CN113252902B - 一种探针、检测试纸条及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种探针、检测试纸条及其应用。包括单克隆抗体和信号载体，所述的信号载体为聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子。本发明首次在免疫检测中用聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子构建探针，可实现高灵敏目标物检测，检测限低至0.002ng/mL，与单纯的氧化铱纳米粒子试纸条和传统金标试纸条的灵敏度相比，分别提高24倍和180倍。此外，本发明具有很好的应用前景，可以作为检测各种食品有害小分子分析物的通用检测方法。同时，能成功应用于猪肉、猪肝和牛肉样品中的沙丁胺醇检测。

Description

一种探针、检测试纸条及其应用
技术领域
本发明属生物检测领域，具体涉及一种用聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子的方法作为信号载体，通过标记抗体制备探针，使用了该探针的试纸条，及其快速检测的应用。
背景技术
近年来，免疫层析试纸条，由于其快速、灵敏度高、特异性好，并且成本较低，受到了广泛的关注，成为现场快速检测的重要手段，主要用于监测低浓度的分析物，例如病毒，癌症生物标志物，细菌和毒素等。金纳米颗粒(AuNPs)具有无与伦比的生物相容性和独特的光学性能，是检测SAL的常用信号标签。然而，基于金纳米粒子的免疫层析试纸条的稳定性差和灵敏度低，严重阻碍了其进一步的应用。幸运的是，由于氧化铱纳米粒子(IrO2NPs)简单的合成方法和出色的化学稳定性，它们有望成为AuNPs的替代信号标签。但是，在标记单克隆抗体(mAbs)的过程中，由于IrO2 NPs的粒径太小，很难通过高速离心获得完整的探针，从而导致部分mAbs的损失。因此，有必要探索一种增大IrO2 NPs粒径使其与未标记的mAbs易分离的复合材料，避免抗体的浪费。
沙丁胺醇(SAL)是一种速效β-2肾上腺素受体激动剂，通常被称为“瘦肉精”。在养殖业中，当SAL剂量比正常治疗剂量高5-10倍时，它可以显着增加瘦肉含量，同时减少脂肪沉积，从而可以显著提高经济效益。然而，一些研究表明，动物组织中残留的SAL对人体健康产生负面影响，并引起一些临床症状，如心悸、肌肉震颤、头晕、大量出汗和发冷等。迄今为止，已经报道了检测动物源食品中沙丁胺醇的几种分析方法，包括液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱质谱法(GC-MS)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、表面增强拉曼散射(SERS)和电化学检测。尽管这些常规方法可以提供高度灵敏的检测并获得准确的结果，但它们需要昂贵的仪器，专业操作人员，繁琐的样品预处理步骤和耗时的过程，这阻碍了它们在现场和快速检测中的应用。为了更灵敏地检测沙丁胺醇，特别是现场快速检测，实现易于快速、便捷和价格低廉方法仍然是巨大的技术挑战。
发明内容
针对现有技术中的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种探针、检测试纸条及应用。基于聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子作为信号载体，通过标记抗体制备探针，该探针具有出色的稳定性，光学性能以及更高的亲和力，可以通过简单的物理吸附快速标记单克隆抗体，从而避免了使用复杂的交联剂，同时大大提高了灵敏度。
为达到上述技术效果，本发明采取的技术方案为：
一种探针，包括单克隆抗体和信号载体，所述的信号载体为聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子；
氧化铱纳米粒子的粒径为17～21nm；聚多巴胺修饰层的厚度为9～13nm。
可选的，制备方法包括：
(1)制备氧化铱纳米粒子溶液：按质量比为5:3混合柠檬酸三钠和K2IrCl6制备成溶液，在加热回流反应及碱性条件下反应制备；
(2)制备聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子：将(1)中制备得到的氧化铱纳米粒子溶液(1mL)加入氧化剂，及按照体积比100:1加入10mg/mL盐酸多巴胺溶液混合制备。
