CN103858676B - 一种北虫草液体菌种的制备方法 - Google Patents
一种北虫草液体菌种的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种北虫草液体菌种的制备方法，包括以下步骤：（1）、配制培养基：（2）、装瓶灭菌：将配好的培养基装入培养瓶，封口膜封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；（3）、接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却后，接入北虫草斜面母种；（4）、培养：将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种。本发明不使用发酵罐、摇床等设备，不需要通气或者搅拌培养，可以减少投资，降低生产成本，非常适合大批量的成产和推广；制备的北虫草液体菌种，及时使用能保证菌丝的良好活性，样品中菌丝浓度适中，培养液清澈透亮，便于观察菌丝生长状况，能及时发现和处理污染的菌种，减少因为菌种污染接种造成的不必要损失。
Description
技术领域
本发明属于食用菌的使用生产技术领域，具体涉及一种北虫草液体菌种的制备方法。
背景技术
国内外学者一直在努力探索开发培育新的虫草菌种，进行扩大化生产和综合开发，以替代天然的冬虫夏草，其中以蛹虫草的研究最多。蛹虫草又称为北虫草，作为传统珍贵中药材，北虫草具有免疫调节作用、能够治疗系统失调、具有抗氧化抗凋亡活性、同时有治疗哮喘，支气管和炎症的功能。随着人们生活水平的提高，虫草作为我国传统的名贵滋补中药材，由于的营养、药用价值很高，市场需求日益扩大。在野生虫草日益稀少的今天，北虫草的子实体被中医认为是最好的入药部位，且人工培养子实体已实现规模化，因此北虫草的开发和利用具有广阔的前景。
北虫草的菌种一般采用液体菌种，因为其具有灭菌时间短、培养周期短而且活性强的优点而备受重视。栽培实践证明北虫草栽培采用液体种方式更易获得成功和高产，明显优于固体种栽培的效果。现有的液体菌种培养制备需要摇床、发酵罐等设备，在摇床上培养的液体种菌丝体浓度高，易形成菌丝团或者球，这样不便于肉眼检查亮度。
液体种制备是北虫草栽培步骤中最关键技术之一，由于受技术和设备条件限制使北虫草栽培还只是局限在小范围，这不利于北虫草产业的全面推广普及。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种北虫草液体菌种的制备方法，该方法克服现有液体菌种培养过程中使用发酵罐、摇床等设备，投资大，操作不便等不足。
本发明的制备方法不使用发酵罐、摇床等设备，不用通气或者搅拌培养，可以成功培养出健壮活力的菌丝，此方法简单方便、易于推广。
本发明的技术方案包括以下步骤：
（1）、配制培养基：将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取200g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000mL，煮沸20-30min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾lg以及硫酸镁0.5g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml，最后用氢氧化钠水溶液调整pH至7.0-7.2得到培养基；
（2）、装瓶灭菌：按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口膜封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶；
（3）、接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却到28℃以下后，接入北虫草斜面母种；
（4）、培养：将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种；所述培养箱温度控制在20-25℃，湿度保持在60-70%。
上述方案可进一步优选为：
所述步骤（2）中封口膜采用边长为12cm、厚度为5mm耐高温无毒薄膜。
所述步骤（2）中的高压灭菌程序为121℃下保持30min。
所述步骤（3）的接种是指在无菌条件下挑0.5cm×0.5cm小方块4块北虫草斜面母种接入培养基中。
所述步骤（4）中的避光密闭培养需要将接种的菌种瓶先静置培养48h，以后每天人工摇晃2-3次，每次2分钟，防止菌丝结块，同时检查菌丝生长情况，发现污染的菌种及时剔除。
与现有的技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明提供的方法不使用发酵罐、摇床等设备，不需要通气或者搅拌培养，可以减少投资，降低生产成本，非常适合大批量的成产和推广。
2、本发明提供的方法制备的北虫草液体菌种，及时使用能保证菌丝的良好活性，样品中菌丝浓度适中，培养液清澈透亮，便于观察菌丝生长状况，能及时发现和处理污染的菌种，减少因为菌种污染接种造成的不必要损失。
