CN112021068B - 一种金耳子实体菌种的复壮方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食用菌育种技术领域,具体涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法,其包括一次或多次将金耳子实体打浆和将浆液涂布在改良PDA培养基上培养的步骤。本发明方法旨在给金耳子实体退化菌种复壮及脱毒、脱杂菌,能有效恢复菌种的生产能力、抗病能力,为种植户规避风险。
Description
技术领域
本发明属于食用菌育种技术领域,具体涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法。
背景技术
金耳Naematelia aurantialba(Bandoni et Zang)Millanes&Wedin为耳包革科耳包革属真菌,(金耳的曾用学名为Tremella aurantialba Bandoni et Zang,属银耳科银耳属真菌),是著名的食用菌和药用药,野生资源主要分布于云南丽江、香格里拉、西藏等地,资源有限,每年全国采摘量在10吨(干)以内。上个世纪80年代,云南昆明食用菌研究所最早实现了人工椴木和袋料栽培[1-2]。
金耳子实体是异质型复合体,金耳子实体中有毛韧革菌和金耳菌,因此金耳的菌种制作基本都是用子实体多代扩大繁殖而来。
金耳从栽培成功至今虽然已经有30多年历程,但是整个金耳产业还处于初级阶段(年产量远远小于金针菇的日产量),无论是利用分步接种法还是混合菌种法,子实体都是种源,随着金耳子实体的扩大繁殖次数增多,菌种生产性能快速退化,菌种携带病毒细菌等,使栽培成功率降低,产量减少,甚至绝收。
发明概述
为解决上述技术问题,本发明提供一种金耳子实体退化菌种的复壮方法,能有效恢复菌种的生产能力、抗病能力,为种植户规避风险。
具体而言,本发明涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法,其包括将金耳子实体打浆和将浆液涂布在改良PDA培养基上培养的步骤。该复壮方法同样适用于其他异质型菌类菌种。
根据本发明,改良PDA培养基包括马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L。
根据本发明,金耳子实体打浆是将无菌金耳子实体与无菌水混合(两者比例1:1-50(wt/vol),例如1:40(wt/vol),1:30(wt/vol),1:20(wt/vol),1:10(wt/vol),1:5(wt/vol)等)、再经破碎机打成浆状。
根据本发明,在改良PDA培养基上培养是指在22℃恒温箱内暗培养25-35天,培养基中长出多个直径0.5cm左右(±0.2cm)大小、新的金耳小子实体。
根据本发明,该复壮方法进一步包括将上述生长形状好、新的金耳小实体挑出,然后再次打浆和培养的步骤。
根据本发明,该复壮方法包括多次(例如三次)重复打浆和培养的步骤。
根据本发明,该复壮方法还包括金耳子实体栽培种培养、栽培袋接种、出菇管理以及菌种扩繁的步骤。
具体而言,本发明涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法,包括下列步骤:
(1)在超净工作台中,取无菌金耳子实体0.5克与5毫升无菌水混合,利用破碎机将之打成浆状,涂布至改良PDA培养基上,在22℃恒温箱内暗培养25-35天,培养基中会长出多个直径0.5cm左右大小、新的金耳小子实体,其中改良PDA培养基包括马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L;
(2)将生长性状好、新的金耳小子实体分别挑出,并标记,然后重复上述(1)步骤,重复两次;
(3)将第三次培养出性状优良、新的金耳小子实体,分别标记并留样保存(4℃恒温),分别接种至灭菌好的木屑培养基,22℃、暗培养35-40天后,金耳子实体长至直径5-8cm,作为金耳子实体栽培种,其中木屑培养基包括杂木屑80%、麦麸18%、轻质碳酸钙2%;
(4)采用分步接种法,首先在栽培袋中打孔接入毛韧革菌(液体或固体)菌种,无纺布封口,暗培养5天,待菌丝萌发后,接入上述(3)中金耳子实体菌种,无纺布再次封口。接种后培养7天,撕去无纺布,进入出菇管理阶段;
(5)出菇房:湿度90%-100%,温度20℃-22℃,二氧化碳浓度600ppm-1200ppm,光照:800lx-1200lx,培养33天;
(6)最后以栽培菌棒出菇的综合性状来筛选优良的子实体菌种,将上述(3)中保存的菌种扩繁,从而实现金耳子实体菌种的复壮。
发明效果
本发明为金耳子实体菌种的复壮技术,可以脱毒、脱杂菌,有效避免金耳在栽培过程中减产甚至绝产的现象。通过本发明可以有效恢复金耳子实体菌种的各生物学性状,为种植户规避风险。
本发明目前已应用于实际生产中,经过3年多来连续栽培试验,金耳接种后成活率达到97%以上,金耳子实体健壮、单产高、商品性状好。
附图及其简要说明
为了更清楚地描述本发明的技术方案,下面将结合附图作简要介绍。显而易见,这些附图仅是本申请记载的一些具体实施方式。本发明包括但不限于下列附图:
图1示出由毛韧革菌和金耳菌混合培养20天后看到的许多金耳子实体原基(白毛球,由数字标注);以及
