CN112912106A - 登革热疫苗单位剂量及其施用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及登革热疫苗组合物的单位剂量以及用于预防登革热病的方法和用途，以及用于在受试者或受试者群体中刺激对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答的方法。所述登革热疫苗组合物的单位剂量包括不同浓度的每种登革热血清型，诸如TDV‑1、TDV‑2、TDV‑3和TDV‑4的构建体，以改善对登革热感染的防护。
Description
技术领域
本发明涉及接种预防登革热病的安全有效方法以及相应的安全有效的登革热疫苗。具体而言，本发明涉及不管血清状态如何，接种预防登革热病的安全有效方法以及相应的安全有效的登革热疫苗。本发明还涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，以及向广泛年龄组的受试者或受试者群体施用登革热疫苗组合物的单位剂量的方法。本发明还涉及特定的伴随施用方案，其中单位剂量/疫苗组合物伴随以下一种或多种施用：黄热病(YF)疫苗，甲型肝炎疫苗，人乳头瘤病毒(HPV)疫苗、麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)联合疫苗，破伤风、白喉和百日咳(带喘息声的咳嗽)(Tdap)联合疫苗，和/或白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(DTap/IPV/Hib)联合疫苗，或上面提到的伴随施用方案的任何组合。根据本发明的单位剂量提供针对登革热病毒的所有血清型(即DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4)的免疫应答。
背景技术
用于防护病毒感染的疫苗已有效地用于减少人类疾病的发病率。病毒疫苗最成功的技术之一是用弱毒或减毒病毒株(“减毒活病毒”)使动物或人免疫。由于免疫后的复制有限，减毒病毒株不会引起疾病。但是，有限的病毒复制足以表达完整的病毒抗原库，并且可以对病毒产生有效且持久的免疫应答。因此，在随后暴露于病原性病毒株时，免疫个体受到保护免受疾病侵害。这些减毒活疫苗是公共卫生中使用的最成功的疫苗之一。
登革热病是由登革热病毒感染引起的蚊媒疾病。登革热病毒感染可导致虚弱和痛苦的症状，包括突然的高烧、头痛、关节和肌肉疼痛、恶心、呕吐和皮疹。迄今为止，已经鉴定出登革热病毒的四种血清型：登革热-1(DENV-1)、登革热2(DENV-2)、登革热3(DENV-3)和登革热4(DENV-4)。登革热病毒血清型1-4也可引起登革出血热(DHF)和登革休克综合征(DSS)。在最严重的情况下，DHF和DSS可危及生命。登革热病毒每年引起5千万至1亿例致衰登革热，500,000例DHF/DSS，以及20,000多例死亡，其中很大一部分是儿童。所有四种登革热病毒血清型在世界热带地区都地方性流行，对那里的人构成了最严重的蚊媒病毒威胁。登革热病毒主要通过埃及伊蚊(Aedes aegypti)传播给人类，但是也可以通过白纹伊蚊(Aedes albopictus)传播。感染一种登革热病毒血清型可导致终生免受该种血清型再次感染的防护，但不能阻止其它三种登革热病毒血清型之一的继发感染。事实上，早先感染一种登革热病毒血清型可在不同血清型继发感染后而导致严重疾病(DHF/DSS)的风险增加。
迄今为止，根据在亚洲和拉丁美洲针对儿童中病毒学上确认的登革热(VCD)为56–61％的整体疫苗功效(VE)的临床证明，只有一种疫苗，即基于黄热病骨架的四价登革热疫苗CYD-TDV(
Sanofi Pasteur,Lyon,France)已在几个国家获得了许可(Capeding MR等人，Clinical efficacy and safety of a novel tetravalent denguevaccine in healthy children in Asia:a phase 3,randomised,observer-masked,placebo-controlled trial.Lancet 2014,384:1358-65；Villar LA等人，Safety andimmunogenicity of a recombinant tetravalent dengue vaccine in 9-16year olds:arandomized,controlled,phase II trial in Latin America.Pediatr Infect Dis J2013,32:1102-9)。然而，临床试验已经证实，
可以提高而不是降低早先尚未感染登革热病毒的个体(血清阴性群体)中由于登革热感染而引起严重疾病的风险。因此，仅建议
用于早先已经感染过至少一种登革热病毒血清型的个体(血清阳性群体)。更具体地说，根据该产品的欧洲医学机构欧洲公共评估报告(EPAR)，
仅适用于之前已经感染过登革热病毒且居住在该感染地方性流行的地区的9至45岁的人。流行地区是全年定期发生该疾病的地区。另请参见Sridhar S等人，Effect of DengueSerostatus on Dengue Vaccine Safety and Efficacy.N Engl JMed 2018,379:327-40；和世界卫生组织《登革热疫苗：世卫组织立场文件-2018年9月》Wkly.Epidemiol.Rec.2018,93:457-476。S.R.Hadinegoro等在New England Journal of Medicine，第373卷，第1195页，在“Efficacy and Long-Term Safety of a Dengue Vaccine in Regions of EndemicDisease”中报告9岁以下人群中住院治疗病毒学上确认的登革热病的汇总风险为1.58，表明疫苗接种组关于严重登革热的风险增加。因此，这样在未感染登革热和血清阳性的个体，包括生活在流行地区的未登革热的那些群体，可能尚未对登革热发展任何血清阳性应答或已经暴露于登革热的年轻个体，以及来自非流行区的旅行者和个体中，使得对具有良好安全特性的有效疫苗的大量需求未得到满足。还需要控制暴发或旅行疫苗接种，从而仅一个剂量后降低登革热的风险。
目前唯一批准的登革热疫苗即
的另一个缺点是，只能将其给予检测结果呈阳性，表明早先感染过登革热病毒(EPAR)的人，即已知登革热血清状态的个体。因此，登革热血清状态未知的个体无法进行
疫苗接种。
因此，需要一种登革热疫苗和相应的接种方法，该登革热疫苗在血清阴性和血清阳性群体中刺激对所有登革热血清型的免疫应答，优选对所有血清型的平衡免疫应答，并防护任何严重程度的登革热病(包括DSS、DHF)，其对于较大年龄组来说是安全的，尤其对于9岁及更小的受试者来说也是安全的。开发一种能够保护包括血清阴性和血清阳性群体在内的所有群体，尤其是处于流行环境中并且是为了旅行的儿童以及年轻成人和老年受试者的安全有效的疫苗，是预防和控制这种全球性疾病的重要方法。
因此，医疗上需要无论血清状态如何，在较大年龄组中既安全又有效的登革热疫苗和相应的接种方法。需要避免费用高且费时的血清状态测试或血清阳性率考虑的登革热疫苗和相应的接种方法。需要可以在暴发情形中使用的登革热疫苗和相应的接种方法。此外，医疗上还需要可以施用给登革热血清状态未知的个体、9岁以下的儿童和血清阳性的个体的既安全又有效的登革热疫苗。
还需要以比目前间隔6个月共施用3个剂量的
给药方案更少的剂量施用的疫苗，诸如可仅施用两个剂量或一个剂量就有效的疫苗。
上述目的与WHO在登革热疫苗：WHO立场文件-2018年9月(Wkly.Epidemiol.Rec.2018,93:457-476)中提供的研究重点相吻合。
黄热病(YF)是由受感染的埃及伊蚊物种的蚊子传播的急性病毒性出血病。黄热病的症状需要3至6天才会发展，包括发烧、头痛、黄疸、肌肉痛、恶心、呕吐和疲劳。一小部分感染该病毒的患者(约15％的人)会发展出可导致出血、休克、器官衰竭以及有时死亡的严重疾病。该病毒在非洲和中南美洲的热带地区地方性流行。
登革热和黄热病(YF)病毒属于黄病毒科的同一科，并且共有抗原决定簇，这可产生交叉反应性抗体。它们都通过蚊子(主要是埃及伊蚊)在人之间传播，并且都在非洲和拉丁美洲的热带地区地方性流行，具有很大的公共卫生影响。
如今，存在一种黄热病疫苗(YF-17D疫苗)，该疫苗基于减毒活病毒株，并且是唯一可商购的以单次皮下注射方式施用的YF疫苗。YF-17D疫苗非常有效(接近100％)，除了非常罕见的与疫苗相关的嗜神经性和嗜内脏型疾病的病例外，通常是安全的。根据《国际卫生条例》，前往某些国家的旅行者也需要接种YF疫苗，并且WHO也建议所有前往有持续或周期性YF病毒传播迹象的地区旅行的受试者接种YF疫苗。YF-17D疫苗可以产品名称
从Sanofi获得。
建议居住在或前往流行地区旅行的9月龄以上的人，前往旅行或经需要国家的人使用黄热病疫苗。皮下施用单个剂量的黄热病疫苗通常足以赋予针对黄热病的持续的终身保护性免疫力。然而，对于仍然处于风险中的人，建议每10年一次加强剂量。
因此，需要同时预防登革热病和黄热病的安全有效的方法。
甲型肝炎是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的肝脏疾病。该病毒主要在未感染(和未接种疫苗)的人摄入被受感染者的粪便污染的食物或水时传播。该疾病与不安全的水或食物、不充足的卫生设施和个人卫生不良密切相关。该病毒也可以通过与感染者的密切身体接触传播。与乙型肝炎和丙型肝炎不同，甲型肝炎感染不会引起慢性肝脏疾病并且很少致命，但它会引起虚弱症状和暴发性肝炎(急性肝衰竭)，暴发性肝炎通常是致命的。甲型肝炎偶发，在世界范围内流行，具有周期性复发的趋势。
甲型肝炎病毒是食源性感染的最常见原因之一。与受污染的食物或水有关的流行病可以突然暴发，诸如1988年上海的流行病，影响了约300,000人。甲型肝炎病毒在环境中持续存在并且可以承受通常用于灭活和/或控制细菌病原体的食品生产过程。该疾病可导致社区的重大经济和社会后果。人们从疾病中恢复可能需要数周或数月才能重返工作、学习或日常生活。鉴定的该病毒对食品建立的影响以及总体而言对当地生产力的影响可能很大。在卫生条件和卫生规范差的发展中国家，大多数儿童(90％)在10岁之前就已经感染了甲型肝炎病毒。
近几十年来，国际旅行的人数大大增长。根据联合国世界旅游组织(UNWTO)，2014年有超过11亿游客出国旅行。在国际旅行期间生病的风险取决于许多因素，诸如所参观的世界地区，旅行时间的长度和计划的活动的多样性。疫苗建议是国际旅行之前健康准备工作的重要部分。通常建议要前往世界各地的危险地区(包括亚洲、非洲和拉丁美洲)的旅行者接种甲型肝炎病毒疫苗。
对于常规的甲型肝炎疫苗接种，建议两剂计划，特别是处于感染甲型肝炎高风险的旅行者和免疫力低下的个体。然而，在健康个体中，用单个剂量已达到同等有效性。儿童/青少年(12月龄至18岁)以及成人(≥19岁)的疫苗接种计划由肌内注射一个初次剂量和6至18个月后肌内注射另一个加强剂量组成。
可用的甲型肝炎疫苗包括
和
因此，需要同时预防登革热病和甲型肝炎的安全有效的方法。
人乳头瘤病毒(HPV)是一种常见病毒，在性活动期间会通过直接的皮肤接触从一个人传播给另一个人。大多数性活跃的人在一生中的某些时候会感染HPV，而这种感染在少年晚期和20岁初期最为常见。约有40种类型的HPV可以感染男性和女性的生殖区。虽然大多数HPV类型不会引起症状并且可以被人体的免疫系统清除，但是一些HPV类型却是持久性的并且可以在女性中引起宫颈癌和其它不太常见的癌症—如肛门、阴茎、阴道、外阴和口咽的癌症或男性和女性生殖区的疣，称为生殖器疣。
HPV疫苗接种可预防HPV相关的宫颈癌以及肛门、外阴、阴道和口咽的HPV相关癌症。接种疫苗还可以预防HPV相关的生殖器疣。建议特别是11和12岁的女孩接种HPV疫苗。还建议尚未接种疫苗或尚未完成疫苗系列的13至26岁的女孩和妇女接种疫苗。还可以从9岁开始为女孩给予HPV疫苗。CDC建议11至12岁的女孩接种两剂HPV疫苗，以防护由HPV引起的癌症。最近，还建议对相同年龄范围的男孩进行疫苗接种。
在15岁生日之前开始疫苗接种系列的青少年的常规HPV疫苗接种计划包括两剂HPV疫苗。两剂通常间隔6至12个月。两剂间的最小间隔为五个日历月。对于在15岁生日当天或之后开始该系列的受试者以及患有某些免疫功能低下的疾患(诸如癌症、HIV感染或正在服用免疫抑制药物)的受试者，建议三剂计划。通常在第一剂后1至2个月给予第二剂，并且在第一剂后6个月给予第三剂。第一剂和第二剂疫苗之间的最小间隔通常为4周。第二剂和第三剂疫苗之间的最小间隔通常为12周。第一剂和第三剂之间的最小间隔通常为5个日历月。如果疫苗接种系列中断，无需重新开始该系列。
可用的HPV疫苗包括
9，这是一种重组9价HPV(9vHPV)疫苗，用于预防HPV血清型6、11、16、18、31、33、45、52和58。HPV疫苗不包括任何活的或灭活的HPV，但包括相应HPV血清型的L1蛋白。
因此，需要同时预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的安全有效的方法。
麻疹是一种由麻疹病毒引起的高度传染性传染病，麻疹病毒是副粘病毒科(Paramyxoviridae)中麻疹病毒属(Morbillivirus)的单链负义包膜(非区段化)RNA病毒。在约30％的病例中发生并发症并且可包括腹泻、失明、脑部炎症和肺炎等。报告的每2000例中大约有1例发生脑炎；幸存者往往患有永久性脑损伤和智力迟钝。报告的每3000例麻疹病例中有1例发生主要由于呼吸道和神经系统原因引起的死亡。婴儿和成人的死亡风险高于儿童和青少年。妊娠期间感染麻疹会增加胎儿风险。最常见地，这种风险涉及早产并且会适度增加自然流产和低出生体重的比率。亚急性硬化性全脑炎，一种缓慢的中枢神经系统病毒感染，与麻疹病毒相关。麻疹是一种空气传播的疾病，易于通过感染者咳嗽和打喷嚏传播，也可以通过与唾液或鼻分泌物的接触而传播。
腮腺炎是一种由腮腺炎病毒引起的儿童和年轻成人的急性疾病，腮腺炎病毒是副粘液病毒科中属腮腺炎病毒属(Rubulavirus)的单链负义RNA病毒。腮腺炎病毒在约三分之一的感染者中不会产生症状。在具有临床反应的那些感染者中，腺和神经组织最常受到影响并且最常见的症状包括发烧和腮腺肿胀。并发症可包括脑膜炎(15％)、胰腺炎(4％)、心脏发炎或永久性耳聋。频繁的病毒尿和肾功能异常表明腮腺炎病毒可能感染了肾脏。腮腺炎具有高度传染性并且在紧密生活在一起的人中通过呼吸道飞沫或与感染者的直接接触而迅速传播。
风疹(德国麻疹)是由风疹病毒引起的感染，风疹病毒是披膜病毒科(Togaviridae)中风疹病毒属(Rubivirus)的单链正义RNA病毒。该病毒通常导致轻度疾病，伴有很少的全身症状，并且最常发生于儿童时期。然而，如果在妊娠早期的妇女中发生感染，则该病毒可能穿过胎盘到达胎儿处，在该处感染可导致出生缺陷。这些缺陷可能是严重且永久性的，包括先天性心脏病、白内障形成、耳聋和智力迟钝。风疹通常经由受感染者咳嗽通过空气传播。
麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)联合疫苗由于其优于单个疫苗的优势而广泛用于世界某些区域的儿童免疫。联合疫苗可在儿童中同时激发针对这三种感染的足够免疫应答。
MMR疫苗适用于12月龄或更大年龄的个体同时接种麻疹、腮腺炎和风疹疫苗。在12月龄或更大年龄时首次接种疫苗的个体应在小学入学前再次接种疫苗。再次接种疫苗旨在血清转化那些对第一剂无应答的个体。免疫实践咨询委员会(ACIP)建议在12至15月龄时施用第一剂并且在4至6岁时施用第二剂。
因此，需要一种同时预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的安全有效的方法。
破伤风是由细菌破伤风梭菌(Clostridium tetani)感染引起的，该细菌通常发现于土壤、唾液、灰尘和粪肥中。该细菌通常通过皮肤上被污染物体损伤的裂口(诸如伤口或刺伤)进入人体。细菌产生的毒素会干扰肌肉收缩，导致肌肉痉挛的典型体征。它会影响大脑和神经系统并且通常在全身，导致极度痛苦的肌肉痉挛。下巴痉挛可能导致无法张开嘴巴，这种情况被称为“牙关紧闭症(lockjaw)”。破伤风使十分之一感染该疾病的人致死。
白喉是由细菌白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae)引起的感染，该细菌主要感染咽喉和上呼吸道，并产生影响其它器官的毒素。白喉发作急性并且主要特征是咽喉痛、低烧和颈部腺体肿胀。在严重的情况下，毒素可能引起心肌炎或周围神经病变。白喉毒素引起死组织膜在咽喉和扁桃体上堆积，使得呼吸和吞咽困难。白喉是一种传染性极强的感染并且该细菌通常通过直接接触或通过空气在人之间传播，但是也可以通过受污染的物体传播。
由细菌百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)引起的百日咳或带喘息声的咳嗽是一种空气传播的疾病，其引起极具传染性的呼吸道感染，该呼吸道感染可导致严重的呼吸问题，尤其是在婴儿中。百日咳首先看起来像是普通的感冒，但是随后引起剧烈的、无法控制的咳嗽，可引起呼吸困难、呕吐和睡眠障碍。一个人可能会咳嗽得厉害，以至于呕吐，肋骨断裂或因为工作变得非常疲倦。不到一岁的儿童可能很少咳嗽或不咳嗽，相反有一段时间他们没有呼吸。当人在咳嗽后尝试呼吸时，会听到尖锐的“喘息”声。并发症包括肺炎或死亡。百日咳可影响所有年龄的人，但对于不到一岁的婴孩而言，百日咳可能是非常严重且甚至致死的。
Tdap是防护三种可能威胁生命的细菌疾病即破伤风、白喉和百日咳(带喘息声咳嗽)的联合疫苗。Tdap代表破伤风和白喉类毒素与无细胞百日咳。Tdap是通过使用死细菌生产的灭活疫苗。建议在婴儿期(在小于7岁的儿童中)进行的破伤风、白喉和百日咳疫苗接种，通过使用特定的白喉类毒素、破伤风类毒素和无细胞百日咳吸收疫苗，诸如来自GlaxoSmithKline的
进行。建议对10岁以上的儿童使用另一加强型Tdap疫苗，以确保对破伤风、白喉和百日咳的免疫力维持到成人期。基于破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附型)联合疫苗的加强型Tdap疫苗以商标名称
可从GlaxoSmithKline获得。Tdap疫苗作为单剂量肌内注射。
因此，需要同时预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的安全有效的方法。
除白喉、破伤风和百日咳外，脊髓灰质炎(通常称为脊髓灰质炎或小儿麻痹症)是由脊髓灰质炎病毒引起的高度感染性病毒疾病。它侵入神经系统并且可在几小时内引起全身瘫痪。该病毒主要通过粪口途径，或者较少地通过共同媒介物(例如，受污染的水或食物)在人与人之间传播，并且在肠道中繁殖。最初的症状是发烧、疲劳、头痛、呕吐、颈部僵硬和肢体疼痛。每200例感染中有1例导致不可逆性瘫痪(通常在腿部)。在瘫痪者中，有5％至10％在呼吸肌肉变得不能动时死亡。脊髓灰质炎主要影响5岁以下的儿童。脊髓灰质炎无法治愈，只能预防。
b型流感嗜血杆菌(Hib)是几乎只在5岁以下儿童中造成重症肺炎、脑膜炎和其它侵袭性疾病的细菌。它通过呼吸道从感染者传播给易感个体。Hib还会引起面部、口腔、血液、会厌、关节、心脏、骨骼、腹膜和气管的潜在严重性炎症感染。尽管这个问题在世界范围内都存在，但在资源贫乏的国家，在将疫苗引入其国家免疫规划之前，Hib疾病的负担也相当高。据估计，在2000年，Hib引起了200至300万例严重疾病，尤其是肺炎和脑膜炎，并引起386,000例幼儿死亡。在世界各地都观察到Hib疾病，但难以确认，因为它需要对尚未接受既往抗生素治疗的患者进行及时的实验室检查。
可商购的DTaP/IPV/Hib联合疫苗包括
其基于联合的白喉类毒素、破伤风类毒素、无细胞百日咳(吸附型)和灭活脊髓灰质炎病毒与Hib缀合疫苗的组合。
因此，需要一种同时预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的安全有效的方法。
此外，已有报道称，感染登革热病毒的老年受试者常常非典型地呈现，其中发烧可能是唯一的症状并且不太可能呈现登革热的典型症状和体征，登革热的典型症状和体征可以定义为发烧加上以下的至少一种症状：骨痛、肌痛、关节痛、眼眶后痛、头痛和斑丘疹(Lee等人(2013)Am.J.Emerg.Med.31(5):783-787)。然而，与年轻受试者相比，老年人发展严重登革热和DHF/DSS的风险增加(Liu等人(2008)Am.J.Infect.Dis.4(1):10-17；Lin等人(2012)Emerg.Infect.Dis.18(10):2003-1009；Rowe等人(2014)PloS Negl.Trop.Dis.8(4))。已经讨论了几种可在老年人中促成严重疾病的原因，诸如在老年人(即60岁以上)中生理和免疫功能损伤，获得续发性登革热的可能性增加以及慢性疾病和其它合并症的患病率增加(参见Lin等人(2017)Expert Review of Anti-infective Therapy 15(8):729-735中的讨论)。
目的与概要
本发明的一个目的是为登革热流行群体和登革热非流行群体以及广泛年龄范围，尤其是对于2月龄至60岁的受试者，并且和疫苗接种之前是否早先暴露于登革热疫苗以及相应的血清阳性或血清阴性状态无关，提供一种针对登革热病毒所有血清型的安全有效的疫苗和相应的接种方法。
本发明的一个目的是使由DENV-1、DENV-2、DENV-3或DENV-4感染引起的DHF和DSS的风险最小化，尤其是在对早先未曾暴露于登革热或在疫苗接种之前为登革热血清阴性的幼龄儿童和任何年龄的个体进行疫苗接种之后。
本发明的一个目的是提供一种用于控制登革热暴发情形的疫苗和相应的接种方法。
本发明的一个目的是提供一种可用于对登革热的临床管理不太熟悉的环境或资源较少的环境中的疫苗和相应的接种方法。
本发明的一个目的是提供一种避免测试个体接种之前的个体血清状态或分析要进行大规模疫苗接种的地区中的血清阳性率的疫苗和相应的接种方法。
本发明的一个目的是提供一种减少和/或避免后期抗体依赖性增强的风险的疫苗和相应的接种方法。
本发明的一个目的是提供一种减少和/或避免登革热NS1中毒的疫苗和相应的方法。
本发明的一个目的是提供一种诱导交叉反应性多型抗体和/或细胞介导的免疫的疫苗和相应的接种方法。
本发明的一个目的是针对登革热病和黄热病提供安全有效的防护。
本发明的另一个目的是针对登革热病和甲型肝炎提供安全有效的防护。
本发明的又一个目的是针对登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣提供安全有效的防护。
本发明的某一个目的是针对登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹提供安全有效的防护。
本发明的另一个目的是针对登革热病和破伤风、白喉和百日咳提供安全有效的防护。
本发明的另一个目的是针对登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和由b型流感嗜血杆菌引起的疾病提供安全有效的防护。
本发明的另一个目的是针对以上提及的疾病的任何组合提供安全有效的防护。
本发明的另一个目的是提供一种在受试者，尤其是老年受试者(即60岁以上)中刺激对所有四种登革热血清型的平衡免疫应答的疫苗。
因此，本发明部分地涉及用于大规模疫苗接种方法的登革热疫苗，无需单独测试血清状态或预先评估血清阳性率。这种大规模疫苗接种包括针对旅行者而言的流行区(包括暴发情形)以及非流行区。
因此本发明涉及四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，其中优选地所述四价登革热病毒组合物包含嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株和嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株，其中优选地登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-2 16681(用SEQ ID NO 11表示)并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
本发明尤其涉及组合物或冻干单位剂量，其在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
本发明还尤其涉及此类组合物或单位剂量，其在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或优选至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％。
本发明还尤其涉及此类方法和用途，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％。
因此本发明涉及包括四价登革热病毒组合物的方法以及四价登革热病毒组合物的相应用途，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，所述方法涉及为受试者接种预防病毒学上可确认的登革热病，其中尤其所述四价登革热病毒组合物包含嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株和嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株，其中具体来说登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-2 16681(用SEQ ID NO 11表示)并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
d)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
e)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
f)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
本发明尤其涉及此类方法和用途，其中单位剂量经冻干并且在用0.5mL的药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
本发明还尤其涉及此类方法和用途，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且其中所述受试者优选为2至17岁或4至16岁。
本发明还尤其涉及此类方法和用途，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％，其中所述受试者为18至60岁。
因此本发明涉及方法和相应的用途，该方法包括仅两次施用所述单位剂量进行的初次疫苗接种，所述初次疫苗接种包括以下步骤：
(A)向受试者施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物，和
(B)在第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的四价登革热病毒组合物，
其中优选地，该方法和用途不包括在单位剂量施用之前确定受试者早先感染登革热的步骤，或者其中在单位剂量施用之前受试者的血清状态是未知的，或者其中该方法和用途不包括优选在施用步骤之前、期间或之后的任何时间确定受试者早先感染登革热的步骤，或者优选在施用步骤之前、期间或之后的任何时间受试者的血清状态都是未知的。
根据一个实施方案，此类方法和用途不包括在第一和第二单位剂量施用后对于受试者的发热性疾病的主动监测。在主动监测期间，研究人员将要求任何患有发热性疾病的受试者(定义为连续3天中的任何2天发烧≥38℃)返回现场进行登革热评价。至少每周一次与受试者/监护人取得联系，以提醒受试者/监护人在发生发热性疾病时有义务返回现场，以确保对发热性疾病的鲁棒辨识。将通过在每个试验场所可能有所不同的适当方法(例如，电话、短信、家访、基于学校的监测)来实现这种联系。
根据一个实施方案，此类方法和用途不包括疫苗免疫原性分析，所述疫苗免疫原性分析包括登革热中和抗体的GMT。
根据一个实施方案，此类方法和用途不包括反应原性分析。此类反应原性分析涉及诱发的局部不良事件(注射部位疼痛、注射部位红斑和注射部位肿胀)和诱发的全身不良事件(儿童<6岁：发烧、烦躁/易怒、嗜睡和食欲不振；儿童≥6岁：虚弱、发烧、头痛、不适和肌痛)，例如在每次接种疫苗(包括接种当天)后，通过收集日记卡对诱发的局部不良事件和诱发的全身不良事件分别评估7天和14天。
根据本发明的方法不需要在疫苗接种之前测试血清状态，因此允许立即进行治疗和控制暴发。根据某些实施方案，本发明涉及方法和用途，其中所述受试者暴露于登革热暴发。在某些此类实施方案中，暴发是由于登革热血清型2和/或由于血清型1引起的。
根据某些实施方案，所述接种方法是针对由于登革热血清型2和/或由于登革热血清型1引起的病毒学上可确认的登革热病。
根据一个实施方案，该方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定早先是否有登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
因此，无需确定早先是否有登革热感染即可完成所述接种方法。所述方法还任选地包括在第二单位剂量施用后至少1年，单位剂量的加强剂量。
根据一个实施方案，所述方法和用途涉及为受试者接种四价登革热病毒组合物以预防病毒学上可确认的登革热病的方法，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，所述登革热血清型2毒株源自所述野生型病毒株DEN-2 16681(用SEQ ID NO 11表示)并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体，
所述方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定是否存在早先登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
因此，无需确定早先是否有登革热感染即可完成所述接种方法。所述方法还任选地包括在第二单位剂量施用后至少1年，单位剂量的加强剂量。
根据本发明，所述方法和用途适用于各种年龄的受试者。本发明尤其涉及此类方法和用途，其中所述受试者是9岁以下，或4至5岁，或6至11岁，或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至17岁，或18至60岁，或18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
具体而言，本发明涉及此类用途，其中所述方法是安全的。
具体而言，本发明涉及此类用途，其中所述方法针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。
具体而言，本发明涉及此类用途，其中所述方法是有效的。
具体而言，本发明涉及此类用途，其中所述方法在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
本发明还部分地涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的重构登革热疫苗组合物，所述方法包括向受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在三个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种登革热病毒株，任选地其中登革热病毒株是活的、减毒的，并且其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，
(i)登革热血清型1的浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL并且任选地达到4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL并且任选地达到6.2log10pfu/0.5mL。
因此本发明部分地涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病(VCD)的方法中使用的登革热疫苗组合物，所述方法包括向受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在三个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，并且其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，其中所述减毒登革热病毒株包含嵌合登革热病毒和优选至少一种非嵌合登革热病毒，并且其中登革热血清型1和登革热血清型2各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在和/或合计小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％，尤其其中登革热血清型3是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％并且尤其其中登革热血清型4是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。
因此本发明部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量及其用途，所述单位剂量包含：
四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包括四种活的减毒登革热血清型(例如病毒株)：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)，
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)，
及其一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明进一步部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量及其用途，所述单位剂量包含：
四价病毒组合物，所述四价病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒株：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)，以及
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)，
以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明进一步部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量及其用途，所述单位剂量包含：
四价病毒组合物，所述四价病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒株，其中所述单位剂量经冻干并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)，以及
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)。
本发明进一步部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量及其用途，其中所述单位剂量是冻干的并且是通过将0.5mL溶液冻干而获得的，所述溶液包含：
四价病毒组合物，所述四价病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒株：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)，以及
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)，
以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明尤其涉及此类单位剂量或组合物，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，尤其其中(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少10％。
本发明尤其涉及此类单位剂量或组合物，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％。
本发明还部分地涉及用于制备重构单位剂量的试剂盒及其用途，所述试剂盒包含以下组分：
a)如本文所述的本发明的冻干单位剂量，和
b)用于重构的药学上可接受的稀释剂。
本发明还部分地涉及容器，诸如小瓶，其包含一至十个如本文所述的本发明的单位剂量。
本发明进一步涉及一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括例如通过皮下注射向受试者施用重构单位剂量的如本文所述的登革热疫苗组合物。
本发明进一步涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的重构单位剂量用于制造例如通过皮下注射在受试者中预防登革热病的药物的用途。
本发明进一步涉及在例如通过皮下注射在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的重构单位剂量。
本发明进一步涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用重构单位剂量的如本文所述的疫苗组合物，其中所述受试者群体对所有登革热血清型是血清阴性的。在所述方法中，当在至少40个，或至少50个或至少60个受试者中在至少第一次施用所述单位剂量后，和任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量后的第180天或第365天测试时，几何平均中和抗体滴度(GMT)，对于登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT(GMT DENV-2:GMT DENV-4)可以提供不超过50，不超过40，或不超过30，或不超过20的比率，并且任选地对于登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT(GMTDENV-2:GMT DENV-1)可以提供不超过20的比率，并且任选地对于登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT(GMT DENV-2:GMT DENV-3)可以提供不超过20的比率。
本发明进一步涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用重构单位剂量的如本文所述的疫苗组合物，其中所述受试者对所有登革热血清型是血清阴性的。在所述方法中，当在受试者中在至少第一次施用所述单位剂量之后，和任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量后的第180天或第365天测试时，中和抗体滴度，对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度可以提供不超过50，不超过40，或不超过30，或不超过20的比率，并且任选地对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度可以提供不超过20的比率，并且任选地对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度可以提供不超过20的比率。
在一个优选的实施方案中，本发明的预防登革热病的方法与诸如在9岁以下的儿童或血清阴性个体中诱发的全身不良事件的可能性增加不相关。
因此本发明部分地涉及预防登革热病以及黄热病的方法。
因此本发明部分地涉及预防登革热病以及甲型肝炎的方法。
因此本发明部分地涉及预防登革热病以及与HPV相关癌症或生殖器疣的方法。
因此本发明部分地涉及预防登革热病以及麻疹、腮腺炎和风疹的方法。
因此本发明部分地涉及预防登革热病以及破伤风、白喉和百日咳的方法。
因此本发明部分地涉及预防登革热病以及白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法。
因此本发明还部分地涉及预防以上提及的疾病的任何组合的方法。
本发明进一步部分地涉及重构单位剂量的如本文所述的登革热疫苗组合物/四价登革热病毒组合物用于制造例如通过皮下注射在受试者中预防登革热病的药物的用途。
本发明进一步部分地涉及在如本文所述的在受试者中预防登革热病的方法中使用的重构单位剂量的如本文所述的登革热疫苗组合物/四价登革热病毒组合物。
定义
在描述本发明时，以下术语按以下所示使用。除非上下文另外明确指出，否则如本文所用，单数形式“一个/种(a、an)”和“所述(该)”包括多个指示物。
如本文所用，术语“登革热疫苗组合物的单位剂量”、“单位剂量”和“如本文所述的本发明的单位剂量”是指以单一剂量施用于受试者的登革热疫苗的量。在一个实施方案中，小瓶中存在一个单位剂量，并且该单位剂量例如任选地在重构之后施用于受试者。在一个实施方案中，在小瓶中可以存在多于一个单位剂量的登革热疫苗组合物，使得用一个小瓶的内容物，可以对多于一个受试者进行疫苗接种。
“冻干单位剂量”或“冻干形式的单位剂量”是指通过将给定体积的液体登革热疫苗组合物(诸如0.5mL)进行冻干而获得的单位剂量。因此，将通过组合药学上可接受的赋形剂和包含四种登革热病毒株(优选TDV-1至TDV-4)的登革热病毒组合物而产生的登革热疫苗组合物的水性配制品进行冻干以获得冻干单位剂量。
通过用药学上可接受的稀释剂重构，从冻干剂量获得“重构单位剂量”或“重构形式的单位剂量”。稀释剂不含登革热病毒。重构单位剂量是可以例如通过注射(诸如皮下注射)施用于受试者的液体。
如本文所用，术语“在用0.5mL重构后”不限制使用0.5mL稀释剂进行的重构，而是指当用0.5mL稀释剂进行重构时，重构单位剂量中将存在的登革热病毒的浓度。虽然使用不同体积进行重构(例如0.8mL)将在重构单位剂量中产生不同的登革热病毒浓度，但施用单位剂量的总体积(例如0.8mL)将导致施用相同总量的登革热病毒。
如本文所用，“至少X log10pfu/0.5mL的浓度”是指0.5mL中登革热血清型的浓度，但不是将单位剂量限制为0.5mL。如果单位剂量的体积不同于0.5mL，或者是从不同于0.5mL的体积冻干的，或者是以不同于0.5mL的体积重构的，则所述浓度将不同于“至少Xlog10pfu/0.5mL的浓度”。但是，如果单位剂量的体积为0.5mL，或者是从0.5mL的体积冻干的，或者是以0.5mL的体积重构的，则所述浓度将是“至少X log10pfu/0.5mL的浓度”。因此，虽然浓度可能不同，但是单位剂量中的病毒总量保持不变。
如本文所用，术语“登革热血清型”是指由其细胞表面抗原定义的登革热病毒的物种，因此可以通过本领域已知的血清学方法加以区分。目前，已知四种登革热病毒血清型，即登革热血清型1(DENV-1)、登革热血清型2(DENV-2)、登革热血清型3(DENV-3)和登革热血清型4(DENV-4)。
如本文所用，术语“四价登革热病毒组合物”是指包含来自四种不同登革热血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4的四种不同免疫原性组分，优选包含四种不同活的、减毒登革热病毒(每种代表一种登革热血清型)，并且旨在刺激对所有四种登革热血清型的免疫应答的登革热病毒组合物。
如本文所用，术语“活的减毒登革热病毒”是指突变以提供降低的毒力的活性登革热病毒。活的减毒登革热病毒可以是其中所有组分都源自相同登革热血清型的登革热病毒，或者它可以是具有来自两种或更多种登革热血清型的部分的嵌合登革热病毒。
“病毒株”并且尤其是“登革热病毒株”是病毒，尤其是登革热病毒的遗传亚型，其特征在于特定的核酸序列。登革热血清型可以包括具有不同核酸序列，具有相同细胞表面抗原的不同毒株。登革热病毒株可以是其中所有组分都源自相同登革热血清型的登革热病毒，或者它可以是具有来自两种或更多种登革热血清型的部分的嵌合登革热病毒。
如本文所用，“TDV-2”是指源自活的减毒的DEN-2PDK-53病毒株的经分子表征和克隆的登革热血清型2毒株。PDK-53毒株例如在Bhamarapravati等人(1987)Bulletin of theWorld Health Organization65(2):189-195中有描述。在一个实施方案中，TDV-2毒株用作嵌合TDV-1、TDV-3和TDV-4毒株的骨架，将来自TDV-1、TDV-3和TDV-4毒株的部分引入其中。
“非嵌合登革热病毒”或“非嵌合登革热血清型毒株”或“非嵌合登革热毒株”仅包含来自一种登革热血清型的部分。具体而言，非嵌合登革热病毒不包括来自不同黄病毒，诸如黄热病病毒、寨卡病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、蜱传脑炎病毒的部分。TDV-2是非嵌合登革热病毒的一个实例。
“嵌合登革热病毒”或“嵌合登革热血清型毒株”或“嵌合登革热毒株”包含来自至少两种不同的登革热血清型的部分。如本文所用，嵌合登革热病毒不包括来自不同黄病毒，诸如黄热病病毒、寨卡病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、蜱传脑炎病毒的部分。具体而言，本文所述的嵌合登革热病毒不包括来自黄热病病毒的部分。如本文所用，“嵌合登革热血清型2/1毒株”或“DENV-2/1嵌合体”或”TDV-1”是指包含来自DENV-2和DENV-1两者的部分的登革热病毒嵌合构建体。具体而言，在嵌合登革热血清型2/1毒株中，来自DENV-1的prM和E蛋白置换了来自DENV-2的prM和E蛋白，如下详述。如本文所用，“嵌合登革热血清型2/3毒株”或“DENV-2/3嵌合体”或“TDV-3”是指包含来自DENV-2和DENV-3的部分的登革热病毒嵌合构建体。具体而言，在嵌合登革热血清型2/3毒株中，来自DENV-3的prM和E蛋白置换了来自DENV-2的prM和E蛋白，如下详述。如本文所用，“嵌合登革热血清型2/4毒株”或“DENV-2/4嵌合体”或“TDV-4”是指包含来自DENV-2和DENV-4两者的部分的登革热病毒嵌合构建体。具体而言，在嵌合登革热血清型2/4毒株中，来自DENV-4的prM和E蛋白置换了来自DENV-2的prM和E蛋白，如下详述。
如本文所用，“TDV”是指四价活的减毒登革热疫苗，其包含分别来自四种登革热血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4的表达表面抗原的四种活的减毒登革热病毒株TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4的混合物。在一个实施方案中(例如，还有在实例中)，TDV-1具有根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和/或根据SEQ ID No.2的氨基酸序列。在一个实施方案中，TDV-2具有根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和/或根据SEQ ID No.4的氨基酸序列。在一个实施方案中，TDV-3具有根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和/或根据SEQ ID No.6的氨基酸序列。在一个实施方案中，TDV-4具有根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和/或具有根据SEQ IDNo.8的氨基酸序列。
如本文所用，术语“登革热病”是指由登革热病毒感染引起的疾病。登革热病的症状包括突然的高烧、头痛、关节和肌肉疼痛、恶心、呕吐和皮疹。术语登革热病还包括更重度形式的登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)。DHF的症状包括血管渗透性增加、血容量不足和凝血机制异常。患有DHF的受试者可能出现血浆渗漏和出血的严重表现。当患有DHF的受试者经历休克时，他或她将被归类为患有DSS。DSS的症状包括出血，出血可表现为皮肤上细小的血点和皮肤下的大块血斑。长时间休克是与并发症相关的主要因素，并发症包括可能导致死亡的消化道大出血。如本文所用，DHF病例定义为满足WHO 1997DHF标准的VCD病例。在预防老年受试者中的登革热病的上下文中，术语“预防登革热病”优选包括预防DHF和/或DSS。在预防老年受试者中的登革热病的上下文中，术语“预防登革热病”优选包括预防登革热的严重终末器官表现，诸如肝肿大和急性肾衰竭。
如本文所用，“预防登革热病”是指预防受试者由于登革热病毒感染而发展出登革热病的一种或多种症状。具体而言，通过为受试者接种疫苗或为受试者接种登革热疫苗组合物(诸如本文所述的重构单位剂量)来实现预防登革热病。如本文所用，术语“预防性治疗登革热病”等同于“预防登革热病”。在一个特定的实施方案中，预防登革热病包括预防DHS和/或DSS。
如本文所用，术语“病毒学上确认的登革热病”、“VCD病例”或“VCD发热”是指发热性疾病或通过阳性血清型特异性逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)临床怀疑为登革热病的疾病。术语“病毒学上可确认的登革热”病是指受试者患有发热性疾病或临床怀疑为登革热病，其中例如使用RT-PCR对受试者进行测试将确认至少一种登革热血清型的存在。重度形式的VCD发热将如下鉴定：登革热出血热(DHF)是根据WHO 1997标准定义的。严重的登革热是通过独立的登革热个案评审委员会的评估而定义的，该委员会将基于章程中重新定义的标准来评估所有住院的VCD病例(严重的/非严重的)。所有未住院的病例均视为的非严重的。
如本文所用，术语“发热性疾病”定义为连续3天中的任意2天温度≥38℃。
如本文所用，术语“住院治疗的病毒学上确认的登革热病”被认为是严重登革热的替代名称，并且“住院治疗的病毒学上确认的登革热病的发生率”被用作安全性参数。如本文所用，“关于住院治疗的病毒学上确认的登革热病的相对风险”意指相对于住院治疗的病毒学上确认的登革热病的事件数除以用安慰剂治疗的受试者数，住院治疗的病毒学上确认的登革热病的事件数除以用本文公开的单位剂量治疗的受试者数。如果“关于住院治疗的病毒学上确认的登革热病的相对风险”为1或更低，则疫苗为住院治疗的病毒学上确认的登革热病提供与安慰剂相同或更低的风险并且被认为是“安全的”。在这种情况下，住院治疗的病毒学上确认的登革热病的风险也可以是0.9或更低，0.8或更低，0.7或更低，0.6或更低，0.5或更低，0.4或更低，0.3或更低，0.2或更低，或0.1或更低，尤其是从第二次施用后30天到第二次施用后12个月测定时，尤其是在选自4至16岁受试者的年龄组，4至9岁受试者的年龄组，2至9岁以下受试者的年龄组，4至5岁受试者的年龄组，6至11岁受试者的年龄组和12至16岁受试者的年龄组的年龄组中测定时。
如本文所用，可替代地当关于住院治疗的病毒学上确认的登革热病的疫苗功效(VE)为0％或更高时，疫苗被认为是“安全的”。这意味着该疫苗为住院治疗的病毒学上确认的登革热病提供了与安慰剂相同或更低的可能性。尤其认为“安全的”是针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限超过25％，尤其是在至少1,500名或至少2,000名在基线时针对所有血清型均呈血清阴性或在基线时针对至少一种血清型呈血清阳性的健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时(尤其是在尤其是选自4至16岁受试者的年龄组，4至9岁以下受试者的年龄组，2至9岁以下受试者的年龄组，4至5岁受试者的年龄组，6至11岁受试者的年龄组和12至16岁受试者的年龄组的年龄组中测量时)，尤其是在大约从第一次施用开始少于6个月内(诸如3个月内)或从施用计划的第二次或最后一次施用后30天到施用计划的第二次或最后一次施用后至少12个月、12至18个月、12个月或18个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次时。具体而言，下限可以超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过65％，超过66％，超过67％，超过68％，超过70％，或超过75％。具体而言，在比较血清阳性受试者和血清阴性受试者时，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的2侧95％置信区间可以提供在10％点以内或在15％点以内或在20％点以内的2侧置信区间下限。在一个特定实施方案中，“安全的”意指针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，从施用计划的第一次施用到施用计划的最后一次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。
如果满足以上针对术语“安全的”所定义的标准之一，则在本发明的意义内认为疫苗是安全的。在本文中，安全的尤其是指对于所有受试者而言都是安全的疫苗，而不管其在基线时的血清状态如何。这意味着不需要在施用前确定受试者中早先登革热感染的发生情况即可施用疫苗。优选地，如以上定义的那样，疫苗对于从4岁开始的所有年龄组均安全且优选地与血清状态无关，尤其是4岁至60岁或4岁至16岁的年龄组。在这种情况下，相关亚组为9岁以下，2岁至9岁以下，4岁至9岁以下，4至5岁，6至11岁以及12至16岁，或4至16岁以内的任何年龄组。对于针对住院治疗的病毒学上确认的登革热病的VE的进一步定义，参考以下关于某些治疗方法的公开内容。
如本文所用，“疫苗功效”或”VE”度量接种者中病例的成比例减少。通过计算接种者和未接种者中的疾病风险并测定接种者相对于未接种者的疾病风险的降低百分比来度量疫苗功效(VE)。接种组中疾病减少的百分比越大，疫苗功效越大。例如，VE为90％表示在进行疫苗接种的组中疾病发生减少90％，或者自您在他们未接种疫苗时所预期的病例数减少90％。疫苗效率通过以下公式计算：100*(1–HR)，其中HR是危险比，其定义为疫苗的危险率(λv)除以安慰剂的危险率(λc)，即HR＝λv/λc。λv表示用本文公开的四价登革热疫苗组合物接种的受试者的危险率，而λc表示未接种的受试者，即接受安慰剂的受试者的危险率。危险率比HR是根据Cox比例危险模型估算的，其中以研究疫苗为因素，根据年龄进行了调整，并按地区进行了分层。如本文所用，术语“针对所有四种血清型的联合疫苗功效”定义为与登革热病的风险有关的疫苗功效，而与引起病毒学上确认的登革热病的血清型和受试者的基线血清状态无关。在联合疫苗功效高于30％的情况下，认为疫苗是“有效的”。在这种情况下，联合疫苗功效也可以是40％或更高，50％或更高，60％或更高，70％或更高，72％或更高，或80％或更高，尤其是从第二次施用后30天开始到第二次施用后12个月或第二次疫苗接种后18个月测定时，尤其是在选自4至16岁受试者的年龄组，4至9岁以下受试者的年龄组，2至9岁以下受试者的年龄组，4至5岁受试者的年龄组，6至11岁受试者的年龄组和12至16岁受试者的年龄组的年龄组中测定时。在这种情况下，有效尤其是指无论其基线时的血清状态如何，对所有受试者都有效的疫苗。优选地，疫苗对于从4岁开始的所有年龄组都有效且优选地与血清状态无关，尤其是4岁至60岁或4岁至16岁的年龄组，并且与血清状态无关。在这种情况下，相关亚组为9岁以下，2岁至9岁以下，4岁至9岁以下，4至5岁，6至11岁以及12至16岁，或4至16岁以内的任何年龄组。在某些实施方案中，“有效”意指在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且4至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。可以定义其它特定功效。如本文所用，“针对血清阴性患者中所有四种血清型的联合疫苗功效”是指在基线时呈血清阴性的受试者中测得的功效。如本文所用，“针对特定血清型例如血清型1的疫苗功效”是指与引起病毒学上确认的登革热病的特定血清型有关的功效。如本文所用，“针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效”是指其中仅考虑住院治疗的病毒学上确认的登革热病例的功效。可以关于在基线时呈血清阴性或血清阳性的受试者并且对于不同的年龄组测定此类疫苗功效。
如本文所用，“相对风险”意指相对于病毒学上确认的登革热病的事件数除以用安慰剂治疗的受试者数，病毒学上确认的登革热病的事件数除以用本文公开的单位剂量治疗的受试者数。如本文所用，术语“针对所有四种血清型的联合相对风险”定义为与登革热病的风险有关，而与引起病毒学上确认的登革热病的血清型和受试者的基线血清状态无关的相对风险。
如本文所用，“疫苗接种”或“接种”是指向受试者施用疫苗，其目的是防止受试者发展出疾病的一种或多种症状。如本文所用，“接种疫苗预防登革热病”或“接种预防登革热病”是指向受试者施用登革热疫苗组合物，其目的是防止受试者发展出登革热病的一种或多种症状。原则上，该方法包括初次疫苗接种和任选地一次或多次加强疫苗接种。初次疫苗接种定义为施用本文公开的组合物或单位剂量以建立保护性免疫应答的初次施用计划，并且例如由两次施用(例如在三个月内)组成。每当在本公开中提及施用时，除非指定为加强疫苗接种，否则这种施用是指初次疫苗接种。加强疫苗接种是指在初次疫苗接种之后，例如在初次疫苗接种计划的最后一次施用(例如第二次施用)后至少1年或甚至5或10年之后进行的施用或施用计划。加强施用试图增强或重建初次疫苗接种的免疫应答。
如本文所用，术语“受试者(subject或subjects)”限于人类受试者(例如婴儿、儿童或成人)。术语“老年受试者(elderly subject或elderly subjects)”是指年龄超过60岁，诸如61岁至100岁，61岁至90岁，61岁至80岁，61岁至75岁，或61岁至70岁的受试者。
如本文所用，“受试者群体”是指一组受试者。受试者群体可以指至少40名受试者，至少50名受试者，至少60名受试者，至少100名受试者或至少1000名受试者，并且由某些参数限定。可用于限定受试者群体的参数包括但不限于受试者的年龄、受试者来自登革热流行区还是登革热非流行区以及受试者的血清状态。
如本文所用，“流行区”是指此类区域，在该区域内的群体中疾病或传染物经常存在和/或通常普遍。如本文所用，“非流行区”是指疾病不存在或通常不普遍的区域。因此，“登革热流行区”是指登革热病毒感染经常保持在基线水平的地理区。“登革热非流行区”是指登革热病毒感染不经常保持在基线水平的地理区。因此，“来自登革热流行区”或“来自登革热非流行区”的受试者群体或受试者是指生活在如上定义的地理区的受试者群体或受试者。地理区或受试者群体是否是登革热流行的可以通过不同的计算方法来确定，诸如在Bhatt等人(2013)Nature 496(7446):504-507和补充材料中以及在Stanaway等人(2016)Lancet Infect Dis.16(6):712-723和补充材料中描述的那些计算方法。登革热流行区和登革热流行病学的概述例如由WHO或CDC定期发布。典型的登革热流行区处于拉丁美洲、东南亚和太平洋岛屿，登革热流行国家包括但不限于澳大利亚、巴西、孟加拉国、哥伦比亚、中国、多米尼加共和国、印度尼西亚、印度、墨西哥、马来西亚、尼加拉瓜、尼日利亚、巴基斯坦、巴拿马、菲律宾、波多黎各、新加坡、斯里兰卡、泰国和越南。该地区的感染力是通过以血清阳性率提供的血清阳性率调查来度量的。感染力极高的地区被认为血清阳性率超过80％。如本文所用，术语“区域”在涉及血清阳性率时是指血清阳性率可以测定或已知的地理区，例如，村庄、城镇、城市、区、县、州、省或上述部分地区或整个国家。
如本文所用，“血清状态”是指受试者相对于某一传染物，特别是登革热病毒所具有的抗体的量。如本文所用，“血清阴性”或“血清原初性”意指受试者在血清中不具有针对登革热血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4中的任一种的中和抗体。血清阴性或血清原初性受试者或受试者群体由对于四种登革热血清型中的每一种的中和抗体滴度小于10定义。对于至少一种登革热血清型，具有等于或大于10的中和抗体滴度的受试者或受试者群体定义为对于所述登革热血清型呈“血清阳性”。基线时的血清状态是指在施用如本文所述的登革热疫苗组合物之前的血清状态。
如本文所用，“中和抗体滴度”是指受试者血清中的中和相应登革热血清型的抗体的量。使用已知方法，诸如WHO指南(世界卫生组织免疫疫苗生物制品部(2007)登革热病毒人类抗体的噬斑减少中和测试指南，WHO/IVB/07.07)中所述的噬斑减少中和测试(PRNT)或如本文所述的微量中和(MNT50)测定法，测定受试者血清样品中针对DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4的中和抗体滴度。如本文所用，“登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度之比不超过20”意指将登革热血清型2的中和抗体滴度除以登革热血清型4的中和抗体滴度，并且由此获得的比率不超过20。换句话说，登革热血清型2的中和抗体滴度不超过受试者中登革热血清型4的中和抗体滴度的20倍。
如本文所用，术语“几何平均中和抗体滴度”和”GMT”是指受试者群体的受试者血清中针对相应登革热血清型的中和抗体的滴度的几何平均值。几何平均值通过熟知的公式计算。如本文所用，“登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT之比不超过20”意指将登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)除以登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，并且由此获得的比率不超过20。换句话说，登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度不超过受试者群体中登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度的20倍。
如本文所用，“免疫应答”是指受试者对登革热疫苗施用的应答。具体而言，免疫应答包括针对一种或多种登革热血清型的中和抗体的形成。还可能包括刺激细胞介导的应答或形成针对非结构蛋白(诸如NS1)的抗体。如果在所述单位剂量的所述施用后，针对至少一种登革热病毒血清型并且优选针对所有四种登革热病毒血清型的中和抗体的滴度增加，则通过施用如本文所述的本发明的单位剂量刺激了免疫应答。如果在所述单位剂量的所述施用后，经来自登革热病毒蛋白的肽刺激的外周血单核细胞的干扰素γ分泌增加，则通过施用如本文所述的本发明的单位剂量刺激了免疫应答。如果在所述单位剂量的所述施用后，针对非结构蛋白诸如NS1的抗体的滴度增加，则通过施用如本文所述的本发明的单位剂量刺激了免疫应答。在一个特定实施方案中，施用如本文所述的本发明的重构单位剂量刺激针对一种或多种登革热血清型的中和抗体的形成，细胞介导的应答以及针对非结构蛋白诸如NS1的抗体的形成。
如本文所用，“平衡的免疫应答”意指对四种登革热血清型的免疫应答足以提供针对所有四种登革热血清型感染的防护，并且优选地，对四种登革热血清型的免疫应答强度相似。具体而言，在施用如本文所述的本发明的第一重构单位剂量后的第180天或第365天，针对四种登革热血清型的中和抗体滴度相似，即相差小于30倍，小于25倍或小于20倍。
对于包含浓度为3.60log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，浓度为4.00log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，浓度为4.60log10pfu/0.5ml的登革热血清型3和浓度为5.11log10pfu/0.5ml的登革热血清型4的一种示例性四价疫苗组合物，显示了“以pfu/0.5ml计的总浓度”，其用作计算四价登革热疫苗的每种单独组分的浓度百分比的基础值。
首先，将浓度的对数值转换为数值。该转换的结果对于血清型1而言为4x103pfu/0.5ml，对于血清型2而言为1x104pfu/0.5ml，对于血清型3而言为4x104pfu/0.5ml并且对于血清型4而言为1.3x105pfu/0.5ml。以pfu/0.5ml计的总浓度是上述数值的总和，得出1.84x105pfu/0.5ml。
通过将单个血清型的浓度数值(表示为pfu/0.5ml)除以总浓度(以pfu/0.5ml表示)并将结果乘以100，可以得到血清型1、2、3和4中每一种的“浓度百分比”，即：
血清型1的浓度百分比＝(4x103pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝2％
血清型2的浓度百分比＝(1x104pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝5％
血清型3的浓度百分比＝(4x104pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝22％
血清型4的浓度百分比＝(1.3x105pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝71％。
将浓度百分比四舍五入为整数。
如本文所用，疫苗的“伴随”施用是指两种或更多种疫苗的联合施用。在本发明的部分上下文中，两种或更多种疫苗的联合施用是指将登革热疫苗(诸如本发明的单位剂量)的施用计划与黄热病疫苗(诸如YF-17D)，和/或甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，和/或HPV疫苗(诸如9vHPV疫苗)，和/或麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)联合疫苗，和/或Tdap联合疫苗(诸如破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗诸如
)，和/或DTaP/IPV/HIB疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的施用计划相联合。
如本文所用，“同时”施用意指在同一天施用至少两种不同的疫苗，诸如登革热疫苗和黄热病疫苗，或登革热疫苗和甲型肝炎疫苗，或登革热疫苗和HPV疫苗，或登革热疫苗和MMR疫苗，或登革热疫苗和Tdap疫苗，或登革热疫苗和DTaP/IPV/Hib疫苗。同时施用可以由同一医师施用，诸如在同一医疗预约期间。
如本文所用，“依次”施用意指在相继的几天，诸如在90天内，但是以包括施用登革热疫苗和黄热病疫苗的联合施用计划，施用至少两种不同的疫苗，诸如登革热疫苗和黄热病疫苗，或登革热疫苗和甲型肝炎疫苗，或登革热疫苗和HPV疫苗，或登革热疫苗和MMR疫苗，或登革热疫苗和Tdap疫苗，或登革热疫苗和DTaP/IPV/Hib疫苗。
如本文所用，“与HPV相关癌症或生殖器疣”分别是指由HPV感染引起的癌症和生殖器疣。HPV血清型16、18、45、31、33、52、58(也称为“高危”HPV血清型)是宫颈癌中最常见的类型，其中两种HPV血清型16和18在全球引起约70％的宫颈癌HPV血清型6和11(也称为“低危”HPV血清型)会引起生殖器疣。
如本文所用，”9vHPV疫苗”是指提供针对HPV血清型6、11、16、18、31、33、45、52和58的防护的9价HPV疫苗。具体而言，9vHPV疫苗用于预防由这些HPV血清型中的一种或多种引起的宫颈癌、外阴癌、阴道癌和肛门癌、癌前病变或发育异常的病变以及生殖器疣。
如本文所用，”MMR疫苗”是指用于麻疹、腮腺炎和风疹的联合疫苗。几种MMR疫苗是现有技术中已知的，并且包括
II、
和
如本文所用，”Tdap疫苗”是指用于破伤风、白喉和百日咳的联合疫苗。现有技术中已知的Tdap疫苗包括
(用于6周至7岁的儿童的疫苗接种)，以及来自GlaxoSmithKline的
和来自Sanofi Pasteur的Adacel(两者均用于10岁或以上的个体)。
如本文所用，“DTaP”是指白喉、破伤风和无细胞百日咳。
如本文所用，“IPV”是指灭活的脊髓灰质炎病毒。
如本文所用，“Hib”是指b型流感嗜血杆菌。
如本文所用，“DTaP/IPV/Hib疫苗”是指用于白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌的联合疫苗。现有技术中已知的DTaP/IPV/Hib疫苗包括来自SanofiPasteur的
如本文所用，术语“慢性疾病或疾患”包括在老年受试者中持续三个月或更长时间的那些疾病和疾患。具体而言，它包括糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾损伤和慢性阻塞性肺疾病。
如本文所用，术语“免疫系统受损”意指免疫系统的至少一种组分的至少一种功能弱于年轻受试者，即年龄小于60岁的受试者。这些功能包括单核细胞对由登革热病毒诱导的氧化应激的抗氧化应答降低，以及响应于登革热病毒感染的T细胞应答和细胞因子产生降低。
如本文所用，将6岁以下儿童中“诱发的全身不良事件”定义为每次疫苗接种后14天内发生的发烧、烦躁/易怒、嗜睡和食欲不振，而在6岁或以上儿童中定义为每次疫苗接种后14天内发生的发烧、头痛、虚弱、不适和肌痛。
如本文所用，“诱发的局部不良事件”是在每次疫苗接种后7天内发生的注射部位疼痛、注射部位红斑和注射部位肿胀。
如本文所用，“非诱发的不良事件”是并非如以上定义的诱发的局部或全身AE的任何不良事件(AE)。
如本文所用，“严重不良事件”或“SAE”是指在任何剂量下均会导致死亡，危及生命，需要住院治疗或延长现有住院治疗，导致持续或严重残疾/丧失能力，是先天性异常/出生缺陷，或由于以上提及的标准以外的其它原因在医学上具有重要意义的任何不幸医学状况或影响。
将使用以下类别来评估每种AE(包括诱发的全身AE(诱发的局部AE被认为相关))与一种或多种试验疫苗的关系：如本文所用，”IP相关AE”或“疫苗相关AE”意指怀疑疫苗与AE之间存在关系(无序确定可能性的程度)；存在疫苗促成AE的合理可能性。如本文所用，“非IP相关”或“非疫苗相关”意指不怀疑疫苗与AE之间存在关系；存在其它更有可能的原因，并且不怀疑施用疫苗会促成AE。
如本文所用，受试者或受试者群体为“2至17岁”是指在施用如本文所述的登革热疫苗组合物的第一天，受试者或受试者群体为2至17岁。
如本文所用，“％点”是指以％值表示的两个％值的差。例如，在5％点以内的以％表示的两个值是指例如1％的一个值和6％的第二个值。
如本文所用，术语“在施用之前确定受试者中的早先登革热感染”意指必须在疫苗接种之前评估早先登革热感染，因为存在实验室确认的登革热病史或通过适当验证的血清学试验，例如通过如本文所公开的方法，诸如实施例2中描述的MNT50试验或根据地区疾病流行病学在特异性和交叉反应性方面具有足够性能的任何血清测试来评估。
如本文所用，％w/v是指％mg/ml，其中例如150mg/ml是15％w/v。
附图说明
图1：TDV中所含的四种登革热毒株的基因结构。红色实心三角形表示5'NCR、NS1和NS3蛋白中存在的三个减毒突变。TDV-1、TDV-3和TDV-4毒株是嵌合病毒，其中分别来自登革热血清型1、3和4的prM和E基因插入TDV-2骨架中。
图2：说明用于测定中和抗体滴度的微量中和试验(MNT)的示意图。
图3：在HD-TDV组(深色，左侧条形)和TDV组(浅色，右侧条形)中在整个试验中，在试验的不同时间点，对于每种登革热血清型呈血清阳性(中和滴度倒数≥10)的受试者的百分比(±95％置信区间)。显示的时间点是基线、第15天(d15)、第30天(d30)、第90天(d90)、第180天(d180)和第365天(d365)。A部分显示了符合方案集的在基线时血清阳性参与者(左侧的一组图)和血清阴性参与者(右侧的一组图)的结果。B部分显示了符合方案集的整个试验群体(所有)的结果
图4：符合方案集的在针对HD-TDV(带三角形的深色线)和TDV(带圆圈的浅色线)接受者，针对整个试验群体(B部分)以及针对在基线时为血清阳性和血清阴性的参与者(A部分)的整个试验过程中，针对四种登革热血清型中的每一种的中和抗体的几何平均滴度(GMT)(±95％置信区间)。
图5：疫苗接种前(基线)和施用TDV后的不同时间点对外周血单核细胞的IFNγELISpot分析。示出了对整个DENV-2蛋白质组的应答频率。如果对来自DENV-2的一个以上肽库的应答为阳性(即，≥4x阴性对照的平均值和≥50SFC/106个PBMC)，则认为该受试者有应答。
图6：疫苗接种前(基线)和施用TDV后的不同时间点对外周血单核细胞的IFNγELISpot分析。示出了对与所示的选定DENV来源的蛋白质相匹配的肽库的应答频率。如果对来自DENV-2的一个以上肽库的应答为阳性(即，≥4x阴性对照的平均值和≥50SFC/106个PBMC)，则认为该受试者有应答。A＝DENV-2C；B＝DENV-1prM+E；C＝DENV-2prM+E；D＝DENV-3prM+E；E＝DENV-4prM+E；F＝DENV-2NS1；G＝DENV-2NS2；H＝DENV-2NS3；I＝DENV-2NS4；J＝DENV-2NS5。
图7：通过TEER确定的来自于向其施用了TDV的血清阴性受试者(A)和血清阳性受试者(A)的血清对DENV-2NS1诱导的通透性过高的影响。使HPMEC在Transwell半透膜(孔径为0.4μm)上生长，在存在或不存在DENV2NS1(5μg/ml)的情况下，将血清样品(30μl)添加到顶端腔室中。将DENV2NS1描绘为正方形；将单独的第0天血清描绘为菱形；将单独的第120天血清描绘为三角形；将第0天血清+DENV2NS1描绘为倒置三角形；将第120天血清+DENV2NS1描绘为X。(^)表示培养基更换。在48小时内的指定时间点测量内皮通透性。将来自一式两份进行的一个独立实验的相对TEER值作图。误差条表示平均值标准误差(SEM)。
图8：来自向其施用了TDV的血清阴性和血清阳性受试者的血清对NS1诱导的唾液酸和硫酸乙酰肝素降解的影响。示出了用唾液酸和硫酸乙酰肝素特异性荧光抗体染色后，通过共聚焦显微镜术观察的(A)唾液酸和(B)硫酸乙酰肝素表达的平均荧光强度(MFI)的定量。将值相对于NS1+阳性对照血清组的MFI(在100％下用虚线表示)进行归一化，并表示为对照的百分比。误差条表示SEM。每个受试者的左侧条形显示第0天(d0)的结果，每个受试者的右侧条形显示第120天(d120)的结果。
图9：实施例6的临床试验的流程图。
图10：在第1部分研究期间，随着时间的推移，按基线血清状态(安全集数据；第18个月截断呈现的数据)的A)病毒学上确认的登革热病例和B)住院治疗的病毒学上确认的登革热病例的累积发生率。表格显示了在第1部分研究期结束时的各个时间点进行随访的参与者数目。
图11：实施例6中描述的III期研究的研究设计
具体实施方式
登革热病毒株
登革热病毒是黄病毒科的单链正义RNA病毒。表1概述了该分类法。黄病毒科包括三个属：黄病毒属、肝炎病毒属和瘟病毒属。黄病毒属含高致病性和潜在出血热病毒，诸如黄热病病毒和登革热病毒；脑炎病毒，诸如日本脑炎病毒；墨累谷脑炎病毒和西尼罗河病毒；以及许多低致病性病毒。
表1.GMO亲本毒株的登革热病毒分类
黄病毒基因组在5'至3'方向包含(参见图1)：
-5'非编码区(5'-NCR)，
-衣壳蛋白(C)编码区，
-前膜蛋白(prM)编码区，
-包膜蛋白(E)编码区，
-编码非结构蛋白(NSl、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)的区域和
-3'非编码区(3'-NCR)。
病毒结构蛋白是C、prM和E，非结构蛋白是NSl至NS5。结构蛋白和非结构蛋白被翻译为单个多聚蛋白，并被细胞和病毒蛋白酶加工。
如本文所述的本发明的单位剂量包含登革热病毒组合物，其包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种活的减毒登革热病毒株(四价登革热病毒组合物)。优选地，所述组合物包含嵌合登革热病毒和任选地至少一种非嵌合登革热病毒，尤其是源自活的减毒DEN-2PDK-53病毒株(TDV-2)的经分子表征和克隆的登革热血清型2毒株，以及源自TDV-2毒株的三种嵌合登革热毒株，其方法是通过将来自TDV-2的结构蛋白prM和E置换为来自其它登革热血清型的相应结构蛋白，从而产生以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体(TDV-1)，
-DENV-2/3嵌合体(TDV-3)和
-DENV-2/4嵌合体(TDV-4)。
经基因修饰的四价登革热疫苗TDV基于经分子表征和克隆的登革热2病毒株(TDV-2)。这种减毒的TDV-2毒株是通过对实验室来源的减毒DEN-2PDK-53病毒株进行cDNA克隆产生的，该病毒株最初是在泰国曼谷的玛希隆大学(Mahidol University)分离的(Kinney等人(1997)Virology 230(2):300-308)。DEN-2PDK-53是通过在32℃下在原代犬肾(PDK)细胞中连续53次传代产生的(Bhamarapravati等人(1987)Bull.World Health Organ.65(2):189-195)。
减毒的DEN-2PDK-53毒株(TDV-2的前体)源自野生型病毒株DEN-2 16681(SEQ IDNO 11)并且与野生型有如下9个核苷酸不同(Kinney等人(1997)Virology 230(2):300-308)：
(i)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)：主要减毒基因座
(ii)prM-29Asp变为Val(核苷酸524A变为T)
(iii)核苷酸2055C变为T(E基因)沉默突变
(iv)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)：主要减毒基因座
(v)NS2A-181Leu变为Phe(核苷酸4018C变为T)
(vi)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)：主要减毒基因座
(vii)核苷酸5547(NS3基因)T变为C沉默突变
(viii)NS4A-75Gly变为Ala(核苷酸6599G变为C)
*核苷酸8571C变为T(NS5基因)沉默突变
位于5'非编码区(NCR)(核苷酸57)(突变(i))、NS-1(SEQ ID NO.4的氨基酸828)(突变(iv))和NS-3基因(SEQ ID NO.4的氨基酸1725)(突变(vi))中的三个核苷酸变化形成DEN-2PDK-53毒株的减毒表型的基础(Butrapet等人(2000)J.Virol.74(7):3111-3119)(表2)。这三个突变在本文中称为“减毒突变”，并且包含在TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4中。
表2.所有TDV毒株共同基因骨架中的减毒突变
在一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-2还包含一种或多种选自以下的突变：
a)prM基因中核苷酸524处腺嘌呤向胸腺嘧啶的突变，导致位置143处的氨基酸从天冬酰胺变为缬氨酸，和/或
b)E基因中核苷酸2055处胞嘧啶向胸苷的沉默突变，和/或
c)NS2A基因中核苷酸4018处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置1308处的氨基酸从亮氨酸变为苯丙氨酸，和/或
d)NS3基因中核苷酸5547处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变，和/或
e)NS4A基因中核苷酸6599处从鸟嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置2168处的氨基酸从甘氨酸变为丙氨酸，和/或
f)prM基因中核苷酸900处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变。
TDV-2毒株中不存在DEN-2PDK-53的NS5基因中核苷酸8571处从胞嘧啶向胸苷的沉默突变。
在另一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-2还包含一种或多种选自以下的突变：
g)prM基因中核苷酸592处腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置166处的氨基酸从赖氨酸变为谷氨酰胺，和/或
h)NS5基因中核苷酸8803处从腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置2903处的氨基酸从异亮氨酸变为缬氨酸。
在另一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-2还包含突变a)和g)，优选突变a)、g)、c)、e)和h)，更优选突变a)、g)、c)、e)、h)和b)，甚至更优选突变a)、g)、c)、e)、h)、b)和d)，且最优选突变a)至h)。TDV-2的核苷酸位置和氨基酸位置是指如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。
登革热病毒的结构包膜(E)蛋白和前膜(prM)蛋白已被鉴定为引起中和保护性抗体应答的主要抗原(Plotkin 2001)。为了产生四价登革热疫苗(TDV)，通过使用标准的分子基因工程方法(Huang等人(2003)J.Virol.77(21):11436-11447)，用分别来自DENV-1、DENV-3和DENV-4野生型毒株DENV-1 16007、DENV-3 16562或DENV-4 1036(参见表3)的编码相应野生型prM和E糖蛋白的核酸序列置换编码DENV-2prM和E糖蛋白的核酸序列来修饰TDV-2。
表3.TDV病毒株prM/E基因区的病毒起源
登革热疫苗组合物中包含的四种TDV毒株的图表如图1所示。
嵌合登革热毒株TDV-1、TDV-3和TDV-4分别表达DENV-1、DENV-3或DENV-4病毒的表面抗原prM和E，如表3所示，并保留引起TDV-2减毒的基因改变。因此，TDV-1、TDV-3和TDV-4毒株中的每一种均包含表2中描述的减毒突变。
在一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-1还包含一种或多种选自以下的突变：
c)NS2A基因中核苷酸4018处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置1308处的氨基酸从亮氨酸变为苯丙氨酸，和/或
d)NS3基因中核苷酸5547处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变，和/或
e)NS4A基因中核苷酸6599处从鸟嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置2168处的氨基酸从甘氨酸变为丙氨酸，和/或
i)E基因中核苷酸1575处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变，和/或
j)prM-E基因与DEN-2PDK-53骨架之间的连接位点中核苷酸453处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变，和/或
k)prM-E基因与DEN-2PDK-53骨架之间的连接位点中核苷酸2381/2382处从胸苷-鸟嘌呤向胞嘧啶-胞嘧啶的突变，导致位置762处的氨基酸从缬氨酸变成丙氨酸。
在另一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-1还包含一种或多种选自以下的突变：
l)NS2A基因中核苷酸3823处从腺嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置1243处的氨基酸从异亮氨酸变为亮氨酸，和/或
m)NS2B基因中核苷酸4407处从腺嘌呤向胸苷的突变，导致位置1437处的氨基酸从谷氨酰胺变为天冬酰胺，和/或
n)NS4B基因中核苷酸7311处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变。
在另一个实施方案中，TDV-1毒株除三个减毒突变外还包含突变l)和m)，优选突变l)、m)、c)和e)，甚至更优选突变l)、m)、c)、e)、d)和n)，且最优选突变l)、m)、c)、e)、d)、n)、i)、j)和k)。TDV-1的核苷酸位置和氨基酸位置是指如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-3还包含一种或多种选自以下的突变：
c)NS2A基因中核苷酸4012处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置1306处的氨基酸从亮氨酸变为苯丙氨酸，和/或
d)NS3基因中核苷酸5541处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变，和/或
e)NS4A基因中核苷酸6593处从鸟嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置2166处的氨基酸从甘氨酸变为丙氨酸，和/或
j)prM-E基因与DEN-2PDK-53骨架之间的连接位点中核苷酸453处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变，和/或
k)prM-E基因与DEN-2PDK-53骨架之间的连接位点中核苷酸2375/2376处从胸苷-鸟嘌呤向胞嘧啶-胞嘧啶的突变，导致位置760处的氨基酸从缬氨酸变成丙氨酸，和/或
o)prM基因中核苷酸552处从胞嘧啶向胸苷的沉默突变，和/或
p)E基因中核苷酸1970处从腺嘌呤向胸苷的突变，导致位置625处的氨基酸从组氨酸变为亮氨酸。
在另一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-3还包含一种或多种选自以下的突变：
q)E基因中核苷酸1603处腺嘌呤向胸苷的突变，导致位置503处的氨基酸从苏氨酸变为丝氨酸，和/或
r)NS5基因中核苷酸7620处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变。
在另一个实施方案中，TDV-3除三个减毒突变外还包含突变p)和q)，优选突变p)、q)、c)和e)，甚至更优选突变p)、q)、c)、e)、d)和r)，且最优选突变p)、q)、c)、e)、d)、r)、j)、k)和o)。TDV-3的核苷酸位置和氨基酸位置是指如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列和如SEQID NO.6所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-4还包含一种或多种选自以下的突变：
c)NS2A基因中核苷酸4018处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置1308处的氨基酸从亮氨酸变为苯丙氨酸，和/或
d)NS3基因中核苷酸5547处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变，和/或
e)NS4A基因中核苷酸6599处从鸟嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置2168处的氨基酸从甘氨酸变为丙氨酸，和/或
j)prM-E基因与DEN-2PDK-53骨架之间的连接位点中核苷酸453处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变，和/或
k)prM-E基因与DEN-2PDK-53骨架之间的连接位点中核苷酸2381/2382处从胸苷-鸟嘌呤向胞嘧啶-胞嘧啶的突变，导致位置762处的氨基酸从缬氨酸变成丙氨酸，和/或
s)C基因中核苷酸396处从腺嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置100处的氨基酸从精氨酸变为丝氨酸，和/或
t)E基因中核苷酸1401处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变，和/或
u)E基因中核苷酸2027处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置644处的氨基酸从丙氨酸变为缬氨酸，和/或
v)E基因中核苷酸2275处从腺嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置727处的氨基酸从甲硫氨酸变为亮氨酸。
在另一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-4还包含一种或多种选自以下的突变：
w)C基因中核苷酸225处从腺嘌呤向胸苷的沉默突变，和/或
x)NS2A基因中核苷酸3674处从腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置1193处的氨基酸从天冬酰胺变为甘氨酸，和/或
y)NS2A基因中核苷酸3773处从腺嘌呤向腺嘌呤/鸟嘌呤混合物的突变，导致位置1226处的氨基酸从赖氨酸变为赖氨酸/天冬酰胺混合物，和/或
z)NS3基因中核苷酸5391处从胞嘧啶向胸苷的沉默突变，和/或
aa)NS4A基因中核苷酸6437处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置2114处的氨基酸从丙氨酸变为缬氨酸，和/或
bb)NS4B基因中核苷酸7026处从胸腺嘧啶向胸苷/胞嘧啶混合物的沉默突变，和/或
cc)NS5基因中核苷酸9750处从腺嘌呤向胞嘧啶的沉默突变。
在另一个实施方案中，除三个减毒突变外TDV-4还包含突变s)、u)和v)，优选突变s)、u)、v)、c)、e)、x)、y)和aa)，甚至更优选突变s)、u)、v)、c)、e)、x)、y)、aa)和w)，甚至更优选突变s)、u)、v)、c)、e)、x)、y)、aa)、w)、d)、z)、bb)和cc)，且最优选突变s)、u)、v)、c)、e)、x)、y)、aa)、w)、d)、z)、bb)、cc)、j)、k)和t)。TDV-4的核苷酸位置和氨基酸位置是指如SEQID NO.7所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
在一个优选的实施方案中，TDV-1具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，TDV-2具有SEQID NO.3的核苷酸序列，TDV-3具有SEQ ID NO.5的核苷酸序列，和/或TDV-4具有SEQ IDNO.7的核苷酸序列。在另一个优选的实施方案中，TDV-1具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，TDV-2具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，TDV-3具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且TDV-4具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，TDV-1具有编码SEQ ID NO.2的氨基酸序列的核苷酸序列，TDV-2具有编码SEQ ID NO.4的氨基酸序列的核苷酸序列，TDV-3具有编码SEQ ID NO.6的氨基酸序列的核苷酸序列，并且TDV-4具有编码SEQ ID NO.8的氨基酸序列的核苷酸序列。
