CN111670752A - 一种香菇子实体组织分离的方法 - Google Patents

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常堃
蔡婧
李军
李世华
刘杰
李为民
张九玲
肖艳
田继成
齐名师
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Abstract

本发明公开了香菇子实体组织分离的方法，涉及香菇菌种制作的技术领域，其包括以下步骤：步骤S1.选择新鲜健康的小菇蕾，小菇蕾为香菇原基顶部已完成褐变形成菌盖的子实体；步骤S2.对小菇蕾进行组织分离，自菌盖处取得菌肉；步骤S3.将菌肉放入PDA培养皿，并将培养皿倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；步骤S4.用接种铲挂掉菌肉表面菌丝，并将边缘菌块转入新的PDA平板中进行活化培养；步骤S5.将进行活化培养的边缘菌块倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；步骤S6.用接种铲挂掉边缘菌块表面菌丝，并将边缘菌块移入PDA试管中；待菌丝长满PDA试管即可。

Description

一种香菇子实体组织分离的方法
技术领域
本发明涉及香菇菌种制作的技术领域，具体来讲是一种香菇子实体组织分离的方法。
背景技术
香菇属于异宗结合担子菌，担孢子可以说是香菇生活史的开端。香菇成熟后会喷射出大量单核担孢子，担孢子萌发成单核菌丝，单核菌丝生长较慢无法发育成子实体，可亲和的单核菌丝相互交配形成双核菌丝(我们生产中食用菌的香菇菌丝均为双核菌丝)。双核菌丝经过生长发育后，纽结形成香菇原基，由原基发育成菇蕾和成熟的子实体。
菌种的产生及应用，是香菇人工栽培得到快速发展的源头，直接决定着香菇的产量和质量。组织分离是获得香菇原种的技术手段，不同的分离方法也决定了香菇菌丝的活力。随着香菇产业的快速发展，对香菇菌种的需求量越来越高，受菌种厂自身设施设备以及技术条件的限制，多地出现了菌种退化，活力不强的现象，者多是由于菌种厂多次使用香菇原种进行制种，导致香菇菌丝长时间无性生长，导致菌丝出现生长活力弱甚至退化现象，因此研究一种香菇组织分离方法，获得优质香菇母种，势在必行。
专利文件《一种食用菌菌种组织分离以外的取种方法》(专利申请号：201210034355.3)采取食用菌试管母种或瓶(袋)装原种培养时长出的原基进行组织分离，转管提纯。将长有原基的食用菌试管母种或瓶(袋)装原种在无菌环境下用小刀将长势较强、即将分化形成菇蕾的原基个体割取绿豆粒大小的小块，然后用接种钩移接到空白PDA斜面试管的培养基上。组织分离后，培养菌丝。当菌丝长约占试管内培养基面上1/3时，在无菌环境下挑取生长迅猛、旺盛的菌丝转接至空白PDA斜面试管进行菌种提纯。但是，该技术方案分离的为即将行成原基的组织，香菇菌种老化也会形成该组织，对此组织进行分离，很难获得有活力菌丝。
专利文件《一种金针菇白色变异菌种分离培养与鉴定方法》(专利申请号：201110216057.1)介绍的是金针菇变异菌种的分离与鉴定方法，且主要以鉴定变异菌株为主，分离方法是一般方法，同时分离成活率低，污染率高，同时金针菇子实体较小且菌柄空心，只能采取以上方法进行分离。
专利文件《正红菇菌根型食用菌的分离培养保存方法》(专利申请号：201210238171)介绍的是一种菌根菌正红菇的菌丝分离方法，菌根菌为共生菌，菌丝需要与树木根系形成菌根系统，才能正常生长发育，因此分离所得菌丝活力较弱，只能作为保存材料，无法作为菌种进行生产。
专利文件《野生兰州湾脆蘑菌种分离及其驯化栽培方法》(专利申请号：201310569576)介绍的是野生兰州湾脆蘑的分离及驯化，同时以驯化为主，同时分离部位为盖柄交接处，分离所得菌丝用于制作液体菌种进行驯化栽培，可能是菌丝活力较弱，无法进行固体菌种制作，是否有更好的分离方法及分离部位，可直接将分离菌丝进行固体菌种的制作，还需进行研究。
