4的试剂盒和全自动生化分析仪测试空白样本的吸光度△A0和浓度值约1AU/mL和15AU/mL的标准品吸光度△A1，分别计算出1AU/mL和15AU/mL标准品的吸光度△A1与空白样本的吸光度△A0的差值△A，结果如表3所示。
表3显示，在检测低值样本时，实施例1的吸光度差值△A最大，灵敏度最好，对比例1的吸光度差值△A最小，说明其灵敏度最差。
（4）梯度样本测试：按照上述检测方法分别采用实施例1、对比例1~4的试剂盒和全自动生化分析仪对系列梯度样本（1AU/mL，5AU/mL，10AU/mL，20AU/mL，100AU/mL）进行测试，每个样本各检测3次，取平均值，结果见表4。
表4显示，实施例1的检测结果较对比例1~4的检测结果偏差更小，尤其是低值样本，可见实施例1检测的灵敏度优于对比例2。
（5）稳定性：将各试剂盒置于37℃环境下1天、3天和7天，然后按照上述检测方法分别检测不同浓度的标准品，每个浓度重复测定3次，取平均值。并与4℃保存的试剂盒的检测结果比较，结果见表5。
如表5所示，实施例1的37℃ 7天热稳定性平均为93.1%，对比例1~4的37℃ 7天热稳定性分别为90.7%、93.9%、93.1%、92.9%。在稳定性方面实施例1和对比例1~4没有较大差异。
（6）阴、阳性符合率：针对100份临床血清样本，采用欧蒙抗蛋白酶3(PR3-hn-hr)抗体IgG检测试剂盒(酶联免疫吸附法) 检测出47例阳性样本和53例阴性样本，欧蒙试剂盒检测方法参照其说明书。采用实施例1，对比例1~4的试剂盒分别检测上述阳性样本，统计阳性样本数量，分别计算实施例1，对比例1~4的试剂盒对比欧蒙抗蛋白酶3(PR3-hn-hr)抗体IgG检测试剂盒的阳性符合率；采用实施例1，对比例1~4的试剂盒分别检测上述阴性样本，统计阴性样本数量，分别计算实施例1，对比例1~4的试剂盒对比欧蒙抗蛋白酶3(PR3-hn-hr)抗体IgG检测试剂盒的阴性符合率，结果见表6。
表6显示，实施例1的试剂盒与欧蒙抗蛋白酶3(PR3-hn-hr)抗体IgG检测试剂盒(酶联免疫吸附法)检出的阳性样本符合率为97.9%，阴性样本符合率为100%。对比例1~4的试剂盒与欧蒙抗蛋白酶3(PR3-hn-hr)抗体IgG检测试剂盒检出的阳性样本符合率均明显低于实施例1，对比例1和对比例2的试剂盒与欧蒙抗蛋白酶3(PR3-hn-hr)抗体IgG检测试剂盒检出的阴性样本符合率低于100%。
综上，实施例1相较于对比例1~4能有效提升检测灵敏度和试剂稳定性。实施例1通过生物素-亲和素将抗原偶联到胶乳微球上，可以在一定程度上减少抗原抗体识别、连接的空间位阻，暴露更多抗体识别位点，提高试剂的稳定性及检测的灵敏度；通过将以三种不同生物素来偶联抗原的胶乳微球混合使用，使生物素连接抗原上的三种不同基团，可以有效避免因生物素连接导致的抗原识别位点封闭而带来的灵敏度降低，进一步提升试剂盒的灵敏度。对比例1的PR3直接偶联在胶乳微球上，抗体识别位点相对更少，导致灵敏度下降。对比例2-4通过某一种生物素标记PR3后偶联在胶乳微球上，灵敏度相比对比例1虽有所提高，但还是不及实施例1。
Claims (15)
1.一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述胶乳比浊生化试剂盒包括R1试剂、R2试剂和标准品，所述R2试剂包括胶乳微球-蛋白酶3偶联物，所述胶乳微球-蛋白酶3偶联物由第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3与胶乳微球混合孵育得到，所述第一生物素为能够与蛋白酶3的伯胺基相连的生物素，所述第二生物素为能够与蛋白酶3的羧基相连的生物素，所述第三生物素为能够与蛋白酶3的巯基相连的生物素。
2.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述第一生物素为N-羟基琥珀酰亚胺酯-四聚乙二醇-生物素；和/或，所述第二生物素为烷氧基胺-四聚乙二醇-生物素；和/或，所述第三生物素为马来酰亚胺-聚乙二醇-生物素。
3.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：1。
4.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中的胶乳微球和蛋白酶3的质量比为1：（0.01~0.5）。
5.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述R2试剂还包括保存缓冲液，所述保存缓冲液为含有0.1wt%~1wt% 牛血清白蛋白、5g/L~15g/L蔗糖、0.05wt%~0.2wt% ProClin 300的浓度为40mM ~60mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.4~7.8。
6.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，在所述R2试剂中，所述胶乳微球-蛋白酶3偶联物的浓度为0.1mg/mL~1mg/mL。
7.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球为采用链霉亲和素预处理后的胶乳微球。
8.根据权利要求7所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，预处理前的胶乳微球的平均粒径为50nm~500nm，预处理前的胶乳微球的表面含有羧基基团。
9.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述R1试剂为含有400mM~600mM氯化钠、0.1g/L~1g/L吐温-20、0.01g/L~0.05g/L聚氧乙烯月桂醚、5g/L~15g/L聚乙二醇-6000、0.01wt％~0.05wt％叠氮钠的浓度为40mM~60mM的Tris缓冲液，pH值为7.4~7.8。
10.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述标准品包括浓度范围为5AU/mL~200AU/mL的抗PR3抗体梯度标准品。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述R2试剂由如下制备方法制备得到：
