CN107603888A - 一种蛹虫草液体菌种的制种方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物科技技术领域,具体公开了一种蛹虫草液体菌种的制种方法，将蛹虫草液体培养基分装到玻璃瓶中封口；灭菌冷却；接入试管母种震荡培养；加入等比例的液体石蜡后混匀；分装到冷冻管中，放入‑80℃冰箱中冷冻保存；将冷冻管取出后解冻活化，再倒入玻璃瓶中静置培养48小时；将液体培养基倒入液体菌种罐中，灭菌冷却后，倒入液体菌种罐中进行培养。本发明液体菌种的制种方法，在无菌条件下进行培养，增加了液体菌种的保存时间，降低了存储环境温度，简化了操作流程，减少了菌种生产的工作量，缩短菌种的生产周期，提高了接入液体菌种罐所用蛹虫草菌种相关性状的一致程度，达到增产的目的。
Description
技术领域
本发明属于生物科技技术领域，具体涉及一种蛹虫草液体菌种的制种方法。
背景技术
蛹虫草为子囊菌门，肉座目，麦角菌科、虫草属的模式种，又称北虫草，是与冬虫夏草同为虫草属的同属异种真菌，二者化学成分、营养成分和药用功能都非常相似，其主要药用成分虫草素等含量远高于野生冬虫夏草，又由于蛹虫草较之冬虫夏草更易于人工栽培，因此自然而然被作为冬虫夏草的最佳替代品而渐渐走入人们视野并受到极大关注，蛹虫草产业目前已进入工厂化大面积栽培的充分发展时期。
蛹虫草人工栽培起步相对较晚，栽培技术一般是借鉴或引用常规食用菌栽培技术而改进创新。采用液体种因为具有灭菌时间短、培养周期短、菌龄短且活力强等优点而倍受推崇，实践也证明蛹虫草栽培采用液体种方式更易获得成功和高产，明显优于固体种栽培的效果。
在现有技术中，液体菌种制备通常为在无菌条件下，将蛹虫草一级菌种转接入若干支带蛹虫草培养基斜面的试管内，此菌种为二级菌种。挑选长势旺盛转色好的二级试管种放入4℃冰箱中保存；用1000ML的三角瓶制作无菌的蛹虫草液体培养基，将蛹虫草二级试管种在无菌条件下接入三角瓶中，然后将三角瓶放到摇床上震荡培养，在23℃、200r/m条件下培养6天，此为三级菌种。最后将三角瓶中的液体菌种接入液体菌种罐中，在23℃、罐压0.02MPa并连续打进无菌空气条件下培养，以此作为生产种。采用所制作方法存在的缺点为菌种保存时间短，菌种生产周期长，生产成本高，操作繁琐，工作量大，菌种性状不一致，不利于管理，影响产量，二级试管种在4℃冰箱中保存时间短暂，保存时间长会导致菌种活力退化，需定期生产二级菌种；二级试管种在菌种菌龄、活力等性状存在一定的差异，必然导致三角瓶液体种的性状存在差异，最终影响液体发酵罐菌种的质量，影响后期管理及产品产量；制作三角瓶液体菌种过程，操作繁琐，污染机率大。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种蛹虫草液体菌种的制种方法，提高蛹虫草三级菌种的保存时间，简化操作流程的同时达到增产的目的。
为解决上述技术问题，本发明一种蛹虫草液体菌种的制种方法，所述方法如下：
将蛹虫草液体培养基分装到玻璃瓶中，将瓶口封口密封；
在0.15MPa下灭菌30分钟后冷却至室温；
将试管母种接入三角瓶中，然后将三角瓶放到摇床上震荡培养；
当玻璃瓶中液体培养基内的蛹虫草菌丝密度浓密，菌液PH值在4-5时，在无菌条件下，向玻璃瓶内加入等比例的液体石蜡后混匀；
将蛹虫草液体菌种与液体石蜡混合物分装到冷冻管中，放入-80℃冰箱中冷冻保存；
生产蛹虫草生产种时，将冷冻管取出后解冻活化，再倒入玻璃瓶中静置培养48小时；
将液体培养基倒入液体菌种罐中，在0.15MPa下灭菌30分钟后冷却至室温，将玻璃瓶中的液体菌倒入液体菌种罐中，在罐体温度23℃、罐压0.02MPa并连续打进无菌空气条件下培养。
进一步地，所述的玻璃瓶为广口瓶、三角瓶或菌种瓶，瓶体的容积为1000毫升。
进一步地，所述封口步骤为采用棉塞塞住瓶口再包扎牛皮纸。
进一步地，所述震荡培养时，培养温度为23-24℃，摇床的震荡频率为每分钟200转。
进一步地，加入液体石蜡时采用无菌移液枪将液体石蜡加入。
进一步地，液体菌在液体菌种罐中进行培养时，罐体温度为23℃、罐压0.02MPa，并对罐体连续打进无菌空气，培养时间为5天。
本发明的有益效果是：本发明液体菌种的制种方法，在无菌条件下进行培养，增加了液体菌种的保存时间，降低了存储环境温度，简化了操作流程，减少了菌种生产的工作量，缩短菌种的生产周期，提高了接入液体菌种罐所用蛹虫草菌种相关性状的一致程度，达到增产的目的。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的实施例中，公开了一种蛹虫草液体菌种的制种方法，所述方法如下：
将蛹虫草液体培养基分装到玻璃瓶中，将瓶口采用棉塞塞住瓶口再包扎牛皮纸进行封口密封，所述的玻璃瓶为广口瓶、三角瓶或菌种瓶，瓶体的容积为1000毫升，在0.15MPa下灭菌30分钟后冷却至室温；