可选的，氧化铱纳米粒子溶液的制备具体包括包括：
按质量比为5:3，将柠檬酸三钠和K2IrCl6混合制备成溶液，将溶液的pH调节至7.5，并在沸腾下回流；当溶液的颜色从棕色变为钢灰色时，继续搅拌溶液并加热30分钟；待溶液冷却至室温后，将pH重新调节至7.5，然后将溶液加热30分钟直至pH稳定，直至溶液的颜色变为深蓝色。
本发明所述的探针用于制备生物检测试纸条的应用。
一种探针，包括沙丁胺醇单克隆抗体和信号载体，所述的信号载体为聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子；
氧化铱纳米粒子的粒径为17～21nm；聚多巴胺修饰层的厚度为9～13nm；
沙丁胺醇单克隆抗体的浓度为1mg/mL。
可选的，制备该探针的方法包括：
(1)制备氧化铱纳米粒子溶液：按质量比为5:3混合柠檬酸三钠和K2IrCl6制备成溶液，在加热回流反应及碱性条件下反应制备；
(2)制备聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子：将(1)中制备得到的氧化铱纳米粒子溶液(1mL)加入氧化剂，及按照体积比100:1加入10mg/mL盐酸多巴胺溶液混合制备；
(3)制备探针：将沙丁胺醇单克隆抗体加入步骤(2)中聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子溶液中混合，用牛血清蛋白封闭，离心重悬于水中；
所述步骤(3)中将沙丁胺醇单克隆抗体与聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子混合，混合比为4μg：1mL，混合时间为1h，添加牛血清蛋白的封闭时间为30min。
本发明所述的探针用于制备检测肉制品中沙丁胺醇检测试纸条的应用。
可选的，所述的肉制品包括猪肉、猪肝和/或牛肉。
一种检测试纸条，该试纸条上载有本发明所述的探针。
可选的，所述的试纸条包括衬板，衬板上贴有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端覆盖吸水垫，硝酸纤维素膜的另一端依次覆盖样品垫和结合垫，硝酸纤维素膜的非覆盖面上沿横向设置检测线和控制线，结合垫及样品垫分别经封闭液封闭处理；
1mg/mL沙丁胺醇-牛血清白蛋白偶联物以0.9μL/cm的划线速率涂覆在检测线上得检测线，1mg/mL羊抗鼠免疫球蛋白以1μL/cm的划线速率涂覆在控制线上为控制线；然后于37℃条件下干燥30分钟；
所述的样品垫与结合垫的制备方法包括：将玻璃纤维膜放入封闭液中中浸湿，于37℃下干燥8h。
与现有技术相比，其优点与积极效果在于：
(1)简单的抗体标记过程。该发明只通过聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子与抗体进行简单的静电吸附作用制备新型探针，免去了复杂的交联过程(如EDC/NHS方法)。
(2)新型探针。首次在免疫层析试纸条检测中通过聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子作为信号载体标记抗体制备探针，该探针具有出色的稳定性，光学性能以及更高的亲和力，并且大大提高了灵敏度。这项工作为猪肉，猪肝和牛肉样品中的沙丁胺醇检测开发了便宜，灵敏，便携和快速读出的分析系统。
(3)灵敏度高。本发明提供的试纸条对沙丁胺醇的最低检测限为0.002ng/mL。该方法能高灵敏度检测沙丁胺醇，可作为通用方法快速、便捷检测食品中添加剂的残留。
(4)特异性高。该发明能高度特异性识别沙丁胺醇，对其他食品添加剂都无特异性。
(5)良好的实际应用。本发明可以检测猪肉，猪肝和牛肉中的沙丁胺醇，具有很好的应用前景，可以作为检测各种食品有害小分子分析物的通用检测方法。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1为本发明制备的聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子材料示意图；
图2为本发明制备的聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子材料的优化，a，b，c，d和e分别表示IrO2 NPs，IrO2@PDA-5，IrO2@PDA-10，IrO2@PDA-15和IrO2@PDA-20；
图3为本发明制备聚多巴胺修饰氧化铱纳米粒子的表征；
图4本发明的快速检测沙丁胺醇的免疫层析试纸条构型图及免疫层析试纸条检测原理图；
