CN102584359B - 一种复合生物制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种复合生物制剂及其制备方法。所述复合生物制剂由海藻生理活性物质提取液和根际促生菌菌液按照体积比(1～20)∶100混合而成。本发明提供的复合生物制剂含有多种生理活性物质及根际促生菌群，具有抗病增产、活土、无公害等许多优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种含海藻生理活性物质和根际促生菌的复合生物制剂及其制备方法。
背景技术
海藻是生长在海洋中的低等隐花植物，由于其特殊的生长环境，营养成分与陆生植物存在很大的不同，其含有一般陆生植物无法比拟的丰富的矿物元素及维生素等，其中的多种成分例如氨基酸、矿物质、多糖、维生素及细胞分裂素、植物生长素和脱落酸等生理活性物质，可以建立类似鸡尾酒的施肥体系，增大植物茎秆的维管束细胞，帮助植物建立健壮强大的根系，促进植物对土壤养分、水分与气体的吸收利用；能促进植物细胞分裂，延迟细胞衰老，增加植物叶绿素含量，有效提高光合作用效率；能增强作物抗旱、抗寒、抗病虫等多种抗逆功能，提高作物产量，改善作物品质；还能改善土壤结构，提高土壤保水能力等多种功效。从海藻中提取的生理活性物质近年来已被作为重要的液面喷施剂，应用于很多作物，包括很多草类、谷物，花卉及蔬菜品种，均取得抗病增产、增效等较好的效果。
近年来海藻对农作物效果的研究多集中在对作物生长的促进及品质的改善方面，但施用海藻类肥料会对土壤及土壤微生物有一定程度的影响，然而关于这方面的研究甚少。虽然微生物的生物量仅构成土壤有机质的一小部分，但它对农业的可持续发展有贡献，因为微生物的高周转率促进养分的释放，从而促进植物对养分的吸收利用、减少病害发生及抑制病害。微生物的功能多样性很重要，因为土壤中80-90％的反应都是在微生物的参与下进行的。微生物种群结构和功能多样性可很好地描述土壤质量，是土壤健康评价的重要指标之一。
农作物根际微生物种类繁多且活跃，构成特有的根际土壤微生物区系，其中能够促进植物生长，防治病害、增加作物产量的微生物被成为促生菌(plantgrowth-promoting rhizobacteria，简称PGPR)，根际促生菌PGPR对土壤中有害病原微生物与非寄生性根际有害微生物(Deleterious rhizosphere microorganisms，简称DRMO)都有生防作用，对植物吸收利用矿物质营养也有促进作用，并可以产生有益植物生长的代谢产物，从而促进植物的生长发育。
自从1978年Burr等人首先报道马铃薯PGPR以来，国内外已经发现包括荧光假单胞菌、芽孢杆菌、沙雷氏等20多种属的根际微生物具有防病促生的潜能，并有众多的PGPR产品投入使用，在防治作物土传染病害方面发挥愈来愈重要的作用，尤其是能够诱导植物的非专一性抗病性(induced systemic resistance，ISR)的PGPR，则更为理想。
传统的农业生态系统下，化学肥料的大量施用和高强度利用，导致土壤微生物的生物量降低、生物种群和功能多样性衰减、土壤的生物化学过程强度减弱，有机碳转化和养分供应的能力下降，土壤结块现象严重。
发明内容
本发明的目的是提供了一种复合生物制剂。
本发明的另一目的还提供了一种制备该复合生物制剂的方法。
为了实现本发明的目的，本发明提供的一种复合生物制剂，其由海藻生理活性物质提取液和根际促生菌菌液按照体积比(1～20)∶100混合而成。
优选地，本发明的复合生物制剂由海藻生理活性物质提取液和根际促生菌菌液按照体积比优选为(8～12)∶100。
所述海藻生理活性物质包括细胞分裂素、植物生长素和脱落酸等。
所述根际促生菌包括固氮菌、有机磷细菌、无机磷细菌和解钾菌，菌液中含菌数不低于108个/mL。原始菌种可以市售获得。其中固氮菌优选阴沟肠杆菌，有机磷细菌优选地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌，无机磷细菌优选铜绿假单胞杆菌，解钾菌优选胶质芽孢杆菌。
