CN112021068B - 一种金耳子实体菌种的复壮方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食用菌育种技术领域，具体涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法，其包括一次或多次将金耳子实体打浆和将浆液涂布在改良PDA培养基上培养的步骤。本发明方法旨在给金耳子实体退化菌种复壮及脱毒、脱杂菌，能有效恢复菌种的生产能力、抗病能力，为种植户规避风险。

Description

一种金耳子实体菌种的复壮方法

技术领域

本发明属于食用菌育种技术领域，具体涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法。

背景技术

金耳Naematelia aurantialba(Bandoni et Zang)Millanes&Wedin为耳包革科耳包革属真菌，(金耳的曾用学名为Tremella aurantialba Bandoni et Zang，属银耳科银耳属真菌)，是著名的食用菌和药用药，野生资源主要分布于云南丽江、香格里拉、西藏等地，资源有限，每年全国采摘量在10吨(干)以内。上个世纪80年代，云南昆明食用菌研究所最早实现了人工椴木和袋料栽培^[1-2]。

金耳子实体是异质型复合体，金耳子实体中有毛韧革菌和金耳菌，因此金耳的菌种制作基本都是用子实体多代扩大繁殖而来。

金耳从栽培成功至今虽然已经有30多年历程，但是整个金耳产业还处于初级阶段(年产量远远小于金针菇的日产量)，无论是利用分步接种法还是混合菌种法，子实体都是种源，随着金耳子实体的扩大繁殖次数增多，菌种生产性能快速退化，菌种携带病毒细菌等，使栽培成功率降低，产量减少，甚至绝收。

发明概述

为解决上述技术问题，本发明提供一种金耳子实体退化菌种的复壮方法，能有效恢复菌种的生产能力、抗病能力，为种植户规避风险。

具体而言，本发明涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法，其包括将金耳子实体打浆和将浆液涂布在改良PDA培养基上培养的步骤。该复壮方法同样适用于其他异质型菌类菌种。

根据本发明，改良PDA培养基包括马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L。

根据本发明，金耳子实体打浆是将无菌金耳子实体与无菌水混合(两者比例1:1-50(wt/vol)，例如1:40(wt/vol)，1:30(wt/vol)，1:20(wt/vol)，1:10(wt/vol)，1:5(wt/vol)等)、再经破碎机打成浆状。

根据本发明，在改良PDA培养基上培养是指在22℃恒温箱内暗培养25-35天，培养基中长出多个直径0.5cm左右(±0.2cm)大小、新的金耳小子实体。

根据本发明，该复壮方法进一步包括将上述生长形状好、新的金耳小实体挑出，然后再次打浆和培养的步骤。

根据本发明，该复壮方法包括多次(例如三次)重复打浆和培养的步骤。

根据本发明，该复壮方法还包括金耳子实体栽培种培养、栽培袋接种、出菇管理以及菌种扩繁的步骤。

具体而言，本发明涉及一种金耳子实体菌种的复壮方法，包括下列步骤：

(1)在超净工作台中，取无菌金耳子实体0.5克与5毫升无菌水混合，利用破碎机将之打成浆状，涂布至改良PDA培养基上，在22℃恒温箱内暗培养25-35天，培养基中会长出多个直径0.5cm左右大小、新的金耳小子实体，其中改良PDA培养基包括马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L；

(2)将生长性状好、新的金耳小子实体分别挑出，并标记，然后重复上述(1)步骤，重复两次；

(3)将第三次培养出性状优良、新的金耳小子实体，分别标记并留样保存(4℃恒温)，分别接种至灭菌好的木屑培养基，22℃、暗培养35-40天后，金耳子实体长至直径5-8cm，作为金耳子实体栽培种，其中木屑培养基包括杂木屑80％、麦麸18％、轻质碳酸钙2％；

(4)采用分步接种法，首先在栽培袋中打孔接入毛韧革菌(液体或固体)菌种，无纺布封口，暗培养5天，待菌丝萌发后，接入上述(3)中金耳子实体菌种，无纺布再次封口。接种后培养7天，撕去无纺布，进入出菇管理阶段；

(5)出菇房：湿度90％-100％，温度20℃-22℃，二氧化碳浓度600ppm-1200ppm，光照：800lx-1200lx，培养33天；

(6)最后以栽培菌棒出菇的综合性状来筛选优良的子实体菌种，将上述(3)中保存的菌种扩繁，从而实现金耳子实体菌种的复壮。

发明效果

本发明为金耳子实体菌种的复壮技术，可以脱毒、脱杂菌，有效避免金耳在栽培过程中减产甚至绝产的现象。通过本发明可以有效恢复金耳子实体菌种的各生物学性状，为种植户规避风险。

