CN113174338B - 一种黑木耳组织分离培养基及其应用 - Google Patents
一种黑木耳组织分离培养基及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113174338B CN113174338B CN202110593712.9A CN202110593712A CN113174338B CN 113174338 B CN113174338 B CN 113174338B CN 202110593712 A CN202110593712 A CN 202110593712A CN 113174338 B CN113174338 B CN 113174338B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- black fungus
- culture medium
- camphorwood
- auricularia auricula
- tissue
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 73
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims abstract description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 40
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 claims description 35
- 244000082946 Tarchonanthus camphoratus Species 0.000 claims description 35
- 235000005701 Tarchonanthus camphoratus Nutrition 0.000 claims description 35
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 20
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 20
- 241001149430 Auricularia auricula-judae Species 0.000 claims description 18
- 235000000023 Auricularia auricula Nutrition 0.000 claims description 17
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 14
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 13
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 10
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 claims description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 claims description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 241001088162 Primula auricula Species 0.000 claims 5
- 235000006894 Primula auricula Nutrition 0.000 claims 5
- 241000144128 Lichtheimia corymbifera Species 0.000 claims 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- 230000028644 hyphal growth Effects 0.000 claims 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 27
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 32
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 241000221377 Auricularia Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物培养技术领域，特别涉及一种黑木耳组织分离培养基及其应用，本发明通过对PDA培养基进行改良，在原料中添加樟木，并进行水煮提取，得到樟木PDA培养基，通过对该培养基进行进一步的研究发现，该培养基具有明显的促进黑木耳菌丝生长、抑制毛霉菌的效果，为此，可用于黑木耳的组织分离。使用该培养基进行黑木耳组织分离时，不需要消毒步骤，仅需用水清洗干净耳片，再将耳片接入培养基培养，就能完成对黑木耳的组织分离。本发明特别适用于在实验条件不好的野外组织分离黑木耳菌种，是一种简便、高效、快捷的黑木耳菌种组织分离方法，可有效降低黑木耳野外组织分离难度，提高菌种分离效率。
