CN112986476A - 一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法，用纯水提取样品中残留的络氨铜，提取液经二氯甲烷液液萃取净化后，用液相色谱‑串联质谱仪(LC‑MS/MS)检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正标准溶液工作曲线，外标法定量。本方法平均添加回收率为80%〜95%，平均相对标准偏差(RSD)为5.3%〜9.9%，测定低限为0.05 mg/kg，具有操作简便、快速、定性定量准确的优点。该方法能满足农药残留登记试验质量规范的要求，能够快速、灵敏、准确的测定果蔬中络氨铜农药残留量，为络氨铜农药残留检测提供了一种新的检测技术。

Description

一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法，更具体地说是采用液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)定性定量测定蔬菜和水果中残留的络氨铜含量的方法，属于农药残留量的测定技术领域。

背景技术

络氨铜是一种广谱保护性铜制剂杀菌剂，又名消病灵、胶氨铜、克病增产素、瑞枯霉，英文通用名：Copper sulfate-ammonia complex,化学名称：硫酸四氨络合铜，化学分子式：CuN₄H₁₂SO₄；化学结构式：

络氨铜作为一种铜鳌合物，其主要成分铜氨络离子，在作物表面形成一层严密的保护膜，然后在植物体表缓慢地释放铜离子，通过铜离子与病原菌细胞膜表面K⁺、H⁺等阳离子发生转换，使其细胞膜蛋白质凝固；同时铜离子渗透病原菌细胞内与酶结合，影响其活性，抑制病菌萌发和菌丝发育，故而达到杀菌目的，且连续使用不易产生抗性。作为一种广谱杀菌剂，络氨铜对众多作物的由真菌、细菌和霉菌引起的病害均有突出的防治效果，如西瓜、西瓜及菜豆枯萎病，甜椒、茄子及辣椒立枯病、炭疽病，西红柿早疫病、晚疫病和西瓜霜霉病及茄子黄叶病等，对于水稻、小麦的纹枯病、烂秧病、白粉病、白叶枯病、锈病、柑桔，芒果的溃疡病、疮痂病、炭疽病、黑斑病等病害都具有预防防治作用。对瓜类枯萎病防效优异，可达94％以上。可见，络氨铜作为一种新型广谱杀菌剂应用前景广阔。

随着络氨铜农药的登记、推广和使用，有关络氨铜农药残留消解动态及最终残留量等环境行为的研究势必增加。以前，络氨铜的农药残留登记试验的监测残留物不是农药本身只是铜离子，与实际农药形态不相符。随着农药登记试验规定的完善和变化，对于铜制剂农药的残留监测和毒性评估不再只针对铜离子，需对螯合态或结合态铜化合物进行整体检测和评估，加强对该农药在农作物中的残留量检测和制定其最大残留限量，对保护人类身体健康具有重要意义。

迄今为止，未见国内外有关于蔬菜和水果中络氨铜残留量检测方法的报道。已报道的检测烟草和土壤中络氨铜农药消解动态的方法，只是检测络氨铜的无机铜离子，检测对象不是螯合态或结合态铜化合物，不符合新的农药登记试验管理规范要求。

络氨铜作为铜络合物，因无紫外吸收，无法通过液相色谱直接测定，同时络氨铜的可见光吸收灵敏度较低，采用传统的分光光度计测定，灵敏度无法满足农药残留的痕量分析。所以，现有的检测方法都是采用不同方式测定络氨铜中的铜离子，再转换计算络氨铜的含量，检测对象是铜离子而不是螯合态或结合态铜化合物，该方法容易受到环境、生物体内铜本底的影响，同时对样品中的铜离子形态进行区分，无法识别铜离子来自样品本底铜离子，还是络氨铜农药或其他含铜离子化合物，故这种只检测铜离子来测定络氨铜的含量方法存在不科学不合理的地方，也不符合新农药登记试验管理规范要求。