图5为本发明新型探针的表征；
图6为本发明制备的免疫层析试纸条检测灵敏度和特异性，Control，MEL，RAC，CLE，CAP，STR，NaNO2和SAL分别表示空白，三聚氰胺，莱克多巴胺，盐酸克伦特罗，氯霉素，硫酸链霉素和亚硝酸钠；
图7为本发明制备的免疫层析试纸条与基于氧化铱纳米粒子和金纳米粒子试纸条的检测灵敏度的对比；
图8为本发明制备的免疫层析试纸条检测的实际应用；
图9为本发明制备的免疫层析试纸条的通用性；
以下结合说明书附图和具体实施方式对本发明做具体说明。
具体实施方式
以下将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，并非全部实施例，也并未对本发明做任何形式上的限制，凡是利用本实施例的技术方案，包括对本实施例做了简单的变化，均属于本发明保护的范围。
本发明的目的是提供一种探针、检测试纸条及应用。基于聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子作为信号载体，通过标记抗体制备探针，该探针具有出色的稳定性，光学性能以及更高的亲和力，可以通过简单的物理吸附快速标记单克隆抗体，从而避免了使用复杂的交联剂。并且大大提高了灵敏度，这对于监控食品中的残留的沙丁胺醇具有很重要的意义和应用价值。本发明聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子(IrO2@PDA)具有出色的亲水性、生物相容性、稳定性并且含有多个活性位点，相比于磁性量子点、聚合物点、碳点和钙钛矿纳米晶体等其他材料，IrO2@PDA合成简单，分散性好，可以通过简单的物理吸附快速标记单克隆抗体，从而避免了使用复杂的交联剂。另外，IrO2@PDA比单纯的氧化铱纳米粒子(IrO2 NPs)具有更好的光学性能和更高的亲和力，是一种很有前景的信号载体。
具体的，氧化铱纳米粒子的粒径为17～21nm；聚多巴胺修饰层的厚度为9～13nm；聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子的粒径为26～34nm。
为了获得最佳的测定性能，发明人优化了抗体的使用量，抗原的划线量，探针的体积以及免疫时间，并确定了最优的系统条件。最终制得的试纸条用于检测食品中残留的沙丁胺醇，该方法已成功应用于猪肉，猪肝和牛肉中沙丁胺醇的检测，验证了其实用性，灵敏性和准确性。
该试纸条的工作原理为：基于竞争检测原理，首先，将探针与样品溶液混合，然后滴到测试条上，通过毛细作用移向试纸的测试区域。当样品溶液中不存在时，探针会被检测线中被抗原捕获，在检测线上形成可见带。相反，对于阳性样品，游离的沙丁胺醇和固定在检测线上抗原之间存在强烈的竞争反应，导致检测线强度随沙丁胺醇浓度的增加而降低。当沙丁胺醇浓度足够高时，探针仅会被控制线捕获，不会在检测线上出现可见带。
制备该探针的方法包括：
(1)制备氧化铱纳米粒子：将柠檬酸三钠和K2IrCl6与超纯水混合，将溶液的pH调节至7.5，并在沸腾下回流。当溶液的颜色从棕色变为钢灰色时，继续搅拌溶液并加热30分钟。待溶液冷却至室温后，将pH重新调节至7.5，然后将溶液加热30分钟直至pH稳定，最终溶液的颜色变为深蓝色。
(2)制备聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子：将3％的过氧化氢加入步骤(1)中氧化铱纳米粒子溶液中混合，再加入10mg/mL盐酸多巴胺溶液，并搅拌过夜。使用去离子水清洗两次。
(3)制备探针：将沙丁胺醇单克隆抗体加入步骤(2)中聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子溶液中混合，用牛血清蛋白封闭，离心重悬于超纯水中。所述的玉米赤霉烯酮单克隆抗体与聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子混合比为4μg:1mL，所述的混合时间为1h，牛血清蛋白的终浓度1％，封闭时间为30min。
本发明的免疫层析试纸条由五部分构成，依次将硝酸纤维素膜、样品垫、结合垫和吸水垫贴至衬板上，其中硝酸纤维素上划线包被有沙丁胺醇-牛血清白蛋白偶联物(SAL-BSA)和羊抗鼠免疫球蛋白(IgG)分别做为检测线T线和控制线C线。
本发明中所用的实验试剂均为市售所得，并未做进一步处理，检测仪器设备等均为常用的仪器。
本文中如无特殊说明，溶液浓度均为体积浓度。
实施例1：聚多巴胺修饰氧化铱纳米粒子条件的优化
