CN113214357A - 一种多肽或其衍生物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用 - Google Patents

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赵晨曦
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Abstract

本发明公开了一种多肽或其衍生物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用，属于生物技术领域。所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，或者，如将序列表SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中的两个氨基酸替换为侧链可相连的非天然氨基酸所示；所述的衍生物包括所述多肽与细胞穿膜肽接连所形成的嵌合肽。所述多肽或其衍生物能够特异性地与肿瘤促进因子FGD5相互作用，从而阻断FGD5与EGFR的相互作用，促进EGFR蛋白降解，抑制EGFR信号通路活性，因此将其应用于治疗EGFR异常扩增的肿瘤药物制备中。所制备的药物具有靶向特异性，毒副作用少，使用安全，可用于治疗肺癌、肠癌、胰腺癌、乳腺癌以及肝癌等。

Description

一种多肽或其衍生物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种多肽或其衍生物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
背景技术
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是ErbB跨膜受体酪氨酸激酶家族成员，该家族包括EGFR(ErbB-1),HER2/c-neu(ErbB-2),Her 3(ErbB-3)和Her 4(ErbB-4)。EGFR也被命名为ErbBl或HER-1,位于第7号染色体，由28个外显子组成，编码1186个氨基酸，糖蛋白分子量约170kDa，EGFR突变或过表达一般会引发肿瘤。EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，其信号通路在细胞的生长、增殖和分化等生理过程中发挥重要的作用。EGFR等酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达。活化的EGFR激活它位于细胞内的激酶通路，包括Y992,Y1045,Y1068,Y1148 and Y1173等激活位点。这个自磷酸化可以引导下游的磷酸化，包括MAPK，Akt和JNK通路,在肿瘤增殖、血管新生、肿瘤转移，肿瘤免疫逃逸、肿瘤耐药以及肿瘤代谢重编程等方面发挥促进作用。
目前，针对EGFR的肿瘤分子靶向药物，按其性质主要分为两大类：一类是单克隆抗体，主要通过阻碍配体与EGFR结合，阻断EGFR信号活化。另一类是小分子抑制剂，主要通过竞争性结合EGFR胞内区酪氨酸激酶的磷酸化位点，阻断其与ATP的相互作用，进而抑制EGFR的酪氨酸磷酸化及下游一系列的信号传导。虽然许多针对EGFR靶向治疗的药物应用于临床，但在应用过程中会产生耐药问题。并且其耐药原因错综复杂：EGFR突变(T790M)导致激酶与ATP的亲和力提高；EGFR被阻断后，细胞内其它酪氨酸激酶(TK)受体或EGFR下游信号通路会通过过度活化替代EGFR的主要功能来维持细胞的存活；许多肿瘤患者存在Kras基因突变，会导致EGFR信号通路持续激活，加速肿瘤细胞增殖；此外，VEGF的过度表达，肿瘤诱导非依赖于EGFR的血管生成以及膜表面的EGFR内吞降解过程异常均是EGFR靶向药物产生耐药的原因。
近年来，有研究表明靶向EGFR治疗导致的继发性耐药即使在没有EGFR突变的情况下也会发生。事实上，在肿瘤中EGFR过表达与EGFR突变相比是更为常见的现象。在很多情况下，EGFR表达量与efgr的基因拷贝数并不直接相关，表明EGFR过表达可能是由于EGFR降解调节异常所致。EGFR过表达不仅导致对靶向EGFR药物的耐受，也导致肿瘤对多种化疗药物耐受。正是由于EGFR在肿瘤中的重要调节作用并不完全依赖其激酶活性，以及现有靶向EGFR药物高耐药率的现状，直接调节EGFR表达水平或蛋白稳定性的物质具有良好的抑制肿瘤发生和发展的成药前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对EGFR分子靶向药物高耐药率以及缺乏直接靶向EGFR蛋白稳定性药物的现状，提供一种促进EGFR蛋白降解的多肽或其衍生物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
本发明的发明人经过深入的研究和反复的试验发现，获得了能够靶向促进EGFR降解的多肽ER1(其氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示)，然而多肽ER1的生物稳定性比较低。该生物稳定性低的缺陷与多肽ER1在溶液中不能稳定形成活性所需的α螺旋构象直接相关。由此，发明人进行了针对性的研究和试验，发现如果将多肽ER1中特定位置的氨基酸残基替换为侧链可以相连的非天然氨基酸，如S-戊烯丙氨酸(S5)，则改造后的多肽具有稳定的α螺旋的二级结构，使改造后的多肽具有极高的亲和力、抗酶解稳定性以及细胞穿膜性，从而具有极高的α螺旋稳定性、代谢稳定性，能够抑制多种肿瘤细胞增殖和转移，从而应用于制备治疗肿瘤的药物中。基于发明人的研究工作，本发明提供下述的技术方案。
本发明提供的技术方案之一是：一种靶向促进EGFR蛋白降解的多肽或所述多肽的衍生物，所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，或者，如将序列表SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中的两个氨基酸替换为侧链可相连的非天然氨基酸所示；所述的衍生物包括所述多肽与细胞穿膜肽接连所形成的嵌合肽。其中，所述的细胞穿膜肽为本领域常规的细胞穿膜肽，只要其能辅助将所述多肽送入细胞以发挥作用即可。一般，所述的细胞穿膜肽为由10～30个氨基酸组成的短肽分子。较佳地，所述细胞穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端，更佳地连接在所述多肽的N端；进一步更佳地所述细胞穿膜肽和本发明多肽ER1之间以两个甘氨酸(Gly-Gly)连接。
