CN107937193A - 一种有机葡萄酒的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种有机葡萄酒的制备方法，将具有驱虫杀虫效果的植物套种在果园中，按照有机种植要求管理果园，采摘成熟后葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒。本发明采用有机葡萄酿酒，具有营养，健康，安全，无农药残留的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种有机葡萄酒的制备方法。
背景技术
民以食为天，加强食品安全工作，关系我国13亿多人的身体健康和生命安全，必须抓得紧而又紧。这些年，党和政府下了很大气力抓食品安全，食品安全形势不断好转，但存在的问题仍然不少，老百姓仍然有很多期待，必须再接再厉，把工作做细做实，确保人民群众“舌尖上的安全”。
葡萄酒历史悠久，其具有助消化、美容养颜和补充营养作用，深受人们喜爱，目前酿造葡萄酒的葡萄多采用普通种植，含有农药成分，且口感差，市场需要有机葡萄酒。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种有机葡萄酒的制备方法，本发明采用有机葡萄酿酒，具有营养，健康，安全，无农药残留的优点。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种有机葡萄酒的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将具有驱虫杀虫效果的植物套种在果园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述具有驱虫杀虫效果的植物包括大蒜、薰衣草、天竺葵、猪笼草、食虫草和艾叶中的一种或任意比例两种以上；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度160～230g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至5～8℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度60～120mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶20～60mg/L,容器在入料前充入氮气或者二氧化碳，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至5～8℃，浸渍12～96h，每天喷淋循环1～2次，每次喷淋1/2～1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气或二氧化碳除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至5～8℃，添加澄清剂，静置沉淀24～48h，分离葡萄清汁，浊度150～250NTU，期间充氮气或二氧化碳去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至10～12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量不低于106cfu/ml，发酵温度10～12℃，发酵时间24～72h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至15～25℃，接种酿酒酵母，酵母数量不低于106cfu/ml，发酵温度16～20℃，发酵时间24～72h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至5～10℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气或二氧化碳排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌20～60mg/L，发酵温度20～25℃，发酵时间24～480h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度10～15℃贮存，贮存时间3～6个月，控制游离二氧化硫浓度为20～30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠、美乐、蛇龙珠、品丽珠、西拉、黑比诺、霞多丽、贵人香和雷司令中的一种或任意比例的两种以上；
所述酶是果胶酶、纤维素酶、木瓜酶、褐藻酸酶和淀粉酶中的一种或任意比例的两种以上；
所述澄清剂是明胶、皂土、PVPP和蛋清中的一种或任意比例的两种以上；
所述有机种植所用肥料为有机肥、有机无机肥和生物有机肥中的一种或任意比例两种以上；
所述有机肥、有机无机肥和生物有机肥中加入生态海藻生物刺激素；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70％，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21％，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
所述果园所用农药为石硫合剂、波尔多液、矿物油、哈茨木霉菌、喹啉酮悬浮剂、乙醇、苏打、苦楝碱、鱼藤酮、除虫菊乳油和苦参碱中的一种或任意比例两种以上。
融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0～25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
步骤3)所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
步骤4)所述混合培养基至含水量为60％，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
步骤5)混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC31192和CICC 10168。
步骤A)中所述匀质为匀质2次，匀质温度为40℃，匀质时间为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa。
生态海藻生物刺激素加入到肥料中的方式为：与肥料原料混合造粒的内添加方式和喷涂到肥料颗粒表面的外添加方式。
发明具有以下有益技术效果：
1、本发明采用有机水果和有机葡萄为原料，其制备的葡萄酒具有营养，健康，安全，无农药残留的优点。
2、本发明葡萄基酒工艺独特，使葡萄酒具有浓郁、清新的香气，口感更加柔顺，且营养物质保留充分；首先采用低温冷浸渍工艺控制性提取果皮和果籽中颜色和有益物质；然后压榨去果皮采用澄清葡萄汁进行酒精发酵，在此过程中顺序接种非酿酒酵母与酿酒酵母发酵生成芳香物质和酒精等，增加葡萄基酒的香气复杂度和浓郁度，并通过低温发酵、贮藏工艺防止香气物质的挥发损失，增加在酒中的细腻度；通过全程充氮气或二氧化碳等防氧化工艺，最大限度增加葡萄基酒的新鲜度及营养物质活性；本发明不需要添加防腐物质。
3、本发明通过在果园中套种具有驱虫杀虫效果的植物，可以达到驱虫并减少农药使用量的目的。
