CN104961717B - 一种槐属二氢黄酮g的富集方法及应用 - Google Patents

一种槐属二氢黄酮g的富集方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途，通过在槐属二氢黄酮G提取富集过程中引入催化转化步骤明显提高了槐属二氢黄酮G的提取得率。根据测定的槐属二氢黄酮G的理化性质，将槐属二氢黄酮G制备成片剂、胶囊剂、脂质体、纳米粒、纳米混悬剂、自微乳、磷脂复合物和肠溶片剂等，有助于槐属二氢黄酮G抗癌效果的更好发挥。

Description

一种槐属二氢黄酮G的富集方法及应用
技术领域
本发明涉及药物领域，尤其涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术
癌症是起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中常见的一类，一直是威胁人类生命的严重疾病之一，世卫组织称，中国的癌症发病率正在大幅上升，2014年中国约有220万人死于癌症，因此寻找有效的抗癌药物已成为癌症治疗的当务之急。我国具有丰富的中草药资源，目前已发现多种中草药具有抗癌效果，如苦参、白花蛇舌草、苍耳、蒲公英、斑蝥等。但由于中草药中成分复杂，有效成分含量较低，导致了中草药的抗癌效果等不到有效的发挥，因此，需要对中草药中有效成分进行富集。
中药苦参为豆科槐属植物苦参(S.flavescens)的干燥根，其性寒味苦，有清热解毒、明目止泪、祛风杀虫、安五脏、转身定志的作用。从中分离出的主要化学成分可分为两大类，即苦参生物碱和苦参黄酮，其中苦参黄酮具有抗肿瘤活性已有多篇文献报道，中国专利CN101091707A公开了苦参黄酮类化合物或其混合物可用于制备抑制NF-κB、EGFR、Her-2或KDR活性的抑制剂或制备肿瘤或炎症的药物，中国专利CN1676521A公开了槐黄烷酮G具有抗肿瘤活性，对非小细胞肺癌、卵巢癌、皮肤癌、中枢神经系统肿瘤、结肠癌、白血病、肝癌、食管癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、淋巴瘤、肺癌、恶性黑色素瘤等均具有抑制活性，其中槐黄烷酮G的苦参提取得率为0.06％。
槐属二氢黄酮G(Sophoraflavanone G)又名槐黄烷酮G，化学结构如下：
分子式C25H28O6，分子量424.49，熔点173～175℃。
虽然现有技术中对于苦参中槐属二氢黄酮G的抗癌活性已有报道，但由于苦参中槐属二氢黄酮G的含量较低，提取得率不高，CN1676521A公开的提取方法中槐属二氢黄酮G的得率不足0.1％，因此，需要开发更加有效的槐属二氢黄酮G的提取和富集方法。
发明内容
本发明提供了得率明显提高的槐属二氢黄酮G的富集方法及其制备抗癌药物的用途，其以苦参作为原料，经苦参总黄酮的提取、槐属二氢黄酮G的富集制得高得率、高纯度的槐属二氢黄酮G。
具体的，本发明涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法，具体步骤包括：
(1)苦参总黄酮的提取
苦参药材，粉碎至通过1～9号筛，采用1～20倍量有机溶剂，经超声、回流、浸渍或渗漉提取，提取条件为提取1～4次，每次提取时间为5～90min，合并提取液，回收溶剂至干，获得苦参总黄酮的固形物；
(2)槐属二氢黄酮的转化
将步骤(1)所得的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐或Lewis酸混合，在N2保护下，升温至30～150℃反应，反应结束后冷却，加水，放入1-6℃冰箱过夜后过滤，所得固形物即为槐属二氢黄酮G粗品，其中所述的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐或Lewis酸的比例为10：1-200；加入的水与苦参总黄酮固形物的比例为1-40:1ml/g；