根际促生菌和海藻生理活性物质两者能起到互相促进的作用，海藻提取物对PGPR的生长有不同程度的影响，尤其是对固氮菌、无机磷细菌和硅酸盐细菌的影响较显著，有明显的促进作用；另外PGPR能产生植物激素、ACC脱氨酶、挥发性物质(volatiles)等，更进一步增加了复合制剂中活性物质的种类和含量。此制剂的有效保存时间可以比单纯的菌肥或海藻肥延长至1年。
所述海藻为海带、巨藻、泡叶藻、海囊藻或浒苔中的一种或几种。
本发明提供的制备上述复合生物制剂的方法，包括如下步骤：
(1)制备海藻生理活性物质提取液；
(2)定植驯化根际促生菌，并进行高密度培养；
(3)将海藻生理活性物质提取液与根际促生菌菌液按比例复配成复合生物制剂。
所述海藻生理活性物质提取液可以市售获得(市售一般是海藻粉，活性成分不太确定)，也可以通过套泡处理方法提取。优选套泡处理方法提取，具体提取步骤如下：
(1)将海藻清洗、压榨，使藻体破碎呈块状藻渣，藻渣直径小于2cm；
(2)将藻渣放入淡水池中进行套泡处理：首先将藻渣放在A池中浸泡60-80min，浸泡后将藻渣捞出放入B池中再浸泡60-80min，同时将A池中的浸泡液放入待处理的容器中，并重新将A池加入海藻重量4-6倍的自来水，经A、B池两次浸泡后将藻渣捞出；第二轮开始时A、B池顺序互换，此时A池中为干净的淡水，B池中为藻渣二次浸泡后的浸泡液，新的同质量藻渣首先放入B池中浸泡60-80min，浸泡后将藻渣捞出放入A池中再浸泡60-80min，同时将B池中的浸泡液放入待处理的容器中，并重新将B池加入海藻重量4-6倍的自来水，经B、A池两次浸泡后将藻渣捞出；A、B两池可往复使用；淡水指常温自来水；所用淡水池为两个以上；
(3)套泡后的藻渣用稀酸溶液水解，水解液离心去掉盐分；稀酸优选为盐酸溶液，其pH值为2.5-5.5，优选pH值为3.0；水解条件优选为50-70℃下水解5-10h；离心条件优选为4000rpm/min，5-8min；
(4)将步骤(2)的浸泡液与步骤(3)的离心液混合，50℃蒸发浓缩至淡黄色稍黏稠状为止，即得到海藻生理活性物质提取液。
提取液中的主要活性成分的含量如下：
玉米素(ZT)：29.38～40.72μg/kg·FW
吲哚乙酸(IAA)：80.42～230.67μg/kg·FW
脱落酸(ABA)：28.45～42.58μg/kg·FW
吲哚丁酸(IBA)：17.55～52.12μg/kg·FW
褐藻酸：18.72～20.98μg/kg·FW。
所述根际促生菌，原始菌种可市售获得，所述定植驯化步骤如下：
(1)选择四种根际促生菌，包括阴沟肠杆菌，枯草芽孢杆菌(或地衣芽孢杆菌)，铜绿假单胞杆菌和胶质芽孢杆菌，混合接种于50-80mL培养液中，每种菌的接种量为106/mL，在已灭菌的培养皿的底部放一张滤纸，将以上处理的50-80mL培养液倒入其中，再放入50-100粒小油菜的种子，上部盖一张湿滤纸，然后在无菌室30±2℃进行培养催芽；3天后揭掉上层滤纸，继续培养。
(2)再培养2-4天后，将幼苗根尖上的混合细菌用培养液洗下来，然后接种于新鲜的种子上进行下一轮的富集循环(操作同第一步)。共进行三轮操作。经过此定植驯化后，以上选择的四种根际促生菌的定植效果可达到107-108个/cm根系，各种菌的定植比例如下：阴沟肠杆菌20％-30％，枯草芽孢杆菌20％-35％，地衣芽孢杆菌30％-45％，铜绿假单胞杆菌15％-30％，胶质芽孢杆菌10％-20％。
(3)将以上定植驯化的四种菌株从幼苗根系上用培养液冲洗下来，并在培养液中进行高密度培养24±4h，温度为37±2℃。培养液中的菌种密度高于109个/mL。
