CN110297044A - 一种识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法 - Google Patents

一种识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种通过电子圆二色谱方法来确定氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法，该方法以邻苯二甲醛作衍生化试剂，通过核磁以及高效液相监测反应过程，发现氨基酸与邻苯二甲醛的衍生化反应速度快，且无副产物产生。经核磁氢谱与碳谱分析，确定衍生化后产物为异吲哚结构。产物在272nm附近产生电子圆二色谱信号，进一步的实验显示原料浓度以及比例对产物结构无影响。本发明还建立了对映体过量与各向异性因子的标准曲线，以确定氨基酸或肽类化合物的光学纯度。本发明优点在于反应速度快、样品用量少、灵敏度高；分析测试操作简单，原料浓度以及比例对产物结构无影响；可适用于所有手性伯胺类氨基酸以及N端为裸露伯胺的肽类化合物。

Description

一种识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种氨基酸的手性识别方法，特别是一种通过电子圆二色谱方法确定伯胺类氨基酸及N端为裸露伯胺的肽类化合物的绝对构型和光学纯度的方法。
背景技术
氨基酸是生命体的重要组成成分，许多疾病与氨基酸的构型有关，如阿尔兹海默症与D-构型的氨基酸有关。同时氨基酸也是许多药物的前体，如左旋多巴、硼替佐米和表苯丁抑制素等。因此建立一种简单高效确定氨基酸绝对构型方法是非常重要的。由于氨基酸是一类极性大、紫外吸收弱的小分子，常用的色谱法如气相和液相难以直接进行分析。旋光度的测定是最典型的确定氨基酸绝对构型以及光学纯度的分析方法。但是这种方法具有灵敏性差，用量大等缺点。柱前衍生化氨基酸，通过高效液相或气相分析氨基酸的绝对构型以及光学纯度具有耗时长、溶剂消耗量大等缺点。
电子圆二色谱(ECD)是广泛使用的确定手性分子绝对构型的方法。它具有操作简单、用量少、灵敏度高和耗时少的特点。这些特点吸引着我们用电子圆二色谱分析氨基酸的绝对构型。但是氨基酸紫外吸收较弱，限制了电子圆二色谱方法直接用于氨基酸绝对构型以及光学纯度的分析。可行的解决方法是找到一种合适的手性探针衍生化氨基酸，使其在合适的波段内显示明显的ECD信号。
现在的手性探针一般都是自己合成的金属络合物或联苯的结构，这些探针的合成过程一般很复杂，而且手性识别氨基酸的过程耗时较长。因此，非常有必要建立新的氨基酸及肽类化合物手性识别方法，使用简单、易得的试剂进行快速、高效的衍生化反应，实现识别氨基酸及肽类化合物。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种氨基酸的手性识别方法，以邻苯二甲醛作为氨基酸的衍生化试剂，并结合电子圆二色谱(ECD)方法，从而确定了氨基酸的绝对构型和光学纯度，用于解决现有技术中氨基酸绝对构型和光学纯度确定时灵敏度差、试剂用量大、耗时长等问题。
邻苯二甲醛是商业上可以买到的、价格便宜的用于检测氨基结构、蛋白和肽类化合物的衍生化试剂，衍生物产物通过高效液相色谱法进行检测。尚未见报道将其作为手性识别剂，采用电子圆二色谱方法来分析氨基酸的绝对构型。邻苯二甲醛作为氨基酸的手性识别试剂，与氨基酸在碱性条件下以1:2的比例进行反应。通过核磁以及高效液相监测反应过程，发现此反应速度快，而且无副产物产生。核磁氢谱与碳谱分析，确定产物的结构为异吲哚结构。电子圆二色谱测定产物，发现在272nm附件产生明显的ECD信号。运用电子圆二色谱以及高效液相的方法，对产物的稳定性以及原料的浓度以及不同比例对产物的影响进行了考察，产物在数小时内稳定，而且原料的浓度以及比例对产物无影响。
具体地，本发明提供了如下的技术方案：一种识别氨基酸及肽类化合物的绝对构型和光学纯度方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)衍生化：将待测氨基酸样品或肽类化合物样品溶于碱性甲醇溶液中，加入邻苯二甲醛或其甲醇溶液，振摇，得待测氨基酸或肽类化合物样品的衍生化产物；
(2)采集ECD图谱：通过电子圆二色谱仪采集待测氨基酸或肽类化合物样品衍生化产物的ECD图谱；
