CN106069193A - 一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法 - Google Patents

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    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms

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Abstract

本发明涉及食用菌培养技术领域，公开了一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法，在培养皿外用Parafilm封口膜封口，以实现在培养皿中栎松口蘑菌种长期培养，减少菌种培养过程中的污染，方便观察和测量栎松口蘑菌丝的生长。本发明方法操作简单，容易获得纯菌种，且操作成本低，又不易带入杂菌。

Description

一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法
技术领域
本发明涉及食用菌培养技术领域，特别涉及一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法。
背景技术
栎松口蘑又称傻松茸、栎松茸、傻松口蘑、青红松茸或青冈菌等，是珍稀食用真菌，典型的营养共生型外生菌根菌。由于难以合成代替活树根系的营养和生境，驯化栽培十分艰难，菌种的分离和培养也是难题之一。松口蘑的菌丝体在人工条件下生长很缓慢，而且培养基容易干燥且菌种易污染，因此寻找合适的培养方法尤为重要。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是在于提供一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法，在培养皿外用Parafilm封口膜封口，实现在培养皿中栎松口蘑菌种长期培养，减少菌种培养过程中的污染，方便观察和测量栎松口蘑菌丝的生长。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。
一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其过程为：
(1)选取新鲜松口蘑子实体，在无菌室内无菌条件下将松口蘑子实体用70％酒精擦洗；
(2)将表面消毒过的子实体放在无菌培养皿内，用解剖刀把子实体纵向切开，从菌肉、菌褶和菌柄处分别挑取黄豆粒大小的组织块，接种到母种培养基上，每个部位10个重复，共30个培养皿，随后将培养皿用Parafilm封口膜密封，最后将培养皿放置于20-25℃的恒温培养箱内避光培养20-60d，定期观察并做好记录；
(3)待菌落直径长到80-100mm，转皿进一步纯化。
进一步地，所述母种培养基是将1000mL PDA培养基在121℃灭菌20min后加入VB10.5mg和烟酸0.5mg。
进一步地，所述PDA培养基包含葡萄糖20.0g、马铃薯200.0g、琼脂15.0g、自来水1000.0mL，pH值自然。
进一步地，所述VB1使用前采用细菌过滤器过滤除菌。
进一步地，所述烟酸使用前采用细菌过滤器过滤除菌。
本发明中采用的Parafilm封口膜是一种无色无味、半透明的热塑性塑料，具有良好的柔软性、可塑性、自动密封性，容易切割，可以快速有效地密封实验器皿，具有防水防湿的性能，能够有效阻止样品发挥和污染，适用于许多重要实验和技术方面的理想工具。
本发明方法操作简单，容易获得纯菌种，且操作成本低，又不易带入杂菌。
附图说明
以下结合附图与具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
图1为实施例中栎松口蘑母种在固体平板上的分离情况，其中A是菌肉分离物，B是菌褶分离物。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例
(1)母种培养基的制作：将200g马铃薯去皮洗净，切成小块，加水煮沸30min后，纱布过滤，取其滤液，补足水分至l000mL，趁热加入20g葡萄糖和15g琼脂使之溶化，pH自然，121℃灭菌20min后加入VB1和烟酸(VB1和烟酸采用细菌过滤器过滤除菌)。
(2)栎松口蘑子实体组织分离纯化：在超净工作台内无菌条件下将松口蘑子实体用70％酒精擦洗，将表面消毒过的子实体放在无菌培养皿内，用解剖刀把子实体纵向切开，从菌肉、菌褶和菌柄处分别挑取黄豆粒大小的组织块，接种到上述分离培养基上，10个重复，随后将培养皿用Parafilm封口膜密封，最后将培养皿放置于20-25℃的恒温培养箱内避光培养20-60d，定期观察并做好记录；待菌落直径长到80-100mm，转皿进一步纯化。
对林芝市栎松口蘑子实体的菌肉、菌褶和菌柄进行组织分离，其萌发状况参照表1。参照图1，菌褶组织块在培养25d后，开始萌发，长出白色菌丝，平均萌发率为50.0％，而菌肉组织块在培养30d后开始萌发，长出白色菌丝，平均萌发率为10.0％，菌柄组织没有萌发。
表1栎松口蘑组织的萌发状况
以上所述，仅是本发明的较佳案例，并不对本发明做出任何限制，凡是针对本发明技术内容对以上实施案例所做的任何简单修改、变更、模仿均属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (5)

1.一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，其过程为：
(1)选取新鲜栎松口蘑子实体，在无菌室内无菌条件下将栎松口蘑子实体用70％酒精擦洗；
(2)将表面消毒过的子实体放在无菌培养皿内，用解剖刀把子实体纵向切开，从菌肉、菌褶和菌柄处分别挑取黄豆粒大小的组织块，接种到母种培养基上，菌肉、菌褶、菌柄各做10个培养皿，共30个培养皿；随后将培养皿用Parafilm封口膜密封；最后将培养皿放置于20-25℃的恒温培养箱内避光培养20-60d，定期观察并做好记录；
(3)待菌落直径长到80-100mm，转皿进一步纯化。
2.根据权利要求1所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述母种培养基是将1000mL PDA培养基在121℃灭菌20min后加入VB10.5mg和烟酸0.5mg。
3.根据权利要求2所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述PDA培养基包含葡萄糖20.0g、马铃薯200.0g、琼脂15.0g、自来水1000.0mL，pH值自然。
4.根据权利要求2所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述VB1使用前采用细菌过滤器过滤除菌。
5.根据权利要求2所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述烟酸使用前采用细菌过滤器过滤除菌。
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