所述种子培养液为土壤浸提液(或取蒸馏水)，每1000mL包括如下成分：K2HPO41.6-2.0g，(NH4)2HPO4 2.0-4.0g，酵母粉2.0-5.0g，MgSO47H2O 0.2-0.5g，MgCl2 0.4-1.0g，NaCl 0.15-0.30g，CaCl2 0.4-0.6g，FeCl3 0.04-0.07g，(NH4)2NO3 2.0-5.0g，K2SiO32.0-4.0g。
本发明的有益效果是：
(1)本发明中采用了高效物理破碎与化学处理工艺相结合的方法提取海藻海藻生理活性物质和营养物质，并采用了二次套泡工艺，最大程度保留了鲜海藻中的各植物促生长剂和多种营养成分。
(2)本发明利用共培养技术的混合增效和互补作用增强了菌剂在生产应用中的增产节肥效果。
(3)本发明中的菌株经过驯化，遗传稳定性高，同时确定了海藻提取液与驯化菌液的最适混合比例，消除了单纯海藻制剂对土壤微生物的影响，同时还起到抑制有害病原菌的作用，起到以菌制菌的目的。
(4)本发明的原料廉价易得，制备工艺简单，生产效率高，成本低，对环境污染少。
(5)本发明广泛适用于全国各地区。
根据提取液中促生菌株的有效活菌数和活性物质的含量，并结合根际促生菌在植物根系的定植效果，确定适宜的海藻提取液和定植驯化菌液的混合比例，制造出复合生物制剂，并确定施用量。其中海藻生理活性中的生物促生剂可提高作物对肥料中及土壤中养分的利用率；其中的多糖成分可螯合重金属离子，增加有效成分的持久性和有效性，还可增加土壤透气和聚结的能力，明显促进土壤团粒结构的形成。而且不同于化学肥料，海藻提取物可被生物降解毒，无污染，对人类、动物和鸟类无危险性。此种制剂对农作物的成熟、产量和质量的提高、水果的保鲜以及抵抗病虫害等方面均产生了明显的积极作用。
总之，本发明提供的复合生物制剂含有多种生理活性物质及根际促生菌群，具有抗病增产、活土、无公害等许多优点。
附图说明
图1是本发明二次套泡的工艺流程；
图2是本发明复合生物制剂有效活菌数含量变化；
图3是本发明复合生物制剂有效活菌数含量变化。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1套泡处理工艺：
(1)将采集的海带冲洗去除杂物，称取200kg，将海带破碎直径2cm以下；
(2)首先将100kg藻渣放在A池中浸泡60min，浸泡后将藻渣捞出放入B池中再浸泡60min，同时将A池中的浸泡液放入待处理的容器中并重新将A池中加入500kg的自来水，经A、B池两次浸泡后将藻渣捞出；第二轮开始时A、B池顺序互换，此时A池中为干净的淡水，B池中为藻渣二次浸泡后的浸泡液，新的100kg藻渣首先放入B池中浸泡60min，浸泡后将藻渣捞出放入A池中再浸泡60min，同时将B池中的浸泡液放入待处理的容器中并重新将B池加入500kg的自来水，经B、A池两次浸泡后将藻渣捞出进行下一步的水解；A、B池往复使用，此为套泡处理。具体步骤如图1所示。
实施例2根际促生菌定植驯化及高密度培养的步骤：
(1)将四种根际促生菌(阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae 10014)，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis 23584)，铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)，胶质芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus))。混合接种于50mL培养液中，每种菌的接种量为106/mL，在已灭菌的培养皿的底部放一张滤纸，将以上处理的50mL培养液倒入其中，再放入50粒小油菜的种子，上部盖一张湿滤纸，然后在无菌室30℃进行培养催芽；3天后揭掉上层滤纸，继续培养。
(2)再培养3天，将幼苗根尖上的混合细菌用培养液洗下来，然后接种于新鲜的种子上进行下一轮的富集循环(操作同步骤(1))。共进行三轮操作。经过此定植驯化后，以上选择的四种根际促生菌的定植效果可达到108个/cm根系，各种菌的定植比例如下：阴沟肠杆菌21％，地衣芽孢杆菌30％，枯草芽孢杆菌21％，铜绿假单胞杆菌18％，胶质芽孢杆菌9％，杂菌1％。