表4.TDV病毒株的序列
| SEQ ID NO. | 登革热病毒株 | 序列类型 |
| SEQ ID NO.1 | TDV-1 | 核苷酸序列 |
| SEQ ID NO.2 | TDV-1 | 氨基酸序列 |
| SEQ ID NO.3 | TDV-2 | 核苷酸序列 |
| SEQ ID NO.4 | TDV-2 | 氨基酸序列 |
| SEQ ID NO.5 | TDV-3 | 核苷酸序列 |
| SEQ ID NO.6 | TDV-3 | 氨基酸序列 |
| SEQ ID NO.7 | TDV-4 | 核苷酸序列 |
| SEQ ID NO.8 | TDV-4 | 氨基酸序列 |
因此，在一个特别优选的实施方案中，本文所述的本发明的单位剂量包含活的减毒登革热病毒株TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4，其中TDV-1、TDV-3和TDV-4基于TDV-2并且分别包含DENV-1、DENV-3和DENV-4的prM和E区。在另一个特别优选的实施方案中，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
DENV-3的E蛋白比DENV-2的E蛋白少两个氨基酸。因此，TDV-2的核苷酸和编码的氨基酸骨架在DENV-3的E区之后从SEQ ID NO.5的核苷酸2374和SEQ ID NO.6的氨基酸760开始，分别比原始TDV-2核苷酸和氨基酸位置少6个核苷酸和少2个氨基酸。
登革热疫苗组合物
本发明部分涉及所述的登革热疫苗组合物的单位剂量。登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物(也称为登革热病毒组合物)，以及药学上可接受的赋形剂。
登革热病毒组合物、病毒浓度和％浓度
本发明部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，其中所述登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株：
(i)优选浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的登革热血清型1，
(ii)优选浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2，
(iii)优选浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的登革热血清型3，和
(iv)优选浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的登革热血清型4毒株。
在一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株：
(i)优选浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL至3.8log10pfu/0.5mL的登革热血清型1，
(ii)优选浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2，
(iii)优选浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的登革热血清型3，和
(iv)优选浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml或4.6log10pfu/0.5mL，任选地达到6.2log10pfu/0.5ml的登革热血清型4毒株。
本发明还部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，其中所述登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
在一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL至3.8log10pfu/0.5ml的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL或至少4.6log10pfu/0.5mL，至任选地6.2log10pfu/0.5ml的嵌合登革热血清型2/4毒株。
优选地，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。
在一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.3log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至6.0log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.5log10pfu/0.5mL。
在一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL。
在另一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至5.5log10pfu/剂。
在另一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至4.1log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至3.6log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至4.7log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至5.3log10pfu/剂。
在另一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至3.6log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.0log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至4.6log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/0.5ml或4.6log10pfu/0.5mL至5.1log10pfu/0.5mL。
在另一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为4.3log10pfu/0.5mL至4.4log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为3.7log10pfu/0.5mL至3.8log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为5.5log10pfu/0.5mL至5.6log10pfu/0.5mL。
在一个特别优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为4.4log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为3.8log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.5log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为5.6log10pfu/0.5mL。
在另一个特别优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.6log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为4.0log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.6log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为5.1log10pfu/0.5mL。
在另一个优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中所有四种血清型的算术总和小于6.7log10pfu/0.5mL，优选小于5.5log10pfu/0.5mL。在某些此类实施方案中，所有四种血清型的算术总和为至少4.6log10pfu/0.5mL。在一个优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中所有四种血清型的算术总和在4.6log10pfu/0.5mL至6.7log10pfu/0.5mL的范围内，优选在4.6log10pfu/0.5mL至5.5log10pfu/0.5mL的范围内。
优选地，在所述实施方案中，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。更优选地，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
本发明部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，其中所述登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/剂的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/剂的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/剂的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)，以及
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/剂的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)。
在一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至5.3log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至5.0log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至6.0log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至6.5log10pfu/剂。
在一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至6.2log10pfu/剂。
在另一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至5.5log10pfu/剂。
在另一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至4.1log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至3.6log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至4.7log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至5.3log10pfu/剂。
在另一个此类实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至3.6log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至4.0log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至4.6log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂，4.6log10pfu/剂至5.1log10pfu/剂。
在另一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为4.3log10pfu/剂至4.4log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为3.7log10pfu/剂至3.8log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至5.0log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为5.5log10pfu/剂至5.6log10pfu/剂。
在一个特别优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为4.4log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为3.8log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为5.6log10pfu/剂。
在另一个特别优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.6log10pfu/剂，
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂，
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.6log10pfu/剂，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为5.1log10pfu/剂。
在另一个优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中所有四种血清型的算术总和小于6.7log10pfu/剂，优选小于5.5log10pfu/剂。在某些此类实施方案中，所有四种血清型的算术总和为至少4.6log10pfu/剂。在一个优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中所有四种血清型的算术总和在4.6log10pfu/剂至6.7log10pfu/剂的范围内，优选在4.6log10pfu/剂至5.5log10pfu/剂的范围内。
在一个实施方案中，组合物(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度，并且基于所述浓度，(iii)的浓度是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少10％。
在一个实施方案中，组合物(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度，并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％。
优选在重构单位剂量中(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少10％。
在一个实施方案中，组合物(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度，并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％。
优选地，在所述实施方案中，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。更优选地，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
不同登革热病毒的浓度优选通过本领域已知的免疫聚焦测定法确定。例如，可以通过免疫聚焦测定法确定浓度，其中将登革热病毒的连续稀释液施加于单层粘附细胞(诸如Vero细胞)。在允许感染性病毒与细胞结合并且被细胞吸收的一段时间后，添加含有增稠剂(诸如琼脂糖或羧甲基纤维素)的覆盖物以防止病毒扩散，使得子代病毒只能感染与原始感染细胞相邻的细胞。孵育一段时间允许病毒复制后，使用血清型特异性抗登革热单克隆抗体和二抗(诸如用碱性磷酸酶标记的抗体)将细胞固定并染色。通过添加与二抗附接的酶的合适底物，诸如5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸/硝基蓝四唑鎓磷酸酶底物，对病灶进行染色。板上的噬斑数目对应于施加于细胞的溶液中的病毒的噬斑形成单位。例如，浓度为1,000pfu/μl表示施加于细胞的1μl溶液含有足够的病毒，在细胞单层中产生1,000个噬斑。
登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中嵌合登革热血清型2/1毒株、登革热血清型2毒株、嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株提供以pfu/0.5mL计的总浓度。术语“以pfu/0.5mL计的总浓度”或“以pfu/剂计的总浓度”是登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)、登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)、登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)和登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度总和，优选为TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4的浓度总和，并且定义为按0.5mL或一定剂量中的pfu(噬斑形成单位)测定的登革热病毒浓度的100％。
在一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)、登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)、登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)和登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)提供以pfu/0.5mL计的总浓度，其中基于所述总浓度以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度小于总浓度的10％，或小于总浓度的8％或小于总浓度的6％，并且其中以pfu/0.5mL测量的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为总浓度的至少50％或至少60％或至少65％。在一个实施方案中，基于所述总浓度，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为总浓度的0.3％至10％或0.5％至8％，并且以pfu/0.5mL测量的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为总浓度的50％至90％或60％至88％。这意味着登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度低于登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度。
在一个此类实施方案中，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为总浓度的至少1％，和/或以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为总浓度的至少6％，或者为总浓度的至少7％或8％、10％、12％、14％、16％或18％。在一个此类实施方案中，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为总浓度的1％至7％或2％至6％或2.0％至5.0％，和/或以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为总浓度的6％至25％或7％至25％或10％至25％或18％至25％。这意味着登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度低于登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度。
在一个优选的实施方案中，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2毒株(诸如TDV-2)的浓度小于总浓度的10％，优选小于6％或小于2％，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)的浓度为总浓度的至少50％，优选至少65％，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)为总浓度的至少1％，优选1％至7％或2.0％至5.0％之间，并且以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)的浓度为总浓度的至少6％，优选6％至25％或10％至25％或18％至25％之间。
在另一个优选的实施方案中，提供了登革热病毒组合物，其包含登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)、登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)、登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)和登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)，诸如TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4，其中以pfu/0.5mL测量的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为总浓度的至少1％，优选1％至7％或2.0％至5.0％之间，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度小于总浓度的10％，优选小于6％或小于2％，并且以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为总浓度的至少6％，优选6％至25％或10％至25％或18％至25％之间。特别优选，登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)在所有四种登革热血清型中具有最高的浓度。
在另一个优选的实施方案中，登革热疫苗组合物包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中以pfu/0.5mL测量的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为总浓度的1％至7％，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度小于总浓度的8％，诸如在总浓度的1％至8％的范围内，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为总浓度的至少10％，并且以pfu/0.5mL测量的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为总浓度的至少65％，诸如在65％至80％的范围内。在某些此类实施方案中，所有四种血清型的算术总和在4.6log10pfu/0.5mL至6.7log10pfu/0.5mL的范围内，优选在4.6log10pfu/0.5mL至5.5log10pfu/0.5mL的范围内。
在另一个优选的实施方案中，登革热病毒血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)和登革热病毒血清型2(例如登革热血清型2毒株)(诸如TDV-2)各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在和/或合起来小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％。在某些此类实施方案中，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)优选为以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，更优选登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。在某些此类实施方案中，登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)在所有四种血清型中占组合物中的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)在所有四种血清型中占组合物中的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)和登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)(诸如TDV-2)各自所占的浓度低于血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)的浓度，并且任选地合起来占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
优选地，在所述实施方案中，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。更优选地，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
根据另一个实施方案，嵌合登革热血清型2/4毒株，优选TDV-4，在登革热疫苗组合物中具有最高浓度，接着是嵌合登革热血清型2/3毒株，优选TDV-3，接着是嵌合登革热血清型2/1毒株，优选TDV-1，接着是登革热血清型2毒株，优选TDV-2。特别优选的是，登革热血清型2毒株在登革热疫苗组合物中存在的四种毒株中具有最低的浓度。
每当提及浓度/0.5ml时，这并不会将本文所述的单位剂量的体积限制为0.5ml。0.5ml是用于测定组合物中以pfu/ml计的病毒株浓度的参考体积。每单位剂量的体积和/或量在相应章节中有描述。
药学上可接受的赋形剂
本发明部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，其中登革热疫苗组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。在一个实施方案中，登革热疫苗组合物包含非还原糖、表面活性剂、蛋白质和无机盐。优选地，非还原糖是海藻糖，表面活性剂是泊洛沙姆407(poloxamer 407)，蛋白质是人血清白蛋白，无机盐是氯化钠。
在一个实施方案中，登革热疫苗组合物的单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约10％w/v至约20％w/v的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，
-约0.5％w/v至约1.5％w/v的泊洛沙姆407，
-约0.05％w/v至约2％w/v的人血清白蛋白，和
-约70mM至140mM的氯化钠。
在一个实施方案中，当以0.5ml测量时，登革热疫苗组合物的单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约10％w/v至约20％w/v的α,α-海藻糖或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，
-约0.5％w/v至约1.5％w/v的泊洛沙姆407，
-约0.05％w/v至约2％w/v的人血清白蛋白，和
-约70mM至140mM的氯化钠，并且优选
-pH为7至8.5。
在一个实施方案中，当以0.5ml测量时，登革热疫苗组合物的单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约143mg/ml至约185mg/ml的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，
-约9.1mg/ml至约12.4mg/ml的泊洛沙姆407，
-约0.88％mg/ml至约1.32mg/ml的人血清白蛋白，和
-约70mM至140mM的氯化钠，并且优选
-pH为7至8.5。
在一个优选的实施方案中，如本文所述的本发明的冻干单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约15％w/v的α,α-海藻糖二水合物，
-约1％w/v的泊洛沙姆407，
-约0.1％w/v的人血清白蛋白，和
-约100mM的氯化钠。
在一个优选的实施方案中，当以0.5ml测量时，如本文所述的本发明的冻干单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约15％w/v的α,α-海藻糖，
-约1％w/v的泊洛沙姆407，
-约0.1％w/v的人血清白蛋白，和
-约100mM的氯化钠。
在一个优选的实施方案中，如本文所述的本发明的冻干单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约82.9mg的α,α-海藻糖二水合物，
-约5mg泊洛沙姆407，
-约0.5mg人血清白蛋白，和
-约50微摩尔的氯化钠。
在一个优选的实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约15％w/v的α,α-海藻糖二水合物，
-约1％w/v的泊洛沙姆407，
-约0.1％w/v的人血清白蛋白，和
-约137mM的氯化钠，并且优选
-pH为7至8.5。
在一个优选的实施方案中，当以0.5ml测量时，如本文所述的本发明的重构单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约15％w/v的α,α-海藻糖，
-约1％w/v的泊洛沙姆407，
-约0.1％w/v的人血清白蛋白，和优选
-约137mM的氯化钠，并且优选
-pH为7至8.5。
在一个优选的实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量包含以下药学上可接受的赋形剂：
-约82.9mg的α,α-海藻糖二水合物，
-约5mg泊洛沙姆407，
-约0.5mg人血清白蛋白，和优选
-约68.5微摩尔的氯化钠，并且优选
-pH为7至8.5。
人血清白蛋白可以是天然或重组人血清白蛋白(rHSA)。泊洛沙姆407可以是例如普朗尼克F127(Pluronic F127)。
在一个实施方案中，单位剂量还包含缓冲剂。缓冲剂可以是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。缓冲剂可包括氯化钠(NaCl)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、氯化钾(KCl)和磷酸二氢钾(KH2PO4)中的至少一种。在一个优选的实施方案中，缓冲剂可以包括磷酸氢二钠(Na2HPO4)、氯化钾(KCl)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。该缓冲剂在25℃下的pH可以在7.0至8.5的范围内。
本发明部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，该组合物包含如本文所述的四价登革热病毒组合物和如本文所述的药学上可接受的赋形剂。
本发明部分地涉及如上所述的登革热疫苗组合物的单位剂量，该登革热疫苗组合物例如具有：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)，以及
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)。
优选地，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。更优选地，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
在一个实施方案中，单位剂量是冻干的。在一个此类实施方案中，通过将0.5mL体积的通过组合如本文所述的药学上可接受的赋形剂和包含四种登革热病毒株(尤其是TDV-1至TDV-4)的如本文所述的登革热病毒组合物而产生的水性登革热疫苗组合物进行冻干而获得冻干单位剂量。在一个优选的实施方案中，通过卡尔费休测定法(Karl FischerDetermination)测定的残余水分含量等于或小于5.0％，优选等于或小于3％。
在另一个实施方案中，单位剂量是重构的。通过使冻干单位剂量用药学上可接受的稀释剂进行重构，优选在施用登革热疫苗之前，获得重构单位剂量。在一个此类实施方案中，通过将药学上可接受的稀释剂(诸如注射用水、磷酸盐缓冲盐水或氯化钠水溶液)添加到冻干单位剂量中来完成重构。在一个实施方案中，将氯化钠水溶液诸如37mM氯化钠水溶液添加到冻干单位剂量中进行重构。在一个此类实施方案中，将冻干单位剂量用0.3至0.8mL，或0.4至0.7mL，或0.5mL的稀释剂重构。在一个优选的实施方案中，将冻干单位剂量用0.3至0.8mL，0.4至0.7mL或0.5mL的37mM氯化钠水溶液重构。在一个更优选的实施方案中，将冻干单位剂量用0.5mL的37mM氯化钠水溶液重构。重构单位剂量随后可以皮下施用。
优选的是，冻干形式的单位剂量是单位剂量制造后的成品和单位剂量的储存形式，其中重构形式的单位剂量是在将单位剂量施用于受试者之前制备的。
而且，本发明部分地涉及登革热疫苗组合物的单位剂量，该组合物包含：
四价病毒组合物，所述四价病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒株，其中所述单位剂量经冻干并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，诸如嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，诸如登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，诸如嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4，诸如嵌合登革热血清型2/4毒株。
在一个实施方案中，重构单位剂量的体积为例如0.5mL，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述浓度，(iii)的浓度是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少10％。
在另一个实施方案中，重构单位剂量的体积为例如0.5mL，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％。
优选在重构单位剂量中(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少10％。
在另一个实施方案中，重构单位剂量的体积为例如0.5mL，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％。
在一个实施方案中，本发明涉及登革热疫苗组合物的冻干单位剂量，其在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)和浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)以及如本文所述的药学上可接受的赋形剂，其中单位剂量优选在冻干前配制成0.5mL。优选地，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。更优选地，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
在一个此类实施方案中，通过将0.5mL的登革热疫苗组合物冻干来获得冻干单位剂量，该登革热疫苗组合物包含：浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/0.5mL的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/0.5mL的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)和浓度为4.5log10pfu/剂至5.5log10pfu/0.5mL的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)以及如本文所述的药学上可接受的赋形剂。优选地，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。
在一个此类实施方案中，通过将0.5mL的登革热疫苗组合物冻干来获得冻干单位剂量，该登革热疫苗组合物包含：浓度为3.3log10pfu/0.5mL至3.6log10pfu/0.5mL的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)，浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.0log10pfu/0.5mL的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)，浓度为4.0log10pfu/0.5mL至4.6log10pfu/0.5mL的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)和浓度为4.5log10pfu/0.5mL或4.6log10pfu/0.5mL至5.1log10pfu/0.5mL的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)以及如本文所述的药学上可接受的赋形剂。优选地，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。
在某些实施方案中，冻干单位剂量是指冻干之前的0.5mL，其中基于TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4以pfu/0.5mL计的总浓度，TDV-2和TDV-4以某些相对量存在，并且以pfu/0.5mL测量的TDV-2浓度小于10％或小于8％或小于6％，并且以pfu/0.5mL测量的TDV-4浓度为至少50％或至少65％。在这些实施方案的一些中，以pfu/0.5mL测量的TDV-1的浓度为至少1％和/或以pfu/0.5mL测量的TDV-3的浓度为至少6％、7％、8％、10％、12％、14％、16％或至少18％。
在某些实施方案中，重构单位剂量的体积为0.5mL，并且基于TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4以pfu/0.5mL计的总浓度，TDV-2和TDV-4以某些相对量存在，并且以pfu/0.5mL测量的TDV-2浓度小于10％或小于8％或小于6％，并且以pfu/0.5mL测量的TDV-4浓度为至少50％或至少65％。在这些实施方案的一些中，以pfu/0.5mL测量的TDV-1的浓度为至少1％和/或以pfu/0.5mL测量的TDV-3的浓度为至少6％、7％、8％、10％、12％、14％、16％或至少18％。
在另一个优选的实施方案中，重构单位剂量的体积为0.5mL并且包含四价登革热病毒组合物，该四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中以pfu/0.5mL测量的登革热血清型1(例如登革热血清型2/1毒株)的浓度为总浓度的1％至7％，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度小于总浓度的8％，诸如在总浓度的1％至8％的范围内，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如登革热血清型2/3毒株)的浓度为总浓度的至少10％，并且以pfu/0.5mL测量的登革热血清型4(例如登革热血清型2/4毒株)的浓度为总浓度的至少65％，诸如在65％至80％的范围内。在某些此类实施方案中，所有四种血清型的算术总和在4.6log10pfu/0.5mL至6.7log10pfu/0.5mL的范围内，优选在4.6log10pfu/0.5mL至5.5log10pfu/0.5mL的范围内。
在另一个优选的实施方案中，重构单位剂量的体积为0.5mL并且包含四价登革热病毒组合物，该四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，其中登革热病毒血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)和登革热病毒血清型2(例如登革热血清型2毒株)(诸如TDV-2)各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在和/或合起来小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％。在某些此类实施方案中，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)优选为以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，更优选登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。在某些此类实施方案中，登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)在所有四种血清型中占组合物中的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)在所有四种血清型中占组合物中的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)和登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)(诸如TDV-2)各自所占的浓度低于血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)的浓度，并且任选地合起来占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
以0.5mL重构的冻干单位剂量将为四种登革热血清型提供上述浓度。虽然如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量涉及0.5mL中登革热血清型的浓度，但是冻干单位剂量可以用其它体积的药学上可接受的稀释剂(诸如氯化钠水溶液)重构，无需改变所施用的病毒绝对量或病毒彼此的比率。
在某些实施方案中，本发明的冻干单位剂量是由包含非还原糖、表面活性剂、蛋白质和无机盐的溶液制备的。
在某些实施方案中，本发明的冻干单位剂量是由包含海藻糖、泊洛沙姆407、人血清白蛋白和氯化钠的溶液制备的。
在某些实施方案中，本发明的冻干单位剂量是由包含约10％w/v至约20％w/v的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，约0.5％w/v至约1.5％w/v的泊洛沙姆407，约0.05％w/v至约2％w/v的人血清白蛋白和约70mM至约120mM的氯化钠的溶液制备的。
在优选的实施方案中，如本文所述的本发明的冻干单位剂量是由包含约15％w/v的α,α-海藻糖二水合物、约1％w/v的泊洛沙姆407、约0.1％w/v的人血清白蛋白和约100mM的氯化钠的溶液制备的。
在一个实施方案中，由其制备冻干单位剂量的溶液还包含缓冲剂。缓冲剂可以是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。缓冲剂可包括氯化钠(NaCl)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、氯化钾(KCl)和磷酸二氢钾(KH2PO4)中的至少一种。在一个优选的实施方案中，缓冲剂可以包括磷酸氢二钠(Na2HPO4)、氯化钾(KCl)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。缓冲剂在25℃下的pH可以在约7.0至约8.5的范围内，或者在25℃下的pH可为约6.8至约7.6，优选在25℃下的pH为约7.2。
在优选的实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量包含约15％w/v的α,α-海藻糖二水合物、约1％w/v的泊洛沙姆407、约0.1％w/v的人血清白蛋白和约137mM的氯化钠。重构单位剂量在25℃下的pH可为约7.0至约8.5，优选在25℃下的pH为约7.2。
如本文所述的本发明的单位剂量激活血清阴性和血清阳性受试者群体中或血清阴性和血清阳性受试者中的免疫系统的多个臂–中和抗体、细胞免疫和抗NS1抗体。因此，如本文所述的本发明的单位剂量保护登革热血清阴性和登革热血清阳性受试者群体或受试者免于登革热病。
在一个实施方案中，在容器中，优选在小瓶中存在一个单位剂量，并且将所述单位剂量在重构后施用于受试者。在一个实施方案中，可以在容器中，优选在小瓶中存在一个以上单位剂量的登革热疫苗组合物，使得用一个容器(优选小瓶)中的内容物，可以为一个以上的受试者进行疫苗接种。在一个实施方案中，使用包含一个以上如本文所述的本发明的单位剂量的容器提供重构单位剂量，该重构单位剂量要在如本文所述的本发明的方法中使用。
在某些实施方案中，包含本发明的单位剂量的容器是试剂盒的一部分。因此，本发明部分地涉及用于制备重构单位剂量的试剂盒，该试剂盒包含如本文所述的本发明的冻干单位剂量和用于重构的药学上可接受的稀释剂。
在某些实施方案中，用于重构的稀释剂在容器中，优选在小瓶或预填充注射器中提供。在一些实施方案中，用于重构的稀释剂选自注射用水、磷酸盐缓冲盐水或氯化钠水溶液。在一个优选的实施方案中，用于重构的稀释剂是30至40mM的氯化钠，诸如37mM的氯化钠。
在某些实施方案中，试剂盒还可包含黄热病疫苗，尤其是YF-17D。在一些实施方案中，黄热病疫苗可以处于单独的容器，诸如小瓶中。在另一个实施方案中，黄热病疫苗和本发明的单位剂量可以处于同一容器中。因此，本发明部分地涉及登革热/黄热病联合疫苗，其中如本文所述的本发明的单位剂量与黄热病疫苗组合。此类登革热/黄热病联合疫苗在同一配制品中包含如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗，尤其是YF-17D。在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包含此类登革热/黄热病联合疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，试剂盒还可包含甲型肝炎疫苗，诸如
或
在一些实施方案中，甲型肝炎疫苗可以处于单独的容器，诸如小瓶中。在另一个实施方案中，甲型肝炎疫苗和本发明的单位剂量可以处于同一容器中。因此，本发明部分地涉及登革热/甲型肝炎联合疫苗，其中如本文所述的本发明的单位剂量与甲型肝炎疫苗组合。此类登革热/甲型肝炎联合疫苗在同一配制品中包含如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗，诸如
或
在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包含此类登革热/甲型肝炎联合疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，试剂盒还可包含HPV疫苗，尤其是9vHPV疫苗，诸如
9。在一些实施方案中，HPV疫苗可以处于单独的容器，诸如小瓶中。在另一个实施方案中，HPV疫苗和本发明的单位剂量可以处于同一容器中。因此，本发明部分地涉及登革热/HPV联合疫苗，其中如本文所述的本发明的单位剂量与HPV疫苗组合。此类登革热/HPV联合疫苗在同一配制品中包含如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗，尤其是9vHPV疫苗，诸如
9。在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包含此类登革热/HPV联合疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，试剂盒还可包含MMR疫苗，诸如
II。在一些实施方案中，MMR疫苗可以处于单独的容器，诸如小瓶中。在另一个实施方案中，MMR疫苗和本发明的单位剂量可以处于同一容器中。因此，本发明部分地涉及登革热/MMR联合疫苗，其中如本文所述的本发明的单位剂量与MMR疫苗组合。此类登革热/MMR联合疫苗在同一配制品中包含如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗，诸如
II。在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包含此类登革热/MMR联合疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，试剂盒还可包含Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗，诸如
在一些实施方案中，Tdap疫苗可以处于单独的容器，诸如小瓶中。在另一个实施方案中，Tdap疫苗和本发明的单位剂量可以处于同一容器中。因此，本发明部分地涉及登革热/Tdap联合疫苗，其中如本文所述的本发明的单位剂量与Tdap疫苗组合。此类登革热/Tdap联合疫苗在同一配制品中包含如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗，诸如
在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包含此类登革热/Tdap联合疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，试剂盒还可包含DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
在一些实施方案中，DTaP/IPV/Hib疫苗可以处于单独的容器，诸如小瓶中。在另一个实施方案中，DTaP/IPV/Hib疫苗和本发明的单位剂量可以处于同一容器中。因此，本发明部分地涉及登革热/DTaP/IPV/Hib联合疫苗，其中如本文所述的本发明的单位剂量与DTaP/IPV/Hib疫苗组合。此类登革热/DTaP/IPV/Hib联合疫苗在同一配制品中包含如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包含此类登革热/DTaP/IPV/Hib联合疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量。
黄热病疫苗
甲型肝炎疫苗
HPV疫苗
MMR疫苗
现有技术中已知几种MMR疫苗并且包括
和
破伤风毒素是通过使破伤风梭状芽胞杆菌(Clostridium tetani)在源自牛酪蛋白的改良Latham培养基中生长而产生的。白喉毒素是通过使白喉杆菌(Corynebacteriumdiphtheriae)在含有牛提取物的Fenton培养基中生长而产生的。两种毒素均用甲醛解毒，通过超滤浓缩，并通过沉淀、透析和无菌过滤纯化。通过测量先前免疫接种的豚鼠的中和抗毒素的量来测定破伤风和白喉类毒素的效力。
从在改良的Stainer-Scholte液体培养基中生长的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)培养物中分离无细胞百日咳抗原(iPT、FHA和PRN)。从发酵液中分离出iPT和FHA，通过热处理和絮凝从细胞中提取PRN。在连续的色谱和沉淀步骤中纯化抗原。使用戊二醛和甲醛对iPT进行解毒。用甲醛处理FHA和PRN。每种抗原单独地吸附到氢氧化铝上。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)对来自先前免疫接种的小鼠的血清测定无细胞百日咳组分(灭活的iPT和经甲醛处理的FHA和PRN)的效力。
每0.5mL剂量含有15个絮凝限量(Lf)的白喉类毒素、5Lf破伤风类毒素、无细胞百日咳抗原(20μg解毒百日咳毒素(PT)、20μg丝状血凝素(FHA)、3μg百日咳杆菌粘附素(PRN)、5μg 2型和3型菌毛(FIM))、灭活的脊髓灰质炎病毒(40个D抗原单位(DU)1型(Mahoney)、8个DU 2型(MEF-1)、32个DU 3型(Saukett))和与24μg破伤风类毒素共价结合的10μg PRP b型流感嗜血杆菌(PRP-T)。
每0.5mL剂量的其它成分包括1.5mg作为佐剂的磷酸铝(0.33mg铝)、聚山梨醇酯80(经计算为大约10ppm)、42.5mg蔗糖、≤5μg残留甲醛、<50ng残留戊二醛、≤50ng残留牛血清白蛋白、3.3mg(0.6％v/v)2-苯氧基乙醇(不作为防腐剂)、<4pg新霉素和<4pg多粘菌素B硫酸盐。
白喉棒杆菌在改良的Mueller生长培养基中生长。通过硫酸铵分级分离纯化后，将白喉毒素用甲醛解毒并渗滤。
破伤风梭状芽胞杆菌在不含牛心浸液的改良的Mueller-Miller酪蛋白氨基酸培养基中生长。将破伤风毒素用甲醛解毒，并通过硫酸铵分级分离和渗滤纯化。白喉和破伤风类毒素单独地吸附在磷酸铝上。
无细胞百日咳疫苗抗原是由在通过添加酪蛋白氨基酸和二甲基-β-环糊精而改良的Stainer-Scholte培养基中生长的百日咳博德氏杆菌培养物产生的。单独地从上清液培养基中分离出PT、FHA和PRN。从细菌细胞中提取并共同纯化FIM。通过依次过滤、盐沉淀、超滤和色谱法纯化百日咳抗原。将PT用戊二醛解毒。将FHA用甲醛处理，并通过超滤去除残留的醛。各个抗原单独吸附到磷酸铝上。
通过微载体方法使脊髓灰质炎病毒1型、2型和3型各自在MRC-5细胞(正常人二倍体细胞系)的单独培养物中生长。使细胞在补充有小牛血清的CMRL(康诺特医药研究实验室)1969培养基中生长。对于病毒生长，将培养基替换为无小牛血清的培养基199。澄清和过滤后，通过超滤浓缩病毒悬浮液，并通过液相色谱法步骤进行纯化。用甲醛灭活单价病毒悬浮液。将每种灭活的脊髓灰质炎病毒的单价浓缩物组合以产生三价脊髓灰质炎病毒浓缩物。
将吸附的白喉、破伤风和无细胞百日咳抗原与磷酸铝(作为佐剂)、2-苯氧乙醇(不作为防腐剂)和注射用水组合成中间浓缩物。添加三价脊髓灰质炎病毒浓缩物，并将DTaP-IPV组分稀释至其最终浓度。DTaP-IPV组分不含防腐剂。
在豚鼠效力测试中，白喉和破伤风类毒素均诱导每毫升至少2个中和单位。通过如通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)所测量的免疫小鼠对解毒的PT、FHA、PRN和FIM的抗体应答来评价无细胞百日咳抗原的效力。通过测量来自免疫大鼠的血清中抗体介导的脊髓灰质炎病毒的中和作用来测定灭活的脊髓灰质炎病毒抗原的效力。
PRP，一种高分子量聚合物，是由在半合成培养基中生长的b型流感嗜血杆菌菌株1482制备的。通过对来自于在改良的Mueller和Miller培养基中生长的破伤风梭状芽胞杆菌(Harvard菌株)的培养物中的毒素进行硫酸铵纯化和福尔马林灭活来制备用于与PRP结合的破伤风类毒素。在结合过程之前将类毒素过滤灭菌。
组分不含防腐剂。通过限制每个剂量中PRP多糖和蛋白质的含量以及表征为高分子量缀合物的多糖和蛋白质的比例，可以指定每批次中
组分的效力。
预防方法、接种方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用单位剂量/四价登革热病毒组合物，尤其是如本文所述的本发明的重构单位剂量。
本发明部分地涉及预防登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物。
因此本发明涉及为受试者接种四价登革热病毒组合物预防病毒学上可确认的登革热病的方法，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，其中尤其所述四价登革热病毒组合物包含嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株和嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株，其中尤其登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-2 16681(SEQ ID NO 11)并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)：主要减毒基因座
b)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)：主要减毒基因座
c)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)：主要减毒基因座；并且
其中所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
关于四价组合物的血清型的更多信息可以来源于上面的“登革热病毒株”部分。
用于此类方法的四价登革热病毒组合物可以是单位剂量的形式，所述单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
本发明尤其涉及此类方法，其中单位剂量经冻干并且在用0.5mL的药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
本发明还尤其涉及此类方法，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且其中优选所述受试者为2至17岁或4至16岁。
本发明还尤其涉及此类方法，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％，其中优选所述受试者为18至60岁。
关于四价组合物或单位剂量的更多信息可来源于上面的“登革热疫苗组合物”和“单位剂量”部分。
因此本发明涉及方法和相应的用途，该方法包括仅两次施用所述单位剂量进行的初次疫苗接种，所述初次疫苗接种包括以下步骤：
(A)向受试者施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物，和
(B)在第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的四价登革热病毒组合物。
根据该实施方案，在3个月内仅施用两个剂量足以提供针对随后登革热感染的有效防护。
此类方法优选在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
此类方法还优选在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少1,500名或至少2,000名在基线时针对所有血清型均为血清阴性且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第二次施用后30天到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过45％。
根据某些实施方案，该接种方法是针对由于登革热血清型2和/或由于登革热血清型1引起的病毒学上可确认的登革热病。该方法针对登革热血清型2和登革热血清型1具有非常高的功效，并且针对登革热血清型2具有最高的功效。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型1具有疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，下限超过25％。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过35％，超过40％，超过45％，超过50％或超过54％。在某些此类实施方案中，至少1,500名受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且下限超过35％。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在10％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型1具有疫苗功效的所述方法。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％或超过65％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型2具有疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，下限超过25％。在某些此类实施方案中，下限超过50％，超过60％，超过70％，超过80％或超过85％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型2具有疫苗功效的所述方法。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过60％，超过70％，超过80％或超过90％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
该方法的功效下面在本节中进一步详细描述。
在某些实施方案中，将单位剂量重构并通过皮下注射施用。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
根据一个实施方案，此类方法不包括在所述单位剂量施用之前确定所述受试者中是否存在早先登革热感染的步骤，或其中在所述单位剂量施用之前所述受试者的血清状态未知。
根据一个实施方案，此类方法不包括优选在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间确定所述受试者中的早先登革热感染的步骤，或其中优选在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间所述受试者的血清状态未知。
根据本发明的方法不需要在疫苗接种之前测试血清状态，因此允许立即进行治疗和控制暴发。根据某些实施方案，该用途用于其中受试者暴露于登革热暴发的方法。在某些此类实施方案中，暴发是由于登革热血清型2和/或由于血清型1引起的。
根据此类方法的一个实施方案，所述受试者来自于其中血清阳性率未知并且/或者其中血清阳性率低于80％，或低于70％，或低于60％的区域。
根据此类方法的一个实施方案，所述受试者在基线时为血清阴性，并且来自于或前往到其中血清阳性率相对于血清型1和/或血清型2高，即80％或90％或以上的区域。
根据该实施方案，所述疫苗和相应的方法对于血清阴性和血清阳性受试者是安全的，因此不需要分析血清状态或确定该区域中的早先登革热感染或高血清阳性率。此类方法优选针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，优选在至少1,500名在基线时为血清阴性的4至16岁的健康受试者中，从施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。优选地，在比较血清阳性受试者和血清阴性受试者时，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的2侧95％置信区间可以提供在10％点以内或在15％点以内或在20％点以内的2侧置信区间下限。该方法优选对于血清型1和血清型2是安全的，因此可以在由于血清型1和/或血清型2引起的暴发情形下使用，或者甚至用于由于血清型1和/或血清型2引起高血清阳性率(>80％)的区域中的血清阴性受试者(例如，旅行者)或血清状态未知的受试者。
该方法的安全性在“预防方法、接种方法”部分中有更详细的描述。
根据一个实施方案，此类方法不包括在第一和第二单位剂量施用后对于受试者的发热性疾病的主动监测。在主动监测期间，研究人员将要求任何患有发热性疾病的受试者(定义为连续3天中的任何2天发烧≥38℃)返回现场进行登革热评价。至少每周一次与受试者/监护人取得联系，以提醒受试者/监护人在发生发热性疾病时有义务返回现场，以确保对发热性疾病的鲁棒辨识。将通过在每个试验场所可能有所不同的适当方法(例如，电话、短信、家访、基于学校的监测)来实现这种联系。
根据一个实施方案，此类方法不包括疫苗免疫原性分析，所述疫苗免疫原性分析包括登革热中和抗体的GMT。
根据一个实施方案，此类方法不包括反应原性分析。此类反应原性分析涉及诱发的局部不良事件(注射部位疼痛、注射部位红斑和注射部位肿胀)和诱发的全身不良事件(儿童<6岁：发烧、烦躁/易怒、嗜睡和食欲不振；儿童≥6岁：虚弱、发烧、头痛、不适和肌痛)，例如在每次接种疫苗(包括接种当天)后，通过收集日记卡对诱发的局部不良事件和诱发的全身不良事件分别评估7天和14天。
根据一个实施方案，该方法不包括主动监测、免疫原性分析和反应原性分析。
根据此类实施方案，所述疫苗和相应的接种方法是安全的，因此不需要进一步的监测或分析步骤。
鉴于上述情况，根据一个实施方案的方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定早先是否有登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
因此，无需确定早先是否有登革热感染即可完成所述接种方法。所述方法还任选地包括在第二单位剂量施用后至少1年，单位剂量的加强剂量。
选择受试者可以包括所有类型的考虑因素，但是优选不包括对早先登革热感染的确定。选择可包括对年龄、健康状况和感染威胁的考虑。感染威胁包括对受试者正常生活或打算前往的区域中的血清阳性率，血清型特异性血清阳性率和暴发情形或血清型特异性暴发情形的考虑。可以由于暴露于血清型1和/或血清型2或由于需要防护特定登革热血清型(即血清型1和/或血清型2)的事实来选择受试者。
根据本发明，该方法适用于各种年龄的受试者。根据一个实施方案，所述受试者是9岁以下，或4至5岁，或6至11岁或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至17岁，或18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
具体而言，本发明涉及此类方法，其中所述方法是安全的。
具体而言，本发明涉及此类方法，该方法针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。
具体而言，本发明涉及此类方法，其中所述方法是有效的。
具体而言，本发明涉及此类方法，该方法在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用单位剂量，尤其是如本文所述的本发明的重构单位剂量。
本发明部分地涉及用于在受试者群体中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的所述方法，该方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到一定的几何平均中和抗体滴度(GMT)比率。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及用于在受试者中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的所述方法，该方法包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到一定的中和抗体滴度比率。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对GMT DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
根据本文公开的微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法，测定受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度。不希望受任何理论束缚，目前应理解的是，就针对四种登革热血清型的几何平均中和抗体滴度(GMT)或针对四种登革热血清型的中和抗体滴度之间的差异较小而言，由于施用如本文所述的本发明的重构单位剂量而诱导更为平衡的免疫应答的方法有利于待接种疫苗的受试者或受试者群体。具体而言，应当理解，与其它血清型相比，对四种血清型中的任何一种(诸如对DENV-2)的更强应答不太有利。
本发明部分地涉及用于在受试者或受试者群体中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的所述方法，其中该方法在至少50名受试者的受试者群体中提供一定血清阳性率，包括在第1天和第90天皮下施用两个单位剂量，其中该受试者群体的受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，在施用第一单位剂量后至少一个月，诸如在第30天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之前或在施用第二单位剂量时，诸如在第90天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之后，诸如在第120天，受试者群体的至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之后，诸如在第270天，受试者群体的至少80％，或至少85％，或至少90％对所有四种登革热血清型均为血清阳性。
本发明部分地涉及在受试者或受试者群体中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的所述方法，其中该方法在至少100名受试者的受试者群体中提供一定血清阳性率，包括在第1天和第90天皮下施用两个单位剂量，其中受试者群体的受试者包括20％至40％在基线时对所有登革热血清型为血清阴性的受试者和60％至80％在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性的受试者，其中在第120天和/或第270天，受试者群体的血清阴性部分中对所有四种登革热血清型的血清阳性率和受试者群体的血清阳性部分中对所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过10％点并且/或者其中在第120天，受试者群体的血清阴性部分中对所有四种登革热血清型的血清阳性率和受试者群体的血清阳性部分中对所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过5％点。
本发明部分地涉及在受试者或受试者群体中预防病毒学上可确认的登革热病的方法，该方法包括向受试者或受试者群体施用重构单位剂量的四价登革热病毒组合物，该组合物包括四种活的减毒登革热血清型，尤其是如本文所述的病毒株。
本发明部分地涉及在受试者或受试者群体中预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病的方法，该方法包括向受试者或受试者群体施用重构单位剂量的四价登革热病毒组合物，该组合物包括四种活的减毒登革热血清型，尤其是如本文所述的病毒株。
在某些实施方案中，该方法包括施用登革热疫苗组合物的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物以预防受试者或受试者群体中的登革热病，该重构单位剂量包含：包含四种活的减毒登革热病毒株的四价病毒组合物，其中单位剂量是冻干的并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，获得重构单位剂量，其包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，诸如嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，诸如登革热血清型2毒株，(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，诸如嵌合登革热血清型2/3毒株，以及
(vi)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4，诸如嵌合登革热血清型2/4毒株。
优选在本发明的预防登革热病的方法中使用重构单位剂量/四价登革热病毒组合物，其中在单位剂量用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％并且其中受试者或受试者群体为18至60岁。
在另一个优选的实施方案中，在本发明的预防登革热病的方法中使用重构单位剂量/四价登革热病毒组合物，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％并且其中受试者或受试者群体为2至17岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热血清型，尤其是本文所述的病毒株，其中就病毒组合物和单位剂量而言，所述血清型具有如本文所述的某些浓度，诸如：
(i)登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/剂，或3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL
(ii)登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/0.5剂，或2.7log10pfu/0.5ml至4.9log10pfu/0.5ml
(iii)登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/0.5剂，或4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/剂至5.5log10pfu/0.5剂，或4.5log10pfu/0.5mL至5.5log10pfu/0.5mL。
在优选的此类实施方案中，受试者或受试者群体为2至17岁，诸如4至16岁，并且优选小于9岁。在其它优选的实施方案中，受试者或受试者群体为4-5岁、6-11岁或12-16岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至3.6log10pfu/0.5mL，登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.0log10pfu/0.5mL，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至4.6log10pfu/0.5mL，登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为4.5log10pfu/0.5mL或4.6log10pfu/0.5mL至5.1log10pfu/0.5mL。在优选的此类实施方案中，受试者或受试者群体为2至17岁，诸如4至16岁，并且优选小于9岁。在其它优选的实施方案中，受试者或受试者群体为4-5岁、6-11岁或12-16岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中以pfu/0.5mL测量的登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)的浓度为总浓度的1％至7％，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)的浓度小于总浓度的8％，诸如在总浓度的1％至8％的范围内，以pfu/0.5mL测量的登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)的浓度为总浓度的至少10％，并且以pfu/0.5mL测量的登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)的浓度为总浓度的至少65％，诸如在65％至80％的范围内。在某些此类实施方案中，所有四种血清型的算术总和在4.6log10pfu/0.5mL至6.7log10pfu/0.5mL的范围内，优选在4.6log10pfu/0.5mL至5.5log10pfu/0.5mL的范围内。优选，在所述实施方案中，受试者或受试者群体为2至17岁，诸如4至16岁，并且甚至更优选小于9岁。在其它优选的实施方案中，受试者或受试者群体为4-5岁、6-11岁或12-16岁。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及所述方法，其中登革热病毒血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)和登革热病毒血清型2(例如登革热血清型2毒株)(诸如TDV-2)各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在和/或合起来小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％。在某些此类实施方案中，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)优选为以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，更优选登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。在某些此类实施方案中，登革热血清型4(例如嵌合登革热血清型2/4毒株)(诸如TDV-4)在所有四种血清型中占组合物中的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)在所有四种血清型中占组合物中的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1(例如嵌合登革热血清型2/1毒株)(诸如TDV-1)和登革热血清型2(例如登革热血清型2毒株)(诸如TDV-2)各自所占的浓度低于血清型3(例如嵌合登革热血清型2/3毒株)(诸如TDV-3)的浓度，并且任选地合起来占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
优选地，嵌合登革热血清型2/1毒株是TDV-1，登革热血清型2毒株是TDV-2，嵌合登革热血清型2/3毒株是TDV-3，而嵌合登革热血清型2/4毒株是TDV-4。更优选地，TDV-1的特征在于根据SEQ ID No.1的核苷酸序列和根据SEQ ID No.2的氨基酸序列，TDV-2的特征在于根据SEQ ID No.3的核苷酸序列和根据SEQ ID No.4的氨基酸序列，TDV-3的特征在于根据SEQ ID No.5的核苷酸序列和根据SEQ ID No.6的氨基酸序列，并且TDV-4的特征在于根据SEQ ID No.7的核苷酸序列和根据SEQ ID No.8的氨基酸序列。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中通过皮下注射施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将重构单位剂量施用于未知血清状态的受试者并且/或者其中尚未进行测试来确定受试者(在施用如本文所述的单位剂量之前)是血清阳性还是血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，该方法不包括确定一个或多个受试者中的早先登革热感染的步骤。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，该方法不包括分析该区域中的血清阳性率，或者在血清阳性率低于80％、低于70％或低于60％的区域中进行。在某些实施方案中，本发明涉及方法，其中受试者的血清状态是未知的。在此类实施方案中，关于该方法，在施用之前和之后的任何时间都未确定血清状态。在本发明的某些实施方案中，该方法在暴发情形中使用。在某些实施方案中，本发明涉及在临床试验之外进行的所述方法
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或六个月内，或三个月内，以及任选地至少间隔4周，例如在第0天和第90天或在第1天和第90天，施用两个单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明的方法包括施用本发明的单个单位剂量或由施用本发明的单个单位剂量组成。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于相对于所有登革热血清型均为血清阴性的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在这些实施方案的一些中，受试者或受试者群体来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在一个优选的实施方案中，受试者或受试者群体来自亚太区或拉丁美洲。在这些实施方案的一些其它实施方案中，受试者或受试者群体来自泰国、斯里兰卡、菲律宾、巴拿马、尼加拉瓜、多米尼加共和国、哥伦比亚或巴西。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下可以对此类受试者群体或此类受试者进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或登革热非流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于2至60岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体是大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的成人。在进一步的具体实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于2至17岁的儿童和青少年。在一些实施方案中，受试者或受试者群体小于9岁，或小于4岁。在一些实施方案中，受试者或受试者群体为2至9岁，或2至5岁，或4至9岁，或6至9岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体为4至16岁。在一些此类实施方案中，受试者或受试者群体为4-5岁、6-11岁或12-16岁。任选地，受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者或儿科受试者群体。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者或儿科受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者或儿科受试者群体，优选通过皮下注射进行施用。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者或儿科受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某一实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体为4-5岁并且来自亚太区，6-11岁并且来自亚太区，或者12-16岁并且来自亚太区。在其它实施方案中，受试者或受试者群体为4-5岁并且来自拉丁美洲，6-11岁并且来自拉丁美洲，或者12-16岁并且来自拉丁美洲。
在某一实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体为4-5岁并且对于至少1种登革热血清型为血清阳性，6-11岁并且对于至少1种登革热血清型为血清阳性，或12-16岁并且对于至少1种登革热血清型为血清阳性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体为4-5岁并且对于所有登革热血清型均为血清阴性，6-11岁并且对于所有登革热血清型均为血清阴性，或12-16岁并且对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某一实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体来自亚太区或拉丁美洲，并且在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自亚太区或拉丁美洲，并且在基线时对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体来自亚太区，在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自亚太区，在基线时对于所有登革热血清型均为血清阴性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自拉丁美洲，在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自美国，在基线时对于所有登革热血清型均为血清阴性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体预先接种了黄热病疫苗。在其它实施方案中，受试者或受试者群体预先接种了日本脑炎疫苗。在其它实施方案中，受试者或受试者群体没有预先接种黄热病疫苗。在其它实施方案中，受试者或受试者群体没有预先接种日本脑炎疫苗。预先疫苗接种表示在第二次施用后的30天前，诸如在第一次施用后的4个月内用如本文所述的重构单位剂量进行的疫苗接种。例如，对于实施例6中从第二次疫苗接种后30天开始测定的疫苗功效(VE)，预先接种黄热病疫苗定义为发生在第二次疫苗接种后30天之前的黄热病疫苗接种。在某些实施方案中，受试者或受试者群体在如本文所述的施用方案内或在施用第一剂后的4.5年内接受了
在施用市售登革热疫苗后，在血清阴性群体或受试者中观察到针对四种登革热血清型的中和抗体的滴度特别不平衡。本发明显示尤其是血清阴性受试者在施用如本文所述的本发明的重构单位剂量后对四种登革热血清型显示出更为平衡的免疫应答。因此，考虑如本文所述的本发明的单位剂量和如本文所述的本发明的方法可以在包括血清阳性和血清阴性受试者的受试者群体中提供更强的免疫应答。需要这种平衡的应答以及平衡的功效和安全性，以允许在无需预先血清状态分析的情况下接种，这在疫苗接种计划中且尤其是在暴发情形下是一个主要优势。
本发明部分地涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法，该方法包括向受试者施用四价登革热病毒组合物，该四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种登革热病毒株，其中病毒株任选地是活的减毒登革热病毒株。
本发明部分地涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法，该方法由向受试者施用四价登革热病毒组合物组成，该四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种登革热病毒株，其中病毒株任选地是活的减毒登革热病毒株。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中没有确定受试者在基线时的血清状态的步骤，换句话说，所述方法不包括在施用四价登革热病毒组合物之前确定受试者在基线时的早先登革热感染。具体而言，此类方法是安全且有效的。因此，在某些此类实施方案中，尚未测试受试者早先登革热感染的存在。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中不管是否在施用四价登革热病毒组合物之前确定受试者有早先登革热感染，疫苗的施用都是安全的。具体而言，此类方法也是有效的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中该方法是安全和/或有效的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中组合物包含至少一种嵌合登革热病毒。在某些此类实施方案中，本发明涉及所述方法，其中组合物包含至少一种非嵌合登革热病毒和至少一种嵌合登革热病毒，尤其是嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株，以及嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株。组合物的详情如上所述。
因此，在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有疫苗功效，优选针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何并且例如14至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在第一次施用后少于6个月内，诸如3个月内，或在第二次/最后一次施用后30天到第二次/最后一次施用后至少12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有疫苗功效，优选针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在施用计划的第一次施用后15至21个月(例如15或21个月)以前，施用如本文所述的重构单位剂量或四价登革热病毒组合物或安慰剂至少一次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％或超过72％。优选地，所述重构单位剂量或安慰剂在约3个月内，诸如在第0天和第90天，皮下施用。
因此，在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过60％，其中在第一次施用后少于6个月内，诸如3个月内，到最后一次施用后18个月施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在这些实施方案中，下限例如超过62％，超过64％，超过66％，超过68％或超过69％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何并且例如14至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有超过30％的疫苗功效，优选针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在第一次施用后少于6个月内，诸如3个月内，或在第二次施用/最后一次施用后30天到第二次施用/最后一次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量或四价登革热病毒组合物或安慰剂至少两次。在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有超过30％的疫苗功效，优选针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在施用计划的第一次施用后15个月以前，施用如本文所述的重构单位剂量或四价登革热病毒组合物或安慰剂至少一次。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％，超过75％，超过78％，超过79％或约80％。优选地，所述重构单位剂量或安慰剂在约3个月内，诸如在第0天和第90天，皮下施用。
