CN116359367B - 一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ‑氨基丁酸的方法，包括步骤：S1、分别配制浓度为2mg/L的GABA标准中间液及浓度为6.65mg/L的GABA‑d₆内标溶液；S2、制备内标GABA‑d₆浓度均为200μg/L的系列标准工作液；S3、绘制内标标准工作曲线；S4、制备GABA‑d₆浓度为200μg/L的待测样品液；S5、制备空白试液；S6、待测样品液、空白试液检测，计算待测样品中GABA含量。本发明方法操作简单、快捷、灵敏度高，并具有良好的精密度与准确度，适用于食品中γ‑氨基丁酸的测定。

Description

一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨 基丁酸的方法

技术领域

本发明涉及食品检测分析技术领域，特别是涉及一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法。

背景技术

γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid，简称GABA)是一种天然存在的非蛋白质功能性氨基酸，参与人体中多种代谢活动，具有很多重要的生理活性功能。GABA能抑制交感神经系统的兴奋，有助于改善睡眠、镇静和防焦虑。GABA在胰岛β细胞内可增加胰岛素分泌，作用于胰岛α细胞可抑制胰高血糖素分泌，在预防和治疗糖尿病上有潜在应用。GABA可以促进脑细胞的新陈代谢，帮助脑细胞恢复功能，增强长期记忆。此外，GABA还具有抗高血压、抗氧化、缓解压力、抗肿瘤等健康益处。

食品中GABA可能的生成途径有两条：第一条是谷氨酸脱羧酶及其辅助因子磷酸吡哆醛催化谷氨酸或其盐脱羧合成，称为GABA支路；第二条途径是由二胺氧化酶和多胺氧化酶降解多胺(腐胺、精胺、亚精胺)形成多胺中间产物，多胺中间产物在脱氢酶的催化下形成GABA。GABA是酒的功能性成分之一，可来源于酿酒原料和发酵过程微生物代谢。从现有文献数据看，白酒、啤酒、红酒以及黄酒都含有一定量的GABA。

由于其健康属性，GABA的检测受到学术界的广泛关注。现有文献报道GABA的检测方法主要有液相色谱法、Berthelot比色法、气相色谱-质谱法等。液相色谱法一般使用紫外-可见光或荧光检测器，氨基酸需要在柱前或柱后进行衍生反应生成有色物质，是目前氨基酸分析中应用最多的方法，但是对于基质复杂的发酵酒，存在目标物GABA与其他氨基酸或杂质干扰物不能有效分离、色谱图基线不平、定量不准、灵敏度低等缺点。Berthelot比色法利用苯酚和次氯酸钠与GABA中游离氨发生显色反应来检测GABA的含量，该方法方便快捷且成本低廉，可快速检测大批量GABA样品，但易受样品中其他成分干扰，不适用成分复杂样品。气相色谱-质谱法虽然准确度和精密度较高，但是实验过程繁琐，涉及液液萃取、离心、浓缩、冷冻干燥、衍生化等多个步骤，单次实验操作时间超过24h。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，该方法操作简单、快捷、灵敏度高，并具有良好的精密度与准确度，适用于酒中γ-氨基丁酸的测定。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，包括以下步骤：

S1、以乙酸铵溶液为定容液，分别配制浓度为2mg/L的GABA标准中间液及浓度为6.65mg/L的GABA-d₆内标溶液；

S2、制备系列标准工作液：以乙酸铵溶液为定容液，取GABA标准中间液和GABA-d₆内标溶液配制成GABA浓度分别为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L且内标物GABA-d₆浓度均为200μg/L的系列标准工作液；

S3、绘制内标标准工作曲线：采用高效液相色谱串联质谱仪对系列标准工作液进行测定，得到GABA和GABA-d₆的多反应监测色谱图，以GABA与GABA-d₆的浓度比为横坐标，GABA与GABA-d₆的定量离子峰面积比为纵坐标，绘制内标标准工作曲线；

S4、制备待测样品液：

对于液体待测样品：取1mL液体样品，加入GABA-d₆内标溶液，并用乙酸铵溶液稀释至待测样品液中GABA含量在标准曲线范围内，同时控制待测样品液中GABA-d₆浓度为200μg/L，混匀后过水系滤膜，得到滤液即为待测样品液；