本发明中，所述的侧链相连的非天然氨基酸为本领域常规的非天然氨基酸，较佳地为S-戊烯丙氨酸(S5)。
本发明中，所述替换的氨基酸的数目为两个且所述替换的氨基酸的位置分别为第i位和第i+4位的氨基酸；其中，i为整数，且1≤i≤14，即i为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14。
更佳地，所述的多肽的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2～16中任一项所示。
其中，上述SEQ ID No.2～SEQ ID No.16所示的氨基酸序列中可进行适当地氨基酸替换、缺失或添加，只要使改造后的氨基酸序列仍然能够与EGFR特异性结合并且保持改造前的活性即可。
本发明中，所述的衍生物为所述多肽与细胞穿膜肽接连所形成的嵌合肽。
其中，本发明所述的细胞穿膜肽为本领域常规的细胞穿膜肽，只要其能辅助将所述多肽送入细胞以发挥作用即可。一般，所述的细胞穿膜肽为由10～30个氨基酸组成的短肽分子。较佳地，所述细胞穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端，更佳地连接在所述多肽的N端；进一步更佳地所述细胞穿膜肽和本发明多肽ER1之间以两个甘氨酸(Gly-Gly)连接。
进一步更佳地，所述细胞穿膜肽为如序列表SEQ ID No.17所示的TAT肽(peptide)，所形成的嵌合多肽即本发明的多肽衍生物的氨基酸序列如SEQ ID No.16所示。本发明中，上述SEQ ID No.1～SEQ ID No.16所示的氨基酸序列中可进行适当地氨基酸替换、缺失或添加，只要使改造后的氨基酸序列仍然能够促进EGFR蛋白降解并且保持改造前的活性即可。本发明提供的技术方案之二是：一种靶向促进EGFR蛋白降解的多肽或所述多肽的衍生物在制备治疗与EGFR过度表达活化有关的肿瘤的药物中的应用。
本发明中，所述的肿瘤为本领域常规的，较佳地为肺癌、肠癌、胰腺癌、乳腺癌或者肝癌。其中，所述肺癌为本领域常规，较佳的为非小细胞肺癌或小细胞肺癌。所述肠癌为本领域常规，较佳的为结肠癌或直肠癌。所述胰腺癌为本领域常规，较佳的为胰腺导管腺癌或胰腺腺泡细胞癌。所述乳腺癌为本领域常规，较佳的为非浸润性乳腺癌、早期浸润性乳腺癌、浸润性特殊类型乳腺癌或浸润性非特殊类型乳腺癌。所述肝癌为本领域常规，较佳的为原发性肝癌或继发性肝癌。
本发明中，所述抗肿瘤是本领域常规的，较佳地指在存在可能的肿瘤因素时，使用后防止或降低肿瘤的产生，也指存在肿瘤病灶时，减轻肿瘤的程度，或者治愈肿瘤使之正常化，或者减缓或延迟肿瘤的进程，或者减轻肿瘤引起的症状。
本发明提供的技术方案之三是：一种抗肿瘤的药物组合物，其含有上述靶向促进EGFR蛋白降解的多肽或所述多肽的衍生物。
本发明中，所述的活性成分是指具有抗肿瘤功能的部分。在所述药物组合物中，上述靶向促进EGFR蛋白降解的多肽或所述多肽的衍生物可以单独作为活性成分或和其他具有抗肿瘤活性的成分一起作为活性成分。
本发明中，较佳地，所述的药物组合物还包括一种或多种药用载体。所述的药用载体为本领域常规药用载体，所述的药用载体可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更佳地，所述的药物组合物包括0.01～99.99％的上述靶向促进EGFR蛋白降解的多肽或所述多肽的衍生物，和0.01～99.99％的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。
本发明所述的药物组合物的给药途径是常规的多肽药物给药途径，较佳地为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳地包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。所述的药物组合物为本领域常规的各种剂型，较佳地为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂或输注剂等。
较佳地，所述的药物组合物的施用量为有效量，所述有效量为能够缓解或延迟疾病病症进展的量。所述有效量可以以个体基础来测定，并将部分基于待治疗症状和所寻求结果的考虑。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的多肽或多肽衍生物具有极高的亲和力、抗酶解稳定性以及细胞穿膜性，从而具有极高的α螺旋稳定性、代谢稳定性，能够靶向促进EGFR蛋白降解，抑制EGFR信号通路活性，能够抑制多种肿瘤细胞增殖和转移，从而应用于抗肿瘤的药物的制备中。所制备的药物在抗肿瘤中，具有疗效显著，毒副作用少，使用安全的优点。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
若无特别说明，实施例中所述的PBS溶液，指浓度为0.1M，pH值为7.2的磷酸盐缓冲液。
实施例中所述的室温为本领域常规的室温，较佳地为15～30℃。
实验结果用均值±标准误表示，经参数或者非参数方差检验，经比较p<0.05被认为有显著性差异，p<0.01被认为有极其显著性差异。
实施例1多肽的合成
多肽ER1的氨基酸序列参见序列表SEQ ID No.1。
引入两个非天然氨基酸S-戊烯丙氨酸(S5)进行固相多肽链合成。固相多肽链合成完成后采用钌作为催化剂进行烯烃复分解反应(RCM)环化即得目标多肽。称量树脂并投入到多肽固相合成管(以下简称反应器)中，加入适量的DMF溶胀半小时以上。抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床。抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取少量树脂(约5～10mg)于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应。分别按照SEQ ID No.1～SEQ ID No.15多肽的氨基酸序列顺序取相应氨基酸、HBTU(氨基酸：HBTU＝1:1)，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应。1-2小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测。抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂。对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc去保护——氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕。反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂2-3次，甲醇洗两次，继续抽干15-20min。反应器中取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液(裂解液先冰浴20min)中裂解两小时。将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)洗3次。粗肽使用制备型反相HPLC纯化，使用HPLC检测纯度>90％。所得到的纯肽使用质谱(MS,electrospray)鉴定。
至最后一个肽合成后，取出部分加荧光标记。先将Fmoc-e-Acp-OH按氨基酸偶联方法链接在多肽上，再取适量HBTU与FITC溶于荧光偶联溶剂中，1——2天后，茚三酮测试液测试。如果未偶联上，相同方法在重复一次。
上述固相多肽链合成及纯化的步骤由中肽生化有限公司公司完成。两个S-戊烯丙氨酸(S5)S5插入在多肽ER1氨基酸序列中的第i、i+4位，由此得到不同序列的改造后的多肽(氨基酸序列参见序列表SEQ ID No.2～SEQ ID No.16)，其具体插入位点如下所示：ER1:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S1:S5-Pro-Lys-Ala-S5-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S2:Pro-S5-Lys-Ala-Asn-S5-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S3:Pro-Lys-S5-Ala-Asn-Lys-S5-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S4:Pro-Lys-Ala-S5-Asn-Lys-Glu-S5-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S5:Pro-Lys-Ala-Asn-S5-Lys-Glu-Ile-S5-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S6:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-S5-Glu-Ile-Leu-S5-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S7:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-S5-Ile-Leu-Asp-S5-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S8:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-S5-Leu-Asp-Glu-S5-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S9:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-S5-Asp-Glu-Ala-S5-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S10:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-S5-Glu-Ala-Tyr-S5-Val-Met-Ala-Ser；ER1-S11:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-S5-Ala-Tyr-Val-S5-Met-Ala-Ser；ER1-S12:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-S5-Tyr-Val-Met-S5-Ala-Ser；ER1-S13:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-S5-Val-Met-Ala-S5-Ser；ER1-S14:Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-S5-Met-Ala-Ser-S5；TAT-ER1:TAT peptide-Pro-Lys-Ala-Asn-Lys-Glu-Ile-Leu-Asp-Glu-Ala-Tyr-Val-Met-Ala-Ser；
多肽ER1进行氨基酸替换后的多肽如ER1-S1～ER1-S14所示(氨基酸序列参见序列表SEQ ID No.2～SEQ ID No.15)。与细胞穿膜肽TAT-肽(peptide)接连所形成的嵌合肽如TAT-ER1所示(氨基酸序列参见序列表SEQ ID No.16)。
上述多肽均由中肽生化有限公司合成并纯化。
实施例2用表面等离子共振的方法检测多肽与FGD5蛋白的结合能力
表面等离子共振实验在表面等离子共振仪Biacore T200中进行，操作步骤按照等离子共振仪Biacore T200的说明书进行。具体步骤如下：
1.将纯化的FGD5蛋白(购自Abnova公司)通过氨基偶联到CM5芯片上(购自GE公司)，按10μL/min的流速洗脱除去未结合的蛋白，并且平衡芯片表面2小时。其中，氨基偶联、洗脱和平衡的具体步骤参见GE公司CM5芯片的相关说明书。
2.自动进样250μL不同浓度(6400、3200、1600、800、400、200、50、12.5、6.25和3.125nM)的实施例1所制备的ER1和ER1-S1～ER1-S14多肽片段，整个表面等离子共振实验在25℃进行。所使用的缓冲液为HBS-EP缓冲液[0.01M HEPES、0.15M NaCl、3mM EDTA和0.005％(w/w)表面活性剂]。用Biacore T200自带分析软件模拟不同浓度多肽与FGD5的结合曲线，计算出多肽与FGD5蛋白的亲和力。表1说明，肽段ER1-S1～ER1-S14与FGD5蛋白的亲和力明显高于多肽ER1与FGD5蛋白的亲和力。与细胞穿膜肽TAT-肽(peptide)接连所形成的嵌合肽如TAT-ER1与FGD5蛋白的亲和力明显高于多肽ER1与FGD5蛋白的亲和力。
