CN113005120A - 一种有效提取休眠葡萄嫁接枝dna的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明适用于植物研究技术领域，提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法及应用。有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：配制1.5~4.5wt%的单氰胺溶液；截取休眠葡萄嫁接枝；休眠葡萄嫁接枝采用单氰胺溶液处理；休眠葡萄嫁接枝放置于培养箱内破芽；萌发的新叶用CTAB法进行基因组DNA提取。本发明与休眠枝基因组DNA直接提取相比，明显降低了实验设备要求及提取成本，提取的基因组DNA溶液澄清透亮、浓度高、纯度好，提取纯化效率高，并具较好的完整性。
Description
技术领域
本发明属于植物研究技术领域，尤其涉及一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法及应用。
背景技术
葡萄作为世界范围内总产量第二大的水果，种植面积广泛，目前我国葡萄的繁育方式主要依靠无性繁殖，如扦插、嫁接等。由于葡萄产业发展缺少较为系统的管理，导致葡萄种苗市场的品种混乱，品种不纯现象制约了产业的发展，为实际生产中解决这一问题带来的麻烦，种植前对休眠期的种苗进行品种鉴定就显得尤为重要。
休眠期的葡萄嫁接枝不具备明显的外部形态学标记特征，采用分子标记是目前最普遍的方法，其是在DNA水平上反映出差异的遗传标记法。但是葡萄接穗木质化茎段部分和休眠芽中含有大量木质素、酚类、糖类物质以及纤维毛状物，影响DNA的提取进程，杂质容易大量留存于接穗DNA提取物中，加上样品研磨的难度也会导致DNA的纯度不高，含量极低且降解严重。而基因组DNA作为分子标记的基础物质，其浓度、纯度、完整性以及提取方法的灵敏度和速度将直接决定PCR特异性扩增以及后续试验的成败。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法及应用，旨在解决背景技术中指出的现有技术存在的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
配制1.5~4.5wt%的单氰胺溶液；
截取休眠葡萄嫁接枝；
休眠葡萄嫁接枝采用单氰胺溶液处理；
休眠葡萄嫁接枝放置于22~28℃培养箱内破芽；
萌发的新叶用CTAB法进行基因组DNA提取。
作为本发明实施例的另一种优选方案，截取休眠葡萄嫁接枝中，截取葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态。
作为本发明实施例的另一种优选方案，休眠葡萄嫁接枝采用单氰胺溶液处理，包括以下步骤：将接穗木质茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间5~15s。
作为本发明实施例的另一种优选方案，休眠葡萄嫁接枝放置于培养箱内破芽，包括以下步骤：将接穗木质茎段的底部浸入纯水中，并置于22~28℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽。
作为本发明实施例的另一种优选方案，利用改良CTAB法提取基因组DNA，改良CTAB法提取基因组DNA，包括以下步骤：
将新叶置于离心管后采用液氮速冻，震荡破碎；
加入CTAB缓冲液，保温一段时间，得到混合物A；
加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，离心取上清液；
上清液中加入异丙醇沉淀DNA，然后用乙醇清洗DNA沉淀，即得。
作为本发明实施例的另一种优选方案，震荡破碎条件为：加入3~7mm钢珠，在30~50Hz条件下震荡破碎20~40s。
作为本发明实施例的另一种优选方案，加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温10~20min，得到混合物A。
作为本发明实施例的另一种优选方案，氯仿与异戊醇的质量比为20~27：1。
作为本发明实施例的另一种优选方案，上清液中加入其1/2~5/6体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
本发明实施例的另一目的在于提供一种所述的方法在有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA中的应用。
有益效果：本发明与休眠枝基因组DNA直接提取相比，明显降低了实验设备要求及提取成本，提取的基因组DNA溶液澄清透亮、浓度高、纯度好，提取纯化效率高，并具较好的完整性；使用本方法提取100mg叶片，可得到3.4~7.5ug的DNA，其纯度为A260/280=1.8~2.0；
本发明利用液氨速冻茎段新叶，新叶受冻变脆易被钢珠打碎，同时在低温条件下也更利于组织细胞保护，可通过仪器完成，节省了研磨时间且自动化程度高，研磨效率高；
本发明所需设备易得，且具有操作简单、费用低廉、实用性强等优点，既可少量操作，亦可批量进行，可用于休眠接穗早期DNA大量提取。
附图说明
图1为截取休眠的冬季葡萄嫁接枝接穗部分示意图；
图2为恒温培养箱中休眠的冬季葡萄嫁接枝接穗示意图；
图3为木质化茎段基因组DNA直接提取与利用本发明所述方法提取的基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳比对图。
其中：M是Marker，A为木质化茎段直接提取的基因组DNA泳道，B为利用本发明所述方法提取的基因组DNA泳道。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。
实施例1
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为1.5 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；图1为截取休眠的冬季葡萄嫁接枝接穗部分示意图；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间5s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于22℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；图2为恒温培养箱中休眠的冬季葡萄嫁接枝接穗示意图；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入3mm钢珠，在30Hz条件下震荡破碎40s；
S7.加入800μL、60℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温20min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为20：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其1/2体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例2
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为1.5wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间15s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于25℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入7mm钢珠，在50Hz条件下震荡破碎20s；
S7.加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温10min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为27：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其5/6体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例3
