CN113018347B - 一种中药提取物纳米粒及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药领域，公开了一种中药提取物纳米粒，它是以白花蛇舌草半枝莲药对为原料药，经70％乙醇回流提取，提取液浓缩得到总浸膏，总浸膏干法上柱，采用D101大孔树脂柱，经0～95％的乙醇‑水系统梯度洗脱，收集60％～70％乙醇洗脱液，再经高速离心处理，得到的沉淀冷冻干燥，即得。本发明中药提取物纳米粒的粒径大小均一性好、粒径分布范围窄、稳定性高，经体外细胞毒实验和细胞迁移实验表明，该纳米粒具有明显抑制三阴性乳腺癌MDA‑MB‑231细胞增殖和迁移的作用。本发明还公开了所述的中药提取物纳米粒制备治疗肿瘤药物中的应用。

Description

一种中药提取物纳米粒及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及一种中药提取物纳米粒及其制备方法和应用。
背景技术
随着癌症发病率和死亡率的增加，其已经成为全世界主要的卫生问题。在中国，中医药几乎参与了肿瘤治疗的全过程，无论是在协同增强，降低西药毒性，还是在提高患者生存质量，以及中晚期肿瘤患者“人瘤共存”等方面均发挥了至关重要的作用。中医“药对”又称对药，是两种草药联合使用可产生良性协同作用或特殊疗效的药物组，它既是复方的主干，也是配伍的基础，是最基本和最简单的多草药治疗形式。运用中医“药对”治疗癌症成为近年来研究的热点。然而，中药药对发挥主要活性的成分和配伍理论仍未得到很好的阐明。
白花蛇舌草为茜草科耳草属植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd)的全草，其味甘、性寒，归心、肝、脾、大肠经，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛之功，广泛分布于中国南部和其他亚洲国家，具有神经保护和抗肿瘤活性，在临床上，几乎任何癌症都可以入药治疗。半枝莲为唇形科黄芩属植物半枝莲(Scutellaria barbata D.Don)的干燥全草，其味辛苦、性寒，归肺、肝、肾经，具有清热解毒、化瘀利尿之功，是最常见的清热解毒的草药之一，可治疗肝癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌等多种癌症。在中医系统中，白花蛇舌草和半枝莲都属于清热解毒类中药，具有清热解毒、活血化瘀、消肿软坚等功效。对肿瘤、炎症等疗效确切，是我国常用的抗癌药中的核心药对。
中药化学成分是中药发挥药效作用的基础。目前，随着三萜、黄酮、蒽醌、生物碱等化合物自组装的特性被相继发现，将天然产物自组装的特性和中药化学成分在中药煎煮中的变化相结合为揭示中药配伍理论提供了一个新的研究方向。发现和探究药对中的中药化学成分的自我识别和自组装不仅可以用于中药配伍理论的揭示，还可以分离和制备具有良好生物相容性和生物活性的纳米粒，使其更有利于转化为临床药物。
因此，通过药效追踪，在现有药对的研究基础上，发现和确定白花蛇舌草半枝莲药对中的功能性纳米粒，并对其进行追踪表征和化学成分的研究，对于研究白花蛇舌草半枝莲药对预防和治疗肿瘤具有重要的意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种中药提取物纳米粒。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种中药提取物纳米粒，所述的中药提取物纳米粒是以白花蛇舌草半枝莲药对为原料药，经体积分数70％乙醇加热回流提取，提取液减压浓缩得到总浸膏，总浸膏干法上柱，采用D101大孔树脂柱，经0～95％的乙醇-水系统梯度洗脱，收集60％～70％乙醇洗脱液，再经高速离心处理，得到的沉淀经冷冻干燥，即为中药提取物纳米粒。
所述的白花蛇舌草半枝莲药对由白花蛇舌草和半枝莲干燥全草重量比为1:1组成。
所述的白花蛇舌草半枝莲药对和70％乙醇的质量体积比(料液比)为1:20～1:30g/mL或kg/L。
所述的加热回流提取的次数为2次，每次提取1h～2h。
所述的减压浓缩的温度为60～80℃。
所述的干法上柱为：总浸膏与D101大孔树脂按照重量比1:1混合均匀。