Description
【技术领域】
本发明涉及微生物培养技术领域，特别涉及一种黑木耳组织分离培养基及其应用。
【背景技术】
在收集食用菌野生种质资源或提纯复壮栽培种质资源时，为了获得该品种的纯培养菌种，本领域技术人员通常采用组织分离方法获得相应种质的菌丝培养物作物菌种，再通过反复扩繁和保存菌丝培养物达到长久利用该种质资源的目的。组织分离中避免或降低杂菌感染是获得纯种菌种的关键，在对一些子实体厚实的食用菌，例如蘑菇、香菇等进行组织分离时，本领域技术人员往往通过直接切取其内部组织块，即可避免杂菌感染。而对一些子实体很薄的食用菌，例如木耳等，直接挑取内部组织的难度大，只能先进行表面消毒、然后连同外表组织一起切下培养。表面消毒通常采用的试剂是75％酒精或0.1％升汞，但表面消毒效果往往不理想，前者很难达到完全消毒效果，后者很容易使组织块失活，从而导致组织分离失败。而且在开展野外资源收集工作中，有时不方便携带液体消毒剂，组织块携带杂菌更无法避免。因此，黑木耳菌种的组织分离比其他食用菌品种难度更大，感染杂菌导致组织分离失败的风险更高。
黑木耳组织分离常用的培养基是PDA或以PDA成分为主的合成培养基。用PDA培养基分离黑木耳时，黑木耳菌丝萌发慢、而且菌丝细弱，一旦感染杂菌特别是霉菌，杂菌很快会覆盖或抑制黑木耳菌丝，使得黑木耳菌丝不能与杂菌分开，从而导致分离成功率较低，不利于菌种的获得。
为此，有必要针对上述缺陷，研发出一种针对在野外条件下组织分离黑木耳菌种的培养基，不需要消毒就能实现对野生黑木耳种质进行组织分离纯化，获得纯种的黑木耳菌种，降低组织分离难度，提高菌种分离效率。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要研发出一种针对在野外条件下组织分离黑木耳菌种的培养基，不需要消毒就能实现对野生黑木耳种质进行组织分离纯化，获得纯种的黑木耳菌种，降低黑木耳组织分离难度，提高菌种分离效率。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
黑木耳组织分离培养基，所述培养基的原料为：樟木、马铃薯、葡萄糖、琼脂和水；所述马铃薯、葡萄糖、琼脂的质量分别为200g、20g、20g。
进一步的，所述樟木由去皮樟木屑100g和0-10g的樟木叶组成。
进一步的，所述樟木由去皮樟木屑100g和5g的樟木叶组成。
本发明还包括一种制备黑木耳组织分离培养基的方法，所述方法为：
(1)按所述质量称量各原料；
(2)将樟木放入适量水中煮沸20min，过滤后取滤液；
(3)向步骤(2)的滤液中加入马铃薯煮沸20min，过滤后取滤液；
(4)将琼脂放入水中加入融化得到琼脂液；
(5)混合步骤(3)滤液、步骤(4)琼脂液，加入葡萄糖搅拌均匀，然后用蒸馏水定容至1000mL，于121℃灭菌20min。灭菌好的培养基分装于培养皿中，冷却凝固后每皿加入5mg/ml的卡那霉素100μL，涂布均匀即得。
本发明还包括所述的黑木耳组织分离培养基在分离黑木耳野外种质中的应用。
本发明还包括所述的黑木耳组织分离培养基在促进黑木耳菌丝生长和/或抑制毛霉菌生长上的应用。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明通过对PDA培养基进行改良，在原料中添加樟木，并进行水煮提取，得到樟木PDA培养基，通过对该培养基进行进一步的研究发现，该培养基具有明显的促进黑木耳菌丝生长、抑制毛霉菌的效果，使得黑木耳菌丝先于杂菌萌发生长，从而获得分离成功。为此，可用该培养基来对黑木耳菌种进行组织分离，且不需要使用消毒步骤，仅使用水清洗干净耳片就能完成对黑木耳组织的分离，特别适用于在实验条件不好的野外采集分离黑木耳菌种，是一种简便、高效、快捷的黑木耳菌种组织分离方法；有效降低的黑木耳的野外组织分离难度，提高菌种分离效率。
2、通过对该培养基的研究发现：该培养基能有效提高黑木耳菌丝生长，抑制毛霉菌生长。
【附图说明】
图1为黑木耳组织块在不同培养基的菌丝萌发情况图；图中左边为PDA培养基，右边为本发明实施例1的③号培养基；
图2为黑木耳菌丝在不同培养基中培养1d后的生长情况图；图中，左边为PDA培养基，右边为实施例1的③号培养基；
图3为黑木耳菌丝在不同培养基中培养5d后的生长情况图；图中，左边为实施例1的③号培养基；右边为PDA培养基；
图4为毛霉菌丝在不同培养基上的生长情况对比图；图中AB均为本申请实施例1的③号培养基，CD为PDA培养基。
【具体实施方式】
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
实施例1：