因此，在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何且14至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有超过66％的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在第一次施用后少于6个月内，诸如3个月内，到最后一次施用后18个月施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在这些实施方案中，疫苗功效例如超过68％，超过70％，超过72％或超过74％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有疫苗功效，优选针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过0％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少18个月施用如本文所述的重构单位剂量或四价登革热病毒组合物或安慰剂至少两次。在某些此类实施例中，下限超过10％，超过20％，超过30％，超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％或超过80％或超过90％。
在某些实施方案中，本发明涉及在血清阴性受试者中具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％或超过55％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时针对所有血清型均为血清阴性且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过35％，超过40％，或超过45％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时为血清阳性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过40％，超过45％，超过50％，超过60％或超过65％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时为血清阳性或在基线时针对所有血清型均为血清阴性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，基线时为血清阳性的受试者与基线时针对所有血清型均为血清阴性的受试者提供的下限之间的差异不超过15％点。
在某些实施方案中，本发明涉及当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在血清阴性受试者中具有超过30％的针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，在血清阴性受试者中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过70％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，所述疫苗功效超过30％，超过40％，超过50％，超过55％，超过60％或超过65％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在基线时为血清阳性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，所述疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％，超过70％或超过75％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时为血清阳性或在基线时针对所有血清型均为血清阴性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，基线时为血清阳性的受试者与基线时针对所有血清型均为血清阴性的受试者提供的下限之间的差异不超过15％点，或不超过10％点。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在随机分组时为4至5岁并且不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，或超过45％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在随机分组时为4至5岁并且不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过30％的针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过70％。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在随机分组时为6至11岁并且不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％或超过70％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在随机分组时为6至11岁并且不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过30％的针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过75％，或超过80％。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在随机分组时为12至16岁并且不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过68％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在随机分组时为12至16岁并且不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过30％的针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过75％，或超过80％。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对登革热血清型1的疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者或至少10,000名健康受试者或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，或超过50％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对血清型1的疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何并且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过35％，超过40％，超过45％，超过50％或超过54％。在某些此类实施方案中，至少1,500名受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且下限超过35％。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在10％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者或至少10,000名健康受试者或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过30％的针对登革热血清型1的疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对登革热血清型1的疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过70％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何并且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对血清型1的疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％或超过65％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对登革热血清型2的疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者或至少10,000名健康受试者或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对血清型2的疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何并且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过50％，超过60％，超过70％，超过80％或超过85％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者或至少10,000名健康受试者或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过30％的针对登革热血清型2的疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对登革热血清型2的疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％或超过90％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何并且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中具有针对血清型2的疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过60％，超过70％，超过80％或超过90％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对登革热血清型3的疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者或至少10,000名健康受试者或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者或至少10,000名健康受试者或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过30％的针对登革热血清型3的疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对登革热血清型3的疫苗功效超过40％，超过50％，超过55％或超过60％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从第一次施用到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)，或从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施例中，下限超过10％，超过20％，超过30％，超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过66％，超过67％，超过70％，超过75％，超过77％，或超过80％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从第一次施用到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)，或从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过70％，超过75％，超过80％，或超过82％，或超过85％，超过88％。
在某些实施方案中，本发明涉及针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％或超过75％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时针对所有血清型均为血清阴性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施例中，下限超过60％，超过65％，超过66％，超过67％，超过70％，超过75％，超过77％或超过80％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体(健康受试者在基线时针对所有血清型均为血清阴性)中相对于安慰剂测量时，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有超过30％的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，所述疫苗功效超过60％，超过65％，超过66％，超过67％，超过70％，超过75％，超过77％，超过80％或超过85％。
在某些实施方案中，本发明涉及针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时均为血清阳性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在施用计划的第二次施用后约30天到施用计划的第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％或超过80％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时为血清阳性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，下限超过60％，超过65％，超过70％，超过75％或超过80％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体(健康受试者在基线时为血清阳性)中相对于安慰剂测量时，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有超过30％的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或到12至18个月(例如在12或18个月时)施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
在某些实施方案中，本发明涉及当在基线时为血清阳性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过75％，超过70％，超过80％，超过85％，或超过90％。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时为血清阳性或在基线时针对所有血清型均为血清阴性且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，基线时为血清阳性的受试者与基线时针对所有血清型均为血清阴性的受试者提供的下限之间的差异不超过15％点。
在某些实施方案中，本发明涉及当在基线时为血清阳性或在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且4至16岁的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，在预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病中具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，从最后一次施用后30天到最后一次施用后12至18个月(例如在12个月或18个月时)施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂例如至少两次。在某些此类实施方案中，基线时为血清阳性的受试者与基线时针对所有血清型均为血清阴性的受试者提供的疫苗功效之间的差异不超过10％点或不超过5％点。
在某些实施方案中，本发明涉及具有相对风险，优选针对所有四种血清型的联合相对风险的所述方法，所述联合相对风险具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，上限低于0.75，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，上限低于0.70，低于0.65，低于0.60，低于0.55，低于0.50，低于0.45，低于0.40，低于0.35，低于0.30或低于0.28。优选地，所述重构单位剂量或安慰剂在约3个月内，诸如在第0天和第90天，皮下施用。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有低于0.70的相对风险，优选针对所有四种血清型的联合相对风险的所述方法，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，相对风险低于0.65，低于0.60，低于0.55，低于0.50，低于0.45，低于0.40，低于0.35，低于0.30，低于0.25或低于0.23。优选地，所述重构单位剂量或安慰剂在约3个月内，诸如在第0天和第90天，皮下施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，少于2.5％的受试者中发生病毒学上可确认的登革热病，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月或至少18个月施用如本文所述的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物或安慰剂至少两次。在某些此类实施方案中，在少于2.0％的受试者，少于1.5％的受试者，少于1.0％的受试者，少于0.8％的受试者，或少于0.6％的受试者中发生病毒学上可确认的登革热病。优选地，所述重构单位剂量或安慰剂在约3个月内，诸如在第0天和第90天，皮下施用。
在某些实施方案中，本发明涉及具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在来自流行区而不管基线时血清状态如何并且选自由随机分组时4至16岁的受试者组成的组的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过61.0％，或超过65.0％或超过70.0％或超过72.0％，其中在6个月或更短时间内，在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后至少12或13个月施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。
在某些实施方案中，本发明涉及当在来自流行区而不管基线时血清状态如何并且选自由随机分组时4至16岁的受试者组成的组的至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，具有超过66％或超过70％或超过75％或超过77％或超过80.0％的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的所述方法，其中在6个月或更短时间内，在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后至少12个月或13个月施用所述单位剂量/四价登革热病毒组合物或所述安慰剂至少两次。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中针对所有四种血清型的联合疫苗功效是在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后12或13个月测量的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述单位剂量或所述安慰剂在三个月内，尤其是在约第1天和约90天施用至少两次，并且其中针对所有四种血清型的联合疫苗功效是在第二次施用后30天到施用计划的第二次施用后12或13个月测量的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述方法是有效且安全的。在这些实施方案的一些中，受试者或受试者群体是9岁以下，4岁以下，或2岁以下，或2至9岁，或2至5岁，或4至9岁或6至9岁。任选地，受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中当在至少5,000名健康受试者(或至少10,000名或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法对于住院治疗的病毒学上确认的登革热的相对风险为1或更低，或0.8或更低，或0.6或更低。在这些实施方案的一些中，受试者或受试者群体是9岁以下，4岁以下，或2岁以下，或2至9岁，或2至5岁，或4至9岁或6至9岁。任选地，受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者为4至16岁。在此类实施方案的一些中，受试者群体的健康受试者为4至5岁、6至11岁或12至16岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者根据实施例6中指定的排除标准定义为健康。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者来自亚太区或拉丁美洲。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者相对于至少一种血清型为血清阳性。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者相对于所有血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者为4-5岁并且来自亚太区，6-11岁并且来自亚太区，或者12-16岁并且来自亚太区。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者为4-5岁并且来自拉丁美洲，6-11岁并且来自拉丁美洲，或者12-16岁并且来自拉丁美洲。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者为4-5岁并且对于至少1种登革热血清型为血清阳性，6-11岁并且对于至少1种登革热血清型为血清阳性，或12-16岁并且对于至少1种登革热血清型为血清阳性。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者为4-5岁并且对于所有登革热血清型均为血清阴性，6-11岁并且对于所有登革热血清型均为血清阴性，或12-16岁并且对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者来自亚太区或拉丁美洲，并且在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者来自亚太区或拉丁美洲，并且在基线时对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者来自亚太区，在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者来自亚太区，在基线时对于所有登革热血清型均为血清阴性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者来自拉丁美洲，在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者来自美国，在基线时对于所有登革热血清型均为血清阴性并且为4-5岁、6-11岁或12-16岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者预先接种了黄热病疫苗。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者没有预先接种黄热病疫苗。预先疫苗接种表示在用如本文所述的重构单位剂量进行第一次疫苗接种之前进行的疫苗接种。例如，对于实施例6中从第二次疫苗接种后30天开始测定的疫苗功效(VE)，预先接种黄热病疫苗定义为发生在第二次疫苗接种后30天之前的黄热病疫苗接种。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者预先接种了日本脑炎疫苗。在其它实施方案中，受试者群体的健康受试者没有预先接种日本脑炎疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者群体的健康受试者在如本文所述的施用方案内或在施用第一剂后的4.5年内接受了
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中疫苗相关的严重不良事件的发生率小于0.1％。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中发生在施用4周以内的疫苗相关的非诱发的不良事件的发生率小于2％。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中发生在施用2周以内的疫苗相关的诱发的不良事件的发生率小于35％。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中发生在施用1周以内的疫苗相关的诱发的局部反应的发生率小于40％。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述方法不会增加个体(诸如血清阴性个体)中住院治疗的病毒学上确认的登革热的风险。
在一个实施方案中，单位剂量与选自下组的疫苗共同施用：DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗)，MMR疫苗，黄热病疫苗(尤其是YF-17D)、HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗)，破伤风、白喉和百日咳(Tdap)疫苗(尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗)以及如下面更详细描述的甲型肝炎疫苗。
在预防登革热病的方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的组合物或单位剂量，其在受试者中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的方法中使用。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的组合物或单位剂量，其在预防受试者群体中的登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的方法中使用。
接种预防登革热病、接种登革热病疫苗和预防登革热病具有相同的含义。本发明部分地涉及预防登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)的方法。
上文在标题“预防方法、接种方法”下面描述的任何方法都应理解为也公开为在预防受试者或受试者群体中的登革热病的此类方法中使用的单位剂量，而不管是否在下面明确说明。
根据某一方面，本发明的组合物或单位剂量是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株以及嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株。根据某些此类方面，登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-2 16681(用SEQ ID NO 11表示)并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
其中所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
DENV-2/1嵌合体，
DENV-2/3嵌合体和
DENV-2/4嵌合体。
关于四价组合物的血清型的更多信息可以来源于上面的“登革热病毒株”部分。
用于此类用途的四价登革热病毒组合物可以是单位剂量的形式，所述单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
用于此类用途的四价登革热病毒组合物也可以是冻干单位剂量的形式，在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
在根据一个实施方案用于此类用途的四价登革热病毒组合物中，在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度优选小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少8％，或更优选至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且其中所述受试者优选为2至17岁或4至16岁。
在根据一个实施方案用于此类用途的四价登革热病毒组合物中，在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度优选小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少6％，并且其中所述受试者优选为18至60岁。
关于四价组合物或单位剂量的更多信息可来源于上面的“登革热疫苗组合物”和“单位剂量”部分。
根据一个实施方案，用于此类用途的单位剂量涉及包括仅两次施用所述单位剂量进行的初次疫苗接种的方法，所述初次疫苗接种包括以下步骤：
(A)向受试者施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物，和
(B)在第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的四价登革热病毒组合物。
根据该实施方案，在3个月内仅施用两个剂量足以提供针对随后登革热感染的有效防护。
此类方法优选在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
此类方法还优选在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少1,500名或至少2,000名在基线时针对所有血清型均为血清阴性且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第二次施用后30天到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过45％。
根据某些实施方案，该用途是针对接种预防由于登革热血清型2和/或由于登革热血清型1引起的病毒学上可确认的登革热病的方法。该方法针对登革热血清型2和登革热血清型1具有非常高的功效，并且针对登革热血清型2具有最高的功效。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型1具有疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名不管基线时的血清状态如何且4至16岁的健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，下限超过25％。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过35％，超过40％，超过45％，超过50％或超过54％。在某些此类实施方案中，至少1,500名受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且下限超过35％。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在10％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型1具有疫苗功效的所述方法。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％或超过65％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型2具有疫苗功效的所述方法，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，下限超过25％。在某些此类实施方案中，下限超过50％，超过60％，超过70％，超过80％或超过85％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型2具有疫苗功效的所述方法。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过60％，超过70％，超过80％或超过90％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
该方法的功效在“预防方法、接种方法”部分中有更详细的描述。
在某些实施方案中，将单位剂量重构并通过皮下注射施用。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
根据一个实施方案，此类方法不包括优选在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间确定所述受试者中的早先登革热感染的步骤，或其中优选在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间所述受试者的血清状态未知。
根据本发明的方法不需要在疫苗接种之前测试血清状态，因此允许立即进行治疗和控制暴发。根据某些实施方案，该用途用于其中受试者暴露于登革热暴发的方法。在某些此类实施方案中，暴发是由于登革热血清型2和/或由于血清型1引起的。
根据此类方法的一个实施方案，所述受试者来自于其中血清阳性率未知并且/或者其中血清阳性率低于80％，或低于70％，或低于60％的区域。
根据此类方法的一个实施方案，所述受试者在基线时为血清阴性，并且来自于或前往到其中血清阳性率相对于血清型1和/或血清型2高，即80％或90％或以上的区域。
根据该实施方案，所述疫苗和相应的方法对于血清阴性和血清阳性受试者是安全的，因此不需要分析血清状态或确定该区域中的早先登革热感染或高血清阳性率。此类方法优选针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，优选在至少1,500名在基线时为血清阴性的4至16岁的健康受试者中，从施用计划的第一次施用到施用计划的第二次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。优选地，在比较血清阳性受试者和血清阴性受试者时，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的2侧95％置信区间可以提供在10％点以内或在15％点以内或在20％点以内的2侧置信区间下限。该方法优选对于血清型1和血清型2是安全的，因此可以在由于血清型1和/或血清型2引起的暴发情形下使用，或者甚至用于由于血清型1和/或血清型2引起高血清阳性率(>80％)的区域中的血清阴性受试者(例如，旅行者)或血清状态未知的受试者。
该方法的安全性在“预防方法、接种方法”部分中有更详细的描述。
根据一个实施方案，此类方法不包括在第一和第二单位剂量施用后对于受试者的发热性疾病的主动监测。在主动监测期间，研究人员将要求任何患有发热性疾病的受试者(定义为连续3天中的任何2天发烧≥38℃)返回现场进行登革热评价。至少每周一次与受试者/监护人取得联系，以提醒受试者/监护人在发生发热性疾病时有义务返回现场，以确保对发热性疾病的鲁棒辨识。将通过在每个试验场所可能有所不同的适当方法(例如，电话、短信、家访、基于学校的监测)来实现这种联系。
根据一个实施方案，此类方法不包括疫苗免疫原性分析，所述疫苗免疫原性分析包括登革热中和抗体的GMT。
根据一个实施方案，此类方法不包括反应原性分析。此类反应原性分析涉及诱发的局部不良事件(注射部位疼痛、注射部位红斑和注射部位肿胀)和诱发的全身不良事件(儿童<6岁：发烧、烦躁/易怒、嗜睡和食欲不振；儿童≥6岁：虚弱、发烧、头痛、不适和肌痛)，例如在每次接种疫苗(包括接种当天)后，通过收集日记卡对诱发的局部不良事件和诱发的全身不良事件分别评估7天和14天。
根据一个实施方案，该方法不包括主动监测、免疫原性分析和反应原性分析。
根据此类实施方案，所述疫苗和相应的接种方法是安全的，因此不需要进一步的监测或分析步骤。
鉴于上述情况，根据一个实施方案的方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定早先是否有登革热感染，和
(B)向受试者施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
因此，无需确定早先是否有登革热感染即可完成所述接种方法。然而，该方法还任选地包括在第二单位剂量施用后至少1年，单位剂量的加强剂量。
选择受试者可以包括所有类型的考虑因素，但是优选不包括对早先登革热感染的确定。选择可包括对年龄、健康状况和感染威胁的考虑。感染威胁包括对受试者正常生活或打算前往的区域中的血清阳性率，血清型特异性血清阳性率和暴发情形或血清型特异性暴发情形的考虑。可以由于暴露于血清型1和/或血清型2或由于需要防护特定登革热血清型(即血清型1和/或血清型2)的事实来选择受试者。
根据本发明，该方法适用于各种年龄的受试者。根据一个实施方案，所述受试者是9岁以下，或4至5岁，或6至11岁或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至17岁，或18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
根据某些此类实施方案，包含(i)、(ii)、(iii)和(iv)的四价登革热病毒组合物的单位剂量在用药学上可接受的稀释剂重构后提供(i)、(ii)、(iii)和(iv)的pfu/0.5mL总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度优选小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少8％，或更优选至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且所述受试者为2至17岁或4至16岁。
根据某些此类实施方案，包含(i)、(ii)、(iii)和(iv)的四价登革热病毒组合物的单位剂量在用药学上可接受的稀释剂重构后提供(i)、(ii)、(iii)和(iv)的pfu/0.5mL总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度优选小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少6％，并且所述受试者为18至60岁。
下面描述了另外的具体实施方案。
本发明部分地涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，所述方法包括向受试者施用至少第一单位剂量的登革热疫苗组合物，其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种登革热病毒株，任选地其中登革热病毒株是活的、减毒登革热病毒株和/或包含嵌合登革热病毒和/或至少一种非嵌合登革热病毒，并且其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，
(i)登革热血清型1的浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL并且任选地达到4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL并且任选地达到6.2log10pfu/0.5mL。
本发明还部分地涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，所述方法包括向受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在3个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种登革热病毒株，任选地其中登革热病毒株是活的、减毒的，并且其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，
(v)登革热血清型1的浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.0log10pfu/0.5mL，
(vi)登革热血清型2的浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL并且任选地达到4.9log10pfu/0.5mL，
(vii)登革热血清型3的浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.7log10pfu/0.5mL，并且
(viii)登革热血清型4的浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL并且任选地达到6.2log10pfu/0.5mL。
在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，所述方法包括向受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在3个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种登革热病毒株，任选地其中登革热病毒株是活的、减毒的，其中受试者为9岁以下和/或当受试者的血清状态未知或为血清阴性时，并且其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，
(i)登革热血清型1的浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL并且任选地达到4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL并且任选地达到5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL并且任选地达到6.2log10pfu/0.5mL。
在某些实施方案中，将重构单位剂量施用于未知血清状态的受试者并且/或者其中尚未进行测试来确定受试者在施用如本文所述的单位剂量之前是血清阳性还是血清阴性。
在某些实施方案中，受试者为9岁以下和/或受试者的血清状态未知或为血清阴性。在某些此类实施方案中，受试者为9岁以下并且受试者的血清状态未知或为血清阴性，优选为血清阴性。
在某些实施方案中，该方法是安全的。在某些此类实施方案中，受试者小于9岁或从4岁开始和/或受试者的血清状态未知或为血清阴性。在某些此类实施方案中，受试者从4岁开始，并且受试者的血清状态未知或为血清阴性，优选为血清阴性。
在某些实施方案中，该方法是有效的。在某些此类实施方案中，受试者为9岁以下和/或受试者的血清状态未知或为血清阴性。在某些此类实施方案中，受试者为9岁以下并且受试者的血清状态未知或为血清阴性，优选为血清阴性。
在某些实施方案中，登革热血清型1和登革热血清型2各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在，和/或合起来小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％。在某些此类实施方案中，登革热血清型3是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％和/或登革热血清型4是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。
在某些实施方案中，登革热血清型4占组合物中所有四种血清型的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3占组合物中所有四种血清型的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1和登革热血清型2各自所占的浓度低于血清型3的浓度，并且任选地合计占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
在某些实施方案中，所述组合物包含至少一种嵌合登革热病毒。在某些此类实施方案中，所述组合物包含至少一种非嵌合登革热病毒和至少一种嵌合登革热病毒。
在某些实施方案中，受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性的和/或从4岁开始，任选地高达60岁。在某些此类实施方案中，受试者为4至16岁，9岁以下，2岁至9岁以下，4岁至9岁以下，4至5岁，6至11岁，或12至16岁。在其它实施方案中，受试者在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性和/或从4岁开始，任选地高达60岁。在某些此类实施方案中，受试者为4至16岁，9岁以下，2岁至9岁以下，4岁至9岁以下，4至5岁，6至11岁，或12至16岁。
在某些实施方案中，该方法不包括在施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物之前确定受试者中的早先登革热感染。因此，在某些实施方案中，尚未测试受试者早先登革热感染的存在。
在某些实施方案中，登革热血清型1是嵌合登革热血清型2/1毒株，登革热血清型2是非嵌合登革热血清型2毒株，登革热血清型3是嵌合登革热血清型2/3毒株，登革热血清型4是嵌合登革热血清型2/4毒株，并且登革热血清型1具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，登革热血清型2具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，登革热血清型3具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且登革热血清型4具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
在某些实施方案中，当在0.5mL中测量时，单位剂量包含约10％w/v至约20％w/v的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，约0.5％w/v至约1.5％w/v的泊洛沙姆407，约0.05％w/v至约2％w/v的人血清白蛋白和约70mM至140mM的氯化钠。在某些此类实施方案中，当在0.5mL中测量时，单位剂量包含约15％(w/v)α,α-海藻糖二水合物，约1％(w/v)的泊洛沙姆407，约0.1％(w/v)的人血清白蛋白和约100mM的氯化钠。
在某些实施方案中，该方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
在某些实施方案中，受试者来自登革热流行区。在其它实施方案中，受试者来自登革热非流行区。
在某些实施方案中，受试者来自亚太区或拉丁美洲。
在某些实施方案中，当在第1天和第90天向至少50名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，重构单位剂量提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，在施用第一单位剂量后至少一个月，诸如在第30天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之前或在施用第二单位剂量时，诸如在第90天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之后，诸如在第120天，受试者群体的至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之后，诸如在第270天，受试者群体的至少80％，或至少85％，或至少90％对所有四种登革热血清型均为血清阳性。在某些此类实施方案中，在施用第一单位剂量后至少一个月，诸如在第30天，以及在施用第二单位剂量之前或在施用第二单位剂量时，诸如在第90天，和在施用第二单位剂量之后，诸如在第120天和在第270天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性。
在某些实施方案中，当在第1天和第90天向至少100名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，重构单位剂量提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者包含20％至40％在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性的受试者和60％至80％在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性的受试者，其中在第120天和/或第270天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过10％点并且/或者其中在第120天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过5％点。
在某些特定实施方案中，本发明涉及在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物，所述方法包括向受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在3个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，并且其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，其中所述减毒登革热病毒株包含嵌合登革热病毒和至少一种非嵌合登革热病毒，并且其中登革热血清型1和登革热血清型2各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在，和/或合计小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％。
在某些实施方案中，该方法不包括在施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物之前确定受试者中的早先登革热感染并且其中该方法是安全且有效的。因此，在某些实施方案中，尚未测试受试者早先登革热感染的存在。
在某些实施方案中，登革热血清型3是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％和/或登革热血清型4是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。
在某些实施方案中，登革热血清型4占组合物中所有四种血清型的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3占组合物中所有四种血清型的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1和登革热血清型2各自所占的浓度低于血清型3的浓度，并且任选地合计占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
在某些实施方案中，登革热血清型1是嵌合登革热血清型2/1毒株，登革热血清型2是非嵌合登革热血清型2毒株，登革热血清型3是嵌合登革热血清型2/3毒株，登革热血清型4是嵌合登革热血清型2/4毒株，并且登革热血清型1具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，登革热血清型2具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，登革热血清型3具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且登革热血清型4具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
在某些实施方案中，在单位剂量中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)登革热血清型1的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL，并且任选地，当在0.5mL中测量时，该组合物还包含约15％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物，约1％(w/v)的泊洛沙姆407，约0.1％(w/v)的人血清白蛋白和约100mM的氯化钠。
在某些实施方案中，单位剂量施用于手臂的三角肌区域。
在某些实施方案中，在没有确定受试者在基线时的血清状态的情况下施用组合物，并且其中无论基线时的血清状态如何，施用都是安全且有效的。
在某些实施方案中，受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性的和/或从4岁开始，任选地高达60岁。在某些此类实施方案中，受试者为4至16岁，9岁以下，2岁至9岁以下，4岁至9岁以下，4至5岁，6至11岁，或12至16岁。具体而言，受试者可以是9岁以下并且在基线时对所有四种登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性和/或从4岁开始，任选地高达60岁。在某些此类实施方案中，受试者为4至16岁，9岁以下，2岁至9岁以下，4岁至9岁以下，4至5岁，6至11岁，或12至16岁。具体而言，受试者可以是9岁以下并且在基线时对至少一种登革热血清型均为血清阳性。在某些优选的实施方案中，受试者为4至5岁，6至11岁或12至16岁。
在某些实施方案中，该方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
在某些实施方案中，受试者来自登革热流行区或登革热非流行区。
在某些实施方案中，受试者来自亚太区或拉丁美洲。
在某些实施方案中，当在第1天和第90天向至少50名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，所述组合物提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性，尤其其中在施用第一单位剂量后至少一个月，诸如在第30天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之前或在施用第二单位剂量时，诸如在第90天，受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之后，诸如在第120天，受试者群体的至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％对所有四种登革热血清型均为血清阳性，和/或在施用第二单位剂量之后，诸如在第270天，受试者群体的至少80％，或至少85％，或至少90％对所有四种登革热血清型均为血清阳性。
在某些实施方案中，当在第1天和第90天向至少100名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，所述组合物提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者包含20％至40％在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性的受试者和60％至80％在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性的受试者，其中在第120天和/或第270天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过10％点并且/或者其中在第120天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过5％点。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，所述方法包括向受试者群体至少施用如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMTDENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，所述方法包括向受试者至少施用如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对GMTDENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据本文公开的微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中所述单位剂量通过皮下注射施用。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中所述受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中施用单个如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0天和第90天或在第1天和第90天，施用两个重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，可以在第二次施用之后施用第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量最多以两个剂量或一个剂量施用。
在本发明的某些实施方案中，受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在本发明的某些实施方案中，受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性，并且通过皮下注射向血清阴性受试者施用重构单位剂量。
在本发明的某些其它实施方案中，受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在这些实施方案的一些中，受试者或受试者群体来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下可以对此类受试者群体或此类受试者进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或来自登革热非流行区的受试者或受试者群体。
在一些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量，其中受试者或受试者群体为2至60岁，或大于17岁，或大于18岁，或18至60岁。在某些实施方案中，受试者或受试者群体为1至17岁，或小于9岁，或小于4岁或小于2岁。在进一步的具体实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中如本文所述的本发明的单位剂量施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者或儿科受试者群体。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者或儿科受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中将重构单位剂量皮下施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者或儿科受试者群体。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者或儿科受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在上述方法中使用的单位剂量可以是如上面在标题“单位剂量”或“登革热疫苗组合物”下所述的登革热疫苗组合物的任何单位剂量，并且可以包含标题“登革热病毒株”下所述的任何登革热病毒株。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量，其在预防老年受试者中的登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)的方法中使用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中老年受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中老年受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，可以在第二次施用之后施用第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在本发明的某些实施方案中，老年受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在本发明的某些实施方案中，老年受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性，并且通过皮下注射向血清阴性受试者施用重构单位剂量。
在本发明的某些其它实施方案中，老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量施用于来自登革热流行区的老年受试者。在这些实施方案的一些中，老年受试者来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在其它实施方案中，老年受试者来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下可以对此类老年受试者进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或来自登革热非流行区的老年受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。所述至少一种慢性疾患或疾病可以选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中老年受试者的免疫系统受损。
用于制造用于预防登革热病的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病(尤其是病毒学上可确认的登革热，VCD)的药物的用途。
因此本发明涉及四价登革热病毒组合物在制造用于为受试者接种预防病毒学上可确认的登革热病的方法的药物中的用途，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，其中尤其所述四价登革热病毒组合物包含嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株和嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株，其中尤其登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-216681(SEQ ID NO 11)并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
d)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)：主要减毒基因座
e)NS1-53Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)：主要减毒基因座
f)NS3-250Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)：主要减毒基因座；并且
其中所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
关于四价组合物的血清型的更多信息可以来源于上面的“登革热病毒株”部分。
本发明尤其涉及此类用途，其中四价登革热病毒组合物为单位剂量的形式，该单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
本发明尤其涉及此类用途，其中单位剂量经冻干并且在用0.5mL的药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4。
本发明还尤其涉及此类用途，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且其中所述受试者优选为2至17岁或4至16岁。
本发明还尤其涉及此类用途，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％，并且其中所述受试者优选为18至60岁。
关于四价组合物或单位剂量的更多信息可来源于上面的“登革热疫苗组合物”和“单位剂量”部分。
根据一个实施方案，此类用途涉及包括仅两次施用所述单位剂量进行的初次疫苗接种的方法，所述初次疫苗接种包括以下步骤：
(A)向受试者施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物，和
(B)在第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的四价登革热病毒组合物。
根据该实施方案，在3个月内仅施用两个剂量足以提供针对随后登革热感染的有效防护。
此类方法优选在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
此类方法还优选在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少1,500名或至少2,000名在基线时针对所有血清型均为血清阴性且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的第二次施用后30天到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过45％。
根据某些实施方案，该用途是针对接种预防由于登革热血清型2和/或由于登革热血清型1引起的病毒学上可确认的登革热病的方法。该方法针对登革热血清型2和登革热血清型1具有非常高的功效，并且针对登革热血清型2具有最高的功效。
在某些实施方案中，本发明涉及该用途，其中所述方法在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型1具有疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，下限超过25％。在某些此类实施方案中，下限超过30％，超过35％，超过40％，超过45％，超过50％或超过54％。在某些此类实施方案中，至少1,500名受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性并且下限超过35％。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在10％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，所述方法在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型1具有疫苗功效。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％或超过65％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型1的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中所述方法在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型2具有疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，下限超过25％。在某些此类实施方案中，下限超过50％，超过60％，超过70％，超过80％或超过85％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中下限在5％点以内。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中当在不管基线时的血清状态如何且4至16岁的至少1,500名或至少2,000名或至少5,000名健康受试者(或至少10,000名，或至少15,000名健康受试者)的受试者群体中，从第二次施用后30天到第二次施用后12至18个月(例如在12或18个月时)相对于安慰剂测量时，所述方法在预防病毒学上可确认的登革热病中针对血清型2具有疫苗功效。在某些此类实施方案中，疫苗功效超过60％，超过70％，超过80％或超过90％。在某些此类实施方案中，至少1,500名的受试者群体在基线时针对所有血清型均为血清阴性。在某些此类实施方案中，血清阴性和血清阳性群体各自提供针对血清型2的疫苗功效，该疫苗功效在5％点以内。
该方法的功效在“预防方法、接种方法”部分中有更详细的描述。
在某些实施方案中，将单位剂量重构并通过皮下注射施用。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
根据一个实施方案，此类用途不涉及这样的方法，该方法不包括优选在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间确定所述受试者中的早先登革热感染的步骤，或其中优选在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间所述受试者的血清状态未知。
根据本发明的方法不需要在疫苗接种之前测试血清状态，因此允许立即进行治疗和控制暴发。根据某些实施方案，该用途用于其中受试者暴露于登革热暴发的方法。在某些此类实施方案中，暴发是由于登革热血清型2和/或由于血清型1引起的。
根据此类方法的一个实施方案，所述受试者来自于其中血清阳性率未知并且/或者其中血清阳性率低于80％，或低于70％，或低于60％的区域。
根据此类方法的一个实施方案，所述受试者在基线时为血清阴性，并且来自于或前往到其中血清阳性率相对于血清型1和/或血清型2高，即80％或90％或以上的区域。
根据该实施方案，所述疫苗和相应的方法对于血清阴性和血清阳性受试者是安全的，因此不需要分析血清状态或确定该区域中的早先登革热感染或高血清阳性率。此类方法优选针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，优选在至少1,500名在基线时为血清阴性的4至16岁的健康受试者中，从施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。优选地，在比较血清阳性受试者和血清阴性受试者时，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效的2侧95％置信区间可以提供在10％点以内或在15％点以内或在20％点以内的2侧置信区间下限。该方法优选对于血清型1和血清型2是安全的，因此可以在由于血清型1和/或血清型2引起的暴发情形下使用，或者甚至用于由于血清型1和/或血清型2引起高血清阳性率(>80％)的区域中的血清阴性受试者(例如，旅行者)或血清状态未知的受试者。
该方法的安全性在“预防方法、接种方法”部分中有更详细的描述。
根据一个实施方案，此类方法不包括在第一和第二单位剂量施用后对于受试者的发热性疾病的主动监测。在主动监测期间，研究人员将要求任何患有发热性疾病的受试者(定义为连续3天中的任何2天发烧≥38℃)返回现场进行登革热评价。至少每周一次与受试者/监护人取得联系，以提醒受试者/监护人在发生发热性疾病时有义务返回现场，以确保对发热性疾病的鲁棒辨识。将通过在每个试验场所可能有所不同的适当方法(例如，电话、短信、家访、基于学校的监测)来实现这种联系。
根据一个实施方案，此类方法不包括疫苗免疫原性分析，所述疫苗免疫原性分析包括登革热中和抗体的GMT。
根据一个实施方案，此类方法不包括反应原性分析。此类反应原性分析涉及诱发的局部不良事件(注射部位疼痛、注射部位红斑和注射部位肿胀)和诱发的全身不良事件(儿童<6岁：发烧、烦躁/易怒、嗜睡和食欲不振；儿童≥6岁：虚弱、发烧、头痛、不适和肌痛)，例如在每次接种疫苗(包括接种当天)后，通过收集日记卡对诱发的局部不良事件和诱发的全身不良事件分别评估7天和14天。
根据一个实施方案，该方法不包括主动监测、免疫原性分析和反应原性分析。
根据此类实施方案，所述疫苗和相应的接种方法是安全的，因此不需要进一步的监测或分析步骤。
鉴于以上根据一个实施方案，该用途涉及包括初次疫苗接种的方法，初次疫苗接种由以下步骤组成：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定早先是否有登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
因此，无需确定早先是否有登革热感染即可完成所述接种方法。然而，该方法还任选地包括在第二单位剂量施用后至少1年，单位剂量的加强剂量。
选择受试者可以包括所有类型的考虑因素，但是优选不包括对早先登革热感染的确定。选择可包括对年龄、健康状况和感染威胁的考虑。感染威胁包括对受试者正常生活或打算前往的区域中的血清阳性率，血清型特异性血清阳性率和暴发情形或血清型特异性暴发情形的考虑。可以由于暴露于血清型1和/或血清型2或由于需要防护特定登革热血清型(即血清型1和/或血清型2)的事实来选择受试者。
根据本发明，该方法适用于各种年龄的受试者。根据一个实施方案，所述受试者是9岁以下，或4至5岁，或6至11岁或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至17岁，或18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
根据某些此类实施方案，包含(i)、(ii)、(iii)和(iv)的四价登革热病毒组合物的单位剂量在用药学上可接受的稀释剂重构后提供(i)、(ii)、(iii)和(iv)的pfu/0.5mL总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度优选小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少8％，或更优选至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且所述受试者为2至17岁或4至16岁。
根据某些此类实施方案，包含(i)、(ii)、(iii)和(iv)的四价登革热病毒组合物的单位剂量在用药学上可接受的稀释剂重构后提供(i)、(ii)、(iii)和(iv)的pfu/0.5mL总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度优选小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度优选为至少6％，并且所述受试者为18至60岁。
上文在标题“预防方法”下面描述的任何方法都应理解为也公开为单位剂量用于制造用于用此类方法预防受试者或受试者群体中的登革热病的药物的用途，而不管是否在下面明确说明。
下面描述了另外的具体实施方案。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其包括向受试者群体至少施用如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其包括向受试者至少施用如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对GMT DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据本文公开的微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射施用一个所述的本发明的重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一个实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0天和第90天或在第1/0天和第90天，施用两个单位剂量。根据这些实施方案中的一些，可以在第二次施用之后施用第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在本发明的某些实施方案中，受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在本发明的某些其它实施方案中，受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射将重构单位剂量施用于血清阴性受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将重构单位剂量施用于未知血清状态的受试者并且/或者其中尚未进行测试来确定受试者在施用单位剂量之前是血清阳性还是血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在这些实施方案的一些中，受试者或受试者群体来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下可以对此类受试者群体或受试者进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或来自登革热非流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者为2至60岁或大于17岁，或大于18岁，或18至60岁。在某些实施方案中，受试者为1至17岁，或小于9岁，或小于4岁或小于2岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。根据这些实施方案中的一些，受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者或儿科受试者群体。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者或儿科受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者或儿科受试者群体。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者或儿科受试者群体是血清阴性的并且来自登革热流行区。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防老年受试者中的登革热病的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防老年受试者中的登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)的药物的用途。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一个实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个单位剂量。根据这些实施方案中的一些，可以在第二次施用之后施用第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在本发明的某些实施方案中，老年受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
在本发明的某些其它实施方案中，老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射将重构单位剂量施用于血清阴性的老年受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量施用于来自登革热流行区的老年受试者。在这些实施方案的一些中，老年受试者来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在其它实施方案中，老年受试者来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下可以对此类老年受试者进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或来自登革热非流行区的老年受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。所述至少一种慢性疾患或疾病可以选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中老年受试者的免疫系统受损。
预防方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病以及黄热病的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者伴随施用黄热病疫苗(尤其是YF-17D)来在受试者中预防黄热病。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病以及黄热病的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者群体伴随施用黄热病疫苗(尤其是YF-17D)来预防受试者群体中的黄热病。
本发明部分地涉及用于预防受试者群体中的登革热病和黄热病的所述方法，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用黄热病疫苗，尤其是YF-17D。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMTDENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及用于在受试者中预防登革热病和黄热病的所述方法，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用黄热病疫苗，尤其是YF-17D。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用如本文所述的本发明的重构单位剂量并且通过皮下注射施用黄热病疫苗(尤其是YF-17D)。根据一些实施方案，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)的皮下注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在6个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次之后施用另外第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天施用所述黄热病疫苗，
-在所述黄热病疫苗施用后，诸如3个月后并且优选在第90天，第一次施用第一重构单位剂量，并且
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次施用第一重构单位剂量，
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，施用所述黄热病疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天同时施用第一重构单位剂量和所述黄热病疫苗，并且
-在所述同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在一个优选的实施方案中，黄热病疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量在第0天同时施用或在第90天同时施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于受试者或受试者群体，并将黄热病疫苗，尤其是YF-17D疫苗，皮下施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)皮下施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区和黄热病流行区的情况下可以对此类受试者群体或此类受试者进行疫苗接种。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)皮下施用于大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行和黄热病非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在预防方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用黄热病疫苗(尤其是YF-17D)在受试者中预防黄热病。具体而言，本发明部分地涉及分别在受试者中预防登革热病和黄热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用黄热病疫苗(尤其是YF-17D)预防受试者群体中的黄热病。具体而言，本发明部分地涉及分别在预防受试者群体中的登革热病和黄热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病和黄热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，所述方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用黄热病疫苗，尤其是YF-17D。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMTDENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和黄热病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，所述方法包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用黄热病疫苗，尤其是YF-17D。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中所述单位剂量和所述黄热病疫苗同时施用。在这些实施方案中的一些中，同时施用在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，所述单位剂量和所述黄热病疫苗(尤其是YF-17D)的施用依次进行。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中所述单位剂量通过皮下注射施用并且其中所述黄热病疫苗通过皮下注射施用。根据一些实施方案，将皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，所述单位剂量的皮下注射液和所述黄热病疫苗的皮下注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天施用所述黄热病疫苗，
-在所述黄热病疫苗施用后，诸如3个月后并且优选在第90天，第一次施用第一重构单位剂量，并且
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第二次施用第二重构单位剂量。
在另一个实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次施用第一重构单位剂量，
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，施用所述黄热病疫苗。
在另一个实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天同时施用第一重构单位剂量和所述黄热病疫苗，并且
-在所述同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在一个优选的实施方案中，黄热病疫苗和如本文所述的本发明的单位剂量在第0天同时施用或在第90天同时施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中将所述单位剂量重构并皮下施用于受试者或受试者群体，并将所述黄热病疫苗皮下施用于受试者或受试者群体，并且其中受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中将所述单位剂量和所述黄热病疫苗施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)皮下施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区和黄热病流行区的情况下可以对此类受试者群体或此类受试者进行疫苗接种。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)皮下施用于大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行和黄热病非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