络氨铜作为水溶性的药物，不溶于大部分有机溶剂，酸性条件下易分解，热不稳定。由于络氨铜特殊的理化性质使得络氨铜的样品提取和富集前处理带来挑战。因具有高灵敏、高准确性、速度速等优点，液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)已成为农药残留分析手段的主力军。因此，建立简便、快速、准确、能同时定性和定量分析蔬菜和水果中络氨铜残留量的LC-MS/MS检测方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于填补目前络氨铜农药残留检测技术的空白，提供了一种快速、准确的检测果蔬中络氨铜农药残留量的方法。该方法具有简便、快速、准确、可同时定性和定量分析等特点，对指导有机铜农药的安全合理使用，控制果蔬中络氨铜残留具有重要价值。

为实现以上目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种检测果蔬中络氨铜农药残留量的方法，采用液液分配净化一液相色谱-串联质谱法检测，包括如下步骤：

(1)提取

称取10.0-20.0g蔬菜和水果匀浆样品于具塞离心管中，加入20-25mL纯净水提取2-5min后，在4000r/min-8000r/min下离心3-5min，取上层清液，残渣再用20-30mL纯净水重复以上提取过程，合并上层清液，用纯净水定容至50-100mL，混匀；

(2)液液分配净化

移取4-6mL步骤一的样品提取液于离心管中，加入与样品等体积的二氯甲烷，涡旋振荡2-5min，静置或离心分层后，弃去二氯甲烷层，再重复以上液液萃取过程2-3次，取一定量水相清液，过水系滤膜后，用液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)检测；

(3)标准工作溶液的配制

标准溶液的配制：称取适量标准品，用1％-1.5％的氨水溶液溶解定容，制成标准储备液1000mg/L，配制成系列浓度标准工作液；

系列浓度标准工作液将不含络氨铜的同种类基质空白样品按上述步骤(1)、(2)、(3)处理，得空白样品提取净化液，再用用空白样品提取净化液配制成至少5个浓度的络氨铜系列标准工作液；

(4)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定和结果计算

将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤(1)、(2)中净化后的样液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中络氨铜的色谱峰面积，代入基质标准曲线，得到样液中络氨铜含量，然后根据样液所代表试样的质量计算得到样品中络氨铜残留量。

步骤(1)中蔬菜和水果若为脱水样品时，须减少称样量，并加适量水充分浸润。

步骤(2)中采用液液分配净化时需加入与提取液体积相同体积的二氯甲烷萃取，提取次数不少于3次。

步骤(4)中API 4000LC-MS/MS的液相色谱分析条件为：2.1mm×50mm，粒径1.8μm的ZORBAX，Eclipse Plus C18色谱柱，柱温为35℃；

步骤(4)中液相色谱的流动相为：含0.1％甲酸的水溶液和乙腈，流速0.2-0.4mL/min，进样体积为2μL。梯度洗脫，程序为：

时间(min)	0.1％甲酸水溶液(％)	乙睛(％)
			0	90	10
1	90	10
			2.0	10	90
3.0	10	90
			3.1	90	10
4.0	90	10

步骤(4)中质谱检测使用电喷雾质谱(ESI)检测，电喷雾电压(v)：5500；干燥气和鞘气均为氮气，气帘气压力(psi)：30；雾化气压力(psi)：55；辅助气压力(psi)：55；加热气温度(℃)：500；鞘气压力(psi)：9。

步骤(4)中质谱检测使用多反应监测(MRM)正离子扫描模式；络氨铜的母离子为131.9，子离子分别为122和104。

步骤(4)中检测所述样液时，若出现目标化合物的定性离子对和定量离子对色谱峰的保留时间与标准工作溶液一致；且目标化合物的两个定性离子对的相对丰度比与浓度相当的基质标准溶液的离子相对丰度比一致时，则可判断该样品中存在该种农药。若上述两个条件不能同时满足，则可判断不含该种农药。