表1多肽ER1和ER1-S1～ER1-S14与FGD5蛋白的亲和力测试
多肽名称 与TRB3蛋白的亲和力常数(KD)
ER1(对照) 4.967×10<sup>-8</sup>M
ER1-S1 6.45×10<sup>-9</sup>M
ER1-S2 3.23×10<sup>-9</sup>M
ER1-S3 1.97×10<sup>-9</sup>M
ER1-S4 3.21×10<sup>-9</sup>M
ER1-S5 2.35×10<sup>-9</sup>M
ER1-S6 3.25×10<sup>-9</sup>M
ER1-S7 3.76×10<sup>-9</sup>M
ER1-S8 5.46×10<sup>-10</sup>M
ER1-S9 3.16×10<sup>-9</sup>M
ER1-S10 3.25×10<sup>-9</sup>M
ER1-S11 6.73×10<sup>-10</sup>M
ER1-S12 5.12×10<sup>-9</sup>M
ER1-S13 7.55×10<sup>-9</sup>M
ER1-S14 3.37×10<sup>-9</sup>M
TAT-ER1 5.37×10<sup>-10</sup>M
实施例3圆二色谱法检测多肽的α螺旋率
用圆二色谱仪(购自日本Jasco公司)检测多肽的α螺旋率。将实施例1所制备的多肽ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1溶解到PBS溶液中，将圆二色谱仪的上机浓度调整为1mg/mL，结果如表2所示。其中，α螺旋率指保持二级结构α螺旋的多肽的肽段数量占总多肽的肽段数量的百分比。
表2说明，多肽ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1的α螺旋率明显高于多肽ER1，多肽的α螺旋率的维持是增加多肽稳定性的重要指标，因此，多肽ER1-S1～ER1-S14和TAT-ER1的α螺旋率的提高会增强其稳定性。
表1.圆二色谱法测定多肽α螺旋率
多肽名称 α螺旋率(％)
ER1 20
ER1-S1 59
ER1-S2 42
ER1-S3 37
ER1-S4 40
ER1-S5 36
ER1-S6 58
ER1-S7 48
ER1-S8 67
ER1-S9 72
ER1-S10 54
ER1-S11 46
ER1-S12 51
ER1-S13 48
ER1-S14 57
TAT-ER1 31
实施例4流式细胞术检测多肽穿膜能力
流式细胞术检测多肽穿过细胞膜的能力。具体操作步骤如下：
1.收集对数生长期的肺癌细胞MDA-MB-231(购自中国医学科学院基础医学研究所)，用1640培养基(购自美国Invitrogen公司)调整细胞浓度，制成20万个/mL的细胞悬液。
2.将实施例1所制得的多肽溶于PBS磷酸盐缓冲溶液，调节PH为7.4。将FAM荧光探针溶于100uL的DMF中，逐滴加至上述溶解好的溶液中。将混合液至于摇床，反应2h。反应结束后，反应液加入超滤管中进行超滤(4000rpm，30×3min)，取超滤管上层溶液冻干得标记FAM荧光基团的相应固体粉末。
3.将1mL步骤1所制得的细胞悬液加入6孔板进行培养，12小时后换成新的培养基，并且分别加入1μg/mL步骤2所制得的FAM荧光基团标记的多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1。
4.6小时后，用胰酶消化制备成单细胞悬液，冷PBS重悬细胞。
5.运用流式细胞计数仪，激发波长为465nm，发射波长为520nm，测定细胞内荧光的强弱，计算含荧光细胞占总细胞的百分比。结果如表3所示，含荧光细胞占总细胞百分比越高，说明多肽能穿过的细胞数越多，即多肽的穿膜能力越好
表3说明，给予多肽ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1处理后，含荧光的细胞比例明显多于ER1，因此多肽ER1-S1～ER1-S14和TAT-ER1的穿膜能力明显优于ER1。
表3.流式细胞术检测多肽穿膜能力
Figure BDA0002379967540000051
Figure BDA0002379967540000061
实施例5免疫荧光染色验证多肽对EGFR蛋白的半衰期的影响
1.收集对数生长期的肺癌细胞MDA-MB-231，用1640培养基调整细胞浓度，制成20万个/mL的细胞悬液。
2.将2mL步骤1所制得的细胞悬液加入6孔板进行培养，12小时后换成新的培养基，并且分别加入1μg/mL实施例1所制得的多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1。对照组加入等体积的溶剂PBS。
3.12小时后，按时间点加入蛋白合成抑制剂放线菌酮(Cycloheximide，CHX)，使其作用时间分别为24h，12h，8h，4h，2h，0h。每过12h分别补加1μg/mL实施例1所制得的多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1。对照组加入等体积的溶剂。
4.收集细胞，加入RIPA裂解液(购自上海碧云天生物技术有限公司)(按照使用说明书，用前加入蛋白酶抑制剂PMSF和leupeptin，aprotinin等其它抑制剂)，冰上裂解30min；12000rpm，4℃离心30min；吸取上清，用BCA法对蛋白进行定量，按照定量结果将蛋白调整成统一浓度，加入5×上样缓冲液，98℃变性10min。
5.取部分样品按照《分子克隆》所述的方法进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳结束后，进行免疫印迹检测。
6.免疫印迹结果利用Gel-Pro Analyzer32Analyzer4.0进行定量分析，并绘制时间相关EGFR含量变化曲线，确定EGFR蛋白含量下降至CHX作用0h时的50％所需时间，即为EGFR蛋白半衰期。结果如表3所示。
表4说明，与多肽ER1相比，多肽ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1能明显降低EGFR蛋白半衰期。
表3.多肽对细胞EGFR蛋白半衰期的影响
Figure BDA0002379967540000062
Figure BDA0002379967540000071