对于固体样品：取2g固体样品，加水涡旋混匀，经超声提取、离心后将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声、离心，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀；取1mL提取液，加入内标溶液，用乙酸铵溶液定容至5mL，并控制GABA-d₆浓度为200μg/L，混匀后过系滤膜，得到滤液即为待测样品液；

S5、制备空白试液：除不加待测样品外，按步骤S4的操作进行制备；

S6、待测样品液、空白试液检测，计算出待测样品中GABA含量：采用高效液相色谱串联质谱仪分别对空白试液、待测样品液进行测定，获得待测样品液中GABA、GABA-d₆的定量离子峰面积；通过内标标准工作曲线获得待测样品液中GABA的浓度，根据公式(a)计算液体待测样品中GABA的含量或根据公式(b)计算固体待测样品中GABA的含量，计算结果需扣除空白值；

式(a)中：X₁为液体待测样品中GABA的含量，单位为mg/L；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；F₁为液体待测样品稀释至待测样品液的稀释倍数；

式中：X₂为固体待测样品中GABA的含量，单位为μg/kg；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；V为待测样品液定容体积，单位为mL；m为固体待测样品质量，单位为g；F₂为提取液稀释至待测样品液的稀释倍数。

步骤S1中，GABA标准中间液的具体制备步骤为：取GABA标准品，用0.1mol/L盐酸溶解，混匀，用水定容至10mL，配制成浓度为500mg/L的GABA标准储备液，置于4℃下避光保存；吸取标准储备液40μL，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至10mL。

步骤S1中，GABA-d₆内标溶液的具体制备步骤为：取GABA-d₆标准品，用0.1mol/L盐酸溶解，混匀，用水定容至10mL，配制成浓度为133mg/L的GABA-d₆内标储备液，置于4℃下避光保存；吸取内标储备液500μL，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至10mL。

制备系列标准工作液的具体步骤为：取GABA标准中间液各50μL、125μL、250μL、500μL、1250μL，向各个GABA标准中间液中加入GABA-d₆内标溶液，分别用10mmol/L乙酸铵溶液定容至5mL，并控制GABA-d₆浓度为200μg/L，配制成系列标准工作液。

步骤S3中，根据内标标准工作曲线得到的线性回归方程为Y＝1.91846X-0.0124014，相关系数R²＝0.9999。

系列标准工作液、待测样品液、空白试液测定所采用的液相色谱条件均为：

色谱柱：Acclaim Trinity P1，2.1mm×100mm，3μm；流动相：0.1v/v％甲酸-乙腈溶液和10mmol/L乙酸铵溶液，体积比1：1；流速：0.3mL/min，等度洗脱；进样体积：2μL；柱温：35℃。

系列标准工作液、待测样品液、空白试液检测所采用的质谱条件均为：

离子源：电喷雾ESI，正离子模式；扫描方式：多反应监测模式，参数如下

雾化气和干燥气均为高纯氮气，流速分别为3L/min、10L/min；加热气流速：3L/min；接口温度：300℃；脱溶剂温度：526℃；加热块温度：400℃。

本发明的有益效果是：本发明利用LC-MS/MS，以氘代同位素GABA-d6为内标，建立了同位素内标液相色谱-串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸含量的分析方法。经方法验证，综合白酒、啤酒、红酒以及黄酒样品的检测结果，该方法的相对标准偏差为0.86％-2.04％，样品加标回收率为88.8％-113.1％，可以满足不同类型酒中GABA的检测要求，为检测食品中γ-氨基丁酸的含量提供可靠实验方法，为更好研究酒中功能性成分提供技术支持。该方法较液相色谱法操作步骤更简单快捷，无需衍生化，定性更准确可靠；该方法采用稳定同位素为内标，能有效消除基质干扰与进样误差，提高了方法准确度与精密度。