本发明充分利用络氨铜的水溶性特点，首先采用纯水进行提取，将样品中的络氨铜农药充分提取出来，减少非水溶性杂质成分的共提取，降低后期净化难度；然后，再利用络氨铜不容易大部分有机溶剂的特性，采用疏水性有机溶剂进行液液反萃取，将共提取的有机杂质进行提取弃去，达到一步净化的目的。本方法采用简单的液液分配萃取技术作为前处理手段，具有试验操作简单，有机试剂用量少，绿色环保，成本低等特点。

本发明的有益效果在于：

1、本发明采用液液萃取结合分散固相萃取净化技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合LC-MS/MS应用于蔬菜和水果中络氨铜残留量的定性确证和定量检测，平均回收率为80％95％，平均相对标准偏差(RSD)为5.3％9.9％，检出限低于0.05mg/kg，满足农药残留登记试验质量规范要求。

本发明运用液相色谱-串联质谱法，首次解决了络氨铜络合物难于定性、定量检测的难题。

本发明的检测方法能够快速、灵敏、准确的测定果蔬中络氨铜农药残留量，为络氨铜农药残留的检测提供了一种新的检测技术。

附图说明

图1为实施例添加在西瓜空白基质中的0.5mg/kg络氨铜标液的LC-MS/MS多反应监测色谱图。

图2为实施例不含络氨铜的空白西瓜样品的LC-MS/MS多反应监测色谱图。

图3为实施例空白西瓜样品为基质配制的络氨铜标准工作曲线；

图4为实施例色谱柱Boltimate HILIC(150mm×21mm，2.7μm)的色谱图；

图5为实施例色谱柱Accucore C18(100mm×21mm,2.6μm)的色谱图；

图6为实施例Boltimate XB-NH2(100mm×30mm,3μm)的色谱图；

图7为实施例Acclaim Trinity P1(150mm×2.1mm,3μm)的色谱图。

图8为实施例ZORBAX Eclipse Plus C18(50mm×21mm，1.8μm)的色谱图；

图9为10mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈对络氨铜的分离效果的色谱图；

图10为0.1％甲酸水溶液-乙腈对络氨铜的分离效果的色谱图；

图11为0.1％氨水溶液-乙腈对络氨铜的分离效果的色谱图；

图12为以0.1％氨水溶液作为溶剂时的全扫描质谱图；

图13为以50％甲醇溶液作为溶剂时的全扫描质谱图；

图14为以水作为溶剂时的全扫描质谱图；

图15为以10mmol/L乙酸铵溶液作为溶剂时的全扫描质谱图；

图16为以0.1％甲酸溶液作为溶剂时的全扫描质谱图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。现以以下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。

实施例1

实施例中使用的仪器与试剂

仪器：

液相色谱-串联质谱仪(AB API 4000)、Eppendorf单道可调量程移液器、Labdance S25漩涡混合器、梅特勒-托利多MS105DU十万分之一电子天平、YP502N百分之一电子天平、SC-3610低速台式离心机、YWK-767专业冰沙调理机、KQ-500DE超声波清洗器。

试剂：

纯净水：浙江省杭州市娃哈哈饮用水有限公司；

氨水：分析纯，西陇科学股份有限公司；

甲酸：色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；

二氯甲烷：分析纯，天津市富宇精细化工有限公司；

乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA):40-60μm，月旭科技(上海)股份有限公司；十八烷基硅烷键合硅胶(C18)：40-60μm，月旭科技(上海)股份有限公司乙腈：色谱纯，赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

络氨铜标准物质：纯度为85.1％，购自天津华宇农药有限公司。

实施例1:西瓜中络氨铜残留量的检测

(1)样品前处理

1提取

称取10.0g蔬菜和水果匀浆样品于具塞离心管中，加入20mL纯水提取2min后，在不小于4000r/min下离心3min，取上层清液于刻度管中，残渣再用20mL纯水重复以上提取过程，合并上层清液，用纯水定容至50mL，混匀。