在申请人的前期研究中发现，申请人采用常规的抗生素并不能达到良好的效果，这是因为，常规抗生素通常只抑制细菌生长，而对毛霉菌等真菌的抑制作用不大；添加抗真菌药剂则会同时抑制黑木耳菌丝的萌发和生长，不利于黑木耳的组织分离。野外的木耳生长环境较为复杂，耳片表面细菌和霉菌等各类杂菌均普遍存在，仅添加抗生素很难获得组织分离成功。申请人发现，现有技术中有报道，某些植物提取液成分具有抑菌效果，经过对多种不同植物的实验，申请人发现某些植物提取液成分抑菌效果并不好，有些植物提取液甚至抑制黑木耳菌丝萌发和生长，为此，经过大量的前期原料筛选，申请人得出利用樟木水提取液，效果突出，因此，本申请采用樟木水提液做为抑菌剂，即采用熬煮方法获得的樟木水提液，预处理方法粗放，其中的成分较为复杂除了含有抑菌成分外，还含有营养成分，即能实现抑菌又能满足对黑木耳菌种的营养需求，为此，申请人在实验室内做了几个樟木水提物培养基组织分离黑木耳的实验，具体如下：
1、试验材料：供试菌株野生黑木耳采集于广西百色田林县乐里镇那光村大坝屯；
2、培养基：
①号培养基(PDA，CK)：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，1000ml。
②号培养基：樟木屑100g，马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，1000ml。
③号培养基：樟木屑100g，樟木叶5g，马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，1000ml。
④号培养基：樟木屑100g，樟木叶10g马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，1000ml。
PDA培养基制备：按常规的母种培养基方法制作。
上述②-④号培养基的樟木屑均为去皮木屑，培养基的制备方法为：
(1)按上述质量称量各原料：原料中樟木屑和/或樟木叶均为晒干材料；
(2)将樟木屑和/或樟木叶放入500ml蒸馏水中煮沸20分钟，过滤后取滤液得樟木提取液。
(3)向步骤(2)的滤液中加入马铃薯一起煮沸20min，过滤并取滤液，得到马铃薯樟木提取液。
(4)将琼脂置于500ml蒸馏水中煮沸至琼脂完全融化，加入葡萄糖和马铃薯樟木提取液，充分搅拌均匀，并定容至1000ml，搅拌均匀后分装于三角瓶等容器中，再于121℃下高压灭菌20min。
(5)将灭菌好的培养基冷却至50-60℃时趁热倒入直径90mm的培养皿，在超净工作台内自然晾干2天后，每皿加入5mg/ml的卡那霉素100μL，涂布均匀即得。
组织分离方法：
1、试验材料：
材料1：Ty026，野生黑木耳菌株，采集于广西百色田林县乐里镇那光村大坝屯；
材料2：Ty071，野生黑木耳菌株，采集于广西百色田林县定安镇那雄村河口屯。
2、试验方法：
(1)黑木耳耳片处理：将野外采集到的黑木耳耳片置于流动的水龙头水反复冲洗，把耳片表面的杂尘或杂质冲洗干净，然后置于洁净培养皿中自然晾干。
(2)接种组织块：用无菌解剖刀将耳片四周边缘切除，选择耳片近边缘没有筋的平整部位，切取大小约0.5cm×0.5cm的组织块，将组织块接种于分离培养基。
(3)培养：接种后的培养基放置于28℃培养箱中恒温培养，分别于培养后1d、2d、3d观察记录组织块菌丝萌发快慢、菌丝长势及杂菌感染情况。
(4)纯化培养：培养5-6d后，挑取无杂菌感染、菌丝雪白、健壮、整齐的菌落尖端菌丝块接种于PDA培养基中进行纯化培养。获得黑木耳菌丝纯培养物即表明该黑木耳菌种组织分离成功。
其中萌发率、污染率、分离成功率的计算公式如下：
得到的实验结果具体如表1所示：
表1不同培养基对不同野生黑木耳组织分离试验结果
由表1可知，樟木培养基对两种不同生境下的野生黑木耳菌株均有良好的促生长和抑制染菌的能力，两者均体现出：樟木的培养基(②-④)的萌发天数低于CK组；萌发率、分离成功率远高于CK组；污染率远低于CK组；而在培养基②-培养基④之间，培养基③的萌发天数最短、萌发率、分离成功率最高、污染率最低为最优实验组；对照组均出现霉菌感染导致组织分离失败的情况。说明本申请的樟木培养基对黑木耳菌种的分离纯化具有一定的普适性。
实施例2：
本实施例研究木耳组织在培养基上的菌丝萌发和生长状况：
1、实验培养基：实施例1的③号培养基、PDA培养基
2、实验方法：采用实施例1的实验方法进行培养，在步骤(3)培养2d后对平板进行生长观察，得到的观察结果如图1：
图1为分离培养2d后黑木耳组织在平皿培养基上的菌丝萌发情况图；图中左边为PDA培养基，右边为本发明实施例1的③号培养基；从图中可见：右边的野生黑木耳组织周边有明显的白色菌丝，而且菌丝状态体现为：长势强、洁白、浓密、整齐、无污染。而右边平皿PDA培养基上木耳组织周围仅看见很少量的白色菌丝，明显可见在③号培养基上的木耳组织萌发能力要优于PDA培养基上的木耳组织。
实施例3：
对黑木耳菌丝的生长影响试验：
1、实验培养基：实施例1的③号培养基、PDA培养基
2、实验方法：将采用实施例1、步骤(4)培养5-6天结束后的黑木耳菌丝，用打孔器(直径6mm)取菌块。将菌块圆片分别接种到PDA培养基、实施例1配方③培养基中，接种后放置28℃培养箱中进行进一步纯化培养，培养5天后观察菌丝生长情况，测量菌丝生长速率，具体结果如表2所示：
