CN112029678A - 一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用 - Google Patents
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Abstract
一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用，所述复配微生物菌剂为秸秆纤维负载的生物菌剂，该秸秆纤维负载的生物菌剂的制备方法包括向混合菌液中添加秸秆纤维，混合均匀后制成秸秆纤维负载的生物菌剂，秸秆纤维与混合菌液两者之间的质量体积比为1Kg:3‑6 L；所述混合菌液为含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液。本发明的复配生物菌剂、腐植酸和泥炭土，经过合理组合与应用，对土壤和（或）姜种中病原微生物（如青枯雷尔氏菌等）起到物理隔离、抑制或杀灭作用，同时负载大量功能微生物的秸秆纤维和富含营养元素的栽培基质可调节土壤微生态，改良土壤结构提升地力，增强姜的抗病能力，从而达到防治姜瘟病的目的。
Description
技术领域
本发明属于植物保护技术领域，涉及一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用。
背景技术
铜陵白姜是中国国家地理标志产品，为安徽省铜陵市特产，至今已有2000多年栽培历史。铜陵白姜因鲜姜呈乳白色至淡黄色而得名，享有“中华白姜”之美誉，是当地重要的特色农业产业。姜瘟病是铜陵白姜生产中的最大威胁，是一种由青枯雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum，简称青枯菌）侵染造成的细菌性青枯病，因其发病快、死亡率高、缺乏有效防治手段，俗称姜瘟病。据铜陵市农业科学研究所调查，正常栽培条件下，发病面积占播种面积的36.2%，发病田块中有20%田块绝收、40%田块发病率70%以下、40%田块发病率高达70%~80%，平均产量损失500Kg/亩以上。由于防治措施不得力，铜陵白姜姜瘟病危害呈逐年加重的趋势，导致生姜的产量与品质降低，制约了生姜规模化产业化发展。
铜陵白姜姜瘟病防治目前多采取综合防治的途径，以农业措施为主，切断种、土、水、肥四大主要病菌传播源：
精选姜种与姜种消毒：从无病姜地选择肥大、芽好的无菌姜块作种，单收单藏，单阁贮存，贮姜阁用40%福尔马林熏蒸消毒处理。姜种播种之前，要对其进行消毒处理，可用40%福尔马林100倍稀释液浸泡30min，再密封闷种3-6h。或用80%多菌灵700倍稀释液浸泡姜种2-3h。
换茬与轮作：生姜的病原菌能够在土壤中存活2年以上，因而最好在生茬地种植生姜，同时选择农作物轮作的方式种植，有条件的地方，与水稻、山芋、大蒜、油菜等轮作，3~4年后再种植生姜，能有效减少姜瘟病的发生。
浇净水施净肥：不用从病田流过的田沟水浇灌，当发现田间病株后，不可大水漫灌、串灌，以喷灌、浅水沟灌或泼浇为好。施净肥指姜田施用的有机肥必须得到充分腐熟，以堆放沤制高温杀菌再使用，切不可用发病植株沤肥。复合肥使用方面可按照姜田肥料需求量施用纯N、P2O5、K2O等，可采用测土配方施肥技术对姜田进行科学合理地分期分段施肥。
病株处理：当发现病株后要及时彻底、完全干净的挖除，包括邻近的健株也要一并挖除，不可乱扔或堆肥，需带出田外深埋处理，能有效控制病害蔓延，减轻危害。同时，病穴内施5%漂白粉或新鲜生石灰，或72%农用硫酸链霉素3000-4000倍液淋灌。
药物防治：7月初铜陵进入高温高湿多雨季节，姜瘟病爆发几率成倍增加，一旦出现零星发病，除立即处理病株外，亦常全田用药，目前较为理想的药剂包括，50%灭菌威、70%根腐灵、20%速补、50%敌克松、3%克菌康、73%可杀得。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种复配微生物菌剂，所述复配微生物菌剂为秸秆纤维负载的生物菌剂，该秸秆纤维负载的生物菌剂的制备方法包括向混合菌液中添加秸秆纤维，混合均匀后制成秸秆纤维负载的生物菌剂，秸秆纤维与混合菌液两者之间的质量体积比为1Kg:3-6 L；所述混合菌液为含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液。
优选的技术方案为：所述含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液的制备方法包括下列步骤：
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌斜面种子分别接种到种子培养基中，然后在恒温振荡培养箱，于25-37℃条件下，控制转速为180-300rpm，培养8-24h，获得解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；将所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液分别接种至液体发酵培养基中，于25-37℃条件下，控制转速为150-400rpm，通气量为1-2vvm，在发酵罐中培养24-72h，获得解淀粉芽孢杆菌初始菌液、枯草芽孢杆菌初始菌液；
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至1-2，枯草芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至3-5，得到解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液，二者混合后得到含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的发酵液。