2净化

移取4mL步骤一的样品提取液于离心管中，加入4mL二氯甲烷，涡旋振荡2min，静置或离心分层后，弃去二氯甲烷层，再重复以上液液萃取过程2次。取一定量水相清液，过0.22μm水系滤膜后，待液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)检测。

(2)标准工作溶液的配制

准确称取适量标准品于10mL容量瓶中，用0.1％氨水溶解，定容得1000mg/L标准储备液；移取1mL标准储备液置于l0mL容量瓶中，用0.1％氨水定容得到100mg/L标准中间液；称取10g西瓜空白样品，通过上述前处理步骤制备空白基质溶液，将标准中间液用空白基质溶液稀释配制成0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.5mg/L系列标准工作溶液，将标准工作液进LC-MS/MS分析，以所得色谱峰面积对其相应质量浓度进行线性回归分析，得到标准工作曲线。

(3)液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)测定

将不同浓度梯度的标准工作液分别注入LC-MS/MS，以外标法进行络氨铜含量的定量分析，即以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将样品提取液注入LC-MS/MS进行测定，测得样液中络氨铜的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样液中络氨铜含量，然后根据样液所代表试样的质量计算得到样品中络氨铜残留量。

其中色谱条件为：

色谱柱:ZORBAX，Eclipse Plus C18，2.1mm×50mm，粒径1.8μm；

流动相：含0.1％甲酸水溶液和乙腈；

流速：0.2mL/min；

进样量：2μL；

柱温：35℃；

梯度洗脫程序如表1。

表1实施例1的梯度洗脫程序

时间(min)	0.1％甲酸水溶液(％)	乙睛(％)
			0	90	10
1	90	10
			2.0	10	90
3.0	10	90
			3.1	90	10
4.0	90	10

其中，质谱参数为：

扫描方式：多反应离子监测(MRM)正离子扫描；

电喷雾电压：5500V；

雾化气压力：55psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：55psi；

加热气温度：500℃；

干燥气：氮气；

鞘气：氮气；鞘气压力：9psi；

MRM检测参数见表2。

表2实施例1的MRM检测参数

定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，在相同的条件下，如果试样中的离子色谱峰与空白基质标准工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度偏差不超过30％时，则判断该样品中存在该种农药；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。

以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行线性回归分析，得到标准溶液工作曲线如表3。

表3西瓜空白基质中络氨铜标准溶液工作曲线

名称	保留时间(min)	回归方程	相关系数
				络氨铜	0.51	y＝105,377.7778x+4,980.2778	0.9999

加标回收率和重复性：

在不含络氨铜的西瓜样品中加入0.05、0.5、1和2mg/kg 4个浓度水平的络氨铜标准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定。将测定浓度与农药理论添加浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定5次，得其相对标准偏差，测定结果见表4。由表4可以看出，在4个加标水平上，络氨铜的平均添加回收率为80％95％，相对标准偏差(RSD)为5.3％9.9％，说明本发明方法的回收率较高，重复性好,符合农药残留检测标准方法要求。

表4络氨铜的回收率和重复性(n＝5)

加标量(mg/kg)	1	2	3	4	5	平均回收率(％)	RSD(％)
								0.05	96	98	94	87	100	95	5.3
0.5	80	83	79	73	84	80	5.4
								1	93	75	74	78	80	80	9.9
2	87	92	82	84	96	88	6.5

测定低限：

将不同浓度的络氨铜基质标准工作溶液注入LC-MS/MS，以最低浓度基质标准溶液色谱峰的10倍信噪比(S/N)和样品处理过程的稀释倍数(西瓜的稀释倍数为5)计算测定低限，本方法中络氨铜的测定低限为0.05mg/kg。