用于制造预防方法中的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其还包括黄热病疫苗(尤其是YF-17D)用于制造用于在受试者中预防黄热病的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)分别用于制造用于在受试者中预防登革热病和黄热病的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其还包括黄热病疫苗(尤其是YF-17D)用于制造用于预防受试者群体中的黄热病的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)分别用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和黄热病的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和黄热病的药物的用途，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用黄热病疫苗，尤其是YF-17D。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)用于制造用于在受试者中预防登革热病和黄热病的药物的用途，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用黄热病疫苗，尤其是YF-17D。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并通过皮下注射施用，并且其中黄热病疫苗(尤其是YF-17D)通过皮下注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)的皮下注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天施用所述黄热病疫苗，
-在所述黄热病疫苗施用后，诸如3个月后并且优选在第90天，第一次施用第一重构单位剂量，并且
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次施用第一重构单位剂量，
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，施用所述黄热病疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗(尤其是YF-17D)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天同时施用第一重构单位剂量和所述黄热病疫苗，并且
-在所述同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并皮下施用于受试者或受试者群体，并将黄热病疫苗，尤其是YF-17D疫苗，皮下施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)皮下施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区和黄热病流行区的情况下可以对此类受试者群体或此类受试者进行疫苗接种。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和黄热病疫苗(尤其是YF-17D)皮下施用于大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行和黄热病非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
预防方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病以及甲型肝炎的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)来在受试者中预防甲型肝炎。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病以及甲型肝炎的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者群体伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)来预防受试者群体中的甲型肝炎。
本发明部分地涉及用于预防受试者群体中的登革热病和甲型肝炎的所述方法，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用甲型肝炎疫苗，诸如
或
根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及用于在受试者中预防登革热病和甲型肝炎的所述方法，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用甲型肝炎疫苗，诸如
或
根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量通过皮下注射施用，并且其中甲型肝炎疫苗(诸如
或
)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在6个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于受试者或受试者群体，并将甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
根据一些实施方案，施用第二剂的甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。第二剂的甲型肝炎疫苗可以在第一次施用甲型肝炎疫苗之后施用。此类第二次施用可以充当加强剂并且可以在第一次施用甲型肝炎疫苗后9个月(诸如在第270天)施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且其中甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行和甲型肝炎非流行区。根据某些实施方案，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在预防方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)在受试者中预防甲型肝炎。具体而言，本发明部分地涉及分别在受试者中预防登革热病和甲型肝炎的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)预防受试者群体中的甲型肝炎。具体而言，本发明部分地涉及分别在预防受试者群体中的登革热病和甲型肝炎的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病和甲型肝炎的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，所述方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMTDENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和甲型肝炎的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，所述方法包括向受试者施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)和至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20，其中所述方法还包括通过向受试者伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)来在受试者中预防甲型肝炎。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中所述单位剂量和所述甲型肝炎疫苗同时施用。在这些实施方案的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，所述单位剂量和所述甲型肝炎疫苗的施用依次进行。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中所述单位剂量通过皮下注射施用并且其中所述甲型肝炎疫苗通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，所述单位剂量的皮下注射液和所述甲型肝炎疫苗的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的甲型肝炎疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和一个剂量的所述甲型肝炎疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中将所述单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并将所述甲型肝炎疫苗经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中将所述单位剂量和所述甲型肝炎疫苗施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中施用另外第二剂的甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。第二剂的甲型肝炎疫苗可以在第一次施用甲型肝炎疫苗之后施用。此类第二次施用可以充当加强剂并且可以在第一次施用甲型肝炎疫苗后9个月(诸如在第270天)施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行和甲型肝炎非流行区。根据某些实施方案，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
用于制造预防方法中的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其还包括甲型肝炎疫苗(诸如
或
)用于制造用于在受试者中预防甲型肝炎的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)分别用于制造用于在受试者中预防登革热病和甲型肝炎的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其还包括甲型肝炎疫苗(诸如
或
)用于制造用于预防受试者群体中的甲型肝炎的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)分别用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和甲型肝炎的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和甲型肝炎的药物的用途，所述方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMTDENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)用于制造用于在受试者中预防登革热病和甲型肝炎的药物的用途，所述方法包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并通过皮下注射施用，并且其中甲型肝炎疫苗(诸如
或
)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据一些实施方案，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的甲型肝炎疫苗(诸如
或
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并将甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和甲型肝炎疫苗(诸如
或
)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用另外第二剂的甲型肝炎疫苗(诸如
或
)。第二剂的甲型肝炎疫苗可以在第一次施用甲型肝炎疫苗之后施用。此类第二次施用可以充当加强剂并且可以在第一次施用甲型肝炎疫苗后9个月(诸如在第270天)施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且甲型肝炎疫苗(诸如
或
)经肌内施用于大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者或受试者群体。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行和甲型肝炎非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
预防方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病以及HPV相关癌症或生殖器疣的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)来在受试者中预防HPV相关癌症或生殖器疣。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病以及HPV相关癌症或生殖器疣的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者群体伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)来预防受试者群体中的HPV相关癌症或生殖器疣。
本发明部分地涉及用于预防受试者群体中的登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的所述方法，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及用于在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的所述方法，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量通过皮下注射施用，并且其中HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在6个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次之后施用另外第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和两个剂量的HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述HPV疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第三次施用第二剂的所述HPV疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于受试者或受试者群体，并将HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且其中HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于9至26岁，优选9至15岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体为女性。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的方法，该方法包括根据上述施用计划向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的肌内注射液，其中受试者是来自登革热流行区的9至15岁的女性受试者。
在预防方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)在受试者中预防HPV相关癌症或生殖器疣。具体而言，本发明部分地涉及分别在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)预防受试者群体中的HPV相关癌症或生殖器疣。具体而言，本发明部分地涉及分别在预防受试者群体中的登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，所述方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，所述方法包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中同时施用所述单位剂量和所述HPV疫苗。在这些实施方案的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，所述单位剂量和所述HPV疫苗的施用依次进行。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中所述单位剂量通过皮下注射施用并且其中所述HPV疫苗通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，所述单位剂量的皮下注射液和所述HPV疫苗的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和两个剂量的HPV疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述HPV疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第三次施用第二剂的所述HPV疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中将所述单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并将所述HPV疫苗经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中将所述单位剂量和所述HPV疫苗施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且其中HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于9至25岁，优选9至15岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体为女性。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，该方法包括根据上述施用计划向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的肌内注射液，其中受试者是来自登革热流行区的9至15岁的女性受试者。
用于制造预防方法中的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其还包括HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)用于制造用于在受试者中预防HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)分别用于制造用于在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其还包括HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)用于制造用于预防受试者群体中的HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)分别用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)用于制造用于在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并通过皮下注射施用，并且其中HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和两个剂量的HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述HPV疫苗，
-在所述同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第三次施用第二剂的所述HPV疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并将HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)经肌内施用于9至25岁，优选9至15岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体为女性。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)用于制造用于在受试者中预防登革热病和HPV相关癌症或生殖器疣的药物的用途，其包括根据上述施用计划向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)的肌内注射液，其中受试者是来自登革热流行区的9至15岁的女性受试者。
预防方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者伴随施用MMR疫苗(诸如
II)来在受试者中预防麻疹、腮腺炎和风疹。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者群体伴随施用MMR疫苗(诸如
II)来预防受试者群体中的麻疹、腮腺炎和风疹。
本发明部分地涉及用于预防受试者群体中的登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的所述方法，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用MMR疫苗(诸如
II)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMTDENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及用于在受试者中预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的所述方法，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用MMR疫苗(诸如
II)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量通过皮下注射施用，并且其中MMR疫苗(诸如
II)通过皮下注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和MMR疫苗(诸如
II)的皮下注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在6个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次之后施用另外第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和两个剂量的MMR疫苗(诸如
II)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述MMR疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用第二重构单位剂量之后，诸如在所述第一次同时施用后3至6年，第三次施用第二剂的所述MMR疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和其中MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于1至10岁，优选2个月至7岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在预防方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用MMR疫苗(诸如
II)在受试者中预防麻疹、腮腺炎和风疹。具体而言，本发明部分地涉及分别在受试者中预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用MMR疫苗(诸如
II)预防受试者群体中的麻疹、腮腺炎和风疹。具体而言，本发明部分地涉及分别在预防受试者群体中的登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，所述方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用MMR疫苗(诸如
II)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，所述方法包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用MMR疫苗(诸如
II)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中所述单位剂量和所述MMR疫苗同时施用。在这些实施方案的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，所述单位剂量和所述MMR疫苗的施用依次进行。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中所述单位剂量通过皮下注射施用并且其中所述MMR疫苗通过皮下注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，所述单位剂量的皮下注射液和所述MMR疫苗的皮下注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和两个剂量的MMR疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述MMR疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用第二重构单位剂量之后，诸如在所述第一次同时施用后3至6年，第三次施用第二剂的所述MMR疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中将所述单位剂量重构并皮下施用于受试者或受试者群体，并将所述MMR疫苗皮下施用于受试者或受试者群体，并且其中受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中将所述单位剂量和所述MMR疫苗施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于1至10岁，优选2个月至7岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
用于制造预防方法中的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其还包括MMR疫苗(诸如
II)用于制造用于在受试者中预防麻疹、腮腺炎和风疹的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)分别用于制造用于在受试者中预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其还包括MMR疫苗(诸如
II)用于制造用于预防受试者群体中的麻疹、腮腺炎和风疹的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)分别用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的药物的用途，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用MMR疫苗(诸如
II)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMTDENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)用于制造用于在受试者中预防登革热病和麻疹、腮腺炎和风疹的药物的用途，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用MMR疫苗(诸如
II)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并通过皮下注射施用，并且其中MMR疫苗(诸如
II)通过皮下注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和MMR疫苗(诸如
II)的皮下注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和两个剂量的MMR疫苗(诸如
II)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述MMR疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用第二重构单位剂量之后，诸如在所述第一次同时施用后3至6年，第三次施用第二剂的所述MMR疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并且MMR疫苗(诸如
II)经皮下施用于受试者或受试者群体，并且其中受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)皮下施用于1至10岁，优选2个月至7岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在另一个实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
预防方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)来在受试者中预防破伤风、白喉和百日咳。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者群体伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)来预防受试者群体中的破伤风、白喉和百日咳。
本发明部分地涉及用于预防受试者群体中的登革热病和破伤风、白喉和百日咳的所述方法，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及用于在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的所述方法，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天，达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对GMT DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)同时施用。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量通过皮下注射施用，并且其中Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用如本文所述的本发明的两个单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在6个月内，或在3个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述Tdap疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用于受试者或受试者群体并且Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于受试者或受试者群体肌内，并且其中该受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且其中Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于10至18岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法，其包括根据上述施用计划向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的肌内注射液，其中受试者在10至18岁之间并且来自于登革热流行区。
在预防方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)在受试者中预防破伤风、白喉和百日咳。具体而言，本发明部分地涉及分别在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中所述方法还包括用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)预防受试者群体中的破伤风、白喉和百日咳。具体而言，本发明部分地涉及分别在预防受试者群体中的登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，所述方法包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMTDENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，所述方法包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对GMT DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中所述单位剂量和所述Tdap疫苗同时施用。在这些实施方案的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，所述单位剂量和所述Tdap疫苗的施用依次进行。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中所述单位剂量通过皮下注射施用，并且其中所述Tdap疫苗通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，所述单位剂量的皮下注射液和所述Tdap疫苗的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或，在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和一个剂量的Tdap疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述Tdap疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中受试者或受试者群体对于所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中将所述单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并且将所述Tdap疫苗经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中所述单位剂量和所述Tdap疫苗施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且其中Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于10至18岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，所述方法包括根据上述施用计划向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的肌内注射液，其中受试者为10至18岁并且来自于登革热流行区。
用于制造预防方法中的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其还包括Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)用于制造用于在受试者中预防破伤风、白喉和百日咳的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)分别用于制造用于在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其还包括Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)用于制造用于预防受试者群体中的破伤风、白喉和百日咳的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及分别用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和破伤风、白喉和百日咳的药物的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)用于制造用于预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的药物的用途，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMTDENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)用于制造用于在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的药物的用途，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)同时施用。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并通过皮下注射施用，并且其中Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据这些实施方案中的一些，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂，尤其是当所述疫苗同时施用时。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和一个剂量的Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述Tdap疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体并且Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于受试者或受试者群体肌内，并且其中该受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)经肌内施用于10至18岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)用于制造用于在受试者中预防登革热病和破伤风、白喉和百日咳的药物的用途，其包括根据上述施用计划向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)的肌内注射液，其中受试者为10至18岁并且来自于登革热流行区。
预防方法
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)来在受试者中预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法。因此，在某些实施方案中，本发明涉及预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向受试者群体施用如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中该方法还包括通过向受试者群体伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)来预防受试者群体中的白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病。
本发明部分地涉及预防受试者群体中的登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向所述受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并且向受试者群体伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMT DENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向所述受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并且向受试者伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量通过皮下注射施用，并且其中DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将如本文所述的本发明的单位剂量施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据一些实施方案，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位。根据这些实施方案中的一些，将所述单位剂量经皮下施用于手臂，优选施用于三角肌区域，并且将所述DTaP/IPV/Hib疫苗经肌内施用于大腿，优选施用于大腿的前外侧。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在6个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次之后施用另外第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次同时施用后3个月并且优选在第90天，第三次施用第二重构单位剂量，
-在所述第三次施用后，诸如在第一次同时施用后4个月并且优选在第120天，第四次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次施用后，诸如在9至12个月后并且优选在第390天，第五次施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次施用第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次施用后4个月并且优选在第120天，第三次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第三次施用后，诸如9至12个月后并且优选在第390天，第四次同时施用第一重构单位剂量和第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次同时施用后，诸如3个月后并且优选在第480天，第五次施用第二重构单位剂量。
根据一些实施方案，在施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗之后，施用第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。为此，可以使用由Sanofi Pasteur以商品名
销售的可商购获得的白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎(DTaP-IPV)联合疫苗。
是一种白喉和破伤风类毒素以及无细胞百日咳吸附和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗并且适用于针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的主动免疫。单剂量的
在4至6岁的儿童中用作白喉、破伤风、百日咳疫苗接种(DTaP)系列中的第五剂并且在接受了4个剂量的
的儿童中用作灭活脊髓灰质炎疫苗接种(IPV)系列中的第四剂或第五剂。因此，在一些实施方案中，可以在施用第四剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)后30至57个月进行另一第六次施用第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于受试者或受试者群体，并将DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且其中DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于2个月至4岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法，其包括根据上述施用计划之一向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的肌内注射液，其中受试者是2个月至4岁的来自于登革热流行区的受试者。
在预防方法中使用的单位剂量
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中该方法还包括用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)在受试者中预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病。具体而言，本发明部分地涉及分别在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量，其中该方法还包括用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)预防受试者群体中的白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病。具体而言，本发明部分地涉及分别在预防受试者群体中的登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。
本发明部分地涉及在预防受试者群体中的登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMTDENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法中使用的如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中所述单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗同时施用。在这些实施方案的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，所述单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗的施用依次进行。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中所单位剂量通过皮下注射施用并且其中所述DTaP/IPV/Hib疫苗通过肌内注射施用。根据一些实施方案，所述单位剂量施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据一些实施方案，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位。根据这些实施方案中的一些，将所述单位剂量经皮下施用于手臂，优选施用于三角肌区域，并且将所述DTaP/IPV/Hib疫苗经肌内施用于大腿，优选施用于大腿的前外侧。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的重构单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次同时施用后3个月并且优选在第90天，第三次施用第二重构单位剂量，
-在所述第三次施用后，诸如在第一次同时施用后4个月并且优选在第120天，第四次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次施用后，诸如在9至12个月后并且优选在第390天，第五次施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次施用第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次施用后4个月并且优选在第120天，第三次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第三次施用后，诸如9至12个月后并且优选在第390天，第四次同时施用第一重构单位剂量和第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次同时施用后，诸如3个月后并且优选在第480天，第五次施用第二重构单位剂量。
根据一些实施方案，在施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗之后，施用第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。为此，可以使用由Sanofi Pasteur以商品名
销售的可商购获得的白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎(DTaP-IPV)联合疫苗。
是一种白喉和破伤风类毒素以及无细胞百日咳吸附和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗并且适用于针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的主动免疫。单剂量的
在4至6岁的儿童中用作白喉、破伤风、百日咳疫苗接种(DTaP)系列中的第五剂并且在接受了4个剂量的
的儿童中用作灭活脊髓灰质炎疫苗接种(IPV)系列中的第四剂或第五剂。因此，在一些实施方案中，可以在施用第四剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)后30至57个月进行另一第六次施用第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中将所述单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并且将所述DTaP/IPV/Hib疫苗经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中所述单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且其中DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于2个月至4岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的方法中使用的如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，所述方法包括根据上述施用计划之一向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的肌内注射液，其中受试者是2个月至4岁的来自于登革热流行区的受试者。
用于制造预防方法中的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于在受试者中预防登革热病的药物的用途，其还包括DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)用于制造用于在受试者中预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)分别用于制造用于在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量用于制造用于预防受试者群体中的登革热病的药物的用途，其还包括DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)用于制造用于预防受试者群体中的白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途。具体而言，本发明部分地涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)分别用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)用于制造用于预防受试者群体中的登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途，其包括向受试者群体施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者群体施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些几何平均中和抗体滴度(GMT)比率，并向受试者群体伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，针对登革热血清型2的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-2)和针对登革热血清型4的几何平均中和抗体滴度(GMT DENV-4)，提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的GMTDENV-2:GMT DENV-4比率。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-1的比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，GMT DENV-2:GMT DENV-3的比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)用于制造用于在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途，其包括向受试者施用至少如本文所述的本发明的第一重构单位剂量，其中在向受试者施用所述第一单位剂量后的第180或365天达到某些中和抗体滴度比率，并向受试者伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。根据一些实施方案，在至少第一次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用如本文所述的本发明的重构单位剂量之后，针对登革热血清型2的中和抗体滴度和针对登革热血清型4的中和抗体滴度，提供的针对DENV-2的中和抗体滴度:针对DENV-4的中和抗体滴度的比率不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20。在这些实施方案的一些中，在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-1的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15，和/或在施用所述第一重构单位剂量后的第180或365天，DENV-2:DENV-3的中和抗体滴度比率不超过20，或不超过18，或不超过15。
在一些实施方案中，受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)或受试者的中和抗体滴度根据微量中和试验，例如根据实施例2中描述的方法测定。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中同时施用如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。在这些实施方案中的一些中，同时施用是在第0天或第90天，优选在第0天。在其它实施方案中，依次进行如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并且通过皮下注射施用，并且其中DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)通过肌内注射施用。根据一些实施方案，将如本文所述的本发明的单位剂量施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域。根据一些实施方案，如本文所述的本发明的单位剂量的皮下注射液和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的肌内注射液施用于不同的解剖部位。根据这些实施方案中的一些，将所述单位剂量经皮下施用于手臂，优选施用于三角肌区域，并且将所述DTaP/IPV/Hib疫苗经肌内施用于大腿，优选施用于大腿的前外侧。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0/1天和第90天，施用两个如本文所述的本发明的单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在第二次施用之后施用另外的第三个如本文所述的本发明的单位剂量。此类第三次施用可以充当加强剂，并且可以在第一次施用后6至12个月之间，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次同时施用后3个月并且优选在第90天，第三次施用第二重构单位剂量，
-在所述第三次施用后，诸如在第一次同时施用后4个月并且优选在第120天，第四次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次施用后，诸如在9至12个月后并且优选在第390天，第五次施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用
-在第0天第一次施用第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次施用后4个月并且优选在第120天，第三次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第三次施用后，诸如9至12个月后并且优选在第390天，第四次同时施用第一重构单位剂量和第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次同时施用后，诸如3个月后并且优选在第480天，第五次施用第二重构单位剂量。
根据一些实施方案，在施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗之后，施用第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。为此，可以使用由Sanofi Pasteur以商品名
销售的可商购获得的白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎(DTaP-IPV)联合疫苗。
是一种白喉和破伤风类毒素以及无细胞百日咳吸附和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗并且适用于针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的主动免疫。单剂量的
在4至6岁的儿童中用作白喉、破伤风、百日咳疫苗接种(DTaP)系列中的第五剂并且在接受了4个剂量的
的儿童中用作灭活脊髓灰质炎疫苗接种(IPV)系列中的第四剂或第五剂。因此，在一些实施方案中，可以在施用第四剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)后30至57个月进行另一第六次施用第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中受试者或受试者群体对所有登革热血清型均为血清阴性。在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量重构并且经皮下施用于受试者或受试者群体，并将DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于受试者或受试者群体，并且其中该受试者或该受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。在其它实施方案中，受试者或受试者群体相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。在某些实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用，并且DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于来自登革热流行区的受试者或受试者群体。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量经皮下施用并且DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)经肌内施用于2个月至4岁的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热流行区。在其它实施方案中，受试者或受试者群体来自登革热非流行区。根据这些实施方案中的一些，受试者或受试者群体对于所有四种登革热血清型均为血清阴性。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及如本文所述的登革热疫苗组合物的单位剂量和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)用于制造用于在受试者中预防登革热病和白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和由b型流感嗜血杆菌引起的疾病的药物的用途，其包括根据上述施用计划之一向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量的皮下注射液和DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)的肌内注射液，其中受试者是2个月至4岁的来自于登革热流行区的受试者。
在应该预防多种疾病的情况下，根据本发明的单位剂量(TDV)可以以至少以下任何组合的方式共同施用。
双联疫苗组合：
TDV+YF、TDV+甲型肝炎、TDV+MMR、TDV+Tdap、TDV+DTap或TDV+HPV
三联疫苗组合：
TDV+YF+甲型肝炎、TDV+YF+MMR、TDV+YF+Tdap、TDV+YF+Dtap、TDV+YF+HPV、TDV+甲型肝炎+MMR、TDV+甲型肝炎+Tdap、TDV+甲型肝炎+DTap、TDV+甲型肝炎+HPV、TDV+MMR+Tdap、TDV+MMR+DTap、TDV+MMR+HPV、TDV+Tdap+DTap、TDV+Tdap+HPV或TDV+DTap+HPV。
四联疫苗组合
TDV+YF+甲型肝炎+MMR、TDV+YF+甲型肝炎+Tdap、TDV+YF+甲型肝炎+DTap、TDV+YF+甲型肝炎+HPV、TDV+YF+MMR+Tdap、TDV+YF+MMR+DTap、TDV+YF+MMR+HPV、TDV+YF+Tdap+DTap、TDV+YF+Tdap+HPV、TDV+YF+DTap+HPV、TDV+甲型肝炎+MMR+Tdap、TDV+甲型肝炎+MMR+DTap、TDV+甲型肝炎+MMR+HPV、TDV+甲型肝炎+Tdap+DTap、TDV+甲型肝炎+Tdap+HPV、TDV+甲型肝炎+DTap+HPV、TDV+MMR+Tdap+DTap、TDV+MMR+Tdap+HPV、TDV+MMR+DTap+HPV或TDV+Tdap+DTap+HPV。
五联疫苗组合
TDV+YF+甲型肝炎+MMR+Tdap、TDV+YF+甲型肝炎+MMR+Dtap、TDV+YF+甲型肝炎+MMR+HPV、TDV+YF+甲型肝炎+Tdap+DTap、TDV+YF+甲型肝炎+Tdap+HPV、TDV+YF+甲型肝炎+DTap+HPV、TDV+YF+MMR+Tdap+DTap、TDV+YF+MMR+Tdap+HPV、TDV+YF+MMR+DTap+HPV、TDV+YF+Tdap+DTap+HPV、TDV+甲型肝炎+MMR+Tdap+DTap、TDV+甲型肝炎+MMR+Tdap+HPV、TDV+甲型肝炎+MMR+DTap+HPV、TDV+甲型肝炎+Tdap+Dtap+HPV或TDV+MMR+Tdap+DTap+HPV。
六联疫苗组合
TDV+YF+甲型肝炎+MMR+Tdap+DTap、TDV+YF+甲型肝炎+MMR+Tdap+HPV、TDV+YF+甲型肝炎+MMR+DTap+HPV、TDV+YF+甲型肝炎+Tdap+DTap+HPV、TDV+YF+MMR+Tdap+DTap+HPV或TDV+甲型肝炎+MMR+Tdap+DTap+HPV。
七联疫苗组合
TDV+YF+甲型肝炎+MMR+Tdap+DTap+HPV。
优选的组合是例如TDV、YF和MMR。
在本发明的某些实施方案中，该方法涉及与其它登革热疫苗(诸如
)的共同施用。
是一种基于黄热病骨架的四价登革热疫苗，CYD-TDV(
Sanofi Pasteur,Lyon,France)，并且已经根据在亚洲和拉丁美洲针对儿童中病毒学上确认的登革热(VCD)为56–61％的整体疫苗功效(VE)的临床证明而在几个国家获得许可(Capeding MR等人，Clinical efficacy and safety of a novel tetravalentdengue vaccine in healthy children in Asia:a phase 3,randomised,observer-masked,placebo-controlled trial.Lancet 2014,384:1358-65；Villar LA等人，Safetyand immunogenicity of arecombinant tetravalent dengue vaccine in 9-16yearolds:a randomized,controlled,phase II trial in Latin America.Pediatr InfectDis J 2013,32:1102-9)。这些特定毒株CYD1、CYD2、CYD3和CYD4的制备已在国际专利申请WO 98/37911、WO 03/101397、WO07/021672、WO 08/007021、WO 08/047023和WO 08/065315中详细描述，可以对这些专利申请进行参考以获得对所述特定毒株的制备过程的精确描述。CYD1、CYD2、CYD3和CYD4的prM-E区的相应核苷酸序列在WO2016034629中提供，并且表16中列出了SEQID NO。
在本发明的某些实施方案中，该方法涉及与其它旅行疫苗诸如霍乱、甲型肝炎、戊型肝炎、日本脑炎、脑膜炎球菌病、狂犬病、蜱传脑炎、伤寒和黄热病疫苗的共同施用。
根据一个实施方案，根据本发明的登革热疫苗与以上所有疫苗共同施用。
根据一个实施方案，根据本发明的登革热疫苗与以上一种或多种疫苗共同施用。
刺激免疫应答的方法
在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中刺激针对所有四种登革热血清型的免疫应答，优选平衡的免疫应答的方法，其包括向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。
在某些实施方案中，该方法包括施用登革热疫苗组合物的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物以在受试者或受试者群体中刺激针对所有四种登革热血清型的免疫应答，优选平衡的免疫应答，所述重构单位剂量包含：包含四种活的减毒登革热病毒株的四价病毒组合物，其中本文所述的单位剂量是冻干的并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，获得重构单位剂量，其中重构单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，诸如嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，诸如登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，诸如嵌合登革热血清型2/3毒株，以及
(vi)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4，诸如嵌合登革热血清型2/4毒株。
优选在本发明的刺激免疫应答的方法中使用重构单位剂量/四价登革热病毒组合物，其中在单位剂量用药学上可接受的稀释剂重构后，登革热血清型(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％并且其中受试者或受试者群体为18至60岁。
在另一个优选的实施方案中，在本发明的刺激免疫应答的方法中使用重构单位剂量/四价登革热病毒组合物，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，登革热血清型(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％并且其中受试者或受试者群体为2至17岁。
本发明部分地涉及在受试者中刺激针对所有四种血清型登革热病毒的免疫应答的方法，其包括通过皮下注射向受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中对所有四种血清型登革热病毒的免疫应答是平衡的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中通过皮下注射向手臂，优选向手臂的三角肌区域施用重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0天和第90天或在第1天和第90天，施用两个重构剂量。根据这些实施方案中的一些，在施用所述第一单位剂量后6至12个月，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月施用第三个如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于来自登革热流行区的受试者。在这些实施方案的一些中，受试者来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在其它实施方案中，受试者来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下此类受试者可以进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或登革热非流行区的受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于相对于所有登革热血清型均为血清阴性的受试者。在其它实施方案中，受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明是涉及所述方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后，和任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量后的第180天或第365天测试时，受试者的中和抗体滴度，对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度可以提供不超过50，不超过40，或不超过30，或不超过20的比率。在某些实施方案中，受试者的所述中和抗体滴度对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度可以提供不超过20的比率，和/或对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度可以提供不超过20的比率。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于2至60岁，或大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者。在某些实施方案中，受试者为1至17岁，或小于9岁，或小于4岁或小于2岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。根据这些实施方案中的一些，受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与黄热病疫苗(尤其是YF-17D)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与黄热病疫苗(尤其是YF-17D)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与MMR疫苗(诸如
II)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与MMR疫苗(诸如
II)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及在老年受试者中刺激针对所有四种登革热血清型的免疫应答，优选平衡的免疫应答的方法，其包括向老年受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。
本发明部分地涉及在老年受试者中刺激针对所有四种血清型登革热病毒的免疫应答的方法，其包括通过皮下注射向老年受试者施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中对所有四种血清型登革热病毒的免疫应答是平衡的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中通过皮下注射向手臂，优选向手臂的三角肌区域施用重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中所述老年受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间，或六个月内或三个月内，诸如在第0天和第90天，施用两个重构剂量。根据这些实施方案中的一些，在施用所述第一单位剂量后6至12个月，诸如在第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月施用第三个如本文所述的本发明的单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于来自登革热流行区的老年受试者。在这些实施方案的一些中，老年受试者来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马、菲律宾、哥伦比亚、波多黎各或泰国，尤其是来自新加坡、多米尼加共和国、巴拿马或菲律宾。在其它实施方案中，老年受试者来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下此类老年受试者可以进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或登革热非流行区的老年受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于相对于所有登革热血清型均为血清阴性的老年受试者。在其它实施方案中，老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。所述至少一种慢性疾患或疾病可以选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
在某些实施方案中，本发明涉及所述方法，其中老年受试者的免疫系统受损。
用于制造用于刺激免疫应答的药物的用途
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的重构单位剂量用于制造用于在受试者中刺激针对所有四种血清型的登革热病毒的免疫应答的药物的用途。在一个实施方案中，通过皮下注射施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及登革热疫苗组合物的重构单位剂量/四价登革热病毒组合物用于制造用于在受试者或受试者群体中刺激针对所有四种血清型的登革热病毒的免疫应答的药物的用途，其中所述重构单位剂量包含：包含四种活的减毒登革热病毒株的四价病毒组合物，其中如本文所述的单位剂量是冻干的并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，获得重构单位剂量，其中重构单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，诸如嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，诸如登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5ml的登革热血清型3，诸如嵌合登革热血清型2/3毒株，以及
(vi)浓度为至少4.5log10pfu/0.5ml的登革热血清型4，诸如嵌合登革热血清型2/4毒株。
优选在单位剂量用药学上可接受的稀释剂重构后获得重构单位剂量/四价登革热病毒组合物用于制造用于在受试者或受试者群体中刺激针对所有四种血清型的登革热病毒的免疫应答的方法中的药物的用途，并且登革热血清型(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％并且其中受试者或受试者群体为18至60岁。
在另一个优选的实施方案中，在本文所述的单位剂量用药学上可接受的稀释剂重构后获得重构单位剂量/四价登革热病毒组合物用于制造用于在受试者或受试者群体中刺激针对所有四种血清型的登革热病毒的免疫应答的方法中的药物的用途，并且登革热血清型(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％并且其中受试者或受试者群体为2至17岁。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中对所有四种血清型登革热病毒的免疫应答是平衡的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射向手臂，优选向手臂的三角肌区域施用重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0天和第90天或在第1天和第90天，施用两个重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在施用第一重构单位剂量后6至12个月，诸如第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间，施用第三重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中所述受试者来自登革热流行区。在其它实施方案中，受试者来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下此类受试者可以进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或登革热非流行区的受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于相对于所有登革热血清型均为血清阴性的受试者。在其它实施方案中，受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明是涉及所述用途，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后，和任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量后的第180天或第365天测试时，受试者的中和抗体滴度，对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度可以提供不超过50，不超过40，或不超过30，或不超过20的比率。在某些实施方案中，受试者的所述中和抗体滴度对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度可以提供不超过20的比率，和/或对于登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度可以提供不超过20的比率。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量施用于2至60岁，或大于17岁，或大于18岁，或18至60岁的受试者。在某些实施方案中，受试者为1至17岁，或小于9岁，或小于4岁或小于2岁。在其它实施方案中，受试者或受试者群体是大于21岁，或21至60岁，或21至45岁的成人。根据这些实施方案中的一些，受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的单位剂量施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于小于2岁，优选2个月至2岁或2个月至1.5岁或2个月至1岁的儿科受试者。根据这些实施方案中的一些，儿科受试者是血清阴性的并且来自登革热流行区。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与黄热病疫苗(尤其是YF-17D)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与黄热病疫苗(尤其是YF-17D)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与MMR疫苗(诸如
II)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与MMR疫苗(诸如
II)伴随施用。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中如本文所述的本发明的重构单位剂量与另一种疫苗伴随施用。在一个实施方案中，如本文所述的本发明的重构单位剂量与DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)伴随施用。如前一部分所述，特别优选如本文所述的本发明的重构单位剂量与DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)伴随施用。
本发明部分地涉及如本文所述的本发明的重构单位剂量用于制造用于在老年受试者中刺激针对所有四种血清型的登革热病毒的免疫应答的药物的用途。在一个实施方案中，通过皮下注射施用如本文所述的本发明的重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中对所有四种血清型登革热病毒的免疫应答是平衡的。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中通过皮下注射向手臂，优选向手臂的三角肌区域施用重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及用于所述用途的如本文所述的本发明的重构单位剂量，其中受试者对所有登革热血清型均为血清阴性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中施用两个如本文所述的本发明的重构单位剂量。在一些实施方案中，在12个月或更长时间内，或在六个月内，或在三个月内，诸如在第0天和第90天，施用两个重构单位剂量。根据这些实施方案中的一些，在施用第一重构单位剂量后6至12个月，诸如第一次施用后12个月，或晚于第一次施用后12个月，诸如在第二次施用后12个月(1年)，或甚至在第一次或第二次施用后5年或更长时间，施用第三重构单位剂量。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中老年受试者来自登革热流行区。在其它实施方案中，老年受试者来自登革热非流行区。根据本发明，在前往登革热流行区的情况下此类老年受试者可以进行疫苗接种。在某些实施方案中，将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于来自登革热流行区或登革热非流行区的老年受试者。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中将如本文所述的本发明的重构单位剂量皮下施用于相对于所有登革热血清型均为血清阴性的老年受试者。在其它实施方案中，老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。所述至少一种慢性疾患或疾病可以选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
在某些实施方案中，本发明涉及所述用途，其中老年受试者的免疫系统受损。
本公开提供了一种测定血清样品中针对登革热血清型1、2、3和4的每一种的中和抗体滴度的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将来自登革热易感细胞系的细胞接种到96孔测定板上并在培养期内进行培养；
(b)制备血清样品的连续稀释液；
(c)将步骤(b)中制备的连续稀释的血清样品与登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4单独混合，以获得每种登革热血清型的单独混合物并孵育这些单独的混合物；
(d)将(c)中制备的单独的混合物添加到步骤(a)中接种和培养的细胞中并将细胞与单独的混合物一起孵育；
(e)为接种的细胞提供覆盖物，并将细胞孵育40至75小时；
(f)测定每个孔中的噬斑数目并将每个孔中的噬斑数目与对照进行比较，以测定针对登革热血清型1、2、3和4中的每一种的中和抗体的水平。
对于不同的登革热血清型的混合物，步骤(e)中可以使用不同的孵育期。登革热血清型4的混合物的孵育期可以比登革热血清型1、2和3的混合物的孵育期短，例如登革热血清型4的混合物的孵育期可以小于50小时，优选46±2小时。在一些实施方案中，登革热血清型2的混合物的孵育期可以比登革热血清型1、3和4的混合物的孵育期长，例如登革热血清型2的混合物的孵育期可以在60至70小时之间，优选70±2小时。
步骤(a)中使用的登革热易感细胞系可以选自Vero细胞、LLC-MK2细胞和BHK-21细胞。细胞的培养期可以是12至36小时。
在步骤(c)中，登革热血清型1可以是DENV-1毒株16007，登革热血清型2可以是DENV-2毒株16681，登革热血清型3可以是DENV-3毒株16562并且登革热血清型4可以是DENV-4毒株1036。
步骤(c)中单独的混合物可以在2至8℃的温度下孵育过夜。
步骤(e)中的覆盖物可以选自甲基纤维素、羧甲基纤维素和琼脂糖。细胞与覆盖物可以在33℃至35℃的温度下孵育。
可以使用血清型特异性抗登革热单克隆抗体测定每个孔中的噬斑数目。
本公开提供了一种测定血清样品中针对登革热血清型1、2、3和4的每一种的中和抗体滴度的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将Vero细胞接种在96孔测定板上并将Vero细胞培养20至30小时；
(b)制备血清样品的连续稀释液；
(c)将连续稀释的血清样品与登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4单独混合，以制备单独的混合物，并将单独的混合物在2至8℃的温度下孵育过夜；
(d)将步骤(a)中接种和培养的细胞与步骤(c)中制备的单独的混合物一起在单独的孔中孵育90至120分钟；
(e)为接种的细胞提供甲基纤维素覆盖物，并将细胞在34℃下孵育40至75小时；
(f)使用血清型特异性抗登革热单克隆抗体测定每个孔中的噬斑数目并将每个孔中的噬斑数目与对照进行比较，以测定针对登革热血清型1、2、3和4中的每一种的中和抗体的水平。
本公开还提供了所述方法用于在接种登革热病毒疫苗之前确定受试者的登革热血清状态或在接种登革热病毒疫苗之后分析受试者的免疫应答的用途。
实施例
包括以下实施例是为了证明如权利要求书中所描述的本发明的某些方面和优选实施方案。然而，本领域技术人员应理解，以下描述仅是说明性的，不应以任何方式作为对本发明的限制。
实施例1：登革热病毒株的制备。
用于产生嵌合登革热毒株TDV-1、TDV-3和TDV-4的方法是标准分子克隆和DNA工程方法，并在Huang等人(2003)J.Virology77(21):11436-11447中进行了描述。使用以下熟知的方法来构建登革热血清型1、3和4的prM-E基因并将其引入TDV-2骨架：逆转录酶PCR(RT-PCR)、PCR、限制性酶消化、DNA片段连接、通过电穿孔进行细菌转化、质粒DNA制备，通过T7RNA聚合酶进行体外转录以及通过电穿孔转染Vero细胞。
在如Huang等人(2013)PLOS Neglected Dis,7(5):e2243所述，单独地培育和纯化不同的登革热血清型后，将它们以表5中提供的浓度混合。登革热血清型混合物存在于登革热疫苗组合物中，并与产生登革热疫苗组合物的药学上可接受的赋形剂的组合物组合，所述登革热疫苗组合物包含15％w/vα,α海藻糖二水合物、1％w/v泊洛沙姆407、0.1％w/v人血清白蛋白和100mM氯化钠。所述登革热疫苗组合物是冻干的并且代表TDV的冻干单位剂量。将冻干单位剂量用37mM氯化钠水溶液重构，重构单位剂量包含15％w/vα,α海藻糖二水合物、1％w/v泊洛沙姆407、0.1％w/v人血清白蛋白和137mM氯化钠。
实施例2：微量中和试验
通过微量中和测定法对四种登革热血清型中的每一种进行免疫原性测量，滴度定义为引起噬斑值降低50％的稀释度(MNT50)。简言之，第1天将Vero细胞以2.5x105个细胞/ml的密度接种在96孔测定板的DMEM和10％FBS中，并在37℃下孵育24小时。第2天，制备含热灭活抗体的试验血清样品和对照血清样品的连续稀释液(稀释度范围为1:10至1:20480)，并与固定浓度的登革热病毒，尤其是DENV-1毒株16007、DENV-2毒株16681、DENV-3毒株16562和DENV-4毒株1036一起(目标60-80pfu/孔)混合在96孔微量滴定板中，并在2-8℃下孵育过夜以使血清中存在的抗体能够中和病毒。孵育后，将病毒和抗体的混合物转移到带有Vero细胞的96孔板上，并将板在37℃下孵育90-120分钟以感染Vero细胞。将DMEM中1％的甲基纤维素覆盖物添加到板上以限制子代病毒的传播，并且根据登革热血清型，将板在34℃下孵育46-70小时：
DENV1–66±2小时
DENV2-70±2小时
DENV3-66±2小时
DENV4–46±2小时
孵育后，将细胞用PBS洗涤两次并通过添加冷甲醇且在≤-20℃的温度下孵育60分钟来固定。固定后，将板干燥并用洗涤缓冲剂(1x PBS，pH 7.4，含0.5％吐温(Tween))洗涤三次，然后在每孔的封闭溶液(2.5％脱脂奶PBST溶液)中添加50μl血清型特异性抗登革热单克隆抗体，并与细胞一起在2-8℃下孵育18±4小时。