附图说明

图1为本发明标准工作液的GABA与GABA-d₆的总离子流色谱图；

图2为本发明的内标标准工作曲线；

图3为本发明空白试样中GABA的MRM色谱图；

图4为本发明空白试样中GABA-d₆的MRM色谱图；

图5为本发明标准工作液中GABA的MRM色谱图；

图6为实施例1白酒样品中GABA的MRM色谱图；

图7为实施例5啤酒样品中GABA的MRM色谱图；

图8为实施例9红酒样品中GABA的MRM色谱图；

图9为实施例13黄酒样品中GABA的MRM色谱图；

图10为酸枣仁茯苓粉样品中GABA的MRM色谱图；

图11为茶叶样品中GABA的MRM色谱图；

图12为小麦草粉样品中GABA的MRM色谱图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步描述：

材料与试剂：

酒样：实验所用白酒、啤酒、红酒、黄酒样品均为市售产品；固样：酸枣仁茯苓粉、茶叶、小麦草粉；乙腈(LCMS级)：德国Merck公司；GABA标准品(98.0％)：上海安谱实验科技股份有限公司；GABA-d₆标准品(99.0％)：北京振翔科技有限公司；实验用水(超纯水)：由Milli-Q纯水系统制备；乙酸铵(AR)：国药集团化学试剂有限公司。

仪器与设备：

LCMS-8050液相色谱-三重四级杆质谱联用仪：日本岛津公司；Mili-Q Reference型超纯水机：美国Millipore公司；XS205高精密分析天平(精度0.01mg)：Mettler-Toledo公司。

实施例1市售白酒中GABA的测定

S1、以乙酸铵溶液为定容液，分别配制浓度为2mg/L的GABA标准中间液及浓度为6.65mg/L的GABA-d₆内标溶液；

2mg/L GABA标准中间液的具体制备步骤为：称取GABA标准品，用0.1mol/L盐酸溶解，混匀，用水定容至10mL，配制成浓度为500mg/L的GABA标准储备液，置于4℃下避光保存，有效期3个月；吸取GABA标准储备液40μL，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至10mL，现配现用。

6.65mg/L GABA-d₆内标溶液的具体制备步骤为：称取GABA-d₆标准品，用0.1mol/L盐酸溶解，混匀，用水定容至10mL，配制成浓度为133mg/L的GABA-d₆内标储备液，置于4℃下避光保存，有效期3个月；吸取内标储备液500μL，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至10mL，现配现用。

S2、制备系列标准工作液：取GABA标准中间液各50μL、125μL、250μL、500μL、1250μL，向各个GABA标准中间液中加入GABA-d₆内标溶液，并分别用10mmol/L乙酸铵溶液定容至5mL，配制成系列标准工作液(各系列标准工作液中，GABA浓度分别为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L且内标GABA-d₆浓度均为200μg/L)。

S3、绘制内标标准工作曲线：

采用高效液相色谱串联质谱仪对系列标准工作液进行测定，得到GABA多反应监测色谱图和对应的GABA-d₆多反应监测色谱图，以标准物GABA与内标物GABA-d₆的浓度比为横坐标，GABA与GABA-d₆的定量离子峰面积比为纵坐标，绘制内标标准工作曲线。

1)液相色谱条件为：

色谱柱：Thermo Acclaim Trinity P1(2.1mm×100mm，3μm)；流动相：乙腈(含0.1v/v％甲酸)+10mmol/L乙酸铵溶液＝5+5(体积比)；流速：0.3mL/min；进样体积：2μL；柱温：35℃。

Acclaim Trinity P1是一种混合模式色谱柱，其硅胶球孔内具有反相和阴离子交换特性，硅胶球外孔区具有阳离子交换性质。当目标物形式上为中性时，可以以盐形式保留离子；目标物带电荷时，可以通过离子交换相互作用。GABA为两性化合物，可以通过调节流动相pH，来改变其在色谱柱上的保留模式。采用乙腈+乙酸铵体系为流动相时，GABA的保留时间为1.65min，可能原因是在此条件下GABA主要以中性形式存在，Acclaim Trinity P1柱发挥反相模式作用，对目标物的保留较弱。采用乙腈(含0.1％甲酸)+乙酸铵体系为流动相时，GABA的保留时间为3.85min，可能原因是该流动相中GABA主要为酸式构型，AcclaimTrinity P1柱对目标物的保留增强。考虑到采用乙腈+乙酸铵为流动相时保留时间较为接近死时间，影响目标物的分离，选择以乙腈(含0.1％甲酸)+乙酸铵体系为流动相。

考察了柱温对GABA分离效果的影响，结果显示：柱温为30℃时，目标物响应值最高，但是峰宽较大；柱温为40℃时，目标物峰形窄，但是响应值偏低。为兼顾响应值与峰形，选择35℃柱温。

