CN112442450B - 枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用 - Google Patents

枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112442450B
CN112442450B CN201910824941.XA CN201910824941A CN112442450B CN 112442450 B CN112442450 B CN 112442450B CN 201910824941 A CN201910824941 A CN 201910824941A CN 112442450 B CN112442450 B CN 112442450B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ramaria
culture
culture medium
japonica
phellopterin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910824941.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN112442450A (zh
Inventor
张玉铎
张东雷
徐凯
周孝秋
谢春元
许鹤鸣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Planting Technology Extension Station Of Fangshan District Beijing
Original Assignee
Planting Technology Extension Station Of Fangshan District Beijing
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Planting Technology Extension Station Of Fangshan District Beijing filed Critical Planting Technology Extension Station Of Fangshan District Beijing
Priority to CN201910824941.XA priority Critical patent/CN112442450B/zh
Publication of CN112442450A publication Critical patent/CN112442450A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112442450B publication Critical patent/CN112442450B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H15/00—Fungi; Lichens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)

Abstract

本发明涉及食用菌技术领域，公开了枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用。该方法包括：将枝瑚菌一级分支的菌肉组织接种到枝瑚菌母种培养基上进行培养，得到枝瑚菌母种；其中，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌或保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌。本发明通过选取枝瑚菌一级分支的菌肉组织对保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌或保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌进行母种培养，获得枝瑚菌母种菌丝长势比较强，菌丝均一。