(3)构型确定：将待测氨基酸样品衍生化产物的ECD图谱与标准氨基酸衍生化产物的ECD图谱进行比较，确定待测氨基酸样品的绝对构型；
(4)光学纯度确定：建立对映体过量(e.e.％)与特定波长下各向异性因子(g因子)的标准曲线，确定其光学纯度；
其中所述氨基酸样品选自天然的或非天然的伯胺类手性氨基酸；
所述肽类化合物样品选自N端为裸露的伯胺类手性氨基酸的肽类化合物；
所述标准氨基酸衍生化产物的实验ECD图谱是由已知绝对构型的、与待测氨基酸或肽类化合物样品相同种类的氨基酸或肽类化合物，在相同的条件下进行衍生化反应并进行ECD图谱采集获得；
所述各向异性因子(g因子)为特定波长下ECD信号强度与紫外吸收(UV)强度的比值。
进一步地，所述天然氨基酸样品选自丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、或组氨酸；
所述肽类化合物样品选自N端的氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、或组氨酸的肽类化合物；
所述电子圆二色谱仪的参数设置条件为：扫描波长220-400nm，扫描速度100nm/min，数据间隔0.5nm，带宽1nm，样品池为0.1cm；
进一步地，步骤(1)衍生化中所述的肽类化合物选自二肽、三肽、四肽、五肽、六肽。
优选地，所述氨基酸选自丙氨酸或苯丙氨酸；所述肽类化合物选自D-Phe-D-Phe或L-Phe-L-Phe。
进一步地，步骤(1)衍生化中所用的碱性甲醇溶液的碱性条件选自有机碱或无机碱。
进一步地，所述无机碱选自KOH、NaOH、LiOH、Na2CO3、NaHCO3、K2CO3，所述有机碱选自DIEA和DBU。
优选地，步骤(1)衍生化中所用的碱性甲醇溶液的碱性条件选自KOH。
如上所述，本发明提供的氨基酸手性识别方法具有以下有益效果：1、通过与邻苯二甲醛的衍生化反应，衍生后的产物紫外吸收性强，使得ECD图谱中的Cotton效应出现在高波段，克服了其他因素如溶剂等产生的低波段Cotton效应的干扰，更利于构型的判断；2、反应速度快、无副产物生成、样品用量少、灵敏度高；3、分析测试操作简单，原料的浓度以及比例对产物无影响；4、应用范围广，该手性识别方法可适用于所有手性伯胺类氨基酸以及N端为裸露伯胺的肽类化合物；5、建立了对映体过量与g因子的标准曲线，可简单快速的确定氨基酸的光学纯度，并且误差小。
附图说明
图1.L-苯丙氨酸手性识别过程的ECD图谱
图2.HPLC监测L-苯丙氨酸手性识别过程
图3.1H-NMR监测L-苯丙氨酸手性识别过程
图4.L-丙氨酸衍生化产物的1H-NMR图谱
图5.L-丙氨酸衍生化产物的13C-NMR图谱
图6.L-丙氨酸衍生化产物的HRMS图谱
图7.L-苯丙氨酸衍生化产物的1H-NMR图谱
图8.L-苯丙氨酸衍生化产物的13C-NMR图谱
图9.L-苯丙氨酸衍生化产物的HRMS图谱
图10.L-苯丙氨酸在不同碱性条件下的ECD图谱
图11.反应时间对L-苯丙氨酸手性识别过程中各向异性因子的影响
图12.HPLC监测不同溶剂对L-苯丙氨酸手性识别的影响
图13.ECD监测配料比对L-苯丙氨酸手性识别过程的影响
图14.UV监测配料比对L-苯丙氨酸手性识别过程的影响
图15.ECD监测反应液浓度对D-苯丙氨酸手性识别过程的影响
图16.UV监测反应液浓度对D-苯丙氨酸手性识别过程的影响
图17.D-/L-丙氨酸衍生化产物的ECD图谱
图18.D-/L-苯丙氨酸衍生化产物的ECD图谱
图19.D-/L-色氨酸衍生化产物的ECD图谱
图20.D-/L-天冬酰胺衍生化产物的ECD图谱
图21.D-/L-亮氨酸衍生化产物的ECD图谱
图22.D-/L-丝氨酸衍生化产物的ECD图谱
图23.D-/L-苏氨酸衍生化产物的ECD图谱
图24.D-/L-缬氨酸衍生化产物的ECD图谱
图25.D-/L-精氨酸衍生化产物的ECD图谱
图26.D-/L-半胱氨酸衍生化产物的ECD图谱
图27.D-/L-谷氨酰胺衍生化产物的ECD图谱
图28.D-/L-酪氨酸衍生化产物的ECD图谱
图29.D-/L-天冬氨酸衍生化产物的ECD图谱
图30.D-/L-谷氨酸衍生化产物的ECD图谱
图31.D-/L-赖氨酸衍生化产物的ECD图谱
图32.D-/L-异亮氨酸衍生化产物的ECD图谱
图33.D-/L-蛋氨酸衍生化产物的ECD图谱
图34.D-/L-组氨酸衍生化产物的ECD图谱
图35.D-Phe-D-Phe和L-Phe-L-Phe衍生化产物的ECD图谱