优选的技术方案为：所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液均为液体发酵培养基的体积的1-10%。
优选的技术方案为：解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液二者之间的体积比为1:1。
优选的技术方案为：每升所述种子培养基包括5-20g的甘油、5-35g的蛋白胨、0.5-5g的MgSO4、0.5-5g 的K2HPO4；每升所述液体发酵培养基包括5-20g的葡萄糖、2-20g的蛋白胨、1.5-15g的酵母提取物、1.5-15g的NaCl、0.5-5g 的MgSO4、0.5-5g K2HPO4。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种复配微生物菌剂在姜瘟病防治中的应用，在栽培姜时，将富含营养元素栽培基质平铺得到第一层，然后将用混合菌液浸泡后的姜种排布于所述富含营养元素栽培基质之上得到第二层，然后在姜种之上平铺秸秆纤维负载的生物菌剂得到第三层，再在秸秆纤维负载的生物菌剂之上平铺富含营养元素栽培基质得到第四层；所述富含营养元素栽培基质的制备包括将腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥混合均匀后制得富含营养元素栽培基质，腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥之间的质量比为1-2Kg:3-6Kg:10-60g:0.5-1Kg；所述混合菌液采用上述的混合菌液，所述秸秆纤维负载的生物菌剂采用上述的秸秆纤维负载的生物菌剂。
优选的技术方案为：由下至上，第一层的厚度为3-5cm，第三层的厚度为2-4cm，第四层的厚度为3-5cm。
优选的技术方案为：混合菌液浸泡姜种的时间为0.5-1h，浸泡温度为30-40℃。
优选的技术方案为：所述复合肥为氮磷钾复混肥料17-17-17。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
1、本发明的富含营养元素可以增强的姜的抵抗力，混合菌液可以抑制青枯雷尔氏菌。从而达到防治姜瘟病的目的。
2、本发明的复配生物菌剂、腐植酸和泥炭土，经过合理组合与应用，对土壤和（或）姜种中病原微生物（如青枯雷尔氏菌等）起到物理隔离、抑制或杀灭作用，同时负载大量功能微生物的秸秆纤维和富含营养元素的栽培基质可调节土壤微生态，改良土壤结构提升地力，增强姜的抗病能力，从而达到防治姜瘟病的目的。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
实施例1：一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用
一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用，包括秸秆纤维负载的生物菌剂制备和使用、富含营养元素栽培基质的制备和使用。
所述秸秆纤维负载的生物菌剂制备包括：向混合菌液中添加秸秆纤维，混合均匀后于40℃条件下搅拌4h，再静置1.5 h后制成秸秆纤维负载生物菌剂；所述秸秆纤维与菌液质量体积比为1Kg:4.5 L。
所述营养元素的栽培基质制备包括：将腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥混合均匀后，于38℃条件下搅拌2.5 h，制得富含营养元素的栽培基质；所述腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥质量比为1.5Kg:4.5 Kg:40g:0.8Kg。
所述秸秆纤维负载的生物菌剂和富含营养元素的栽培基质使用包括：分四层使用，最底层为富含营养元素的栽培基质，第二层为秸秆纤维负载的生物菌剂，第三层排布菌液浸泡后的姜种，第四层为富含营养元素的栽培基质。
所述菌液为含有解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的发酵液。
所述菌液的制备方法包括下列步骤：
S1、将解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌斜面种子分别接种到种子培养基中，然后在恒温振荡培养箱，于30℃条件下，控制转速为200rpm，培养16h，获得解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；将所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液分别接种至液体发酵培养基中，于30℃条件下，控制转速为2500rpm，通气量为1.5vvm，在发酵罐中培养48h，获得解淀粉芽孢杆菌初始菌液、枯草芽孢杆菌初始菌液；
S2、将解淀粉芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至1.5，枯草芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至4，得到解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液，二者按照体积比1:1混合后得到混合菌液剂。
复合肥为氮磷钾复混肥料17-17-17，有机肥为餐厨垃圾发酵。
最底层富含营养元素的栽培基质厚度为4 cm，第三层秸秆纤维负载的生物菌剂厚度为3cm，混合菌液浸泡姜种时间为0.8h，浸泡温度为35℃，第四层富含营养元素的栽培基质厚度为4cm。
所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液均为液体发酵培养基的体积的5%。
每升所述种子培养基包括10g甘油、20g蛋白胨、2.5g MgSO4、3g K2HPO4；每升所述液体发酵培养基包括10g葡萄糖、10g蛋白胨、8g酵母提取物、10gNaCl、3g MgSO4、2.5gK2HPO4。