(3)槐属二氢黄酮G的富集过程
将步骤(2)所得转化样品湿法或干法上样，通过正相硅胶H柱色谱进行分离，流动相为石油醚-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统或氯仿甲醇系统、二氯甲烷甲醇系统，通过薄层点样合瓶，收集洗脱部位，相应洗脱部位回收溶剂至干，加二氯甲烷超声复溶，即得大量白色粉末，离心得固形物，其中槐属二氢黄酮G含量为90～95％，槐属二氢黄酮G的得率可达0.2～1.2％。
其中所述的Lewis酸作为脱甲基化试剂包括三氯化铝、氯化锌或碘化锂，其中优选为三氯化铝。
本发明还涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法，其包括以下步骤：
(1)含槐属二氢黄酮G粗品的制备；
(2)将步骤(1)所得粗品湿法或干法上样，通过正相硅胶H柱色谱进行分离，流动相为石油醚-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统或氯仿甲醇系统、二氯甲烷甲醇系统，通过薄层点样合瓶，收集洗脱部位，相应洗脱部位回收溶剂至干，加二氯甲烷超声复溶，即得大量白色粉末，离心得固形物，其中槐属二氢黄酮G含量为90-95％。
另一方面，本发明涉及通过本发明方法富集制备得到的槐属二氢黄酮在制备治疗癌症药物中的用途，所述癌症优选的为肝癌、胃癌、结肠癌。
此外，由于槐属二氢黄酮G为难溶性药物，本发明还涉及将通过本发明方法富集制备得到的槐属二氢黄酮G制备成合适服用的药物剂型，所述剂型包括片剂、胶囊剂、脂质体、纳米粒、纳米混悬剂、自微乳、磷脂复合物、肠溶片剂、栓剂等，优选的所述片剂、胶囊剂、纳米粒为缓控释制剂。
有益效果：
本发明通过包含转化步骤的槐属二氢黄酮G富集方法，取得了以下的有益效果：
(1)富集方法简单易行，适用于工业化生产；
(2)槐属二氢黄酮G的苦参提取得率显著提高；
(3)槐属二氢黄酮G纯度高，可用于制备槐属二氢黄酮G高纯度对照品；
(4)槐属二氢黄酮G的各类剂型，尤其是缓控释剂型更加有利于槐属二氢黄酮G抗癌效果的发挥。
附图说明
图1：本发明方法提取的槐属二氢黄酮G的HPLC图；
图2：槐属二氢黄酮G纯品的HPLC图；
图3：槐属二氢黄酮G的1H-NMR谱图；
图4：槐属二氢黄酮G的13C-NMR谱图；
图5：不同pH值的槐属二氢黄酮G缓冲溶液的紫外吸收光谱；
图6：不同pH值的槐属二氢黄酮G缓冲溶液的紫外吸收光谱(简化图)
具体实施方式
下面将结合实施例、对比例、效果例对槐属二氢黄酮G的富集方法、制剂的制备方法作进一步的详细说明。
实施例1，槐属二氢黄酮G的富集方法
1)苦参原材料500g，粉碎后过2号筛，加乙酸乙酯3000mL，超声提取30min，滤过，残渣加乙酸乙酯3000mL继续超声30min，滤过，合并滤液，在低于50℃的条件下减压回收有机溶剂至干，得苦参总黄酮样品10.2g。
2)将步骤1)的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐按照重量比1：1混合，N2保护条件下，升温至60℃反应。反应4h，冷却，加水100mL，4℃冰箱过夜。过滤，固形物即为槐属二氢黄酮G的粗品。
3)将转化的粗品进行硅胶H柱层析，以石油醚-乙酸乙酯系统为流动相系统，洗脱；
4)石油醚:乙酸乙酯的不同比例配比作为流动相，石油醚:乙酸乙酯的洗脱比例依次为1:0.2、1:0.4、1:0.6、1:0.8、1:1.0、1:1.2、1:5、1:2，最后以乙酸乙酯冲柱，每200mL换瓶进行梯度洗脱；
