CN101121919A - 一种长期保藏微生物菌种的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物菌种保藏方法，主要涉及酵母菌、芽胞杆菌、曲霉菌种的长期保藏方法。培养基的重量配比：玉米面40～70％，麸皮5～30％，豆粕粉15～35％，料水配比1∶0.8～1.2；培养基分装灭菌：按上述配量培养基物料与水混合，分装入试管，高压蒸汽灭菌1.2atm，30～45min，冷却备用；接种培养：于无菌条件下接入1～2环菌种(0.1～0.2ml)，于培养箱中26～30℃培养2～3天；干燥保藏：在40～45℃条件下干燥2～3天，使水份控制在≤6％，包装置于冰箱中于1～4℃或－16℃～－20℃保藏期达到3～5年。此方法设备投入少，在普通的冰箱就能实现菌种长期保藏，实用性强，具有操作简单、稳定可靠、成本低廉、保藏期长的特点。

Description

一种长期保藏微生物菌种的方法
技术领域
本发明涉及微生物菌种保藏方法，主要涉及酵母菌、芽胞杆菌、曲霉菌种的长期保藏方法。
背景技术
目前微生物菌种通常采用斜面定期移植保藏法、液体石蜡保藏法、冷冻干燥、液氮超低温保藏、-80℃低温冷冻保藏。低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代谢活动，抑制其繁殖速度，达到减少菌株突变，延长菌种保藏时间的目的。
斜面定期移植保藏法：通常是采用在带棉塞的玻璃试管内，用少于1/3管的无菌的固体培养基摆成斜面，中央划线的接种方法，在28-30℃培养2-3天后，置于冰箱内4℃保藏，这种方法是用于微生物菌种的主要保藏方法，优点是操作简单，缺点是斜面培养基与空气接触面大，脱水较快，一般在半年内就会干缩；棉塞容易吸水变潮，容易导致菌种染菌；保藏温度较高，酵母菌种仍有一定的代谢活动，可进行繁殖，为了防止菌种死亡，通常3-4个月就应该传代转管；加大了菌种保藏的工作量；由于菌种传代频繁，菌种变异频率较高，需要对菌种定期的分离复壮，给菌种的保藏带来较高的技术要求和较大的工作量。
液体石蜡保藏法：是定期移植保藏法的辅助方法。在液体石蜡覆盖下，菌种的生物代谢受到抑制，细胞老化被推迟。此方法可阻止氧气进入，使好气菌不能继续生长，也可防止因培养基的水分蒸发而引起的菌体死亡，达到延长菌种保藏时间的目的。该方法优点是菌种保藏时间长，一般2-10年不等。缺点是只适应于不能分解液体石蜡的微生物菌种的保藏；菌种保藏时必须用试管架竖直摆放，保藏占用的空间较大，保藏场所应保持干燥，防止棉塞污染；整个操作比较繁琐。
冷冻干燥法是将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。
氮超低温保藏是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。
-80℃低温冷冻保藏是将菌种保藏在-80℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。
上述三种方法都能较好地保藏微生物菌种，保藏周期长，变异频率低，缺点是操作复杂，技术含量高，设备投入高，运行成本高，只适合专业保藏机构使用，不适合生产企业使用。
发明内容
本发明目的是针对上述保藏方法所存在的缺陷，提供一种适用于生产企业，保藏时间长又操作简单实用、菌种质量稳定可靠，保藏成本低的微生物菌种保藏方法。
本发明所述微生物菌种保藏方法如下：
1、培养基的制备
培养基的重量配比：玉米面40-70％，麸皮5-30％，豆粕粉15-35％，料水配比为：1∶0.8-1.2。
2、培养基分装与灭菌
按上述配量将培养基物料与水混合，分装于试管中，通常试管中装量为1/3～2/3，塞好棉塞，高压灭菌，1.0-1.2atm，30-45min，取出趁热摇散，冷却备用；
3、接种与培养
在无菌条件下接入1-2环菌种(0.1-0.2ml)，用接种针搅匀，松散水平放入培养箱中26-30℃培养2-3天。
4、干燥与保藏
在40-45℃条件下干燥2-3天，使物料水份控制在≤6％，用牛皮纸包好，放至冰箱中1～4℃冷藏或-16～-20℃冷冻保存，保藏期达到3～5年。
5、菌种复苏方法
将所保藏试管中的物料颗粒，在无菌条件下转入到新鲜斜面培养基上数粒，放到培养箱中进行适温培养即可。
本发明优选的培养基重量配比为玉米面50～60％，麸皮15～20％，豆粕粉25～30％，料水配比1∶0.8～1.0。
本发明首先选择适当的培养基及培养条件让微生物在培养物中生长，然后在较温和的条件下将菌种脱水干燥，由于菌种细胞中含水量很低，可放入冰箱中冷藏或冷冻保藏。此方法是将斜面试管保藏、冷冻干燥保藏、和低温保藏结合起来的一种保藏方法。本法保藏微生物菌种，4℃冷藏可保藏3-4年，-18℃冷冻可保藏4-5年。此方法设备投入少，在普通的冰箱就能实现菌种长期保藏，实用性强，具有操作简单、稳定可靠、成本低廉、保藏期长的特点。
具体实施方式
实施例1
培养基的配制：玉米面60％，麸皮15％，豆粕粉25％，料水比1∶0.85。
将原料按上述比例混合，加入定量的水，分装于试管中，通常试管中装量为1/3，塞好棉塞，高压灭菌，1.2atm，30～45min，取出趁热摇散，冷却备用。
在无菌条件下接入1-2环菌种(0.1-0.2ml)，所保藏的菌种如下：