表2黑木耳菌丝在不同培养基上的生长情况
由表2可知，采用本申请实施例1(配方③培养基)做为纯化培养基，其黑木耳菌丝的生长速度明显高于PDA培养基，且菌丝的生长状态比PDA培养基更优。
具体菌丝的生长状态可参见图2-图3
图2为纯化培养1d后黑木耳菌丝的生长情况对比图，图中，左边为PDA培养基，右边为实施例2的③号培养基；从图中可见，右边培养基上的菌丝圈明显大于左边的菌丝圈。
图3为纯化培养5d后黑木耳菌丝的生长情况对比图，图中，左边为实施例2的③号培养基；右边为PDA培养基；从图中可见，左边培养基上的菌丝圈明显大于右边的菌丝圈。且左边平板的菌丝圈表现出：菌丝浓白、粗壮、浓密、整齐的性状，由此说明本申请的培养基能有效促进云耳菌丝的生长。
实施例4：
分离中常见毛霉杂菌在PDA培养基和本发明培养基上的生长对比试验
毛霉生长速度快，抗生素难以抑制。因此，在常规黑木耳组织分离中，一旦感染毛霉菌，即使黑木耳菌丝已经萌发，也会被毛霉菌覆盖，就无法纯化，组织分离也意味着失败。
1、实验培养基：实施例1的③号培养基、PDA培养基
2、实验方法：将平皿培养4天的霉菌菌丝，用打孔器(直径6mm)取菌块。将菌块圆片分别接种到PDA培养基、发明③号培养基中，接种后放置28℃培养箱中培养，培养1-2天后观察菌丝并测量菌丝生长速率。得到的结果如表3所示：
表3毛霉在不同培养基上的生长情况
| 培养基 | 霉菌菌丝生长速度(mm/d) | 霉菌菌丝生长状态 |
| PDA | 35.51 | 生长快，菌丝白，浓密。 |
| 实施例1(③号) | 21.19 | 生长慢，菌丝淡灰色，稀疏。 |
由表3可知，霉菌菌丝的生长速度明显低于PDA培养基，说明本申请的培养基具有抑制霉菌生长的效果。
具体如图4所示，图4为毛霉菌丝在不同培养基上的生长情况对比图；图中AB均为本申请实施例1的③号培养基，CD为PDA培养基，从图中可见，AB培养基上的菌丝圈明显小于CD，且AB培养基上的毛霉菌丝生长速度明显减慢，而且菌丝细弱，说明发明培养基对杂菌毛霉有一定的抑制作用。
综上所述，本申请的樟木培养基能很好的对黑木耳菌种进行分离、纯化，且对毛霉有较强的抑制作用，特别能适用于野外组织分离黑木耳菌种资源，而且在分离操作时不需要用消毒剂进行消毒，减少了消毒步骤，相对于常规方法更为简便，是一种简便、快速、高效分离纯化野生黑木耳菌种的培养基，能大幅提高操作人员的工作效率。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (5)
1.黑木耳（Auricularia auricula）组织分离培养基，其特征在于，所述培养基的原料为：樟木滤液、马铃薯、葡萄糖、琼脂和水；所述马铃薯、葡萄糖和琼脂的质量分别为200g、20g和20g；
樟木由去皮樟木屑100g和0-10g的樟木叶组成；
樟木滤液的制备方法为：将樟木放入适量水中煮沸20min，过滤后取滤液。
2.根据权利要求1所述的黑木耳（Auricularia auricula）组织分离培养基，其特征在于，所述樟木由去皮樟木屑100g和5g的樟木叶组成。
3.一种制备如权利要求1或2任意一项所述黑木耳（Auricularia auricula）组织分离培养基的方法，其特征在于，所述方法为：
（1）按所述质量称量各原料；
（2）将樟木放入适量水中煮沸20min，过滤后取滤液；
（3）向步骤（2）的滤液中加入马铃薯煮沸20min，过滤后取滤液；
（4）将琼脂放入水中加热融化得到琼脂液；
（5）混合步骤（3）滤液、步骤（4）琼脂液，加入葡萄糖搅拌均匀，然后用蒸馏水定容至1000mL，灭菌后分装于培养皿中，冷却凝固后每皿加入5mg/ml的卡那霉素100μL，涂布均匀即得。
4.如权利要求1或2任意一项所述的黑木耳（Auricularia auricula）组织分离培养基在分离黑木耳（Auricularia auricula）野外种质中的应用。
5.如权利要求1或2任意一项所述的黑木耳（Auricularia auricula）组织分离培养基在促进黑木耳（Auricularia auricula）菌丝生长和/或抑制毛霉菌（Mucor corymbifer）生长上的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110593712.9A CN113174338B (zh) | 2021-05-28 | 2021-05-28 | 一种黑木耳组织分离培养基及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110593712.9A CN113174338B (zh) | 2021-05-28 | 2021-05-28 | 一种黑木耳组织分离培养基及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113174338A CN113174338A (zh) | 2021-07-27 |
