CN113138206B - 一种鉴别氨基酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鉴别氨基酸的方法，包括以下步骤：1）配制目标氨基酸标准溶液，分别与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10‑12，再加入氘代试剂，进行核磁共振¹⁹F‑NMR信号采集，得到第一¹⁹F‑NMR图谱；2）配制含有待测氨基酸的样品溶液，与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10‑12，再加入氘代试剂，进行核磁共振第二¹⁹F‑NMR信号采集，得到第二¹⁹F‑NMR图谱；3）将第一¹⁹F‑NMR图谱与第二¹⁹F‑NMR图谱进行叠加比较分析，通过第一¹⁹F‑NMR图谱与第二¹⁹F‑NMR图谱相对应的各个¹⁹F‑NMR化学位移信号鉴别出步骤2）的所述样品溶液中的各个待测氨基酸；优点在于：本发明的检测方法成本较低、简单易行、可即时制样即时测样，实现对样品中多种游离氨基酸进行定性定量。

Description

一种鉴别氨基酸的方法

技术领域

本发明属于氨基酸检测领域，尤其是涉及一种鉴别氨基酸的方法。

背景技术

生物样本中的游离氨基酸是诊断各种疾病最重要的分析指标，特别是氨基指数癌症筛查，它利用血浆中氨基酸的浓度作为癌症检测的标志，是筛查早期癌症和减少对生命威胁的一种有前景的技术，因此，氨基酸的鉴别对于基本诊断至关重要。

目前，鉴别氨基酸的方法多种多样，包括：高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS联用法）、核磁氢谱、基于¹³C同位素标记的¹H-¹³C HSQC谱、¹⁹F-NMR谱等。HPLC-MS联用法能够在10分钟内完成样品的氨基酸分析，虽然基于高效液相色谱的方法对于分析生物样本中的游离氨基酸是很有益的，但是基本的问题仍然存在，特别是进行高通量的分析；由于基于HPLC的方法需要使用反相或离子交换柱对每个氨基酸进行物理分离，因此基于HPLC的方法的分析方法很大程度上取决于物理分离技术，没有良好的技术就难以区分不同的氨基酸。另外，基于核磁氢谱也是常见的分析氨基酸的方法，它常常应用于代谢组学分析中；然而，该方法所获得的¹H-NMR谱图复杂、谱峰重叠等现象，鉴别氨基酸存在一定的困难。此外，利用¹³C同位素标记样本，不仅可以高灵敏度地检测氨基酸，还可以检测人类尿液和血清中的各种氨基酸代谢物，特别是通过对¹H-¹³C HSQC的测定，可以对复杂生物液中的氨基代谢物进行了相当清晰的分离；尽管该方法可以进行有效的氨基酸鉴别分析，但是¹³C同位素标记成本比较高。¹⁹F在自然界中的天然丰度为100%，化学位移分布广，灵敏度高，不需要同位素标记以及物理分离进行氨基酸分析；目前，以¹⁹F-NMR可以分析混合物中的有机物、胺类物质、腈类物质、寡聚脱氧核苷酸等；与氨基酸检测中常用的荧光法和吸光度法相比，高灵敏的¹⁹F NMR信号和生物标本中低背景的¹⁹F-NMR信号，都是分析混合物或者复杂样品中氨基酸的优点。

邻苯二甲醛（OPA）与氨基酸的α氨基进行醛氨缩合反应生成席夫碱被用于氨基酸的鉴别。邻苯二甲醛与3-（三氟甲基）苯硫酚及不同的氨基酸进行反应，生成不同的产物。因¹⁹F对化学环境敏感，邻位的¹⁹F-NMR对不同的氨基酸表现出不同的化学位移，即与不同氨基酸反应生成的产物具有不同的化学位移，以此鉴别氨基酸。然而，该方法存在一定的不足之处：首先，该方法需要额外引入含氟反应物，即3-（三氟甲基）苯硫酚，提高了成本；其次，该方法仅仅鉴别了15种天然氨基酸，无法鉴别出谷氨酰胺、天冬酰胺、色氨酸、半胱氨酸这4种天然氨基酸；最后，该方法在最优条件下不能将苯丙氨酸Phe和丝氨酸Ser区分开，两个¹⁹F-NMR信号峰完全重叠。