专利文件《一种通过阴干子实体保存和分离羊肚菌菌种的方法》(专利申请号：201510106417)获取菌丝的方法实则为孢子分离法，本发明是子实体的组织分离方法，属于无性分离法，孢子分离时可能会出现部分自交产生新的杂交菌株的可能，导致菌种出现正向或负向的改变，属于有性分离，因此就作为生产菌种的技术手段来说，组织分离所得菌种更加纯，更加安全。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种香菇子实体组织分离的方法，适合于香菇菌种厂进行香菇菌种制作，相对于常规组织分离方法，本发明无需添加新的设施设备，分离成功率高，同时菌丝活力强，长速快，保障了菌种质量，保护了栽培户的种源安全。
为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种香菇子实体组织分离的方法，包括以下步骤：步骤S1.选择新鲜健康的小菇蕾，小菇蕾为香菇原基顶部已完成褐变形成菌盖的子实体；步骤S2.对小菇蕾进行组织分离，自菌盖处取得菌肉；步骤S3.将菌肉放入PDA培养皿，并将培养皿倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；步骤S4.用接种铲挂掉菌肉表面菌丝，并将边缘菌块转入新的PDA平板中进行活化培养；步骤S5.将进行活化培养的边缘菌块倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；步骤S6.用接种铲挂掉边缘菌块表面菌丝，并将边缘菌块移入PDA试管中；待菌丝长满PDA试管即可。
在上述技术方案的基础上，步骤S1中，香菇第一潮出菇时，选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在菌棒中选择新鲜健康的小菇蕾。
在上述技术方案的基础上，步骤S2包括以下步骤：步骤S201.先用75％的酒精棉球对小菇蕾周身进行擦拭消毒，再用无菌水冲洗干净，放入超净工作台紫外灯下新风吹干；步骤S202.在酒精灯前，用无菌手术剪将小菇蕾从菌盖到菌柄方向剪开，形成有明显菌盖和菌柄的横截面；步骤S203.用无菌手术刀在小菇蕾菌盖横截面表面切割0.02-0.2立方厘米的菌肉。
在上述技术方案的基础上，菌肉自菌盖横截面一侧中心处取出。
在上述技术方案的基础上，步骤S3中，恒温培养箱的温度为25℃，培养周期为一周。
在上述技术方案的基础上，步骤S4中，边缘菌块为0.5-1cm直径的圆形菌块。
在上述技术方案的基础上，步骤S5中，恒温培养箱的温度为25℃，培养周期为一周。
本发明的有益效果在于：
1.明确了香菇子实体分离时期以及分离部位。
2.分离成功率高，分离后菌丝活力强长速快。
3.本发明操作简单，同时能明显提高菌丝长速，保证菌种质量。
4.本发明的创新之处在于提供了一种香菇子实体组织分离的方法，除了对需分离子实体选择以及分离方法有要求外，不增加其他投入，利用本发明方法，分离成活率高，且可明显提高香菇菌丝长速和活力，提高了菌种制种成功率和菌种活力，为种植户提供了优质的种源。
附图说明
图1为本发明中小菇蕾进行组织分离出菌肉的示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述的实施例示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。
下面结合说明书的附图，通过对本发明的具体实施方式作进一步的描述，使本发明的技术方案及其有益效果更加清楚、明确。下面通过参考附图描述实施例是示例性的，旨在解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
本发明实施例提供了一种香菇子实体组织分离的方法，包括以下步骤：
步骤S1.选择新鲜健康的小菇蕾，小菇蕾为香菇原基顶部已完成褐变形成菌盖的子实体；香菇第一潮出菇时，选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在菌棒中选择新鲜健康的小菇蕾。