图36.苯丙氨酸对映体组成与272nm下各向异性因子的标准曲线
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。
仪器与试剂：实验中HPLC分析采用岛津LC-20A型高效液相色谱仪(包括SPD-20A检测器和SIL-20自动进样器)，以乙腈和水作为洗脱溶剂，C18柱子用XB-C18column(5μm,4.6×250mm)。用Varian Mercury(500MHz)测试产物的1H-NMR和13C-NMR图谱。用Thermo Exactive plus Orbitrap测试产物的高分辨质谱图。用Jasco J-815型圆二色谱仪(Tokyo,Japan)测得产物的电子圆二色谱(ECD)图谱，参数设置为扫描波长220-400nm，扫描速度100nm/min,数据间隔0.5nm,带宽1nm,样品池为0.1cm。所有的溶剂和试剂都是商业获得，直接使用。
实施例1
以L-苯丙氨酸为例介绍其手性识别过程
(1)衍生化反应
将16.5mg的L-苯丙氨酸溶于5mL KOH甲醇溶液配置成0.02mM的溶液，将邻苯二甲醛13.4mg溶于10mL甲醇。首先，分别测得L-苯丙氨酸和邻苯二甲醛的ECD图谱。然后，取100μL L-苯丙氨酸溶液和100μL邻苯二甲醛溶液混合，振摇1min，即可进行ECD测试。
(2)原料、衍生化产物的ECD检测
ECD检测结果如图1所示。手性识别探针邻苯二甲醛(1a)的ECD图谱中无明显Cotton效应。在测试浓度下，L-苯丙氨酸(1b)的ECD图谱在210nm处有一个正的Cotton效应。当在L-苯丙氨酸中加入0.5当量的邻苯二甲醛并振荡1min后，反应液(1c)的ECD图谱在272nm出现一个负的Cotton效应和在230nm出现一个正的Cotton效应。由此可见，与原料L-苯丙氨酸和邻苯二甲醛的ECD图谱相比，手性识别体系的ECD图谱发生了显著变化。
(3)衍生化产物的HPLC分析
以含有0.1％甲酸的乙腈和水作为洗脱剂，流动相中乙腈的比例从5％到95％，梯度洗脱时间为16min。首先，确定在该分析条件下，L-苯丙氨酸(2a)、邻苯二甲醛(2b)和纯化后所得产物的峰(2c)位分别为4.8min，8min(宽峰)和10min。然后，取100μL L-苯丙氨酸和100μL邻苯二甲醛混合振摇1分钟，测得反应液(2d)的HPLC色谱图(图2)。结果显示，当L-苯丙氨酸与邻苯二甲醛在碱性条件下，以2:1的摩尔比例混合后，在10min处出现一个新的峰，与纯化所得衍生化产物的峰位一致，而原料峰消失。这说明邻苯二甲醛手性识别氨基酸的速度快，而且无副产物产生。
(4)衍生化过程的1H-NMR监测
为更好地阐述手性识别的过程，我们通过1H-NMR来检测邻苯二甲醛手性识别氨基酸绝对构型的过程。将L-苯丙氨酸与邻苯二甲醛在碱性条件下，以2:1比例混合，立即测定1H-NMR(图3)。从图3可知，衍生化产物异吲哚结构的特征氢信号a,b,c,d均出现，符合异吲哚结构的氢谱特征。这说明邻苯二甲醛手性识别氨基酸的速度快，而且这一过程中没有双希夫碱的产生。
实施例2
L-丙氨酸衍生化产物的结构确定
以L-丙氨酸和L-苯丙氨酸为例，说明衍生化产物的化学结构，分别为实施例2和3。
取56mg的KOH固体，溶于5mL的甲醇溶液。将L-丙氨酸89mg和KOH甲醇溶液5mL加入茄形瓶内，搅拌使之混合均匀，再加入67mg的邻苯二甲醛，室温搅拌反应1min，经中压制备得到衍生化产物纯品。L-丙氨酸衍生化产物的1H-NMR、13C-NMR和HRMS图谱分别列于图4-图6。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.09(d,1H),7.71(brs,2H),7.55(d,1H),4.87(d,1H),4.72(d,1H),4.59(brs,1H),4.46(brs,1H),1.52(dd,6H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ173.2,171.5,159.8,143.8,132.7,129.1,128.8,126.5,123.7,57.2,55.2,53.4,19.8,16.31.HRMS-ESI(calcd.for C14H17O4N2[M+H]+)277.1183，found 277.1183.