实施例6细胞计数实验验证多肽抑制肿瘤细胞的生长
1.收集对数生长期的肺癌细胞A549(购自中国医学科学院基础医学研究所)、结肠癌细胞HCT-8(购自中国医学科学院基础医学研究所)、胰腺癌细胞SW1990(购自中国医学科学院基础医学研究所)、乳腺癌细胞MDA-MB-231(购自中国医学科学院基础医学研究所)和肝癌细胞HepG2(购自中国医学科学院基础医学研究所)，将其制备为1.5×105/ml的细胞悬液。
2.取步骤1所制得的细胞悬液1ml，将其加入12孔板进行培养(其中HepG2、HCT-8细胞所用培养基为DMEM培养基，A549、SW1990和MDA-MB-231细胞所用培养基为RPMI1640培养基，均购自Invitrogen公司；培养温度为37℃，培养基体积为1mL)，12小时后换成新的培养基，并且分别加入1μg/mL实施例1所制得的多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1。对照组加入等体积溶剂。每隔一天传代一次，并进行计数。随着细胞数量增多，更换至相应底面积培养皿中进行培养。培养12天后，收集所有细胞至1ml培养基中进行细胞计数，并计算总的细胞数量。实验结果以mean±SD表示，并采用t test检验各组与对照组间的差异。实验结果见表5～9。表5～9说明多肽ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1相比于ER1更能够抑制肿瘤细胞的生长。
表5.多肽抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长
多肽名称 细胞数量(10<sup>4</sup>) P值
对照 625.783±35.647 >0.9999
ER1 498.896±40.565 0.0002
ER1-S1 258.459±31.287 <0.0001
ER1-S2 289.342±25.845 <0.0001
ER1-S3 398.453±51.487 <0.0001
ER1-S4 231.476±40.634 <0.0001
ER1-S5 512.344±49.421 0.0010
ER1-S6 243.397±22.496 <0.0001
ER1-S7 266.461±23.772 <0.0001
ER1-S8 284.789±31.573 <0.0001
ER1-S9 254.237±27.562 <0.0001
ER1-S10 412.629±37.843 <0.0001
ER1-S11 316.735±28.753 <0.0001
ER1-S12 313.463±23.860 <0.0001
ER1-S13 397.365±45.234 <0.0001
ER1-S14 445.392±16.387 <0.0001
TAT-ER1 243.487±25.354 <0.0001
表6多肽抑制肺癌细胞A549的生长
Figure BDA0002379967540000072
Figure BDA0002379967540000081
表7.多肽抑制肠癌细胞HCT-8的生长
多肽名称 细胞数量(10<sup>4</sup>) P值
对照 685.987±51.986 >0.9999
ER1 525.745±41.463 0.0002
ER1-S1 551.467±35.388 0.0004
ER1-S2 485.276±21.267 <0.0001
ER1-S3 510.416±31.879 <0.0001
ER1-S4 481.256±29.384 <0.0001
ER1-S5 501.274±39.283 <0.0001
ER1-S6 419.237±20.273 <0.0001
ER1-S7 494.283±34.284 <0.0001
ER1-S8 392.385±23.294 <0.0001
ER1-S9 453.945±29.495 <0.0001
ER1-S10 383.755±30.288 <0.0001
ER1-S11 352.392±30.492 <0.0001
ER1-S12 394.498±34.341 <0.0001
ER1-S13 518.297±29.276 <0.0001
ER1-S14 532.392±21.365 0.0003
TAT-ER1 401.872±47.298 <0.0001
表8.多肽抑制胰腺癌细胞SW1990的生长
Figure BDA0002379967540000082
Figure BDA0002379967540000091
表9.多肽抑制肝癌细胞HepG2的生长
多肽名称 细胞数量(10<sup>4</sup>) P值
对照 665.893±31.436 >0.9999
ER1 497.463±52.956 <0.0001
ER1-S1 304.894±24.135 <0.0001
ER1-S2 298.476±46.359 <0.0001
ER1-S3 414.393±40.157 <0.0001
ER1-S4 243.756±23.575 <0.0001
ER1-S5 387.872±42.478 <0.0001
ER1-S6 393.687±21.357 <0.0001
ER1-S7 358.465±29.266 <0.0001
ER1-S8 303.366±18.437 <0.0001
ER1-S9 268.775±18.460 <0.0001
ER1-S10 474.168±21.947 <0.0001
ER1-S11 316.970±31.986 <0.0001
ER1-S12 297.391±41.353 <0.0001
ER1-S13 326.938±24.397 <0.0001
ER1-S14 376.384±65.335 <0.0001
TAT-ER1 281.187±38.392 <0.0001
实施例7细胞划痕实验验证多肽抑制肿瘤细胞划痕后的愈合
1.先用记号笔在6孔板背后，用直尺比着划横线，横穿过孔。
2.在每个孔中分别加入5×105个肿瘤细胞，在DMEM或RPMI1640培养基中37℃孵育箱培养过夜后细胞贴壁。该肿瘤细胞为对数生长期的肺癌细胞A549、结肠癌细胞HCT-8、胰腺癌细胞SW1990、乳腺癌细胞MDA-MB-231和肝癌细胞HepG2。3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线进行划痕，枪头要垂直。
3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线进行划痕，枪头要垂直。