4、本发明中生态海藻生物刺激素采用新鲜海藻，新鲜海藻中含有大量可以刺激生长的刺激素和抗逆性物质，活性好，可以达到减少肥料使用量的目的。本发明采用溶菌酶和果胶酶对海藻进行预处理，溶菌酶使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出，方便后续提取。
5、本发明中生态海藻生物刺激素采用好氧兼厌氧的胶红酵母在厌氧条件下发酵，可防止海藻营养成分的流失，并且厌氧发酵产生的酒精对海藻提取具有辅助作用。
6、本发明中生态海藻生物刺激素采用好氧兼厌氧的产氨棒杆菌在缺氧条件下发酵，生产ATP，ATP是一种高能磷酸化合物，在细胞中，它能与ADP的相互转化实现贮能和放能，从而保证了细胞各项生命活动的能量供应，促进作物生长。由于长期施肥的不合理，造成土壤酸化，产氨棒杆菌可还原N03 -和尿素，产生氨使发酵产物呈弱碱性，可以改善酸化土壤问题。
7、本发明中生态海藻生物刺激素对重金属有一定的固定作用。本发明发酵物中含有多肽、海藻酸及其它蛋白类，重金属可以使蛋白、海藻酸和多肽类失活，同时重金属也会被蛋白、海藻酸和多肽固定，从而防止作物吸收。
8、本发明采用好氧兼氧菌，目前土壤板结严重，施入地中的微生物常处于缺氧状态，采用好氧兼氧菌更能适应现在土壤环境。
9、本发明中生态海藻生物刺激素通过融冻法提高产氨棒杆菌细胞的通透性，可以使产氨棒杆菌产生的ATP更容易从细胞膜中渗透到细胞外，其产物效果明显好于用未经处理的产氨棒杆菌的产物。
具体实施方式
下面结合具体实例进一步说明本发明。
实施例1
将大蒜和薰衣草套种在葡萄园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度180～200g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至6℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度80mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶40mg/L,容器在入料前充入氮气，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至7℃，浸渍48h，每天喷淋循环1次，每次喷淋1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至7℃，添加澄清剂，静置沉36h，分离葡萄清汁，浊度200NTU，期间充氮气去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度12℃，发酵时间36h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至20℃，接种酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度20℃，发酵时间48h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至6℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌40mg/L，发酵温度22℃，发酵时间120h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度12℃贮存，贮存时间4个月，控制游离二氧化硫浓度为30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠和美乐按照质量比1:1的组合物；
所述酶是果胶酶、纤维素酶和木瓜酶按照质量比3:1:1的组合物；
所述澄清剂是PVPP和蛋清按照质量比1:1的组合物。
所述果园使用加入生态海藻生物刺激素的有机肥；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例2
将大蒜和薰衣草套种在苹果、梨、樱桃和葡萄混种的果园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度180～200g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至6℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度60mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶50mg/L,容器在入料前充入氮气，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至7℃，浸渍48h，每天喷淋循环1次，每次喷淋1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至7℃，添加澄清剂，静置沉36h，分离葡萄清汁，浊度200NTU，期间充氮气去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度12℃，发酵时间48h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至20℃，接种酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度20℃，发酵时间32h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至6℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌40mg/L，发酵温度22℃，发酵时间120h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度12℃贮存，贮存时间4个月，控制游离二氧化硫浓度为30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠和美乐按照质量比1:1的组合物；
所述酶是纤维素酶和木瓜酶按照质量比1:1的组合物；
所述澄清剂是PVPP。
所述果园使用加入生态海藻生物刺激素的有机肥；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为35℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例3
