CN112931060A - 一种利用蒙古栎果实保藏食用菌菌种的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种利用蒙古栎果实保藏食用菌菌种的方法。该方法包括以下步骤：制作蒙古栎果实保藏培养基、接种与养菌、菌种保藏。该方法用到的菌种保藏培养基配方为蒙古栎果实75％、辅料24％(阔叶木屑90％、麦麸10％；水量为干料质量的60％)、石膏0.5％、石灰0.5％。具体保藏方法是将待保藏的液体菌种接种于蒙古栎保藏培养基，待菌丝长满培养基后，用透明聚乙烯塑料膜将瓶盖上的透气膜封住以隔绝氧气，然后置于4℃冰箱保藏，若保藏时间不超过1年，可放置常温保藏。本发明具有菌种保藏时间长、菌种菌龄一致、菌种保藏量大等优点，且利用本方法保藏菌种，菌丝性状稳定、长势旺盛、活力强。

Description

一种利用蒙古栎果实保藏食用菌菌种的方法

技术领域

本发明涉及一种食用菌菌种保藏方法。

背景技术

菌种工作是食用菌生产过程中的重中之重，菌种的纯度和质量决定着出菇的产量和质量。因此，一株优良的菌种如何保藏下来并延长使用周期是菌种工作中必不可缺的一项。目前食用菌菌种保藏普遍采用的方法是木屑保藏法，木屑保藏法具有保藏菌种菌龄不一致、保藏时间较短、需4℃低温保藏等缺点，并且木屑保藏法一般在试管中保藏，获得的菌种量较少。在长期保藏菌种过程中，木屑保藏法保藏的菌种容易发生退化，退化后的菌种菌丝生长速度慢、出菇量低，限制了食用菌菌种的推广应用。

蒙古栎果实由果仁和果壳组成，使用蒙古栎果实保藏食用菌菌种，菌丝可以侵入到果实内部，吸收果仁中丰富的营养物质，有利于菌丝生长。菌丝长满培养基后，蒙古栎果壳可以成为菌丝的保护屏障，使菌种不易失水，为菌种的保藏提供了有力保障。利用该方法保藏菌种，可延长菌种的保藏时间，短期保藏也可置于常温保藏，且菌种活化效果好、活性强、菌丝萌发快、生长快、浓密洁白、稳定性较高、不易衰退。

发明内容

本发明提供一种利用蒙古栎果实保藏食用菌菌种的方法。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种利用蒙古栎果实保藏食用菌菌种的方法，包括如下步骤：

(1)制作蒙古栎果实保藏培养基

所述蒙古栎果实保藏培养基配方为蒙古栎果实75％、辅料24％(阔叶木屑90％、麦麸10％；含水量为干料质量的60％)、石膏0.5％、石灰0.5％。将上述组分按比例添加，充分搅拌使各物质混合均匀后装入组培瓶，料面距瓶口不小于5cm，放入灭菌装置中121℃灭菌2h，灭菌完成后取出放于干燥清洁的环境中。

(2)接种与养菌

待所述步骤(1)组培瓶冷却至28℃左右，接入10mL液体菌种，上下摇动组培瓶使菌种与培养基充分接触，置于适宜温度培养至菌丝长满培养基。

(3)菌种保藏

将透明聚乙烯塑料膜包裹在组培瓶盖上，用麻绳扎好，保证瓶盖上的透气膜被封住以隔绝氧气，然后置于4℃或常温保藏。

所述步骤(1)中蒙古栎果实应选用无虫蛀，无发霉的果实。

所述步骤(1)中蒙古栎果实可选用新鲜的或者干燥的蒙古栎果实，新鲜的果实不需要浸泡，干燥的果实需置于25℃环境中加水浸泡48h，水没过果实，每1L水中加入1g石膏防止浸泡过程中果实变质。