4.用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入新的培养基，同时分别加入1μg/mL实施例1所制备的多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1。对照组给予等体积的溶剂。取样拍照，计算划痕面积，即为0h划痕面积。
5.然后放入37℃、5％(v/v)CO2培养箱培养，24小时后取样拍照，并计算此时未修复的剩余面积，即24h剩余面积。按损伤修复比＝(0h划痕面积-24h剩余面积)/0h划痕面积*100％计算损伤修复比。
实验结果以mean±SD表示，并采用t test检验各组与EJ4组间的差异。实验结果见表9～13。
表10～14的结果表明，损伤修复面积比越大，肿瘤细胞的迁移能力越强，细胞划痕后愈合能力越强。因此多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S3、ER1-S4、ER1-S5、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S8、ER1-S9、ER1-S10、ER1-S11、ER1-S12、ER1-S13、ER1-S14和TAT-ER1可以降低肿瘤细胞划痕后的愈合能力。
表9.多肽抑制肺癌细胞A549迁移
多肽名称 损伤修复面积比 P值
对照 93.2±4.82 >0.9999
ER1 69.3±7.14 <0.0001
ER1-S1 51.9±2.29 <0.0001
ER1-S2 48.7±1.75 <0.0001
ER1-S3 58.3±3.38 <0.0001
ER1-S4 59.2±2.73 <0.0001
ER1-S5 62.4±5.19 <0.0001
ER1-S6 62.0±1.80 <0.0001
ER1-S7 61.8±2.25 <0.0001
ER1-S8 59.7±3.24 <0.0001
ER1-S9 51.4±5.91 <0.0001
ER1-S10 48.0±1.80 <0.0001
ER1-S11 49.3±2.86 <0.0001
ER1-S12 53.4±2.02 <0.0001
ER1-S13 47.93±3.2I <0.0001
ER1-S14 64.24±6.25 <0.0001
TAT-ER1 41.45±2.97 <0.0001
表11.多肽抑制肠癌细胞HCT-8迁移
多肽名称 损伤修复面积比 P值
对照 90.3±2.33 >0.9999
ER1 76.2±2.19 <0.0001
ER1-S1 59.4±1.34 <0.0001
ER1-S2 51.3±3.19 <0.0001
ER1-S3 69.3±7.20 <0.0001
ER1-S4 59.4±2.99 <0.0001
ER1-S5 65.4±7.29 <0.0001
ER1-S6 49.0±2.98 <0.0001
ER1-S7 60.9±2.12 <0.0001
ER1-S8 52.3±1.98 <0.0001
ER1-S9 39.5±3.98 <0.0001
ER1-S10 58.0±3.92 <0.0001
ER1-S11 46.4±5.38 <0.0001
ER1-S12 49.4±4.29 <0.0001
ER1-S13 43.2±3.56 <0.0001
ER1-S14 58.4±6.73 <0.0001
TAT-ER1 30.2±4.86 <0.0001
表12多肽抑制胰腺癌细胞SW1990迁移
Figure BDA0002379967540000101
Figure BDA0002379967540000111
表13多肽抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移
多肽名称 损伤修复面积比 P值
对照 88.2±4.39 >0.9999
ER1 78.2±3.92 0.0019
ER1-S1 42.8±4.28 <0.0001
ER1-S2 52.9±3.20 <0.0001
ER1-S3 53.2±5.34 <0.0001
ER1-S4 49.3±3.29 <0.0001
ER1-S5 56.4±5.32 <0.0001
ER1-S6 48.2±4.32 <0.0001
ER1-S7 60.2±1.92 <0.0001
ER1-S8 59.3±3.16 <0.0001
ER1-S9 40.7±4.02 <0.0001
ER1-S10 59.2±2.14 <0.0001
ER1-S11 63.8±3.02 <0.0001
ER1-S12 40.3±4.31 <0.0001
ER1-S13 55.3±3.26 <0.0001
ER1-S14 61.3±4.12 <0.0001
TAT-ER1 48.4±4.36 <0.0001
表14.多肽抑制肝癌细胞HepG2迁移
Figure BDA0002379967540000112
Figure BDA0002379967540000121
实施例8肿瘤皮下生长实验验证多肽抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长
操作步骤如下：
1.实验耗材及试剂：灭菌EP管1.5mL，15mL离心管，枪头，滤网(100目)，脱脂棉球，镊子数把，酒精棉球，无菌1mL注射器，500mL烧杯(灭菌，用前照紫外)，PBS(过滤)，胰酶，血清。
2.实验动物及分组：4-6周龄雄性或雌性(用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231的接种)裸鼠100只(购自北京维通利华实验动物有限公司)，随机分为：ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S9、ER1-S11、ER1-S12和TAT-ER1组及溶剂对照组，每组10只。
3.细胞制备：将贴壁培养的肿瘤细胞用胰酶消化，到达胰酶消化时间后(此时细胞状态应为单细胞且刚好贴壁不掉)，吸掉胰酶。用含有1％血清的PBS按2mL/皿终止，将细胞吹下，移至15mL离心管中，1200转离心5min。弃上清，PBS重悬，过100目滤网一次；细胞计数，调整细胞终浓度至2.5×107/mL。该肿瘤细胞为对数生长期的肺癌细胞A549、结肠癌细胞HCT-8、胰腺癌细胞SW1990、乳腺癌细胞MDA-MB-231和肝癌细胞HepG2直接收集至15mL离心管，1200转离心5min。弃上清，PBS重悬，过100目滤网一次；细胞计数，调整细胞终浓度至2.5×107/mL。