5)通过薄层板判断，收集合并石油醚与乙酸乙酯1:0.4的洗脱部分，减压回收溶剂至干，得淡黄色粉末，加二氯甲烷超声得白色粉末，离心得到固形物1.2g。该固形物即为槐属二氢黄酮G，经HPLC面积归一化检测，纯度为92％，其中槐属二氢黄酮G的HPLC色谱图见图1，其中HPLC的检测条件为：以甲醇-水为流动相，梯度洗脱(50％甲醇过渡到100％甲醇)，梯度洗脱条件：50％甲醇过渡到100％甲醇，25min；流速为1mL/min。
实施例2，槐属二氢黄酮G的富集方法
1)苦参原材料500g，粉碎后过1号筛，加60％乙醇3000mL，超声提取60min，滤过，残渣加60％乙醇继续超声30min，滤过，合并滤液，在低于50℃的条件下减压回收有机溶剂至干，得苦参总黄酮样品25.3g。
2)将步骤1)的25.3g苦参总黄酮样品加入1000mL干燥的四口反应瓶中，加入吡啶10g，甲醇100g，升温至40℃，分批慢慢加入5g无水三氯化铝，加完50℃保温反应。TLC检测，停止反应。降至室温，加少量饱和氯化铵水溶液至反应混合液无固体物存在，加乙酸乙酯分次萃取。得乙酸乙酯萃取液回收溶剂至干；
3)将转化液进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯系统为流动相系统，洗脱；
4)石油醚:乙酸乙酯的不同比例配比作为流动相，石油醚:乙酸乙酯的洗脱比例依次为1:0.2、1:0.4、1:0.6、1:0.8、1:1.0、1:1.2、1:5、1:2，最后以乙酸乙酯冲柱，每200mL换瓶进行梯度洗脱；
5)通过薄层板判断，收集合并石油醚与乙酸乙酯1:0.4的洗脱部分，减压回收溶剂至干，得黄色粉末，加二氯甲烷超声得白色粉末，离心得到固形物1.6g。该固形即为槐属二氢黄酮G，纯度可达90％。
实施例3，槐属二氢黄酮G的富集方法
1)苦参原材料500g，粉碎后过2号筛，加甲醇3000mL，超声提取60min，滤过，残渣加甲醇继续超声30min，滤过，合并滤液，在低于50℃的条件下减压回收有机溶剂至干，得苦参总黄酮样品20.2g。
2)将步骤1)的20.2g苦参总黄酮样品与新制吡啶盐酸盐按照重量比1：1混合，N2保护条件下，升温至50℃反应。反应4h，冷却，加水200mL，4℃冰箱过夜。过滤，固形物即为槐属二氢黄酮G的粗品。
3)将槐属二氢黄酮G进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯系统为流动相系统，洗脱；
4)石油醚:乙酸乙酯的不同比例配比作为流动相，石油醚:乙酸乙酯的洗脱比例依次为1:0.2、1:0.4、1:0.6、1:0.8、1:1.0、1:1.2、1:5、1:2，最后以乙酸乙酯冲柱，每200mL换瓶进行梯度洗脱；
5)通过薄层板判断，收集合并石油醚与乙酸乙酯1:0.4的洗脱部分，减压回收溶剂至干，得黄色粉末，加二氯甲烷超声得白色粉末，离心得到固形物2.1g。该固形即为槐属二氢黄酮G，纯度可达95％。
实施例4，槐属二氢黄酮G高纯度对照品的制备
(1)实施例1-3所得到的槐属二氢黄酮G样品，上样量1g，反相C18为填料。反相分离溶剂系统为甲醇-水，梯度洗脱为40％甲醇水溶液过渡到100％甲醇。每150mL流分接一瓶，根据薄层点板合并。
(2)收集70～75％甲醇溶液，此部分为槐属二氢黄酮G纯品，根据薄层合瓶，获得槐属二氢黄酮G纯品约700mg。色谱图见图2。
(3)采用紫外、红外、质谱、核磁进行结构鉴定，结果如下
化合物外观呈白色无定形粉末，mp178～180℃，分子式C25H28O6，分子量424，UVλmax(nm)296.4，339.2(MeOH)。红外(KBr)在以下波数有吸收：3358(OH),1631(C＝O),1604,1517(arom C＝C),1434(CH3)。