所述的梯度洗脱为：依次用水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、95％乙醇洗脱，每个梯度洗脱约10个柱体积，经薄层板检测合并，收集60％-70％乙醇洗脱液。
所述的高速离心处理的转速为8000～10000r/min，离心时间为20～40min。
具体的，所述的中药提取物纳米粒是由以下方法制得的：取白花蛇舌草半枝莲药对，70％乙醇加热回流提取2次，每次1～2h，提取液合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏；总浸膏与D101大孔树脂按照重量比1:1混合均匀，干法上柱，经0-95％的乙醇-水系统梯度洗脱，依次用水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、95％乙醇洗脱，收集60％～70％乙醇洗脱液，再经高速离心处理，得到的沉淀经冷冻干燥，即为中药提取物纳米粒。
经过HPLC和HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS定性分析，所述的中药提取物纳米粒中主要成分含有金色酰胺醇酯、半枝莲碱、棕榈酸酯和Scutebarbatine W。
本发明中药提取物纳米粒的平均粒径在130nm左右，PDI值在0.1～0.3之间，表明纳米粒的粒径均一度较高。此外，纳米粒的稳定性高，放置一个月后，其平均粒径分布和粒度分布无明显变化，液相结果也显示其主要成分未发生变化。
本发明的另一个目的在于提供一种中药提取物纳米粒的制备方法，包括：以白花蛇舌草半枝莲药对干燥全草为原料药，经70％乙醇回流提取，减压浓缩得到总浸膏，总浸膏干法上柱，采用D101大孔树脂柱，经0～95％的乙醇-水系统梯度洗脱，收集60％～70％乙醇洗脱液，再经高速离心处理，得到的沉淀经冷冻干燥，即为中药提取物纳米粒。
优选的，所述的中药提取物纳米粒的制备方法包括：取白花蛇舌草半枝莲药对，70％乙醇加热回流提取2次，每次1～2h，提取液合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏；总浸膏与D101大孔树脂按照重量比1:1混合均匀，干法上柱，经0-95％的乙醇-水系统梯度洗脱，依次用水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、95％乙醇洗脱，收集60％～70％乙醇洗脱液，再经高速离心处理，得到的沉淀经冷冻干燥，即为中药提取物纳米粒。
本发明的另一个目的是提供一种中药有效部位，是以白花蛇舌草半枝莲药对为原料药，经体积分数70％乙醇加热回流提取，提取液减压浓缩得到总浸膏，总浸膏干法上柱，采用D101大孔树脂柱，经0～95％的乙醇-水系统梯度洗脱，收集60％～70％乙醇洗脱液，再经浓缩得到。
发明人对白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏洗脱的不同有效部位进行体外抗癌活性筛选，体外细胞毒实验表明60％-70％乙醇部位相对于其他部位，可以显著抑制肝癌、肺癌、乳腺癌细胞的增殖，对肝癌、肺癌、乳腺癌均具有显著的抗癌活性，且对三阴性乳腺癌MDA-MB-231的抗癌活性最好。由体外细胞毒实验和细胞迁移实验表明，60％-70％乙醇部位可以明显抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖。从60％-70％乙醇部位高速离心得到的纳米粒体外细胞毒实验和细胞划痕实验均表明，中药纳米粒可以显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖和迁移。
因此，本发明的另一个目的是提供所述的中药提取物纳米粒或所述的中药有效部位在制备治疗肿瘤药物中的应用。
本发明的另一个目的是提供所述的中药提取物纳米粒或所述的中药有效部位在制备抑制肿瘤细胞增殖和/或迁移药物中的应用。
所述的肿瘤为肝癌、肺癌、乳腺癌。
所述的药物以所述的中药提取物纳米粒或所述的中药有效部位为有效成分或主要有效成分，还可以包括靶向特异性的纳米材料。
与现有技术相比，本发明中药提取物纳米粒具有以下优点：