图2示出金耳子实体原基(白毛球)继续培养,长大形成的小金耳(箭头所示)。
具体实施方式
为了进一步理解本发明,下面将结合本发明具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。显然,所描述的实施例是本发明一部分,而非全部。基于本发明中的实施例,本领域技术人员在无需作出创造性劳动前提下所获得的所有变例,都落入本发明要求保护的范围。
除非特别说明,本发明百分比为重量百分比。
实施例
1.金耳的采集
在出菇棚中选取一朵健壮、朵型匀称、色泽金黄的第一茬金耳。
2.金耳复壮培养基制作
改良PDA培养基:马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L。
按上述配方制作培养基,并121℃下灭菌20分钟,在超净工作台上倒入培养皿后,冷却备用。
3.子实体菌种复壮工艺流程
3.1涂布接种
在超净工作台中,取无菌金耳子实体0.5克与5毫升无菌水混合,利用破碎机将之打成浆状,涂布至改良PDA培养基上。
3.2培养
在22℃恒温箱内暗培养25-35天,培养基中会长出多个直径0.5cm左右的金耳小子实体。
3.3小子实体2次复壮筛选
将生长性状好的金耳小子实体分别挑出,并标记,然后按照3.1和3.2的方法对小金耳子实体2次复壮,将生长性状好的小子实体及培养基分别标记后,于4℃冰箱保存。
3.4栽培种制作和培养
栽培种培养基配方(木屑培养基):杂木屑80%、麦麸18%、轻质碳酸钙2%,pH为6.5。
将第三次培养出性状优良的金耳小子实体,分别标记并留样保存(4℃恒温),分别接种至灭菌好的木屑培养基。22℃、暗培养35-40天后,金耳子实体长至直径5-8cm左右,作为金耳子实体栽培种。
3.5栽培出菇验证
3.5.1栽培袋的制作
栽培袋配方同栽培种配方。
按照栽培袋配方,加水搅拌,调节含水量和pH,利用装袋机均匀装袋,然后扎口机封口,一次生产菌棒3200棒,每棒干料重为1千克。最后转入灭菌柜,湿热高压(121℃)灭菌4小时,冷却至25℃以下备用。
3.5.2金耳栽培袋接种
采用分布接种法,首先在栽培袋中打孔接入毛韧革菌(液体或固体)菌种,无纺布封口,暗培养5天,待菌丝萌发后,接入金耳子实体菌种,无纺布再次封口。接种后培养7天,撕去无纺布,进入出菇管理阶段。
3.5.3出菇房管理
湿度90%-100%,温度20℃-22℃、二氧化碳浓度600ppm-1200ppm,光照:800lx-1200lx,培养33天。
3.5.4复壮菌种的确定
最后以栽培菌棒出菇的综合性状来筛选优良的子实体菌种,将3.4中保存的菌种扩繁,从而获得金耳子实体菌种的复壮菌株。
参考文献
[1]刘书畅,李荣春,马布平等,金耳菌种生产技术研究[J].中国食用菌,2019.38(9):94-99.
[2]刘书畅,马布平,罗祥英,李荣春.金耳研究进展综述[J].食药用菌,2017,25(5):359-362.
Claims (1)
1.一种金耳子实体菌种的复壮方法,包括下列步骤:
(1)在超净工作台中,取无菌金耳子实体0.5克与5毫升无菌水混合,利用破碎机将之打成浆状,涂布至改良PDA培养基上,在22℃恒温箱内暗培养25-35天,培养基中会长出多个直径0.5cm±0.2cm大小、新的金耳小子实体,其中改良PDA培养基包括马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L;
(2)将新的金耳小子实体分别挑出,并标记,然后重复上述(1)方法步骤,重复两次;
(3)将第三次培养出新的金耳小子实体,分别标记并在4℃恒温留样保存作为菌种,分别接种至灭菌好的木屑培养基,22℃、暗培养35-40天后,金耳子实体长至直径5-8cm,作为新的金耳子实体栽培种,其中木屑培养基包括杂木屑80%、麦麸18%、轻质碳酸钙2%;
(4)采用分步接种法,首先在栽培袋中打孔接入毛韧革菌液体或固体菌种,无纺布封口,暗培养5天,待菌丝萌发后,接入上述(3)中金耳子实体栽培种,无纺布再次封口,接种后培养7天,撕去无纺布,进入出菇管理阶段;
(5)出菇房:湿度90%-100%,温度20℃-22℃,二氧化碳浓度600ppm-1200ppm,光照:800lx-1200lx,培养33天;
(6)最后以栽培菌棒出菇的综合性状来筛选优良的子实体菌种,将上述(3)中保存的菌种扩繁,从而实现金耳子实体菌种的复壮。
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Denomination of invention: A Method for Revitalizing Solid Strains of Auricularia auricula Effective date of registration: 20230726 Granted publication date: 20220927 Pledgee: Industrial Bank Co.,Ltd. Kunming Branch Pledgor: YUNNAN MUSHROOM WORLD BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2023530000048 |