实施例3
L-苯丙氨酸衍生化产物的结构确定
取56mg的KOH固体，溶于5mL的甲醇溶液。将L-苯丙氨酸165mg和KOH甲醇溶液5mL加入茄形瓶内，搅拌使之混合均匀，再加入67mg的邻苯二甲醛，室温搅拌反应1min，经中压制备得到衍生化产物纯品。L-苯丙氨酸衍生化产物的1H-NMR、13C-NMR和HRMS图谱分别列于图7-图9。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6):δ7.97(d,1H),7.10-7.75(m,13H),4.84(brs,1H),4.54(brs,2H),4.37(dd,1H),3.25(brs,4H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ172.6,171.0,161.9,143.5,140.5,139.3,132.8,130.0,129.1,128.8,126.8,126.7,123.7,63.6,62.1,53.3,38.6,36.1.HRMS-ESI(calcd.for C26H25O4N2[M+H]+)429.1809，found 429.1808.
实施例4
碱条件的优化
将16.5mg L-苯丙氨酸溶于5mL甲醇溶液作为L-苯丙氨酸母液(0.02mM)，分别配制KOH、NaOH、LiOH、Na2CO3、NaHCO3、K2CO3、DIEA和DBU的摩尔浓度为1mM的溶液作为碱液，将13.4mg邻苯二甲醛溶于10mL的甲醇溶液作为邻苯二甲醛母液。取L-苯丙氨酸母液0.5mL，加入等摩尔量的不同碱溶液振摇20s，再加入0.5mL的邻苯二甲醛母液振摇1min后，测试ECD图谱，结果见附图10。
由图10可见，在不同碱的作用下，L-苯丙氨酸与邻苯二甲醛反应后，ECD图谱的Cotton效应的位置不变，但ECD信号的强度有所不同。这表明碱对衍生化产物结构无影响，但对反应程度的影响较明显。其中，在使用有机碱DIEA和无机碱KOH时，ECD图谱中272nm处的Cotton效应最强；在使用有机碱DBU时，ECD信号最弱。因此，我们优先选用无机碱KOH作为邻苯二甲醛手性识别氨基酸的碱。
实施例5
衍生化产物稳定性的考察
将邻苯二甲醛与L-苯丙氨酸按照1:2的比例在碱性条件混合，考察反应时间对手性识别体系ECD图谱的影响。由于反应液中衍生化产物的绝对浓度很难直接确定，我们引入各向异性因子(g因子)忽略浓度的影响。通过对反应液不同时间点的ECD监测，发现邻苯二甲醛可快速手性识别氨基酸，而且在40min之内，g因子无明显变化(图11)。同时，还通过HPLC对反应体系进行监测，发现在1h之内除产物峰外，无其它峰产生，进一步说明了产物的稳定性。
实施例6
不同溶剂对邻苯二甲醛手性识别氨基酸的影响
通过HPLC分析在甲醇(12a)和水(12b)中邻苯二甲醛手性识别L-苯丙氨酸的反应液，结果如图12所示。这表明水做溶剂时可能带来较多的副产物，而且反应时间长，因此我们优选甲醇作为溶剂。
实施例7
反应原料不同比例和浓度对反应体系的影响
在邻苯二甲醛手性识别L-苯丙氨酸体系中，用ECD和UV监测L-苯丙氨酸与邻苯二甲醛的配料比对反应体系的影响，结果见图13和图14。由此可见，不同配料比的反应液所测得的ECD和UV信号图形相同，强度接近。这表明氨基酸与邻苯二甲醛的配料比对产物结构没有影响。
在邻苯二甲醛手性识别D-苯丙氨酸体系中，采用ECD和UV监测反应浓度对反应体系的影响，结果图15和图16。ECD和UV监测结果显示，不同浓度的反应液所测得的ECD和UV信号图形相似，相应的信号强度均随浓度呈线性变化。这说明反应液浓度对反应产物结构没有影响。
实施例8-27
标准氨基酸衍生化产物的电子圆二色谱图谱
依次取0.01mmol的D-/L-丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、组氨酸以及D-Phe-D-Phe和L-Phe-L-Phe(依次对应实施例8-27)，分别溶于KOH的甲醇溶液，加入0.005mmol的邻苯二甲醛，振摇1min，测定电子圆二色谱图谱，列于附图17-35。