（1）采用第一生物素标记蛋白酶3得到第一生物素化蛋白酶3，采用第二生物素标记蛋白酶3得到第二生物素化蛋白酶3，采用第三生物素标记蛋白酶3得到第三生物素化蛋白酶3；
（2）采用链霉亲和素预处理胶乳微球，然后保存在保存缓冲液中得到胶乳微球溶液；
（3）将所述第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3分批加入所述胶乳微球溶液中进行混合孵育。
12.根据权利要求11所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，步骤（3）中，控制所述孵育的温度为10℃~30℃。
13.根据权利要求11所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，步骤（3）中，先将所述第一生物素化蛋白酶3与所述胶乳微球溶液混合孵育10min~20min，然后加入所述第二生物素化蛋白酶3混合孵育10min~20min，最后加入第三生物素化蛋白酶3混合孵育1h~3h。
14.根据权利要求11所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，步骤（2）中，胶乳微球的预处理方法为：将经EDC·HCl活化的胶乳微球与链霉亲和素在室温下孵育，然后采用封闭缓冲液封闭，最后保存于保存缓冲液中。
15.根据权利要求14所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述封闭缓冲液为含有100mg/L~300mg/L牛血清白蛋白的浓度为5mM~15mM的甘氨酸缓冲液，pH值为7.0~7.5。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015151078A2 (en) * | 2015-06-15 | 2015-10-08 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd | Hydrophilic linkers for conjugation |
| CN108956978A (zh) * | 2018-04-11 | 2018-12-07 | 中翰盛泰生物技术股份有限公司 | 一种应用胶乳免疫比浊法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 |
| CN111320696A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-23 | 上海捷门生物技术有限公司 | 基于链霉亲和素化胶乳的mmp-3抗体复合物及其试剂盒 |
| CN111856009A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定mmp-3的试剂盒及其制备使用方法 |
| JP2021073185A (ja) * | 2015-08-10 | 2021-05-13 | ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用 |
| WO2022078524A2 (en) * | 2021-11-03 | 2022-04-21 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Specific conjugation of an antibody |
| CN115327122A (zh) * | 2022-08-09 | 2022-11-11 | 江西乐成生物医疗有限公司 | 一种基质金属蛋白酶-3检测试剂盒及制备方法 |
-
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- 2023-08-21 CN CN202311047441.2A patent/CN116773826B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015151078A2 (en) * | 2015-06-15 | 2015-10-08 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd | Hydrophilic linkers for conjugation |
| JP2021073185A (ja) * | 2015-08-10 | 2021-05-13 | ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用 |
| CN108956978A (zh) * | 2018-04-11 | 2018-12-07 | 中翰盛泰生物技术股份有限公司 | 一种应用胶乳免疫比浊法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 |
| CN111320696A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-23 | 上海捷门生物技术有限公司 | 基于链霉亲和素化胶乳的mmp-3抗体复合物及其试剂盒 |
| CN111856009A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定mmp-3的试剂盒及其制备使用方法 |
| WO2022078524A2 (en) * | 2021-11-03 | 2022-04-21 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Specific conjugation of an antibody |
| CN115327122A (zh) * | 2022-08-09 | 2022-11-11 | 江西乐成生物医疗有限公司 | 一种基质金属蛋白酶-3检测试剂盒及制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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