步骤S2.对小菇蕾进行组织分离，自菌盖处取得菌肉；步骤S2包括以下步骤：步骤S201.先用75％的酒精棉球对小菇蕾周身进行擦拭消毒，再用无菌水冲洗干净，放入超净工作台紫外灯下新风吹干；步骤S202.在酒精灯前，用无菌手术剪将小菇蕾从菌盖到菌柄方向剪开，形成有明显菌盖和菌柄的横截面；步骤S203.用无菌手术刀在小菇蕾菌盖横截面表面切割0.02-0.2立方厘米的菌肉。参见图1所示，菌肉自菌盖横截面一侧中心处取出，即图1中的圆圈处。
步骤S3.将菌肉放入PDA培养皿，并将培养皿倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；恒温培养箱的温度为25℃，培养周期为一周。
步骤S4.用接种铲挂掉菌肉表面菌丝，并将边缘菌块(边缘菌块也属于菌肉)转入新的PDA平板中进行活化培养；边缘菌块为0.5-1cm直径的圆形菌块。
步骤S5.将进行活化培养的边缘菌块倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；恒温培养箱的温度为25℃，培养周期为一周。
步骤S6.用接种铲挂掉边缘菌块表面菌丝，并将边缘菌块移入PDA试管中；待菌丝长满PDA试管即可。
下面通过两个实施例和一个对比例对本发明作进一步说明。
实施例1
在春栽代料香菇第一潮出菇时，选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择新鲜健康的小菇蕾；上述小菇蕾为香菇原基顶部已完成褐变形成菌盖的子实体；上述小菇蕾无法看到菌盖与菌柄之间的菌膜以及菌褶；对上述小菇蕾进行组织分离；先用75％的酒精棉球对小菇蕾周身进行擦拭消毒，再用无菌水冲洗干净，放入超净工作台紫外灯下新风吹干；在酒精灯前，用无菌手术剪将小菇蕾从菌盖到菌柄方向剪开，形成有明显菌盖和菌柄的横截面；用无菌手术刀对上述横截面的菌盖处进行划割处理；上述菌盖处为菌盖横截面中心处，且远离菌柄顿号菌盖边缘以及菌褶形成处；上述划割处理为在小菇蕾菌盖横截面表面切割0.1立方厘米大菌肉；用无菌镊子将上述菌肉放入PDA培养皿中心处；上述培养皿25℃倒置培养于恒温培养箱中一周；一周后在超净工作台中对上述培养皿中菌丝进行活化处理，用接种铲挂掉培养基表面菌丝，并将边缘菌块转入新的PDA平板中进行活化培养；上述边缘菌块为圆形1cm直径菌块；上述进行活化培养的菌丝25℃倒置培养于恒温培养箱中一周；一周后按照第一次菌丝活化方法，将边缘菌块移入PDA试管中，待菌丝长满试管，完成香菇子实体的组织分离。
实施例2
在春栽代料香菇第一潮出菇时，选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择新鲜健康的大型子实体进行组织分离；上述大型子实体开伞7-8分；上述对上述子实体进行组织分离；先用75％的酒精棉球对子实体周身进行擦拭消毒，再用无菌水冲洗干净，放入超净工作台紫外灯下新风吹干；在酒精灯前，用无菌手术剪将子实体从菌盖到菌柄方向剪开，形成有明显菌盖和菌柄的横截面；用无菌手术刀对上述横截面的菌盖处进行划割处理；上述菌盖处为菌盖横截面中心处，且远离菌柄顿号菌盖边缘以及菌褶形成处；上述划割处理为在子实体菌盖横截面表面切割0.1立方厘米大菌肉；用无菌镊子将上述菌肉放入PDA培养皿中心处；上述培养皿25℃倒置培养于恒温培养箱中一周；一周后在超净工作台中对上述培养皿中菌丝进行活化处理，用接种铲挂掉培养基表面菌丝，并将边缘菌块转入新的PDA平板中进行活化培养；上述边缘菌块为圆形1cm直径菌块；上述进行活化培养的菌丝25℃倒置培养于恒温培养箱中一周；一周后按照第一次菌丝活化方法，将边缘菌块移入PDA试管中，待菌丝长满试管，完成香菇子实体的组织分离。
对比例3