1H-NMR(400HMz,MeOD)δ1.48(3H,s,H-6″),1.56(3H,s,H-10″),1.63(3H,s,H-7″),1.99(2H,m,H-3″),2.48(1H,m,H-2″)2.58(2H,m,H-1″),2.72(1H,dd,J＝17.08,2.84Hz,H-3α),2.97(1H,dd,J＝17.12,13.20Hz,H-3β),4.51(1H,s,H-9″),4.58(1H,s,H-9″),4.97(1H,m,H-4″),5.56(1H,dd,J＝13.20,2.80Hz,H-2),5.91(1H,s,H-6),6.33(1H,dd,J＝8.16,2.32,H-5′),6.34(1H,d,J＝2.32,H-3′),7.30(1H,d,J＝8.12Hz,H-6′)。1H-NMR见图3。
13C-NMR(MeOD):75.77(C-2),43.31(C-3),199.03(C-4),163.21(C-5),96.22(C-6),166.52(C-7),108.60(C-8),162.64(C-9),103.28(C-10),118.31(C-1′),156.70(C-2′),107.64(C-3′),159.60(C-4′),103.35(C-5′),128.62(C-6′),27.97(C-1″),48.31(C-2″),32.34(C-3″),124.81(C-4″),132.05C-5″),17.85(C-6″),25.88(C-7″),149.71(C-8″),111.22(C-9″),19.18(C-10″)。经过对该化合物的1H NMR，13C NMR的综合解析，并与文献对照，以上数据与槐属二氢黄酮G的数据一致,推定该化合物为槐属二氢黄酮G，1H-NMR见图4。
实施例5，槐属二氢黄酮G的理化性质研究
(1)槐属二氢黄酮G平衡溶解度的测定
槐属二氢黄酮G为难溶性药物，几乎不溶于水，所以测定槐属二氢黄酮G在不同pH中的平衡溶解度，可为指导制剂剂型的研发及体外溶出介质的筛选提供依据。取槐属二氢黄酮G原料过量，置于试管中，分别加入不同pH值的缓冲液(pH 1.2、pH4.5、pH 5.8、pH 6.8、pH 7.2)，涡旋至药物不再溶解(可酌情添加原料药，确保试管中有未溶的药物存在)。将试管放入空气恒温振荡器中，于37℃振摇72h。将饱和槐属二氢黄酮G溶液以3500r·min-1离心10min，取上层澄清溶液，再以13000r·min-1离心10min，取上层澄清溶液，用甲醇稀释至适宜浓度后，高效液相法测定。另取对照溶液，同法测定，按照外标法计算药物在不同溶液中的平衡溶解度。结果见表1。
表1 槐属二氢黄酮G在不同pH值溶液中(100mL水)的溶解度
(2)表观油/水分配系数的测定
由于正辛醇的溶解度参数δ为10.24，与细胞磷脂膜的溶解度参数(δ＝10.3)最为接近，最能模拟药物在体内的体液与细胞磷脂分配情况，因此，常被用作有水分配系数测定的油相。
取槐属二氢黄酮G适量，精密称定，以被水饱和的正辛醇为溶剂，配制成浓度为0.3mg·mL-1的溶液。精密量取上述槐属二氢黄酮G正辛醇溶液0.4mL作为油相，分别加入已被正辛醇饱和的PBS 1.2、PBS 4.5、PBS 5.8、PBS 6.8、PBS 7.2的溶液4mL作为水相，将混合溶液密闭置于37℃空气恒温振荡器内平衡72h，使系统达到萃取平衡。取出样品，于3500r·min-1离心10min，精密量取上层油相0.2mL于10mL量瓶中，甲醇稀释定容，采用高效液相色谱法测定油相中药物浓度。计算公式如下：
ρw＝(ρo-ρ)×Vo/Vw
Po/w＝ρo/ρw
公式中，ρw为槐属二氢黄酮G分配平衡时水相中药物浓度(mg·L-1)；ρo和ρ为分别为平衡前后正辛醇层中的药物浓度(mg·L-1)；Vo和Vw分别为平衡体系中正辛醇相和水相的体积(mL)；Po/w为槐属二氢黄酮G的表观油/水分配系数。
根据上述公式计算槐属二氢黄酮G在各pH值条件下的Po/w值，结果见表2。
表2 槐属二氢黄酮G在不同pH值中的表观油水分配系数
ρ ρ0 ρW V0 VW PO/W lgP
1.2 49.59 131.78 8.22 0.4 4 16.03 1.21