| CN113174338B true CN113174338B (zh) | 2022-12-20 |
Family
ID=76928046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110593712.9A Active CN113174338B (zh) | 2021-05-28 | 2021-05-28 | 一种黑木耳组织分离培养基及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113174338B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1309176A (zh) * | 2000-02-18 | 2001-08-22 | 食品工业发展研究所 | 樟芝分离株、制备樟芝培养物的方法及所得的产物 |
| WO2005110352A1 (en) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | The Procter & Gamble Company | Personal care compositions and methods regulating mammalian growth |
| CN105766382A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-07-20 | 福建华神樟芝生物科技有限公司 | 一种可提高三萜含量的牛樟芝培育方法 |
| CN106358762A (zh) * | 2016-09-08 | 2017-02-01 | 福建省中医药研究院 | 一种沉水樟替代牛樟木繁育樟芝的培育方法 |
| CN112358972A (zh) * | 2020-10-21 | 2021-02-12 | 宜宾学院 | 一种消毒油樟表面并分离培养其内生真菌的方法 |
| WO2022024097A1 (en) * | 2020-07-31 | 2022-02-03 | Ai Pharmaceuticals Jamaica Limited | Antiviral compositions and methods for their use |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050255059A1 (en) * | 2004-05-10 | 2005-11-17 | Oblong John E | Personal care compositions and methods regulating mammalian hair growth |
| CN104673685B (zh) * | 2015-03-16 | 2018-11-16 | 广西中医药大学 | 一种两面针内生真菌的分离培养基 |
| CN104876691A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-09-02 | 苏州葛家坞生物科技有限公司 | 一种黑木耳栽培用培养料及其制备方法 |
| CN104904498A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-09-16 | 兴安县铭晖食用菌种植有限公司 | 一种黑木耳的栽培方法 |
| CN105543101B (zh) * | 2015-10-11 | 2018-09-04 | 福建省中延菌菇业有限公司 | 一种牛樟芝母种制备方法 |
| CN105613049B (zh) * | 2016-03-09 | 2018-12-14 | 上海市农业科学院 | 一种可分解松柏树木屑的黑木耳菌种的栽培方法 |
| CN109006178A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-18 | 贵州向阳雨农业开发有限公司 | 一种木耳培养基及其制备方法 |
| CN109220530B (zh) * | 2018-10-29 | 2021-01-08 | 广西壮族自治区农业科学院微生物研究所 | 一种黑木耳菌种及其应用 |
| IL300067A (en) * | 2020-07-21 | 2023-03-01 | Ai Pharmaceuticals Jamaica Ltd | Preparations and methods for the treatment of cancers |
-
2021
- 2021-05-28 CN CN202110593712.9A patent/CN113174338B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1309176A (zh) * | 2000-02-18 | 2001-08-22 | 食品工业发展研究所 | 樟芝分离株、制备樟芝培养物的方法及所得的产物 |