本发明目前已应用于实际生产中，经过3年多来连续栽培试验，金耳接种后成活率达到97％以上，金耳子实体健壮、单产高、商品性状好。

附图及其简要说明

为了更清楚地描述本发明的技术方案，下面将结合附图作简要介绍。显而易见，这些附图仅是本申请记载的一些具体实施方式。本发明包括但不限于下列附图：

图1示出由毛韧革菌和金耳菌混合培养20天后看到的许多金耳子实体原基(白毛球，由数字标注)；以及

图2示出金耳子实体原基(白毛球)继续培养，长大形成的小金耳(箭头所示)。

具体实施方式

为了进一步理解本发明，下面将结合本发明具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分，而非全部。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在无需作出创造性劳动前提下所获得的所有变例，都落入本发明要求保护的范围。

除非特别说明，本发明百分比为重量百分比。

实施例

1.金耳的采集

在出菇棚中选取一朵健壮、朵型匀称、色泽金黄的第一茬金耳。

2.金耳复壮培养基制作

改良PDA培养基：马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L。

按上述配方制作培养基，并121℃下灭菌20分钟，在超净工作台上倒入培养皿后，冷却备用。

3.子实体菌种复壮工艺流程

3.1涂布接种

在超净工作台中，取无菌金耳子实体0.5克与5毫升无菌水混合，利用破碎机将之打成浆状，涂布至改良PDA培养基上。

3.2培养

在22℃恒温箱内暗培养25-35天，培养基中会长出多个直径0.5cm左右的金耳小子实体。

3.3小子实体2次复壮筛选

将生长性状好的金耳小子实体分别挑出，并标记，然后按照3.1和3.2的方法对小金耳子实体2次复壮，将生长性状好的小子实体及培养基分别标记后，于4℃冰箱保存。

3.4栽培种制作和培养

栽培种培养基配方(木屑培养基)：杂木屑80％、麦麸18％、轻质碳酸钙2％，pH为6.5。

将第三次培养出性状优良的金耳小子实体，分别标记并留样保存(4℃恒温)，分别接种至灭菌好的木屑培养基。22℃、暗培养35-40天后，金耳子实体长至直径5-8cm左右，作为金耳子实体栽培种。

3.5栽培出菇验证

3.5.1栽培袋的制作

栽培袋配方同栽培种配方。

按照栽培袋配方，加水搅拌，调节含水量和pH，利用装袋机均匀装袋，然后扎口机封口，一次生产菌棒3200棒，每棒干料重为1千克。最后转入灭菌柜，湿热高压(121℃)灭菌4小时，冷却至25℃以下备用。

3.5.2金耳栽培袋接种

采用分布接种法，首先在栽培袋中打孔接入毛韧革菌(液体或固体)菌种，无纺布封口，暗培养5天，待菌丝萌发后，接入金耳子实体菌种，无纺布再次封口。接种后培养7天，撕去无纺布，进入出菇管理阶段。

3.5.3出菇房管理

湿度90％-100％，温度20℃-22℃、二氧化碳浓度600ppm-1200ppm，光照：800lx-1200lx，培养33天。

3.5.4复壮菌种的确定

最后以栽培菌棒出菇的综合性状来筛选优良的子实体菌种，将3.4中保存的菌种扩繁，从而获得金耳子实体菌种的复壮菌株。

参考文献

[1]刘书畅，李荣春，马布平等，金耳菌种生产技术研究[J].中国食用菌，2019.38(9):94-99.

[2]刘书畅，马布平，罗祥英，李荣春.金耳研究进展综述[J].食药用菌，2017，25(5):359-362.

Claims (1)

1.一种金耳子实体菌种的复壮方法，包括下列步骤：

(1)在超净工作台中，取无菌金耳子实体0.5克与5毫升无菌水混合，利用破碎机将之打成浆状，涂布至改良PDA培养基上，在22℃恒温箱内暗培养25-35天，培养基中会长出多个直径0.5cm±0.2cm大小、新的金耳小子实体，其中改良PDA培养基包括马铃薯200克/L、葡萄糖10克/L、蛋白胨3克/L、磷酸二氢钾3克/L、柠檬酸1.2克/L、贝壳粉1克/L、琼脂18克/L；

(2)将新的金耳小子实体分别挑出，并标记，然后重复上述(1)方法步骤，重复两次；

(3)将第三次培养出新的金耳小子实体，分别标记并在4℃恒温留样保存作为菌种，分别接种至灭菌好的木屑培养基，22℃、暗培养35-40天后，金耳子实体长至直径5-8cm，作为新的金耳子实体栽培种，其中木屑培养基包括杂木屑80％、麦麸18％、轻质碳酸钙2％；

(4)采用分步接种法，首先在栽培袋中打孔接入毛韧革菌液体或固体菌种，无纺布封口，暗培养5天，待菌丝萌发后，接入上述(3)中金耳子实体栽培种，无纺布再次封口，接种后培养7天，撕去无纺布，进入出菇管理阶段；

(5)出菇房：湿度90％-100％，温度20℃-22℃，二氧化碳浓度600ppm-1200ppm，光照：800lx-1200lx，培养33天；

(6)最后以栽培菌棒出菇的综合性状来筛选优良的子实体菌种，将上述(3)中保存的菌种扩繁，从而实现金耳子实体菌种的复壮。

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