考察了流动相流速对GABA分离效果的影响，结果显示：流速为0.15mL/min时，峰形变宽；流速为0.40mL/min时，保留时间前移，不利于目标物与杂质之间分离；流速为0.3mL/min时，峰形好，保留时间适中。

2)质谱条件为：

离子源：电喷雾ESI，正离子模式；雾化气和干燥气均为高纯氮气，流速分别为3L/min、10L/min；加热气流速：3L/min；接口温度：300℃；脱溶剂温度：526℃；加热块温度：400℃；

扫描方式：多反应监测模式。根据GABA与GABA-d₆的结构特征，参考文献数据采用ESI正离子扫描模式分析。使用标准溶液不接色谱柱直接进样，确定定性、定量离子对，同时对Q1预杆偏差、碰撞电压CE以及Q3预杆偏差等参数进行优化，提高定量、定性子离子信号，优化后的MRM参数见表1。GABA与GABA-d₆加氢的母离子[M+H]⁺的m/z分别为104.1、110.1。选择响应值最高的m/z为87.1、93.2的子离子作为定量离子，综合考虑信号强度与稳定性选择m/z为69.1、73.2的子离子作为定性离子。

表1GABA与GABA-d₆的MRM参数

其中，带“*”为定量离子，其余为定性离子。

S4、制备待测样品液：取1mL白酒酒样，加入浓度为6.65mg/L的GABA-d₆内标溶液，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至5mL，并控制待测样品液中GABA-d₆浓度为200μg/L，混匀后过0.22μm水系滤膜，所得滤液(即待测样品液)供高效液相色谱串联质谱仪测定。

S5、制备空白试液：除不加酒样外，按步骤S4的操作制备空白试液；

S6、待测样品液、空白试液检测，计算出待测样品中GABA含量：按照系列标准工作液测定的液相色谱、质谱条件，采用高效液相色谱串联质谱仪分别对空白试液、待测样品液进行测定，获得待测样品液中GABA、GABA-d₆的定量离子峰面积；通过内标标准工作曲线获得待测样品液中GABA的浓度，根据公式计算液体待测样品中GABA的含量，计算结果需扣除空白值；

式中：X₁为液体待测样品中GABA含量，单位为mg/L；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；F₁为液体待测样品稀释至待测样品液的稀释倍数。

实施例2-4

按照实施例1的方法进行另外三种白酒酒样中GABA含量的测定。

实施例5-16

按照实施例1的方法分别对四种市售啤酒酒样(实施例5-8)、四种市售黄酒酒样(实施例9-12)、四种市售红酒酒样(实施例13-16)进行测定，不同之处在于步骤S4制备待测样品液，啤酒、黄酒、红酒待测样品液的制备方法为：取1mL酒样(啤酒酒样需预先超声脱气5min)，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至5mL；之后取100μL稀释样，加入浓度为6.65mg/LGABA-d₆内标溶液，再用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至5mL，控制待测样品液中GABA-d₆浓度为200μg/L，混匀后过0.22μm水系滤膜，滤液(待测样品液)供高效液相色谱串联质谱仪测定。

结果分析：

1)线性关系及检出限

根据样品中目标化合物的保留时间、定性离子、子离子及离子丰度比进行定性，GABA、GABA-d₆总离子流色谱图如图1。根据所得检测数据，以GABA与GABA-d₆的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制内标标准工作曲线，如图2所示。根据标准工作曲线可知，GABA在10-500μg/L质量浓度范围内呈现良好的线性关系，线性回归方程Y＝1.91846X-0.0124014，R²为0.9999879。

分别取白酒、啤酒、红酒、黄酒四种酒样逐级稀释，经0.22μm滤膜过滤后对应按照实施例所述的液相色谱和质谱条件进行分析。以S/N＝3计算GABA的检出限(limit ofdetection，LOD)，S/N＝10计算其定量限(limit of quantitation，LOQ)。结合不同类型酒样的稀释倍数，经计算得出四种酒样中GABA的LOD与LOQ，详见表2。

表2不同类型酒样的检出限与定量限

2)实际样品的检测结果

采用上述实施例方法对4类酒样中GABA含量进行检测，每类酒样检测4种不同产品，结果见表3。结果显示，白酒中GABA普遍低于其他三类酒，可能原因是大部分GABA在白酒蒸馏工序流失。相同大类的不同酒样中GABA含量差别较大，这与酿酒原料品种、生产条件控制有关。