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为1.5 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间10s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于28 ℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14:10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入5mm钢珠，在40Hz条件下震荡破碎30s；
S7.加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温15min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为24：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例4
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为3.0 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间12s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于22 ℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入6mm钢珠，在45Hz条件下震荡破碎35s；
S7.加入800μL、65 ℃预热的CTAB缓冲液，在65 ℃下保温16min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为26：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例5
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为3.0 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间6s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于25 ℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入6.5mm钢珠，在48Hz条件下震荡破碎35s；
S7.加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65 ℃下保温14min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为25：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例6
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为3.0 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间9s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于28 ℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入6mm钢珠，在42Hz条件下震荡破碎22s；
S7.加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温13min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为24：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例7
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为4.5 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间8s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于22 ℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入5.5mm钢珠，在40Hz条件下震荡破碎26s；
S7.加入800 μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温14min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为23：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例8
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为4.5 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间12s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于25℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入5mm钢珠，在38Hz条件下震荡破碎36s；
S7.加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温17min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为22.5：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例9
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为4.5 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间13s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于28℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入4.5mm钢珠，在44Hz条件下震荡破碎31s；
S7.加入800μL、65℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温15min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为21.5：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实施例10
该实施例提供了一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，包括以下步骤：
S1.配制单氰胺溶液，具体步骤为：将单氰胺加水配置成有效成分为3.0 wt%的单氰胺溶液；
S2.截取的葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态；
S3.将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间10s；
S4.速蘸后，将接穗茎段的底部浸入纯水中，并置于25℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14.5：10的条件下培养破芽；
S5.收集萌发新叶；
S6.将新叶置于离心管后采用液氮速冻，加入3.5mm钢珠，在40Hz条件下震荡破碎30s；
S7.加入700 μL、65 ℃预热的CTAB缓冲液，在65 ℃下保温15 min，得到混合物A；
S8.加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，氯仿与异戊醇的质量比为24：1，离心取上清液；