5.8 57.52 131.78 7.43 0.4 4 17.74 1.25
6.8 99.19 131.78 3.26 0.4 4 40.43 1.61
7.2 89.69 131.78 4.21 0.4 4 31.31 1.50
(3)解离常数的测定
仪器与试药
变温紫外分光光度计(Agilent Technologies)；PB-10型pH计(sartorius)；AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山巿超声仪器有限公司)。
槐属二氢黄酮G(实验室自制，纯度>95％)；磷酸二氢钾；氯化钾；甲醇为色谱纯；实验所用其他试剂均为分析纯。
方法与结果
缓冲液的配制
称取磷酸二氢钾3.4032g、氯化钾27.9528g，加适量去离子水超声使溶解，转移至1000mL量瓶中，再加去离子水定容，摇匀，即得恒定离子浓度液(KH2PO4浓度为0.025mol/l)。取恒定离子浓度液约30mL，滴加NAOH试液制成一系列不同pH值的缓冲液。
不同pH值对照品供试液的配制
精密称取槐属二氢黄酮G 5.0mg，置50mL量瓶中，色谱甲醇定容，作为储备液，浓度为0.1mg/mL。精密量取2.0mL，分别置于10mL量瓶中，加色谱甲醇以及不同pH值的缓冲液定容，即得不同pH值的供试液。另精密量取色谱甲醇2mL，置于10mL量瓶中，加色谱甲醇以及不同pH值的缓冲液定容作为空白溶液。
紫外分光光度法测定槐属二氢黄酮G解离常数可行性分析。
取不同pH值的对照品缓冲液，空白溶液为参比，于200～400nm波长范围扫描，得到一系列吸收曲线，详见图5和图6(图6为图5的简化图)。
由图5和图6可知，槐属二氢黄酮G的离子型和分子型的紫外吸收光谱不同，随着溶液pH值的改变，溶液中离子型、分子型药物浓度的比值发生变化，因此产生不同的紫外吸收曲线，pH＝4.51的紫外吸收曲线峰形与在色谱甲醇溶液中的紫外吸收曲线峰形一致，表明pH值在4.51时，药物基本以分子型存在；同理，pH＝10.37的槐属二氢黄酮G基本以离子型存在。由于槐属二氢黄酮G在不同pH值的缓冲液中的紫外吸收光谱存在较大差异，因此，利用分光光度法测定其解离常数是可行的。
测定方法
取不同pH值的对照品缓冲液，置于石英吸收池中，并以相应空白溶剂为参比，测定各供试品溶液的吸光度(测定波长为275、285、330、335nm)。
按法测得不同pH下槐属二氢黄酮G的吸收度，结果见表3。将表3中在同一波长下的pH4.51(分子态)，pH7.06，7.54，8.75，9.57(分子离子态共存)和pH10.37(离子态)所测得的吸光度AHB,A,AB分别代入公式pKa＝pH+lg(A-AB)/(AHB-A))计算。(注：AHB和AB分别为槐属二氢黄酮G在分子和离子状态下的吸光度)，得槐属二氢黄酮G pKa值为7.36±0.35。见表4。
表3 槐属二氢黄酮G在选定pH值下测定的吸光度
pH A(275) A(294) A(330) A(333) A(285) A(290)
4.51 0.41 0.76 0.17 0.17 0.67 0.74
5.64 0.40 0.73 0.20 0.20 0.65 0.71
6.36 0.37 0.69 0.25 0.25 0.61 0.67
7.06 0.31 0.54 0.44 0.45 0.48 0.53
7.54 0.28 0.47 0.76 0.77 0.42 0.45
8.75 0.18 0.26 1.09 1.09 0.23 0.22
9.57 0.16 0.28 1.13 1.13 0.22 0.25
10.37 0.14 0.30 1.15 1.14 0.22 0.26
11.26 0.11 0.27 1.07 1.05 0.18 0.22
表4 槐属二氢黄酮G的pKa值测算结果
pH pKa(275) pKa(285) pKa(330) pKa(330)