3、本发明提供的方法不用电，不消耗能源，对环境没有任何污染，符合国家节能环保的产业政策。
具体实施方式
实施例1
1、准备洗干净的塑料培养瓶500mL16只，边长为12cm，厚度为5mm的正方形的聚丙烯酰胺封口膜和适量橡皮筋。
2、配制方法：洗净新鲜的马铃薯，去皮后称取400g，切成小块(或小条、薄片均可)，加水2000mL，煮沸20-30min，至马铃薯软而不烂时，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，取其液汁于烧杯中，再加入葡萄糖40g，磷酸二氢钾2.0g，硫酸镁1.0g，并搅拌均匀，补足水至2000mL；最后用氢氧化钠水溶液调整pH7.0-7.2。
3、装瓶灭菌：将配好的培养液按照每瓶250mL装入培养瓶后，用准备好的聚丙烯酰胺封口膜封口后，用橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中按照常规灭菌，灭菌温度121℃，时间30min。
4、接种：等培养液温度冷却到28℃以下后，在无菌的条件下接入北虫草斜面母种，挑0.5cm×0.5cm小方块4块。
5、培养：将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，先静置培养48h，以后每天人工摇晃3次，每次2分钟，防止菌丝结块，同时检查菌丝生长情况，发现污染的菌种及时剔除，培养箱温度控制在20-25℃，湿度保持在60-70%。培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种。
6、使用：将获得的液体菌种导入灭菌的处理的瓶中，用移液枪均匀接种到北虫草大米培养基中，每瓶接种3-5mL。
下面将连续振荡方法（摇床、发酵罐）制备的液体菌种与本发明定时振荡制备的液体菌种做比较，结果如下表：
| 方法 | 菌种形状 | 接种通畅性 | 制种时间 | 发菌时间 |
| 定时振荡（一天3次，每次2分钟） | 短丝状、绒状 | 通畅，不堵移液枪的喷头 | 5-7天 | 7-9天 |
| 连续振荡 | 呈球形，转速慢球形大 | 易堵移液枪的喷头，需先粉碎 | 5天 | 7-9天 |
通过以上对比可知，本发明制备的液体菌体菌丝浓度适中，不易成球或团，便于后续的接种操作（不易堵塞移液枪），也便于发现污染的菌种，同时本发明培养的时间与现有技术相当，而菌种的活性并没有降低，由表中的数据可见，发菌时间基本与现有技术一致。综合以上，本发明在保持现有技术指标的基础上，菌种培养操作更加方便，后续接种更加顺畅，并且设备投资更少，能源消耗更低，显然适合大面积的推广。
上述实施例仅仅为本发明的典型实施例，本领域技术人员完全可以根据本发明的技术方案作出简单的调整，但是与本发明的实质内容相同，因此同样落入本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、配制培养基：将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取200g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000mL，煮沸20-30min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾lg以及硫酸镁0.5g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml，最后用氢氧化钠水溶液调整pH至7.0-7.2得到培养基；
（2）、装瓶灭菌：按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口膜封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶；
（3）、接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却到28℃以下后，接入北虫草斜面母种；
（4）、培养：将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种；所述培养箱温度控制在20-25℃，湿度保持在60-70%；所述避光密闭培养需要将接种的菌种瓶先静置培养48h，以后每天人工摇晃2-3次，每次2分钟，防止菌丝结块，同时检查菌丝生长情况，发现污染的菌种及时剔除。
2.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中封口膜采用边长为12cm、厚度为5mm耐高温无毒薄膜。
3.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的高压灭菌程序为121℃下保持30min。
4.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）的接种是指在无菌条件下挑0.5cm×0.5cm小方块4块北虫草斜面母种接入培养基中。
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