将大蒜和薰衣草套种在葡萄园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度180～200g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至6℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度70mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶50mg/L,容器在入料前充入氮气，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至7℃，浸渍48h，每天喷淋循环2次，每次喷淋1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至7℃，添加澄清剂，静置沉36h，分离葡萄清汁，浊度200NTU，期间充氮气去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度12℃，发酵时间48h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至20℃，接种酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度20℃，发酵时间32h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至6℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌40mg/L，发酵温度22℃，发酵时间120h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度12℃贮存，贮存时间4个月，控制游离二氧化硫浓度为30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠和美乐按照质量比1:1的组合物；
所述酶是果胶酶、纤维素酶和木瓜酶按照质量比2:1:1的组合物；
所述澄清剂是PVPP。
所述果园使用加入生态海藻生物刺激素的有机肥；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为45℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例4
将大蒜和薰衣草套种在苹果、梨、樱桃和葡萄混种的果园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度180～200g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至6℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度80mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶40mg/L,容器在入料前充入氮气，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至7℃，浸渍48h，每天喷淋循环1次，每次喷淋1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至7℃，添加澄清剂，静置沉36h，分离葡萄清汁，浊度200NTU，期间充氮气去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度12℃，发酵时间36h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至20℃，接种酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度20℃，发酵时间48h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至6℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌40mg/L，发酵温度22℃，发酵时间120h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度12℃贮存，贮存时间4个月，控制游离二氧化硫浓度为30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠和美乐按照质量比1:1的组合物；
所述酶是果胶酶、纤维素酶和木瓜酶按照质量比3:1:1的组合物；
所述澄清剂是PVPP。
所述果园使用加入生态海藻生物刺激素的有机肥；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质1次，匀质温度均为40℃，匀质时间为30min，匀质压力为25MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例5
将大蒜和薰衣草套种在苹果、梨、樱桃和葡萄混种的果园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度180～200g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至6℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度80mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶40mg/L,容器在入料前充入氮气，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至7℃，浸渍48h，每天喷淋循环1次，每次喷淋1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至7℃，添加澄清剂，静置沉36h，分离葡萄清汁，浊度200NTU，期间充氮气去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度12℃，发酵时间36h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至20℃，接种酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度20℃，发酵时间48h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至6℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌40mg/L，发酵温度22℃，发酵时间120h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度12℃贮存，贮存时间4个月，控制游离二氧化硫浓度为30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠和美乐按照质量比1:1的组合物；
所述酶是果胶酶、纤维素酶和木瓜酶按照质量比3:1:1的组合物；
所述澄清剂是PVPP。
所述果园使用加入生态海藻生物刺激素的有机肥；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质3次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，第三次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例6
将大蒜和薰衣草套种在葡萄园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a)采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b)采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度180～200g/L；