(1)、本发明采用富集和纯化方法，从白花蛇舌草半枝莲药对中通过药效追踪得到中药提取物纳米粒，相比于白花蛇舌草半枝莲药对总提物，中药提取物纳米粒活性成分明确，明确了白花蛇舌草和半枝莲药对中发挥抗肿瘤活性的药效物质基础，提高了药对白花蛇舌草和半枝莲在临床上治疗癌症的科学性。
(2)、本发明中药提取物纳米粒的制备方法简单、绿色环保，操作简便，得到的粒径大小均一性好，稳定性高。
本发明中药提取物纳米粒子可以与纳米材料相结合，有效地提高中药的生物利用度和靶向特异性。
(3)、中药提取物纳米粒具有良好的抗癌活性，特别是对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞，可以显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖和迁移。
(4)、本发明解释了药对煎煮的配伍机制，解释了临床应用上所产生的协同增效与减毒配伍。
附图说明
图1：实施例1不同溶剂提取物的TEM图。
图2：实施例2中5个有效部位和总提取物的TEM图。
图3：实施例2中5个有效部位和总提取物的体外细胞毒性测试结果。
图4：实施例3中药提取物纳米粒的丁达尔效应图。
图5：实施例3中药提取物纳米粒的TEM图。
图6：实施例3中药提取物纳米粒的粒径分布图。
图7：实施例3中药提取物纳米粒的粒径分布变化。
图8：实施例3中药提取物纳米粒的主要成分的变化。
图9：实施例3中药提取物纳米粒的形貌特征。
图10：实施例3中药提取物纳米粒的紫外图谱。
图11：实施例3中药提取物纳米粒的红外图谱。
图12：实施例3中药提取物纳米粒的HPLC图谱。
图13：实施例3中药提取物纳米粒的HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS图。
图14：实施例3中药提取物纳米粒对MDA-MB-231乳腺癌细胞的体外细胞毒性测试结果。
图15：实施例3中药提取物纳米粒抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的体外细胞迁移实验结果。
图16：实施例3中药提取物纳米粒对MDA-MB-231乳腺癌细胞的体外细胞迁移抑制率。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但下述仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1：白花蛇舌草半枝莲药对(SH)的不同溶剂提取物
取20g白花蛇舌草半枝莲干燥全草(白花蛇舌草和半枝莲的重量比为1:1，下同)，料液比为1:20g/mL，纯水加热回流提取2次，每次1h，提取液过滤合并后减压浓缩，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏2.1g，即纯水SH总提物。
取20g白花蛇舌草半枝莲干燥全草(1:1)，料液比为1:20g/mL，30％乙醇加热回流提取2次，每次1h，提取液过滤合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏2.4g，即30％乙醇SH总提物。
取20g白花蛇舌草半枝莲干燥全草(1:1)，料液比为1:20g/mL，50％乙醇加热回流提取2次，每次1h，提取液过滤合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏2.3g，即50％乙醇SH总提物。
取20g白花蛇舌草半枝莲干燥全草(1:1)，料液比为1:20g/mL，70％乙醇加热回流提取2次，每次1h，提取液过滤合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏2.3g，即70％乙醇SH总提物。
取20g白花蛇舌草半枝莲(1:1)，料液比为1:20g/mL，95％乙醇加热回流提取2次，每次1h，提取液过滤合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏2.0g，即95％乙醇SH总提物。
通过透射电子显微镜(TEM)对以上不同浓度的乙醇-水提取溶剂所得到的5个SH总提物进行形貌观察，结果如图1，只有70％乙醇提取得到的70％乙醇SH总提物形成了均一的纳米粒，其粒子形态近球形，粒径在200nm左右。