Description

枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用
技术领域
本发明涉及食用菌技术领域，具体枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用。
背景技术
野生枝瑚菌(Ramaria sp.)又名扫帚菌，刷把菌，属于非褶菌目，枝瑚菌科，枝瑚菌属，夏秋季节在山区多生于阔叶林或针叶林地上，该科各属含有很多别具风味的食用菌，是我国野生食用菌资源中宝贵的组成部分，据报导，枝瑚菌多糖等活性物质具有抑制肿瘤、抗氧化、清除自由基、免疫调节等功能，该类真菌很有研究价值。
目前，对于枝瑚菌的研究多限于资源调查或者大分子生物活性等方面的研究，未见有人工驯化栽培相关报道，也更未见有如何获得菌丝长势强，菌丝均一的人工驯化栽培相关报道。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供一种枝瑚菌母种培养方法以及该方法获得的枝瑚菌母种，所述枝瑚菌母种菌丝长势强，且菌丝均一。
本发明的发明人在研究的过程中发现，在母种培养的过程中，通过选取枝瑚菌子实体不同部位的菌肉组织，萌发获得的菌丝体形态和特性差异较大，经过对比，发明人获得了一个最佳的菌种提取部位，该部位获得的菌丝长势比较强，菌丝比较均一。
基于如上的发现，本发明一方面，提供一种枝瑚菌母种的培养方法，该方法包括：将枝瑚菌一级分支的菌肉组织接种到枝瑚菌母种培养基上进行培养，得到枝瑚菌母种；
其中，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌或保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌。
优选的，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌；所述母种培养基含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸和维生素B。
优选的，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌；所述母种培养基含有土豆、麸皮、麦芽糖、肌醇、磷酸盐和镁盐。
本发明第二方面，提供一种如上所述的方法培养得到的枝瑚菌母种。
本发明第三方面，提供如上所述的枝瑚菌母种在枝瑚菌原种培养中的应用。
本发明通过选取枝瑚菌一级分支的菌肉组织对保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌或保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌进行母种培养，获得枝瑚菌母种菌丝长势比较强，菌丝比较均一。如实施例所示的，在优选的提取部位选自枝瑚菌一级分支的基部时，枝瑚菌母种菌丝长势更强，菌丝更均一，当结合本发明的母种培养基时，不仅能够进一步提高枝瑚菌母种的状态，并且菌丝中还出现了菌核。
生物保藏
本发明的枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783被命名为枝瑚菌(Ramaria sp.)，并于 2019年5月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO：17783，简称为菌株野生枝瑚菌1。
本发明的枝瑚菌菌株CGMCC NO：17784被命名为枝瑚菌(Ramaria sp.)，并于 2019年5月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO：17784，简称为菌株野生枝瑚菌2。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。
图1是本发明提供的枝瑚菌CGMCC NO：17783的子实体，图中箭头所示位置为其一级分支；
图2是为实施例1-1(A)和对比例1-4(B)培养的枝瑚菌菌丝生长状况；
图3为实施例1-4培养的枝瑚菌的菌丝生长状况；
图4为对比例1-3培养的枝瑚菌的菌丝生长状况。
图5是为实施例2-1(A)和实施例2-7(B)培养的枝瑚菌菌丝生长状况；
图6为实施例2-4培养的枝瑚菌的菌丝生长状况；
图7为实施例2-5培养的枝瑚菌的菌丝生长状况；
图8为对比例2-3培养的枝瑚菌的菌丝生长状况。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明中，未作相反说明的情况下，如本领域所公知的，为了避免杂菌污染，所进行的各种操作均优选在基本上无菌的条件(例如，经紫外杀菌后的环境)下进行，所用的各种工具和材料均为已经消毒过的，例如在110-130℃和0.12-0.18MPa下进行蒸汽灭菌20-80min后的。
一方面，本发明提供一种枝瑚菌母种的培养方法，该方法包括：将枝瑚菌一级分支的菌肉组织接种到枝瑚菌母种培养基上进行培养，得到枝瑚菌母种；
其中，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌或保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌。
本发明的枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783和枝瑚菌菌株CGMCC NO：17784分别于2017年9月分离自房山区蒲洼乡东村。
如图1(A：CGMCC NO：17784；B：CGMCC NO：17783)所示的，所述枝瑚菌包括根部，在根部分支出来的多个一级分支(如图中箭头所示)以及在一级分支的基础上分支出的二级分支，等等依次递推至多级分支。本发明的发明人通过研究发现，通过选取枝瑚菌一级分支上的菌肉对枝瑚菌进行母种培养，能够提高母种菌丝的生长速度，以及获得的母种菌丝纯培养物中菌丝的均一性。
更为优选的，所述菌肉组织为所述一级分支基部的菌肉组织。进一步优选的，所述菌肉组织为未裸露的菌肉，从而保证待接种的菌肉取自无菌的环境。其中，术语“未裸露”是指在枝瑚菌子实体状态下以及未进行任何操作的情况下，未裸露在外的菌肉。
根据本发明一种具体的实施方式，所述菌肉通过如下的方式获得：
将枝瑚菌子实体，置于超净工作台，适当地吹无菌风，操作人员双手消毒、操作工具灭菌，将枝瑚菌子实体用酒精擦拭根部和主分支，进行表面消毒，用手掰下一级分支，并将掰下来的一级分支从基部向顶端用手掰开，使分枝一分两半，手不要碰到裸露的菌肉，用消毒好的镊子从一级分支基部夹取菌肉，放入灭好菌的母种培养基上。
根据本发明，虽然通过枝瑚菌接种部位的选取即可在一定程度上提高枝瑚菌菌丝生长速度，且菌丝更加健壮。但本发明的发明人通过研究，获得了一种用于人工培养枝瑚菌CGMCC NO：17783的母种培养基和一种用于人工培养枝瑚菌CGMCC NO：17784 的母种培养基。使用该优选的母种培养基对相应的枝瑚菌进行培养时，枝瑚菌菌丝生长速度更快、菌丝更健壮，气生菌丝更均一，并甚至有菌核出现。
当所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌时，所述母种培养基优选含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸和维生素B。
尽管将枝瑚菌CGMCC NO：17783在如上的母种培养基中进行母种培养，即可进一步提高枝瑚菌CGMCC NO：17783的生长速度和母种菌丝的状态，而对于母种培养基中各组分的含量没有特别的限定。但本发明的发明人在研究中进一步发现，当相对于 100g的所述土豆，所述菠萝的含量为40-80g，所述葡萄糖的含量为10-30g，所述氨基酸的含量为30-70mg，所述维生素B的含量为5-15mg，优选的，相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为50-70g，所述葡萄糖的含量为15-25g，所述氨基酸的含量为 40-60mg，所述维生素B的含量为8-12mg时，枝瑚菌菌丝生长速度更快、菌丝更健壮、气生菌丝更均一。
菠萝(学名：Ananas comosus)，是热带水果之一。福建和台湾地区称之为旺梨或者旺来，新马一带称为黄梨，内地 及香港称作菠萝。有70多个品种，岭南四大名果之一。本发明中所述菠萝可以为市售的各种菠萝，对此并没有特别的限制。但本发明的发明人发现，选择合适成熟度的菠萝能够进一步促进枝瑚菌的生长，优选的，所述菠萝的成熟度为7-9，其中，所述成熟度是指根据中国农业标准NY/℃450-2001的成熟度标准来划分的。
根据本发明，所述氨基酸可以为能够用作食用菌培养基的氨基酸，优选的，所述氨基酸为极性氨基酸，更优选为带正电荷的氨基酸，例如，赖氨酸、天冬氨酸和组氨酸，最优选的，所述氨基酸为赖氨酸。本发明的发明人发现，当所述氨基酸为赖氨酸时，更能够促进枝瑚菌的生长。
根据本发明，所述维生素B可以为常规的各种B族维生素，例如，可以为但不限于VB1、VB2、VB12等。但本发明的发明人发现，当所述维生素B为VB1时，更能够促进枝瑚菌的生长。
根据本发明，所述母种培养基还可以含有琼脂，优选的，相对于100g的所述土豆，所述琼脂的含量为10-30g，优选为15-25g。
根据本发明，所述母种培养基还可以含有水，优选的，相对于100g的所述土豆，水的含量为500-1500ml，优选为800-1200ml。
根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸、维生素B、琼脂和水。
根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基由土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸、维生素B、琼脂和水组成。
根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基由土豆、成熟度为7-9的菠萝、葡萄糖、赖氨酸、维生素B1、琼脂和水组成。
根据本发明，所述母种培养基的制备方法可以按照PDA培养基的制备方法进行，具体的，选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成正方体(1厘米边长左右)，菠萝洗净去皮，切成正方体(1厘米边长左右)，备用，在不锈钢锅内加水(1200ml)，加热，称取切好的土豆、菠萝加入锅中，煮沸(30min)，用纱布过滤(4层)，将滤液放入不锈钢锅加热；称取葡萄糖、氨基酸、维生素B和琼脂，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的玻璃试管进行分装(培养基装液量为试管的1/4)，用硅胶塞封口，放置于灭菌锅内进行灭菌，灭菌结束后，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，待培养基凝固后收起，即为所述培养基，可用于枝瑚菌母种培养。
由如上所述的本发明的母种培养基的制备方法可以看出，所述土豆和菠萝并非是直接将土豆和菠萝粉碎用作制备培养基的原料，而是通过洗切、蒸煮并过滤后得到的滤液。但需要说明的是，本发明的母种培养基中各组分的用量所基于的土豆的含量是指洗切后并蒸煮前的土豆的量，菠萝的含量也是指洗切后并蒸煮前的菠萝的量。
当所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌时，所述母种培养基含有土豆、麸皮、麦芽糖、肌醇、磷酸盐和镁盐。
尽管将枝瑚菌CGMCC NO：17784在如上的母种培养基中进行母种培养，即可进一步提高枝瑚菌CGMCC NO：17783的生长速度和母种菌丝的状态，而对于母种培养基中各组分的含量没有特别的限定。但本发明的发明人在研究中进一步发现，当相对于 100g的所述土豆，所述麸皮的含量为50-150g，所述麦芽糖的含量为10-50g，所述肌醇的含量为50-150mg，所述磷酸盐的含量为0.5-5g，所述镁盐的含量为1-5g，优选的，相对于100g的所述土豆，所述麸皮的含量为60-100g，所述麦芽糖的含量为15-25g，所述肌醇的含量为80-120mg，所述磷酸盐的含量为1-2g，所述镁盐的含量为2-4g时，枝瑚菌菌丝生长速度更快、菌丝更健壮、气生菌丝更均一。
根据本发明，所述麸皮可以为各种种子脱皮后形成的麸皮，例如，可以为但不限于小麦麸皮、玉米麸皮、水稻麸皮、小米麸皮等。但本发明的发明人发现，当所述麸皮为麦麸(小麦麸皮)时，更能够促进枝瑚菌的生长。
根据本发明，所述磷酸盐可以为能够用作食用菌培养基的磷酸盐，例如，可以为但不限于磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。但本发明的发明人发现，当所述磷酸盐为磷酸二氢钾时，更能够促进枝瑚菌的生长。
根据本发明，所述镁盐可以为能够用作食用菌培养基的镁盐，例如，可以为但不限于氯化镁、硫酸镁等。但本发明的发明人发现，当所述镁盐为硫酸镁时，更能够促进枝瑚菌的生长。
根据本发明，所述母种培养基还可以含有琼脂，优选的，相对于100g的所述土豆，所述琼脂的含量为10-30g，优选为15-25g。
根据本发明，所述母种培养基还可以含有水，优选的，相对于100g的所述土豆，水的含量为500-1500ml，优选为800-1200ml。
根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基含有土豆、麸皮、麦芽糖、肌醇、磷酸盐、镁盐、琼脂和水。
根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基由土豆、麸皮、麦芽糖、肌醇、磷酸盐、镁盐、琼脂和水组成。
根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基由土豆、麦麸、麦芽糖、肌醇、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂和水组成。
根据本发明，所述母种培养基的制备方法可以按照PDA培养基的制备方法进行，具体的，选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成正方体(1厘米边长左右)，称取干净、无霉变麸皮，备用，在不锈钢锅内加水(1200ml)，加热，称取切好的土豆、麸皮加入锅中，煮沸(30min)，用纱布过滤(8层)，将滤液放入不锈钢锅加热；称取麦芽糖，肌醇，磷酸盐，镁盐，琼脂，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的玻璃试管进行分装(培养基装液量为试管的1/4)，用硅胶塞封口，放置于灭菌锅内进行灭菌，灭菌结束后，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，待培养基凝固后收起，即为所述培养基，可用于枝瑚菌母种培养。
由如上所述的本发明的母种培养基的制备方法可以看出，所述土豆并非是直接将土豆粉碎用作制备培养基的原料，而是通过洗切、蒸煮并过滤后得到的滤液。但需要说明的是，本发明的母种培养基中各组分的用量所基于的土豆的含量是指洗切后并蒸煮前的土豆的量。
根据本发明，所述培养的条件可以为枝瑚菌常规的生长条件，优选的，所述培养的温度为20-30℃，更优选为23-28℃，所述培养为暗培养，也即在光照强度小于30LX 的条件下进行培养。
第三方面，本发明提供了如上所述的方法培养得到的枝瑚菌母种。
第四方面，本发明提供了如上所述的枝瑚菌母种在枝瑚菌原种培养中的应用。
本发明中，术语“原种”是指由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也叫二级种。原种主要用来生产栽培种，也可直接用作栽培种。其中，术语“母种”是指直接从子实体组织分离、孢子分离等所得到的菌丝体纯培养物，及其转接的菌种，也称一级种。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783被命名为枝瑚菌(Ramaria sp.)，并于2019年5 月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO：17783，简称为菌株野生枝瑚菌1。
枝瑚菌菌株CGMCC NO：17784被命名为枝瑚菌(Ramaria sp.)，并于2019年5 月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO：17784，简称为菌株野生枝瑚菌2。
1、枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783
制备例1-1
本制备例用于说明枝瑚菌CGMCC NO：17783菌丝纯培养物的获得
将采集到的保藏编号为CGMCC NO：17783的子实体，置于超净工作台，吹无菌风30min，操作人员双手用75％酒精消毒、操作工具等进行表面消毒和火焰灭菌，将枝瑚菌CGMCC NO：17783子实体用75％酒精棉球擦拭根部和主分支，进行表面消毒，用手掰下一级分支，并将掰下来的分枝从基部向顶端用手掰开，使分枝一分两半，注意手不要碰到裸露的菌肉，用消毒好的镊子从一级分支基部夹取长0.3cm，宽0.2-0.3cm的菌肉，放入灭好菌的含有PDA斜面培养基试管内，菌肉组织放置于斜面中间，整个组织分离操作过程在酒精灯火焰20cm范围内完成。将含有组织的试管置于25℃条件下，暗培养，经过20天的培养，获得了野生枝瑚菌菌丝纯培养物。
制备例1-2
本制备例用于说明枝瑚菌CGMCC NO：17783菌丝纯培养物的获得
按照制备例1-1的方法进行野生枝瑚菌菌丝纯培养物的制备，不同的是，菌肉组织取自一级分支的顶部。
对比制备例1-1
本对比制备例用于说明参比的枝瑚菌CGMCC NO：17783菌丝纯培养物的获得
按照制备例1-1的方法进行野生枝瑚菌菌丝纯培养物的制备，不同的是，菌肉组织取自主分支的基部。
对比制备例1-2
本对比制备例用于说明参比的枝瑚菌CGMCC NO：17783菌丝纯培养物的获得
按照制备例1-1的方法进行野生枝瑚菌菌丝纯培养物的制备，不同的是，菌肉组织取自二级分支的基部。
对比制备例1-3
本制备例用于说明参比的枝瑚菌菌丝纯培养物的获得
将同时采集的另一株枝瑚菌(参比枝瑚菌)的子实体，置于超净工作台，吹无菌风30min，操作人员双手用75％酒精消毒、操作工具等进行表面消毒和火焰灭菌，将参比枝瑚菌子实体用75％酒精棉球擦拭根部和主分支，进行表面消毒，用手掰下一级分支，并将掰下来的分枝从基部向顶端用手掰开，使分枝一分两半，注意手不要碰到裸露的菌肉，用消毒好的镊子从主枝基部夹取长0.3cm，宽0.2-0.3cm的菌肉，放入灭好菌的含有 PDA斜面培养基试管内，菌肉组织放置于斜面中间，整个组织分离操作过程在酒精灯火焰20cm范围内完成。将含有组织的试管置于25℃条件下，暗培养，经过20天的培养，获得了参比野生枝瑚菌菌丝纯培养物。
实施例1-1
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，8成熟菠萝，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、菠萝60g加入锅中，煮沸30min，用4层纱布过滤，将滤液体积调至 1000ml，放入不锈钢锅加热；称取葡萄糖20g，赖氨酸50mg，维生素B1 10mg，琼脂 20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的 18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞 40-50mm，得到母种培养基。
待培养基凝固后和制备例1-1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，进行暗培养。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表1和图2(A)所示。
对比例1-1
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌的母种培养，不同的是，接种的为对比制备例1-1制备的枝瑚菌菌丝纯培养物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
对比例1-2
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌的母种培养，不同的是，接种的为对比制备例1-2制备的枝瑚菌菌丝纯培养物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
实施例1-2
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，8成熟菠萝，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、菠萝50g加入锅中，煮沸30min，用4层纱布过滤，将滤液体积调至 1000ml，放入不锈钢锅加热；称取葡萄糖25g，赖氨酸40mg，维生素B1 12mg，琼脂 20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的 18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞 40-50mm，得到母种培养基。
待培养基凝固后和制备例1-1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
实施例1-3
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，8成熟菠萝，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、菠萝70g加入锅中，煮沸30min，用4层纱布过滤，将滤液体积调至 1000ml，放入不锈钢锅加热；称取葡萄糖15g，赖氨酸60mg，维生素B1 8mg，琼脂 20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的 18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞 40-50mm，得到母种培养基。
待培养基凝固后和制备例1-1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
实施例1-4
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17783的培养，不同的是，将菠萝的成熟度替换为5。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表1和图3所示。
实施例1-5
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17783的培养，不同的是，将赖氨酸替换为等量的天冬氨酸。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
实施例1-6
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17783的培养，不同的是，将VB1 替换为等量的VB12。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
实施例1-7
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17783的培养，不同的是，将母种培养基替换为PDA培养基。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表1所示。
实施例1-8
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌的母种培养，不同的是，接种的为制备例1-2制备的枝瑚菌菌丝纯培养物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表1。
对比例1-3
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-1的方法进行枝瑚菌的培养，不同的是，将枝瑚菌CGMCC NO：17783替换为对比制备例1-3制备的参比枝瑚菌。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表1和图4所示。
对比例1-4
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1-7的方法进行枝瑚菌的培养，不同的是，将枝瑚菌CGMCC NO： 17783替换为对比制备例1-3制备的参比枝瑚菌。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表1和图2(B)所示。
表1
Figure BDA0002188778330000131
注：菌丝健壮程度列和气生菌丝通过肉眼观察，并粗略估算健壮菌丝或均一菌丝占总菌丝的百分比；
菌核的有无可通过光学显微镜进行观察；
菌丝生长速度：菌丝长满试管培养基表面时结束培养，并计算平均生长速度作为菌丝生长速度。
2、枝瑚菌菌株CGMCC NO：17784
制备例2-1
本制备例用于说明枝瑚菌CGMCC NO：17784菌丝纯培养物的获得
将采集到的保藏编号为CGMCC NO：17784的子实体，置于超净工作台，吹无菌风30min，操作人员双手用75％酒精消毒、操作工具等进行表面消毒和火焰灭菌，将枝瑚菌CGMCC NO：17784子实体用75％酒精棉球擦拭根部和主分支，进行表面消毒，用手掰下一级分支，并将掰下来的分枝从基部向顶端用手掰开，使分枝一分两半，注意手不要碰到裸露的菌肉，用消毒好的镊子从一级分支基部夹取长0.3cm，宽0.2-0.3cm的菌肉，放入灭好菌的含有PDA斜面培养基试管内，菌肉组织放置于斜面中间，整个组织分离操作过程在酒精灯火焰20cm范围内完成。将含有组织的试管置于25℃条件下，暗培养，经过25天的培养，获得了野生枝瑚菌菌丝纯培养物。
制备例2-2
本制备例用于说明枝瑚菌CGMCC NO：17784菌丝纯培养物的获得
按照制备例2-1的方法进行野生枝瑚菌菌丝纯培养物的制备，不同的是，菌肉组织取自一级分支的顶部。
对比制备例2-1
本对比制备例用于说明参比的枝瑚菌CGMCC NO：17784菌丝纯培养物的获得
按照制备例2-1的方法进行野生枝瑚菌菌丝纯培养物的制备，不同的是，菌肉组织取自主分支的基部。
对比制备例2-2
本对比制备例用于说明参比的枝瑚菌CGMCC NO：17784菌丝纯培养物的获得
按照制备例2-1的方法进行野生枝瑚菌菌丝纯培养物的制备，不同的是，菌肉组织取自二级分支的基部。
实施例2-1
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，称取干净、无霉变麦麸80g，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、麦麸80g 加入锅中，煮沸30min，用8层纱布过滤，将滤液体积调至1000ml，放入不锈钢锅加热；称取麦芽糖20g，肌醇100mg，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁3g，琼脂20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，得到母种培养基。
待培养基凝固后和制备例2-1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，进行暗培养，记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表2和图5(A)所示。
对比例2-1
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例2-1的方法进行枝瑚菌的母种培养，不同的是，接种的为对比制备例2-1制备的枝瑚菌菌丝纯培养物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表2。
对比例2-2
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例2-1的方法进行枝瑚菌的母种培养，不同的是，接种的为对比制备例2-2制备的枝瑚菌菌丝纯培养物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表2。
实施例2-2
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，称取干净、无霉变麦麸60g，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、麦麸60g 加入锅中，煮沸30min，用8层纱布过滤，将滤液体积调至1000ml，放入不锈钢锅加热；称取麦芽糖25g，肌醇80mg，磷酸二氢钾1g，硫酸镁4g，琼脂20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，得到母种培养基。
待培养基凝固后和制备例2-1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，进行暗培养，记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表2。
实施例2-3
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，称取干净、无霉变麦麸100g，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、麦麸 100g加入锅中，煮沸30min，用8层纱布过滤，将滤液体积调至1000ml，放入不锈钢锅加热；称取麦芽糖15g，肌醇120mg，磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，琼脂20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，得到母种培养基。
待培养基凝固后和制备例2-1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，进行暗培养，记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表2。
实施例2-4
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例2-1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17784的培养，不同的是，将麦麸替换为等量的玉米麸皮。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表2和图6所示。
实施例2-5
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例2-1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17784的培养，不同的是，将磷酸二氢钾替换为等量的磷酸钙和氯化钾1:1的混合物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表2和图7所示。
实施例2-6
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17784的培养，不同的是，将硫酸镁替换为等量的氯化镁。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表2。
实施例2-7
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例1的方法进行枝瑚菌CGMCC NO：17784的培养，不同的是，将本发明提供的母种培养基替换为PDA培养基。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表2和图5(B)所示。
实施例2-8
本实施例用于说明本发明提供的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例2-1的方法进行枝瑚菌的母种培养，不同的是，接种的为制备例2-2制备的枝瑚菌菌丝纯培养物。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果见表2。
对比例2-3
本对比例用于说明参比的枝瑚菌母种的培养方法
按照实施例2-1的方法进行枝瑚菌的培养，不同的是，将枝瑚菌CGMCC NO： 17784替换为对比制备例1-3制备的参比枝瑚菌。记录菌丝的生长速度，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色，气生菌丝均一性，以及是否有菌核出现，结果如表2和图8所示。
表2
Figure BDA0002188778330000181
Figure BDA0002188778330000191
注：菌丝健壮程度列和气生菌丝通过肉眼观察，并粗略估算健壮菌丝或均一菌丝占总菌丝的百分比；
菌核的有无可通过光学显微镜进行观察；
菌丝生长速度：菌丝长满试管培养基表面时结束培养，并计算平均生长速度作为菌丝生长速度。
由以上实施例1-1与对比例1-1和1-2的对比以及实施例2-1与对比例2-1和2-2的对比可看出，通过选取枝瑚菌子实体特定的部位进行接种，能够显著提高母种培养过程中，枝瑚菌菌丝的生长速度，以及菌丝的特性，并且还能够促进双核菌丝的出现。
将实施例1-1和实施例1-8进行对比以及实施例2-1和实施例2-8进行对比可以看出，当菌肉组织取自一级分支的基部时，菌丝的生长速度能够和菌丝的特性能够进一步提高。
将实施例1-1和实施例1-4至1-7进行对比以及实施例2-1和实施例2-7进行对比可以看出，采用优选的培养基，菌丝的生长速度能够和菌丝的特性能够进一步提高。
将实施例1-1和1-7与对比例1-3和1-4进行对比以及实施例2-1和2-7与对比例2-3和1-4进行对比可以看出，本发明提供的枝瑚菌在本发明优选的培养基上以及PDA培养基上进行母种培养更具有优势。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (14)