所述步骤(1)中取新鲜的或浸泡完的果实放入锅中熬煮，熬煮过程中水要没过果实，熬煮至果实内部无白芯，捞出沥干水分，备用。

所述步骤(1)中将混合好的培养基装入组培瓶，装好后应将组培瓶外表面及瓶口擦拭干净，保证无培养基残留。

优选地，所述步骤(1)中组培瓶容量为340mL，瓶口直径为59mm，瓶口带有螺纹，瓶盖可旋紧并带有透气膜。瓶身和瓶盖可放入高温高压灭菌锅中灭菌，不会损坏变形及释放有毒物质。

所述步骤(2)中食用菌液体菌种为待保藏菌种接种于液体培养基中振荡培养获得的液体菌种。

优选地，所述步骤(3)中透明聚乙烯塑料膜需洁净、无破损、不透气、可包裹住组培瓶盖。

本发明所使用的保藏方法与现有技术相比具有菌种保藏时间长、菌龄一致、保藏量大、活性强等优点。利用蒙古栎果实作为保藏培养基主料，其果仁可为菌丝提供丰富的营养促进菌丝生长，外壳可保持菌种水分，为菌种保藏提供适宜的环境。待菌丝长满后，用透明聚乙烯塑料膜将瓶盖上的透气膜封住以隔绝氧气，有效的延长了菌种保藏时间。利用此保藏方法保藏的菌种，在常温下可保藏一年，在4℃下可保藏两年以上。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一：蒙古栎果实保藏培养基保藏黑木耳菌种

1.所用的菌种活化培养基为:

PDA培养基:去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂16g,水1L。

PD培养基:去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、水1L。

2.供试菌种为东北林业大学森林保护学试验室保藏的黑木耳菌种

3.具体步骤如下：

(1)按常规方法配制PDA培养基，将PDA培养基分装到试管中，每个试管装液量为试管长度的1/5-1/4，随后置于高压灭菌设备121℃灭菌20min，在试管冷却至50℃左右，在干燥洁净的环境中摆放成PDA斜面培养基，冷却后备用。

(2)取黄豆粒大小黑木耳菌种接种到PDA斜面培养基上，置于25℃培养8-12d。

(3)按常规方法配制PD培养基，将200mL PD培养基分装到500mL三角瓶中，置于高压灭菌设备121℃灭菌20min，冷却后备用。

(4)取所述步骤(2)得到的黑木耳斜面试管种接入PD培养基中，每瓶约接种1/2试管黑木耳菌丝，将接种好的培养基置于25℃下以160r/min振荡培养5-8d。

(5)取新鲜的或干燥的蒙古栎果实，新鲜的果实不需要浸泡，干燥的果实需置于25℃环境中加水浸泡48h，水没过果实，每1L水中加入1g石膏防止浸泡过程中果实变质。

(6)取所述步骤(5)得到的蒙古栎果实放入锅中熬煮，熬煮过程中水要没过果实，熬煮至果实内无白芯，捞出果实沥干水分，备用。

(7)辅料的配方为阔叶木屑90％、麦麸10％；将各组分按比例添加，再加水，含水量为干料质量的60％，将配好的辅料进行充分搅拌，混合均匀，备用。

(8)取所述步骤(6)得到的蒙古栎果实75％、所述步骤(7)得到的辅料24％、石膏0.5％、石灰0.5％充分搅拌，混合均匀，备用。

(9)将所述步骤(8)得到的培养基装入组培瓶中，装料高度距离瓶口不高于5cm，装好后将组培瓶外表面及瓶口擦拭干净，拧紧瓶盖。

(10)将所述步骤(9)的组培瓶放入高压灭菌设备121℃灭菌2h。

(11)灭菌完成后，取出组培瓶放于干燥清洁的环境中，冷却至28℃左右，接入10mL黑木耳液体菌种，上下摇动瓶子使菌种与培养基充分混匀，置于25℃培养至菌丝长满培养基。