表3不同酒样中GABA含量测定结果

3)精密度试验

分别取实施例1的白酒样品、实施例5的啤酒样品、实施例9的红酒样品、实施例13的黄酒样品各6份，对应按照实施例中所述的待测样品液制备方法处理样品，并测定GABA含量，精密度见表4。由表4可知，本发明方法精密度试验结果相对标准偏差(relativestandard deviation，RSD)在0.86％-2.04％，该方法精密度良好。

表4精密度试验结果

4)加标回收率试验

向已知GABA含量的白酒、啤酒、红酒、黄酒样品中分别加入标准溶液进行加标试验。考虑到很难找到阴性样品，且不同类型酒样中GABA含量差别较大，为更好的考察加标回收率与精密度，本试验向不同类型酒样加入相当于0.5倍、1倍、2倍本底值的目标物。对应按照实施例中所述的待测样品液制备方法处理加标样品，平行测定6次，计算GABA加标回收率，结果见表5。由表5可知，四种酒中GABA的平均加标回收率为88.8％-113.1％，回收率的RSD为1.17％-7.93％。

表5GABA的加标回收率试验结果

注：加标测定值以“平均值±标准差”表示

本发明中，质谱与液相色谱技术相结合时，基质中非挥发组分会与目标物在液滴表面离子化过程中产生竞争，影响离子化效率。啤酒、红酒、黄酒属于发酵酒，酒液中含有大量色素、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类等，基质抑制效应显著，以外标法定量，GABA加标回收率普遍偏低。使用与目标物具有相似理化性质与离子化效应的稳定同位素内标进行校正是消除基质效应的最便捷有效的方法。

本发明中，实施例1-16均是对于液体待测样品中GABA含量的测定，在制备待测样品液时，取1mL样品，加入GABA-d₆内标溶液，并用乙酸铵溶液稀释至待测样品液中GABA含量在标准曲线范围内，同时控制待测样品液中GABA-d₆浓度与标准工作液中相同，均为200μg/L，混匀后过水系滤膜，得到的滤液即为待测样品液，具体按照上述实施例1-16中所述方法制备的待测样品液中GABA含量均在标准曲线范围内。

实施例17

按照实施例1的方法进行检测，不同之处在于：(1)S4待测样品液的制备方法为：称取2g(精确至0.001g)酸枣仁茯苓粉待测样品于50mL具塞离心管中，加水25mL，涡旋混匀，超声提取15min，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀；取1mL提取液，加入GABA-d₆内标溶液，用10mmol/L乙酸铵溶液定容至5mL，并控制GABA-d₆浓度为200μg/L，过0.22μm水系滤膜，所得滤液即为待测样品液；(2)S6中采用高效液相色谱串联质谱仪后根据公式计算固体待测样品中GABA的含量，计算结果需扣除空白值；式中：X₂为固体待测样品中GABA的含量，单位为μg/kg；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；V为待测样品液定容体积，单位为mL；m为固体待测样品质量，单位为g；F₂为提取液稀释至待测样品液的稀释倍数。

经计算，酸枣仁茯苓粉待测样品中GABA含量为21.5g/kg。

实施例18-19

按照实施例17的方法对茶叶、小麦草粉样品进行GABA含量检测，计算得到茶叶中GABA含量为94.3mg/kg，小麦草粉中GABA含量为142.8mg/kg。

对于液体待测样品，也可按照公式计算GABA的含量，X₂代表液体待测样品中GABA的含量，单位为μg/kg；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；V为待测样品液定容体积，单位为mL；m为液体待测样品质量，单位为g；F₂为液体待测样品稀释至待测样品液的稀释倍数。

本发明以GABA-d₆为内标，补偿了GABA由于基质效应引起的响应信号降低，消除了进样过程中目标物损失所带来的误差，校正回收率，可获得更准确的实验结果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、以乙酸铵溶液为定容液，分别配制浓度为2mg/L的GABA标准中间液及浓度为6.65mg/L的GABA-d₆内标溶液；

S2、制备系列标准工作液：以乙酸铵溶液为定容液，取GABA标准中间液和GABA-d₆内标溶液配制成GABA浓度分别为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L且内标物GABA-d₆浓度均为200μg/L的系列标准工作液；