将试管母种接入三角瓶中，然后将三角瓶放到摇床上震荡培养，所述震荡培养时，培养温度为23-24℃，摇床的震荡频率为每分钟200转。
当玻璃瓶中液体培养基内的蛹虫草菌丝密度浓密，菌液PH值在4-5时，在无菌条件下，采用无菌移液枪向玻璃瓶内加入等比例的液体石蜡后混匀；
将蛹虫草液体菌种与液体石蜡混合物分装到若干个10毫升冷冻管中，放入-80℃冰箱中冷冻保存，保存时间不得超过一年，需在一年内进入下道工序，保存超过一年后再使用无法达到本发明所预期的效果；
生产蛹虫草生产种时，将冷冻管取出后解冻活化，再倒入玻璃瓶中静置培养48小时；
将液体培养基倒入液体菌种罐中，在0.15MPa下灭菌30分钟后冷却至室温，将玻璃瓶中的液体菌倒入液体菌种罐中，在罐体温度23℃、罐压0.02MPa并连续打进无菌空气条件下培养5天得到本发明所述液体菌种。
具体实施例：
制备蛹虫草液体培养基，分装到1000ml三角玻璃瓶中，每瓶装量400ml，用棉塞塞住瓶口再包扎牛皮纸将瓶口密封，在0.15MPa下灭菌30分钟，灭完菌，冷却至室温，将试管母种接入三角瓶中，然后将三角瓶放到摇床上震荡培养，在温度为23-24℃，摇床的震荡频率为每分钟200转的条件下培养，当三角瓶中液体培养基内的蛹虫草菌丝密度浓密，菌液PH值在4.5时，将10ml冷冻管、移液枪吸头和液体石蜡进行灭菌处理，同时无菌化处理移液枪，在无菌条件下，向装有液体菌种的三角瓶内加入等比例的无菌液体石蜡，并混合均匀。用灭过菌的移液枪将蛹虫草液体菌种与液体石蜡混合物分装到若干个10ml冷冻管中，放入-80℃冰箱中冷冻保存。待用液体菌种罐生产蛹虫草生产种时，取出冷冻管，室温解冻活化，并无菌化处理冷冻管，再倒入装有无菌蛹虫草液体培养基的三角瓶中，静置培养48小时；同时配置液体菌种罐中的液体培养基，在0.15MPa下灭菌30分钟，灭完菌，冷却至室温，将三角瓶中的液体菌种倒入液体菌种罐中，在23℃、罐压0.02MPa并连续打进无菌空气条件下培养5天。
本发明的有益效果是：本发明液体菌种的制种方法，在无菌条件下进行培养，增加了液体菌种的保存时间，降低了存储环境温度，简化了操作流程，减少了菌种生产的工作量，缩短菌种的生产周期，提高了接入液体菌种罐所用蛹虫草菌种相关性状的一致程度，达到增产的目的。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种蛹虫草液体菌种的制种方法，其特征在于，所述方法如下：
将蛹虫草液体培养基分装到玻璃瓶中，将瓶口封口密封；
在0.15MPa下灭菌30分钟后冷却至室温；
将试管母种接入三角瓶中，然后将三角瓶放到摇床上震荡培养；
当玻璃瓶中液体培养基内的蛹虫草菌丝密度浓密，菌液PH值在4-5时，在无菌条件下，向玻璃瓶内加入等比例的液体石蜡后混匀；
将蛹虫草液体菌种与液体石蜡混合物分装到冷冻管中，放入-80℃冰箱中冷冻保存；
生产蛹虫草生产种时，将冷冻管取出后解冻活化，再倒入玻璃瓶中静置培养48小时；
将液体培养基倒入液体菌种罐中，在0.15MPa下灭菌30分钟后冷却至室温，将玻璃瓶中的液体菌倒入液体菌种罐中再进行培养。
2.根据权利要求1所述的一种蛹虫草液体菌种的制种方法，其特征在于，所述的玻璃瓶为广口瓶、三角瓶或菌种瓶，瓶体的容积为1000毫升。
3.根据权利要求1所述的一种蛹虫草液体菌种的制种方法，其特征在于，所述封口步骤为采用棉塞塞住瓶口再包扎牛皮纸。
4.根据权利要求1所述的一种蛹虫草液体菌种的制种方法，其特征在于，所述震荡培养时，培养温度为23-24℃，摇床的震荡频率为每分钟200转。
5.根据权利要求1所述的一种蛹虫草液体菌种的制种方法，其特征在于，加入液体石蜡时采用无菌移液枪将液体石蜡加入。
6.根据权利要求1所述的一种蛹虫草液体菌种的制种方法，其特征在于，液体菌在液体菌种罐中进行培养时，罐体温度为23℃、罐压0.02MPa，并对罐体连续打进无菌空气，培养时间为5天。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108849257A (zh) * | 2018-09-26 | 2018-11-23 | 张家港市藏联生物研究所有限公司 | 一种蛹虫草科学培养方法 |
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| CN104450521A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-03-25 | 东莞市生物技术研究所 | 一种长期保存蛹虫草菌种的方法 |
| CN104472221A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-01 | 四川藏宝虫草生物科技有限公司 | 一种由天然冬虫夏草子实体发酵菌丝的方法 |
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