电子圆二色谱图谱是吸收光谱，只有手性中心离生色团较近才能产生电子圆二色谱信号，常见的生色团如苯环、羰基等，而对于氨基酸或不含生色团的手性伯胺化合物，电子圆二色谱信号一般很弱或者无信号。我们引入邻苯二甲醛使氨基酸衍生物的电子圆二色谱信号增强而且波长红移避免了杂质的干扰，而且邻苯二甲醛与氨基酸反应并未涉及手性碳原子，其构型在反应中保持不变。附图35二肽L-Phe-L-Phe衍生化产物与附图18L-Phe衍生化产物的ECD图谱形状类似，峰位略有红移。因此，N端的氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、组氨酸之一的肽类化合物样品也可以通过附图17-34来确定其N-端氨基酸的绝对构型。
实施例28
氨基酸光学纯度的确定
在线性浓度范围内，建立对映体过量(e.e.％)与各向异性因子(g因子)之间的标准曲线确定氨基酸的光学纯度。首先，在碱性甲醇溶液内配制11份不同e.e.％苯丙氨酸，其e.e.％分别100，80，60，40，20，0，-20，-40，-60，-80和-100。将配置好的不同e.e.％氨基酸与邻苯二甲醛以摩尔比2:1反应。测得不同ee％氨基酸反应液的ECD图谱，建立不同e.e.％与g因子的标准曲线(图34)。随后，随机配制不同e.e.％的L-苯丙氨酸，实际值与计算值的比较见表1。
表1.苯丙氨酸样品的手性识别分析应用
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (8)

1.一种识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)衍生化：将待测氨基酸样品或肽类化合物样品溶于碱性甲醇溶液中，加入邻苯二甲醛固体或其甲醇溶液，振摇，得待测氨基酸或肽类化合物样品的衍生化产物；
(2)采集电子圆二色谱：通过电子圆二色谱仪采集待测氨基酸或肽类化合物样品衍生化产物的电子圆二色谱；
(3)构型确定：将待测氨基酸样品衍生化产物的电子圆二色谱与标准氨基酸衍生化产物的电子圆二色谱进行比较，确定待测氨基酸样品的绝对构型；
(4)光学纯度确定：建立对映体过量与特定波长下各向异性因子的标准曲线，确定其光学纯度；
其中所述氨基酸选自天然的或非天然的伯胺类手性氨基酸；
所述肽类化合物选自N端为裸露的伯胺类手性氨基酸的肽类化合物；
所述标准氨基酸衍生化产物的电子圆二色谱是由已知绝对构型的、与待测氨基酸或肽类化合物样品相同种类的氨基酸或肽类化合物，在相同的条件下进行衍生化反应并进行电子圆二色谱采集获得。
2.根据权利要求1所述的识别氨基酸及肽类化合物的绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，所述各向异性因子为特定波长下电子圆二色谱信号强度与紫外吸收强度的比值。
3.根据权利要求2所述的识别氨基酸及肽类化合物的绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，所述特定波长选自220-400nm。
4.根据权利要求1所述的识别氨基酸及肽类化合物的绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，所述电子圆二色谱仪的参数设置条件为：扫描波长220-400nm，扫描速度100nm/min，数据间隔0.5nm，带宽1nm，样品池为0.1cm。
5.根据权利要求1所述的识别氨基酸及肽类化合物的绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，所述天然氨基酸选自丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸或组氨酸；
所述肽类化合物选自N端的氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸或组氨酸的肽类化合物。
6.根据权利要求1所述的识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，步骤(1)衍生化中所述的肽类化合物选自二肽、三肽、四肽、五肽、六肽。
7.根据权利要求1所述的识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于：步骤(1)衍生化中所用的碱性甲醇溶液的碱性条件选自有机碱或无机碱。
8.根据权利要求7所述的识别氨基酸及肽类化合物绝对构型和光学纯度的方法，其特征在于，所述无机碱选自KOH、NaOH、LiOH、Na2CO3、NaHCO3、K2CO3，所述有机碱选自DIEA和DBU。
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