单克隆抗体的制备如Gentry等人(1982)Am.J.Trop.Med.Hyg.31,548–555；Henchal等人(1985)Am.J.Trop.Med.Hyg.34,162–169；和Henchal等人(1982)Am.J.Trop.Med.Hyg.31(4):830-6)所述。简言之，抗DENV-1HBD是针对登革热1毒株夏威夷型包膜产生的，抗DENV-2是针对登革热2毒株新几内亚C型包膜同种型1产生的，抗DENV-3HBD是针对登革热3毒株H87包膜同种型2A产生的，并且抗DENV-4HBD是针对登革热4毒株H241包膜同种型2A产生的。
孵育后，将板用洗涤缓冲剂洗涤三次，并添加50μl在封闭溶液中的过氧化物酶标记的山羊抗小鼠二次IgG(H+L)(KPL目录号074-1806)并在37℃下孵育90至120分钟。然后将板用洗涤缓冲剂洗涤三次并添加50μl沉淀剂底物(在2.5ml DMSO中的2-氨基-9-乙基咔唑(AEC)片剂，47.5ml 50mM乙酸盐缓冲剂和250μl过氧化氢)，并将混合物在室温下孵育20分钟。最后，去除底物，将板用dH2O冲洗并干燥。
使用线性回归方法计算样品滴度，并报告为每个样品的MNT50滴度。临床数据报告为每个治疗组中所有单个MNT50滴度的几何平均滴度。简言之，对每个孔中感染灶的数目进行计数，并通过比较含有抗体(试验样品)的孔与仅含有病毒的孔的感染灶中心的减少百分比来确定中和抗体的滴度。使用以下线性回归方程计算MNT50：
MNT50＝10^[(50-c)/m])，其中c＝回归线的y截距，m＝回归线的斜率
每个试验样品进行三次重复测试，并根据三次重复的平均值计算滴度。图2中提供了该试验中进行的步骤的示意图。
实施例3：比较两种不同单位剂量的临床试验
在居住在新加坡的351名年龄在21至45岁的受试者中进行了一项描述性的II期、双盲、随机化和对照试验，比较了四价登革热疫苗的两种不同配制品。按照基线登革热血清状态将患者随机分为两个处理组(1:1)：第1组接受1个皮下(SC)剂量的HD-TDV，第2组接受1个皮下剂量的TDV。如实施例1中所述制备登革热疫苗配制品。HD-TDV疫苗(高剂量四价登革热疫苗)和TDV疫苗(对应于如本文所述的本发明的单位剂量)中四种登革热血清型的浓度在表5中有概述。
表5.试验中使用的单位剂量。
在疫苗接种后第15、30、90、180和365天评价免疫原性，作为几何平均滴度(GMT)和血清阳性率来评价。使用微量中和测定法评估疫苗针对四种登革热血清型中的每一种的免疫原性，滴度对应于引起噬斑减少50％的稀释度(MNT50)，如实施例2所述。根据整个试验群体中，中和抗体的几何平均滴度(GMT)和血清阳性率(定义为对于每种DENV血清型而言中和滴度倒数≥10的受试者的百分比)来报告主要免疫原性终点。作为次要终点，通过登革热基线血清阳性状态分析GMT和血清阳性率。基线时血清阳性定义为对于至少一种DENV血清型为血清阳性，而基线时血清阴性定义为对于所有四种DENV血清型均为血清阴性。
通过严重程度和因果关系来评估诱发和非诱发不良事件(AE)。
a)血清阳性
登革热血清阳性是基于实施例2中描述的微量中和试验(MNT)的结果，并且定义为基线时对于一种或多种登革热血清型的中和抗体滴度倒数≥10。对于每种登革热血清型的基线血清阳性率定义为对于给定登革热血清型的血清阳性受试者的百分比，并且是从在施用第一单位剂量之前在受试者中测得的登革热血清型的中和抗体滴度得出的。在第180天或第365天的血清阳性率定义为血清阳性受试者的百分比，并且分别是从在施用第一单位剂量后180天和365天在受试者中测得的登革热血清型的中和抗体滴度得出的。
基于MNT50，总共有187位受试者(53.6％)在基线时对于至少一种登革热血清型为血清阳性：48.7％对于DENV-1为血清阳性，49.0％对于DENV-2为血清阳性，45.2％对于DENV-3为血清阳性并且41.2％对于DENV-4为血清阳性。表6示出了两个不同的疫苗接种组在基线时的血清阳性状态和血清阳性率。
表6.基线时的血清状态和血清阳性率
到施用单位剂量后第30天，血清阳性率增加，并且一直到第365天对于四种血清型中的每一种而言都保持高水平(图3)。在整个试验群体中，HD-TDV和TDV组中对于DENV-1和DENV-3为血清阳性的受试者百分比相似，而HD-TDV组看到针对DENV-2较高的基线后血清阳性率，TDV组看到针对抗DENV-4的较高的基线后血清阳性率(图3B)。通常，在基线时已经为血清阳性的受试者中看到比血清阴性受试者更高的血清阳性率。到第30天，血清阳性疫苗组中针对所有四种登革热血清型的血清阳性率均升高到近100％，并且保持在该水平一直到第365天；HD-TDV和TDV之间未见差异(图3A)。在血清阴性组中，血清阳性率逐渐增加，在第30天达到峰值，直到365天下降幅度有限。一直到第365天，HD-TDV针对DENV-2的比率始终高于TDV，但TDV针对DENV-4的比率却高于HD-TDV(图3A)。
表7.第180天的血清阳性率
表8.第365天的血清阳性率
b)几何平均中和抗体滴度(GMT)
在施用第一单位剂量的登革热疫苗组合物之前和在施用第一单位剂量的登革热疫苗组合物后180或365天得到的受试者的血清样品中，使用如实施例2中描述的微量中和(MNT)测定法测定每种登革热血清型的中和抗体滴度(GMT)。
对于HD-TDV和TDV两者，到第15天观察到GMT增加，到第30天达到最大值(图4)。在整个试验中，两种单位剂量的抗体滴度均保持在基线水平以上。在整个试验群体中，两个单位剂量组之间的GMT滴度未见显著差异，除了针对DENV-2的情况外，其中HD-TDV组与TDV组相比的应答更高(第30天为8640.3与1992.7)。当通过基线血清阳性状态评估时，GMT分布型与整个群体相似，到第15天上升，第30天达到峰值，此后逐渐下降(图4B)。在基线时为血清阳性的组中，单位剂量组之间在对DENV-2的应答方面差异减小，在第30天HD-TDV组和TDV组的GMT分别为6970.3和4193.3。在两个单位剂量中，基线血清阳性组与基线血清阴性组相比针对DENV-1、DENV-3和DENV-4的应答更高。针对DENV-2，与HD-TDV相比，在接受TDV的基线血清阴性受试者中看到应答较低；TDV组中第30天的GMT为812.9，相比而言HD-TDV组为10965.9。这些受试者中的应答也与针对DENV-4不同，在TDV组中观察到更高的应答(第30天的GMT为57.7，相比而言HD-TDV组为20.9)；这种差异持续到第365天(图4A)。
表9.第180天的几何平均中和抗体滴度(GMT)
表10.第180天的几何平均中和抗体滴度(GMT)的比率
表11.第365天的几何平均中和抗体滴度(GMT)
表12.第365天的几何平均中和抗体滴度(GMT)的比率
表13.通过第180天的登革热基线血清阳性状态评估的所有四种登革热血清型的几何平均中和抗体滴度(GMT)
表14.通过第180和365天的登革热基线血清阳性状态评估的几何平均中和抗体滴度(GMT)的比率
表15.通过第365天的登革热基线血清阳性状态评估的所有四种登革热血清型的几何平均中和抗体滴度(GMT)
表16.通过第365天的登革热基线血清阳性状态评估的几何平均中和抗体滴度(GMT)的比率
c)安全性
总体而言，在两个单位剂量组中，诱发的局部和全身不良事件(AE)、非诱发的AE和严重不良事件(SAE)的比率相似。在试验中没有记录到死亡或导致中断的不良事件。每个单位剂量组中有三名受试者经历SAE，根据时间关联性，申办者认为HD-TDV组中的这些事件之一与疫苗有关。SAE是多关节炎，在接受疫苗六天后开始。单位剂量组间诱发反应率和基线时的血清阳性状态相似。总体而言，在HD-TDV和TDV组中，分别有47.4％和53.7％的受试者报告了局部反应，并且分别有52.0％和50.9％的受试者报告了诱发的全身性AE。大多数反应是轻度或中度的。最常报告的局部不良反应是注射部位疼痛(HD-TDV组为46.3％，TDV组为52.0％)，最常见的全身性AE为头痛(HD-TDV组为28.6％，TDV组为34.9％)。
d)结论
两种单位剂量均显示出可接受的安全特性。结果显示，与早期HD-TDV单位剂量相比，新的TDV单位剂量的免疫应答更加平衡，尤其是在疫苗接种之前为血清阴性的受试者中：(i)在基线血清阴性受试者中，用TDV对DENV-2的应答不太占优势，(ii)在这些受试者中用TDV的DENV-4血清阳性率和GMT也较高。
实施例4：登革热疫苗刺激的细胞介导的免疫
使用来自于参加实施例3的临床试验的受试者的外周血单核细胞(PBMC)和可从Mabtech获得的商业ELISpot测定试剂盒根据制造商的说明进行γ干扰素(IFNγ)酶联免疫吸附斑点(ELISPOT)测定。简言之，将冷冻保存的PBMC解冻并使其静置过夜，然后与各种肽库一起在包被有抗IFNγ抗体的板中孵育18-22小时。然后去除PBMC，使斑点显影，然后计数。结果报告为每106个PBMC的平均斑点形成细胞(SFC)。肽库与选定的DENV来源的蛋白相匹配，所述蛋白覆盖了整个DENV-2蛋白质组，其中包含来自新几内亚C(NGC)和泰国/16681/84毒株的NS1、NS3和NS5蛋白；和仅来自泰国/16681/84的C、prM+E、NS2和NS4蛋白加上分别来自DENV-1、DENV-3和DENV-4毒株泰国/16007/1964、菲律宾/16562/1964和印度尼西亚/1036/1976的TDV-1、TDV-3和TDV-4prM+E插入物。
在单个剂量的TDV后6个月和12个月对DENV-2蛋白质组的应答率>90％，并且在基线时血清阴性与血清阳性的受试者之间相当(图5)。
所述应答主要针对NS蛋白，尤其是在基线时为血清阴性的受试者中(图6)。
NS3和NS5蛋白是最公认的抗原(占受试者的50-75％)。NS3和NS5的免疫优势不依赖于基线血清状态。在单次疫苗接种后的12个月随访中，NS3和NS5之间的应答耐久性均保持相同。
实施例5：对非结构蛋白的抗体应答
通过跨内皮电阻(TEER)测量，来自四种登革热血清型的非结构蛋白NS-1可诱导人肺微血管内皮细胞(HPMEC)的内皮渗透性过高(Puerta-Guardo等人(2016)PloS Pathog.12(7):e1005738)。它也与内皮细胞相互作用，通过活化唾液酸酶和组织蛋白酶L/乙酰肝素酶途径来诱导糖萼降解(Glasner等人(2017)PloS Pathog.13(11):e1006673)。鉴于这些作用，研究了比较单位剂量是否会诱导针对NS1的抗体并抑制NS1介导的生理作用。
a)抗NS1抗体
在疫苗接种前第0天和施用第一单位剂量后第120天收集血清样品。在第0天和第120天从6位登革热血清阴性受试者和6位登革热血清阳性受试者中收集血清，并通过ELISA测定Ab浓度。
表17和表18中示出了第0天和第120天血清阴性受试者和血清阳性受试者中的抗NS1抗体浓度：
表17.第0天和第120天血清阴性受试者中的抗NS1抗体浓度
表18.第0天和第120天血清阳性受试者中的抗NS1抗体浓度
这些数据显示，该疫苗在血清阳性受试者和血清阴性受试者中诱导针对来自所有登革热血清型的NS1的抗体。
b)跨内皮电阻(TEER)
如先前所述通过测量在24孔Transwell聚碳酸酯膜系统(
渗透性支持物，0.4μM，6.5mm插入物；Corning Inc.)上生长的HPMEC的TEER来评价来自登革热血清型1、2、3和4的重组NS1蛋白以及来自接种疫苗的血清阴性和血清阳性受试者的血清对内皮渗透性的影响(Beatty等人(2015)Sci.Transl.Med.7(304):304ra141；Puerta-Guardo等人(2016)PloS Pathog.12(7):e1005738)。简言之，在添加试验蛋白后使用带有“筷状”电极(World Precision Instruments)的上皮伏特欧姆计(EVOM)，在连续2小时的时间点以欧姆(Ω)为单位测量TEER。将在Transwell插入物上生长的未经处理的内皮细胞用作未处理的阴性对照，仅将含培养基的插入物用于空白电阻测量。相对TEER表示电阻值(Ω)的比率，如下所示：(Ω实验条件-Ω仅培养基)/(Ω未处理的内皮细胞--Ω仅培养基)。处理24小时后，将上腔室和下腔室培养基的50％更换为新鲜的内皮细胞培养基。对于使用血清的实验，从顶室中取出30μl培养上清液并更换为30μl血清样品，之后立即添加5μg/ml DENV-2NS1。
来自血清阴性受试者的第0天血清样品未能防护NS1介导的屏障功能障碍，但是来自所有血清阴性受试者的第120天样品阻止了由NS1诱导的TEER值的降低(参见图7A)。来自血清阳性受试者的第0天样品产生不同水平的防护，并且来自血清阳性受试者的所有第120天样品完全消除了NS1诱导的渗透性过高(参见图7B)。
c)糖萼样层(EGL)的降解
如先前所述进行显微镜检查(Puerta-Guardo等人(2016)PloS Pathog.12(7):e1005738)。对于成像实验，使HPMEC在涂有0.2％明胶(Sigma)的盖玻片上生长，并在配备34通道光谱检测器的Zeiss LSM710Axio Observer倒置荧光显微镜上成像。对使用Zen 2010软件(Zeiss)获取的图像进行加工并用ImageJ软件进行分析。将所有RGB图像转换为灰度图，然后获得选定区域的平均灰度值和积分密度，以及相邻背景读数，并对平均荧光强度(MFI)进行绘图。为了评估来自接种疫苗的受试者的血清对DENV2NS1诱导的EGL破坏的影响，在用DENV2NS1(5μg/ml)+阴性对照血清(30μl)、NS1+阳性对照血清(30μl)或NS1+来自接种疫苗的受试者的血清(30μl)处理过并且在处理后6小时用4％多聚甲醛(PFA)固定的铺满的HPMEC单层上检查唾液酸和硫酸乙酰肝素的分布。在4℃下孵育一抗(与Alexa Fluor 647缀合以染色N-乙酰神经氨酸(唾液酸)的小麦胚芽凝集素(WGA)凝集素(WGA-A647，Molecular Probes)；纯化的硫酸乙酰肝素Ab(克隆F58-10E4，Amsbio)过夜，并且使用与Alexa荧光团(488和647)缀合的物种特异性抗IgG或抗IgM二抗进行检测。
来自血清阴性受试者的第0天血清没有实质性防护作用，而来自血清阴性受试者的第120天血清完全阻断了唾液酸和硫酸乙酰肝素的降解。类似地，来自血清阳性受试者的第0天样品表现出不同水平的防护，而来自血清阳性受试者的第120天血清具有完全防护性(参见图8)。阳性对照血清用作防护的基线，阴性对照血清代表最大程度的NS1介导的破坏。这些结果显示，由登革热疫苗刺激的抗NS1抗体应答可以通过预防关键EGL组分的降解来防护NS1诱导的渗透性过高。
综上所述，这些结果表明登革热疫苗在接种疫苗后刺激强大且有防护性的抗DENV2NS1Ab应答。
实施例6：儿童III期临床试验
针对20100名居住在泰国、斯里兰卡、菲律宾、巴拿马、尼加拉瓜、多米尼加共和国、哥伦比亚或巴西的年龄在4至16岁的受试者进行了一项III期、双盲、随机化和安慰剂对照的试验，评价四价登革热疫苗(在下文中称为TDV)的功效、安全性和免疫原性。该试验包括3个部分。第1部分评价疫苗功效(VE)并且持续到满足以下2个标准为止：(i)确诊120例登革热病例；和(ii)第二次疫苗接种后至少12个月的受试者随访持续时间。第2部分是进行另外6个月评价VE和进行次要功效分析。第3部分将通过跟踪参与者的副作用来评价长期安全性并且将持续另3年。
第1部分：主动监测以初步评估在所有受试者中的功效。在这段时间内，至少每周一次与受试者联系，以确保对可能潜在地由登革热引起的发热性疾病的鉴定。该部分始于疫苗接种当天并且一旦满足以下2个标准则结束：(i)确诊120例登革热病例；和(ii)第二次疫苗接种后至少12个月的受试者随访时间。对每个受试者均限定第1部分的终点，使得第二次疫苗接种后的随访持续时间对于所有受试者而言大致相同。如果在第二次疫苗接种后至少30天发生，则第1部分中病毒学上确认的病例计入主要功效目标。第1部分在第二次疫苗接种后12个月结束
第2部分：第1部分I完成后，即第二次接种后18个月，对每个受试者进行另外6个月的主动监测。在这段时间内，至少每周一次与受试者联系，以确保对可能潜在地由登革热引起的发热性疾病的鉴定。第1部分和第2部分中病毒学上确认的病例有助于次要功效目标。
第3部分：第2部分完成后进行改进的主动监测以评估所有受试者中的安全性并且每个受试者持续3年。第3部分期间改进的监测将在试验的第3部分中保持至少每周一次联系，但调查强度将根据住院治疗的需要加以改进。监测将鉴定出可能潜在地由登革热引起的任何严重程度的发热性疾病。
纳入标准包括：
·在随机分组时，受试者年龄为4至16岁(含4岁和16岁)。
·通过病史、身体检查(包括生命体征)和研究人员的临床判断确定，在进入试验时健康状况良好的个体。
·在根据当地法规要求解释了试验性质之后，在开始任何试验程序之前，受试者和/或受试者的父母/监护人在同意书/书面知情同意书(如果适用)以及任何必要的隐私授权书上签名并注明日期。
·可以遵守试验程序并在随访持续期间可接受探访的个体。
排除标准包括：
1.随机分组时出现发热性疾病(温度≥38℃)或中度或重度急性疾病或感染。
2.研究人员认为由于参与试验而可能干扰试验结果或对受试者造成额外风险的病史或任何疾病，包括但不限于：
a.已知的对任何疫苗组分的超敏性或过敏性。
b.妊娠或哺乳期的女性受试者(初潮后)。
c.根据研究人员的判断，患有任何严重的慢性疾病或进行性疾病的个体(例如，赘瘤、胰岛素依赖型糖尿病、心脏病、肾病或肝脏疾病、神经系统或癫痫病症或格林-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome))。
d.已知或疑似的免疫功能损害/改变，包括：
i.在第1天(第0个月)之前的60天内长期使用口服类固醇(相当于20mg/天的泼尼松≥12周/≥2mg/kg体重/天的泼尼松≥2周)(允许吸入、鼻内或局部使用糖皮质激素)。
ii.在第1天(第0个月)之前的60天内接受了肠胃外类固醇(相当于20mg/天的泼尼松≥12周/≥2mg/kg体重/天的泼尼松≥2周)。
iii.在第1天(第0个月)之前的3个月内施用了免疫球蛋白和/或任何血液制品，或计划在试验期间施用。
iv.在第1天(第0个月)之前的60天内接受了免疫刺激剂。
v.第1天(第0个月)之前的6个月内进行免疫抑制疗法，诸如抗癌化学疗法或放射疗法。
vi.人类免疫缺陷病毒(HIV)感染或HIV相关疾病。
vii.遗传性免疫缺陷。
3.在第1天(第0个月)之前的14天内(对于灭活疫苗而言)或28天内(对于活疫苗而言)接受了任何其它疫苗，或计划在第1天(第0个月)之后的28天内接受任何疫苗。
4.在第1天(第0个月)之前30天参与了另一研究产品的任何临床试验，或者有意在进行该试验期间的任何时间参与另一临床试验。
5.先前参与过登革热候选疫苗的任何临床试验，或先前接受过登革热疫苗。
6.参与试验进行的个体的一级亲属。
7.性活跃且在第1天(第0个月)之前至少两个月未使用任何可接受的避孕方法的有生育能力的女性。
8.性活跃且拒绝在第二次疫苗接种后最多6周使用可接受的避孕方法的有生育能力的女性。
9.因行政命令或法院命令剥夺自由的，或处于紧急情况或非自愿住院的。
10.当前酗酒或者可能干扰受试者遵从试验程序的能力的药物成瘾。
11.确定为研究人员或试验中心的雇员，直接参与提出的试验或在该研究人员或试验中心指导下的其它试验。
将符合条件的受试者随机分为(2:1)两个处理组：第1组在第1天和第90天在上臂接受一个皮下(SC)剂量的TDV，第2组在第1天和第90天在上臂接受一个皮下剂量的安慰剂。根据地区(亚太区和拉丁美洲)和年龄范围(4-5岁、6-11岁和12-16岁的儿童)对随机分组进行分层，以确保每个年龄范围具有每个地区的适当TDV与安慰剂比率。随机分组后，不替换退出者。研究第1天定义为首次施用TDV或安慰剂的日期。如实施例1中所述制备TDV。TDV的每个皮下剂量为0.5mL和每个剂量的TDV疫苗中四种登革热血清型的浓度分别为3.6log10PFU/剂、4.0log10PFU/剂、4.6log10PFU/剂和5.1log10PFU/剂的TDV-1、TDV-2、TDV-3和TDV-4。
对于包含浓度为3.60log10pfu/0.5ml的登革热血清型1，浓度为4.00log10pfu/0.5ml的登革热血清型2，浓度为4.60log10pfu/0.5ml的登革热血清型3和浓度为5.11log10pfu/0.5ml的登革热血清型4的一种示例性四价疫苗组合物，显示了“以pfu/0.5ml计的总浓度”，其用作计算四价登革热疫苗的每种单独组分的浓度百分比的基础值。
首先，将浓度的对数值转换为数值。该转换的结果对于血清型1而言为4x103pfu/0.5ml，对于血清型2而言为1x104pfu/0.5ml，对于血清型3而言为4x104pfu/0.5ml并且对于血清型4而言为1.3x105pfu/0.5ml。以pfu/0.5ml计的总浓度是上述数值的总和，得出1.84x105pfu/0.5ml。
通过将单个血清型的浓度数值(表示为pfu/0.5ml)除以总浓度(以pfu/0.5ml表示)并将结果乘以100，可以得到血清型1、2、3和4中每一种的“浓度百分比”，即：
血清型1的浓度百分比＝(4x103pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝2％
血清型2的浓度百分比＝(1x104pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝5％
血清型3的浓度百分比＝(4x104pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝22％
血清型4的浓度百分比＝(1.3x105pfu/0.5ml÷1.84x105pfu/0.5ml)x100＝71％。
将浓度百分比四舍五入为整数。
主要结果量度包括两剂TDV疫苗预防由任何登革热血清型诱导的病毒学上确认的登革热(VCD)的疫苗功效(VE)[时间范围：第二次疫苗接种后30天(第120天)到第1部分结束]。VE定义为1-(λv/λc)，其中λv和λc分别表示TDV组和安慰剂组的危险率。病毒学上确认的登革热病例定义为发热性疾病(定义为连续3天中任意2天温度≥38℃)或研究人员以血清型特异性逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)为阳性在临床上怀疑为登革热的疾病。发热性疾病与上一次发热性疾病之间将需要间隔至少14天，以避免一次发作的急性期和恢复期就诊与第二次发作急性期和恢复期就诊重叠。
次要结果量度包括：
1)两剂TDV预防由每种登革热血清型诱导的病毒学上确认的登革热的VE[时间范围：第二次疫苗接种后30天(第120天)到第2部分结束]。
2)两剂TDV预防在基线时为登革热血清阴性的参与者中由任何登革热血清型诱导的病毒学上确认的登革热的VE[时间范围：第二次疫苗接种后30天(第120天)到第2部分结束(最多21个月)]。
3)两剂TDV预防在基线时为登革热血清阳性的参与者中由任何登革热血清型诱导的病毒学上确认的登革热的VE[时间范围：第二次疫苗接种后30天(第120天)到第2部分结束]。
4)两剂TDV预防由于任何登革热血清型诱导的病毒学上确认的登革热引起的住院治疗的VE[时间范围：第二次疫苗接种后30天(第120天)到第2部分结束]。
5)两剂TDV预防由任何登革热血清型诱导的病毒学上确认的中度登革热的VE[时间范围：第二次疫苗接种后30天(第120天)到第2部分结束]。
6)在安全子集中有诱发的局部注射部位不良事件(AE)的参与者的百分比[时间范围：每次疫苗接种后的第1至7天]和诱发的局部注射AE的严重程度。注射部位诱发的局部AE定义为每次疫苗接种后7天内发生的疼痛、红斑和肿胀。
7)在安全子集中有诱发的全身性不良事件(AE)的参与者的百分比[时间范围：每次疫苗接种后的第1至14天]和诱发的全身性AE的严重程度。儿童(<6岁)中诱发的全身性AE定义为每次疫苗接种后14天内发生的发烧、烦躁/易怒、嗜睡和食欲不振。儿童(≥6岁)中诱发的全身性AE定义为每次疫苗接种后14天内发生的发烧、头痛、乏力、不适和肌痛。
8)在安全子集中有任何非诱发的不良事件(AE)的参与者的百分比[时间范围：每次疫苗接种后的第1至28天]。如上所定义，非诱发的AE是并非诱发的局部或全身性AE的任何AE。
9)第1部分和第2部分期间有严重不良事件(SAE)的参与者的百分比[时间范围：第1天到第1部分和第2部分结束时]。严重不良事件(SAE)是在任何剂量下均会导致死亡，危及生命，需要住院治疗或延长现有住院时间，导致持续或严重的残疾/丧失能力，是先天性异常/出生缺陷或由于以上提及的标准以外的其它原因而在医学上具有重要意义的任何不幸医疗事件或影响。
10)在第3部分的上半部分和下半部分期间有致命性SAE和与研究药物相关的SAE的参与者的百分比[时间范围：从第2部分结束时开始的3年(18个月减半)(第一次疫苗接种后大约21个月)]。
11)在免疫原性子集中，对四种登革热血清型中的每一种都具有血清阳性应答的参与者的百分比[时间范围：第1天和第1、3、4、9、15个月，然后每年一次(最多3年)]。血清阳性应答定义为中和滴度倒数≥10。四种DENV血清型为DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4。
12)在免疫原性子集中，对多种登革热血清型都具有血清阳性应答的参与者的百分比[时间范围：第1天和第1、3、4、9、15个月，然后每年一次(最多3年)]。
13)在免疫原性子集中，对四种登革热血清型中的每一种的中和抗体的几何平均滴度(GMT)[时间范围：第1天和第1、3、4、9、15个月，然后每年一次(最多3年)]。如实施例2所述，将通过微量中和试验(MNT)测量中和抗体的GMT。
a)研究群体
筛选后，将20,099名参与者随机分组，并且20,071名接受至少一次注射。总共97.4％的安慰剂参与者(n/N：6,521/6,698)和97.3％的疫苗接种者(n/N：13,038/13,401)完成了研究的第1部分(图9)。退出研究的原因包括AE，参与者因失访，妊娠，违背方案和参与者(或父母/监护人)退出。两个治疗组的基线特征相似(表19)。研究参与者的平均年龄为9.6岁，基线血清阴性率为27.7％，并且招募在各个地区广泛平衡(亚洲为46.5％，拉丁美洲为53.5％)。血清阴性率最高的是巴拿马(62.2％)，其次是斯里兰卡(38.5％)、泰国(34.4％)、巴西(28.8％)、尼加拉瓜(22.3％)、哥伦比亚(15.4％)、菲律宾(12.4％)和多米尼加共和国(2.8％)。
表19：研究群体的基线特征(数量，％)
a对于所有血清型均为血清阴性；血清阳性定义为中和抗体滴度倒数≥10；SD，标准偏差。
bTVD加上安慰剂组的参与者数量不等于所示总数，因为分配不当的参与者(即由于管理错误而接受TVD和安慰剂两者的参与者)不包括在TDV和安慰剂组的数据中。
b)发热性疾病和VCD
在第1部分期间，亚洲和拉丁美洲的站点分别报告了5,754例和4,663例的发热性疾病发作。在亚洲和拉丁美洲分别在这些病例中的99.5％和96.6％中获得了急性样本，98.3％和85.1％的样本在五天内获得。在整个第1部分期间，安全集内有278例VCD病例(76例住院治疗)，其中210例(58例住院治疗)是在PPS中第二次疫苗接种30天后(表20；表22)并且纳入主要终点分析。
c)主要终点分析中包括的VCD的分布
所有国家报告DENV-1都有VCD并且包括巴拿马的所有21例。在斯里兰卡，60例VCD中有54例是DENV-2，而在菲律宾109例VCD中有87例是DENV-3。菲律宾报告了全部7例DENV-4VCD。尼加拉瓜或多米尼加共和国未报告VCD。在相关的58例住院治疗的VCD中，斯里兰卡报告43例。总共报告了两例严重登革热(均为DENV-3)和五例登革出血热(DHF；三例DENV-2；两例DENV-3)(表21)。在整个第1部分安全集中，这七例也是唯一的此类病例。
d)疫苗功效
针对任何血清型的VCD的VE均为80.2％(95％CI：73.3–85.3；P<0.001)。在安全集中各剂量之间并且从第一剂开始(表20)，81％的相似功效(95％CI：64.1–90.0)表明该疫苗在第一剂后是有效的。对次要功效终点的探索性分析显示，按血清型存在差异性功效趋势，针对DENV-2的功效最高(97.7％)，其次是DENV-1(73.7％)、DENV-4(63.2％，CI含零)和DENV-3(62.6％；表3)。总体而言，在基线血清阴性者(74.9％)和血清阳性者(82.2％；图10A)中功效相似；然而，这随血清型而变化。针对DENV-2的功效不受血清状态的影响；在基线血清阳性者中针对DENV-1的功效(79.8％；95％CI：51.3–91.6)略高于基线血清阴性者(67.2％；95％CI：23.2–86.0)。与基线血清阳性者(71.3％；95％CI：54.2–82.0)相比，在基线血清阴性者(–38.7％；95％CI：–335.7–55.8)未观察到针对DENV-3的功效。因为在基线血清阴性者中没有观察到病例，所以无法计算出按血清状态对于DENV-4的功效。在PPS的主要终点时间范围内，疫苗组仅报告了五例需要住院治疗的VCD，相比而言安慰剂组有53例，VE为95.4％(95％CI：88.4-98.2；基线血清阴性者为97.2％，基线血清阳性者为94.4％；表21；图10B)，与安全集从第一剂开始VE为93.3％(95％CI：86.7–96.7)相符。
表20中示出了两剂TDV预防任何登革热血清型诱导的病毒学上确认的登革热(VCD)的主要疫苗功效(VE)。
表20.从第二次疫苗接种后30天到符合方案集(PPS)第1部分结束，即第二次疫苗接种后12个月，TDV针对任何血清型预防病毒学上确认的登革热(VCD)的疫苗功效。从第一剂到第1部分研究期结束(即第二次疫苗接种后12个月)的安全集分析
注1：病毒学上确认的登革热(VCD)的百分比是基于所评价的受试者数量。
注2：风险人年数定义为直到VCD发热开始或直到第1部分研究期结束或停止日期为止的累积时间，以先到者为准。事故密度定义为每100风险人年数中的病例数。百分比是基于所评价的分析集参与者的总数(分母)，并且可能不等于符合方案分析集中的参与者总数。
*在第1部分期间，一个参与者发生两次VCD，只有第一次VCD包括在功效计算中
注3：疫苗功效(VE)和2侧95％CI是根据Cox比例风险模型估算的，以TDV为因数，根据年龄进行了调整并按地区进行了分层。
注4：如果VE的95％CI的下限高于25％，将推断统计显著性。由于将以确认方式在5％的2侧显著性水平上检验假设，因此应将计算出的p值与0.025进行比较。
注5：相对风险的计算方法是：相对于事件数除以安慰剂组中评价的受试者数量，事件数量除以TDV组中评价的受试者数量。
对于表20所示的功效评价，将VCD病例定义为发热性疾病(定义为连续3天中任意2天发烧≥38℃)，且血清型特异性RT-PCR阳性(即登革热检测RT-PCR阳性)，并且发生在从第二次疫苗接种后第30天(第120天[第4个月])到第1部分结束为止的任何时间。对符合方案集(PPS)和安全集进行了分析。
如本文所用，“符合方案集(PPS)”由全分析集(FAS)中的所有受试者组成，全分析集由接受至少一个剂量的TDV或安慰剂，无严重违背方案的所有随机分组的受试者组成。严重违背方案是没有接受两个剂量的TDV或安慰剂，没有以正确的间隔接受两个剂量，没有正确地施用TDV或安慰剂，受试者使用了违禁药物/疫苗，受试者符合上面定义的排除标准2d、3、4或5中的任一条或产品制备错误。
通过按照以下公式求解临界值Z获得p值：
HR的1侧(1-p％)CI的上限为0.75，其中HR为危险比且定义为HR＝λV/λC。
e∧[β^+Z*S^E]＝0.75，其中β^定义了治疗而S^E定义相关标准误差。
1侧p值为1(标准正态分布临界值Z左侧的区域)。由于将以确认方式在5％的2侧显著性水平上检验假设，因此应将计算出的1侧p值与0.025进行比较。
在本研究第1部分的总结中，发现针对4至16岁儿童的任何血清型的病毒学上确认的登革热具有80.2％的高疫苗功效。它包括在基线血清阴性者中为74.9％的功效，在住院治疗中鲁棒降低95.4％。在第一剂后可以看到防护作用的发生，两个剂量之间的功效为81％。总体而言，这些结果表明，无论先前的登革热暴露或年龄如何，每个疫苗接受者都有潜在益处。这一发现意义重大，因为针对登革热的疫苗开发一直具有挑战性，特别是对于登革热原初个体而言，并且登革热仍然是2019年WHO全球健康十大威胁之一。19此外，第一剂后防护作用的发生在暴发控制或旅行疫苗接种的情况下具有潜在实用性，即仅在一个剂量后降低登革热的风险。
如下评估重度形式的登革热：按照1997年WHO定义所定义的登革出血热(DHF)。通过登革热病例裁决委员会裁决的重度登革热。登革热病例裁决委员会(DCAC)由四名成员组成：一名投票主席、两名投票成员和一名独立的无投票权的统计员。DCAC的三名投票成员全部为医师和登革热专家。DCAC成员不是研究人员，并且没有任何会使他们对试验数据的审查产生偏差的利益冲突。所有未住院治疗的病例均视为非重度型。以盲法应用于病毒学上确认的住院治疗的登革热病例的DCAC重度登革热病例标准如下：1)出血异常，要将病例认为是重度的，需要有响应于出血事件所需的重大干预，诸如输血、鼻腔填塞、激素疗法，或重要器官(例如脑部)发生出血；2)血浆渗漏，要将病例认为是重度的，需要有血浆渗漏和功能损伤的证据(血浆渗漏包括临床证据、放射学证据或血细胞比容升高>20％，超过正常水平或基线；功能损伤定义为休克或呼吸窘迫)；3)肝脏，要将病例认为是重度的，需要有肝炎和功能损伤的证据(肝炎定义为天冬氨酸转氨酶[AST]或丙氨酸转氨酶[ALT]>10正常范围的上限[ULN]；功能损伤定义为凝血酶原[PT]>1.5ULN或血白蛋白减少)；4)肾，血清肌酐>2.5倍ULN或需要透析；5)心脏，心脏固有的异常(即不是由血管内容量损耗引起的)，并且有功能损伤的证据(固有异常的实例：心肌炎、心包炎和心肌心包炎；功能损伤的实例：新的传导异常导致心律不齐[即不是短暂性第一度心脏阻滞])；6)中枢神经系统，除单纯性高热惊厥或短暂精神错乱以外的任何异常；7)休克，所有休克病例均被视为重度。需要存在至少1种功能损伤(标准3、4、5、6)，但是成员在其评估中考虑了全部数据。
第1部分和第2部分的进一步结果呈现在表21a至表21c中。
表22中示出了安全集数据中在第1部分研究期间病毒学上确认的登革热病例的临床体征和症状。
表22：在第1部分研究期间病毒学上确认的登革热病例的临床体征和症状(安全集数据)
VCD，病毒学上确认的登革热；ALT，丙氨酸转氨酶；AST，天冬氨酸转氨酶
a发热性疾病的持续时间定义为最早症状的开始日期到最近症状的结束日期加上一天(所考虑的症状包括发热和任何一般症状)。
b血细胞比容增加定义为从发热开始后第3天至第7天(含第3天和第7天)的最大血细胞比容比发热开始前第3天之前或第7天之后的最小血细胞比容增加≥20％。
c对于血小板、ALT和AST数据，已考虑在发热性疾病开始后14天内进行评估。
N是指具有特定参数的可用数据的VCD病例数
e)免疫原性
不论基线血清状态如何，针对DENV-2观察到最高几何平均滴度(GMT)(表24)。在基线血清阴性者中在第二剂后一个月观察到非常高的四价血清阳性率(99.5％)(表23和表24)。
在第1天(第0个月)疫苗接种前，在第30天(第1个月)首次疫苗接种后，在第90天(第3个月)疫苗接种前，在第120天(第4个月)、第270天(第9个月)、第450天(第15个月)第二次疫苗接种后，测定四种登革热血清型中的每一种的血清阳性率(占血清阳性受试者的％)，然后每年测定一次。表23中示出了第0天、第30天、第90天、第120天和第270天的免疫原性数据的登革热血清型符合方案集的血清阳性率(参与者％，95％CI)。
表23中示出了第0天、第30天、第90天、第120天和第270天的免疫原性数据中符合方案集登革热血清型针对三种或更多种血清型(三价)以及针对所有四种血清型(四价)的血清阳性率(参与者％，95％CI)。在第二剂后六个月，基线血清阴性患者中四价血清阳性率很高(>91％)。
表23：登革热血清型的血清阳性率(参与者％，95％CI)(针对免疫原性数据的符合方案集)
按登革热血清型的血清阳性率(参与者％，95％CI)(针对免疫原性数据的符合方案集；血清阳性定义为中和抗体滴度倒数≥10；基线血清阴性定义为对所有血清型均为血清阴性；基线血清阳性定义为对一种或多种血清型为血清阳性；N是指分析集中的参与者人数；每个时间点评价的参与者人数可能有所不同)
在第1天(第0个月)疫苗接种前，在第30天(第1个月)疫苗接种后，在第90天(第3个月)疫苗接种前，在第120天(第4个月)第二次疫苗接种后，在第270天(第9个月)，第450天(第15个月)测定每种登革热血清型的中和抗体的几何平均滴度(GMT)(微量中和试验[MNT])，然后每年测定一次。表24中示出了第0天、第30天、第90天、第120天和第270天的针对免疫原性数据的符合方案集按登革热血清型的几何平均滴度(95％CI)。
表24：按登革热血清型的几何平均滴度(95％CI)(针对免疫原性数据的符合方案集)
在疫苗接种后30天内，在患有发热性疾病的受试者中通过三种PCR评估疫苗病毒血症：登革热检测RT-PCR，疫苗筛选PCR和TDV测序。
f)安全性
疫苗组和安慰剂组中的严重不良事件(SAE)比率相似(分别为参与者的3.1％和3.8％；表25)。一名疫苗接种者和四名安慰剂接受者经历被研究人员认为与接受不知情的研究产品有关的SAE(两名经历超敏反应，两名被诊断为登革热，另一名患有DHF)。在第1部分期间有5例死亡，所有死亡均被认为与研究产品或研究程序无关。疫苗组与安慰剂组之间非诱发AE的总比率相似。按优选术语在任何剂量的四周内，最常见(≥1％的疫苗接种者)报告的非诱发AE是高热(疫苗组1.5％；安慰剂组1.4％)、鼻咽炎(疫苗组2.7％；安慰剂组3.0％)、上呼吸道炎道感染(疫苗组2.6％；安慰剂组2.9％)和病毒感染(疫苗组1.1％；安慰剂组0.9％)。疫苗组中诱发的局部反应报告更为频繁。
表25a：安全性数据综述。在任何疫苗剂量后有至少一个不良事件的受试者。除非另有说明，否则数据表示为事件数(受试者百分比；受试者数量[n]/受试者总数[N])(安全集数据)
AE，不良事件；SAE，严重不良事件；IP，研究产品/TDV
aIP相关的定义为与研究人员评估的研究产品相关的
b仅对日志数据可用的参与者进行了评价
c所有被认为与IP相关的注射部位(诱发的局部)反应
表25b：在第1部分中在任何疫苗接种后按照MedDRA(监管活动医学词典)系统器官分类按递减频率次序的有严重不良事件的参与者人数(％)(TDV和安慰剂组针对由于揭盲风险引起>3名参与者中发生的事件所呈现的安全集数据)。
*总计列包括由于施用错误而接受TAK-003和安慰剂两者并且从TAK-003和安慰剂组中排除的参与者。列中的N是指安全集中的参与者人数
表25c：在任何疫苗接种后最多28天按照MedDRA系统器官分类按递减频率次序的具有任何严重程度的非诱发不良事件的参与者人数(％)(TDV和安慰剂组针对由于揭盲风险引起>6名参与者中发生的事件所呈现的安全集子集的数据)。
*总计列包括由于施用错误而接受TAK-003和安慰剂两者并且从TAK-003和安慰剂组中排除的参与者。列中的N是指安全集的子集中的参与者人数
表25d：在任何疫苗接种后最多7天日志报告的注射部位反应和在任何疫苗接种后最多14天的全身性不良事件的汇总(安全集子集的数据)。数据呈现为分析集中具有事件的参与者人数/评价的参与者人数(占评价的具有事件的参与者的％)。
实施例7：黄热病疫苗和登革热疫苗的伴随施用
将在非流行区约900名年龄在18至60岁的健康成人中针对登革热病和黄热病进行3期、观察者不知情的、随机化、多中心试验，以研究伴随施用和依次施用如本文所述的单位剂量(TDV)和YF-17D疫苗的免疫原性和安全性。将受试者平均(1:1:1比率)随机分组到以下3个试验组之一(每个试验组300名受试者)：
–第1组：在第0天(第0个月)伴随施用YF-17D疫苗和安慰剂，在第90天(第3个月)施用第一剂TDV，并且在第180天(第6个月)施用第二剂TDV。
–第2组：在第0天(第0个月)伴随施用第一剂TDV和安慰剂，在第90天(第3个月)施用第二剂TDV，并且在第180天(第6个月)施用YF-17D疫苗。
–第3组：在第0天(第0个月)伴随施用第一剂TDV和YF-17D疫苗，在第90天(第3个月)施用第二剂TDV，并且在第180天(第6个月)施用安慰剂。
伴随施用的疫苗将被注射到对侧臂。将对所有受试者随访，持续第三次疫苗接种(第一次疫苗接种大约6个月后施用)后6个月，因此每个受试者的试验持续时间将为大约360天(12个月)。
为了评价对TDV和YF-17D的免疫应答，将收集并分析血样。第一次疫苗接种前(第0天(第0个月))，第一次疫苗接种后1个月(第30天(第1个月))，第二次疫苗接种前(第90天(第3个月))，第二次疫苗接种后1个月(第120天(第4个月))，第三次疫苗接种前(第180天(第6个月))以及第三次疫苗接种后1个月(第210天(第7个月))将收集用于测量登革热中和抗体(微量中和试验50％(MNT50))的血样。第一次疫苗接种前(第0天(第0个月))，第一次免疫接种后1个月(第30天(第1个月))，第三次疫苗接种前(第180天(第6个月))，以及第三次疫苗接种后1个月(第210天(第7个月))，将收集用于测量YF中和抗体(斑块减少中和试验(PRNT))的血样。
将在非流行国家约900名年龄在18至60岁(分布在整个年龄范围内)的健康成年受试者中针对登革热和甲型肝炎病毒(HAV)进行随机化、观察者不知情的3期试验，以研究2剂四价登革热疫苗TDV(皮下(SC)注射)以及共同施用单个剂量的HAV疫苗(肌内(IM)注射)和TDV(SC注射)的免疫原性和的安全性。将受试者平均(1:1:1比率)随机分组到以下3个试验组之一(每组300名受试者)：
-第1组：在第0天(第0个月)共同施用HAV疫苗(IM)和安慰剂(SC)；在第90天(第3个月)施用安慰剂(SC)。
-第2组：在第0天(第0个月)共同施用TDV(SC)和安慰剂(IM)；在第90天(第3个月)施用TDV(SC)。
-第3组：第0天(第0个月)共同施用TDV(SC)和HAV安慰剂(IM)；在第90天(第3个月)施用TDV(SC)。
共同施用的试验疫苗将被注射到对侧臂。注射用生理盐水溶液(0.9％NaCl)将用作安慰剂。在筛选时将从所有受试者中收集用于抗HAV抗体试验的血样，以排除抗HAV抗体为阳性的受试者。将对所有受试者随访，持续第90天(第3个月)第二次疫苗接种后6个月，因此每个受试者的试验持续时间将为270天或9个月(不包括筛选期)。在该试验范围之外，在第270天(第9个月)完成试验程序后，将向第1组和第3组中的受试者提供HAV疫苗加强剂量。
登革热中和抗体(微量中和测试(MNT50))将使用在第一次试验疫苗接种前(第0天(第0个月))，第一次试验疫苗接种后1个月(第30天(第1个月))和第二次试验疫苗接种后1个月(第120天(第4个月))收集的血样进行测量。将在第一次试验疫苗接种前(第0天(第0个月))和第一次试验疫苗接种后1个月(第30天(第1个月))收集用于测量抗HAV抗体(酶联免疫吸附测定法(ELISA))的血样。
主要终点包括确定在每个组120名受试者的子集(免疫原性子集)中通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测量的在第30天(第1个月)受到针对HAV的血清保护的基线HAV/DENV原初受试者的比例。血清保护定义为血清抗HAV抗体水平≥10mIU/mL。对HAV/DENV的免疫学原初性定义为抗HAV抗体水平<10mIU/mL并且对于所有4种登革热血清型的中和滴度倒数<10。
次要终点包括在基线HAV/DENV原初受试者中测定在第30天(第1个月)和第120天(第4个月)对于4种登革热血清型中的每一种的中和抗体的几何平均滴度(GMT)(微量中和试验(MNT50))，在第30天(第1个月)和第120天(第4个月)对于4种登革热血清型中的每一种为血清阳性的基线HAV/DENV原初受试者的比率(血清阳性率)，以及基线HAV/DENV原初受试者中第30天(第1个月)的抗HAV抗体的几何平均浓度(GMC)。
登革热病毒的血清阳性定义为对于四种登革热血清型中任一种的中和滴度倒数≥10。
实施例9：HPV疫苗和登革热疫苗的伴随施用
将在登革热流行区的约430名年龄≥9岁至<15岁的健康女性中进行3期、开放标签、随机化、多中心试验，以研究共同施用TDV和9vHPV疫苗与单独施用9vHPV疫苗的免疫原性和安全性。将受试者平均随机分组到2组中的1组(每个试验组约215名受试者)：
-第1组：在第0天(第0个月)共同施用第一剂9vHPV疫苗+TDV，在第90天(第3个月)施用第二剂TDV，并且在180天(第6个月)施用第二剂9vHPV疫苗。
-第2组：在第0天(第0个月)施用第一剂9vHPV疫苗，在第180天(第6个月)施用第二剂9vHPV疫苗。
伴随施用的疫苗将被注射到对侧臂。将对所有受试者随访，持续最后一次试验疫苗接种后6个月，因此每个受试者的试验持续时间将为大约360天(或12个月)。
第1组和第2组用于测量HPV中和抗体(Merck测定法)的血样将在第一次疫苗接种前(第0天(第0个月))和第二次9vHPV疫苗接种后1个月(第210天(第7个月))收集。对于第1组仅在第一次疫苗接种前(第0天(第0个月))和第二次TDV疫苗接种后1个月(第120天(第4个月))收集用于测量登革热中和抗体(通过微量中和试验50％(MNT50)测量)的血样。
主要终点包括第210天(第7个月)HPV 6型、11型、16型、18型、31型、33型、45型、52型、58型的几何平均滴度(GMT)。
次要终点包括通过竞争性Luminex免疫测定法(cLIA)或等效测定法测量的第210天(第7个月)对于HPV 6型、11型、16型、18型、31型、33型、45型、52型和58型的血清阳性率(血清阳性受试者的％)，第120天(第4个月)对于4种登革热血清型中每一种的中和抗体的GMT(通过MNT50测量)，以及第120天(第4个月)对于4种登革热血清型中的每一种和对于多种(2、3或4种)的血清阳性率(血清阳性受试者的％)。
登革热病毒的血清阳性定义为对于4种登革热血清型中任一种的中和抗体滴度倒数≥10。
HPV血清阳性定义为对于给定HPV类型而言抗HPV滴度大于或等于预先指定的血清状态截止值。血清阴性定义为对于给定HPV类型而言抗HPV滴度小于预先指定的血清状态截止值。血清状态截止值是高于该测定法的定量下限的抗体滴度水平，该抗体滴度水平可靠地区分了按临床HPV感染可能性分类的血清样品以及按先前版本的cLIA或等效测定测得的阳性或阴性状态。下面示出了9种疫苗HPV类型中每一种的定量下限和血清状态截止值。
表26. 9vHPV类型的竞争性Luminex免疫测定法定量限值和血清状态截止值
(a)mMU＝毫默克单位
将使用竞争性Luminex免疫测定法或等效测定法测量针对HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、45型、52型和58型的血清抗体。将使用Luminex免疫测定法以毫默克单位/mL报告滴度。
实施例10：Tdap疫苗和登革热疫苗的伴随施用
将在登革热流行区的约840名年龄≥10岁至<18岁的健康受试者中进行3期、开放标签、随机化试验，其中Tdap疫苗已获准用于儿童和10至18岁的青少年，以研究共同施用TDV和Tdap疫苗
与单独施用
的免疫原性和安全性。
TDV将通过皮下施用而
将通过肌内施用。将受试者平均(1:1比率)随机分组到以下2个试验组中的每一个(每个试验组约420名受试者)：
-第1组：在第0天(第0个月)共同施用第一剂TDV+Tdap疫苗；在第90天(第3个月)施用第二剂TDV。
-第2组：在第0天(第0个月)施用Tdap疫苗。
伴随施用的疫苗将被注射到对侧臂。将对所有受试者随访，持续第一次疫苗接种后9个月(270天)，因此每个受试者的试验持续时间为大约270天。
对于每个受试者，将安排5次门诊：第0天(第0个月)、第30天(第1个月)、第90天(第3个月)、第120天(第4个月)和第270天(第9个月)。将在第0天(第0个月)和第30天(第1个月)从第1组和第2组的所有受试者中收集用于测量对Tdap疫苗的抗体应答的血样。将测量针对以下抗原的抗体：
-百日咳抗原(灭活的百日咳毒素(iPT)、经甲醛处理的丝状血凝素(FHA))和百日咳杆菌粘附素(PRN))，
-破伤风类毒素抗原，以及
-白喉类毒素抗原。
将在第0天(第0个月)、第30天(第1个月)和第120天(第4个月)从第1组中收集用于测量登革热中和抗体(通过微量中和试验50％(MNT50)测量)的血样。还将在疫苗接种前收集血样。
主要终点包括：
(i)在第30天(第1个月)通过中和毒素测定法(NTA)或等效测定法测量的受白喉血清保护的受试者的比例，其中血清保护定义为血清中抗白喉抗体水平(NTA或等效测定法)≥0.1IU/mL
(ii)在第30天(第1个月)通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)或等效测定法测量的受破伤风血清保护的受试者的比例，其中血清保护定义为血清中抗破伤风抗体水平(ELISA或等效测定法)≥0.1IU/mL。
(iii)在第30天(第1个月)通过ELISA或等效测定法测量的无细胞百日咳抗体(抗iPT抗体、抗FHA抗体、抗PRN抗体)的几何平均浓度(GMC)。
次要终点包括评价以下各项，包括在第一剂TDV后第30天(第1个月)和在第二剂TDV后第120天(第4个月)对于四种登革热血清型中的每一种的抗体的几何平均中和抗体滴度(GMT)(通过MNT50测量)，在第一剂TDV后第30天(第1个月)和在第二剂TDV后第120天(第4个月)对于四种登革热血清型中的每一种和对于多种(2、3或4种)登革热血清型的血清阳性率(血清阳性受试者的％)，其中对于每种登革热血清型为血清阳性率定义为中和抗体滴度倒数≥10的受试者的百分比。
第一个本发明条款清单
1.一种登革热疫苗组合物的单位剂量，其包含：
四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒株，其中所述单位剂量经冻干并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1所述的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(v)浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(vi)浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(vii)浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，以及
(viii)浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL。
3.根据条款1或2所述的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)浓度为3.3log10pfu/0.5mL至3.6log10pfu/0.5mL，
(ii)浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.0log10pfu/0.5mL，
(iii)浓度为4.0log10pfu/0.5mL至4.6log10pfu/0.5mL，以及
(iv)浓度为4.5log10pfu/0.5mL或4.6log10pfu/0.5mL至5.1log10pfu/0.5mL。
4.根据条款1至3中任一项所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度浓度(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％或小于8％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％。
5.根据条款4所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度浓度(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少7％或至少8％。
6.根据条款1至5中任一项所述的单位剂量，其中用药学上可接受的稀释剂重构是用用0.5ml的药学上可接受的稀释剂进行的。
7.根据条款1至6中任一项所述的单位剂量，其中所述冻干单位剂量是由进一步包含非还原糖、表面活性剂、蛋白质和无机盐的溶液制备的。
8.根据条款7所述的单位剂量，其中所述非还原糖是海藻糖，所述表面活性剂是泊洛沙姆407，所述蛋白质是人血清白蛋白并且所述无机盐是氯化钠。
9.根据条款7或8所述的单位剂量，其中所述溶液包含：
-约10％(w/v)至约20％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，
-约0.5％(w/v)至约1.5％(w/v)的泊洛沙姆407，
-约0.05％(w/v)至约2％(w/v)的人血清白蛋白，和
-约70mM至约140mM的氯化钠。
10.根据条款1至9中任一项所述的单位剂量，其中所述冻干单位剂量是由包含以下的溶液制备的：
-约15％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物，
-约1％(w/v)的泊洛沙姆407，
-约0.1％(w/v)的人血清白蛋白，和
-约100mM的氯化钠。
11.根据条款1至10中任一项所述的单位剂量，其中四种活的减毒登革热病毒株中的每一种在5'-非编码区(NCR)的核苷酸57处具有胞嘧啶向胸腺嘧啶的减毒突变，在NS1基因的核苷酸2579处具有从鸟嘌呤向腺嘌呤的减毒突变导致位置828处氨基酸从甘氨酸变为天冬酰胺，并且在NS3基因的核苷酸5270处具有从腺嘌呤向胸腺嘧啶的减毒突变导致位置1725处氨基酸从谷氨酰胺变为缬氨酸，优选地还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
a)NS2A基因中核苷酸4018处从胞嘧啶向胸腺嘧啶的突变，导致位置1308处的氨基酸从亮氨酸变为苯丙氨酸，
b)NS3基因中核苷酸5547处从胸腺嘧啶向胞嘧啶的沉默突变，和
c)NS4A基因中核苷酸6599处从鸟嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置2168处的氨基酸从甘氨酸变为丙氨酸。
12.根据条款11所述的单位剂量，其中(i)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-NS2A基因中核苷酸3823处从腺嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置1243处的氨基酸从异亮氨酸变为亮氨酸，
-NS2B基因中核苷酸4407处从腺嘌呤向胸腺嘧啶的突变，导致位置1437处的氨基酸从谷氨酰胺变为天冬酰胺，和
-NS4B基因中核苷酸7311处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变。
13.根据条款11或12所述的单位剂量，其中(ii)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-prM基因中核苷酸592处腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置166处的氨基酸从赖氨酸变为谷氨酰胺，和
-NS5基因中核苷酸8803处从腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置2903处的氨基酸从异亮氨酸变为缬氨酸。
14.根据条款11至13中任一项所述的单位剂量，其中(iii)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-E基因中核苷酸1603处腺嘌呤向胸腺嘧啶的突变，导致位置503处的氨基酸从苏氨酸变为丝氨酸，和
-NS5基因中核苷酸7620处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变。
15.根据条款11至14中任一项所述的单位剂量，其中(iv)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-C基因中核苷酸225处从腺嘌呤向胸腺嘧啶的沉默突变，
-NS2A基因中核苷酸3674处从腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置1193处的氨基酸从天冬酰胺变为甘氨酸，
-NS2A基因中核苷酸3773处从腺嘌呤向腺嘌呤/鸟嘌呤混合物的突变，导致位置1226处的氨基酸从赖氨酸变为赖氨酸/天冬酰胺混合物，
-NS3基因中核苷酸5391处从胞嘧啶向胸腺嘧啶的沉默突变，
-NS4A基因中核苷酸6437处从胞嘧啶向胸腺嘧啶的突变，导致位置2114处的氨基酸从丙氨酸变为缬氨酸，
-NS4B基因中核苷酸7026处从胸腺嘧啶向胸腺嘧啶/胞嘧啶混合物的沉默突变，和
-NS5基因中核苷酸9750处从腺嘌呤向胞嘧啶的沉默突变。
16.根据条款1至15中任一项所述的单位剂量，其中
(i)具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，
(ii)具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，
(iii)具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且
(iv)具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
17.根据条款1至16中任一项所述的单位剂量，其用0.3至0.8mL重构用液体进行重构。
18.根据条款17所述的单位剂量，其用0.5mL重构用液体进行重构。
19.根据条款17或18所述的单位剂量，其中所述重构用液体是37mM的氯化钠水溶液。
20.一种用于制备重构单位剂量的试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至16中任一项所述的单位剂量，和
b)用于重构的药学上可接受的稀释剂。
21.根据条款20所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
22.容器，诸如小瓶，其包含1至10个根据条款1至19中任一项所述的单位剂量。
23.一种在受试者群体中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
24.根据条款23所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
25.根据条款24所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
26.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
27.根据条款26所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
28.根据条款27所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
29.根据条款23至28中任一项所述的方法，其中所述方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
30.根据条款23至29中任一项所述的方法，其中通过皮下注射，优选向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
31.根据条款23至30中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
32.根据条款23至30中任一项所述的方法，其中在六个月内，优选在三个月内施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
33.根据条款32所述的方法，其中在第0天和第90天施用所述两个重构单位剂量。
34.根据条款31至33中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第一单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
35.根据条款31至33中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第二单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
36.根据条款23至35中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
37.根据条款23至35中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
38.根据条款23至37中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为2至60岁。
39.根据条款23至37中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体在9岁以下，4岁以下或2岁以下。
40.根据条款23至39中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自登革热流行区。
41.根据条款23至39中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自登革热非流行区。
42.一种用于在受试者中刺激对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用根据条款17至19所述的重构单位剂量。
43.根据条款42所述的方法，其中对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答是平衡的。
44.根据条款42或43所述的方法，其中通过皮下注射，优选地向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
45.根据条款42至44中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内施用两个根据条款17至19中任一项所述的单位剂量。
46.根据条款42至45中任一项所述的方法，其中在六个月内，优选在三个月内施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
47.根据条款46所述的方法，其中在第0天和第90天施用所述两个重构单位剂量。
48.根据条款45至47中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第一单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
49.根据条款45至47中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第二单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
50.根据条款42至49中任一项所述的方法，其中所述受试者来自登革热流行区。
51.根据条款42至49中任一项所述的方法，其中所述受试者来自登革热非流行区。
52.根据条款42至51中任一项所述的方法，其中所述受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
53.根据条款42至51中任一项所述的方法，其中所述受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
54.根据条款42至53中任一项所述的方法，其中在至少第一次施用所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
55.根据条款54所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
56.根据条款42至55中任一项所述的方法，其中所述受试者为2至60岁。
57.根据条款42至55中任一项所述的方法，其中所述受试者在9岁以下，4岁以下或2岁以下。
58.根据条款23至57中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量是从根据条款20或21所述的试剂盒获得的。
59.根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量，其在根据条款23至58所述的方法中使用。
60.根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量用于制造用于条款23至58所述的方法的药物的用途。
第二个本发明条款清单
1.一种登革热疫苗组合物的单位剂量，其包含：
四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒株，其中所述单位剂量经冻干并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(v)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(vi)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(vii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(viii)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1所述的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，以及
(iv)浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL。
3.根据条款1所述的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后：
(i)浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/0.5mL，以及
(iv)浓度为4.5log10pfu/剂至5.5log10pfu/0.5mL。
4.根据条款1至3中任一项所述的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(v)浓度为3.3log10pfu/0.5mL至3.6log10pfu/0.5mL，
(vi)浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.0log10pfu/0.5mL，
(vii)浓度为4.0log10pfu/0.5mL至4.6log10pfu/0.5mL，以及
(viii)浓度为4.5log10pfu/0.5mL至5.1log10pfu/0.5mL。
5.根据条款1至4中任一项所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度浓度(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％或小于8％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％。
6.根据条款5所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度浓度(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少7％或至少8％。
7.根据条款1至6中任一项所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为总浓度的1％至7％，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于总浓度的8％，诸如在总浓度的1％至8％范围内，(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为总浓度的至少10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为总浓度的至少65％，诸如在总浓度的65％至80％范围内。
8.根据条款1至7中任一项所述的单位剂量，其中所有四种血清型的算术总和在4.6log10pfu/0.5mL至6.7log10pfu/0.5mL的范围内，优选在4.6log10pfu/0.5mL至5.5log10pfu/0.5mL的范围内。
9.根据条款1至8中任一项所述的单位剂量，其中用药学上可接受的稀释剂重构是用用0.5ml的药学上可接受的稀释剂进行的。
10.根据条款1至9中任一项所述的单位剂量，其中所述冻干单位剂量是由进一步包含非还原糖、表面活性剂、蛋白质和无机盐的溶液制备的。
11.根据条款10所述的单位剂量，其中所述非还原糖是海藻糖，所述表面活性剂是泊洛沙姆407，所述蛋白质是人血清白蛋白并且所述无机盐是氯化钠。
12.根据条款10或11所述的单位剂量，其中所述溶液包含：
-约10％(w/v)至约20％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，
-约0.5％(w/v)至约1.5％(w/v)的泊洛沙姆407，
-约0.05％(w/v)至约2％(w/v)的人血清白蛋白，和
-约70mM至约140mM的氯化钠。
13.根据条款1至12中任一项所述的单位剂量，其中所述冻干单位剂量是由包含以下的溶液制备的：
-约15％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物，
-约1％(w/v)的泊洛沙姆407，
-约0.1％(w/v)的人血清白蛋白，和
-约100mM的氯化钠。
14.根据条款1至13中任一项所述的单位剂量，其中四种活的减毒登革热病毒株中的每一种在5'-非编码区(NCR)的核苷酸57处具有胞嘧啶向胸苷的减毒突变，在NS1基因的核苷酸2579处具有从鸟嘌呤向腺嘌呤的减毒突变导致位置828处氨基酸从甘氨酸变为天冬酰胺，并且在NS3基因的核苷酸5270处具有从腺嘌呤向胸腺嘧啶的减毒突变导致位置1725处氨基酸从谷氨酰胺变为缬氨酸，优选地还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
a)NS2A基因中核苷酸4018处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置1308处的氨基酸从亮氨酸变为苯丙氨酸，
b)NS3基因中核苷酸5547处从胸苷向胞嘧啶的沉默突变，和
c)NS4A基因中核苷酸6599处从鸟嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置2168处的氨基酸从甘氨酸变为丙氨酸。
15.根据条款14所述的单位剂量，其中(i)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-NS2A基因中核苷酸3823处从腺嘌呤向胞嘧啶的突变，导致位置1243处的氨基酸从异亮氨酸变为亮氨酸，
-NS2B基因中核苷酸4407处从腺嘌呤向胸苷的突变，导致位置1437处的氨基酸从谷氨酰胺变为天冬酰胺，和
-NS4B基因中核苷酸7311处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变。
16.根据条款14或15所述的单位剂量，其中(ii)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-prM基因中核苷酸592处腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置166处的氨基酸从赖氨酸变为谷氨酰胺，和
-NS5基因中核苷酸8803处从腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置2903处的氨基酸从异亮氨酸变为缬氨酸。
17.根据条款14至16中任一项所述的单位剂量，其中(iii)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-E基因中核苷酸1603处腺嘌呤向胸苷的突变，导致位置503处的氨基酸从苏氨酸变为丝氨酸，和
-NS5基因中核苷酸7620处从腺嘌呤向鸟嘌呤的沉默突变。
18.根据条款14至17中任一项所述的单位剂量，其中(iv)还包含一个或多个选自以下清单的突变，所述清单包括：
-C基因中核苷酸225处从腺嘌呤向胸腺苷的沉默突变，
-NS2A基因中核苷酸3674处从腺嘌呤向鸟嘌呤的突变，导致位置1193处的氨基酸从天冬酰胺变为甘氨酸，
-NS2A基因中核苷酸3773处从腺嘌呤向腺嘌呤/鸟嘌呤混合物的突变，导致位置1226处的氨基酸从赖氨酸变为赖氨酸/天冬酰胺混合物，
-NS3基因中核苷酸5391处从胞嘧啶向胸苷的沉默突变，
-NS4A基因中核苷酸6437处从胞嘧啶向胸苷的突变，导致位置2114处的氨基酸从丙氨酸变为缬氨酸，
-NS4B基因中核苷酸7026处从胸苷向胸苷/胞嘧啶混合物的沉默突变，和
-NS5基因中核苷酸9750处从腺嘌呤向胞嘧啶的沉默突变。
19.根据条款1至18中任一项所述的单位剂量，其中
(v)具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，
(vi)具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，
(vii)具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且
(viii)具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
20.根据条款1至19中任一项所述的单位剂量，其用0.3至0.8mL重构用液体进行重构。
21.根据条款20所述的单位剂量，其用0.5mL重构用液体进行重构。
22.根据条款20或21所述的单位剂量，其中所述重构用液体是37mM的氯化钠水溶液。
23.一种用于制备重构单位剂量的试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至19中任一项所述的单位剂量，和
b)用于重构的药学上可接受的稀释剂。
24.根据条款23所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
25.容器，诸如小瓶，其包含1至10个根据条款1至22中任一项所述的单位剂量。
26.一种在受试者群体中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量。
27.一种在受试者群体中预防病毒学上可确认的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用重构单位剂量的四价登革热病毒组合物，所述组合物包括四种活的减毒登革热病毒株。
28.一种在受试者群体中预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病的方法，该方法包括向所述受试者群体施用重构单位剂量的四价登革热病毒组合物，所述组合物包括四种活的减毒登革热病毒株。
29.根据条款26至28中任一项所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
30.根据条款29所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
31.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量。
32.一种在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法，其包括向所述受试者施用重构单位剂量的四价登革热病毒组合物，所述组合物包括四种活的减毒登革热病毒株。
33.一种在受试者中预防住院治疗的病毒学上可确认的登革热病的方法，其包括向所述受试者施用重构单位剂量的四价登革热病毒组合物，所述组合物包括四种活的减毒登革热病毒株。
34.根据条款31至33所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
35.根据条款34所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
36.根据条款26至35中任一项所述的方法，其中所述方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
37.根据条款26至36中任一项所述的方法，其中通过皮下注射，优选向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
38.根据条款26至37中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内施用两个根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量。
39.根据条款26至37中任一项所述的方法，其中在六个月内，优选在三个月内施用两个根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量。
40.根据条款39所述的方法，其中在第0天和第90天或在第1天和第90天施用所述两个重构单位剂量。
41.根据条款38至40所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第一单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
42.根据条款38至40所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第二单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
43.根据条款26至42中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
44.根据条款26至42中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
45.根据条款26至44中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为2至60岁。
46.根据条款26至44中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为2至17岁。
47.根据条款26至44中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为9岁以下，4岁以下，或2岁以下或为2至9岁或2至5岁，或4至9岁或6至9岁，并且任选地其中所述受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
48.根据条款26至44中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为4至16岁。
49.根据条款48所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为4至5岁。
50.根据条款48所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为6至11岁。
51.根据条款48所述的方法，其中所述受试者或受试者群体为12至16岁。
52.根据条款26至51中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自登革热流行区。
53.根据条款26至51中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自登革热非流行区。
54.根据条款52或53中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自亚太区或拉丁美洲。
55.根据条款26至54中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体已经接受过针对黄热病的预先疫苗接种，其中针对黄热病的预先疫苗接种是指在第二次施用之前或在第一次施用之前的疫苗接种。
56.根据条款26至54中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体已经接受过针对日本脑炎的先前疫苗接种，其中针对日本脑炎的预先疫苗接种是指在第二次施用之前或在第一次施用之前的疫苗接种。
57.根据条款26至54中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体尚未接受针对黄热病的预先疫苗接种。
58.根据条款26至54中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体尚未接受针对日本脑炎的预先疫苗接种。
59.根据条款26至58中任一项所述的方法，其具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
60.根据条款59所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％或超过72％。
61.根据条款26至60中任一项所述的方法，当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对所有四种血清型具有超过30％的联合疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
62.根据条款61所述的方法，其中针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％，超过75％，超过78％，超过79％或为约80％。
63.根据条款26至62中任一项的方法，所述方法针对所有四种血清型具有联合相对风险，所述联合相对风险具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，上限结合小于0.75,其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
64.根据条款63所述的方法，其中所述上限低于0.70，低于0.65，低于0.60，低于0.55，低于0.50，低于0.45，低于0.40，低于0.35，低于0.30或低于0.28。
65.根据条款26至64中任一项的方法，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，针对所有四种血清型的所述联合相对风险小于0.70，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
66.根据条款65所述的方法，其中针对所有四种血清型的所述联合相对风险低于0.65，低于0.60，低于0.55，低于0.50，低于0.45，低于0.40，低于0.35，低于0.30，低于0.25或低于0.23。
67.根据条款26至58中任一项所述的方法，其具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在来自流行区而不管基线时血清状态如何并且选自由随机分组时4至16岁的受试者组成的组的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过61.0％，或超过65.0％或超过70.0％或超过72.0％，其中在6个月或更短时间内，在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后至少12或13个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
68.根据条款26至58中任一项所述的方法，其中当在来自流行区而不管基线时血清状态如何并且选自由随机分组时4至16岁的受试者组成的组的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过66％，或超过70％，或超过75％，或超过77％，或超过80％，其中在6个月或更短时间内，在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后至少12个月或13个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
69.根据条款67或68所述的方法，其中针对所有四种血清型的联合疫苗功效是在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后12或13个月测量的。
70.根据条款67或68所述的方法，其中所述单位剂量或所述安慰剂在三个月内，尤其是在约第1天和约90天施用两次，并且其中针对所有四种血清型的联合疫苗功效是在第二次施用后30天到施用计划的第二次施用后12或13个月测量的。
71.根据条款26至70中任一项所述的方法，所述方法是有效且安全的。
72.根据条款26至71中任一项所述的方法，当在至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法对于住院治疗的病毒学上确认的登革热的相对风险为1或更低，或0.8或更低，或0.6或更低。
73.根据条款59至72中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者在随机分组时为4至16岁。
74.根据条款59至72中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者在随机分组时为4至5岁。
75.根据条款59至72中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者在随机分组时为6至11岁。
76.根据条款59至72中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者在随机分组时为12至16岁。
77.根据条款59至72中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者来自亚太区或拉丁美洲。
78.根据条款59至77中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者在基线时相对于至少一种血清型为血清阳性。
79.根据条款59至77中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者在基线时相对于所有血清型均为血清阴性。
80.根据条款59至79中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者已经接受针对黄热病的预先疫苗接种。
81.根据条款59至79中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者已经接受针对日本脑炎的预先疫苗接种。
82.根据条款59至79中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者尚未接受针对黄热病的预先疫苗接种。
83.根据条款59至79中任一项所述的方法，其中所述受试者群体的健康受试者尚未接受针对日本脑炎的预先疫苗接种。
84.一种用于在受试者中刺激对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量。
85.根据条款84所述的方法，其中对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答是平衡的。
86.根据条款84或85所述的方法，其中通过皮下注射，优选地向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
87.根据条款84至86中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内施用两个根据条款20至22中任一项所述的单位剂量。
88.根据条款84至87中任一项所述的方法，其中在六个月内，优选在三个月内施用两个根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量。
89.根据条款88所述的方法，其中在第0天和第90天或在第1天和第90天施用所述两个重构单位剂量。
90.根据条款87至89中所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第一单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
91.根据条款87至89中所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第二单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
92.根据条款84至91中任一项所述的方法，其中所述受试者来自登革热流行区。
93.根据条款84至91中任一项所述的方法，其中所述受试者来自登革热非流行区。
94.根据条款84至93中任一项所述的方法，其中所述受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
95.根据条款84至93中任一项所述的方法，其中所述受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
96.根据条款84至95中任一项所述的方法，其中在至少第一次施用所述重构单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
97.根据条款96所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
98.根据条款84至97中任一项所述的方法，其中所述受试者为2至60岁。
99.根据条款84至97中任一项所述的方法，其中所述受试者在9岁以下，4岁以下或2岁以下。
100.根据条款26至99中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量是从根据条款23或24所述的试剂盒获得的。
101.根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量，其在根据条款26至100所述的方法中使用。
102.根据条款20至22中任一项所述的重构单位剂量用于制造用于条款26至100所述的方法的药物的用途。
第三个本发明条款清单
1.一种在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的登革热疫苗组合物，所述方法包括向所述受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在3个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，并且其中所述登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，其中所述减毒登革热病毒株包含嵌合登革热病毒和至少一种非嵌合登革热病毒，并且其中所述登革热血清型1和所述登革热血清型2各自以基于以pfu/0.5mL计的总浓度在彼此的5％点以内的浓度存在，和/或合计小于以pfu/0.5mL计的总浓度的约10％。
2.根据条款1使用的组合物，其中所述方法不包括在施用第一单位剂量的四价登革热病毒组合物之前确定受试者中的早先登革热感染并且其中所述方法是安全且有效的。
3.根据条款1或2使用的组合物，其中所述登革热血清型3是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％并且/或者其中所述登革热血清型4是以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％。
