CN104450521A - 一种长期保存蛹虫草菌种的方法 - Google Patents
一种长期保存蛹虫草菌种的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104450521A CN104450521A CN201410800709.XA CN201410800709A CN104450521A CN 104450521 A CN104450521 A CN 104450521A CN 201410800709 A CN201410800709 A CN 201410800709A CN 104450521 A CN104450521 A CN 104450521A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- cordyceps militaris
- test tube
- sterilizing
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及菌种保存技术领域，具体涉及一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%-60%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%-30%时，取出试管；C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。本发明能更好地抑制菌种的生理活动，菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。
Description
技术领域
本发明涉及菌种保存技术领域，具体涉及一种长期保存蛹虫草菌种的方法。
背景技术
现有的石蜡保存法的一般步骤为：将液体石蜡灭菌，放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。再将已分纯的待存菌在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体，用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培养基上，用量以高出斜面1cm为准，将试管直立，贴上标签，置4℃下保存。该方法制作简单，不需要特殊设备，菌种可以保存1年左右不需要经常移种，缺点是保存的时候需要直立放置。
但对于有些生命力顽强的菌种，如蛹虫草菌种，现有的石蜡保存法并不适用，因此，有必要研发一种能更好地抑制菌种的生理活动的长期保存方法。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种长期保存蛹虫草菌种的方法，该方法能更好地抑制菌种的生理活动，相比现有的液体石蜡保存法，经本发明的方法保存的蛹虫草菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%-60%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%-30%时，取出试管；
C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。优选的，缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1-3cm。
本发明通过将菌丝长满斜面40%-60%后，再进行光培养，可以根据菌丝的生长速度来决定培养时间。本发明通过在石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，能 保持试管口的卫生，防止污染。
优选的，所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
本发明通过将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，其透气性较好，方便后续培养基的脱水；本发明通过在试管的内外各加1层pp薄膜，能防止PDA斜面培养基在灭菌过程中破损；本发明通过在高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，有利报纸上水分蒸发，保证干爽，减少污染。
优选的，所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃±1℃，培养时间为2-3天。
所述暗培养在干爽环境下进行，能减少污染；本发明通过将暗培养的培养温度控制在24℃±1℃，培养时间控制在2-3天，有利于菌丝的生长。
更为优选的，所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃，培养时间为2天。
优选的，所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃±1℃，光照强度为400-600lux，培养时间为1-2天。
本发明通过将光照强度控制在400-600lux，有利于分生孢子的生长；本发明通过将培养时间控制在1-2天，分生孢子数量多，质量好。
更为优选的，所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃，光照强度为500lux，培养时间为1天。
上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3-4年。
本发明的有益效果在于：本发明的方法采用培养基脱水步骤，能抑制菌种的生理活性，并配合低温保存，进一步抑制菌种的生理代谢，延长保存时间。本发明的方法能更好地抑制菌种的生理活动，相比现有的液体石蜡保存法，经本发明的方法保存的蛹虫草菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。
蛹虫草人工培养中，出发菌种的质量是决定子实体有效成分含量高低的关键因素，但蛹虫草优良菌种在繁殖过程中，退化是难以避免的。因此，筛选获得优良菌种之后，将之有效保存，并在必要的时候复活，最大程度发挥菌种的生产性能，将有利于保证优良菌种的供应，促进人工栽培蛹虫草的规模化和产业化发展。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%时，取出试管；
C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。
所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
所述步骤A中，暗培养的培养温度为23℃，干爽环境下培养2天。
所述步骤A中，光培养的培养温度为23℃，光照强度为400lux，培养时间为2天。
上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3年。
实施例2
一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面45%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下22%时，取出试管；
C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1.5cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。
所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃，干爽环境下培养3天。
所述步骤A中，光培养的培养温度为23℃，光照强度为450lux，培养时间为1天。
上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3.5年。
实施例3
一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面50%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下25%时，取出试管；
C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物2cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。
所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃，干爽环境下培养2天。
所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃，光照强度为500lux，培养时间为1天。
上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为4年。
实施例4
一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面55%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下28%时，取出试管；
C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物2.5cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。
所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
所述步骤A中，暗培养的培养温度为23℃，干爽环境下培养3天。
所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃，光照强度为550lux，培养时间为2天。
上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3.5年。
实施例5
一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面60%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下30%时，取出试管；
C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物3cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。
所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
所述步骤A中，暗培养的培养温度为25℃，干爽环境下培养2天。
所述步骤A中，光培养的培养温度为25℃，光照强度为600lux，培养时间为1天。
上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3年。
本发明的方法采用培养基脱水步骤，能抑制菌种的生理活性，并配合低温保存，进一步抑制菌种的生理代谢，延长保存时间。本发明的方法能更好地抑制菌种的生理活动，相比现有的液体石蜡保存法，经本发明的方法保存的蛹虫草菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：包括如下步骤：