结合图1，本实施例给出氧化铱纳米粒子的制备方法以及优化盐酸多巴胺溶液加入的量，包括以下步骤：
(1)制备氧化铱纳米粒子(IrO2 NPs)：将50mg柠檬酸三钠和30mg K2IrCl6与50mL超纯水混合，将溶液的pH调节至7.5，并在沸腾下回流。当溶液的颜色从棕色变为钢灰色时，继续搅拌溶液并加热30分钟。待溶液冷却至室温后，将pH重新调节至7.5，然后将溶液加热30分钟直至pH稳定，最终溶液的颜色变为深蓝色，制得IrO2 NPs溶液。
(2)优化盐酸多巴胺溶液加入的量：将15μL过氧化氢溶液(3％，v:v)加入步骤(1)中氧化铱纳米粒子溶液(1mL)中混合搅拌10分钟，再分别加入5μL，10μL，15μL和20μL的盐酸多巴胺溶液(10mg/mL)，并搅拌过夜。最终，将制备好的IrO2@PDA-5，IrO2@PDA-10，IrO2@PDA-15和IrO2@PDA-20使用去离子水清洗两次并重悬于超纯水中。
见图2A，在紫外光谱中，当加入5μL，10μL，15μL和20μL的盐酸多巴胺溶液(10mg/mL)时，IrO2@PDA-5，IrO2@PDA-10，IrO2@PDA-15和IrO2@PDA-20的最大吸收峰位于575nm，568nm，556nm和494nm。与IrO2 NPs溶液相比，IrO2 NPs表面上聚多巴胺层的自聚合导致吸收峰发生明显的蓝移。此外，当添加10μLDAH溶液时，IrO2@PDA的吸光度最大为0.898。加入过量的盐酸多巴胺溶液会产生较厚的PDA涂层，导致IrO2@PDA聚集，因此吸光度下降并产生更宽的吸收峰。图2B显示IrO2@PDA-5，IrO2@PDA-10，IrO2@PDA-15和IrO2@PDA-20的zeta电位分别为-5.3mV，-14.5mV，-22.8mV，-17.8mV和-13.8mV。聚多巴胺修饰的IrO2 NPs的电位低于纯IrO2 NPs的电位，这是因为PDA涂层上的-OH含量很高。Zeta电位表明纳米分散体的稳定性。在0-10mV，10-20mV，20-30mV和30mV以上的绝对值分别定义为极端不稳定，相对稳定性，中等稳定性和高稳定性。因此，IrO2@PDA-10最稳定，被选作免疫层析的信号标签用于后续实验。
聚多巴胺修饰氧化铱纳米粒子的表征：
(1)透射电镜：合成载体的TEM图像如图A和B所示，从TEM图像(图3A)中可以看出，合成的IrO2 NPs具有出色的分散性和均匀性，并且通过测量100个纳米粒子，从直方图获得了17.84±2.99nm的平均大小。如图3B中IrO2@PDA的TEM图像显示，清楚地观察到PDA层粘附在IrO2 NPs上。
(2)评估IrO2 NPs和IrO2@PDA与抗体的偶联效率：图3C是光OD450相对于沙丁胺醇抗体的浓度(1、0.2、0.1、0.02、0.004和0.001μg/mL)的标准曲线。如图3D所示，当抗体的浓度为10μg/mL时，IrO2@PDA的偶联效率最高为91.56％，而当抗体的浓度为15μg/mL时IrO2 NPs的偶联效率最高为80.43％。以上结果表明，与IrO2 NPs相比，IrO2@PDA可以显着提高与抗体的偶联效率。
实施例2：快速检测沙丁胺醇的试纸条的探针制备
遵从上述技术方案，本实施例给出探针及制备方法，包括以聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子作为信号载体，然后加入沙丁胺醇单克隆抗体进行吸附即得。包括以下步骤：
(1)制备聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子(IrO2@PDA)：将15μL过氧化氢溶液(3％，v:v)加入氧化铱纳米粒子溶液(1mL)中混合搅拌10分钟，再加入10μL盐酸多巴胺溶液(10mg/mL)，并搅拌过夜。最终，将制备好的IrO2@PDA使用去离子水清洗两次并重悬于超纯水中，并在4℃冰箱中保存。
(2)制备探针：将沙丁胺醇单克隆抗体加入步骤(1)中聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子溶液混合，用牛血清蛋白封闭，离心重悬于超纯水中。
在搅拌下将适量的4μg沙丁胺醇单克隆抗体放入1mL上述制备的IrO2@PDA中1小时，然后添加10％BSA(w:v)并反应30分钟以封闭多余未结合的位点。最后，将混合物离心，分散在100μL超纯水中，并保存在4℃冰箱里进一步使用。下述实施例2-4使用的检测沙丁胺醇的探针为实施例2制备得到的。