通过MTT实验对实施例1得到的5个SH总提物进行细胞毒性测试。精密称取各个总提物，用二甲基亚砜(DMSO)超声配制成100mg/mL(生药质量/mL)的溶液。实验前，在无菌条件下，用新鲜的DMEM不完全培养基将5个SH总提物均分别稀释为2000μg/mL、1000μg/mL、500μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。取对数期的肝癌细胞HepG2、LM3，肺癌细胞A549、LLC以及乳腺癌细胞4T1、MCF-7和MDA-MB-231，胰酶消化收集细胞后，以5×103个/孔的密度接种到96孔板中，每孔加入100μL含10％胎牛血清的DMEM培养基，每组设置5个平行孔。在培养箱中进行孵育，待细胞贴壁80％后，用移液枪小心吸弃上清液，更换为100μLDMEM不完全培养基(空白组)或者含不同浓度样品的DMEM不完全培养基(试验组)，继续孵育48h，取出96孔板，避光条件下加入10μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续避光孵育2h，小心弃去上清，加入100μLDMSO，使用酶标仪在492nm波长下测定各孔的吸光度值，记录结果，按照下述公式计算细胞的存活率：
细胞存活率(％)＝(试验组吸光度值/空白组吸光度值)×100％
结果见表1，相比于其他提取溶剂，70％乙醇SH总提物对7种癌细胞系具有更好的抗癌活性，表明70％SH总提物具有较好的细胞毒性。因此，将70％乙醇作为白花蛇舌草半枝莲药对的提取溶剂。
表1：实施例1中不同溶剂SH提取物的体外细胞毒性
Figure GDA0003375990890000061
实施例2：70％乙醇提白花蛇舌草半枝莲药对有效部位的制备
白花蛇舌草和半枝莲(重量比1:1)干燥全草共20kg，料液比为1:20kg/L，70％乙醇加热回流提取2次，每次1h，提取液过滤合并后减压浓缩至无醇味，得到白花蛇舌草半枝莲药对总浸膏2595g。将总浸膏与D101大孔树脂按照重量比1:1混合均匀，干法上样，依次用纯水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、95％乙醇洗脱，每个梯度洗脱约10个柱体积。
经薄层板检测合并后得到5个有效部位，分别是纯水部位(记为0％SH有效部位)、10％-20％乙醇部位(记为20％SH有效部位)、30％-50％乙醇部位(记为50％SH有效部位)、60％-70％乙醇部位(记为70％SH有效部位)、80％-95％乙醇部位(记为95％SH有效部位)。5个有效部位分别减压浓缩，得到0％SH总浸膏260g，20％SH总浸膏302g，50％SH总浸膏270g，70％SH总浸膏180g，95％SH总浸膏220g。
通过透射电镜(TEM)对白花蛇舌草半枝莲药对的5个有效部位进行形貌观察，结果如图2，70％SH有效部位形成了均一的纳米粒，其粒子形态近球形，粒径在100nm左右。
通过马尔文粒度仪对本实施例5个有效部位的粒径分布、PDI和表面电位进行考察，如表2所示，表明，70％SH部位的粒径分布良好，其平均粒径在138nm左右，与图2中透射电镜结果相一致。PDI值在0.1-0.3之间，表明70％SH部位的纳米粒的粒径均一度较高。
表2：实施例2中5个有效部位的粒径及Zeta电位分布
Figure GDA0003375990890000071
采用MTT实验对本实施例5个有效部位对进行细胞毒性测试。精密称取各个有效部位，用二甲基亚砜(DMSO)超声配制成100mg/mL(生药质量/mL)的溶液。实验前，在无菌的条件下，用新鲜的DMEM不完全培养基将5个有效部位和70％乙醇SH总提物分别稀释为1000μg/mL、500μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。取对数期的肝癌细胞HepG2、LM3；肺癌细胞A549、LLC以及乳腺癌细胞4T1、MCF-7和MDA-MB-231，胰酶消化收集细胞后，以5×103个/孔的密度接种到96孔板中，每孔加入100μL含10％胎牛血清的DMEM培养基，每组设置5个平行孔。在培养箱孵育，待细胞贴壁80％后，用移液枪小心吸弃上清液，更换为100μLDMEM不完全培养基(空白组)或者含不同浓度样品的DMEM不完全培养基(试验组)，继续孵育48h，取出96孔板，避光条件下加入10μL5mg/mL的MTT溶液，继续避光孵育2h，小心弃去上清，加入100μLDMSO，使用酶标仪在492nm波长下测定各孔的吸光度值，记录结果，按照下述公式计算细胞的存活率：