S3、绘制内标标准工作曲线：采用高效液相色谱串联质谱仪对系列标准工作液进行测定，得到GABA和GABA-d₆的多反应监测色谱图，以GABA与GABA-d₆的浓度比为横坐标，GABA与GABA-d₆的定量离子峰面积比为纵坐标，绘制内标标准工作曲线；

S4、制备待测样品液：

对于液体待测样品：取1mL液体样品，加入GABA-d₆内标溶液，并用乙酸铵溶液稀释至待测样品液中GABA含量在标准曲线范围内，同时控制待测样品液中GABA-d₆浓度为200μg/L，混匀后过水系滤膜，得到滤液即为待测样品液；

对于固体样品：取2g固体样品，加水涡旋混匀，经超声提取、离心后将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声、离心，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀；取1mL提取液，加入内标溶液，用乙酸铵溶液定容至5mL，并控制GABA-d₆浓度为200μg/L，混匀后过系滤膜，得到滤液即为待测样品液；

S5、制备空白试液：除不加待测样品外，按步骤S4的操作进行制备；

S6、待测样品液、空白试液检测，计算出待测样品中GABA含量：采用高效液相色谱串联质谱仪分别对空白试液、待测样品液进行测定，获得待测样品液中GABA、GABA-d₆的定量离子峰面积；通过内标标准工作曲线获得待测样品液中GABA的浓度，根据公式（a）计算液体待测样品中GABA的含量或根据公式（b）计算固体待测样品中GABA的含量，计算结果需扣除空白值；

（a）

式（a）中：X₁为液体待测样品中GABA的含量，单位为mg/L；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；F₁为液体待测样品稀释至待测样品液的稀释倍数；

（b）

式中：X₂为固体待测样品中GABA的含量，单位为μg/kg；C为由标准曲线得出的待测样品液中GABA的质量浓度，单位为μg/L；V为待测样品液定容体积，单位为mL；m为固体待测样品质量，单位为g；F₂为提取液稀释至待测样品液的稀释倍数；

系列标准工作液、待测样品液、空白试液测定所采用的液相色谱条件均为：

色谱柱：Acclaim Trinity P1，2.1mm×100mm，3μm；流动相：0.1v/v%甲酸-乙腈溶液和10mmol/L乙酸铵溶液，体积比1：1；流速：0.3mL/min，等度洗脱。

2.如权利要求1所述一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，步骤S1中，GABA标准中间液的具体制备步骤为：取GABA标准品，用0.1mol/L盐酸溶解，混匀，用水定容至10mL，配制成浓度为500mg/L的GABA标准储备液，置于4℃下避光保存；吸取标准储备液40μL，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至10mL。

3.如权利要求1所述一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，步骤S1中，GABA-d₆内标溶液的具体制备步骤为：取GABA-d₆标准品，用0.1mol/L盐酸溶解，混匀，用水定容至10mL，配制成浓度为133mg/L的GABA-d₆内标储备液，置于4℃下避光保存；吸取内标储备液500μL，用10mmol/L乙酸铵溶液稀释定容至10mL。

4.如权利要求1所述一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，制备系列标准工作液的具体步骤为：取GABA标准中间液各50μL、125μL、250μL、500μL、1250μL，向各个GABA标准中间液中加入GABA-d₆内标溶液，分别用10mmol/L乙酸铵溶液定容至5mL，并控制GABA-d₆浓度为200μg/L，配制成系列标准工作液。

5.如权利要求1所述一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，步骤S3中，根据内标标准工作曲线得到的线性回归方程为Y= 1.91846X-0.0124014，相关系数R²=0.9999879。

6.如权利要求1-5中任意一项所述一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，系列标准工作液、待测样品液、空白试液测定所采用的液相色谱条件还均包括：进样体积：2μL；柱温：35℃。

7.如权利要求1-5中任意一项所述一种同位素内标高效液相色谱串联质谱法检测食品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，系列标准工作液、待测样品液、空白试液检测所采用的质谱条件均为：

离子源：电喷雾ESI，正离子模式；扫描方式：多反应监测模式，参数如下

；

雾化气和干燥气均为高纯氮气，流速分别为3L/min、10L/min；加热气流速：3L/min；接口温度：300℃；脱溶剂温度：526℃；加热块温度：400℃。