4.肿瘤细胞接种：接种5×106个肿瘤细胞(细胞悬液200μL)于裸鼠左上腹部近腋下皮下。
5.肿瘤生长观察：皮下注射肿瘤细胞后一周用多肽进行治疗(5mg/kg体重，每周两次)，游标卡尺纪录肿瘤大小。肿瘤体积＝(长×宽×宽)/2；
实验结果以mean±SEM表示，并采用t test检验各组与EJ4组间的差异。
接种肿瘤后4周，各组小鼠皮下肿瘤体积如表14～表18所示，肿瘤体积越大表明肿瘤生长越快，因此多肽ER1、ER1-S1、ER1-S2、ER1-S6、ER1-S7、ER1-S9、ER1-S11、ER1-S12和TAT-ER1均能抑制肿瘤细胞在小鼠体内生长。
表15.多肽抑制肺癌细胞A549在小鼠体内生长
多肽名称 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) P值
对照 2293.4±174.3 >0.9999
ER1 2011.8±193.4 0.0031
ER1-S1 1594.4±135.3 <0.0001
ER1-S2 759.3±59.8 <0.0001
ER1-S6 1328.5±161.8 <0.0001
ER1-S7 684.7±56.7 <0.0001
ER1-S9 734.2±58.3 <0.0001
ER1-S11 698.4±64.5 <0.0001
ER1-S12 475.8±42.3 <0.0001
TAT-ER1 384.2±34.2 <0.0001
表16.多肽抑制肠癌细胞HCT-8在小鼠体内生长
Figure BDA0002379967540000122
Figure BDA0002379967540000131
表17.多肽抑制胰腺癌细胞SW1990在小鼠体内生长
多肽名称 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) P值
对照 2275.4±165.9 >0.9999
ER1 1879.6±146.8 <0.0001
ER1-S1 1211.9±110.5 <0.0001
ER1-S2 564.3±45.6 <0.0001
ER1-S6 1021.5±114.3 <0.0001
ER1-S7 546.8±44.3 <0.0001
ER1-S9 583.4±48.2 <0.0001
ER1-S11 416.6±60.1 <0.0001
ER1-S12 539.2±41.9 <0.0001
TAT-ER1 412.8±54.4 <0.0001
表18.多肽抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231在小鼠体内生长
多肽名称 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) P值
对照 2324.5±161.9 >0.9999
ER1 2019.3±182.2 0.0009
ER1-S1 1639.4±110.2 <0.0001
ER1-S2 1376.3±56.2 <0.0001
ER1-S6 1212.4±133.2 <0.0001
ER1-S7 1302.9±43.2 <0.0001
ER1-S9 1402.2±32.7 <0.0001
ER1-S11 1485.4±44.5 <0.0001
ER1-S12 1502.3±32.4 <0.0001
TAT-ER1 1192.5±55.4 <0.0001
表19.多肽抑制肝癌细胞HepG2在小鼠体内生长
多肽名称 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) P值
对照 2193.6±158.3 >0.9999
ER1 1857.4±126.4 <0.0001
ER1-S1 1494.7±109.3 <0.0001
ER1-S2 1529.4±57.4 <0.0001
ER1-S6 1386.4±126.7 <0.0001
ER1-S7 1694.4±56.7 <0.0001
ER1-S9 1493.3±39.2 <0.0001
ER1-S11 1402.4±49.4 <0.0001
ER1-S12 1583.5±53.6 <0.0001
TAT-ER1 1312.3±39.2 <0.0001
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Figure BDA0002379967540000141
Figure BDA0002379967540000151
Figure BDA0002379967540000161
Figure BDA0002379967540000171
Figure BDA0002379967540000181
序列表
<110> 中国医学科学院药物研究所
<120> 一种多肽或其衍生物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用
<160> 17
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser
1 5 10 15
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ser Pro Lys Ala Ser Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 3
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Pro Ser Lys Ala Asn Ser Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 4
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Pro Lys Ser Ala Asn Lys Ser Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 5
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Pro Lys Ala Ser Asn Lys Glu Ser Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 6