在春栽代料香菇第一潮时，选择大型子实体进行组织分离；上述大型子实体开伞7-8分；减去子实体菌柄，再用75％的酒精棉球对子实体周身进行擦拭消毒，再用无菌水冲洗干净，用无菌纱布将子实体擦干，放入超净工作台备用；在酒精灯前，用无菌手术剪将子实体从菌盖到菌柄方向剪开，形成有明显菌盖和菌柄的横截面；用无菌手术刀对上述横截面的菌盖边缘处进行划割处理；上述划割处理为在子实体菌盖边缘处横截面表面切割0.1立方厘米大菌肉；用无菌镊子将上述菌肉放入PDA培养皿中心处；上述培养皿25℃倒置培养于恒温培养箱中一周；一周后在超净工作台中对上述培养皿中菌丝进行活化处理，将菌块转入新的PDA平板中进行活化培养；上述菌块为1cm直径菌块；上述进行活化培养的菌丝25℃倒置培养于恒温培养箱中一周；一周后按照第一次菌丝活化方法，将边缘菌块移入PDA试管中，待菌丝长满试管，完成香菇子实体的组织分离。
表一：不同分离方法对香菇菌丝的影响
处理 萌发时间(d) 菌丝长速(cm/d) 污染率(％)
实施例1 2 0.42 0
实施例2 3 0.38 0
对比例3 2 0.41 20％
通过表一可知，按照本发明方法进行组织分离的实施例1和实施例2的污染率均为0，而对比例3的污染率为20％。因此，发明所述方法，分离成活率高，且可明显提高香菇菌丝长速和活力，提高了菌种制种成功率和菌种活力，为种植户提供了优质的种源。
在说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“优选地”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点，包含于本发明的至少一个实施例或示例中，在本说明书中对于上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或者示例中以合适方式结合。
本发明不局限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围之内。本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。

Claims (7)

1.一种香菇子实体组织分离的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1.选择新鲜健康的小菇蕾，所述小菇蕾为香菇原基顶部已完成褐变形成菌盖的子实体；
步骤S2.对所述小菇蕾进行组织分离，自菌盖处取得菌肉；
步骤S3.将所述菌肉放入PDA培养皿，并将培养皿倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；
步骤S4.用接种铲挂掉菌肉表面菌丝，并将边缘菌块转入新的PDA平板中进行活化培养；
步骤S5.将进行活化培养的边缘菌块倒置培养于恒温培养箱中至长出菌丝；
步骤S6.用接种铲挂掉边缘菌块表面菌丝，并将边缘菌块移入PDA试管中；待菌丝长满PDA试管即可。
2.如权利要求1所述的香菇子实体组织分离的方法，其特征在于：步骤S1中，香菇第一潮出菇时，选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在所述菌棒中选择新鲜健康的小菇蕾。
3.如权利要求1所述的香菇子实体组织分离的方法，其特征在于，步骤S2包括以下步骤：
步骤S201.先用75％的酒精棉球对小菇蕾周身进行擦拭消毒，再用无菌水冲洗干净，放入超净工作台紫外灯下新风吹干；
步骤S202.在酒精灯前，用无菌手术剪将小菇蕾从菌盖到菌柄方向剪开，形成有明显菌盖和菌柄的横截面；
步骤S203.用无菌手术刀在小菇蕾菌盖横截面表面切割0.02-0.2立方厘米的菌肉。
4.如权利要求3所述的香菇子实体组织分离的方法，其特征在于：所述菌肉自菌盖横截面一侧中心处取出。
5.如权利要求1所述的香菇子实体组织分离的方法，其特征在于：步骤S3中，恒温培养箱的温度为25℃，培养周期为一周。
6.如权利要求1所述的香菇子实体组织分离的方法，其特征在于：步骤S4中，所述边缘菌块为0.5-1cm直径的圆形菌块。
7.如权利要求1所述的香菇子实体组织分离的方法，其特征在于：步骤S5中，恒温培养箱的温度为25℃，培养周期为一周。
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