(12)取出长满菌丝的培养基，将透明聚乙烯塑料膜覆盖于组培瓶盖上，用麻绳扎好，保证瓶盖上的透气膜被封住，然后置于4℃和常温保藏。

实施例二：木屑保藏培养基保藏黑木耳菌种

(1)木屑保藏培养基的配方为阔叶木屑89％、麦麸10％、石膏0.5％、石灰0.5％、水量为干料质量的60％，将将上述组分按比例添加，充分搅拌，混合均匀，备用。

(2)将混合好的培养基装入试管中，装料时用玻璃棒将料压实，装料高度为试管的2/3，装好后擦净管口，塞上试管塞。

(3)灭菌方式同实施例(10)

(4)灭菌完成后，取出培养基放于干燥清洁的环境中，冷却至28℃左右，接入3mL黑木耳液体菌种，置于25℃培养至菌丝长满培养基。

(5)菌丝长满后，用封口膜封住试管口，置于4℃和常温保藏。

对比例

(1)采用实施例一和二的保藏方法保藏黑木耳菌种，保藏时间分别为6个月、1年和2年，

(2)按常规方法配置PDA培养基，将200mLPDA分装到500mL三角瓶中，高压灭菌设备保持121℃20min，制作PDA平板培养基，备用。

(3)分别取两种方式保藏的菌种接种到PDA平板培养基上(取蒙古栎果实保藏菌种时，需先用无菌镊子将蒙古栎外壳夹破，用无菌接种钩取蒙古栎内部黄豆粒大小的菌种接种；取木屑保藏菌种时，直接用无菌接种钩取黄豆粒大小菌种接种)，观察菌丝萌发时间，记录菌丝的生长速率和生长状态。

注：--代表不萌发，++++代表菌丝非常浓密，+++代表菌丝较为浓密，++代表菌丝较稀疏，+代表菌丝稀疏。

由此可见采用本实施例的方法保藏菌种，菌种在常温下可保藏一年，在4℃下可保藏两年以上，且应用本实施例所述方法保藏的菌种菌丝萌发快、生长快、浓密洁白、稳定性较高、不易衰退。

以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种利用蒙古栎果实保藏食用菌菌种的方法，包括以下步骤：

(1)制作蒙古栎果实保藏培养基：所述蒙古栎果实保藏培养基配方为蒙古栎果实75％、辅料24％(阔叶木屑90％、麦麸10％；含水量为干料质量的60％)、石膏0.5％、石灰0.5％。将上述组分按比例添加，充分搅拌使各物质混合均匀后装入组培瓶，料面距瓶口不小于5cm，放入灭菌装置中121℃灭菌2h，灭菌完成后取出放于干燥清洁的环境中。

(2)接种与养菌：待所述步骤(1)组培瓶冷却至28℃左右，接入10mL液体菌种，上下摇动组培瓶使菌种与培养基充分接触，置于适宜温度培养至菌丝长满培养基。

(3)菌种保藏：将透明聚乙烯塑料膜包裹在组培瓶盖上，用麻绳扎好，保证瓶盖上的透气膜被封住以隔绝氧气，然后置于4℃或常温保藏。

2.根据权利要求1所述的蒙古栎果实，其特征在于：选用新鲜或者干燥的蒙古栎果实，新鲜的果实不需要浸泡，干燥的果实需置于25℃环境中加水浸泡48h，水没过果实，每1L水中加入1g石膏防止浸泡过程中果实变质。

3.根据权利要求1所述的蒙古栎果实，其特征在于：取新鲜的或浸泡完的蒙古栎果实放入锅中熬煮，熬煮过程中水要没过果实，熬煮至果实内部无白芯，捞出沥干水分，备用。

4.根据权利要求1所述的组培瓶，其特征在于：组培瓶容量为340mL，瓶口直径为59mm，瓶口带有螺纹，瓶盖可旋紧并带有透气膜。瓶身和瓶盖可放入高温高压灭菌锅中灭菌，不会损坏变形及释放有毒物质。

5.根据权利要求1所述的液体菌种，其特征在于：将待保藏菌种接种于液体培养基中振荡培养获得液体菌种。

6.根据权利要求1所述的透明聚乙烯塑料膜，其特征在于：透明聚乙烯塑料膜需洁净、无破损、不透气、可包裹住组培瓶盖。