(3)将以上定植驯化的四种菌株从幼苗根系上用培养液冲洗下来，并在培养液中37±2℃的条件下进行高密度培养24h。培养液中的菌种密度为109个/mL。
实施例3复合制剂的制备方法1
(1)套泡处理：
将采集的海带冲洗去除杂物，称取200kg，将海带破碎直径2cm以下；将其中100kg藻渣放在在A池中浸泡60min，浸泡后将藻渣捞出放入B池中再浸泡60min，同时将A池中的浸泡液50℃蒸发浓缩，A池中重新加入500kg的自来水，经A、B池两次浸泡后将藻渣捞出；第二轮开始时A、B池顺序互换，此时A池中为干净的淡水，B池中为藻渣二次浸泡后的浸泡液，剩余的100kg藻渣首先放入B池中浸泡60min，浸泡后将藻渣捞出放入A池中再浸泡60min，同时将B池中的浸泡液50℃蒸发浓缩，合并浓缩液；
(2)水解处理：
将套泡处理后的藻渣在50℃下pH值为2.5的盐酸溶液中水解6h，水解液离心处理，离心条件为4000rpm/min下离心6min；
取离心上清液与套泡液浓缩液合并，在50℃蒸发浓缩至淡黄色稍黏稠状为止，即得到海藻生理活性物质提取液。
经检测，其中的海藻生理活性物质的含量如下：
玉米素(ZT)：39.38μg/kg·FW
吲哚乙酸(IAA)：115.34μg/kg·FW
脱落酸(ABA)：35.64μg/kg·FW
吲哚丁酸(IBA)43.62μg/kg·FW
褐藻酸：19.02μg/kg·FW
(3)定植驯化步骤：
市售获得菌株，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae 10014)，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis23643)，铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)，胶质芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus)，将以上四种菌株混合接种于50mL培养液中，每种菌的接种量为106个/mL，在已灭菌的培养皿的底部放一张滤纸，将以上处理的50mL培养液倒入其中，再放入50粒小油菜的种子，上部盖一张湿滤纸，然后在无菌室30℃进行培养催芽；3天后揭掉上层滤纸，继续培养4天后，将幼苗根尖上的混合细菌用培养液洗下来，然后接种于新鲜的种子上进行下一轮的富集循环(操作同第一步)。共进行三轮操作。经过此定植驯化后，以上选择的四种根际促生菌的定植效果可达到108个/cm根系，各种菌的定植比例如下：阴沟肠杆菌30％，枯草芽孢杆菌42％，铜绿假单胞杆菌18％，胶质芽孢杆菌9％，杂菌1％。将以上定植驯化的四种菌株从幼苗根系上用培养液冲洗下来，并在培养液中37±2℃的条件下进行高密度培养24h。经检测培养液中菌种的密度为109个/mL。
其中培养液为：土壤浸提液1000mL，K2HPO4 1.6g，(NH4)2HPO4 2.0g，酵母粉2.0g，MgSO4 7H2O 0.3g，MgCl2 0.4g，NaCl 0.20g，CaCl2 0.5g，FeCl3 0.05g，(NH4)2NO3 3.0g，K2SiO3 2.0g。
(4)复合生物制剂的准备：
将海带生理活性物质和根际促生菌定植驯化菌液分别按照1∶100、5∶100、8∶100、12∶100和20∶100的比例混合，分别于存放1个月、3个月、6个月、1年的时间检测其中的有效活菌数和活性成分的含量。经检测5种比例下，其活性成分的含量变化不大。有效活菌数的变化为前半年稳定上升，后半年呈下降趋势，但活菌数仍然超过2×108个/mL。最大值出现在12∶100的比例下，其有效活菌数最大值为(6个月时)：5×108个/mL。以此确定海带活性成分和根际促生菌定植驯化菌液的最佳比例为12∶100。具体结果请参见图2。