4.根据条款1至3中任一项使用的组合物，其中所述登革热血清型4占组合物中所有四种血清型的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3占组合物中所有四种血清型的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1和登革热血清型2各自所占的浓度低于血清型3的浓度，并且任选地合计占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
5.根据条款1至4中任一项使用的组合物，其中所述登革热血清型1是嵌合登革热血清型2/1毒株，所述登革热血清型2是非嵌合登革热血清型2毒株，所述登革热血清型3是嵌合登革热血清型2/3毒株并且所述登革热血清型4是嵌合登革热血清型2/4毒株。
6.根据条款1至5中任一项使用的组合物，其中所述登革热血清型1具有SEQ IDNO.2的氨基酸序列，所述登革热血清型2具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，所述登革热血清型3具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且所述登革热血清型4具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
7.根据条款1至6中任一项使用的组合物，其中所述单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)登革热血清型1的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL。
8.根据条款1至7中任一项使用的组合物，其中当在0.5ml中测量时，所述组合物还包含约15％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物，约1％(w/v)的泊洛沙姆407，约0.1％(w/v)的人血清白蛋白和约100mM的氯化钠。
9.根据条款1至8中任一项使用的组合物，其中所述单位剂量施用于手臂的三角肌区域。
10.根据条款1至9中任一项使用的组合物，其中所述受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性和/或在9岁以下。
11.根据条款1至10中任一项使用的组合物，其中所述受试者为4至5岁或6至11岁或12至16岁。
12.根据条款1至11中任一项使用的组合物，其中所述方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
13.根据条款1至12中任一项使用的组合物，其中所述受试者来自登革热流行区。
14.根据条款1至12中任一项使用的组合物，其中所述受试者来自登革热非流行区。
15.根据条款1或14中任一项使用的组合物，其中所述受试者来自亚太区或拉丁美洲。
16.根据条款1至15中任一项使用的组合物，其中当在第1天和第90天向至少50名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，所述组合物提供一定血清阳性率，其中所述受试者群体的受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性。
17.根据条款16使用的组合物，其中在施用所述第一单位剂量后至少一个月，诸如在第30天，所述受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性。
18.根据条款16或17使用的组合物，其中在施用所述第二单位剂量之前或之时，诸如在第90天，所述受试者群体的至少80％对于所有四种登革热血清型均为血清阳性。
19.根据条款16至18中任一项使用的组合物，其中在施用所述第二单位剂量之后，诸如在第120天，所述受试者群体的至少80％或至少85％或至少90％或至少95％对于所有四种登革热血清型均为血清阳性。
20.根据条款11至14中任一项使用的组合物，其中在施用所述第二单位剂量后，诸如在第270天，所述受试者群体的至少80％或至少85％或至少90％对于所有四种登革热血清型均为血清阳性。
21.根据条款16至20中任一项使用的组合物，其中当在第1天和第90天向至少100名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，所述组合物提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者包含20％至40％在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性的受试者和60％至80％在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性的受试者，其中在第120天和/或第270天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过10％点并且/或者其中在第120天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过5％点。
22.一种为受试者接种预防病毒学上可确认的登革热病的方法，其包括向所述受试者施用四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种登革热病毒株。
23.一种为受试者接种预防病毒学上可确认的登革热病的方法，其由向所述受试者施用四价登革热病毒组合物组成，所述四价登革热病毒组合物包含代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种登革热病毒株。
24.根据条款22或23所述的方法，其中所述方法不包括在施用所述四价登革热病毒组合物之前确定所述受试者中的早先登革热感染。
25.根据条款22至24中任一项所述的方法，其中所述接种是安全的，而不管在施用所述四价登革热病毒组合物之前是否确定所述受试者有早先登革热感染。
26.根据条款22至25中任一项所述的方法，其是安全的。
27.根据条款22至26中任一项所述的方法，其是有效的。
28.根据条款22至27中任一项所述的方法，其中所述病毒株是活的减毒登革热病毒株。
29.根据条款22至28中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种嵌合登革热病毒和任选地至少一种非嵌合登革热病毒。
30.根据条款22至29中任一项所述的方法，其中所述组合物包含嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株以及嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株。
31.根据条款22至30中任一项所述的方法，其中所述受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性和/或为9岁以下、4至5岁、6至11岁或12至16岁。
32.根据条款22至31中任一项所述的方法，其中所述组合物通过皮下注射施用。
33.根据条款22至32中任一项所述的方法，其包括向所述受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的所述登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在3个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和在大约第90天皮下施用。
34.根据条款22至33中任一项所述的方法，其中所述登革热血清型1和2以相似的量存在和/或占总病毒浓度的小于约10％。
35.根据条款22至34中任一项所述的方法，其中所述登革热血清型3占总病毒浓度的至少约10％。
36.根据条款22至35中任一项所述的方法，其中所述登革热血清型4占总病毒浓度的至少约70％。
37.根据条款22至36中任一项所述的方法，其中所述登革热血清型4占组合物中所有四种血清型的最高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3占组合物中所有四种血清型的第二高浓度，优选以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1和登革热血清型2各自所占的浓度低于血清型3的浓度，并且任选地合计占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％。
38.根据条款22至37中任一项所述的方法，其中所述方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
39.根据条款22至38中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自登革热流行区。
40.根据条款22至38中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自登革热非流行区。
41.根据条款22至40中任一项所述的方法，其中所述受试者或受试者群体来自亚太区或拉丁美洲。
42.根据条款22至41中任一项所述的方法，其具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，并且任选地间隔至少4周，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
43.根据条款42所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％或超过72％。
44.根据条款22至43中任一项所述的方法，当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对所有四种登革热血清型具有超过30％的联合疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如3个月内，并且任选地间隔至少4周，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
45.根据条款44所述的方法，其中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过55％，超过60％，超过65％，超过70％，超过75％，超过78％，超过79％或为约80％。
46.根据条款22至45中任一项所述的方法，其在血清阴性受试者中具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
47.根据条款46所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％或超过55％。
48.根据条款22至47中任一项所述的方法，当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法在血清阴性受试者中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过30％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述第二次施用后30天到所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
49.根据条款48所述的方法，其中在血清阴性受试者中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过70％。
50.根据条款22至49中任一项所述的方法，其具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在随机分组时4至5岁而不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
51.根据条款50所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过45％。
52.根据条款22至51中任一项所述的方法，当在随机分组时4至5岁而不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过30％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述第二次施用后30天到所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
53.根据条款52所述的方法，其中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过70％。
54.根据条款22至53中任一项所述的方法，其具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在随机分组时6至11岁而不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
55.根据条款54所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％或超过70％。
56.根据条款22至55中任一项所述的方法，当在随机分组时6至11岁而不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过30％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述第二次施用后30天到所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
57.根据条款56所述的方法，其中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过75％，或超过80％。
58.根据条款26至57中任一项所述的方法，其具有针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在随机分组时12至16岁而不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
59.根据条款58所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过65％，或超过68％。
60.根据条款26至59中任一项所述的方法，当在随机分组时12至16岁而不管在基线时的血清状态如何的至少1,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过30％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述第二次施用后30天到所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
61.根据条款60所述的方法，其中针对所有四种登革热血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过75％，或超过80％。
62.根据条款22至61中任一项所述的方法，其具有针对登革热血清型1的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
63.根据条款62所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，或超过50％。
64.根据条款22至63中任一项所述的方法，当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对登革热血清型1具有超过30％的疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
65.根据条款64所述的方法，其中针对登革热血清型1的疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过65％或超过70％。
66.根据条款22至65中任一项所述的方法，其具有针对登革热血清型2的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
67.根据条款66所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
68.根据条款22至67中任一项所述的方法，当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对登革热血清型2具有超过30％的疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
69.根据条款68所述的方法，其中针对登革热血清型2的疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
70.根据条款22至69中任一项所述的方法，其具有针对登革热血清型3的疫苗功效，所述疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
71.根据条款70所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％。
72.根据条款22至71中任一项所述的方法，当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对登革热血清型3具有超过30％的疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
73.根据条款72所述的方法，其中针对登革热血清型3的疫苗功效超过40％，超过50％，超过55％，或超过60％。
74.根据条款22至73中任一项所述的方法，其针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
75.根据条款74所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，或超过75％。
76.根据条款22至75中任一项所述的方法，当在基线时针对所有血清型均为血清阴性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有超过30％的针对所有四种血清型的联合疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述第二次施用后30天到所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
77.根据条款76所述的方法，其中针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
78.根据条款21至77中任一项所述的方法，其针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在基线时为血清阳性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过25％，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述施用计划的所述第二次施用后约30天到所述施用计划的所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
79.根据条款78所述的方法，其中所述下限超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，或超过80％。
80.根据条款22至79中任一项所述的方法，当在基线时为血清阳性的至少1,500名或至少2,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法针对住院治疗的病毒学上确认的登革热具有超过30％的针对所有四种血清型的联合疫苗功效，其中在少于6个月内，诸如在3个月内，在所述第二次施用后30天到所述第二次施用后至少12个月，施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
81.根据条款80所述的方法，针对住院治疗的病毒学上确认的登革热的针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，或超过90％。
82.根据条款22至81中任一项的方法，所述方法针对所有四种登革热血清型具有联合相对风险，所述联合相对风险具有2侧95％置信区间，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，上限结合小于0.75，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
83.根据条款82所述的方法，其中所述上限低于0.70，低于0.65，低于0.60，低于0.55，低于0.50，低于0.45，低于0.40，低于0.35，低于0.30或低于0.28。
84.根据条款22至83中任一项的方法，其中当在不管基线时的血清状态如何的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，针对所有四种登革热血清型的所述联合相对风险小于0.70，其中在少于6个月内，诸如3个月内，在第二次施用后30天到第二次施用后至少12个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
85.根据条款84所述的方法，其中针对所有四种血清型的所述联合相对风险低于0.65，低于0.60，低于0.55，低于0.50，低于0.45，低于0.40，低于0.35，低于0.30，低于0.25或低于0.23。
86.根据条款22至85中任一项所述的方法，其具有针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在来自流行区而不管基线时血清状态如何并且选自由随机分组时4至16岁的受试者组成的组的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，下限超过61.0％，或超过65.0％或超过70.0％或超过72.0％，其中在6个月或更短时间内，在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后至少12或13个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
87.根据条款22至86中任一项所述的方法，其中当在来自流行区而不管基线时血清状态如何并且选自由随机分组时4至16岁的受试者组成的组的至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者，或至少15,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，针对所有四种血清型的联合疫苗功效超过66％，或超过70％，或超过75％，或超过77％，或超过80.0％，其中在6个月或更短时间内，在施用计划的最后一次施用后约30天到施用计划的最后一次施用后至少12个月或13个月施用所述单位剂量或所述安慰剂至少两次。
88.根据条款22至87中任一项所述的方法，其中所述单位剂量或所述安慰剂在第1天和第90天施用。
89.根据条款22至88中任一项所述的方法，当在不管基线时的血清状态如何并且处于4至16岁年龄组，尤其是处于随机分组时4至5岁的受试者中的至少1,000名健康受试者，或至少5,000名健康受试者，或至少10,000名健康受试者的受试者群体中相对于安慰剂测量时，所述方法对于住院治疗的病毒学上确认的登革热的相对风险为1或更低，或0.8或更低，或0.6或更低。
90.根据条款22至89中任一项所述的方法，其中疫苗相关的严重不良事件的发生率小于0.1％。
91.根据条款22至90中任一项所述的方法，其中发生在施用4周以内的疫苗相关的非诱发的不良事件的发生率小于2％。
92.根据条款22至91中任一项所述的方法，其中发生在施用2周以内的疫苗相关的诱发的不良事件的发生率小于35％。
93.根据条款22至92中任一项所述的方法，其中发生在施用1周以内的诱发的局部反应的发生率小于40％。
94.根据条款22至93中任一项所述的单位剂量，其中所述单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)登革热血清型1的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL，
并且任选地当在0.5mL中测量时，包含约15％(w/v)α,α-海藻糖二水合物，约1％(w/v)的泊洛沙姆407，约0.1％(w/v)的人血清白蛋白和约100mM的氯化钠。
95.一种在受试者中预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，所述方法包括向所述受试者连续施用至少第一和第二单位剂量的登革热疫苗组合物，其中所述第一和第二单位剂量在3个月内间隔至少4周，任选地在大约第1天和大约第90天皮下施用，其中登革热疫苗组合物是四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含代表登革热血清型1、登革热血清型2、登革热血清型3和登革热血清型4的四种登革热病毒株，任选地其中登革热病毒株是活的、减毒的，并且其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后，
(i)登革热血清型1的浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL。
96.根据条款95使用的单位剂量，其中所述受试者为9岁以下和/或当受试者的血清状态未知或为血清阴性时。
97.根据条款95或96使用的单位剂量，其是有效的。
98.根据条款95至97中任一项使用的单位剂量，其针对所有四种登革热血清型均有效。
99.根据条款95至98中任一项使用的单位剂量，其是安全的。
100.根据条款95至99中任一项使用的单位剂量，其中所述单位剂量包含至少一种嵌合登革热病毒。
101.根据条款95至100中任一项使用的单位剂量，其中所述单位剂量包含至少一种非嵌合登革热病毒和至少一种嵌合登革热病毒。
102.根据条款95至101中任一项使用的单位剂量，其中所述受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性和/或在9岁以下。
103.根据条款95至102中任一项使用的单位剂量，其中所述受试者为4至5岁或6至11岁或12至16岁。
104.根据条款95至103中任一项使用的单位剂量，其中所述方法不包括在施用所述第一单位剂量的四价登革热病毒组合物之前确定所述受试者中的早先登革热感染。
105.根据条款95至104中任一项使用的单位剂量，其中所述登革热血清型4占组合物中所有四种血清型的最高浓度，任选地以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约70％，登革热血清型3占组合物中所有四种血清型的第二高浓度，以pfu/0.5mL计的总浓度的至少约10％，并且登革热血清型1和登革热血清型2各自所占的浓度低于血清型3的浓度，并且合计占以pfu/0.5mL计的总浓度的小于约10％和/或其在彼此的5％点以内。
106.根据条款95至105中任一项使用的单位剂量，其中所述登革热血清型1是嵌合登革热血清型2/1毒株，所述登革热血清型2是非嵌合登革热血清型2毒株，所述登革热血清型3是嵌合登革热血清型2/3毒株并且所述登革热血清型4是嵌合登革热血清型2/4毒株。
107.根据条款95至106中任一项使用的单位剂量，其中所述登革热血清型1具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，所述登革热血清型2具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列，所述登革热血清型3具有SEQ ID NO.6的氨基酸序列，并且所述登革热血清型4具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
108.根据条款95至107中任一项使用的单位剂量，其中当在0.5mL中测量时，所述单位剂量包含约10％w/v至约20％w/v的α,α-海藻糖二水合物或等摩尔量的其它形式的α,α-海藻糖，约0.5％w/v至约1.5％w/v的泊洛沙姆407，约0.05％w/v至约2％w/v的人血清白蛋白和约70mM至140mM的氯化钠。
109.根据条款95至108中任一项使用的单位剂量，其中当在0.5mL中测量时，所述单位剂量还包含约15％(w/v)的α,α-海藻糖二水合物，约1％(w/v)的泊洛沙姆407，约0.1％(w/v)的人血清白蛋白和约100mM的氯化钠。
110.根据条款95至109中任一项使用的单位剂量，其中所述方法用于预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。
111.根据条款95至110中任一项使用的单位剂量，其中所述受试者来自登革热流行区。
112.根据条款95至111中任一项使用的单位剂量，其中所述受试者来自登革热非流行区。
113.根据条款95至112中任一项使用的单位剂量，其中所述受试者来自亚太区或拉丁美洲。
114.根据条款95至113中任一项使用的单位剂量，其中当在第1天和第90天向至少50名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，所述单位剂量提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性。
115.根据条款114使用的单位剂量，其中在施用所述第一单位剂量后至少一个月，诸如在第30天，所述受试者群体的至少80％对所有四种登革热血清型均为血清阳性。
116.根据条款114或115使用的单位剂量，其中在施用所述第二单位剂量之前或之时，诸如在第90天，所述受试者群体的至少80％对于所有四种登革热血清型均为血清阳性。
117.根据条款114至116中任一项使用的单位剂量，其中在施用所述第二单位剂量之后，诸如在第120天，所述受试者群体的至少80％或至少85％或至少90％或至少95％对于所有四种登革热血清型均为血清阳性。
118.根据条款114至117中任一项使用的单位剂量，其中在施用所述第二单位剂量后，诸如在第270天，所述受试者群体的至少80％或至少85％或至少90％对于所有四种登革热血清型均为血清阳性。
119.根据条款114至118中任一项使用的单位剂量，其中当在第1天和第90天向至少100名受试者的受试者群体以两个单位剂量皮下施用时，所述单位剂量提供一定血清阳性率，其中受试者群体的受试者包含20％至40％在基线时对所有登革热血清型均为血清阴性的受试者和60％至80％在基线时对至少一种登革热血清型为血清阳性的受试者，其中在第120天和/或第270天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过10％点并且/或者其中在第120天时，受试者群体的血清阴性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率与受试者群体的血清阳性部分中对于所有四种登革热血清型的血清阳性率相差不超过5％点。
120.根据条款95至119中任一项使用的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)登革热血清型1的浓度为3.3log10pfu/0.5mL至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为2.7log10pfu/0.5mL至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为4.0log10pfu/0.5mL至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为4.5log10pfu/0.5mL至6.2log10pfu/0.5mL。
121.根据条款95至120中任一项使用的单位剂量，其中在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后
(i)登革热血清型1的浓度为3.3log10pfu/剂至5.0log10pfu/0.5mL，
(ii)登革热血清型2的浓度为2.7log10pfu/剂至4.9log10pfu/0.5mL，
(iii)登革热血清型3的浓度为4.0log10pfu/剂至5.7log10pfu/0.5mL，并且
(iv)登革热血清型4的浓度为4.5log10pfu/剂至5.5log10pfu/0.5mL。
第四个本发明条款清单
1.一种在预防受试者群体中的黄热病和登革热病的方法中使用的黄热病疫苗，尤其是YF-17D，和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后，在至少40名或至少50名或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
3.根据条款2使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述GMT提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
4.一种在受试者中预防黄热病和登革热病的方法中使用的黄热病疫苗，尤其是YF-17D，和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
5.根据条款4使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
6.根据条款5使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
7.根据条款1至6中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者对于所有登革热血清型均为血清阴性。
8.根据条款1至7中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述黄热病疫苗的施用是同时或依次的。
9.根据条款1至8中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用，并且所述黄热病疫苗通过皮下注射施用，其中所述注射剂优选施用至手臂，更优选施用至手臂的三角肌区域。
10.根据条款9使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述黄热病疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
11.根据条款1至10中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个所述重构单位剂量。
12.根据条款1至11中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和一个剂量的所述黄热病疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天施用所述黄热病疫苗，
-在所述黄热病疫苗施用后，诸如3个月后并且优选在第90天，第一次施用第一重构单位剂量，并且
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第二次施用第二重构单位剂量。
13.根据条款1至11中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和一个剂量的所述黄热病疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次施用第一重构单位剂量，
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，施用所述黄热病疫苗。
14.根据条款1至11中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和一个剂量的所述黄热病疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天同时施用第一重构单位剂量和所述黄热病疫苗，并且
-在所述同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
15.根据条款1至14中任一项使用的黄热病疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
16.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向受试者伴随施用黄热病疫苗(尤其是YF-17D)来预防所述受试者中的黄热病。
17.根据条款16所述的方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
18.根据条款17所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
19.根据条款16至18中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
20.根据条款16至19中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
21.根据条款16至20中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述黄热病疫苗的施用是同时或依次的。
22.根据条款16至22中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述黄热病疫苗通过皮下注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
23.根据条款22所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述黄热病疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
24.根据条款16至23中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
25.根据条款16至24中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至15中所述的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗，具体而言YF-17D，具体而言是根据以下计划进行施用：
-在第0天施用所述黄热病疫苗，
-在所述黄热病疫苗施用后，诸如3个月后并且优选在第90天，第一次施用第一重构单位剂量，并且
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第二次施用第二重构单位剂量。
26.根据条款16至25中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至15中所述的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗，具体而言YF-17D，具体而言是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次施用第一重构单位剂量，
-在所述第一次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，施用所述黄热病疫苗。
27.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至15中所述的重构单位剂量和一个剂量的黄热病疫苗，尤其是YF-17D，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天同时施用第一重构单位剂量和所述黄热病疫苗，并且
-在所述同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
28.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为2至60岁。
29.根据条款16至28中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
30.根据条款16至29中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行区和黄热病非流行区。
31.一种试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，
b)用于重构所述单位剂量的药学上可接受的稀释剂，和
c)黄热病疫苗。
32.根据条款31所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
第五个本发明条款清单
1.一种在预防受试者群体中的甲型肝炎和登革热病的方法中使用的甲型肝炎疫苗，诸如
或
和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后，在至少40名或至少50名或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
3.根据条款2使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述GMT提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
4.一种在受试者中预防甲型肝炎和登革热病的方法中使用的甲型肝炎疫苗，诸如
或
和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
5.根据条款4使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
6.根据条款5使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
7.根据条款1至6中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者对于所有登革热血清型均为血清阴性。
8.根据条款1至7中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗的施用是同时的。
9.根据条款1至8中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述甲型肝炎疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
10.根据条款9使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
11.根据条款1至10中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个所述重构单位剂量。
12.根据条款1至11中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和一个剂量的所述甲型肝炎疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
13.根据条款1至12中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为2至60岁。
14.根据条款1至13中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
15.根据条款1至13中任一项使用的甲型肝炎疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区，优选来自登革热非流行区和甲型肝炎非流行区。
16.一种预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者群体伴随施用甲型肝炎疫苗诸如
或
来预防所述受试者群体中的甲型肝炎。
17.根据条款16所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
18.根据条款17所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
19.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款16至18中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者伴随施用甲型肝炎疫苗诸如
或
来预防所述受试者中的甲型肝炎。
20.根据条款19所述的方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
21.根据条款20所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
22.根据条款16至21中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
23.根据条款16至22中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
24.根据条款16至23中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗的施用是同时或依次的。
25.根据条款16至24中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述甲型肝炎疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
26.根据条款25所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
27.根据条款16至26中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
28.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至15中所述的重构单位剂量和一个剂量的甲型肝炎疫苗诸如
或
尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述甲型肝炎疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
29.根据条款16至28中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为2至60岁。
30.根据条款16至29中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
31.根据条款16至30中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区，优选地来自登革热非流行区和甲型肝炎非流行区。
32.一种试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至16中任一项所述的单位剂量，
b)用于重构所述单位剂量的药学上可接受的稀释剂，和
c)甲型肝炎疫苗。
33.根据条款32所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
第六个本发明条款清单
1.一种在预防受试者群体中的HPV相关癌症或生殖器疣和登革热病的方法中使用的HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后，在至少40名或至少50名或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
3.根据条款2使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述GMT提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
4.一种在受试者中预防HPV相关癌症或生殖器疣和登革热病的方法中使用的HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
5.根据条款4使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
6.根据条款5使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
7.根据条款1至6中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者对于所有登革热血清型均为血清阴性。
8.根据条款1至7中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述HPV疫苗的施用是同时的。
9.根据条款1至8中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述HPV疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
10.根据条款9使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述HPV疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
11.根据条款1至10中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个所述重构单位剂量。
12.根据条款1至11中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和两个剂量的所述HPV疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述HPV疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第三次施用第二剂的所述HPV疫苗。
13.根据条款1至12中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为9至25岁。
14.根据条款1至13中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
15.根据条款1至14中任一项使用的HPV疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为女性。
16.一种预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者群体伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)来预防所述受试者群体中的HPV相关癌症或生殖器疣。
17.根据条款16所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
18.根据条款17所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
19.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者伴随施用HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)来预防所述受试者中的HPV相关癌症或生殖器疣。
20.根据条款19所述的方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
21.根据条款20所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
22.根据条款16至21中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
23.根据条款16至22中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
24.根据条款16至23中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述HPV疫苗的施用是同时或依次的。
25.根据条款16至24中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述HPV疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
26.根据条款25所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述HPV疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
27.根据条款16至26中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
28.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至16中所述的重构单位剂量和两个剂量的HPV疫苗(尤其是9vHPV疫苗，诸如
9)，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述HPV疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用重构单位剂量之后，诸如3个月后并且优选在第180天，第三次施用第二剂的所述HPV疫苗。
29.根据条款16至28中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为9至25岁。
30.根据条款16至29中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
31.根据条款16至30中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区。
32.根据条款16至31中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为女性。
33.一种试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至16中任一项所述的单位剂量，
b)用于重构所述单位剂量的药学上可接受的稀释剂，和
c)HPV疫苗。
34.根据条款33所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
第七个本发明条款清单
1.一种在预防受试者群体中的麻疹、腮腺炎和风疹及登革热病的方法中使用的MMR疫苗(诸如
II)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后，在至少40名或至少50名或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
3.根据条款2使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述GMT提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
4.一种在受试者中预防麻疹、腮腺炎和风疹及登革热病的方法中使用的MMR疫苗(诸如
II)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量和MMR疫苗(诸如
II)，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
5.根据权利要求4使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
6.根据权利要求5使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
7.根据条款1至6中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者对于所有登革热血清型均为血清阴性。
8.根据条款1至7中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述MMR疫苗的施用是同时或依次的。
9.根据条款1至8中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用，并且所述MMR疫苗通过皮下注射施用，其中所述注射剂优选施用至手臂，更优选施用至手臂的三角肌区域。
10.根据条款9使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述MMR疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
11.根据条款1至10中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个所述重构单位剂量。
12.根据条款1至11中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和两个剂量的所述MMR疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述MMR疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用第二重构单位剂量之后，诸如在所述第一次同时施用后3至6年，第三次施用第二剂的所述MMR疫苗。
13.根据条款1至12中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为1至10岁。
14.根据条款1至12中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为2个月至7岁。
15.根据条款1至14中任一项使用的MMR疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区或来自登革热非流行区。
16.一种预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者群体伴随施用MMR疫苗诸如
II来预防所述受试者群体中的麻疹、腮腺炎和风疹。
17.根据条款16所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
18.根据条款17所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
19.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者伴随施用MMR疫苗诸如
II来预防所述受试者中的麻疹、腮腺炎和风疹。
20.根据条款19所述的方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
21.根据条款20所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
22.根据条款16至21中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
23.根据条款16至22中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
24.根据条款16至23中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述MMR疫苗的施用是同时或依次的。
25.根据条款16至23中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述MMR疫苗通过皮下注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
26.根据条款25所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述MMR疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
27.根据条款16至26中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
28.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至15中所述的重构单位剂量和两个剂量的MMR疫苗诸如
II，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述MMR疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量，并且
-在所述第二次施用第二重构单位剂量之后，诸如在所述第一次同时施用后3至6年，第三次施用第二剂的所述MMR疫苗。
29.根据条款16至28中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为1至10岁，优选2个月至7岁。
30.根据条款16至29中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
31.根据条款16至30中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区。
32.一种试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至15中任一项所述的单位剂量，
b)用于重构所述单位剂量的药学上可接受的稀释剂，和
c)MMR疫苗。
33.根据条款32所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
第八个本发明条款清单
1.一种在预防受试者群体中的破伤风、白喉和百日咳及登革热病的方法中使用的破伤风、白喉和百日咳(Tdap)疫苗(尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗，诸如
)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后，在至少40名或至少50名或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
3.根据条款2使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述GMT提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
4.一种在受试者中预防破伤风、白喉和百日咳及登革热病的方法中使用的破伤风、白喉和百日咳(Tdap)疫苗(尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗，诸如
)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
5.根据条款4使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
6.根据条款5使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
7.根据条款1至6中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者对于所有登革热血清型均为血清阴性。
8.根据条款1至7中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述Tdap疫苗的施用是同时的。
9.根据条款1至8中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述Tdap疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
10.根据条款9使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述Tdap疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
11.根据条款1至10中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个所述重构单位剂量。
12.根据条款1至11中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和一个剂量的所述Tdap疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述Tdap疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
13.根据条款1至12中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为10至18岁。
14.根据条款1至13中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
15.根据条款1至13中任一项使用的Tdap疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区。
16.一种预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者群体伴随施用破伤风、白喉和百日咳(Tdap)疫苗(尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗，诸如
)来预防所述受试者群体中的破伤风、白喉和百日咳。
17.根据条款16所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
18.根据条款17所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
19.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者伴随施用破伤风、白喉和百日咳(Tdap)疫苗(尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗，诸如
)来预防所述受试者中的破伤风、白喉和百日咳。
20.根据条款19所述的方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
21.根据条款20所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
22.根据条款16至21中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
23.根据条款16至22中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
24.根据条款16至23中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述Tdap疫苗的施用是同时或依次的。
25.根据条款16至24中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述Tdap疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
26.根据条款25所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述Tdap疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于对侧臂。
27.根据条款16至26中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
28.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款1至15所述的重构单位剂量和一个剂量的Tdap疫苗，尤其是破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳(吸附)联合疫苗(诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和所述Tdap疫苗，并且
-在所述第一次同时施用之后，诸如3个月后并且优选在第90天，第二次施用第二重构单位剂量。
29.根据条款16至28中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为10至18岁。
30.根据条款16至29中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
31.根据条款16至29中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区。
32.一种试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至15中任一项所述的单位剂量，
b)用于重构所述单位剂量的药学上可接受的稀释剂，和
c)Tdap疫苗。
33.根据条款32所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
第九个本发明条款清单
1.一种在预防受试者群体中的白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病和登革热病的方法中使用的DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述重构单位剂量之后，在至少40名或至少50名或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
3.根据条款2使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述GMT提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
4.一种在受试者中预防白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病和登革热病的方法中使用的DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
5.根据条款4使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用所述单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
6.根据条款5使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中受试者群体的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
7.根据条款1至6中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者对于所有登革热血清型均为血清阴性。
8.根据条款1至7中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗的施用是同时或依次的。
9.根据条款1至8中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用并且所述DTaP/IPV/Hib疫苗通过肌内注射施用，其中所述注射剂优选施用于手臂，更优选地施用于手臂的三角肌区域。
10.根据条款9使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于手臂和大腿。
11.根据条款9或10使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述单位剂量的所述皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域，并且所述DTaP/IPV/Hib疫苗的所述肌内注射液施用于大腿，优选施用于大腿的前外侧。
12.根据条款1至11中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个所述重构单位剂量。
13.根据条款1至12中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和四个剂量的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次同时施用后3个月并且优选在第90天，第三次施用第二重构单位剂量，
-在所述第三次施用后，诸如在第一次同时施用后4个月并且优选在第120天，第四次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次施用后，诸如在9至12个月后并且优选在第390天，第五次施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗。
14.根据条款1至12中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述方法包括施用两个所述重构单位剂量和四个剂量的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次施用第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次施用后4个月并且优选在第120天，第三次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第三次施用后，诸如9至12个月后并且优选在第390天，第四次同时施用第一重构单位剂量和第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次同时施用后，诸如3个月后并且优选在第480天，第五次施用第二重构单位剂量。
15.根据条款13或14使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)在施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗后，诸如在施用第四剂DTaP/IPV/Hib疫苗(诸如
)后30至57个月施用。
16.根据条款1至15中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者为2个月至4岁。
17.根据条款1至16中任一项使用的DTaP/IPV/Hib疫苗和登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区或来自登革热非流行区。
18.一种预防受试者群体中的登革热病的方法，其包括向所述受试者群体施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者群体伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)来预防受试者群体中的白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病。
19.根据条款18所述的方法，其中在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量之后，在至少40名，或至少50名，或至少60名受试者中测试时，所述受试者群体的几何平均中和抗体滴度(GMT)提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型4的GMT比率。
20.根据条款19所述的方法，其中所述受试者群体的GMT还提供不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型1的GMT比率，和/或不超过20的登革热血清型2的GMT与登革热血清型3的GMT比率。
21.一种在受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量，其中所述方法还包括通过向所述受试者伴随施用DTaP/IPV/Hib疫苗，尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)来在受试者中预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎以及由b型流感嗜血杆菌引起的疾病。
22.根据条款21所述的方法，其中当在至少第一次施用所述单位剂量之后的第180天或第365天，且任选地在所述第一次施用后90天第二次施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量之后测试时，所述受试者的中和抗体滴度提供不超过50，或不超过40，或不超过30，或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型4的中和抗体滴度比率。
23.根据条款22所述的方法，其中所述受试者的所述中和抗体滴度还提供不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型1的中和抗体滴度比率，和/或不超过20的登革热血清型2的中和抗体滴度与登革热血清型3的中和抗体滴度比率。
24.根据条款18至23中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
25.根据条款18至24中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
26.根据条款18至25中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗的施用是同时或依次的。
27.根据条款18至26中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量通过皮下注射施用，并且所述DTaP/IPV/Hib疫苗通过肌内注射施用。
28.根据条款27所述的方法，其中所述重构单位剂量和所述DTaP/IPV/Hib疫苗施用于不同的解剖部位，诸如施用于手臂和大腿。
29.根据条款27或28所述的方法，其中所述皮下注射液施用于手臂，优选施用于手臂的三角肌区域，并且所述肌内注射液施用于大腿，优选施用于大腿的前外侧。
30.根据条款18至29中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内，或在六个月内或在三个月内，诸如在第0天和第90天施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
31.根据条款18至30中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款17至19中所述的重构单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次同时施用第一重构单位剂量和第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次同时施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次同时施用后3个月并且优选在第90天，第三次施用第二重构单位剂量，
-在所述第三次施用后，诸如在第一次同时施用后4个月并且优选在第120天，第四次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次施用后，诸如在9至12个月后并且优选在第390天，第五次施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗。
32.根据条款18至31中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用两个根据条款17至19中所述的重构单位剂量和四个剂量的DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)，尤其是根据以下计划进行施用：
-在第0天第一次施用第一剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第一次施用之后，诸如2个月后并且优选在第60天，第二次施用第二剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第二次施用后，诸如在第一次施用后4个月并且优选在第120天，第三次施用第三剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，
-在所述第三次施用后，诸如9至12个月后并且优选在第390天，第四次同时施用第一重构单位剂量和第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗，并且
-在所述第四次同时施用后，诸如3个月后并且优选在第480天，第五次施用第二重构单位剂量。
33.根据条款18至32所述的方法，其中第五剂的DTaP/IPV/Hib疫苗(尤其是DTaP/IPV/Hib联合疫苗，诸如
)在施用第四剂的所述DTaP/IPV/Hib疫苗后，诸如在施用第四剂DTaP/IPV/Hib疫苗后，尤其第四剂DTaP/IPV/Hib联合疫苗(诸如
)后30至57个月施用。
34.根据条款18至33中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者为2个月至4岁。
35.根据条款18至34中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热流行区。
36.根据条款18至35中任一项所述的方法，其中所述受试者群体或受试者来自登革热非流行区。
37.一种试剂盒，其包含以下组分：a)根据条款1至15中任一项所述的单位剂量，b)用于重构所述单位剂量的药学上可接受的稀释剂，和c)DTaP/IPV/Hib疫苗。
38.根据条款37所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
第十个本发明条款清单
1.一种在预防老年受试者中的登革热病的方法中使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述重构单位剂量包含四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包含四种活的减毒登革热病毒株，并且所述重构单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10pfu/0.5mL的登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(iv)浓度为至少4.5log10pfu/0.5mL的嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据条款1使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在所述老年受试者中预防登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)。
3.根据条款1或2使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中通过皮下注射，优选地向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
4.根据条款1至3中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中施用两个所述重构单位剂量。
5.根据条款4使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在12个月，优选在3个月内，诸如在大约第0天和大约第90天施用所述两个单位剂量。
6.根据条款4或5使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中在施用所述第二单位剂量之后施用第三单位剂量。
7.根据条款6使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述第三单位剂量在第一次施用后6至12个月，诸如在第一次施用后12个月施用。
8.根据权利要求6使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述第三单位剂量在第一次施用后12个月之后，诸如在第二次施用后12个月施用。
9.根据条款1至8中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述老年受试者来自登革热流行区。
10.根据条款1至8中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述老年受试者群体来自登革热非流行区。
11.根据条款1至10中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述老年受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
12.根据条款1至10中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
13.根据条款1至12中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。
14.根据条款13使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述至少一种慢性疾患或疾病可以选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
15.根据条款1至14中任一项使用的登革热疫苗组合物的重构单位剂量，其中所述老年受试者免疫系统受损。
16.一种在老年受试者中预防登革热病的方法，其包括向所述老年受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量。
17.一种在老年受试者中预防登革出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)的方法，其包括向所述老年受试者施用根据条款1至15中任一项所述的重构单位剂量。
18.根据条款16或17所述的方法，其中通过皮下注射，优选地向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
19.根据条款16至18中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
20.根据条款16至19中任一项所述的方法，其中在六个月内，优选在三个月内施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
21.根据条款20所述的方法，其中在第0天和第90天施用所述两个重构单位剂量。
22.根据条款16至21中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第一单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
23.根据条款16至21中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第二单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
24.根据条款16至24中任一项所述的方法，其中所述老年受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
25.根据条款16至24中任一项所述的方法，其中所述老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
26.根据条款16至25中任一项所述的方法，其中所述老年受试者超过60岁。
27.根据条款16至26中任一项所述的方法，其中所述老年受试者来自登革热流行区。
28.根据条款16至27中任一项所述的方法，其中所述老年受试者来自登革热非流行区。
29.根据条款16至28中任一项所述的方法，其中所述老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。
30.根据条款29所述的方法，其中所述至少一种慢性疾患或疾病选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
31.根据条款16至30中任一项所述的方法，其中所述老年受试者免疫系统受损。
32.一种用于在老年受试者中刺激对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答的方法，其包括向所述老年受试者施用根据条款1至15所述的重构单位剂量。
33.根据条款32所述的方法，其中对所有四种登革热病毒血清型的免疫应答是平衡的。
34.根据条款32或33所述的方法，其中通过皮下注射，优选地向手臂的三角肌区域施用所述重构单位剂量。
35.根据条款32至34中任一项所述的方法，其中在12个月或更长时间内施用两个根据条款17至19中任一项所述的单位剂量。
36.根据条款32至35中任一项所述的方法，其中在六个月内，优选在三个月内施用两个根据条款17至19中任一项所述的重构单位剂量。
37.根据条款36所述的方法，其中在第0天和第90天施用所述两个重构单位剂量。
38.根据条款32至37中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第一单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
39.根据条款32至38中任一项所述的方法，其中在施用所述第二单位剂量之后，优选在施用所述第二单位剂量后的12个月内施用第三单位剂量。
40.根据条款32至39中任一项所述的方法，其中所述老年受试者来自登革热流行区。
41.根据条款32至40中任一项所述的方法，其中所述老年受试者来自登革热非流行区。
42.根据条款32至41中任一项所述的方法，其中所述老年受试者相对于所有登革热血清型均为血清阴性。
43.根据条款32至42中任一项所述的方法，其中所述老年受试者相对于至少一种登革热血清型为血清阳性。
44.根据条款32至43中任一项所述的方法，其中所述老年受试者患有至少一种慢性疾患或疾病。
45.根据条款44所述的方法，其中所述至少一种慢性疾患或疾病选自糖尿病、高血压、过敏、早先中风、缺血性心脏病、慢性肾功能损伤和慢性阻塞性肺病。
46.根据条款32至45中任一项所述的方法，其中所述老年受试者免疫系统受损。
47.根据条款17至47中任一项所述的方法，其中所述重构单位剂量是从根据条款50或51所述的试剂盒获得的。
48.根据条款1至16中任一项所述的重构单位剂量，其在根据条款17至54所述的方法中使用。
49.根据条款1至16中任一项所述的重构单位剂量用于制造用于条款17至48所述的方法的药物的用途。
50.一种用于制备重构单位剂量的试剂盒，其包含以下组分：
a)根据条款1至16中任一项所述的单位剂量，和
b)用于重构的药学上可接受的稀释剂。
51.根据条款50所述的试剂盒，其中用于重构的药学上可接受的稀释剂是37mM的氯化钠。
序列表
<110> 武田疫苗股份有限公司(Takeda Vaccines, Inc.)