S9.上清液中加入其2/3体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
实验例
1、实验材料：冬季葡萄嫁接枝材料来自中国农业大学上庄实验站，选取标记接穗为“阳光玫瑰”、“夏黑”“火焰无核”的嫁接枝各10个。
2、实验方法：
2.1、解除冬季葡萄嫁接枝接穗休眠
利用15ml 50%有效成分的单氰胺加485ml水配置成有效成分为1.5wt%的单氰胺溶液500ml；截取10cm左右处于休眠状态的接穗部分木质化茎段，休眠芽位置进行1.5wt%的单氰胺溶液速蘸，蘸取时间5~15s；速蘸后木质茎段底部浸入纯水中，置于恒温培养箱条件下培养，培养箱内条件设置为22℃，光/暗（14h/10h）；约7~10天后，休眠芽新叶萌发，收集萌发新叶用于基因组DNA提取。
以直接收集、未做1.5wt%的单氰胺溶液处理的木质化茎段组织为DNA提取对照组。
2.2萌发新叶基因组DNA提取
取上述萌发新叶100mg，装入2ml离心管，加入一颗5mm钢珠，在液氮中速冻，利用震荡破碎仪器，设置振荡频率40Hz，震荡时间30s，至叶片粉状；加入800μL 65℃预热CTAB缓冲液（100mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.4 mol/L NaCl，20mmol/L EDTA，2% CTAB），65℃保温15min；加入所得物等体积的氯仿与异戊醇混合液（氯仿与异戊醇质量比为24：1），涡旋振荡，10000rpm/min离心10min后取上清液；上清液中加入其2/3体积的预冷异丙醇沉淀DNA，采用75%乙醇洗涤DNA沉淀，重复一次。
3、实验结果
3.1 1.5%单氰胺溶液处理后对休眠嫁接枝接穗影响
对“阳光玫瑰”、“夏黑”、“火焰无核”的嫁接枝各10个进行1.5%单氰胺溶液速蘸处理后，在22℃，光/暗（14h/10h）的培养箱中培养7~10天后均出现休眠芽的破芽现象，说明此项处理能有效打破芽休眠，有效促进新叶萌发，以便后续DNA提取使用。
3.2 休眠解除的萌发新叶与木质化茎段样品研磨情况分析
100mg新叶装入2ml离心管，液氮中速冻，利用震荡破碎仪器，设置振荡频率40Hz，震荡时间30s，钢珠上下震荡很容易至叶片粉状，研磨充分的情况下，简化CTAB浸提时间和洗脱步骤，可以大大缩减DNA提取时间；
而对照组木质化茎段直接进行DNA提取，需要剥离木质化层，研磨形成层组织，不可避免的增大了工作量，不利于大规模DNA鉴定。
可见上述两种不同的研磨方法，以新叶机械震荡方法更为简便、效率高、可操作性强，避免了木质化茎段研磨不充分，杂质多影响DNA提取的弊端。
3.3 休眠解除的萌发新叶与木质化茎段DNA提取效果比对
DNA浓度和纯度的测定采用常规方法，用NanoDrop 2000分光光度计检测基因组DNA的质量和数量，测定OD260/280。
萌发新叶提取的接穗DNA值均在1.7~1.9之间，DNA样品纯度高；
对照组质化茎段提取的DNA的OD260/280值在0.8~1.3之间，显示有酚类，蛋白等物质污染。
用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性。5μL的DNA样本小心地加到加载缓冲区，电泳在5V/cm运行30min。然后用凝胶文档和图像分析系统检查紫外线照射下的DNA片段(Sagecreation ChamGel 5000，北京，中国)。
萌发新叶提取的接穗DNA条带清晰，分子量大，表明基因组DNA完整（图3），可用于常规PCR。
对照组木质化茎段提取的DNA条带清晰度低且涂片，说明基因组DNA样本断裂或退化（图3）。
基于早期对休眠的冬季葡萄嫁接枝进行基因组DNA的提取，利用分子标记在DNA水平上反映遗传背景差异，是解决目前实际生产中苗木混乱，品种不纯现象的有效方法。经过探索，本发明提供了一种针对休眠的冬季葡萄嫁接枝快速提取高质量基因组DNA的方法，与休眠枝基因组DNA直接提取相比，明显降低了实验设备要求及提取成本，所提基因组DNA溶液澄清透亮，提取纯化效率高，得到的DNA浓度高，纯度好，并具较好的完整性。本发明的所需设备易得，且具有操作简单、费用低廉及实用性强等优点，既可少量操作，亦可批量进行，可用于休眠接穗早期DNA大量提取。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
配制1.5~4.5wt%的单氰胺溶液；
截取休眠葡萄嫁接枝；
休眠葡萄嫁接枝采用单氰胺溶液处理；
休眠葡萄嫁接枝放置于22~28℃培养箱内破芽；
萌发的新叶用CTAB法进行基因组DNA提取。
2.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，截取休眠葡萄嫁接枝中，截取葡萄嫁接幼苗的接穗木质茎段（含 2-3 芽），其芽处于休眠状态。
3.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，休眠葡萄嫁接枝采用单氰胺溶液处理，包括以下步骤：将接穗茎段采用单氰胺溶液速蘸；蘸取时间5~15s。
4.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，休眠葡萄嫁接枝放置于培养箱内破芽，包括以下步骤：将接穗木质茎段的底部浸入纯水中，并置于22~28℃恒温培养箱中，在光照与黑暗时间比为14：10的条件下培养破芽。
5.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，利用改良CTAB法提取基因组DNA，改良CTAB法提取基因组DNA，包括以下步骤：
将新叶置于离心管后采用液氮速冻，震荡破碎；
加入CTAB缓冲液，保温一段时间，得到混合物A；
加入与混合物A等体积的氯仿与异戊醇的混合液，离心取上清液；
上清液中加入异丙醇沉淀DNA，然后用乙醇清洗DNA沉淀，即得。
6.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，震荡破碎条件为：加入3~7mm钢珠，在30~50Hz条件下震荡破碎20~40s。
7.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，加入800μL、60~70℃预热的CTAB缓冲液，在65℃下保温10~20min，得到混合物A。
8.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，氯仿与异戊醇的质量比为24：1。
9.根据权利要求1所述的有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA的方法，其特征在于，上清液中加入其1/2~5/6体积预冷的异丙醇沉淀DNA，然后用75%乙醇清洗DNA沉淀，即得。
10.一种如权利要求1所述的方法在有效提取休眠葡萄嫁接枝DNA中的应用。
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| CN202110298160.9A CN113005120B (zh) | 2021-03-19 | 2021-03-19 | 一种有效提取休眠葡萄嫁接枝dna的方法及应用 |
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ID=76403635
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2021
- 2021-03-19 CN CN202110298160.9A patent/CN113005120B/zh active Active
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Non-Patent Citations (2)
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| 韩斌等: "DNA分子标记技术在葡萄砧木改良上的应用", 《植物遗传资源学报》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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