新型探针的表征：为了证明本发明成功制备了新型探针，本发明人还做了以下实验(见图5)：
(1)紫外可见光谱图：图A为IrO2@PDA、IrO2@PDA-BSA和BSA的紫外可见光谱图，可以观察到加入抗体后的IrO2@PDA在280nm出现了抗体的特征峰，表明蛋白与IrO2@PDA的成功标记。
(2)Zeta电位：图B为IrO2@PDA和IrO2@PDA-BSA的zeta电位图，可以看出IrO2@PDA(-22.8mv)和IrO2@PDA-mAb(-6.97mv)的zeta电位的发生了明显的变化，说明蛋白成功地标记在IrO2@PDA表面。
(3)聚丙烯酰胺凝胶电泳：图D为IrO2@PDA和IrO2@PDA-BSA的凝胶电泳图结果。可以发现IrO2@PDA与BSA连接后，IrO2@PDA-BSA在60kDa处出现一条特征的蛋白带，而在IrO2@PDA中未出现。结果表明，蛋白可以成功地负载到IrO2@PDA上。
实施例3：快速检测沙丁胺醇的免疫层析试纸条的制备
结合图4，本实施例给出了快速检测沙丁胺醇的高灵敏度免疫层析试纸条，包括硝酸纤维素膜、样品垫、结合垫和吸水垫以及衬板，衬板上贴有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端覆盖吸水垫，硝酸纤维素膜的另一端依次覆盖样品垫和结合垫，硝酸纤维素膜的非覆盖面上沿横向设置检测线和控制线，结合垫及样品垫分别经封闭液进行封闭处理。
硝酸纤维素膜的制备方法包括：1mg/mL沙丁胺醇-牛血清白蛋白偶联物以0.9μL/cm的划线速率涂覆在检测线上得检测线，1mg/mL羊抗鼠免疫球蛋白以1μL/cm的划线速率涂覆在控制线上为控制线；然后于37℃条件下干燥以备用。
样品垫的制备：将玻璃纤维膜剪裁成长15mm宽3mm的规格，放入封闭液(2％BSA，w:v)中浸湿，于37℃条件下干燥8h，得样品垫，然后置4℃冰箱中保存。
结合垫的制备：将玻璃纤维膜剪裁成长8mm宽3mm的规格，放入封闭液(2％BSA)中浸湿，取出，于37℃条件下干燥8h，得样品垫，然后置4℃冰箱中保存。
吸水垫的制备：将吸水纸剪裁成长18mm宽3mm的规格，即得吸水垫。
试纸条的组装：首先将硝酸纤维素膜贴附于衬板上，然后样品垫压结合垫1～3mm，结合垫压硝酸纤维素膜1～3mm，吸水垫压硝酸纤维素膜1～3mm依次贴附于衬板上，即得快速检测沙丁胺醇的免疫层析试纸条。
实施例4：快速检测沙丁胺醇的试纸条的灵敏度测定
检测过程：将沙丁胺醇标准品溶于超纯水中，连续稀释为0到3ng/mL不同的浓度，超纯水作为为空白对照。将2μL的IrO2@PDA-mAb探针与100μL沙丁胺醇标准溶液混合孵育，再把测试条的样品垫浸入不同浓度上述检测液中，混合物通过毛细血管力的作用向吸收垫迁移。反应15min后，用肉眼观察T线的信号强度，并用便携式装置定量测量。
检测结果：当通过肉眼观察到检测线T线明显比空白对照条浅时，相应的沙丁胺醇最小浓度定义为视觉检测限(vLOD)，当检测线T线完全消失时，相应的最小浓度作为阈值浓度。竞争抑制率IC10定义为检测限(LOD)。
见图6，随着沙丁胺醇的浓度从0到3ng/mL，试纸条T线强度不断降低。vLOD为0.01ng/mL，使T线完全消失的阈值浓度为0.75ng/mL。通过计算IrO2@PDA-ICA的LOD为0.002ng/mL，其灵敏度比基于单纯的氧化铱纳米粒子试纸条(IrO2NPs-ICA)高24倍(图7中的A和C)，比基于传统金纳米粒子试纸条(AuNPs-ICA)灵敏度高的180倍(图7中的B和D)。因此，该方法能高灵敏度检测沙丁胺醇，可作为通用方法快速、便捷检测食品添加剂的残留。
实施例4：快速检测沙丁胺醇的试纸条的特异性测定
检测过程：分别将三聚氰胺(MEL)，莱克多巴胺(RAC)，盐酸克伦特罗(CLE)，氯霉素(CAP)，硫酸链霉素(STR)和亚硝酸钠(NaNO2)用超纯水稀释至100ng/mL的浓度，分别取100μL溶液作为检测液，与2μL的IrO2@PDA-mAb探针混合孵育，再把测试条的样品垫浸入上述测试溶液中，同时取100μL超纯水作为空白对照液。15min后，使用条带读取器获得T线强度。
见图6，仅在沙丁胺醇的样品可以抑制T线上的颜色，而对于其他常见的添加剂在T线上可以观察到明显的颜色。说明该发明试纸条能高度特异性识别沙丁胺醇，有很高的特异性。
实施例5：快速检测沙丁胺醇的试纸条的应用
