CN110663452A - 一种羊肚菌菌种保藏方法 - Google Patents

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Abstract

一种羊肚菌菌种保藏方法，包括以下步骤：第一步、制作菌种保藏培养基；取小麦、木屑、麦麸以及贫营养黄土，首先将小麦浸透水后捞出，然后与木屑和麦麸搅拌均匀得到初始培养基，将初始培养基装入培养瓶中，再在初始培养基上铺设滤纸，滤纸上覆盖贫营养黄土，封闭瓶口并进行高压灭菌，取出冷却后得到含菌种培养基的培养瓶；第二步、接种培养；在无菌条件下，将分离提纯的羊肚菌试管种接入由第一步得到的培养瓶当中，直至羊肚菌菌丝在瓶内长满；第三步、菌核培育；第四步、冷冻保藏。本发明克服了羊肚菌试管菌种保藏老化或退化严重的问题，而且菌种保藏量大，能够减少菌种扩繁次数，诱发子实体的形成，可直接用于大田生产。

Description

一种羊肚菌菌种保藏方法
技术领域
本发明属于菌类培育领域，具体涉及一种羊肚菌菌种保藏方法。
背景技术
羊肚菌是一种珍稀的食药两用菌，味道鲜美，脆嫩可口，属高级营养滋补品，富含蛋白质、多糖、碳水化合物、多种维生素、20多种氨基酸以及多种微量元素，被誉为菌中之王，具有补肾壮阳、补脑、提神之功效，长期食用可防癌抗癌，抑制肿瘤，预防感冒，增强人体免疫力，既是宴席上的珍品，又是医药中久负盛名的良药，已成为高端消费和出口创汇的高档食品。近年来随着羊肚菌基础研究的不断深入和种植经验的积累，羊肚菌人工栽培技术也日趋成熟，种植规模迅速扩大，已由2012年的3000亩左右发展到2019年的15万亩以上。但在羊肚菌的生产中同时也出现了很多问题，出菇不稳定或大面积不出菇，产量高低参差不齐，经济效益差距大，其很大原因是菌种质量不高或菌种保存不当导致老化和退化造成的。
发明内容
本发明的目的在于针对羊肚菌菌种保藏易老化或退化的难题，提供一种羊肚菌菌种保藏方法，操作简便易行，并且所栽培的羊肚菌出菇性能好、生长整齐健壮、产量高质量好。
为了实现上述目的，本发明包括以下步骤：
第一步、制作菌种保藏培养基；
取小麦、木屑、麦麸以及贫营养黄土，首先将小麦浸透水后捞出，然后与木屑和麦麸搅拌均匀得到初始培养基，将初始培养基装入培养瓶中，再在初始培养基上铺设滤纸，滤纸上覆盖贫营养黄土，封闭瓶口并进行高压灭菌，取出冷却后得到含菌种培养基的培养瓶；
第二步、接种培养；
在无菌条件下，将分离提纯的羊肚菌试管种接入由第一步得到的培养瓶当中，封闭瓶盖，置于14±2℃、微光条件下进行培养，直至羊肚菌菌丝在瓶内长满；
第三步、菌核培育；
置于5～8℃、避光条件下继续培养，直到形成大量菌核并达到生理成熟；
第四步、冷冻保藏；
将菌种培养瓶置于冰箱当中，缓慢降低温度至-8℃条件下冷冻保藏。
优选的，所述的第一步培养基按质量分数计量取小麦90％、木屑5％、麦麸5％。
优选的，所述的第一步得到的初始培养基中水分按质量分数计量占65％。
优选的，所述的第一步将初始培养基装入500ml的培养瓶中至瓶容积的40％～50％。
优选的，滤纸上覆盖贫营养黄土至培养瓶容积的70％～80％。
优选的，所述的贫营养黄土中拌入石灰粒，贫营养黄土当中的含水量为75％～80％。
优选的，所述的第一步通过内有2层无纺布的透气瓶盖封闭瓶口，将所述培养瓶放在高压灭菌锅里进行高压灭菌，设置温度在121℃～126℃条件下灭菌150～180min。
优选的，所述的第二步将羊肚菌试管种对应得到的培养瓶接入时一支试管种接种5～6瓶。
优选的，所述的第二步羊肚菌试管种在培养瓶当中的培养时间为10～15天。
优选的，所述的第三步将在瓶内长满得到的羊肚菌菌丝培养15～20天。