5.64 7.03 6.96 7.12 7.10
6.36 7.23 7.17 7.41 7.40
7.06 7.30 7.22 7.47 7.46
7.54 7.60 7.44 7.35 7.33
8.75 7.93 7.00 7.58 7.50
9.57 8.28 6.55 7.74 7.58
对比例1：富集方法对槐属二氢黄酮G苦参提取得率的影响
分三组进行槐属二氢黄酮G的提取，每组的起始原料均为苦参原材料500g，粉碎后过2号筛，提取步骤分别按照本发明实施例3、实施例3省略步骤(2)和CN1676521A公开的方法进行，实验结果见表6
表5：槐属二氢黄酮G得提取和富集方法对槐属二氢黄酮G得率的影响
组别 槐属二氢黄酮G产量(g) 槐属二氢黄酮G得率(％)
CN1676521A 0.29 0.058
实施例3省略步骤(2) 0.6 0.12
实施例3 2.1 0.42
由表5实验结果可知省略本发明实施例3的步骤(2)后，虽然槐属二氢黄酮G的得率相对于中国专利CN1676521A公开的方法提高了约1倍，但仍远低于包含步骤(2)的实施例3的槐属二氢黄酮G的得率，表明本发明的转化步骤明显有助于提高苦参黄酮提取物中槐属二氢黄酮G的得率。
实施例6，槐属二氢黄酮G的剂型及其制备方法
(1)槐属二氢黄酮G片剂的制备
取槐属二氢黄酮G 50g、碳酸氢钠2g、微晶纤维素100g、羟丙甲纤维素10g、羧甲基淀粉钠10g混合均匀后加入适量乙醇湿法制粒，干燥后整粒，加入滑石粉2g，压制成1000片，即得槐属二氢黄酮G片剂。
(2)槐属二氢黄酮G胶囊剂的制备
取槐属二氢黄酮G 50g、碳酸氢钠2g、微晶纤维素100g、羟丙甲纤维素10g、羧甲基淀粉钠10g混合均匀后加入适量乙醇湿法制粒，干燥后整粒，加入滑石粉2g，装入明胶胶囊壳即得槐属二氢黄酮G胶囊剂。
(3)槐属二氢黄酮G脂质体的制备
槐属二氢黄酮G与辅料的投料比为：槐属二氢黄酮G-磷脂-胆固醇
-brij为1:10:1:1。按照下述步骤制备得到脂质体：
按照上述比例称取药物与载体，5.0mL无水乙醇溶解，转移到圆底烧瓶中，40℃旋转蒸发，除去无水乙醇使其形成薄膜，用5.0mL pH7.4的PBS(磷酸盐缓冲液)中少量多次溶解，超声30min，即可测粒径。
所得脂质体，以粒径是否变化(增大)为指标，考察脂质体分别在生理盐水、葡萄糖、人工胃液、人工肠液中的稳定性，结果均比较稳定。
表6 槐属二氢黄酮G脂质体的稳定性研究
时间 PBS 生理盐水 葡萄糖 胃液 肠液
0 67.45 61.75 75.27 59.25 68.76
1 58.54 68.29 58.43 69.37 58.27
2 58.83 93.51 59.12 70.41 59.03
4 66.73 62.18 69.04 61.43 74.69
6 59.50 66.82 63.12 77.47 72.32
17 72.52 82.22 71.78 133.77 89.74
上述稳定性研究结果表明，所制备的脂质体可用于口服及静脉注射给药。
(4)槐属二氢黄酮G纳米粒的制备
精密称取槐属二氢黄酮G 11.7mg,TPGS(水溶性天然维生素E)5.8mg，药载比约2:1，于2.0mL EP管中，加入无水乙醇300μl，溶解。50mL烧杯中加入去离子水5.0mL，在超声条件下，用1mL注射器缓慢匀速滴入烧杯中。超声20min。除去有机溶剂(旋蒸)。测得粒径为167.4，PDI值为0.133。
稳定性研究：
配置pH7.4PBS，1.8％NaCl，10％Glu，人工胃液，肠液，血浆。测定粒径，结果表明，纳米粒在葡萄糖溶液中稳定，其他溶液均不稳定。
(5)槐属二氢黄酮G纳米混悬剂的制备