本发明的分析方法和分析条件不是显而易见的结果，是发明人经过创造性劳动才得出的结论，不是说任意置换成常规的流动相或者其他分析条件就可以实现本发明的。

1、本发明考察了不同色谱柱Boltimate HILIC(150mm×21mm，2.7μm)、AccucoreC18(100mm×21mm,2.6μm、ZORBAX Eclipse Plus C18(50mm×21mm 1.8μm)、Boltimate XB-NH2(100mm×30mm,3μm)、Acclaim Trinity P1(150mm×2.1mm,3μm)对络氨铜的色谱峰型及质谱强度的影响，比较发现采用络氨铜在不同色谱柱的保留行为相差很大，有些色谱柱峰型不理想，拖尾严重，或峰分叉，色谱柱的选择对络氨铜分析影响很大，比较色谱图见下图4-8所示：通过比较以上结果，发现Boltimate XB-NH2氨基柱和Acclaim Trinity P1离子交换柱可以强吸附络氨铜，无法洗脱下来，无目标色谱峰出现。本发明最终选取了ZORBAXEclipse Plus C18(50mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱进行样品分离，得到了较好的分离效果和较强的质谱响应。

2、本发明考察了流动相的酸碱度对络氨铜分离的影响，往水相中加入一定含量的甲酸、乙酸铵、氨水来调节流动相pH值，分别考察了10mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈、0.1％甲酸水溶液-乙腈、0.1％氨水溶液-乙腈对络氨铜的分离效果及响应的影响，见图9-11。在乙酸铵做流动相时，峰型有所改善，但是质谱响应低较多，可能加入乙酸铵抑制了络氨铜的离子化，质谱响应大幅下降，且出峰时间太早；加入0.1％氨水后，流动相的酸碱性变化较大，质谱响应增强较明显，但是络氨铜色谱峰有分叉，不利于化合物分离检测。往流动相中加入0.1％甲酸水溶液改变流动相pH值后，络氨铜的分离度和峰形得到明显改善，离子强度也显著增大。根据以上结果，故本发明方法选择了0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相进行分离，可以获得较好的峰型和较强的质谱强度。

3、质谱条件的选择

采用ESI正离子模式下，采用蠕动泵连续进样，对络氨铜进行Q1母子全扫描，对不同溶剂的络氨铜标准溶液(5mg/L)进行母离子扫描，考察不同溶剂0.1％氨水溶液、50％甲醇溶液、水、10mmol/L乙酸铵溶液、0.1％甲酸溶液下的电离效果。全扫描质谱图见图12-16，结果表明，以0.1％氨水溶液、0.1％甲酸溶液、50％甲醇溶液和水作为溶剂时，准分子离子峰离子化不稳定，峰型差且质谱响应强度较低；当在溶剂为0.1％的甲酸溶液、10mmol/L乙酸铵溶液时，准分子离子峰可以稳定出现，峰型也明显改善，其中0.1％甲酸溶液为溶剂时，离子化效率更高，质谱响应明显变大。因此，本发明方法选择了0.1％甲酸溶液作为溶剂，可以获得较好的络氨铜分子离子峰和较高的质谱强度。

在确定络氨铜分子离子峰后，采用不同的碰撞能和去簇电压，得到稳定的响应高的碎片离子，作为定性和定量离子。此外，同时优化质谱的离子源温度、干燥气流和检测器电压等条件，使目标化合物络氨铜有良好的信号响应，保证测试所需的灵敏度、精密度和准确度。

质谱检测条件如下：电喷雾质谱(ESI)检测，电喷雾电压(v)：5500；干燥气和鞘气均为氮气，气帘气压力(psi)：30；雾化气压力(psi)：55；辅助气压力(psi)：55；加热气温度(℃)：500；鞘气压力(psi)：9。质谱检测使用多反应监测(MRM)正离子扫描模式；络氨铜的母离子为131.9，子离子分别为122.0和104.0。