发明内容

本发明提供了一种廉价、快速且简单的鉴别氨基酸的方法，可以对样品中多种游离氨基酸进行定性定量分析。

为解决上述的技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种鉴别氨基酸的方法，包括以下步骤：

步骤1）：配制目标氨基酸标准溶液，分别与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振¹⁹F-NMR信号采集，得到第一¹⁹F-NMR图谱；

步骤2）：配制含有待测氨基酸的样品溶液，与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振第二¹⁹F-NMR信号采集，得到第二¹⁹F-NMR图谱；

步骤3）：将步骤1）得到的所述第一¹⁹F-NMR图谱与步骤2）得到的所述第二¹⁹F-NMR图谱进行叠加比较分析，通过所述第一¹⁹F-NMR图谱与所述第二¹⁹F-NMR图谱相对应的各个¹⁹F-NMR化学位移信号鉴别出步骤2）的所述样品溶液中的各个待测氨基酸。

进一步地，所述氨基酸与所述邻三氟甲基苯甲醛的摩尔比小于1.0。

进一步地，所述调节混合后溶液的pH采用缓冲液调节pH为10-12。

进一步地，所述调节混合后溶液的pH采用缓冲液调节pH为10。

更进一步地，所述缓冲液选自碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液或硼砂-氢氧化钠缓冲液。

进一步地，所述氘代试剂选自氘代水、氘代甲醇、氘代乙腈、或氘代二甲基亚砜。

进一步地，所述氨基酸为甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His中的任意一种或几种。

进一步地，根据步骤1）的方法，配置一系列不同浓度的目标氨基酸的标准溶液，分别与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振¹⁹F-NMR信号采集，得到第一¹⁹F-NMR图谱，得到不同浓度下的邻三氟甲基苯甲醛标记目标氨基酸对应的¹⁹F-NMR峰面积积分值，绘制¹⁹F-NMR峰面积积分值与目标氨基酸浓度的线性关系曲线图，得到各个目标氨基酸峰面积积分值与浓度之间的线性拟合方程式；

步骤3）为根据所述第一¹⁹F-NMR图谱与所述第二¹⁹F-NMR图谱相对应的各个¹⁹F-NMR化学位移信号，鉴别出步骤2）的所述样品溶液中的待测氨基酸相对应的步骤1）的所述目标氨基酸，得到所述待测氨基酸相对应的所述线性拟合方程式；将所述第二¹⁹F-NMR图谱中的所述待测氨基酸的¹⁹F-NMR峰面积积分值代入对应的所述线性拟合方程式获得所述样品溶液中所述待测氨基酸的浓度，对所述样品溶液的待测氨基酸进行定量。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

本发明利用廉价的商品化试剂邻三氟甲基苯甲醛与不同氨基酸的醛氨缩合反应，基于产物¹⁹F-NMR对化学环境的敏感性，无需再额外引入其他的反应物，即可通过核磁共振¹⁹F-NMR实现混合物中游离氨基酸的快速分析鉴别，成本较低且检测方法简单。

本发明利用邻三氟甲基苯甲醛与不同氨基酸进行醛氨缩合反应，反应条件温和且迅速，在配好核磁样品时即可检测到相应的产物¹⁹F-NMR信号，能够实现即时制样即时测样。

本发明可以通过简单的调节加入邻三氟甲基苯甲醛后混合液的pH值，就可使产物的¹⁹F-NMR化学位移区分开，从而实现鉴别混合物中多种氨基酸的目的，尤其适用于对样品中的多种游离氨基酸进行定性定量。