称取槐属二氢黄酮G原料药2g，PVP K300.20g和SDS 0.04g，加入50mL双蒸水，搅匀，8000rpm探头超声乳化5min；将粗混悬液进行高压乳匀，温度为0℃，制备条件为200bar循环2次，500bar循环2次，1000bar循环2次，1500bar循环10次，即得乳白色槐属二氢黄酮G纳米混悬剂，测粒径为400nm，zeta电位为-45mv。
(6)槐属二氢黄酮G自微乳的制备
取1g槐属二氢黄酮G加入到20g乙二醇单乙基醚(Transcutol P)中，超声使药物分散，置70℃水浴恒温加热至药物完全溶解，另取15g大豆油及25g聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)加入到该溶液中，70℃恒温搅拌2～3h，即得槐属二氢黄酮G自微乳。
(7)槐属二氢黄酮G磷脂复合物的制备
称取0.5g槐属二氢黄酮G，0.75g卵磷脂，溶于30mL无水乙醇中，搅拌溶解至澄清透明，40℃减压旋转蒸发除去乙醇，真空干燥24h，得槐属二氢黄酮G磷脂复合物。
(8)槐属二氢黄酮G环糊精包合物的制备
在250mL锥形瓶中加入0.1mol羟丙基--环糊精和0.5g槐属二氢黄酮G，羟丙基--环糊精与槐属二氢黄酮G的分子摩尔比为1︰5～10，溶解于100mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，反应温度15～35℃，磁力搅拌或机械搅拌24h，待反应结束后，在锥形瓶中加入沉淀剂甲醇20～50mL，反应体系中有白色固体析出，抽滤固体，滤液保留并转移至圆底烧瓶中，滤饼用少量无水乙醇洗涤，接着将固体置于30～50℃真空干燥24h，得到白色固体，即为水溶性槐属二氢黄酮G-羟丙基-环糊精包合物。
(9)槐属二氢黄酮G肠溶片剂的制备
取实施例1的槐属二氢黄酮G片剂进行肠溶包衣，所述肠溶包衣液组成为：
包衣液的流速3.0mL/min，进口温度40℃，喷压1.3kgf/cm2，包衣增重3～5％，即得槐属二氢黄酮G肠溶片剂。

Claims (3)

1.一种槐属二氢黄酮G的富集方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)苦参总黄酮的提取
苦参药材，粉碎至通过1-9号筛，采用1-20倍量有机溶剂，经超声、回流、浸渍或渗漉提取，提取条件为提取1-4次，每次提取时间为5-90min，合并提取液，回收溶剂至干，获得苦参总黄酮的固形物；
(2)槐属二氢黄酮G的转化步骤
将步骤(1)所得的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐或Lewis酸混合，在N2保护下，升温至40～150℃反应，反应结束后冷却，加水，放入1-6℃冰箱过夜后过滤，所得固形物即为槐属二氢黄酮G粗品，其中所述的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐或Lewis酸的比例为10：1-200；加入的水与苦参总黄酮固形物的比例为1-40:1ml/g，其中Lewis酸为三氯化铝、氯化锌或碘化锂；
(3)槐属二氢黄酮G的富集过程
将步骤(2)所得槐属二氢黄酮G的粗品湿法或干法上样，通过正相硅胶H柱色谱进行分离，流动相为石油醚-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统或氯仿甲醇系统、二氯甲烷甲醇系统，通过薄层点样合瓶，收集洗脱部位，相应洗脱部位回收溶剂至干，加二氯甲烷超声复溶，即得大量白色粉末，离心得固形物，其中槐属二氢黄酮G含量为90-95％，槐属二氢黄酮G的得率为0.2-1.2％。
2.如权利要求1所述的槐属二氢黄酮G的富集方法，其特征在于步骤(1)中有机溶剂选自：乙酸乙酯、甲醇或乙醇、正丁醇或氯仿。
3.如权利要求1所述的槐属二氢黄酮G的富集方法，其特征在于所述Lewis酸为三氯化铝。
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