实施例4复合制剂的制备方法2
(1)套泡处理：
将采集的浒苔冲洗去除杂物，称取200kg，将浒苔破碎直径2cm以下；将其中100kg藻渣放在在A池中浸泡80min(根据其物理特性，浸泡时间适当延长至80min)，浸泡后将藻渣捞出放入B池中再浸泡80min，同时将A池中的浸泡液50℃蒸发浓缩，重新将A池中加入500kg的自来水，经A、B池两次浸泡后将藻渣捞出；第二轮开始时A、B池顺序互换，此时A池中为干净的淡水，B池中为藻渣二次浸泡后的浸泡液，剩余的100kg藻渣首先放入B池中浸泡80min，浸泡后将藻渣捞出放入A池中再浸泡80min，同时将B池中的浸泡液50℃蒸发浓缩，合并浓缩液。
(2)水解处理：
将套泡处理的藻渣放入pH值为3.0的盐酸溶液中60℃下水解7h，将水解液4000rpm/min下离心8min，取上清液与套泡浓缩液合并，在50℃蒸发浓缩至淡黄色稍黏稠状为止，即得到海藻生理活性物质提取液。
经检测，其中的浒苔生理活性物质的含量如下：
玉米素(ZT)：30.21μg/kg·FW
吲哚乙酸(IAA)：159.93μg/kg·FW
脱落酸(ABA)：40.60μg/kg·FW
吲哚丁酸(IBA)51.32μg/kg·FW
褐藻酸：18.41μg/kg·FW
(3)根际促生菌进行定植驯化和高密度培养。市售获得菌株，阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae 10014)，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis 23584)，铜绿假单胞杆菌(Pseudomonasaeruginosa)，胶质芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus)，将以上四种菌株混合接种于60mL培养液中，每种菌的接种量为106个/mL，在已灭菌的培养皿的底部放一张滤纸，将以上处理的60mL培养液倒入其中，再放入50粒小油菜的种子，上部盖一张湿滤纸，然后在无菌室30℃进行培养催芽；3天后揭掉上层滤纸，继续培养3天后，将幼苗根尖上的混合细菌用培养液洗下来，然后接种于新鲜的种子上进行下一轮的富集循环(操作同第一步)。共进行三轮操作。经过此定植驯化后，以上选择的四种根际促生菌的定植效果可达到108个/cm根系，各种菌的定植比例如下：各种菌的比例如下：阴沟肠杆菌20％，地衣芽孢杆菌50％，铜绿假单胞杆菌20％，胶质芽孢杆菌8％，杂菌2％。将以上定植驯化的四种菌株从幼苗根系上用培养液冲洗下来，并在培养液中37±2℃的条件下进行高密度培养24h。经检测培养液中菌种的密度为109个/mL。其中培养液为：土壤浸提液1000mL，K2HPO4 2.0g，(NH4)2HPO4 4.0g，酵母粉3.0g，MgSO47H2O 0.2g，MgCl2 0.6g NaCl 0.30g，CaCl2 0.6g，FeCl3 0.04g，(NH4)2NO3 2.0g，K2SiO3 4.0g。
(4)复合生物制剂的制备：
将浒苔生理活性物质和根际促生菌驯化菌液分别按照1∶100、5∶100、8∶100、12∶100和20∶100的比例混合，保证根际促生菌的总的有效活菌数不得低于2×108个/mL。分别于存放1个月、3个月、6个月、1年的时间检测其中的有效活菌数和活性成分的含量。经检测5中比例下，其活性成分的含量变化不大。有效活菌数的变化趋势同含海带活性成分的复合制剂。最大值出现在8∶100的比例下，其有效活菌数最大值为(6个月时)：4×108个/mL。具体结果请参见图3。
应用实例1
选用12∶100比例的复合制剂进行应用试验。所测地区的土壤，选择烟台市福山区10年树龄的苹果园，土壤为棕壤土，在离树干0.3-0.8米m左右的位置，将制剂稀释1000倍后对作物进行灌根处理，并配合一定的肥料，制剂用量设定：500mL/亩、800mL/亩、1000mL/亩、和1500mL/亩。利用电镜扫描技术检测根际促生菌的定植效果，具体结果如表1所示，以此确定此种制剂的最佳施用量：1000～1500mL/亩较好。