| WO2005110352A1 (en) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | The Procter & Gamble Company | Personal care compositions and methods regulating mammalian growth |
| CN105766382A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-07-20 | 福建华神樟芝生物科技有限公司 | 一种可提高三萜含量的牛樟芝培育方法 |
| CN106358762A (zh) * | 2016-09-08 | 2017-02-01 | 福建省中医药研究院 | 一种沉水樟替代牛樟木繁育樟芝的培育方法 |
| WO2022024097A1 (en) * | 2020-07-31 | 2022-02-03 | Ai Pharmaceuticals Jamaica Limited | Antiviral compositions and methods for their use |
| CN112358972A (zh) * | 2020-10-21 | 2021-02-12 | 宜宾学院 | 一种消毒油樟表面并分离培养其内生真菌的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 外生菌根真菌菌剂的制备及其对松苗生长效果的研究;周玉芝等;《林业科学研究》;19911030(第05期);全文 * |
| 广西云耳耐高温菌株的室内筛选;陈雪凤等;《西南农业学报》;20180128(第01期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113174338A (zh) | 2021-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103436448B (zh) | 一种稻曲病菌菌种长期保存的方法 | |
| CN113481105B (zh) | 一种拟茎点霉属真菌新菌株、制备方法及用途 | |
| CN111876336B (zh) | 胶膜菌属真菌及其促进白旗兜兰种子萌发形成幼苗的应用 | |
| CN115710560B (zh) | 一种有效防控苹果腐烂病的菌株组合及其应用 | |
| CN101294137B (zh) | 一种节菱孢菌株及其用途 | |
| CN110551637B (zh) | 一种来自黄芪根部的高效抑制番茄灰霉病菌的棘壳孢菌及其应用 | |
| CN117925421B (zh) | 一株翠绿聚孢霉及其在小麦土传病害防治中的应用 | |
| CN113862156B (zh) | 尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)K2018-1418及其应用 | |
| CN113174338B (zh) | 一种黑木耳组织分离培养基及其应用 | |
| CN101984042B (zh) | 马铃薯晚疫病致病菌的保存方法及专用培养基 | |
| CN111100797B (zh) | 一种促进白及种子萌发形成幼苗的菌株及其应用 | |
| CN112280730A (zh) | 一种香菇菌种提纯复壮方法 | |
| CN105483032B (zh) | 马铃薯晚疫病菌单孢子囊分离方法 | |
| CN108260476B (zh) | 一种羊肚菌菌种分离的方法 | |
| CN106069193A (zh) | 一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法 | |
| CN116004392B (zh) | 一种牛樟共生真菌yafef009及其分离方法 | |
| CN113832038B (zh) | 木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）K2017-696及其应用 | |
| CN105543103B (zh) | 一种甘蔗梢腐病菌的简易分离方法 | |
| CN104928211B (zh) | 一种具有拮抗活性的甘蔗内生菌及其应用 | |
| CN110872564A (zh) | 一种野生木耳组织分离方法 | |
| CN117701397B (zh) | 一种促进杜鹃兰种子萌发的小鬼伞属庭院小鬼伞菌及其应用 | |
| CN112438158B (zh) | 枝瑚菌菌株及其应用以及用于人工培育枝瑚菌的母种培养基及其应用 | |
| CN113416656B (zh) | 地耳草内生真菌菌株hubu0122及其应用 | |
| CN113355247B (zh) | 地耳草内生真菌菌株hubu0121及其应用 | |
| CN116240114B (zh) | 一株桑树桑黄菌yx2、提取物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |