CN112280730A - 一种香菇菌种提纯复壮方法 - Google Patents
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Abstract
一种香菇菌种提纯复壮方法,属于食用菌菌种提纯复壮技术领域，包括PDA培养基培养，尖端切割，转接，第二培养基培养，尖端切割，转接和第三培养基培养，子实体组织分离，并包括三种培养基的配方。该方法脱毒和提纯同时进行，周期短，效率高，培养基组分少，操作简单，提纯复壮后，菌种活性强，抗逆性好，香菇产量高。
Description
技术领域
本发明属于食用菌菌种选育技术领域，具体涉及一种香菇菌种提纯复壮方法。
背景技术
目前，我国80%的农业区域进行食用菌栽培，量大面广，在农村发展和农民致富的过程中，起着关键性作用。然而，食用菌菌种在长期保藏及转代过程中普遍存在生产性能变劣、种性衰退等现象，例如香菇品种808、939、L26、L66等，这些优良品种在长期保藏及转代培养过程中，菌种质量逐渐退化，出现菌丝生长慢、抗逆性减弱、产量下降、菇质变差等问题，给食用菌生产带来较大影响。
针对香菇菌种的退化问题，专利申请号为201711008570.5的中国专利， 提出了一种食用菌菌种提纯复壮方法，该方法包括以下步骤，（1）菌丝尖端三次转接：取待提纯复壮的退化的食用菌菌种放入第一培养基中，当菌落的直径达到2-3cm时，切割尖端移接置于第二培养基中，菌落再次的直径达到2-3cm时，切割尖端移接置于第三培养基中，菌落再次的直径达到2-3cm时，切割尖端移接置于第四培养基中；（2）抗生素培养：将步骤（1）中最后一次移接的菌种菌落的直径达到2-3cm时，将菌种移至摇瓶培养液中，所述摇瓶培养液中加入青霉素，所述青霉素的加入量为200万单位/L，菌种在摇瓶培养液的液面表面培养直至液体表面长满菌丝体；（3）碱性木屑培养基培养：经过步骤（2）培养的菌种转接至碱性木屑培养基培养直至长出菌丝体，所述碱性木屑培养基中含有质量分数为4%的生石灰；所述碱性木屑培养基还包括以下重量份的组分,木屑60-70份，丝瓜络5-8份，贝壳粉5-10份，蔗糖1-3份，麦麸25-35份，坡缕石粉3-5份。该方法提高了菌种的产量和质量，但是，菌种提纯复壮的步骤多，周期长，效率低，因为每次菌丝尖端转接都需要大约20天，三次转接需要60天左右。其二，菌种在抗生素培养基中培养，加入的抗生素只能杀灭革兰氏阳性菌，对阴性菌无效，对霉菌和病毒起不到抑制和杀灭作用；第三碱性木屑培养基组分多，操作复杂。
发明内容
本发明的目的是提供一种香菇菌种提纯复壮方法，克服上述专利方法工艺步骤多，周期长，效率低的问题、对霉菌和病毒起不到抑制和杀灭作用的问题以及碱性木屑培养基组分多，操作复杂的问题，提高香菇的产量和质量。
为实现上述目的，本发明包括以下步骤：
（1）PDA培养基培养：将需要提纯复壮的菌种接入PDA培养基中，所述PDA培养基含有马铃薯200份，葡萄糖20份，琼脂20份，利巴韦林10份，水1000份,将马铃薯粉碎，放入水中浸泡24小时，过滤，得到马铃薯的浸泡液，然后将葡萄糖，琼脂，利巴韦林分别放入过滤所得到的马铃薯浸泡液中，搅拌均匀，制得PDA培养基；
（2）第二培养基培养：当接入PDA培养基中的菌落直径达到1-2cm时，切割尖端1-1.5mm移接于第二培养基中，所述第二培养基含有马铃薯200份，葡萄糖20份，琼脂20份，双黄连口服液20份，水1000份, 将马铃薯粉碎，放入水中浸泡24小时，过滤，得到马铃薯的浸泡液，然后将葡萄糖，琼脂，双黄连口服液分别放入过滤所得到的马铃薯浸泡液中，搅拌均匀，制得第二培养基；
（3）当接入第二培养基中的菌落直径达到1-2cm时，切割尖端1-1.5mm移接于第三培养基中，所述第三培养基含有木屑95份，麦麸4份，石膏1份，双黄连口服液30份，水1000份, 将木屑，麦麸，石膏， 双黄连口服液分别放入水中，搅拌均匀，制得第三培养基。
（4）将接入第三培养基中的菌落，在20℃-25℃培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现香菇菌种的提纯复壮。
本发明实现了如下有益效果:
1. 本发明采用二次菌落尖端切割，脱毒和提纯同时进行，周期短，效率高；
2. 培养基中采用利巴韦林和双黄连口服液，脱毒范围宽，可以杀灭病毒，抑制细菌和霉菌的生长；
3. 第三培养基组分少，操作简单，提纯复壮后，菌种活性强，抗逆性好，香菇产量可提高大约20%。
具体实施方式
（1）PDA培养基培养：PDA培养基含有马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，利巴韦林10克，水1000ml， 将马铃薯粉碎，放入水中浸泡24小时，过滤，得到马铃薯的浸泡液，然后将葡萄糖，琼脂，利巴韦林分别放入过滤所得到的溶液中，搅拌均匀，制得PDA培养基，之后，将需要提纯复壮的菌种接入PDA培养基中，菌种在PDA培养基培养的培养温度为31℃；
（2）第二培养基培养：所述第二培养基含有马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，双黄连口服液20ml，水1000ml。将马铃薯粉碎，放入水中浸泡24小时，过滤，得到马铃薯的浸泡液，然后将葡萄糖，琼脂，双黄连口服液分别放入过滤所得到的马铃薯浸泡液中，搅拌均匀，制得第二培养基，之后接入PDA培养基培养切割的菌落。菌种在PDA培养基培养的培养温度为31℃。当接入PDA培养基中的菌落直径达到1-2cm时，切割尖端1-1.5mm移接于第三培养基中；
（3）第三培养基培养：所述第三培养基含有木屑95克，麦麸4克，石膏1克，双黄连口服液30ml，水1000ml，将木屑，麦麸，石膏，双黄连口服液分别加入水中，搅拌均匀，然后接入第二培养基切割的菌落；
（4）将接入第三培养基中的菌落，在20℃-25℃培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现香菇菌种的提纯复壮。
出菇对照试验：
试验组选取提纯复壮后的香菇菌种，在抚顺地区4月中旬，大棚中进行。将提纯复壮后的菌株接入栽培料，栽培料的配方为木屑79%，麦麸20%，石膏1%，采用17X36cm耐压聚乙烯袋，每袋装400g干料，处理400袋，按常规装袋，灭菌，接种，接种后1周挑选成活菌包，随机摆放进行发菌和出菇，测量产量，平均菇重，菌包成活数，积温。
对照组选取未提纯复壮的香菇菌种，培养基相同，袋数相同，工艺条件相同，对比试验结果见下表：
通过上表可以看出：产量可增加20.2%，菇重增加19.3%，积温减少150℃，菌包成活率提高4.7%。
Claims (1)
1.一种香菇菌种提纯复壮方法，其特征在于，包括以下步骤：
PDA培养基培养：将需要提纯复壮的菌种接入PDA培养基中，所述PDA培养基含有马铃薯200份，葡萄糖20份，琼脂20份，利巴韦林10份，水1000份,将马铃薯粉碎，放入水中浸泡24小时，过滤，得到马铃薯的浸泡液，然后将葡萄糖，琼脂，利巴韦林分别放入过滤所得到的马铃薯浸泡液中，搅拌均匀，制得PDA培养基；
第二培养基培养：当接入PDA培养基中的菌落直径达到1-2cm时，切割尖端1-1.5mm移接于第二培养基中，所述第二培养基含有马铃薯200份，葡萄糖20份，琼脂20份，双黄连口服液20份，水1000份, 将马铃薯粉碎，放入水中浸泡24小时，过滤，得到马铃薯的浸泡液，然后将葡萄糖，琼脂，双黄连口服液分别放入过滤所得到的马铃薯浸泡液中，搅拌均匀，制得第二培养基；
当接入第二培养基中的菌落直径达到1-2cm时，切割尖端1-1.5mm移接于第三培养基中，所述第三培养基含有木屑95份，麦麸4份，石膏1份，双黄连口服液30份，水1000份, 将木屑，麦麸，石膏， 双黄连口服液分别放入水中，搅拌均匀，制得第三培养基；
将接入第三培养基中的菌落，在20℃-25℃培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现香菇菌种的提纯复壮。
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