实施例2：一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用
一种复配微生物菌剂，所述复配微生物菌剂为秸秆纤维负载的生物菌剂，该秸秆纤维负载的生物菌剂的制备方法包括向混合菌液中添加秸秆纤维，混合均匀后制成秸秆纤维负载的生物菌剂，秸秆纤维与混合菌液两者之间的质量体积比为1Kg:3L；所述混合菌液为含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液。
优选的实施方式为：所述含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液的制备方法包括下列步骤：
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌斜面种子分别接种到种子培养基中，然后在恒温振荡培养箱，于25℃条件下，控制转速为180rpm，培养8h，获得解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；将所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液分别接种至液体发酵培养基中，于25℃条件下，控制转速为150rpm，通气量为1vvm，在发酵罐中培养24h，获得解淀粉芽孢杆菌初始菌液、枯草芽孢杆菌初始菌液；
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至1，枯草芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至3，得到解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液，二者混合后得到含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的发酵液。
优选的实施方式为：所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液均为液体发酵培养基的体积的1%。
优选的实施方式为：解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液二者之间的体积比为1:1。
优选的实施方式为：每升所述种子培养基包括5g的甘油、5g的蛋白胨、0.5g的MgSO4、0.5g 的K2HPO4；每升所述液体发酵培养基包括5g的葡萄糖、2g的蛋白胨、1.5g的酵母提取物、1.5g的NaCl、0.5g 的MgSO4、0.5g K2HPO4。
一种复配微生物菌剂在姜瘟病防治中的应用，在栽培姜时，将富含营养元素栽培基质平铺得到第一层，然后将用混合菌液浸泡后的姜种排布于所述富含营养元素栽培基质之上得到第二层，然后在姜种之上平铺秸秆纤维负载的生物菌剂得到第三层，再在秸秆纤维负载的生物菌剂之上平铺富含营养元素栽培基质得到第四层；所述富含营养元素栽培基质的制备包括将腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥混合均匀后制得富含营养元素栽培基质，腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥之间的质量比为1Kg:3Kg:20g:0.5Kg；所述混合菌液采用上述的混合菌液，所述秸秆纤维负载的生物菌剂采用上述的秸秆纤维负载的生物菌剂。
优选的实施方式为：由下至上，第一层的厚度为3cm，第三层的厚度为2cm，第四层的厚度为3cm。
优选的实施方式为：混合菌液浸泡姜种的时间为0.5h，浸泡温度为30℃。
优选的实施方式为：所述复合肥为市售的氮磷钾复混肥料。有机肥为市售的有机肥，经过灭菌后使用。
实施例3：一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用
一种复配微生物菌剂，所述复配微生物菌剂为秸秆纤维负载的生物菌剂，该秸秆纤维负载的生物菌剂的制备方法包括向混合菌液中添加秸秆纤维，混合均匀后制成秸秆纤维负载的生物菌剂，秸秆纤维与混合菌液两者之间的质量体积比为1Kg:6 L；所述混合菌液为含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液。
优选的实施方式为：所述含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液的制备方法包括下列步骤：
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌斜面种子分别接种到种子培养基中，然后在恒温振荡培养箱，于37℃条件下，控制转速为300rpm，培养24h，获得解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；将所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液分别接种至液体发酵培养基中，于37℃条件下，控制转速为400rpm，通气量为2vvm，在发酵罐中培养72h，获得解淀粉芽孢杆菌初始菌液、枯草芽孢杆菌初始菌液；
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至2，枯草芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至5，得到解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液，二者混合后得到含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的发酵液。
优选的实施方式为：所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液均为液体发酵培养基的体积的10%。