A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%-60%后，进行光培养；
B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%-30%时，取出试管；
C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。
2.根据权利要求1所述的一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。
3.根据权利要求1所述的一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃±1℃，培养时间为2-3天。
4.根据权利要求1所述的一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃，培养时间为2天。
5.根据权利要求1所述的一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃±1℃，光照强度为400-600lux，培养时间为1-2天。
6.根据权利要求1所述的一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃，光照强度为500lux，培养时间为1天。
7.如权利要求1-6任一项所述的一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，其特征在于：所述蛹虫草菌种的保存时间为3-4年。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410800709.XA CN104450521B (zh) | 2014-12-22 | 2014-12-22 | 一种长期保存蛹虫草菌种的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410800709.XA CN104450521B (zh) | 2014-12-22 | 2014-12-22 | 一种长期保存蛹虫草菌种的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104450521A true CN104450521A (zh) | 2015-03-25 |
| CN104450521B CN104450521B (zh) | 2017-07-07 |
Family
ID=52897280
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410800709.XA Expired - Fee Related CN104450521B (zh) | 2014-12-22 | 2014-12-22 | 一种长期保存蛹虫草菌种的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104450521B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107603888A (zh) * | 2017-10-10 | 2018-01-19 | 南通市新丝路蚕业有限公司 | 一种蛹虫草液体菌种的制种方法 |
| CN107955794A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-04-24 | 沈阳农业大学 | 蛹虫草菌种的优质保藏方法 |
| CN108739053A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-11-06 | 辽东学院 | 一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法 |
| CN111742785A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-10-09 | 辽东学院 | 一种高虫草素产能的蛹虫草菌种的长期保存方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101121919A (zh) * | 2007-07-27 | 2008-02-13 | 辽宁省微生物科学研究院 | 一种长期保藏微生物菌种的方法 |
| CN103563651A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-02-12 | 沈阳师范大学 | 蛹虫草可结实性生产种源长久保藏方法 |
| CN103789210A (zh) * | 2014-02-17 | 2014-05-14 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种产孢真菌菌种长期保藏的方法 |
| CN103881912A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-06-25 | 云南大学 | 一种中国被毛孢的长期保藏方法 |
-
2014
- 2014-12-22 CN CN201410800709.XA patent/CN104450521B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101121919A (zh) * | 2007-07-27 | 2008-02-13 | 辽宁省微生物科学研究院 | 一种长期保藏微生物菌种的方法 |
| CN103563651A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-02-12 | 沈阳师范大学 | 蛹虫草可结实性生产种源长久保藏方法 |
| CN103881912A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-06-25 | 云南大学 | 一种中国被毛孢的长期保藏方法 |
| CN103789210A (zh) * | 2014-02-17 | 2014-05-14 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种产孢真菌菌种长期保藏的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 陈秀英: "菌种保存方法的比较", 《中国卫生检验杂志》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107603888A (zh) * | 2017-10-10 | 2018-01-19 | 南通市新丝路蚕业有限公司 | 一种蛹虫草液体菌种的制种方法 |
| CN107955794A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-04-24 | 沈阳农业大学 | 蛹虫草菌种的优质保藏方法 |
| CN108739053A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-11-06 | 辽东学院 | 一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法 |
| CN111742785A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-10-09 | 辽东学院 | 一种高虫草素产能的蛹虫草菌种的长期保存方法 |
| CN111742785B (zh) * | 2020-07-07 | 2022-05-06 | 辽东学院 | 一种高虫草素产能的蛹虫草菌种的长期保存方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104450521B (zh) | 2017-07-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102523917B (zh) | 一种草菇栽培方法 | |
| CN102907256B (zh) | 一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法 | |
| CN104450521A (zh) | 一种长期保存蛹虫草菌种的方法 | |
| CN102599451A (zh) | 一种新型酸菜复合发酵剂的制备 | |
| CN102845225A (zh) | 海鲜菇液体菌种发酵工艺方法 | |
| CN103858676B (zh) | 一种北虫草液体菌种的制备方法 | |
| CN101406141A (zh) | 一种能大量减少木材消耗的灵芝栽培方法 | |
| CN104206177A (zh) | 一种草菇的栽培方法 | |
| CN104686196A (zh) | 一种通过阴干子实体保存和分离羊肚菌菌种的方法 | |
| CN110713934B (zh) | 食用菌生产菌种保藏方法及其活化方法 | |
| KR100483333B1 (ko) | 발효톱밥을 이용한 꽃송이버섯 재배방법 | |
| CN103493685A (zh) | 一种利用野生活树桩栽培桑黄的方法 | |
| CN110301290A (zh) | 一种快速合成外生菌根的装置和方法 | |
| CN101940131A (zh) | 一种利用饮料瓶栽培北虫草的方法 | |
| CN108207484A (zh) | 一种蚕蛹冬虫夏草的培育方法 | |
| CN1152952C (zh) | 蚕蛹虫草工业化生产方法 | |
| CN108277167A (zh) | 一种生物防治辣椒疫霉病的方法 | |
| CN101326906A (zh) | 坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法 | |
| CN103340090B (zh) | 利用白壤土作过滤层制作蘑菇麦粒栽培种的方法 | |
| CN105075859B (zh) | 一种利用海浮石促进铁皮石斛生根的培养基 | |
| CN211607737U (zh) | 一种植物学研究用植株保管箱 | |
| CN107047057A (zh) | 一种牛樟芝培植方法 | |
| CN207678485U (zh) | 一种蝙蝠蛾幼虫接种体菌源的双相膜式反应器 | |
| CN106635826A (zh) | 一种基于一次性竹筷再生利用的食用菌栽培菌种的制备方法 | |
| CN102146343B (zh) | 一种长期保持捕食线虫真菌活性的保存方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170707 Termination date: 20181222 |