相较于现有技术，本发明有如下的有益效果：
首次采用富营养麦粒培养基和贫营养黄土通过开孔无菌滤纸隔离分层设置的方法，以贫营养黄土作为贮藏母体，诱导培育出大量富含糖类和脂类等营养物质的优质菌核，大幅度提高了羊肚菌菌丝体对不良环境的抵御能力，克服了羊肚菌试管菌种保藏老化或退化严重的技术难题，而且菌种保藏量大，能减少菌种扩繁次数，诱发子实体的形成，可直接用于大田生产。本发明方法设计合理，操作简便易行，羊肚菌生长健壮、产量高、质量好、采收期集中。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的详细说明。
实施例1
一种羊肚菌人工栽培方法，包括以下步骤：
第一步、保藏菌种培养基的制作；
菌种培养基按质量分数计量，取小麦90％、木屑5％、麦麸5％，同时准备一定量的贫营养黄土。将所述小麦浸透水后捞出，与所述木屑和麦麸搅拌均匀，水分控制在65％左右，将拌好的培养基装入500ml培养瓶中至瓶容积的40％，再在培养基上铺一层开孔的滤纸，滤纸上覆盖贫营养黄土(拌入少量0.2cm左右粒径的石灰粒)至培养瓶容积的70％，黄土的含水量达到75％，瓶口用内有2层无纺布的透气瓶盖盖住，将所述培养瓶放在高压灭菌锅里，设置温度121℃灭菌180min，取出冷却后即得菌种培养基。
第二步、接种培养；
在无菌条件下，将分离提纯的羊肚菌试管种接入经过灭菌冷却后的培养瓶内，一支试管种接种5瓶，盖好瓶盖，置于12℃、微光条件下培养，15天羊肚菌菌丝可以长满瓶。
第三步、菌核培育；
菌丝长满瓶后置于8℃、避光条件下继续培养20天，形成大量菌核并达到生理成熟。
第四步、冷冻保藏；
将形成大量菌核并达到生理成熟的菌种培养瓶置于冰箱，缓慢降低温度至-8℃冷冻保藏。
实施例2
一种羊肚菌人工栽培方法，包括以下步骤：
第一步、保藏菌种培养基的制作；
培养基按质量分数计量，取小麦90％、木屑5％、麦麸5％，同时准备一定量的贫营养黄土。将所述小麦浸透水后捞出，与所述木屑和麦麸搅拌均匀，水分控制在65％左右，将拌好的培养基装入500ml培养瓶中至瓶容积的44％，再在培养基上铺一层开孔的滤纸，滤纸上覆盖贫营养黄土(拌入少量0.2cm左右石灰粒)至培养瓶容积的74％，黄土的含水量达到78％，培养瓶的瓶口用内有2层无纺布的透气瓶盖盖住，将所述培养瓶放在高压灭菌锅里，设置温度123℃灭菌165min，取出冷却后即得菌种培养基。
第二步、接种培养
在无菌条件下，将分离提纯的羊肚菌试管种接入经过灭菌冷却后的培养瓶内，一支试管种接种6瓶，盖好瓶盖，置于14℃、微光条件下培养，13天羊肚菌菌丝可以长满瓶。
第三步、菌核培育
在菌丝长满瓶后置于6℃、避光条件下继续培养15天，形成大量菌核并达到生理成熟。
第四步、冷冻保藏
将形成大量菌核并达到生理成熟的菌种培养瓶置于冰箱，缓慢降低温度至-8℃冷冻保藏。
实施例3
一种羊肚菌人工栽培方法，包括以下步骤：
第一步、保藏菌种培养基制作
培养基按质量分数计量，取小麦90％、木屑5％、麦麸5％，同时准备一定量的贫营养黄土。将所述小麦浸透水后捞出，与所述木屑和麦麸搅拌均匀，水分控制在65％左右，将拌好的培养基装入500ml培养瓶中至瓶容积的50％，再在培养基上铺一层开孔的滤纸，滤纸上覆盖贫营养黄土(拌入少量0.2cm左右石灰粒)至培养瓶容积的80％，黄土的含水量达到80％，瓶口用内有2层无纺布的透气瓶盖盖住，将所述培养瓶放在高压灭菌锅里进行灭菌处理，设置温度为126℃，灭菌150min，取出冷却后即得菌种培养基。
第二步、接种培养
在无菌条件下，将分离提纯的羊肚菌试管种接入经过灭菌冷却后的培养瓶内，一支试管种可接种5瓶，盖好瓶盖，置于16℃、微光条件下培养，10天羊肚菌菌丝可以长满瓶。