检测过程：将猪肉，猪肝和牛肉加标预处理沙丁胺醇。在预处理之前，使用液相色谱-质谱法(LC-MS)确认空白的真实样品是否存在沙丁胺醇。取1g样品放入装有2mL 3％三氯乙酸水溶液的15mL离心管中，涡旋振荡5min，然后离心(10,000rpm，10min)。随后，用NaOH(1M)溶液将上清液调节至中性。
将上述预处理的实际样品溶液稀释并加标(沙丁胺醇浓度为0-3ng/mL)，将2μL的IrO2@PDA-mAb探针与100μL沙丁胺醇标准溶液混合孵育，再把测试条的样品垫浸入上述测试溶液中，混合物通过毛细作用向吸收垫迁移。反应15min后，用肉眼观察T线的信号强度，并用便携式装置定量测量。
检测结果：见图8，随着沙丁胺醇的浓度从0上升到3ng/mL，T线的强度逐渐降低。猪肉、猪肝和牛肉样品中SAL的阈值浓度均为7.5μg/kg。猪肉和猪肝中沙丁胺醇的视觉检测限vLOD为0.1μg/kg，而牛肉样品中的沙丁胺醇vLOD为0.2μg/kg，表明牛肉基质对技术的灵敏度影响很小。因此，本发明能检测猪肉，猪肝和牛肉中的沙丁胺醇，与加标样品的结果一致，反映了其良好的实际应用价值。
此外，本发明也具有良好的通用性。见图9，本发明除了可以应用于检测食品中的沙丁胺醇，而且还可以通过更换不同的抗体标记聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子，用于检测啶虫脒、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和吡虫啉等分析物。本发明在食品安全领域中可以作为检测各种有害小分子分析物的通用检测方法。
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (5)

1.一种探针，其特征在于，包括沙丁胺醇单克隆抗体和信号载体，所述的信号载体为聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子；
氧化铱纳米粒子的粒径为17～21 nm；聚多巴胺修饰层的厚度为9～13 nm；
沙丁胺醇单克隆抗体的浓度为1mg/mL；
制备方法包括：
（1）制备氧化铱纳米粒子溶液：按质量比为5:3，将柠檬酸三钠和K2IrCl6混合制备成溶液，将溶液的pH调节至7.5，并在沸腾下回流；当溶液的颜色从棕色变为钢灰色时，继续搅拌溶液并加热30分钟；待溶液冷却至室温后，将pH重新调节至7.5，然后将溶液加热30分钟直至pH稳定，直至溶液的颜色变为深蓝色；
（2）制备聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子：将（1）中制备得到的氧化铱纳米粒子溶液中依次加入氧化剂，及按照体积比100:1加入10mg/mL盐酸多巴胺溶液混合制备；
（3）制备探针：将沙丁胺醇单克隆抗体加入步骤（2）中聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子溶液中混合，用牛血清蛋白封闭，离心重悬于水中；
所述步骤（3）中将沙丁胺醇单克隆抗体与聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子混合，混合比为4 μg ：1 mL，混合时间为1 h，添加牛血清蛋白的封闭时间为30 min。
2.权利要求1所述的探针用于制备检测肉制品中沙丁胺醇检测试纸条的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，所述的肉制品包括猪肉、猪肝和/或牛肉。
4.一种检测试纸条，其特征在于，该试纸条上载有权利要求1所述的探针。
5.如权利要求4所述的检测试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括衬板，衬板上贴有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端覆盖吸水垫，硝酸纤维素膜的另一端依次覆盖样品垫和结合垫，硝酸纤维素膜的非覆盖面上沿横向设置检测线和控制线，结合垫及样品垫分别经封闭液封闭处理；
1 mg/mL沙丁胺醇-牛血清白蛋白偶联物以0.9μL/cm的划线速率涂覆在检测线上得检测线，1 mg/mL羊抗鼠免疫球蛋白以1 μL/cm的划线速率涂覆在控制线上为控制线；然后于37℃条件下干燥30分钟；
所述的样品垫与结合垫的制备方法包括：将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，于37℃下干燥8 h。
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