结果还显示，施加此种制剂后，土壤促生菌的生物量显著增大，其活性也显著提高，并且有害病原菌的生物量大大降低，起到了以菌制菌的效果，作物品质明显改善。
表1根际促生菌的定植效果
注：复合生物制剂1500mL/亩与1000mL/亩结果无显著差别
应用实例2
选用12∶100比例的复合制剂进行应用试验。选择烟台莱阳市小白菜蔬菜地，将制剂稀释1000倍后对作物进行灌根处理，并配合一定的肥料，制剂用量设定：500mL/亩、800mL/亩、1000mL/亩、和1500mL/亩。利用电镜扫描技术检测根际促生菌的定植效果，具体结果如表2所示，以此确定此种制剂的最佳施用量：800～1000mL/亩较好。
结果还发现，施加此种制剂后，土壤促生菌的生物量显著增大，其活性也显著提高，土壤结块程度明显降低，并且有害病原菌的生物量大大降低，作物产量明显提高。
表2根际促生菌的定植效果
备注：1500mL/亩与1000mL/亩差别不大，没有显著性差异。
应用实例3
选择地区为烟台市莱阳市7年树龄的梨园，将8∶100的复合制剂稀释1000倍后对梨树进行灌根处理，灌根部位为离树干0.5m处，采用四穴灌根，制剂用量设定：500mL/亩、800mL/亩、1000mL/亩、和1500mL/亩。利用电镜扫描技术检测根际促生菌的定植效果，具体结果如表3所示，以此确定此种制剂的最佳施用量：果树1000～1500mL/亩较好。
结果还显示，施加此种制剂后，土壤促生菌的生物量显著增大，其活性也显著提高，并且有害病原菌的生物量大大降低，起到了以菌制菌的效果，作物品质明显改善。
表3根际促生菌的定植效果
注：复合生物制剂1500mL/亩与1000mL/亩结果无显著差别
虽然，上文已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种复合生物制剂，其由海藻生理活性物质提取液和根际促生菌菌液按照体积比（1～20）：100混合而成；所述海藻生理活性物质提取液中包括如下含量的活性成分：
玉米素29.38～40.72μg/kg·FW
吲哚乙酸80.42～230.67μg/kg·FW
脱落酸28.45～42.58μg/kg·FW
吲哚丁酸17.55～52.12μg/kg·FW
褐藻酸18.72～20.98μg/kg·FW；
所述根际促生菌包括固氮菌、有机磷细菌、无机磷细菌和解钾菌，菌液中含菌数不低于108个/mL；所述海藻生理活性物质包括细胞分裂素、植物生长素和脱落酸；所述海藻为海带、巨藻、泡叶藻、海囊藻或浒苔中的一种或几种。
2.如权利要求1所述的复合生物制剂，其特征在于，所述海藻生理活性物质提取液和根际促生菌菌液体积比为（8～12）：100。
3.如权利要求1所述的复合生物制剂，其特征在于，所述固氮菌为阴沟肠杆菌，所述有机磷细菌为地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌，所述无机磷细菌为铜绿假单胞杆菌，所述解钾菌为胶质芽孢杆菌。
4.如权利要求1或2所述的复合生物制剂，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：
（1）制备海藻生理活性物质提取液；
（2）定植驯化根际促生菌，并进行高密度培养；
（3）将海藻生理活性物质提取液与根际促生菌菌液按比例复配成复合生物制剂。
5.如权利要求4的复合生物制剂，其特征在于，所述海藻生理活性物质的制备方法为套泡处理方法提取，其具体步骤如下：
（1）将海藻清洗、压榨，使藻体破碎呈块状藻渣；