c)除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至6℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度80mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶40mg/L,容器在入料前充入氮气，排空气防氧化，得葡萄醪；
d)冷浸渍：将葡萄醪降低温度至7℃，浸渍48h，每天喷淋循环1次，每次喷淋1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e)压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气除氧气；
f)低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至7℃，添加澄清剂，静置沉36h，分离葡萄清汁，浊度200NTU，期间充氮气去除氧气；
g)产香发酵：将葡萄清汁回温至12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度12℃，发酵时间36h；
h)酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至20℃，接种酿酒酵母，酵母数量为2*106cfu/ml，发酵温度20℃，发酵时间48h；
i)分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至6℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气排空气；
j)苹果酸-乳酸发酵：向步骤i)得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌40mg/L，发酵温度22℃，发酵时间120h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k)贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度12℃贮存，贮存时间4个月，控制游离二氧化硫浓度为30ml/L；
l)澄清：将步骤k)得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠和美乐按照质量比1:1的组合物；
所述酶是果胶酶、纤维素酶和木瓜酶按照质量比3:1:1的组合物；
所述澄清剂是PVPP和蛋清按照质量比1:1的组合物。
所述果园使用加入生态海藻生物刺激素的有机肥；
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带晾干，采用粉碎机将干海带粉碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果：
实验一
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点和实验对象：烟台某大学化学分析检测中心。
1.2实验检测：测溶菌酶的活性和回收率。
1.3供试材料：针对普通处理(溶菌酶的制备方法除搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5中制备的溶菌酶做效果比较。
1.4试验设计：采用高效液相色谱法对样品处理。
本实验除实验用处理不同外其他操作均一致。
2结果与分析
普通处理(搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5制备的溶菌酶处理相比，数据见表1
表1
| 回收率(％) | 酶活性(U/mg) | |
| 普通处理 | 72.7 | 14567 |
| 实施例1 | 91.7 | 21101 |
| 实施例2 | 84.7 | 19831 |
| 实施例3 | 88.3 | 20790 |
| 实施例4 | 91.7 | 20903 |
| 实施例5 | 89.3 | 20737 |
由表1实施例1和普通处理相比，本发明无论是在溶菌酶回收率，还是酶活性方面都明显好于普通处理；由实施例1至实施例3比较可以看出匀质温度对溶菌酶的回收率和活性还是有一定影响，其中实施例1采用40℃总体效果最好；由实施例1、实施例4和实施例5比较可以看出匀质压力和次数对溶菌酶的回收率和活性也有一定影响，并非压力越大，时间越长就越好，综合比较实施例1效果最佳。
实验二
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点：实验室。
1.2供试材料：普通果园(非有机果园)中的水果和葡萄和本发明有机果园中的水果和葡萄，做比较。
本实验除实验用处理不同外其他管理均一致。
1.3试验设计：分别采摘普通果园(非有机果园)中的水果和葡萄和本发明有机果园中的水果和葡萄按照实施例2的方法酿造葡萄酒，检测葡萄酒中的NO2 -和农药残留。
2结果与分析
| 葡萄酒中NO2 -(mg/kg) | 农药残留(mg/kg) | |
| 普通果园葡萄酒 | 0.8 | 0.9 |
| 本发明有机果园葡萄酒 | 0 | 0 |
由以上数据可以看出，本发明酿造的葡萄酒与普通葡萄酒在食品健康方面更具优势。
试验三
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点：烟台栖霞市苏家店镇葡萄园。
1.2供试材料：普通果园(除未具有驱虫杀虫效果的植物外，其它制作方法与本发明一致)、对比1(制备生态海藻液体生物刺激素时，除产氨棒杆菌未经融冻法处理直接使用外，其它制作方法均与本发明一致)和实施例1，做比较。
本实验除实验用处理不同外其他管理均一致。
1.3试验设计：选择6亩树龄一致的葡萄园，2平行，1亩为1处理单位。针对普通果园(除未套种具有驱虫杀虫效果的植物外，其它制作方法与本发明一致)、对比1(制备生态海藻液体生物刺激素时，除产氨棒杆菌未经融冻法处理直接使用外，其它制作方法均与本发明一致)和实施例1做对比，观察果园虫害情况，统计果园葡萄产量。
2结果与分析
| 葡萄平均产量(kg) | 果园虫害情况 | |
| 普通果园 | 2028.6 | 虫害严重 |
| 对比1 | 2371.4 | 基本无虫 |
| 本发明 | 2611.5 | 基本无虫 |
由普通果园和本发明相比，可以看出本发明具有明显的驱虫效果，能够提供葡萄产量；由实施例1和对比1比较可以得出产氨棒杆菌经融冻法处理效果好，能提高葡萄产量。
本发明所述的“按照有机种植要求管理果园”是指按照GB/T19630《有机产品》的标准管理果园。
Claims (10)
1.一种有机葡萄酒的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将具有驱虫杀虫效果的植物套种在果园中，按照有机种植要求管理果园，采摘果园中成熟葡萄进行酿酒，即得有机葡萄酒；
所述具有驱虫杀虫效果的植物包括大蒜、薰衣草、天竺葵、猪笼草、食虫草和艾叶中的一种或任意比例两种以上；
所述葡萄酒的制备按照以下步骤进行：
a）采摘期确定：在葡萄果实转色后，取样测定葡萄果实的糖度、酸度指标的变化，当酸度达到6.0～6.5g/L，开始采收；
b）采收：在有机果园采收新鲜、健康、无病烂果和生青果的葡萄果实，糖度160～230g/L；
c）除梗破碎：将采收的葡萄降低温度至5～8℃，进行柔性除去果梗、破碎，破碎前添加二氧化硫浓度60～120mg/kg，破碎入已消毒的容器时添加酶20～60mg/L,容器在入料前充入氮气或者二氧化碳，排空气防氧化，得葡萄醪；