细胞存活率(％)＝(试验组吸光度值/空白组吸光度值)*100％
结果见表3和图3，相较于其他4个有效部位，70％SH有效部位对7种癌细胞系均具有更好的抗癌活性，其中对三阴性乳腺癌MDA-MB-231的活性最好，可以明显抑制人源性三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。表明70％SH有效部位具有较好的细胞毒性。
表3：实施例2中5个有效部位和总提取物的体外细胞毒性
Figure GDA0003375990890000081
注：与表1中70％乙醇SH总提物的体外细胞毒性为两次独立的实验。
综上，70％SH有效部位形成了大小均一性好的纳米粒，且该部位的抗癌活性也更显著。因此，以70％SH有效部位为研究对象，对其形成的纳米粒进行深入的研究。
实施例3：
中药提取物纳米粒的制备：取实施例2白花蛇舌草半枝莲药对70％SH有效部位，10000r/min离心30min，收集沉淀，冷冻干燥，即得中药提取物纳米粒(记为70％SH-NPs)。
对中药提取物纳米粒进行性能测试，包括丁达尔效应、形貌特征、粒径分布测定、稳定性考察。
通过丁达尔效应对中药提取物纳米粒进行初步判定，结果如图4，表明纳米粒具有明显的丁达尔效应。
通过TEM电镜对中药提取物纳米粒的形貌进行表征，结果如图5，表明纳米粒的外观呈球形，形貌均一。
通过马尔文粒度仪对其粒径分布进行考察(图6)，所测粒径(130nm)比透射电镜结果(100nm)稍大，可能与透射电镜是在粒子干燥情况下测定有关。
为了验证本实施例中药提取物纳米粒的稳定性，追踪了粒径分布变化、形貌特征和主要成分的变化进行稳定性考察。结果如图7-图9，纳米粒在4℃下放置一个月，其平均粒径和粒度分布无明显变化，形貌特征和主要成分在两周之内也无明显变化，说明该中药提取物纳米粒具有较高的稳定性。
对本实施例中药提取物纳米粒进行成分分析和鉴定，经过紫外光谱(图10)、红外光谱(图11)、HPLC(图12)和HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS定性分析(图13)，主要成分为金色酰胺醇酯(来源于白花蛇舌草)，半枝莲碱(来源于半枝莲)，棕榈酸酯(来源于白花蛇舌草)和Scutebarbatine W(来源于半枝莲)。
精密称取中药提取物纳米粒，用二甲基亚砜(DMSO)超声配制成100mg/mL的溶液。
样品配制：精密称取中药提取物纳米粒，用50％甲醇超声配置成10mg/mL的溶液，0.22μm滤膜过滤，作为供试品用于高效液相和质谱测试分析。
中药提取物纳米粒的HPLC分析条件：流动相：0.1％冰醋酸水(A)—甲醇(B)，洗脱条件：0～30min 40％(B)-60％(B)；30～40min 60％(B)-65％(B)；40～85min 65％(B)-75％(B)；85～90min 75％(B)；90～125min 75％(B)-90％(B)；125～135min 90％(B)；流速为1mL/min；检测波长：204nm；进样体积：10μL。
中药提取物纳米粒的质谱分析条件：流动相：0.1％冰醋酸水(A)—甲醇(B)，洗脱条件：0～30min 40％(B)-60％(B)；30～40min 60％(B)-65％(B)；40～85min 65％(B)-75％(B)；85～90min 75％(B)；90～125min 75％(B)-90％(B)；125～135min 90％(B)；流速为1mL/min；检测波长：204nm；进样体积：10μL；正离子模式。
表4：中药提取物纳米粒可能化合物结构推断
Figure GDA0003375990890000091