第三步、菌核培育
在菌丝长满瓶后置于5℃、避光条件下继续培养17天，形成大量菌核并达到生理成熟。
第四步、冷冻保藏
将形成大量菌核并达到生理成熟的菌种培养瓶置于冰箱，缓慢降低温度至-8℃冷冻保藏。
经过实践验证，本发明能够解决菌种保藏易老化或退化的难题，操作简便易行，并且所栽培的羊肚菌出菇性能好、生长整齐健壮、产量高质量好。采用富营养麦粒培养基和贫营养黄土通过开孔无菌滤纸隔离分层设置的方法，以贫营养黄土作为贮藏母体，诱导培育出大量富含糖类和脂类等营养物质的优质菌核，大幅度提高了羊肚菌菌丝体对不良环境的抵御能力。
以上所述仅仅是本发明的较佳实施例，并不用以对本发明的技术方案进行任何限定，本领域技术人员应当理解的是，在不脱离本发明精神和原则的前提下，该技术方案还可以进行若干简单的修改和替换，而这些修改和替换也均会落入权利要求划定的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步、制作菌种保藏培养基；
取小麦、木屑、麦麸以及贫营养黄土，首先将小麦浸透水后捞出，然后与木屑和麦麸搅拌均匀得到初始培养基，将初始培养基装入培养瓶中，再在初始培养基上铺设滤纸，滤纸上覆盖贫营养黄土，封闭瓶口并进行高压灭菌，取出冷却后得到含菌种培养基的培养瓶；
第二步、接种培养；
在无菌条件下，将分离提纯的羊肚菌试管种接入由第一步得到的培养瓶当中，封闭瓶盖，置于14±2℃、微光条件下进行培养，直至羊肚菌菌丝在瓶内长满；
第三步、菌核培育；
置于5～8℃、避光条件下继续培养，直到形成大量菌核并达到生理成熟；
第四步、冷冻保藏；
将菌种培养瓶置于冰箱当中，缓慢降低温度至-8℃条件下冷冻保藏。
2.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第一步培养基按质量分数计量取小麦90％、木屑5％、麦麸5％。
3.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第一步得到的初始培养基中水分按质量分数计量占65％。
4.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第一步将初始培养基装入500ml的培养瓶中至瓶容积的40％～50％；
滤纸上覆盖贫营养黄土至培养瓶容积的70％～80％。
5.根据权利要求1或4所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的贫营养黄土中拌入石灰粒，贫营养黄土当中的含水量为75％～80％。
6.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第一步通过内有2层无纺布的透气瓶盖封闭瓶口，将所述培养瓶放在高压灭菌锅里进行高压灭菌，设置温度在121℃～126℃条件下灭菌150～180min。
7.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第二步将羊肚菌试管种对应得到的培养瓶接入时一支试管种接种5～6瓶。
8.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第二步羊肚菌试管种在培养瓶当中的培养时间为10～15天。
9.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种保藏方法，其特征在于：
所述的第三步将在瓶内长满得到的羊肚菌菌丝培养15～20天。
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