优选的实施方式为：解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液二者之间的体积比为1:1。
优选的实施方式为：每升所述种子培养基包括20g的甘油、35g的蛋白胨、5g的MgSO4、5g 的K2HPO4；每升所述液体发酵培养基包括20g的葡萄糖、20g的蛋白胨、15g的酵母提取物、15g的NaCl、5g 的MgSO4、5Kg K2HPO4。
一种复配微生物菌剂在姜瘟病防治中的应用，在栽培姜时，将富含营养元素栽培基质平铺得到第一层，然后将用混合菌液浸泡后的姜种排布于所述富含营养元素栽培基质之上得到第二层，然后在姜种之上平铺秸秆纤维负载的生物菌剂得到第三层，再在秸秆纤维负载的生物菌剂之上平铺富含营养元素栽培基质得到第四层；所述富含营养元素栽培基质的制备包括将腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥混合均匀后制得富含营养元素栽培基质，腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥之间的质量比为2Kg:6Kg:50g:1Kg；所述混合菌液采用上述的混合菌液，所述秸秆纤维负载的生物菌剂采用上述的秸秆纤维负载的生物菌剂。
优选的实施方式为：由下至上，第一层的厚度为5cm，第三层的厚度为4cm，第四层的厚度为5cm。
优选的实施方式为：混合菌液浸泡姜种的时间为1h，浸泡温度为40℃。
优选的实施方式为：所述复合肥为氮磷钾复混肥料17-17-17。
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
Claims (9)
1.一种复配微生物菌剂，其特征在于：所述复配微生物菌剂为秸秆纤维负载的生物菌剂，该秸秆纤维负载的生物菌剂的制备方法包括向混合菌液中添加秸秆纤维，混合均匀后制成秸秆纤维负载的生物菌剂，秸秆纤维与混合菌液两者之间的质量体积比为1Kg:3-6 L；所述混合菌液为含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液。
2.根据权利要求1所述的复配微生物菌剂，其特征在于：所述含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液的制备方法包括下列步骤：
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌斜面种子分别接种到种子培养基中，然后在恒温振荡培养箱，于25-37℃条件下，控制转速为180-300rpm，培养8-24h，获得解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；将所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液分别接种至液体发酵培养基中，于25-37℃条件下，控制转速为150-400rpm，通气量为1-2vvm，在发酵罐中培养24-72h，获得解淀粉芽孢杆菌初始菌液、枯草芽孢杆菌初始菌液；
步骤2：将解淀粉芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至1-2，枯草芽孢杆菌初始菌液OD600值调节至3-5，得到解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液，二者混合后得到含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的发酵液。
3.根据权利要求2所述的复配微生物菌剂，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液均为液体发酵培养基的体积的1-10%。
4.根据权利要求2所述的复配微生物菌剂，其特征在于：解淀粉芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液二者之间的体积比为1:1。
5.根据权利要求3所述的复配微生物菌剂，其特征在于：每升所述种子培养基包括5-20g的甘油、5-35g的蛋白胨、0.5-5g的MgSO4、0.5-5g 的K2HPO4；每升所述液体发酵培养基包括5-20g的葡萄糖、2-20g的蛋白胨、1.5-15g的酵母提取物、1.5-15g的NaCl、0.5-5g 的MgSO4、0.5-5g K2HPO4。
6.一种复配微生物菌剂在姜瘟病防治中的应用，其特征在于：在栽培姜时，将富含营养元素栽培基质平铺得到第一层，然后将用混合菌液浸泡后的姜种排布于所述富含营养元素栽培基质之上得到第二层，然后在姜种之上平铺秸秆纤维负载的生物菌剂得到第三层，再在秸秆纤维负载的生物菌剂之上平铺富含营养元素栽培基质得到第四层；所述富含营养元素栽培基质的制备包括将腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥混合均匀后制得富含营养元素栽培基质，腐殖酸、泥炭土、复合肥和有机肥之间的质量比为1-2Kg:3-6Kg:10-60g:0.5-1Kg；所述混合菌液采用权利要求1-5任一所述的混合菌液，所述秸秆纤维负载的生物菌剂采用权利要求1-5任一所述的秸秆纤维负载的生物菌剂。
7.根据权利要求6所述复配微生物菌剂在姜瘟病防治中的应用，其特征在于：由下至上，第一层的厚度为3-5cm，第三层的厚度为2-4cm，第四层的厚度为3-5cm。
8.根据权利要求6所述复配微生物菌剂在姜瘟病防治中的应用，其特征在于：混合菌液浸泡姜种的时间为0.5-1h，浸泡温度为30-40℃。
9.根据权利要求6所述的复配微生物菌剂，其特征在于：所述复合肥为氮磷钾复混肥料17-17-17。
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