  编号   学名   中文名称   用途
  E3-1   Saccharomyces cerevisiae   酿酒酵母   白酒酿造
  E5-2   Saccharomyces cerevisiae   酿酒酵母   果酒酿造
  E4-1   Saccharomyces cerevisiae   酿酒酵母   啤酒酿造
  20238   Saccharomyces rouxii Boutr   鲁氏酵母   酱油酿造
  20124   Handenula anomala   异常汉逊酵母   白酒生香
  R15   Candida utilis   产朊假丝酵母   饲料酵母
  S-02   Endomyces decipiens   近似内孢霉   饲料酵母
  E2-3   Geotrichum candidum   白地霉   饲料酵母
  Ys-01   Bacillus licheniformis   地衣芽胞杆菌   饲料
  Ys-02   Bacillus cereus   腊样芽胞杆菌   饲料
  As 3.951   Aspergillus oryzae   米曲酶   酱油酿造
  As 3.350   Aspergillus awamori   泡盛曲酶   酱油酿造
用接种针搅匀，松散水平放入培养箱中28-30℃培养2-3天。在40-45℃条件下干燥2-3天，检测试管中菌种的细胞数。用牛皮纸包好，放至冰箱中4℃冷藏保存和-18℃冷冻保存。
菌种保藏初始细胞数测定结果
编号 学名 中文名称   细胞数(亿/克)
  E3-1   Saccharomyces cerevisiae   酿酒酵母   240
  E5-2   Saccharomyces cerevisiae   酿酒酵母   45
  E4-1   Saccharomyces cerevisiae   酿酒酵母   22
  20238   Saccharomyces rouxii Boutr   鲁氏酵母   36
  20124   Handenula anomala   异常汉逊酵母   47
  R15   Candida utilis   产朊假丝酵母   68
  S-02   Endomyces decipiens   近似内孢霉   88
  E2-3   Geotrichum candidum   白地霉   18
  Ys-01   Bacillus licheniformis   地衣芽胞杆   45
  Ys-02   Bacillus cereus   腊样芽胞杆菌   42
  As 3.951   Aspergillus oryzae   米曲酶   130
  As 3.350   Aspergillus awamori   泡盛曲酶   110
4℃冷藏保存结果
4℃条件下不同年限菌种保藏存活率(％)单位：年
  编号   中文名称   1年   2年   3年   4年
  E3-1   酿酒酵母   87   80   15   0
  E5-2   酿酒酵母   85   83   18   0
  E4-1   酿酒酵母   92   88   21   0
  20238   鲁氏酵母   85   79   20   0
  20124   异常汉逊酵母   89   85   24   0
  R15   产朊假丝酵母   88   84   31   0
  S-02   近似内孢霉   87   79   22   0
  E2-3   白地霉   82   68   0
  Ys-01   地衣芽胞杆菌   95   88   72   54
  Ys-02   腊样芽胞杆菌   95   90   81   62
  As 3.951   米曲酶   88   80   51   32
  As 3.350   泡盛曲酶   87   76   43   26
-18℃冷冻保藏结果
-18℃条件下不同年限菌种保藏存活率(％)单位：年
  编号   中文名称   1年   2年   3年   4年   5年
  E3-1   酿酒酵母   92   88   79   67   53
  E5-2   酿酒酵母   95   84   72   63   49
  E4-1   酿酒酵母   95   85   75   64   55
  20238   鲁氏酵母   94   83   72   61   48
  20124   异常汉逊酵母   92   81   68   57   46
  R15   产朊假丝酵母   95   87   73   61   42
  S-02   近似内孢霉   91   78   66   48   39
  E2-3   白地霉   91   75   52   36   0
  Ys-01   地衣芽胞杆菌   95   95   87   76   66
  Ys-02   腊样芽胞杆菌   95   95   88   79   69
  As3.951   米曲酶   92   82   76   65   56
  As3.350   泡盛曲酶   94   86   74   63   52