附图说明

图1为本发明的反应原理图；

图2为本发明实施例一中pH=10条件下邻三氟甲基苯甲醛标记的氨基酸的¹⁹F-NMR图谱叠加图；

图3为本发明实施例二中混合液在pH=12.0条件下的¹⁹F-NMR图谱；

图4为本发明实施例三中邻三氟甲基苯甲醛标记Gly的¹⁹F-NMR峰面积积分值与Gly浓度的线性关系曲线图。

具体实施方式

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。

本发明提供的一种鉴别氨基酸的方法，包括以下步骤：

一种鉴别氨基酸的方法，包括以下步骤：

步骤1）：配制目标氨基酸标准溶液，分别与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振¹⁹F-NMR信号采集，得到第一¹⁹F-NMR图谱；

步骤2）：配制含有待测氨基酸的样品溶液，与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振第二¹⁹F-NMR信号采集，得到第二¹⁹F-NMR图谱；

步骤3）：将步骤1）得到的所述第一¹⁹F-NMR图谱与步骤2）得到的所述第二¹⁹F-NMR图谱进行叠加比较分析，通过所述第一¹⁹F-NMR图谱与所述第二¹⁹F-NMR图谱相对应的各个¹⁹F-NMR化学位移信号鉴别出步骤2）的所述样品溶液中的各个待测氨基酸。

本发明中，邻三氟甲基苯甲醛（a）与不同氨基酸（b）在pH=10-12、室温条件下通过醛氨缩合反应生成相应的产物（c），如附图1所示；由于不同氨基酸的侧链R基不同，使得产物（c）的邻位¹⁹F感应不同的化学环境而产生不同的化学位移，基于产物（c）的¹⁹F-NMR化学信号可分析鉴别不同的氨基酸。由于在醛氨缩合反应中，醛基只能与一级胺（-NH₂）反应，因此，本发明中（a）不能与脯氨酸（二级胺）反应，而未能鉴别脯氨酸。

本发明中，邻三氟甲基苯甲醛（a）与氨基酸（b）的比值没有特别的限制，只要反应后的产物（c）能被核磁共振仪检测到即可，在一些具体实施例中，氨基酸与邻三氟甲基苯甲醛的摩尔比小于1.0。

本发明中，氘代试剂只要能与反应体系水或乙醇互溶即可，优选地，氘代试剂可以是氘代水、氘代水、氘代甲醇、氘代乙腈、或氘代二甲基亚砜。

本发明中，调节混合后的溶液的pH为10-12可以采用缓冲液，采用缓冲液主要是为了保持pH和离子浓度取值在一定的范围内，减小溶液环境对产物（c）核磁共振谱峰信号的影响，优选地，缓冲液的pH为10，更优选地，缓冲溶液可以为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液或硼砂-氢氧化钠缓冲液。

本发明中，氨基酸可以为甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His中的任意一种或几种。

为了进一步地说明本发明的方案，下面结合附图实施例对本发明提供的一种鉴别氨基酸的方法进行详细地描述，但是应当理解，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。

主要试剂：邻三氟甲基苯甲醛，CAS号为447-61-0，购自百灵威科技有限公司；氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His等氨基酸均购自百灵威科技有限公司；

主要仪器：Bruker AVANCE 500MHZ超导傅立叶变换核磁共振仪。

仪器参数：

¹⁹F NMR谱的采样参数：使用Bruker仪器脉冲程序zgig（F19CPD），检测温度298 K，谱宽为113636.367 Hz，中心频率为-47068.65 Hz，扫描次数为64次；调整仪器参数、调谐、控温、匀场、采样及傅里叶变换得到¹⁹F-NMR图谱。

实验例1：

步骤1）：选取19个试管，分别将目标氨基酸（甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His）与邻三氟甲基苯甲醛（a）混合于500 μL、pH为10的20 mM碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，再加入50 μL D₂O，其中，各个氨基酸的溶液浓度为2.5 mM，邻三氟甲基苯甲醛（a）的浓度为5 mM，将各个混合溶液转移至核磁管中，用于¹⁹F NMR信号采集，分别得到19个相应的邻三氟甲基苯甲醛标记的目标氨基酸的¹⁹F-NMR图谱。