d）冷浸渍：将葡萄醪降低温度至5～8℃，浸渍12～96h，每天喷淋循环1～2次，每次喷淋1/2～1/3倍容器容积量的葡萄醪液；
e）压榨取汁：将冷浸渍的葡萄醪压榨取汁，得葡萄浊汁，期间冲氮气或二氧化碳除氧气；
f）低温澄清：将葡萄浊汁控制温度至5～8℃，添加澄清剂，静置沉淀24～48h，分离葡萄清汁，浊度150～250NTU，期间充氮气或二氧化碳去除氧气；
g）产香发酵：将葡萄清汁回温至10～12℃，接种产香非酿酒酵母，酵母数量不低于106cfu/ml，发酵温度10～12℃，发酵时间24～72h；
h）酒精发酵：将产香发酵的葡萄汁回温至15～25℃，接种酿酒酵母，酵母数量不低于106cfu/ml，发酵温度16～20℃，发酵时间24～72h；
i）分离酒脚：监测酒精发酵时葡萄醪的比重和温度，当比重降至0.993时，降温至5～10℃分离酒脚，容器在入料前充入氮气或二氧化碳排空气；
j）苹果酸-乳酸发酵：向步骤i）得到的葡萄酒中接种酒类酒球菌和乳酸菌20～60mg/L，发酵温度20～25℃，发酵时间24～480h，完成苹果酸-乳酸发酵；
k）贮存：将苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒在温度10～15℃贮存，贮存时间3～6个月，控制游离二氧化硫浓度为20～30ml/L；
l）澄清：将步骤k）得到的葡萄酒采用澄清剂进行澄清，得葡萄基酒，葡萄基酒采用0.45和0.20微米膜设备除菌后，即得有机葡萄酒；
所述葡萄是赤霞珠、美乐、蛇龙珠、品丽珠、西拉、黑比诺、霞多丽、贵人香和雷司令中的一种或任意比例的两种以上；
所述酶是果胶酶、纤维素酶、木瓜酶、褐藻酸酶和淀粉酶中的一种或任意比例的两种以上；
所述澄清剂是明胶、皂土、PVPP和蛋清中的一种或任意比例的两种以上;
所述有机种植所用肥料为有机肥、有机无机肥和生物有机肥中的一种或任意比例两种以上;
所述有机肥、有机无机肥和生物有机肥中加入生态海藻生物刺激素;
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1）、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2）、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3）、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4）、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70%，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21%，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5）、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3）得到的海藻滤液加入到步骤4）得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6）、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
2.如权利要求1所述有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：所述果园所用农药为石硫合剂、波尔多液、矿物油、哈茨木霉菌、喹啉酮悬浮剂、乙醇、苏打、苦楝碱、鱼藤酮、除虫菊乳油和苦参碱中的一种或任意比例两种以上。
3.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
Ⅰ）菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10%的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
Ⅱ）融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤1）得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液 1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0～25.0g;
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
4.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
5.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：步骤3）所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
6.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：步骤4）所述混合培养基至含水量为60%，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12%，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
7.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：步骤5）混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
8.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC 31192和CICC 10168。
9.如权利要求4所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：步骤A）中所述匀质为匀质2次，匀质温度为40℃，匀质时间为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa。
10.如权利要求1所述的有机葡萄酒的制备方法，其特征在于：生态海藻生物刺激素加入到肥料中的方式为：与肥料原料混合造粒的内添加方式和喷涂到肥料颗粒表面的外添加方式。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN109135988A (zh) * | 2018-10-10 | 2019-01-04 | 中粮华夏长城葡萄酒有限公司 | 一种抑制葡萄酒酿造冷浸渍过程中自然发酵的方法 |
| CN112226376A (zh) * | 2020-09-25 | 2021-01-15 | 西北农林科技大学 | 酿造酵母Bei-29的健康营养型果酒的制备方法及检测方法 |
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| CN112226376A (zh) * | 2020-09-25 | 2021-01-15 | 西北农林科技大学 | 酿造酵母Bei-29的健康营养型果酒的制备方法及检测方法 |
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