Claims (3)

1.一种长期保藏微生物菌种的方法，其特征在于该保藏方法如下：
a)培养基的重量配比：玉米面40～70％，麸皮5～30％，豆粕粉15～35％，料水配比1∶0.8～1.2；
b)培养基分装灭菌：按上述配量培养基物料与水混合，分装入试管，高压蒸汽灭菌1.2atm，30～45min，冷却备用；
c)接种培养：于无菌条件下接入1～2环菌种(0.1～0.2ml)，于培养箱中26～30℃培养2～3天；
d)干燥保藏：在40～45℃条件下干燥2～3天，使水份控制在≤6％，包装置于冰箱中于1～4℃或-16℃～-20℃保藏期达到3～5年。
2.按照权利要求1所述的长期保藏微生物菌种的方法，其特征是用该方法保藏的菌种有酵母菌、芽胞杆菌、曲霉菌种。
3.按照树种要求1所述的长期保藏微生物菌种的方法，其特征是培养基的重量配比选择为玉米面50～60％，麸皮15～20％，豆粕粉25～30％，料水配比1∶0.8～1.0。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103374530A (zh) * 2012-04-23 2013-10-30 安琪酵母股份有限公司 一种半干酵母及其制备方法
CN103789210A (zh) * 2014-02-17 2014-05-14 中国农业科学院油料作物研究所 一种产孢真菌菌种长期保藏的方法
CN104450521A (zh) * 2014-12-22 2015-03-25 东莞市生物技术研究所 一种长期保存蛹虫草菌种的方法
CN105886402A (zh) * 2016-06-23 2016-08-24 江西农业大学 一种长期保存酿造醪糟用米根霉菌种的简易方法
CN108739053A (zh) * 2018-06-22 2018-11-06 辽东学院 一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法
CN113621544A (zh) * 2021-09-13 2021-11-09 辽宁省微生物科学研究院 一种乳酸菌的保藏方法

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103374530A (zh) * 2012-04-23 2013-10-30 安琪酵母股份有限公司 一种半干酵母及其制备方法
CN103789210A (zh) * 2014-02-17 2014-05-14 中国农业科学院油料作物研究所 一种产孢真菌菌种长期保藏的方法
CN104450521A (zh) * 2014-12-22 2015-03-25 东莞市生物技术研究所 一种长期保存蛹虫草菌种的方法
CN104450521B (zh) * 2014-12-22 2017-07-07 东莞市生物技术研究所 一种长期保存蛹虫草菌种的方法
CN105886402A (zh) * 2016-06-23 2016-08-24 江西农业大学 一种长期保存酿造醪糟用米根霉菌种的简易方法
CN105886402B (zh) * 2016-06-23 2019-08-16 江西农业大学 一种长期保存酿造醪糟用米根霉菌种的简易方法
CN108739053A (zh) * 2018-06-22 2018-11-06 辽东学院 一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法
CN113621544A (zh) * 2021-09-13 2021-11-09 辽宁省微生物科学研究院 一种乳酸菌的保藏方法
CN113621544B (zh) * 2021-09-13 2023-01-24 辽宁省微生物科学研究院 一种乳酸菌的保藏方法

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