采用MTT实验对中药提取物纳米粒进行细胞毒性测试。精密称取中药提取物纳米粒，用二甲基亚砜(DMSO)超声配制成100mg/mL的溶液。实验前，在无菌的条件下，用新鲜的DMEM不完全培养基将中药提取物纳米粒分别稀释至500μg/mL、300μg/mL、200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。取对数期人源性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231，胰酶消化收集细胞后，以5×103个/孔的密度接种到96孔板中，每孔加入100μL含10％胎牛血清的DMEM培养基，每组设置5个平行孔。在培养箱中孵育，待细胞贴壁80％后，用移液枪小心吸弃上清液，更换为100μLDMEM不完全培养基(空白组)或者含不同浓度样品的DMEM不完全培养基(试验组)，继续孵育48h，取出96孔板，避光条件下加入10μL5mg/mL的MTT溶液，继续避光孵育2h，小心弃去上清，加入100μLDMSO，使用酶标仪在492nm波长下测定各孔的吸光度值，记录结果，按照下述公式计算细胞的存活率：
细胞存活率(％)＝(试验组吸光度值/空白组吸光度值)×100％
结果见图14，在浓度200μg/mL、300μg/mL、500μg/mL的中药提取物纳米粒作用48h后，MDA-MB-231乳腺癌细胞的凋亡率可达到50％以上，其半数抑制浓度为155.4μg/mL。表明中药提取物纳米粒对人源性三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞具有较好的细胞毒性，且根据分析可知：通过离心去除了无效的杂质成分，实现了对活性成分的进一步富集，提高了纳米粒的抗癌活性，其活性优于70％有效部位。
表5. 70％SH-NPs对MDA-MB-231的IC50值
Figure GDA0003375990890000101
注：70％乙醇SH上清为70％SH有效部位离心得到的上清液。
通过细胞划痕实验考察中药提取物纳米粒对抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响。精密称取中药提取物纳米粒，用二甲基亚砜(DMSO)超声配制成100mg/mL的溶液。实验前，在无菌的条件下，用新鲜的DMEM不完全培养基将中药提取物纳米粒分别稀释为150μg/mL、100μg/mL。取对数期三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231，胰酶消化收集细胞后，以20×104个/孔的密度接种到6孔板中，每孔加入2mL含10％胎牛血清的DMEM培养基，37℃培养箱培养12h。用10μL的枪头划3条平行线，PBS清洗3次，加入DMEM不完全培养基或者含不同浓度样品的DMEM不完全培养基，继续孵育24h，在显微镜下观察拍照。
结果见图15和图16，中药提取物纳米粒能够抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移，尤其是在150μg/mL的浓度时，对抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移的作用更为显著。

Claims (4)

1.一种中药提取物纳米粒，其特征在于：所述的中药提取物纳米粒是以白花蛇舌草半枝莲药对为原料药，经70%乙醇回流提取，提取次数为2次，每次提取1h～2h，提取液浓缩得到总浸膏，总浸膏干法上柱，采用D101大孔树脂柱，经0～95%的乙醇-水系统梯度洗脱，梯度洗脱为：依次用水、10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇洗脱，收集60%～70%乙醇洗脱液，再经高速离心处理，得到的沉淀即为中药提取物纳米粒，中药提取物纳米粒含有金色酰胺醇酯、半枝莲碱、棕榈酸酯和Scutebarbatine W；其中，所述的白花蛇舌草半枝莲药对由白花蛇舌草和半枝莲干燥全草重量比为1:1组成；所述的白花蛇舌草半枝莲药对和70%乙醇的质量体积比为1:20～1:30g/mL或kg/L；所述的高速离心处理的转速为8000～10000r/min，离心时间为20～40min。
2.权利要求1所述的中药提取物纳米粒在制备治疗肿瘤药物中的应用。
3.权利要求1所述的中药提取物纳米粒在制备抑制肿瘤细胞增殖和/或迁移药物中的应用。
4.根据权利要求2或3的应用，其特征在于：所述的肿瘤为肝癌、肺癌、乳腺癌。
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