步骤2）：选取1个试管，将19种氨基酸混合物（包含：甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His）与邻三氟甲基苯甲醛（a）混合于500 μL、pH为10的20 mM碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，再加50 μL D₂O，得到待测溶液，其中，各个氨基酸的溶液浓度分别为2.5 mM，邻三氟甲基苯甲醛（a）的浓度为50 mM，将待测溶液转移至核磁管中，用于¹⁹F-NMR信号采集，得到待测溶液的¹⁹F-NMR图谱。

步骤3）：将步骤1）得到各个邻三氟甲基苯甲醛（a）标记的目标氨基酸的¹⁹F-NMR图谱与步骤2）所采集待测溶液的¹⁹F-NMR图谱进行叠加比较分析，得到pH=10条件下邻三氟甲基苯甲醛（a）标记的氨基酸的¹⁹F-NMR图谱叠加图，如附图2所示，¹⁹F NMR化学位移表如表1所示。

表1 pH=10条件下邻三氟甲基苯甲醛标记的氨基酸的¹⁹F NMR图谱信号的化学位移表

邻三氟甲基苯甲醛标记的氨基酸	<sup>19</sup>F-NMR化学位移（ppm）
		Thr	-57.713
Ala	-57.830
		Asp	-57.611
Gln	-57.743
		His	-58.051
Gly	-57.668
		Trp	-58.318
Phe	-58.111
		Met	-57.872
Leu	-57.933
		Asn	-57.642, -57.743
Ile	-57.963
		Lys	-58.134, -58.172
Ser	-57.698
		Tyr	-58.062
Glu	-57.772
		Arg	-57.813
Val	-57.973
		Cys	-57.923

实验结果：

从附图2和表1可以看出，通过将步骤1）各个邻三氟甲基苯甲醛（a）标记的目标氨基酸的¹⁹F-NMR图谱与步骤2）所采集待测溶液的¹⁹F-NMR图谱进行叠加比较分析，即可分析步骤2）的待测溶液中各个成份的相应¹⁹F-NMR化学位移信号，以此实现待测液中不同氨基酸的快速鉴别，在pH=10的条件下，可以鉴别出甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His；值得注意的是，在此条件下，天冬酰胺Asn有两个峰，¹⁹F NMR化学位移分别为-57.642, -57.743，其中一个峰与谷酰胺Gln重合。

实施例2:

其余的与实施例一相同，不同之处在于：

实施例一中步骤2）反应后的混合液采用NaOH溶液将pH调节为12.0，再进行核磁共振¹⁹F-NMR信号采集，得到pH=12.0条件下的混合液的¹⁹F-NMR图谱，如附图3所示，化学位移表如表2所示。

表2 pH=12.0条件下邻三氟甲基苯甲醛标记的氨基酸的¹⁹F-NMR图谱信号的化学位移表

邻三氟甲基苯甲醛标记的氨基酸	<sup>19</sup>F-NMR化学位移（ppm）
		Asn	-57.665，-57.754
Gln	-57.785

实验结果：从附图3和表2可以看出，在pH为12.0的条件下，天冬酰胺Asn与谷酰胺Gln的化学位移可以明显地区分开，说明本发明可以通过简单的调节加入邻三氟甲基苯甲醛后混合液的pH值来实现鉴别混合物中多种氨基酸的目的。

实施例3：

定量实验

（1）配制一系列不同浓度的甘氨酸Gly，将一系列具有不同浓度甘氨酸Gly的标准溶液分别与邻三氟甲基苯甲醛混合于500 μL、pH为10的20 mM硼砂-氢氧化钠缓冲液中，再加入50 μL D₂O，其中，邻三氟甲基苯甲醛（a）的浓度为50mM，得到甘氨酸Gly浓度分别为0.05, 0.1, 0.3, 0.5, 1, 5, 10, 20, 50 mM的标准溶液，设置与实施例一相同的采样参数对¹⁹F-NMR信号进行采集，得到不同浓度下的邻三氟甲基苯甲醛（a）标记甘氨酸Gly相对应的各个¹⁹F-NMR图谱；选择积分校正方法，对每个邻三氟甲基苯甲醛（a）标记甘氨酸Gly浓度下所得的目标¹⁹F-NMR峰进行峰面积积分，得到不同浓度下的邻三氟甲基苯甲醛（a）标记甘氨酸Gly对应的¹⁹F-NMR峰面积积分值，利用OriginPro软件进行线性拟合，绘制¹⁹F-NMR峰面积积分值与甘氨酸Gly浓度的线性关系曲线图，如附图3所示，其中，拟合线性方程式为：y =7E + 10x，相关系数R²=99.7。