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Pro Lys Ala Asn Ser Lys Glu Ile Ser Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 7
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Pro Lys Ala Asn Lys Ser Glu Ile Leu Ser Asp Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 8
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ser Ile Leu Asp Ser Glu Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 9
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Ser Leu Asp Glu Ser Ala Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 10
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Ser Asp Glu Ala Ser Tyr Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 11
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Ser Glu Ala Tyr Ser Val Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 12
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ser Ala Tyr Val Ser Met
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 13
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Ser Tyr Val Met Ser
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 14
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Ser Val Met Ala
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 15
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Ser Met Ala
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 16
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Lys Ala Asn Lys
1 5 10 15
Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser
20 25
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
1 5 10

Claims (10)

1.一种多肽或其衍生物，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，所述的衍生物为将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中的两个氨基酸替换为侧链可相连的非天然氨基酸。
2.根据权利要求1所述的多肽或其衍生物，其特征在于，所述侧链可相连的非天然氨基酸为S-戊烯丙氨酸。
3.根据权利要求1所述的多肽或其衍生物，其特征在于，所述SEQ ID No.1中氨基酸的替换位置分别为序列表SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的第i位和第i+4位的氨基酸，其中，i为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14。
4.根据权利要求3所述的多肽或其衍生物，其特征在于，所述第i位替换成的非天然氨基酸为S-戊烯丙氨酸，第i+3或i+4位替换成的非天然氨基酸为S-戊烯丙氨酸。
5.根据权利要求1～4中任一项多肽或其衍生物，其特征在于，所述的多肽或其衍生物为:
a.)SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ IDNo.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、SEQ ID No.10、SEQ ID No.11、SEQ IDNo.12、SEQ ID No.13、SEQ ID No.14、SEQ ID No.15或SEQ ID No.16氨基酸序列；
或者，
b.)在a.)中的氨基酸序列经过替换、缺失或添加一个或几个氨基酸后形成的多肽或其衍生物。
6.根据权利要求1所述的多肽或其衍生物，其特征在于，所述的衍生物为所述多肽与细胞穿膜肽接连所形成的嵌合肽，所述的细胞穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端；优选，当细胞穿膜肽为TAT肽时，所述多肽的衍生物的氨基酸序列为SEQ ID No.16所示。
7.如权利要求1～6任一项所述的多肽或其衍生物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为肺癌、肠癌、胰腺癌、乳腺癌或者肝癌。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肺癌为非小细胞肺癌或小细胞肺癌；所述肠癌为结肠癌或直肠癌；所述胰腺癌为胰腺导管腺癌、胰腺腺泡细胞癌；所述乳腺癌为非浸润性乳腺癌、早期浸润性乳腺癌、浸润性特殊类型乳腺癌或浸润性非特殊类型乳腺癌；所述的肝癌为原发性肝癌或继发性肝癌。
10.一种药物组合物，其特征在于，其含有如权利要求1～5任一项所述的多肽或其衍生物的一种或多种药用载体。
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