1.一种枝瑚菌母种的培养方法，其特征在于，该方法包括：将枝瑚菌一级分支的菌肉组织接种到枝瑚菌母种培养基上进行培养，得到枝瑚菌母种；
其中，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌或保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述菌肉组织来源自所述枝瑚菌一级分支的基部。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述菌肉组织为未裸露的菌肉组织。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌；所述母种培养基含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸和维生素B。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为40-80g，所述葡萄糖的含量为10-30g，所述氨基酸的含量为30-70mg，所述维生素B的含量为5-15mg。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为50-70g，所述葡萄糖的含量为15-25g，所述氨基酸的含量为40-60mg，所述维生素B的含量为8-12mg。
7.根据权利要求4-6中任意一项所述的方法，其中，所述菠萝为根据中国农业标准NY/℃450-2001的成熟度标准的程度为7-9的菠萝；和/或
所述氨基酸为极性氨基酸；和/或
所述维生素B选自维生素B1、维生素B2和维生素B12中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述枝瑚菌为保藏号为CGMCC NO：17784的枝瑚菌；所述母种培养基含有土豆、麸皮、麦芽糖、肌醇、磷酸盐和镁盐。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，相对于100g的所述土豆，所述麸皮的含量为50-150g，所述麦芽糖的含量为10-50g，所述肌醇的含量为50-150mg，所述磷酸盐的含量为0.5-5g，所述镁盐的含量为1-5g。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，相对于100g的所述土豆，所述麸皮的含量为60-100g，所述麦芽糖的含量为15-25g，所述肌醇的含量为80-120mg，所述磷酸盐的含量为1-2g，所述镁盐的含量为2-4g。
11.根据权利要求8-10中任意一项所述的方法，其中，所述麸皮选自小麦麸皮、玉米麸皮、水稻麸皮和小米麸皮中的一种或多种；和/或
所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的一种或多种；和/或
所述镁盐为氯化镁和/或硫酸镁。
12.根据权利要求4或8所述的方法，其中，所述母种培养基还含有琼脂和水。
13.权利要求1-12中任意一项所述的方法培养得到的枝瑚菌母种。
14.权利要求13所述的枝瑚菌母种在枝瑚菌原种培养中的应用。
CN201910824941.XA 2019-09-02 2019-09-02 枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用 Active CN112442450B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910824941.XA CN112442450B (zh) 2019-09-02 2019-09-02 枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910824941.XA CN112442450B (zh) 2019-09-02 2019-09-02 枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112442450A CN112442450A (zh) 2021-03-05
CN112442450B true CN112442450B (zh) 2022-04-15