（2）称取一定量的甘氨酸Gly，溶于蒸馏水中，得到待测溶液；将配制的待测溶液与邻三氟甲基苯甲醛（a）混合于500 μL、pH10的20 mM硼砂-氢氧化钠缓冲液中，加50 μL D₂O，其中，邻三氟甲基苯甲醛（a）的浓度为50mM，将待测溶液转移至核磁管中用于¹⁹F-NMR信号采集，得到待测溶液的¹⁹F-NMR图谱，发现待测液中邻三氟甲基苯甲醛（a）标记甘氨酸Gly的¹⁹F-NMR信号峰，进行峰面积积分，得到待测溶液的峰面积积分值y为4.34E+11，代入线性回归方程式y = 7E+10x得到待测溶液中的甘氨酸浓度为6.2mM。

本发明所提供的检测方法经验证，可以用于检测富含多种游离氨基酸的样品，如人类的血浆、发酵的食物等，适用于对这类样品中的游离氨基酸进行定性定量。

以上所述仅是本发明的优选实施例方式，应当指出，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1）：配制目标氨基酸标准溶液，分别与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振¹⁹F-NMR信号采集，得到第一¹⁹F-NMR图谱；

步骤2）：配制含有待测氨基酸的样品溶液，与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振第二¹⁹F-NMR信号采集，得到第二¹⁹F-NMR图谱；

步骤3）：将步骤1）得到的所述第一¹⁹F-NMR图谱与步骤2）得到的所述第二¹⁹F-NMR图谱进行叠加比较分析，通过所述第一¹⁹F-NMR图谱与所述第二¹⁹F-NMR图谱相对应的各个¹⁹F-NMR化学位移信号鉴别出步骤2）的所述样品溶液中的各个待测氨基酸。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于所述氨基酸与所述邻三氟甲基苯甲醛的摩尔比小于1.0。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于所述调节混合后溶液的pH采用缓冲液调节pH为10-12。

4.根据权利要求3所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于所述调节混合后溶液的pH采用缓冲液调节pH为10。

5.根据权利要求4所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于所述缓冲液选自碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液或硼砂-氢氧化钠缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于所述氘代试剂选自氘代水、氘代甲醇、氘代乙腈、或氘代二甲基亚砜。

7.根据权利要求1所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于所述氨基酸为甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、酪氨酸Tyr、天冬酰胺Asn、谷酰胺Gln、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His中的任意一种或多种。

8.根据权利要求1所述的一种鉴别氨基酸的方法，其特征在于，根据步骤1）的方法，配置一系列不同浓度的目标氨基酸的标准溶液，分别与邻三氟甲基苯甲醛混合，调节混合后的溶液的pH为10-12，再加入氘代试剂，进行核磁共振¹⁹F-NMR信号采集，得到第一¹⁹F-NMR图谱，得到不同浓度下的邻三氟甲基苯甲醛标记目标氨基酸对应的¹⁹F-NMR峰面积积分值，绘制¹⁹F-NMR峰面积积分值与目标氨基酸浓度的线性关系曲线图，得到各个目标氨基酸峰面积积分值与浓度之间的线性拟合方程式；

步骤3）为根据所述第一¹⁹F-NMR图谱与所述第二¹⁹F-NMR图谱相对应的各个¹⁹F-NMR化学位移信号，鉴别出步骤2）的所述样品溶液中的待测氨基酸相对应的步骤1）的所述目标氨基酸，得到所述待测氨基酸相对应的所述线性拟合方程式；将所述第二¹⁹F-NMR图谱中的所述待测氨基酸的¹⁹F-NMR峰面积积分值代入对应的所述线性拟合方程式获得所述样品溶液中所述待测氨基酸的浓度，对所述样品溶液的待测氨基酸进行定量。

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