<120> 登革热疫苗单位剂量及其施用
<130> T08269WO1/MH
<140>
<141>
<150> EP18 192 701.3
<151> 2018-09-05
<150> EP18 192 776.5
<151> 2018-09-05
<150> EP18 192 793.0
<151> 2018-09-05
<150> EP18 192 800.3
<151> 2018-09-05
<150> EP18 192 711.2
<151> 2018-09-05
<150> EP18 192 717.9
<151> 2018-09-05
<150> EP18 192 814.4
<151> 2018-09-05
<150> EP19 154 334.7
<151> 2019-01-29
<150> EP19 161 184.7
<151> 2019-03-07
<150> EP18 192 787.2
<151> 2018-09-05
<150> US16/295,611
<151> 2019-03-07
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10723
<212> DNA
<213> 嵌合登革热血清型2/1 (MVS)(chimeric dengue seroytpe 2/1 (MVS))
<400> 1
agttgttagt ctacgtggac cgacaaagac agattctttg agggagctaa gctcaatgta 60
gttctaacag ttttttaatt agagagcaga tctctgatga ataaccaacg gaaaaaggcg 120
aaaaacacgc ctttcaatat gctgaaacgc gagagaaacc gcgtgtcgac tgtgcaacag 180
ctgacaaaga gattctcact tggaatgctg cagggacgag gaccattaaa actgttcatg 240
gccctggtgg cgttccttcg tttcctaaca atcccaccaa cagcagggat attgaagaga 300
tggggaacaa ttaaaaaatc aaaagctatt aatgttttga gagggttcag gaaagagatt 360
ggaaggatgc tgaacatctt gaataggaga cgcagatctg caggcatgat cattatgctg 420
attccaacag tgatggcgtt ccatttaacc acgcgtgggg gagagccgca tatgatagtt 480
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accctcattg cgatggattt gggagagttg tgtgaggaca cgatgaccta caaatgcccc 600
cggatcactg aggcggaacc agatgacgtt gactgttggt gcaatgccac ggacacatgg 660
gtgacctatg gaacgtgctc tcaaactggc gaacaccgac gagacaaacg ttccgtcgca 720
ttggccccac acgtggggct tggcctagaa acaagagccg aaacgtggat gtcctctgaa 780
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gtgatagccc tttttctagc acatgccata ggaacatcca tcacccagaa agggatcatt 900
ttcattttgc tgatgctggt aacaccatct atggccatgc gatgcgtggg aataggcaac 960
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accaccgatt cgagatgtcc aacacaagga gaagccacac tggtggaaga acaagacgcg 1200
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ggaaaaggta gtctaataac gtgtgccaag tttaagtgtg tgacaaaact agaaggaaag 1320
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caccaggtgg gaaatgagac tacagaacat ggaacaactg caaccataac acctcaagct 1440
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acagggctag attttaacga gatggtgttg ctgacaatga aagaaagatc atggcttgtc 1560
cacaaacaat ggttcctaga cttaccactg ccttggacct ctggggcttc aacatcccaa 1620
gagacttgga acagacaaga tttactggtc acatttaaga cagctcatgc aaagaagcag 1680
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gaaatccaaa cgtcaggaac gacaacaatt ttcgcaggac acctaaaatg cagactaaaa 1800
atggacaaac taactttaaa agggatgtca tatgtgatgt gcacaggctc attcaagtta 1860
gagaaagaag tggctgagac ccagcatgga actgttctgg tgcaggttaa atatgaagga 1920
acagacgcac catgcaagat tcccttttcg acccaagatg agaaaggagc aacccagaat 1980
gggagattaa taacagccaa ccccatagtc actgacaaag aaaaaccagt caatattgag 2040
gcagaaccac cctttggtga gagctacatc gtggtaggag caggtgaaaa agctttgaaa 2100
ctaagctggt tcaagaaagg aagcagcata gggaaaatgt ttgaagcaac tgcccgagga 2160
gcacgaagga tggccattct gggagacacc gcatgggact tcggttctat aggaggagtg 2220
ttcacgtcta tgggaaaact ggtacaccag gtttttggaa ctgcatatgg agttttgttt 2280
agcggagttt cttggaccat gaaaatagga atagggattc tgctgacatg gctaggatta 2340
aattcaagga acacgtccct ttcgatgatg tgcatcgcag ccggcattgt gacactgtat 2400
ttgggagtca tggtgcaggc cgatagtggt tgcgttgtga gctggaaaaa caaagaactg 2460
aaatgtggca gtgggatttt catcacagac aacgtgcaca catggacaga acaatacaag 2520
ttccaaccag aatccccttc aaaactagct tcagctatcc agaaagccca tgaagaggac 2580
atttgtggaa tccgctcagt aacaagactg gagaatctga tgtggaaaca aataacacca 2640
gaattgaatc acattctatc agaaaatgag gtgaagttaa ctattatgac aggagacatc 2700
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tcatggaaaa catggggcaa agcaaaaatg ctctctacag agtctcataa ccagaccttt 2820
ctcattgatg gccccgaaac agcagaatgc cccaacacaa atagagcttg gaattcgttg 2880
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aaacaggatg tattctgcga ctcaaaactc atgtcagcgg ccataaaaga caacagagcc 3000
gtccatgccg atatgggtta ttggatagaa agtgcactca atgacacatg gaagatagag 3060
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aatggagtgc tagaaagtga gatgataatt ccaaagaatc tcgctggacc agtgtctcaa 3180
cacaactata gaccaggcta ccatacacaa ataacaggac catggcatct aggtaagctt 3240
gagatggact ttgatttctg tgatggaaca acagtggtag tgactgagga ctgcggaaat 3300
agaggaccct ctttgagaac aaccactgcc tctggaaaac tcataacaga atggtgctgc 3360
cgatcttgca cattaccacc gctaagatac agaggtgagg atgggtgctg gtacgggatg 3420
gaaatcagac cattgaagga gaaagaagag aatttggtca actccttggt cacagctgga 3480
catgggcagg tcgacaactt ttcactagga gtcttgggaa tggcattgtt cctggaggaa 3540
atgcttagga cccgagtagg aacgaaacat gcaatactac tagttgcagt ttcttttgtg 3600
acattgatca cagggaacat gtcctttaga gacctgggaa gagtgatggt tatggtaggc 3660
gccactatga cggatgacat aggtatgggc gtgacttatc ttgccctact agcagccttc 3720
aaagtcagac caacttttgc agctggacta ctcttgagaa agctgacctc caaggaattg 3780
atgatgacta ctataggaat tgtactcctc tcccagagca ccctaccaga gaccattctt 3840
gagttgactg atgcgttagc cttaggcatg atggtcctca aaatggtgag aaatatggaa 3900
aagtatcaat tggcagtgac tatcatggct atcttgtgcg tcccaaacgc agtgatatta 3960
caaaacgcat ggaaagtgag ttgcacaata ttggcagtgg tgtccgtttc cccactgttc 4020
ttaacatcct cacagcaaaa aacagattgg ataccattag cattgacgat caaaggtctc 4080
aatccaacag ctatttttct aacaaccctc tcaagaacca gcaagaaaag gagctggcca 4140
ttaaatgagg ctatcatggc agtcgggatg gtgagcattt tagccagttc tctcctaaaa 4200
aatgatattc ccatgacagg accattagtg gctggagggc tcctcactgt gtgctacgtg 4260
ctcactggac gatcggccga tttggaactg gagagagcag ccgatgtcaa atgggaagac 4320
caggcagaga tatcaggaag cagtccaatc ctgtcaataa caatatcaga agatggtagc 4380
atgtcgataa aaaatgaaga ggaagatcaa acactgacca tactcattag aacaggattg 4440
ctggtgatct caggactttt tcctgtatca ataccaatca cggcagcagc atggtacctg 4500
tgggaagtga agaaacaacg ggccggagta ttgtgggatg ttccttcacc cccacccatg 4560
ggaaaggctg aactggaaga tggagcctat agaattaagc aaaaagggat tcttggatat 4620
tcccagatcg gagccggagt ttacaaagaa ggaacattcc atacaatgtg gcatgtcaca 4680
cgtggcgctg ttctaatgca taaaggaaag aggattgaac catcatgggc ggacgtcaag 4740
aaagacctaa tatcatatgg aggaggctgg aagttagaag gagaatggaa ggaaggagaa 4800
gaagtccagg tattggcact ggagcctgga aaaaatccaa gagccgtcca aacgaaacct 4860
ggtcttttca aaaccaacgc cggaacaata ggtgctgtat ctctggactt ttctcctgga 4920
acgtcaggat ctccaattat cgacaaaaaa ggaaaagttg tgggtcttta tggtaatggt 4980
gttgttacaa ggagtggagc atatgtgagt gctatagccc agactgaaaa aagcattgaa 5040
gacaacccag agatcgaaga tgacattttc cgaaagagaa gactgaccat catggacctc 5100
cacccaggag cgggaaagac gaagagatac cttccggcca tagtcagaga agctataaaa 5160
cggggtttga gaacattaat cttggccccc actagagttg tggcagctga aatggaggaa 5220
gcccttagag gacttccaat aagataccag accccagcca tcagagctgt gcacaccggg 5280
cgggagattg tggacctaat gtgtcatgcc acatttacca tgaggctgct atcaccagtt 5340
agagtgccaa actacaacct gattatcatg gacgaagccc atttcacaga cccagcaagt 5400
atagcagcta gaggatacat ctcaactcga gtggagatgg gtgaggcagc tgggattttt 5460
atgacagcca ctcccccggg aagcagagac ccatttcctc agagcaatgc accaatcata 5520
gatgaagaaa gagaaatccc tgaacgctcg tggaattccg gacatgaatg ggtcacggat 5580
tttaaaggga agactgtttg gttcgttcca agtataaaag caggaaatga tatagcagct 5640
tgcctgagga aaaatggaaa gaaagtgata caactcagta ggaagacctt tgattctgag 5700
tatgtcaaga ctagaaccaa tgattgggac ttcgtggtta caactgacat ttcagaaatg 5760
ggtgccaatt tcaaggctga gagggttata gaccccagac gctgcatgaa accagtcata 5820
ctaacagatg gtgaagagcg ggtgattctg gcaggaccta tgccagtgac ccactctagt 5880
gcagcacaaa gaagagggag aataggaaga aatccaaaaa atgagaatga ccagtacata 5940
tacatggggg aacctctgga aaatgatgaa gactgtgcac actggaaaga agctaaaatg 6000
ctcctagata acatcaacac gccagaagga atcattccta gcatgttcga accagagcgt 6060
gaaaaggtgg atgccattga tggcgaatac cgcttgagag gagaagcaag gaaaaccttt 6120
gtagacttaa tgagaagagg agacctacca gtctggttgg cctacagagt ggcagctgaa 6180
ggcatcaact acgcagacag aaggtggtgt tttgatggag tcaagaacaa ccaaatccta 6240
gaagaaaacg tggaagttga aatctggaca aaagaagggg aaaggaagaa attgaaaccc 6300
agatggttgg atgctaggat ctattctgac ccactggcgc taaaagaatt taaggaattt 6360
gcagccggaa gaaagtctct gaccctgaac ctaatcacag aaatgggtag gctcccaacc 6420
ttcatgactc agaaggcaag agacgcactg gacaacttag cagtgctgca cacggctgag 6480
gcaggtggaa gggcgtacaa ccatgctctc agtgaactgc cggagaccct ggagacattg 6540
cttttactga cacttctggc tacagtcacg ggagggatct ttttattctt gatgagcgca 6600
aggggcatag ggaagatgac cctgggaatg tgctgcataa tcacggctag catcctccta 6660
tggtacgcac aaatacagcc acactggata gcagcttcaa taatactgga gttttttctc 6720
atagttttgc ttattccaga acctgaaaaa cagagaacac cccaagacaa ccaactgacc 6780
tacgttgtca tagccatcct cacagtggtg gccgcaacca tggcaaacga gatgggtttc 6840
ctagaaaaaa cgaagaaaga tctcggattg ggaagcattg caacccagca acccgagagc 6900
aacatcctgg acatagatct acgtcctgca tcagcatgga cgctgtatgc cgtggccaca 6960
acatttgtta caccaatgtt gagacatagc attgaaaatt cctcagtgaa tgtgtcccta 7020
acagctatag ccaaccaagc cacagtgtta atgggtctcg ggaaaggatg gccattgtca 7080
aagatggaca tcggagttcc ccttctcgcc attggatgct actcacaagt caaccccata 7140
actctcacag cagctctttt cttattggta gcacattatg ccatcatagg gccaggactc 7200
caagcaaaag caaccagaga agctcagaaa agagcagcgg cgggcatcat gaaaaaccca 7260
actgtcgatg gaataacagt gattgaccta gatccaatac cttatgatcc gaagtttgaa 7320
aagcagttgg gacaagtaat gctcctagtc ctctgcgtga ctcaagtatt gatgatgagg 7380
actacatggg ctctgtgtga ggctttaacc ttagctaccg ggcccatctc cacattgtgg 7440
gaaggaaatc cagggaggtt ttggaacact accattgcgg tgtcaatggc taacattttt 7500
agagggagtt acttggccgg agctggactt ctcttttcta ttatgaagaa cacaaccaac 7560
acaagaaggg gaactggcaa cataggagag acgcttggag agaaatggaa aagccgattg 7620
aacgcattgg gaaaaagtga attccagatc tacaagaaaa gtggaatcca ggaagtggat 7680
agaaccttag caaaagaagg cattaaaaga ggagaaacgg accatcacgc tgtgtcgcga 7740
ggctcagcaa aactgagatg gttcgttgag agaaacatgg tcacaccaga agggaaagta 7800
gtggacctcg gttgtggcag aggaggctgg tcatactatt gtggaggact aaagaatgta 7860
agagaagtca aaggcctaac aaaaggagga ccaggacacg aagaacccat ccccatgtca 7920
acatatgggt ggaatctagt gcgtcttcaa agtggagttg acgttttctt catcccgcca 7980
gaaaagtgtg acacattatt gtgtgacata ggggagtcat caccaaatcc cacagtggaa 8040
gcaggacgaa cactcagagt ccttaactta gtagaaaatt ggttgaacaa caacactcaa 8100
ttttgcataa aggttctcaa cccatatatg ccctcagtca tagaaaaaat ggaagcacta 8160
caaaggaaat atggaggagc cttagtgagg aatccactct cacgaaactc cacacatgag 8220
atgtactggg tatccaatgc ttccgggaac atagtgtcat cagtgaacat gatttcaagg 8280
atgttgatca acagatttac aatgagatac aagaaagcca cttacgagcc ggatgttgac 8340
ctcggaagcg gaacccgtaa catcgggatt gaaagtgaga taccaaacct agatataatt 8400
gggaaaagaa tagaaaaaat aaagcaagag catgaaacat catggcacta tgaccaagac 8460
cacccataca aaacgtgggc ataccatggt agctatgaaa caaaacagac tggatcagca 8520
tcatccatgg tcaacggagt ggtcaggctg ctgacaaaac cttgggacgt cgtccccatg 8580
gtgacacaga tggcaatgac agacacgact ccatttggac aacagcgcgt ttttaaagag 8640
aaagtggaca cgagaaccca agaaccgaaa gaaggcacga agaaactaat gaaaataaca 8700
gcagagtggc tttggaaaga attagggaag aaaaagacac ccaggatgtg caccagagaa 8760
gaattcacaa gaaaggtgag aagcaatgca gccttggggg ccatattcac tgatgagaac 8820
aagtggaagt cggcacgtga ggctgttgaa gatagtaggt tttgggagct ggttgacaag 8880
gaaaggaatc tccatcttga aggaaagtgt gaaacatgtg tgtacaacat gatgggaaaa 8940
agagagaaga agctagggga attcggcaag gcaaaaggca gcagagccat atggtacatg 9000
tggcttggag cacgcttctt agagtttgaa gccctaggat tcttaaatga agatcactgg 9060
ttctccagag agaactccct gagtggagtg gaaggagaag ggctgcacaa gctaggttac 9120
attctaagag acgtgagcaa gaaagaggga ggagcaatgt atgccgatga caccgcagga 9180
tgggatacaa gaatcacact agaagaccta aaaaatgaag aaatggtaac aaaccacatg 9240
gaaggagaac acaagaaact agccgaggcc attttcaaac taacgtacca aaacaaggtg 9300
gtgcgtgtgc aaagaccaac accaagaggc acagtaatgg acatcatatc gagaagagac 9360
caaagaggta gtggacaagt tggcacctat ggactcaata ctttcaccaa tatggaagcc 9420
caactaatca gacagatgga gggagaagga gtctttaaaa gcattcagca cctaacaatc 9480
acagaagaaa tcgctgtgca aaactggtta gcaagagtgg ggcgcgaaag gttatcaaga 9540
atggccatca gtggagatga ttgtgttgtg aaacctttag atgacaggtt cgcaagcgct 9600
ttaacagctc taaatgacat gggaaagatt aggaaagaca tacaacaatg ggaaccttca 9660
agaggatgga atgattggac acaagtgccc ttctgttcac accatttcca tgagttaatc 9720
atgaaagacg gtcgcgtact cgttgttcca tgtagaaacc aagatgaact gattggcaga 9780
gcccgaatct cccaaggagc agggtggtct ttgcgggaga cggcctgttt ggggaagtct 9840
tacgcccaaa tgtggagctt gatgtacttc cacagacgcg acctcaggct ggcggcaaat 9900
gctatttgct cggcagtacc atcacattgg gttccaacaa gtcgaacaac ctggtccata 9960
catgctaaac atgaatggat gacaacggaa gacatgctga cagtctggaa cagggtgtgg 10020
attcaagaaa acccatggat ggaagacaaa actccagtgg aatcatggga ggaaatccca 10080
tacttgggga aaagagaaga ccaatggtgc ggctcattga ttgggttaac aagcagggcc 10140
acctgggcaa agaacatcca agcagcaata aatcaagtta gatcccttat aggcaatgaa 10200
gaatacacag attacatgcc atccatgaaa agattcagaa gagaagagga agaagcagga 10260
gttctgtggt agaaagcaaa actaacatga aacaaggcta gaagtcaggt cggattaagc 10320
catagtacgg aaaaaactat gctacctgtg agccccgtcc aaggacgtta aaagaagtca 10380
ggccatcata aatgccatag cttgagtaaa ctatgcagcc tgtagctcca cctgagaagg 10440
tgtaaaaaat ccgggaggcc acaaaccatg gaagctgtac gcatggcgta gtggactagc 10500
ggttagagga gacccctccc ttacaaatcg cagcaacaat gggggcccaa ggcgagatga 10560
agctgtagtc tcgctggaag gactagaggt tagaggagac ccccccgaaa caaaaaacag 10620
catattgacg ctgggaaaga ccagagatcc tgctgtctcc tcagcatcat tccaggcaca 10680
gaacgccaga aaatggaatg gtgctgttga atcaacaggt tct 10723
<210> 2
<211> 3391
<212> PRT
<213> 嵌合登革热血清型2/1 (MVS)(chimeric dengue seroytpe 2/1 (MVS))
<400> 2
Met Asn Asn Gln Arg Lys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Phe Asn Met Leu
1 5 10 15
Lys Arg Glu Arg Asn Arg Val Ser Thr Val Gln Gln Leu Thr Lys Arg
20 25 30
Phe Ser Leu Gly Met Leu Gln Gly Arg Gly Pro Leu Lys Leu Phe Met
35 40 45
Ala Leu Val Ala Phe Leu Arg Phe Leu Thr Ile Pro Pro Thr Ala Gly
50 55 60
Ile Leu Lys Arg Trp Gly Thr Ile Lys Lys Ser Lys Ala Ile Asn Val
65 70 75 80
Leu Arg Gly Phe Arg Lys Glu Ile Gly Arg Met Leu Asn Ile Leu Asn
85 90 95
Arg Arg Arg Arg Ser Ala Gly Met Ile Ile Met Leu Ile Pro Thr Val
100 105 110
Met Ala Phe His Leu Thr Thr Arg Gly Gly Glu Pro His Met Ile Val
115 120 125
Ser Lys Gln Glu Arg Gly Lys Ser Leu Leu Phe Lys Thr Ser Ala Gly
130 135 140
Val Asn Met Cys Thr Leu Ile Ala Met Asp Leu Gly Glu Leu Cys Glu
145 150 155 160
Asp Thr Met Thr Tyr Lys Cys Pro Arg Ile Thr Glu Ala Glu Pro Asp
165 170 175
Asp Val Asp Cys Trp Cys Asn Ala Thr Asp Thr Trp Val Thr Tyr Gly
180 185 190
Thr Cys Ser Gln Thr Gly Glu His Arg Arg Asp Lys Arg Ser Val Ala
195 200 205
Leu Ala Pro His Val Gly Leu Gly Leu Glu Thr Arg Ala Glu Thr Trp
210 215 220
Met Ser Ser Glu Gly Ala Trp Lys Gln Ile Gln Lys Val Glu Thr Trp
225 230 235 240
Ala Leu Arg His Pro Gly Phe Thr Val Ile Ala Leu Phe Leu Ala His
245 250 255
Ala Ile Gly Thr Ser Ile Thr Gln Lys Gly Ile Ile Phe Ile Leu Leu
260 265 270
Met Leu Val Thr Pro Ser Met Ala Met Arg Cys Val Gly Ile Gly Asn
275 280 285
Arg Asp Phe Val Glu Gly Leu Ser Gly Ala Thr Trp Val Asp Val Val
290 295 300
Leu Glu His Gly Ser Cys Val Thr Thr Met Ala Lys Asn Lys Pro Thr
305 310 315 320
Leu Asp Ile Glu Leu Leu Lys Thr Glu Val Thr Asn Pro Ala Val Leu
325 330 335
Arg Lys Leu Cys Ile Glu Ala Lys Ile Ser Asn Thr Thr Thr Asp Ser
340 345 350
Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Ala Thr Leu Val Glu Glu Gln Asp Ala
355 360 365
Asn Phe Val Cys Arg Arg Thr Phe Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly
370 375 380
Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Ser Leu Ile Thr Cys Ala Lys Phe Lys
385 390 395 400
Cys Val Thr Lys Leu Glu Gly Lys Ile Val Gln Tyr Glu Asn Leu Lys
405 410 415
Tyr Ser Val Ile Val Thr Val His Thr Gly Asp Gln His Gln Val Gly
420 425 430
Asn Glu Thr Thr Glu His Gly Thr Thr Ala Thr Ile Thr Pro Gln Ala
435 440 445
Pro Thr Ser Glu Ile Gln Leu Thr Asp Tyr Gly Thr Leu Thr Leu Asp
450 455 460
Cys Ser Pro Arg Thr Gly Leu Asp Phe Asn Glu Met Val Leu Leu Thr
465 470 475 480
Met Lys Glu Arg Ser Trp Leu Val His Lys Gln Trp Phe Leu Asp Leu
485 490 495
Pro Leu Pro Trp Thr Ser Gly Ala Ser Thr Ser Gln Glu Thr Trp Asn
500 505 510
Arg Gln Asp Leu Leu Val Thr Phe Lys Thr Ala His Ala Lys Lys Gln
515 520 525
Glu Val Val Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Met His Thr Ala Leu
530 535 540
Thr Gly Ala Thr Glu Ile Gln Thr Ser Gly Thr Thr Thr Ile Phe Ala
545 550 555 560
Gly His Leu Lys Cys Arg Leu Lys Met Asp Lys Leu Thr Leu Lys Gly
565 570 575
Met Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Ser Phe Lys Leu Glu Lys Glu Val
580 585 590
Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu Val Gln Val Lys Tyr Glu Gly
595 600 605
Thr Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr Gln Asp Glu Lys Gly
610 615 620
Ala Thr Gln Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Ile Val Thr Asp
625 630 635 640
Lys Glu Lys Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro Pro Phe Gly Glu Ser
645 650 655
Tyr Ile Val Val Gly Ala Gly Glu Lys Ala Leu Lys Leu Ser Trp Phe
660 665 670
Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys Met Phe Glu Ala Thr Ala Arg Gly
675 680 685
Ala Arg Arg Met Ala Ile Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser
690 695 700
Ile Gly Gly Val Phe Thr Ser Met Gly Lys Leu Val His Gln Val Phe
705 710 715 720
Gly Thr Ala Tyr Gly Val Leu Phe Ser Gly Val Ser Trp Thr Met Lys
725 730 735
Ile Gly Ile Gly Ile Leu Leu Thr Trp Leu Gly Leu Asn Ser Arg Asn
740 745 750
Thr Ser Leu Ser Met Met Cys Ile Ala Ala Gly Ile Val Thr Leu Tyr
755 760 765
Leu Gly Val Met Val Gln Ala Asp Ser Gly Cys Val Val Ser Trp Lys
770 775 780
Asn Lys Glu Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ile Phe Ile Thr Asp Asn Val
785 790 795 800
His Thr Trp Thr Glu Gln Tyr Lys Phe Gln Pro Glu Ser Pro Ser Lys
805 810 815
Leu Ala Ser Ala Ile Gln Lys Ala His Glu Glu Asp Ile Cys Gly Ile
820 825 830
Arg Ser Val Thr Arg Leu Glu Asn Leu Met Trp Lys Gln Ile Thr Pro
835 840 845
Glu Leu Asn His Ile Leu Ser Glu Asn Glu Val Lys Leu Thr Ile Met
850 855 860
Thr Gly Asp Ile Lys Gly Ile Met Gln Ala Gly Lys Arg Ser Leu Arg
865 870 875 880
Pro Gln Pro Thr Glu Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala
885 890 895
Lys Met Leu Ser Thr Glu Ser His Asn Gln Thr Phe Leu Ile Asp Gly
900 905 910
Pro Glu Thr Ala Glu Cys Pro Asn Thr Asn Arg Ala Trp Asn Ser Leu
915 920 925
Glu Val Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Val Phe Thr Thr Asn Ile Trp Leu
930 935 940
Lys Leu Lys Glu Lys Gln Asp Val Phe Cys Asp Ser Lys Leu Met Ser
945 950 955 960
Ala Ala Ile Lys Asp Asn Arg Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp
965 970 975
Ile Glu Ser Ala Leu Asn Asp Thr Trp Lys Ile Glu Lys Ala Ser Phe
980 985 990
Ile Glu Val Lys Asn Cys His Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Ser
995 1000 1005
Asn Gly Val Leu Glu Ser Glu Met Ile Ile Pro Lys Asn Leu Ala
1010 1015 1020
Gly Pro Val Ser Gln His Asn Tyr Arg Pro Gly Tyr His Thr Gln
1025 1030 1035
Ile Thr Gly Pro Trp His Leu Gly Lys Leu Glu Met Asp Phe Asp
1040 1045 1050
Phe Cys Asp Gly Thr Thr Val Val Val Thr Glu Asp Cys Gly Asn
1055 1060 1065
Arg Gly Pro Ser Leu Arg Thr Thr Thr Ala Ser Gly Lys Leu Ile
1070 1075 1080
Thr Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Leu Pro Pro Leu Arg Tyr
1085 1090 1095
Arg Gly Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Leu
1100 1105 1110
Lys Glu Lys Glu Glu Asn Leu Val Asn Ser Leu Val Thr Ala Gly
1115 1120 1125
His Gly Gln Val Asp Asn Phe Ser Leu Gly Val Leu Gly Met Ala
1130 1135 1140
Leu Phe Leu Glu Glu Met Leu Arg Thr Arg Val Gly Thr Lys His
1145 1150 1155
Ala Ile Leu Leu Val Ala Val Ser Phe Val Thr Leu Ile Thr Gly
1160 1165 1170
Asn Met Ser Phe Arg Asp Leu Gly Arg Val Met Val Met Val Gly
1175 1180 1185
Ala Thr Met Thr Asp Asp Ile Gly Met Gly Val Thr Tyr Leu Ala
1190 1195 1200
Leu Leu Ala Ala Phe Lys Val Arg Pro Thr Phe Ala Ala Gly Leu
1205 1210 1215
Leu Leu Arg Lys Leu Thr Ser Lys Glu Leu Met Met Thr Thr Ile
1220 1225 1230
Gly Ile Val Leu Leu Ser Gln Ser Thr Leu Pro Glu Thr Ile Leu
1235 1240 1245
Glu Leu Thr Asp Ala Leu Ala Leu Gly Met Met Val Leu Lys Met
1250 1255 1260
Val Arg Asn Met Glu Lys Tyr Gln Leu Ala Val Thr Ile Met Ala
1265 1270 1275
Ile Leu Cys Val Pro Asn Ala Val Ile Leu Gln Asn Ala Trp Lys
1280 1285 1290
Val Ser Cys Thr Ile Leu Ala Val Val Ser Val Ser Pro Leu Phe
1295 1300 1305
Leu Thr Ser Ser Gln Gln Lys Thr Asp Trp Ile Pro Leu Ala Leu
1310 1315 1320
Thr Ile Lys Gly Leu Asn Pro Thr Ala Ile Phe Leu Thr Thr Leu
1325 1330 1335
Ser Arg Thr Ser Lys Lys Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Ala Ile
1340 1345 1350
Met Ala Val Gly Met Val Ser Ile Leu Ala Ser Ser Leu Leu Lys
1355 1360 1365
Asn Asp Ile Pro Met Thr Gly Pro Leu Val Ala Gly Gly Leu Leu
1370 1375 1380
Thr Val Cys Tyr Val Leu Thr Gly Arg Ser Ala Asp Leu Glu Leu
1385 1390 1395
Glu Arg Ala Ala Asp Val Lys Trp Glu Asp Gln Ala Glu Ile Ser
1400 1405 1410
Gly Ser Ser Pro Ile Leu Ser Ile Thr Ile Ser Glu Asp Gly Ser
1415 1420 1425
Met Ser Ile Lys Asn Glu Glu Glu Asp Gln Thr Leu Thr Ile Leu
1430 1435 1440
Ile Arg Thr Gly Leu Leu Val Ile Ser Gly Leu Phe Pro Val Ser
1445 1450 1455
Ile Pro Ile Thr Ala Ala Ala Trp Tyr Leu Trp Glu Val Lys Lys
1460 1465 1470
Gln Arg Ala Gly Val Leu Trp Asp Val Pro Ser Pro Pro Pro Met
1475 1480 1485
Gly Lys Ala Glu Leu Glu Asp Gly Ala Tyr Arg Ile Lys Gln Lys
1490 1495 1500
Gly Ile Leu Gly Tyr Ser Gln Ile Gly Ala Gly Val Tyr Lys Glu
1505 1510 1515
Gly Thr Phe His Thr Met Trp His Val Thr Arg Gly Ala Val Leu
1520 1525 1530
Met His Lys Gly Lys Arg Ile Glu Pro Ser Trp Ala Asp Val Lys
1535 1540 1545
Lys Asp Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Lys Leu Glu Gly Glu
1550 1555 1560
Trp Lys Glu Gly Glu Glu Val Gln Val Leu Ala Leu Glu Pro Gly
1565 1570 1575
Lys Asn Pro Arg Ala Val Gln Thr Lys Pro Gly Leu Phe Lys Thr
1580 1585 1590
Asn Ala Gly Thr Ile Gly Ala Val Ser Leu Asp Phe Ser Pro Gly
1595 1600 1605
Thr Ser Gly Ser Pro Ile Ile Asp Lys Lys Gly Lys Val Val Gly
1610 1615 1620
Leu Tyr Gly Asn Gly Val Val Thr Arg Ser Gly Ala Tyr Val Ser
1625 1630 1635
Ala Ile Ala Gln Thr Glu Lys Ser Ile Glu Asp Asn Pro Glu Ile
1640 1645 1650
Glu Asp Asp Ile Phe Arg Lys Arg Arg Leu Thr Ile Met Asp Leu
1655 1660 1665
His Pro Gly Ala Gly Lys Thr Lys Arg Tyr Leu Pro Ala Ile Val
1670 1675 1680
Arg Glu Ala Ile Lys Arg Gly Leu Arg Thr Leu Ile Leu Ala Pro
1685 1690 1695
Thr Arg Val Val Ala Ala Glu Met Glu Glu Ala Leu Arg Gly Leu
1700 1705 1710
Pro Ile Arg Tyr Gln Thr Pro Ala Ile Arg Ala Val His Thr Gly
1715 1720 1725
Arg Glu Ile Val Asp Leu Met Cys His Ala Thr Phe Thr Met Arg
1730 1735 1740
Leu Leu Ser Pro Val Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Ile Met
1745 1750 1755
Asp Glu Ala His Phe Thr Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly
1760 1765 1770
Tyr Ile Ser Thr Arg Val Glu Met Gly Glu Ala Ala Gly Ile Phe
1775 1780 1785
Met Thr Ala Thr Pro Pro Gly Ser Arg Asp Pro Phe Pro Gln Ser
1790 1795 1800
Asn Ala Pro Ile Ile Asp Glu Glu Arg Glu Ile Pro Glu Arg Ser
1805 1810 1815
Trp Asn Ser Gly His Glu Trp Val Thr Asp Phe Lys Gly Lys Thr
1820 1825 1830
Val Trp Phe Val Pro Ser Ile Lys Ala Gly Asn Asp Ile Ala Ala
1835 1840 1845
Cys Leu Arg Lys Asn Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys
1850 1855 1860
Thr Phe Asp Ser Glu Tyr Val Lys Thr Arg Thr Asn Asp Trp Asp
1865 1870 1875
Phe Val Val Thr Thr Asp Ile Ser Glu Met Gly Ala Asn Phe Lys
1880 1885 1890
Ala Glu Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Met Lys Pro Val Ile
1895 1900 1905
Leu Thr Asp Gly Glu Glu Arg Val Ile Leu Ala Gly Pro Met Pro
1910 1915 1920
Val Thr His Ser Ser Ala Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg
1925 1930 1935
Asn Pro Lys Asn Glu Asn Asp Gln Tyr Ile Tyr Met Gly Glu Pro
1940 1945 1950
Leu Glu Asn Asp Glu Asp Cys Ala His Trp Lys Glu Ala Lys Met
1955 1960 1965
Leu Leu Asp Asn Ile Asn Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Ser Met
1970 1975 1980
Phe Glu Pro Glu Arg Glu Lys Val Asp Ala Ile Asp Gly Glu Tyr
1985 1990 1995
Arg Leu Arg Gly Glu Ala Arg Lys Thr Phe Val Asp Leu Met Arg
2000 2005 2010
Arg Gly Asp Leu Pro Val Trp Leu Ala Tyr Arg Val Ala Ala Glu
2015 2020 2025
Gly Ile Asn Tyr Ala Asp Arg Arg Trp Cys Phe Asp Gly Val Lys
2030 2035 2040
Asn Asn Gln Ile Leu Glu Glu Asn Val Glu Val Glu Ile Trp Thr
2045 2050 2055
Lys Glu Gly Glu Arg Lys Lys Leu Lys Pro Arg Trp Leu Asp Ala
2060 2065 2070
Arg Ile Tyr Ser Asp Pro Leu Ala Leu Lys Glu Phe Lys Glu Phe
2075 2080 2085
Ala Ala Gly Arg Lys Ser Leu Thr Leu Asn Leu Ile Thr Glu Met
2090 2095 2100
Gly Arg Leu Pro Thr Phe Met Thr Gln Lys Ala Arg Asp Ala Leu
2105 2110 2115
Asp Asn Leu Ala Val Leu His Thr Ala Glu Ala Gly Gly Arg Ala
2120 2125 2130
Tyr Asn His Ala Leu Ser Glu Leu Pro Glu Thr Leu Glu Thr Leu
2135 2140 2145
Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ala Thr Val Thr Gly Gly Ile Phe Leu
2150 2155 2160
Phe Leu Met Ser Ala Arg Gly Ile Gly Lys Met Thr Leu Gly Met
2165 2170 2175
Cys Cys Ile Ile Thr Ala Ser Ile Leu Leu Trp Tyr Ala Gln Ile
2180 2185 2190
Gln Pro His Trp Ile Ala Ala Ser Ile Ile Leu Glu Phe Phe Leu
2195 2200 2205
Ile Val Leu Leu Ile Pro Glu Pro Glu Lys Gln Arg Thr Pro Gln
2210 2215 2220
Asp Asn Gln Leu Thr Tyr Val Val Ile Ala Ile Leu Thr Val Val
2225 2230 2235
Ala Ala Thr Met Ala Asn Glu Met Gly Phe Leu Glu Lys Thr Lys
2240 2245 2250
Lys Asp Leu Gly Leu Gly Ser Ile Ala Thr Gln Gln Pro Glu Ser
2255 2260 2265
Asn Ile Leu Asp Ile Asp Leu Arg Pro Ala Ser Ala Trp Thr Leu
2270 2275 2280
Tyr Ala Val Ala Thr Thr Phe Val Thr Pro Met Leu Arg His Ser
2285 2290 2295
Ile Glu Asn Ser Ser Val Asn Val Ser Leu Thr Ala Ile Ala Asn
2300 2305 2310
Gln Ala Thr Val Leu Met Gly Leu Gly Lys Gly Trp Pro Leu Ser
2315 2320 2325
Lys Met Asp Ile Gly Val Pro Leu Leu Ala Ile Gly Cys Tyr Ser
2330 2335 2340
Gln Val Asn Pro Ile Thr Leu Thr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Val
2345 2350 2355
Ala His Tyr Ala Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr
2360 2365 2370
Arg Glu Ala Gln Lys Arg Ala Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Pro
2375 2380 2385
Thr Val Asp Gly Ile Thr Val Ile Asp Leu Asp Pro Ile Pro Tyr
2390 2395 2400
Asp Pro Lys Phe Glu Lys Gln Leu Gly Gln Val Met Leu Leu Val
2405 2410 2415
Leu Cys Val Thr Gln Val Leu Met Met Arg Thr Thr Trp Ala Leu
2420 2425 2430
Cys Glu Ala Leu Thr Leu Ala Thr Gly Pro Ile Ser Thr Leu Trp
2435 2440 2445
Glu Gly Asn Pro Gly Arg Phe Trp Asn Thr Thr Ile Ala Val Ser
2450 2455 2460
Met Ala Asn Ile Phe Arg Gly Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Gly Leu
2465 2470 2475
Leu Phe Ser Ile Met Lys Asn Thr Thr Asn Thr Arg Arg Gly Thr
2480 2485 2490
Gly Asn Ile Gly Glu Thr Leu Gly Glu Lys Trp Lys Ser Arg Leu
2495 2500 2505
Asn Ala Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Lys Ser Gly
2510 2515 2520
Ile Gln Glu Val Asp Arg Thr Leu Ala Lys Glu Gly Ile Lys Arg
2525 2530 2535
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2540 2545 2550
Arg Trp Phe Val Glu Arg Asn Met Val Thr Pro Glu Gly Lys Val
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2570 2575 2580
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2585 2590 2595
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2600 2605 2610
Leu Val Arg Leu Gln Ser Gly Val Asp Val Phe Phe Ile Pro Pro
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2630 2635 2640
Asn Pro Thr Val Glu Ala Gly Arg Thr Leu Arg Val Leu Asn Leu
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Val Glu Asn Trp Leu Asn Asn Asn Thr Gln Phe Cys Ile Lys Val
2660 2665 2670
Leu Asn Pro Tyr Met Pro Ser Val Ile Glu Lys Met Glu Ala Leu
2675 2680 2685
Gln Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Leu Val Arg Asn Pro Leu Ser Arg
2690 2695 2700
Asn Ser Thr His Glu Met Tyr Trp Val Ser Asn Ala Ser Gly Asn
2705 2710 2715
Ile Val Ser Ser Val Asn Met Ile Ser Arg Met Leu Ile Asn Arg
2720 2725 2730
Phe Thr Met Arg Tyr Lys Lys Ala Thr Tyr Glu Pro Asp Val Asp
2735 2740 2745
Leu Gly Ser Gly Thr Arg Asn Ile Gly Ile Glu Ser Glu Ile Pro
2750 2755 2760
Asn Leu Asp Ile Ile Gly Lys Arg Ile Glu Lys Ile Lys Gln Glu
2765 2770 2775
His Glu Thr Ser Trp His Tyr Asp Gln Asp His Pro Tyr Lys Thr
2780 2785 2790
Trp Ala Tyr His Gly Ser Tyr Glu Thr Lys Gln Thr Gly Ser Ala
2795 2800 2805
Ser Ser Met Val Asn Gly Val Val Arg Leu Leu Thr Lys Pro Trp
2810 2815 2820
Asp Val Val Pro Met Val Thr Gln Met Ala Met Thr Asp Thr Thr
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Pro Phe Gly Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg
2840 2845 2850
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Ala Glu Trp Leu Trp Lys Glu Leu Gly Lys Lys Lys Thr Pro Arg
2870 2875 2880
Met Cys Thr Arg Glu Glu Phe Thr Arg Lys Val Arg Ser Asn Ala
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Ala Leu Gly Ala Ile Phe Thr Asp Glu Asn Lys Trp Lys Ser Ala
2900 2905 2910
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Glu Arg Asn Leu His Leu Glu Gly Lys Cys Glu Thr Cys Val Tyr
2930 2935 2940
Asn Met Met Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Gly Glu Phe Gly Lys
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Ala Lys Gly Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg
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Phe Leu Glu Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp
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Phe Ser Arg Glu Asn Ser Leu Ser Gly Val Glu Gly Glu Gly Leu
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His Lys Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Val Ser Lys Lys Glu Gly
3005 3010 3015
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Gln Val Gly Thr Tyr Gly Leu Asn Thr Phe Thr Asn Met Glu Ala
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Val Pro Ser His Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile
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His Ala Lys His Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Thr Val
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Leu Ile Gly Asn Glu Glu Tyr Thr Asp Tyr Met Pro Ser Met Lys
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Arg Phe Arg Arg Glu Glu Glu Glu Ala Gly Val Leu Trp
3380 3385 3390
<210> 3
<211> 10723
<212> DNA
<213> 登革热血清型2 (MVS)(dengue serotype 2 (MVS))
<400> 3
agttgttagt ctacgtggac cgacaaagac agattctttg agggagctaa gctcaatgta 60
gttctaacag ttttttaatt agagagcaga tctctgatga ataaccaacg gaaaaaggcg 120
aaaaacacgc ctttcaatat gctgaaacgc gagagaaacc gcgtgtcgac tgtgcaacag 180
ctgacaaaga gattctcact tggaatgctg cagggacgag gaccattaaa actgttcatg 240
gccctggtgg cgttccttcg tttcctaaca atcccaccaa cagcagggat attgaagaga 300
tggggaacaa ttaaaaaatc aaaagctatt aatgttttga gagggttcag gaaagagatt 360
ggaaggatgc tgaacatctt gaataggaga cgcagatctg caggcatgat cattatgctg 420
attccaacag tgatggcgtt ccatttaacc acacgtaacg gagaaccaca catgatcgtc 480
agcagacaag agaaagggaa aagtcttctg tttaaaacag aggttggcgt gaacatgtgt 540
accctcatgg ccatggacct tggtgaattg tgtgaagaca caatcacgta cgagtgtccc 600
cttctcaggc agaatgagcc agaagacata gactgttggt gcaactctac gtccacgtgg 660
gtaacttatg ggacgtgtac caccatggga gaacatagaa gagaaaaaag atcagtggca 720
ctcgttccac atgtgggaat gggactggag acacgaactg aaacatggat gtcatcagaa 780
ggggcctgga aacatgtcca gagaattgaa acttggatct tgagacatcc aggcttcacc 840
atgatggcag caatcctggc atacaccata ggaacgacac atttccaaag agccctgatc 900
ttcatcttac tgacagctgt cactccttca atgacaatgc gttgcatagg aatgtcaaat 960
agagactttg tggaaggggt ttcaggagga agctgggttg acatagtctt agaacatgga 1020
agctgtgtga cgacgatggc aaaaaacaaa ccaacattgg attttgaact gataaaaaca 1080
gaagccaaac agcctgccac cctaaggaag tactgtatag aggcaaagct aaccaacaca 1140
acaacagaat ctcgctgccc aacacaaggg gaacccagcc taaatgaaga gcaggacaaa 1200
aggttcgtct gcaaacactc catggtagac agaggatggg gaaatggatg tggactattt 1260
ggaaagggag gcattgtgac ctgtgctatg ttcagatgca aaaagaacat ggaaggaaaa 1320
gttgtgcaac cagaaaactt ggaatacacc attgtgataa cacctcactc aggggaagag 1380
catgcagtcg gaaatgacac aggaaaacat ggcaaggaaa tcaaaataac accacagagt 1440
tccatcacag aagcagaatt gacaggttat ggcactgtca caatggagtg ctctccaaga 1500
acgggcctcg acttcaatga gatggtgttg ctgcagatgg aaaataaagc ttggctggtg 1560
cacaggcaat ggttcctaga cctgccgtta ccatggttgc ccggagcgga cacacaaggg 1620
tcaaattgga tacagaaaga gacattggtc actttcaaaa atccccatgc gaagaaacag 1680
gatgttgttg ttttaggatc ccaagaaggg gccatgcaca cagcacttac aggggccaca 1740
gaaatccaaa tgtcatcagg aaacttactc ttcacaggac atctcaagtg caggctgaga 1800
atggacaagc tacagctcaa aggaatgtca tactctatgt gcacaggaaa gtttaaagtt 1860
gtgaaggaaa tagcagaaac acaacatgga acaatagtta tcagagtgca atatgaaggg 1920
gacggctctc catgcaagat cccttttgag ataatggatt tggaaaaaag acatgtctta 1980
ggtcgcctga ttacagtcaa cccaattgtg acagaaaaag atagcccagt caacatagaa 2040
gcagaacctc catttggaga cagctacatc atcataggag tagagccggg acaactgaag 2100
ctcaactggt ttaagaaagg aagttctatc ggccaaatgt ttgagacaac aatgaggggg 2160
gcgaagagaa tggccatttt aggtgacaca gcctgggatt ttggatcctt gggaggagtg 2220
tttacatcta taggaaaggc tctccaccaa gtctttggag caatctatgg agctgccttc 2280
agtggggttt catggactat gaaaatcctc ataggagtca ttatcacatg gataggaatg 2340
aattcacgca gcacctcact gtctgtgaca ctagtattgg tgggaattgt gacactgtat 2400
ttgggagtca tggtgcaggc cgatagtggt tgcgttgtga gctggaaaaa caaagaactg 2460
aaatgtggca gtgggatttt catcacagac aacgtgcaca catggacaga acaatacaag 2520
ttccaaccag aatccccttc aaaactagct tcagctatcc agaaagccca tgaagaggac 2580