Family

ID=74734268

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910824941.XA Active CN112442450B (zh) 2019-09-02 2019-09-02 枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112442450B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112438158B (zh) * 2019-09-02 2023-04-21 北京市房山区种植业技术推广站 枝瑚菌菌株及其应用以及用于人工培育枝瑚菌的母种培养基及其应用
CN112438160B (zh) * 2019-09-02 2023-05-23 北京市房山区种植业技术推广站 枝瑚菌菌株及其应用以及用于人工培育枝瑚菌的母种培养基及其应用
CL2022002983A1 (es) * 2022-10-27 2023-03-10 Univ La Frontera Formulación y método de cultivo para hongos ramaria sp.

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002191354A (ja) * 2000-10-06 2002-07-09 Kabaiotekku Co Ltd 茸菌糸体の生産方法およびその用途（Ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｍｕｓｈｒｏｏｍｍｙｃｅｌｉｕｍａｎｄｕｓｅｓｔｈｅｒｅｏｆ）
CN106332654A (zh) * 2016-08-23 2017-01-18 山东省科创食用菌产业技术研究院 一种红色葡萄状珊瑚菌的栽培方法
CN106718052A (zh) * 2016-12-15 2017-05-31 防城港市蓝瀚达科技有限公司 珊瑚菌的人工栽培方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN112442450A (zh) 2021-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112442450B (zh) 枝瑚菌母种及其培养方法和在枝瑚菌原种培养中的应用
CN101803569B (zh) 试管内诱导草莓匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒方法
CN102165919A (zh) 甜叶菊种苗的组培快繁技术
CN109022343A (zh) 一种人参干细胞的制备方法
CN109757373A (zh) 一种荆半夏组织培养快速繁殖方法
CN106171985A (zh) 一种生姜的液体浅层快繁方法
CN115537346B (zh) 促进西藏虎头兰生长分化的胶膜菌及其应用
CN104429953A (zh) 一种甘薯病毒苗的茎尖脱毒方法
CN112442449B (zh) 枝瑚菌原种培养基及其应用以及枝瑚菌原种及其培养方法
CN105191803A (zh) 一种铁皮石斛组培袋苗生产方法
CN103299822A (zh) 一株裂褶菌高产子实体菌株及返生态立体栽培方法
CN104823849A (zh) 一种木薯脱毒苗快速扩繁方法
CN105941162B (zh) 分蘖洋葱高效再生体系的建立方法
CN107223553A (zh) 茎尖脱毒试管苗培养基及其制备方法与应用
CN103975855A (zh) 一种铁皮石斛的单倍体育种方法
CN101748073B (zh) 一种蛹虫草菌种分离保藏方法
CN106577280A (zh) 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗
CN114793897B (zh) 一种枣果肉愈伤组织及其诱导方法和应用
CN102090336B (zh) 一种杜衡组织培养的繁殖方法
CN105746344A (zh) 一种蓖麻脱毒组培快繁的方法
CN104782483B (zh) 一种利用橡胶草须根诱导不定芽的方法
CN112438160B (zh) 枝瑚菌菌株及其应用以及用于人工培育枝瑚菌的母种培养基及其应用
CN107667858A (zh) 一种土人参离体组培快繁方法
CN106613970A (zh) 黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法
CN103404439B (zh) 一种菊芋不定芽诱导及植株再生的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Zhang Yuduo

Inventor after: Zhang Donglei

Inventor after: Xu Kai

Inventor after: Zhou Xiaoqiu

Inventor after: Xie Chunyuan

Inventor after: Xu Heming

Inventor before: Zhang Yuduo

Inventor before: Zhang Donglei

Inventor before: Xu Kai

Inventor before: Zhou Xiaoqiu

Inventor before: Xie Chunyuan

Inventor before: Xu Heming