（2）将藻渣放入淡水池中进行套泡处理：首先将藻渣放在A池中浸泡60-80min，浸泡后将藻渣捞出放入B池中再浸泡60-80min，同时将A池中的浸泡液放入待处理的容器中，并重新将A池加入海藻重量4-6倍的自来水，经A、B池两次浸泡后将藻渣捞出；第二轮开始时A、B池顺序互换，此时A池中为干净的淡水，B池中为藻渣二次浸泡后的浸泡液，新的同质量藻渣首先放入B池中浸泡60-80min，浸泡后将藻渣捞出放入A池中再浸泡60-80min，同时将B池中的浸泡液放入待处理的容器中，并重新将B池加入海藻重量4-6倍的自来水，经B、A池两次浸泡后将藻渣捞出；
（3）套泡后的藻渣用稀酸溶液水解，水解液离心去掉盐分；
（4）将步骤（2）的浸泡液与步骤（3）的水解液混合，50℃蒸发浓缩至淡黄色稍黏稠状为止，即得到海藻生理活性物质提取液。
6.如权利要求4的复合生物制剂，其特征在于，所述根际促生菌定植驯化所用的种子培养液每1000mL包括如下成分：土壤浸提液1000mL，K2HPO41.6-2.0g，(NH4)2HPO42.0-4.0g，酵母粉2.0-5.0g，MgSO47H2O0.2-0.5g，MgCl20.4-1.0g，NaCl0.15-0.30g，CaCl20.4-0.6g，FeCl30.04-0.07g，(NH4)2NO32.0-5.0g，K2SiO32.0-4.0g。
7.制备权利要求1-6任意一项所述复合生物制剂的方法，包括如下步骤：
（1）制备海藻生理活性物质提取液；
（2）定植驯化根际促生菌，并进行高密度培养；
（3）将海藻生理活性物质提取液与根际促生菌菌液按比例复配成复合生物制剂。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述海藻生理活性物质的制备方法为套泡处理方法提取，其具体步骤如下：
（1）将海藻清洗、压榨，使藻体破碎呈块状藻渣；
（2）将藻渣放入淡水池中进行套泡处理：首先将藻渣放在A池中浸泡60-80min，浸泡后将藻渣捞出放入B池中再浸泡60-80min，同时将A池中的浸泡液放入待处理的容器中，并重新将A池加入海藻重量4-6倍的自来水，经A、B池两次浸泡后将藻渣捞出；第二轮开始时A、B池顺序互换，此时A池中为干净的淡水，B池中为藻渣二次浸泡后的浸泡液，新的同质量藻渣首先放入B池中浸泡60-80min，浸泡后将藻渣捞出放入A池中再浸泡60-80min，同时将B池中的浸泡液放入待处理的容器中，并重新将B池加入海藻重量4-6倍的自来水，经B、A池两次浸泡后将藻渣捞出；
（3）套泡后的藻渣用稀酸溶液水解，水解液离心去掉盐分；
（4）将步骤（2）的浸泡液与步骤（3）的水解液混合，50℃蒸发浓缩至淡黄色稍黏稠状为止，即得到海藻生理活性物质提取液。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述根际促生菌定植驯化所用的种子培养液每1000mL包括如下成分：土壤浸提液1000mL，K2HPO41.6-2.0g，(NH4)2HPO42.0-4.0g，酵母粉2.0-5.0g，MgSO47H2O0.2-0.5g，MgCl20.4-1.0g，NaCl0.15-0.30g，CaCl20.4-0.6g，FeCl30.04-0.07g，(NH4)2NO32.0-5.0g，K2SiO32.0-4.0g。
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| 海藻植物生长调节剂的检测及促生长作用研究;王泽文;《中国优秀硕士学位论文全文数据库》;20110731;第29-60页 * |
| 王泽文.海藻植物生长调节剂的检测及促生长作用研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库》.2011,第29-60页. |
| 邓振山等.植物根际促生菌作用机理的研究进展.《安徽农业科学》.2011,第39卷(第10期),第5844-5846页. |
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