5、流速的选择

采用水相为0.1％甲酸溶液，有机相为乙腈，采用90％的水相做起始，以90％的有机相结束进行梯度洗脱，考察了不同的流速0.50mL/min，0.40mL/min，0.20mL/min下对分离情况的影响.试验结果发现当梯度一定的条件下，流动相流速为0.20mL/min时可以获得较好的分离效果。

通过大量的试验对液相色谱-串联质谱仪检测条件进行摸索，最终确定适合于络氨铜的检测的色谱柱、流动相组成、梯度洗脱条件及流速如下：

API 4000LC-MS/MS的液相色谱分析条件为：2.1mm×50mm，粒径1.8μm的ZORBAX，Eclipse Plus C18色谱柱，柱温为35℃；

液相色谱的流动相为：含0.1％甲酸的水溶液和乙腈，流速0.2mL/min，进样体积为2μL。

梯度洗脫程序：

时间(min)	0.1％甲酸水溶液(％)	乙睛(％)
			0	90	10
1	90	10
			2.0	10	90
3.0	10	90
			3.1	90	10
4.0	90	10

以上所述为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）提取

称取10.0-20.0g蔬菜和水果匀浆样品于具塞离心管中，加入20-25 mL纯水提取2-5min后，在 4000-8000 r/min下离心3-5 min，取上层清液，残渣再用20-30 mL纯净水重复以上提取过程，合并上层清液，用纯净水定容至50-100 mL，混匀；

（2）液液分配净化

移取4-6 mL步骤一的样品提取液于离心管中，加入与样品等体积的二氯甲烷，涡旋振荡2-5 min，静置或离心分层后，弃去二氯甲烷层，再重复以上液液萃取过程2-3次，取一定量水相清液，过水系滤膜后，用液相色谱-串联质谱仪检测；

（3）标准工作溶液的配制

标准溶液的配制：称取适量标准品，用1%-1.5%的氨水溶液溶解定容，制成标准储备液1000 mg/L，用于配制成系列浓度标准工作液；

系列浓度标准工作液：将不含络氨铜的同种类基质空白样品按与步骤(1)、(2)相同的条件进行处理，得空白样品提取净化液，再用空白样品提取净化液将标准储备液逐级稀释，液配制成至少5个浓度的络氨铜系列标准工作液；

（4）测定和结果计算

将步骤(3)中各浓度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤(1)、(2)中净化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中络氨铜的色谱峰面积，代入基质标准工作曲线，得到样液中络氨铜含量，然后根据样液所代表试样的质量计算得到样品中络氨铜残留量。

2.根据权利要求1所述的一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中蔬菜和水果样品若为脱水样品，需降低称样量，并加适量水充分浸润。

3.根据权利要求1所述的一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中采用液液分配净化时需加入与提取液体积相同体积的二氯甲烷萃取，提取次数不少于3次。

4.根据权利要求1所述的一种蔬菜和水果中络氨铜残留量的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，步骤(4)中API 4000 LC-MS/MS的液相色谱分析条件为：2.1mm×50mm，粒径1.8μm的ZORBAX，Eclipse Plus C18色谱柱，柱温为 35 ℃；流速为0.2-0.4mL/min，进样体积为2μL；流动相为：含0.1%甲酸水溶液和乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫程序为：

时间(min) 0.1%甲酸水溶液(％ ) 乙睛(％) 0 90 10 1 90 10 2.0 10 90 3.0 10 90 3.1 90 10 4.0 90 10

质谱条件为：离子源：ESI；喷雾电压（V）：4500 ；干燥气和鞘气均为氮气，气帘气压力（psi）：30 ；雾化气压力（psi）：55 ；辅助气压力（psi）：55 ；加热气温度（℃）：500 ；鞘气压力（psi）：9；扫描方式：正离子扫描；监测方式：多反应监测(MRM)；131.4〜132.4，子离子分别为121.5〜122.5和103.5〜104.5。

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