atttgtggaa tccgctcagt aacaagactg gagaatctga tgtggaaaca aataacacca 2640
gaattgaatc acattctatc agaaaatgag gtgaagttaa ctattatgac aggagacatc 2700
aaaggaatca tgcaggcagg aaaacgatct ctgcggcctc agcccactga gctgaagtat 2760
tcatggaaaa catggggcaa agcaaaaatg ctctctacag agtctcataa ccagaccttt 2820
ctcattgatg gccccgaaac agcagaatgc cccaacacaa atagagcttg gaattcgttg 2880
gaagttgaag actatggctt tggagtattc accaccaata tatggctaaa attgaaagaa 2940
aaacaggatg tattctgcga ctcaaaactc atgtcagcgg ccataaaaga caacagagcc 3000
gtccatgccg atatgggtta ttggatagaa agtgcactca atgacacatg gaagatagag 3060
aaagcctctt tcattgaagt taaaaactgc cactggccaa aatcacacac cctctggagc 3120
aatggagtgc tagaaagtga gatgataatt ccaaagaatc tcgctggacc agtgtctcaa 3180
cacaactata gaccaggcta ccatacacaa ataacaggac catggcatct aggtaagctt 3240
gagatggact ttgatttctg tgatggaaca acagtggtag tgactgagga ctgcggaaat 3300
agaggaccct ctttgagaac aaccactgcc tctggaaaac tcataacaga atggtgctgc 3360
cgatcttgca cattaccacc gctaagatac agaggtgagg atgggtgctg gtacgggatg 3420
gaaatcagac cattgaagga gaaagaagag aatttggtca actccttggt cacagctgga 3480
catgggcagg tcgacaactt ttcactagga gtcttgggaa tggcattgtt cctggaggaa 3540
atgcttagga cccgagtagg aacgaaacat gcaatactac tagttgcagt ttcttttgtg 3600
acattgatca cagggaacat gtcctttaga gacctgggaa gagtgatggt tatggtaggc 3660
gccactatga cggatgacat aggtatgggc gtgacttatc ttgccctact agcagccttc 3720
aaagtcagac caacttttgc agctggacta ctcttgagaa agctgacctc caaggaattg 3780
atgatgacta ctataggaat tgtactcctc tcccagagca ccataccaga gaccattctt 3840
gagttgactg atgcgttagc cttaggcatg atggtcctca aaatggtgag aaatatggaa 3900
aagtatcaat tggcagtgac tatcatggct atcttgtgcg tcccaaacgc agtgatatta 3960
caaaacgcat ggaaagtgag ttgcacaata ttggcagtgg tgtccgtttc cccactgttc 4020
ttaacatcct cacagcaaaa aacagattgg ataccattag cattgacgat caaaggtctc 4080
aatccaacag ctatttttct aacaaccctc tcaagaacca gcaagaaaag gagctggcca 4140
ttaaatgagg ctatcatggc agtcgggatg gtgagcattt tagccagttc tctcctaaaa 4200
aatgatattc ccatgacagg accattagtg gctggagggc tcctcactgt gtgctacgtg 4260
ctcactggac gatcggccga tttggaactg gagagagcag ccgatgtcaa atgggaagac 4320
caggcagaga tatcaggaag cagtccaatc ctgtcaataa caatatcaga agatggtagc 4380
atgtcgataa aaaatgaaga ggaagaacaa acactgacca tactcattag aacaggattg 4440
ctggtgatct caggactttt tcctgtatca ataccaatca cggcagcagc atggtacctg 4500
tgggaagtga agaaacaacg ggccggagta ttgtgggatg ttccttcacc cccacccatg 4560
ggaaaggctg aactggaaga tggagcctat agaattaagc aaaaagggat tcttggatat 4620
tcccagatcg gagccggagt ttacaaagaa ggaacattcc atacaatgtg gcatgtcaca 4680
cgtggcgctg ttctaatgca taaaggaaag aggattgaac catcatgggc ggacgtcaag 4740
aaagacctaa tatcatatgg aggaggctgg aagttagaag gagaatggaa ggaaggagaa 4800
gaagtccagg tattggcact ggagcctgga aaaaatccaa gagccgtcca aacgaaacct 4860
ggtcttttca aaaccaacgc cggaacaata ggtgctgtat ctctggactt ttctcctgga 4920
acgtcaggat ctccaattat cgacaaaaaa ggaaaagttg tgggtcttta tggtaatggt 4980
gttgttacaa ggagtggagc atatgtgagt gctatagccc agactgaaaa aagcattgaa 5040
gacaacccag agatcgaaga tgacattttc cgaaagagaa gactgaccat catggacctc 5100
cacccaggag cgggaaagac gaagagatac cttccggcca tagtcagaga agctataaaa 5160
cggggtttga gaacattaat cttggccccc actagagttg tggcagctga aatggaggaa 5220
gcccttagag gacttccaat aagataccag accccagcca tcagagctgt gcacaccggg 5280
cgggagattg tggacctaat gtgtcatgcc acatttacca tgaggctgct atcaccagtt 5340
agagtgccaa actacaacct gattatcatg gacgaagccc atttcacaga cccagcaagt 5400
atagcagcta gaggatacat ctcaactcga gtggagatgg gtgaggcagc tgggattttt 5460
atgacagcca ctcccccggg aagcagagac ccatttcctc agagcaatgc accaatcata 5520
gatgaagaaa gagaaatccc tgaacgctcg tggaattccg gacatgaatg ggtcacggat 5580
tttaaaggga agactgtttg gttcgttcca agtataaaag caggaaatga tatagcagct 5640
tgcctgagga aaaatggaaa gaaagtgata caactcagta ggaagacctt tgattctgag 5700
tatgtcaaga ctagaaccaa tgattgggac ttcgtggtta caactgacat ttcagaaatg 5760
ggtgccaatt tcaaggctga gagggttata gaccccagac gctgcatgaa accagtcata 5820
ctaacagatg gtgaagagcg ggtgattctg gcaggaccta tgccagtgac ccactctagt 5880
gcagcacaaa gaagagggag aataggaaga aatccaaaaa atgagaatga ccagtacata 5940
tacatggggg aacctctgga aaatgatgaa gactgtgcac actggaaaga agctaaaatg 6000
ctcctagata acatcaacac gccagaagga atcattccta gcatgttcga accagagcgt 6060
gaaaaggtgg atgccattga tggcgaatac cgcttgagag gagaagcaag gaaaaccttt 6120
gtagacttaa tgagaagagg agacctacca gtctggttgg cctacagagt ggcagctgaa 6180
ggcatcaact acgcagacag aaggtggtgt tttgatggag tcaagaacaa ccaaatccta 6240
gaagaaaacg tggaagttga aatctggaca aaagaagggg aaaggaagaa attgaaaccc 6300
agatggttgg atgctaggat ctattctgac ccactggcgc taaaagaatt taaggaattt 6360
gcagccggaa gaaagtctct gaccctgaac ctaatcacag aaatgggtag gctcccaacc 6420
ttcatgactc agaaggcaag agacgcactg gacaacttag cagtgctgca cacggctgag 6480
gcaggtggaa gggcgtacaa ccatgctctc agtgaactgc cggagaccct ggagacattg 6540
cttttactga cacttctggc tacagtcacg ggagggatct ttttattctt gatgagcgca 6600
aggggcatag ggaagatgac cctgggaatg tgctgcataa tcacggctag catcctccta 6660
tggtacgcac aaatacagcc acactggata gcagcttcaa taatactgga gttttttctc 6720
atagttttgc ttattccaga acctgaaaaa cagagaacac cccaagacaa ccaactgacc 6780
tacgttgtca tagccatcct cacagtggtg gccgcaacca tggcaaacga gatgggtttc 6840
ctagaaaaaa cgaagaaaga tctcggattg ggaagcattg caacccagca acccgagagc 6900
aacatcctgg acatagatct acgtcctgca tcagcatgga cgctgtatgc cgtggccaca 6960
acatttgtta caccaatgtt gagacatagc attgaaaatt cctcagtgaa tgtgtcccta 7020
acagctatag ccaaccaagc cacagtgtta atgggtctcg ggaaaggatg gccattgtca 7080
aagatggaca tcggagttcc ccttctcgcc attggatgct actcacaagt caaccccata 7140
actctcacag cagctctttt cttattggta gcacattatg ccatcatagg gccaggactc 7200
caagcaaaag caaccagaga agctcagaaa agagcagcgg cgggcatcat gaaaaaccca 7260
actgtcgatg gaataacagt gattgaccta gatccaatac cttatgatcc aaagtttgaa 7320
aagcagttgg gacaagtaat gctcctagtc ctctgcgtga ctcaagtatt gatgatgagg 7380
actacatggg ctctgtgtga ggctttaacc ttagctaccg ggcccatctc cacattgtgg 7440
gaaggaaatc cagggaggtt ttggaacact accattgcgg tgtcaatggc taacattttt 7500
agagggagtt acttggccgg agctggactt ctcttttcta ttatgaagaa cacaaccaac 7560
acaagaaggg gaactggcaa cataggagag acgcttggag agaaatggaa aagccgattg 7620
aacgcattgg gaaaaagtga attccagatc tacaagaaaa gtggaatcca ggaagtggat 7680
agaaccttag caaaagaagg cattaaaaga ggagaaacgg accatcacgc tgtgtcgcga 7740
ggctcagcaa aactgagatg gttcgttgag agaaacatgg tcacaccaga agggaaagta 7800
gtggacctcg gttgtggcag aggaggctgg tcatactatt gtggaggact aaagaatgta 7860
agagaagtca aaggcctaac aaaaggagga ccaggacacg aagaacccat ccccatgtca 7920
acatatgggt ggaatctagt gcgtcttcaa agtggagttg acgttttctt catcccgcca 7980
gaaaagtgtg acacattatt gtgtgacata ggggagtcat caccaaatcc cacagtggaa 8040
gcaggacgaa cactcagagt ccttaactta gtagaaaatt ggttgaacaa caacactcaa 8100
ttttgcataa aggttctcaa cccatatatg ccctcagtca tagaaaaaat ggaagcacta 8160
caaaggaaat atggaggagc cttagtgagg aatccactct cacgaaactc cacacatgag 8220
atgtactggg tatccaatgc ttccgggaac atagtgtcat cagtgaacat gatttcaagg 8280
atgttgatca acagatttac aatgagatac aagaaagcca cttacgagcc ggatgttgac 8340
ctcggaagcg gaacccgtaa catcgggatt gaaagtgaga taccaaacct agatataatt 8400
gggaaaagaa tagaaaaaat aaagcaagag catgaaacat catggcacta tgaccaagac 8460
cacccataca aaacgtgggc ataccatggt agctatgaaa caaaacagac tggatcagca 8520
tcatccatgg tcaacggagt ggtcaggctg ctgacaaaac cttgggacgt cgtccccatg 8580
gtgacacaga tggcaatgac agacacgact ccatttggac aacagcgcgt ttttaaagag 8640
aaagtggaca cgagaaccca agaaccgaaa gaaggcacga agaaactaat gaaaataaca 8700
gcagagtggc tttggaaaga attagggaag aaaaagacac ccaggatgtg caccagagaa 8760
gaattcacaa gaaaggtgag aagcaatgca gccttggggg ccgtattcac tgatgagaac 8820
aagtggaagt cggcacgtga ggctgttgaa gatagtaggt tttgggagct ggttgacaag 8880
gaaaggaatc tccatcttga aggaaagtgt gaaacatgtg tgtacaacat gatgggaaaa 8940
agagagaaga agctagggga attcggcaag gcaaaaggca gcagagccat atggtacatg 9000
tggcttggag cacgcttctt agagtttgaa gccctaggat tcttaaatga agatcactgg 9060
ttctccagag agaactccct gagtggagtg gaaggagaag ggctgcacaa gctaggttac 9120
attctaagag acgtgagcaa gaaagaggga ggagcaatgt atgccgatga caccgcagga 9180
tgggatacaa gaatcacact agaagaccta aaaaatgaag aaatggtaac aaaccacatg 9240
gaaggagaac acaagaaact agccgaggcc attttcaaac taacgtacca aaacaaggtg 9300
gtgcgtgtgc aaagaccaac accaagaggc acagtaatgg acatcatatc gagaagagac 9360
caaagaggta gtggacaagt tggcacctat ggactcaata ctttcaccaa tatggaagcc 9420
caactaatca gacagatgga gggagaagga gtctttaaaa gcattcagca cctaacaatc 9480
acagaagaaa tcgctgtgca aaactggtta gcaagagtgg ggcgcgaaag gttatcaaga 9540
atggccatca gtggagatga ttgtgttgtg aaacctttag atgacaggtt cgcaagcgct 9600
ttaacagctc taaatgacat gggaaagatt aggaaagaca tacaacaatg ggaaccttca 9660
agaggatgga atgattggac acaagtgccc ttctgttcac accatttcca tgagttaatc 9720
atgaaagacg gtcgcgtact cgttgttcca tgtagaaacc aagatgaact gattggcaga 9780
gcccgaatct cccaaggagc agggtggtct ttgcgggaga cggcctgttt ggggaagtct 9840
tacgcccaaa tgtggagctt gatgtacttc cacagacgcg acctcaggct ggcggcaaat 9900
gctatttgct cggcagtacc atcacattgg gttccaacaa gtcgaacaac ctggtccata 9960
catgctaaac atgaatggat gacaacggaa gacatgctga cagtctggaa cagggtgtgg 10020
attcaagaaa acccatggat ggaagacaaa actccagtgg aatcatggga ggaaatccca 10080
tacttgggga aaagagaaga ccaatggtgc ggctcattga ttgggttaac aagcagggcc 10140
acctgggcaa agaacatcca agcagcaata aatcaagtta gatcccttat aggcaatgaa 10200
gaatacacag attacatgcc atccatgaaa agattcagaa gagaagagga agaagcagga 10260
gttctgtggt agaaagcaaa actaacatga aacaaggcta gaagtcaggt cggattaagc 10320
catagtacgg aaaaaactat gctacctgtg agccccgtcc aaggacgtta aaagaagtca 10380
ggccatcata aatgccatag cttgagtaaa ctatgcagcc tgtagctcca cctgagaagg 10440
tgtaaaaaat ccgggaggcc acaaaccatg gaagctgtac gcatggcgta gtggactagc 10500
ggttagagga gacccctccc ttacaaatcg cagcaacaat gggggcccaa ggcgagatga 10560
agctgtagtc tcgctggaag gactagaggt tagaggagac ccccccgaaa caaaaaacag 10620
catattgacg ctgggaaaga ccagagatcc tgctgtctcc tcagcatcat tccaggcaca 10680
gaacgccaga aaatggaatg gtgctgttga atcaacaggt tct 10723
<210> 4
<211> 3391
<212> PRT
<213> 登革热血清型2 (MVS)(dengue serotype 2 (MVS))
<400> 4
Met Asn Asn Gln Arg Lys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Phe Asn Met Leu
1 5 10 15
Lys Arg Glu Arg Asn Arg Val Ser Thr Val Gln Gln Leu Thr Lys Arg
20 25 30
Phe Ser Leu Gly Met Leu Gln Gly Arg Gly Pro Leu Lys Leu Phe Met
35 40 45
Ala Leu Val Ala Phe Leu Arg Phe Leu Thr Ile Pro Pro Thr Ala Gly
50 55 60
Ile Leu Lys Arg Trp Gly Thr Ile Lys Lys Ser Lys Ala Ile Asn Val
65 70 75 80
Leu Arg Gly Phe Arg Lys Glu Ile Gly Arg Met Leu Asn Ile Leu Asn
85 90 95
Arg Arg Arg Arg Ser Ala Gly Met Ile Ile Met Leu Ile Pro Thr Val
100 105 110
Met Ala Phe His Leu Thr Thr Arg Asn Gly Glu Pro His Met Ile Val
115 120 125
Ser Arg Gln Glu Lys Gly Lys Ser Leu Leu Phe Lys Thr Glu Val Gly
130 135 140
Val Asn Met Cys Thr Leu Met Ala Met Asp Leu Gly Glu Leu Cys Glu
145 150 155 160
Asp Thr Ile Thr Tyr Glu Cys Pro Leu Leu Arg Gln Asn Glu Pro Glu
165 170 175
Asp Ile Asp Cys Trp Cys Asn Ser Thr Ser Thr Trp Val Thr Tyr Gly
180 185 190
Thr Cys Thr Thr Met Gly Glu His Arg Arg Glu Lys Arg Ser Val Ala
195 200 205
Leu Val Pro His Val Gly Met Gly Leu Glu Thr Arg Thr Glu Thr Trp
210 215 220
Met Ser Ser Glu Gly Ala Trp Lys His Val Gln Arg Ile Glu Thr Trp
225 230 235 240
Ile Leu Arg His Pro Gly Phe Thr Met Met Ala Ala Ile Leu Ala Tyr
245 250 255
Thr Ile Gly Thr Thr His Phe Gln Arg Ala Leu Ile Phe Ile Leu Leu
260 265 270
Thr Ala Val Thr Pro Ser Met Thr Met Arg Cys Ile Gly Met Ser Asn
275 280 285
Arg Asp Phe Val Glu Gly Val Ser Gly Gly Ser Trp Val Asp Ile Val
290 295 300
Leu Glu His Gly Ser Cys Val Thr Thr Met Ala Lys Asn Lys Pro Thr
305 310 315 320
Leu Asp Phe Glu Leu Ile Lys Thr Glu Ala Lys Gln Pro Ala Thr Leu
325 330 335
Arg Lys Tyr Cys Ile Glu Ala Lys Leu Thr Asn Thr Thr Thr Glu Ser
340 345 350
Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Pro Ser Leu Asn Glu Glu Gln Asp Lys
355 360 365
Arg Phe Val Cys Lys His Ser Met Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly
370 375 380
Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Gly Ile Val Thr Cys Ala Met Phe Arg
385 390 395 400
Cys Lys Lys Asn Met Glu Gly Lys Val Val Gln Pro Glu Asn Leu Glu
405 410 415
Tyr Thr Ile Val Ile Thr Pro His Ser Gly Glu Glu His Ala Val Gly
420 425 430
Asn Asp Thr Gly Lys His Gly Lys Glu Ile Lys Ile Thr Pro Gln Ser
435 440 445
Ser Ile Thr Glu Ala Glu Leu Thr Gly Tyr Gly Thr Val Thr Met Glu
450 455 460
Cys Ser Pro Arg Thr Gly Leu Asp Phe Asn Glu Met Val Leu Leu Gln
465 470 475 480
Met Glu Asn Lys Ala Trp Leu Val His Arg Gln Trp Phe Leu Asp Leu
485 490 495
Pro Leu Pro Trp Leu Pro Gly Ala Asp Thr Gln Gly Ser Asn Trp Ile
500 505 510
Gln Lys Glu Thr Leu Val Thr Phe Lys Asn Pro His Ala Lys Lys Gln
515 520 525
Asp Val Val Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Met His Thr Ala Leu
530 535 540
Thr Gly Ala Thr Glu Ile Gln Met Ser Ser Gly Asn Leu Leu Phe Thr
545 550 555 560
Gly His Leu Lys Cys Arg Leu Arg Met Asp Lys Leu Gln Leu Lys Gly
565 570 575
Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys Val Val Lys Glu Ile
580 585 590
Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg Val Gln Tyr Glu Gly
595 600 605
Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile Met Asp Leu Glu Lys
610 615 620
Arg His Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn Pro Ile Val Thr Glu
625 630 635 640
Lys Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser
645 650 655
Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu Lys Leu Asn Trp Phe
660 665 670
Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Gln Met Phe Glu Thr Thr Met Arg Gly
675 680 685
Ala Lys Arg Met Ala Ile Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser
690 695 700
Leu Gly Gly Val Phe Thr Ser Ile Gly Lys Ala Leu His Gln Val Phe
705 710 715 720
Gly Ala Ile Tyr Gly Ala Ala Phe Ser Gly Val Ser Trp Thr Met Lys
725 730 735
Ile Leu Ile Gly Val Ile Ile Thr Trp Ile Gly Met Asn Ser Arg Ser
740 745 750
Thr Ser Leu Ser Val Thr Leu Val Leu Val Gly Ile Val Thr Leu Tyr
755 760 765
Leu Gly Val Met Val Gln Ala Asp Ser Gly Cys Val Val Ser Trp Lys
770 775 780
Asn Lys Glu Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ile Phe Ile Thr Asp Asn Val
785 790 795 800
His Thr Trp Thr Glu Gln Tyr Lys Phe Gln Pro Glu Ser Pro Ser Lys
805 810 815
Leu Ala Ser Ala Ile Gln Lys Ala His Glu Glu Asp Ile Cys Gly Ile
820 825 830
Arg Ser Val Thr Arg Leu Glu Asn Leu Met Trp Lys Gln Ile Thr Pro
835 840 845
Glu Leu Asn His Ile Leu Ser Glu Asn Glu Val Lys Leu Thr Ile Met
850 855 860
Thr Gly Asp Ile Lys Gly Ile Met Gln Ala Gly Lys Arg Ser Leu Arg
865 870 875 880
Pro Gln Pro Thr Glu Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala
885 890 895
Lys Met Leu Ser Thr Glu Ser His Asn Gln Thr Phe Leu Ile Asp Gly
900 905 910
Pro Glu Thr Ala Glu Cys Pro Asn Thr Asn Arg Ala Trp Asn Ser Leu
915 920 925
Glu Val Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Val Phe Thr Thr Asn Ile Trp Leu
930 935 940
Lys Leu Lys Glu Lys Gln Asp Val Phe Cys Asp Ser Lys Leu Met Ser
945 950 955 960
Ala Ala Ile Lys Asp Asn Arg Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp
965 970 975
Ile Glu Ser Ala Leu Asn Asp Thr Trp Lys Ile Glu Lys Ala Ser Phe
980 985 990
Ile Glu Val Lys Asn Cys His Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Ser
995 1000 1005
Asn Gly Val Leu Glu Ser Glu Met Ile Ile Pro Lys Asn Leu Ala
1010 1015 1020
Gly Pro Val Ser Gln His Asn Tyr Arg Pro Gly Tyr His Thr Gln
1025 1030 1035
Ile Thr Gly Pro Trp His Leu Gly Lys Leu Glu Met Asp Phe Asp
1040 1045 1050
Phe Cys Asp Gly Thr Thr Val Val Val Thr Glu Asp Cys Gly Asn
1055 1060 1065
Arg Gly Pro Ser Leu Arg Thr Thr Thr Ala Ser Gly Lys Leu Ile
1070 1075 1080
Thr Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Leu Pro Pro Leu Arg Tyr
1085 1090 1095
Arg Gly Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Leu
1100 1105 1110
Lys Glu Lys Glu Glu Asn Leu Val Asn Ser Leu Val Thr Ala Gly
1115 1120 1125
His Gly Gln Val Asp Asn Phe Ser Leu Gly Val Leu Gly Met Ala
1130 1135 1140
Leu Phe Leu Glu Glu Met Leu Arg Thr Arg Val Gly Thr Lys His
1145 1150 1155
Ala Ile Leu Leu Val Ala Val Ser Phe Val Thr Leu Ile Thr Gly
1160 1165 1170
Asn Met Ser Phe Arg Asp Leu Gly Arg Val Met Val Met Val Gly
1175 1180 1185
Ala Thr Met Thr Asp Asp Ile Gly Met Gly Val Thr Tyr Leu Ala
1190 1195 1200
Leu Leu Ala Ala Phe Lys Val Arg Pro Thr Phe Ala Ala Gly Leu
1205 1210 1215
Leu Leu Arg Lys Leu Thr Ser Lys Glu Leu Met Met Thr Thr Ile
1220 1225 1230
Gly Ile Val Leu Leu Ser Gln Ser Thr Ile Pro Glu Thr Ile Leu
1235 1240 1245
Glu Leu Thr Asp Ala Leu Ala Leu Gly Met Met Val Leu Lys Met
1250 1255 1260
Val Arg Asn Met Glu Lys Tyr Gln Leu Ala Val Thr Ile Met Ala
1265 1270 1275
Ile Leu Cys Val Pro Asn Ala Val Ile Leu Gln Asn Ala Trp Lys
1280 1285 1290
Val Ser Cys Thr Ile Leu Ala Val Val Ser Val Ser Pro Leu Phe
1295 1300 1305
Leu Thr Ser Ser Gln Gln Lys Thr Asp Trp Ile Pro Leu Ala Leu
1310 1315 1320
Thr Ile Lys Gly Leu Asn Pro Thr Ala Ile Phe Leu Thr Thr Leu
1325 1330 1335
Ser Arg Thr Ser Lys Lys Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Ala Ile
1340 1345 1350
Met Ala Val Gly Met Val Ser Ile Leu Ala Ser Ser Leu Leu Lys
1355 1360 1365
Asn Asp Ile Pro Met Thr Gly Pro Leu Val Ala Gly Gly Leu Leu
1370 1375 1380
Thr Val Cys Tyr Val Leu Thr Gly Arg Ser Ala Asp Leu Glu Leu
1385 1390 1395
Glu Arg Ala Ala Asp Val Lys Trp Glu Asp Gln Ala Glu Ile Ser
1400 1405 1410
Gly Ser Ser Pro Ile Leu Ser Ile Thr Ile Ser Glu Asp Gly Ser
1415 1420 1425
Met Ser Ile Lys Asn Glu Glu Glu Glu Gln Thr Leu Thr Ile Leu
1430 1435 1440
Ile Arg Thr Gly Leu Leu Val Ile Ser Gly Leu Phe Pro Val Ser
1445 1450 1455
Ile Pro Ile Thr Ala Ala Ala Trp Tyr Leu Trp Glu Val Lys Lys
1460 1465 1470
Gln Arg Ala Gly Val Leu Trp Asp Val Pro Ser Pro Pro Pro Met
1475 1480 1485
Gly Lys Ala Glu Leu Glu Asp Gly Ala Tyr Arg Ile Lys Gln Lys
1490 1495 1500
Gly Ile Leu Gly Tyr Ser Gln Ile Gly Ala Gly Val Tyr Lys Glu
1505 1510 1515
Gly Thr Phe His Thr Met Trp His Val Thr Arg Gly Ala Val Leu
1520 1525 1530
Met His Lys Gly Lys Arg Ile Glu Pro Ser Trp Ala Asp Val Lys
1535 1540 1545
Lys Asp Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Lys Leu Glu Gly Glu
1550 1555 1560
Trp Lys Glu Gly Glu Glu Val Gln Val Leu Ala Leu Glu Pro Gly
1565 1570 1575
Lys Asn Pro Arg Ala Val Gln Thr Lys Pro Gly Leu Phe Lys Thr
1580 1585 1590
Asn Ala Gly Thr Ile Gly Ala Val Ser Leu Asp Phe Ser Pro Gly
1595 1600 1605
Thr Ser Gly Ser Pro Ile Ile Asp Lys Lys Gly Lys Val Val Gly
1610 1615 1620
Leu Tyr Gly Asn Gly Val Val Thr Arg Ser Gly Ala Tyr Val Ser
1625 1630 1635
Ala Ile Ala Gln Thr Glu Lys Ser Ile Glu Asp Asn Pro Glu Ile
1640 1645 1650
Glu Asp Asp Ile Phe Arg Lys Arg Arg Leu Thr Ile Met Asp Leu
1655 1660 1665
His Pro Gly Ala Gly Lys Thr Lys Arg Tyr Leu Pro Ala Ile Val
1670 1675 1680
Arg Glu Ala Ile Lys Arg Gly Leu Arg Thr Leu Ile Leu Ala Pro
1685 1690 1695
Thr Arg Val Val Ala Ala Glu Met Glu Glu Ala Leu Arg Gly Leu
1700 1705 1710
Pro Ile Arg Tyr Gln Thr Pro Ala Ile Arg Ala Val His Thr Gly
1715 1720 1725
Arg Glu Ile Val Asp Leu Met Cys His Ala Thr Phe Thr Met Arg
1730 1735 1740
Leu Leu Ser Pro Val Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Ile Met
1745 1750 1755
Asp Glu Ala His Phe Thr Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly
1760 1765 1770
Tyr Ile Ser Thr Arg Val Glu Met Gly Glu Ala Ala Gly Ile Phe
1775 1780 1785
Met Thr Ala Thr Pro Pro Gly Ser Arg Asp Pro Phe Pro Gln Ser
1790 1795 1800
Asn Ala Pro Ile Ile Asp Glu Glu Arg Glu Ile Pro Glu Arg Ser
1805 1810 1815
Trp Asn Ser Gly His Glu Trp Val Thr Asp Phe Lys Gly Lys Thr
1820 1825 1830
Val Trp Phe Val Pro Ser Ile Lys Ala Gly Asn Asp Ile Ala Ala
1835 1840 1845
Cys Leu Arg Lys Asn Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys
1850 1855 1860
Thr Phe Asp Ser Glu Tyr Val Lys Thr Arg Thr Asn Asp Trp Asp
1865 1870 1875
Phe Val Val Thr Thr Asp Ile Ser Glu Met Gly Ala Asn Phe Lys
1880 1885 1890
Ala Glu Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Met Lys Pro Val Ile
1895 1900 1905
Leu Thr Asp Gly Glu Glu Arg Val Ile Leu Ala Gly Pro Met Pro
1910 1915 1920
Val Thr His Ser Ser Ala Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg
1925 1930 1935
Asn Pro Lys Asn Glu Asn Asp Gln Tyr Ile Tyr Met Gly Glu Pro
1940 1945 1950
Leu Glu Asn Asp Glu Asp Cys Ala His Trp Lys Glu Ala Lys Met
1955 1960 1965
Leu Leu Asp Asn Ile Asn Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Ser Met
1970 1975 1980
Phe Glu Pro Glu Arg Glu Lys Val Asp Ala Ile Asp Gly Glu Tyr
1985 1990 1995
Arg Leu Arg Gly Glu Ala Arg Lys Thr Phe Val Asp Leu Met Arg
2000 2005 2010
Arg Gly Asp Leu Pro Val Trp Leu Ala Tyr Arg Val Ala Ala Glu
2015 2020 2025
Gly Ile Asn Tyr Ala Asp Arg Arg Trp Cys Phe Asp Gly Val Lys
2030 2035 2040
Asn Asn Gln Ile Leu Glu Glu Asn Val Glu Val Glu Ile Trp Thr
2045 2050 2055
Lys Glu Gly Glu Arg Lys Lys Leu Lys Pro Arg Trp Leu Asp Ala
2060 2065 2070
Arg Ile Tyr Ser Asp Pro Leu Ala Leu Lys Glu Phe Lys Glu Phe
2075 2080 2085
Ala Ala Gly Arg Lys Ser Leu Thr Leu Asn Leu Ile Thr Glu Met
2090 2095 2100
Gly Arg Leu Pro Thr Phe Met Thr Gln Lys Ala Arg Asp Ala Leu
2105 2110 2115
Asp Asn Leu Ala Val Leu His Thr Ala Glu Ala Gly Gly Arg Ala
2120 2125 2130
Tyr Asn His Ala Leu Ser Glu Leu Pro Glu Thr Leu Glu Thr Leu
2135 2140 2145
Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ala Thr Val Thr Gly Gly Ile Phe Leu
2150 2155 2160
Phe Leu Met Ser Ala Arg Gly Ile Gly Lys Met Thr Leu Gly Met
2165 2170 2175
Cys Cys Ile Ile Thr Ala Ser Ile Leu Leu Trp Tyr Ala Gln Ile
2180 2185 2190
Gln Pro His Trp Ile Ala Ala Ser Ile Ile Leu Glu Phe Phe Leu
2195 2200 2205
Ile Val Leu Leu Ile Pro Glu Pro Glu Lys Gln Arg Thr Pro Gln
2210 2215 2220
Asp Asn Gln Leu Thr Tyr Val Val Ile Ala Ile Leu Thr Val Val
2225 2230 2235
Ala Ala Thr Met Ala Asn Glu Met Gly Phe Leu Glu Lys Thr Lys
2240 2245 2250
Lys Asp Leu Gly Leu Gly Ser Ile Ala Thr Gln Gln Pro Glu Ser
2255 2260 2265
Asn Ile Leu Asp Ile Asp Leu Arg Pro Ala Ser Ala Trp Thr Leu
2270 2275 2280
Tyr Ala Val Ala Thr Thr Phe Val Thr Pro Met Leu Arg His Ser
2285 2290 2295
Ile Glu Asn Ser Ser Val Asn Val Ser Leu Thr Ala Ile Ala Asn
2300 2305 2310
Gln Ala Thr Val Leu Met Gly Leu Gly Lys Gly Trp Pro Leu Ser
2315 2320 2325
Lys Met Asp Ile Gly Val Pro Leu Leu Ala Ile Gly Cys Tyr Ser
2330 2335 2340
Gln Val Asn Pro Ile Thr Leu Thr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Val
2345 2350 2355
Ala His Tyr Ala Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr
2360 2365 2370
Arg Glu Ala Gln Lys Arg Ala Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Pro
2375 2380 2385
Thr Val Asp Gly Ile Thr Val Ile Asp Leu Asp Pro Ile Pro Tyr
2390 2395 2400
Asp Pro Lys Phe Glu Lys Gln Leu Gly Gln Val Met Leu Leu Val
2405 2410 2415
Leu Cys Val Thr Gln Val Leu Met Met Arg Thr Thr Trp Ala Leu
2420 2425 2430
Cys Glu Ala Leu Thr Leu Ala Thr Gly Pro Ile Ser Thr Leu Trp
2435 2440 2445
Glu Gly Asn Pro Gly Arg Phe Trp Asn Thr Thr Ile Ala Val Ser
2450 2455 2460
Met Ala Asn Ile Phe Arg Gly Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Gly Leu
2465 2470 2475
Leu Phe Ser Ile Met Lys Asn Thr Thr Asn Thr Arg Arg Gly Thr
2480 2485 2490
Gly Asn Ile Gly Glu Thr Leu Gly Glu Lys Trp Lys Ser Arg Leu
2495 2500 2505
Asn Ala Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Lys Ser Gly
2510 2515 2520
Ile Gln Glu Val Asp Arg Thr Leu Ala Lys Glu Gly Ile Lys Arg
2525 2530 2535
Gly Glu Thr Asp His His Ala Val Ser Arg Gly Ser Ala Lys Leu
2540 2545 2550
Arg Trp Phe Val Glu Arg Asn Met Val Thr Pro Glu Gly Lys Val
2555 2560 2565
Val Asp Leu Gly Cys Gly Arg Gly Gly Trp Ser Tyr Tyr Cys Gly
2570 2575 2580
Gly Leu Lys Asn Val Arg Glu Val Lys Gly Leu Thr Lys Gly Gly
2585 2590 2595
Pro Gly His Glu Glu Pro Ile Pro Met Ser Thr Tyr Gly Trp Asn
2600 2605 2610
Leu Val Arg Leu Gln Ser Gly Val Asp Val Phe Phe Ile Pro Pro
2615 2620 2625
Glu Lys Cys Asp Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Pro
2630 2635 2640
Asn Pro Thr Val Glu Ala Gly Arg Thr Leu Arg Val Leu Asn Leu
2645 2650 2655
Val Glu Asn Trp Leu Asn Asn Asn Thr Gln Phe Cys Ile Lys Val
2660 2665 2670
Leu Asn Pro Tyr Met Pro Ser Val Ile Glu Lys Met Glu Ala Leu
2675 2680 2685
Gln Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Leu Val Arg Asn Pro Leu Ser Arg
2690 2695 2700
Asn Ser Thr His Glu Met Tyr Trp Val Ser Asn Ala Ser Gly Asn
2705 2710 2715
Ile Val Ser Ser Val Asn Met Ile Ser Arg Met Leu Ile Asn Arg
2720 2725 2730
Phe Thr Met Arg Tyr Lys Lys Ala Thr Tyr Glu Pro Asp Val Asp
2735 2740 2745
Leu Gly Ser Gly Thr Arg Asn Ile Gly Ile Glu Ser Glu Ile Pro
2750 2755 2760
Asn Leu Asp Ile Ile Gly Lys Arg Ile Glu Lys Ile Lys Gln Glu
2765 2770 2775
His Glu Thr Ser Trp His Tyr Asp Gln Asp His Pro Tyr Lys Thr
2780 2785 2790
Trp Ala Tyr His Gly Ser Tyr Glu Thr Lys Gln Thr Gly Ser Ala
2795 2800 2805
Ser Ser Met Val Asn Gly Val Val Arg Leu Leu Thr Lys Pro Trp
2810 2815 2820
Asp Val Val Pro Met Val Thr Gln Met Ala Met Thr Asp Thr Thr
2825 2830 2835
Pro Phe Gly Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg
2840 2845 2850
Thr Gln Glu Pro Lys Glu Gly Thr Lys Lys Leu Met Lys Ile Thr
2855 2860 2865
Ala Glu Trp Leu Trp Lys Glu Leu Gly Lys Lys Lys Thr Pro Arg
2870 2875 2880
Met Cys Thr Arg Glu Glu Phe Thr Arg Lys Val Arg Ser Asn Ala
2885 2890 2895
Ala Leu Gly Ala Val Phe Thr Asp Glu Asn Lys Trp Lys Ser Ala
2900 2905 2910
Arg Glu Ala Val Glu Asp Ser Arg Phe Trp Glu Leu Val Asp Lys
2915 2920 2925
Glu Arg Asn Leu His Leu Glu Gly Lys Cys Glu Thr Cys Val Tyr
2930 2935 2940
Asn Met Met Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Gly Glu Phe Gly Lys
2945 2950 2955
Ala Lys Gly Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg
2960 2965 2970
Phe Leu Glu Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp
2975 2980 2985
Phe Ser Arg Glu Asn Ser Leu Ser Gly Val Glu Gly Glu Gly Leu
2990 2995 3000
His Lys Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Val Ser Lys Lys Glu Gly
3005 3010 3015
Gly Ala Met Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile
3020 3025 3030
Thr Leu Glu Asp Leu Lys Asn Glu Glu Met Val Thr Asn His Met
3035 3040 3045
Glu Gly Glu His Lys Lys Leu Ala Glu Ala Ile Phe Lys Leu Thr
3050 3055 3060
Tyr Gln Asn Lys Val Val Arg Val Gln Arg Pro Thr Pro Arg Gly
3065 3070 3075
Thr Val Met Asp Ile Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly
3080 3085 3090
Gln Val Gly Thr Tyr Gly Leu Asn Thr Phe Thr Asn Met Glu Ala
3095 3100 3105
Gln Leu Ile Arg Gln Met Glu Gly Glu Gly Val Phe Lys Ser Ile
3110 3115 3120
Gln His Leu Thr Ile Thr Glu Glu Ile Ala Val Gln Asn Trp Leu
3125 3130 3135
Ala Arg Val Gly Arg Glu Arg Leu Ser Arg Met Ala Ile Ser Gly
3140 3145 3150
Asp Asp Cys Val Val Lys Pro Leu Asp Asp Arg Phe Ala Ser Ala
3155 3160 3165
Leu Thr Ala Leu Asn Asp Met Gly Lys Ile Arg Lys Asp Ile Gln
3170 3175 3180
Gln Trp Glu Pro Ser Arg Gly Trp Asn Asp Trp Thr Gln Val Pro
3185 3190 3195
Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Ile Met Lys Asp Gly Arg
3200 3205 3210
Val Leu Val Val Pro Cys Arg Asn Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg
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Ala Arg Ile Ser Gln Gly Ala Gly Trp Ser Leu Arg Glu Thr Ala
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Cys Leu Gly Lys Ser Tyr Ala Gln Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
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His Arg Arg Asp Leu Arg Leu Ala Ala Asn Ala Ile Cys Ser Ala
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Val Pro Ser His Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile
3275 3280 3285
His Ala Lys His Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Thr Val
3290 3295 3300
Trp Asn Arg Val Trp Ile Gln Glu Asn Pro Trp Met Glu Asp Lys
3305 3310 3315
Thr Pro Val Glu Ser Trp Glu Glu Ile Pro Tyr Leu Gly Lys Arg
3320 3325 3330
Glu Asp Gln Trp Cys Gly Ser Leu Ile Gly Leu Thr Ser Arg Ala
3335 3340 3345
Thr Trp Ala Lys Asn Ile Gln Ala Ala Ile Asn Gln Val Arg Ser
3350 3355 3360
Leu Ile Gly Asn Glu Glu Tyr Thr Asp Tyr Met Pro Ser Met Lys
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Arg Phe Arg Arg Glu Glu Glu Glu Ala Gly Val Leu Trp
3380 3385 3390
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<212> DNA
<213> 嵌合登革热血清型2/3 (MVS)(chimeric dengue serotype 2/3 (MVS))
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145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
Leu Ala Pro His Val Gly Met Gly Leu Asp Thr Arg Thr Gln Thr Trp
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Met Ser Ala Glu Gly Ala Trp Arg Gln Val Glu Lys Val Glu Thr Trp
225 230 235 240
Ala Leu Arg His Pro Gly Phe Thr Ile Leu Ala Leu Phe Leu Ala His
245 250 255
Tyr Ile Gly Thr Ser Leu Thr Gln Lys Val Val Ile Phe Ile Leu Leu
260 265 270
Met Leu Val Thr Pro Ser Met Thr Met Arg Cys Val Gly Val Gly Asn
275 280 285
Arg Asp Phe Val Glu Gly Leu Ser Gly Ala Thr Trp Val Asp Val Val
290 295 300
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305 310 315 320
Leu Asp Ile Glu Leu Gln Lys Thr Glu Ala Thr Gln Leu Ala Thr Leu
325 330 335
Arg Lys Leu Cys Ile Glu Gly Lys Ile Thr Asn Ile Thr Thr Asp Ser
340 345 350
Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Ala Ile Leu Pro Glu Glu Gln Asp Gln
355 360 365
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Gly Ser Ser Ile Gly Lys Met Phe Glu Ala Thr Ala Arg Gly Ala Arg
675 680 685
Arg Met Ala Ile Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly
690 695 700
Gly Val Leu Asn Ser Leu Gly Lys Met Val His Gln Ile Phe Gly Ser
705 710 715 720
Ala Tyr Thr Ala Leu Phe Gly Gly Val Ser Trp Met Met Lys Ile Gly
725 730 735
Ile Gly Val Leu Leu Thr Trp Ile Gly Leu Asn Ser Lys Asn Thr Ser
740 745 750
Met Ser Phe Ser Cys Ile Ala Ala Gly Ile Val Thr Leu Tyr Leu Gly
755 760 765
Val Met Val Gln Ala Asp Ser Gly Cys Val Val Ser Trp Lys Asn Lys
770 775 780
Glu Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ile Phe Ile Thr Asp Asn Val His Thr
785 790 795 800
Trp Thr Glu Gln Tyr Lys Phe Gln Pro Glu Ser Pro Ser Lys Leu Ala
805 810 815
Ser Ala Ile Gln Lys Ala His Glu Glu Asp Ile Cys Gly Ile Arg Ser
820 825 830
Val Thr Arg Leu Glu Asn Leu Met Trp Lys Gln Ile Thr Pro Glu Leu
835 840 845
Asn His Ile Leu Ser Glu Asn Glu Val Lys Leu Thr Ile Met Thr Gly
850 855 860
Asp Ile Lys Gly Ile Met Gln Ala Gly Lys Arg Ser Leu Arg Pro Gln
865 870 875 880
Pro Thr Glu Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala Lys Met
885 890 895
Leu Ser Thr Glu Ser His Asn Gln Thr Phe Leu Ile Asp Gly Pro Glu
900 905 910
Thr Ala Glu Cys Pro Asn Thr Asn Arg Ala Trp Asn Ser Leu Glu Val
915 920 925
Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Val Phe Thr Thr Asn Ile Trp Leu Lys Leu
930 935 940
Lys Glu Lys Gln Asp Val Phe Cys Asp Ser Lys Leu Met Ser Ala Ala
945 950 955 960
Ile Lys Asp Asn Arg Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp Ile Glu
965 970 975
Ser Ala Leu Asn Asp Thr Trp Lys Ile Glu Lys Ala Ser Phe Ile Glu
980 985 990
Val Lys Asn Cys His Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Ser Asn Gly
995 1000 1005
Val Leu Glu Ser Glu Met Ile Ile Pro Lys Asn Leu Ala Gly Pro
1010 1015 1020
Val Ser Gln His Asn Tyr Arg Pro Gly Tyr His Thr Gln Ile Thr
1025 1030 1035
Gly Pro Trp His Leu Gly Lys Leu Glu Met Asp Phe Asp Phe Cys
1040 1045 1050
Asp Gly Thr Thr Val Val Val Thr Glu Asp Cys Gly Asn Arg Gly
1055 1060 1065
Pro Ser Leu Arg Thr Thr Thr Ala Ser Gly Lys Leu Ile Thr Glu
1070 1075 1080
Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Leu Pro Pro Leu Arg Tyr Arg Gly
1085 1090 1095
Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Leu Lys Glu
1100 1105 1110
Lys Glu Glu Asn Leu Val Asn Ser Leu Val Thr Ala Gly His Gly
1115 1120 1125
Gln Val Asp Asn Phe Ser Leu Gly Val Leu Gly Met Ala Leu Phe
1130 1135 1140
Leu Glu Glu Met Leu Arg Thr Arg Val Gly Thr Lys His Ala Ile
1145 1150 1155
Leu Leu Val Ala Val Ser Phe Val Thr Leu Ile Thr Gly Asn Met
1160 1165 1170
Ser Phe Arg Asp Leu Gly Arg Val Met Val Met Val Gly Ala Thr
1175 1180 1185
Met Thr Asp Asp Ile Gly Met Gly Val Thr Tyr Leu Ala Leu Leu
1190 1195 1200
Ala Ala Phe Lys Val Arg Pro Thr Phe Ala Ala Gly Leu Leu Leu
1205 1210 1215
Arg Lys Leu Thr Ser Lys Glu Leu Met Met Thr Thr Ile Gly Ile
1220 1225 1230
Val Leu Leu Ser Gln Ser Thr Ile Pro Glu Thr Ile Leu Glu Leu
1235 1240 1245
Thr Asp Ala Leu Ala Leu Gly Met Met Val Leu Lys Met Val Arg
1250 1255 1260
Asn Met Glu Lys Tyr Gln Leu Ala Val Thr Ile Met Ala Ile Leu
1265 1270 1275
Cys Val Pro Asn Ala Val Ile Leu Gln Asn Ala Trp Lys Val Ser
1280 1285 1290
Cys Thr Ile Leu Ala Val Val Ser Val Ser Pro Leu Phe Leu Thr
1295 1300 1305
Ser Ser Gln Gln Lys Thr Asp Trp Ile Pro Leu Ala Leu Thr Ile
1310 1315 1320
Lys Gly Leu Asn Pro Thr Ala Ile Phe Leu Thr Thr Leu Ser Arg
1325 1330 1335
Thr Ser Lys Lys Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Ala Ile Met Ala
1340 1345 1350
Val Gly Met Val Ser Ile Leu Ala Ser Ser Leu Leu Lys Asn Asp
1355 1360 1365
Ile Pro Met Thr Gly Pro Leu Val Ala Gly Gly Leu Leu Thr Val
1370 1375 1380
Cys Tyr Val Leu Thr Gly Arg Ser Ala Asp Leu Glu Leu Glu Arg
1385 1390 1395
Ala Ala Asp Val Lys Trp Glu Asp Gln Ala Glu Ile Ser Gly Ser
1400 1405 1410
Ser Pro Ile Leu Ser Ile Thr Ile Ser Glu Asp Gly Ser Met Ser
1415 1420 1425
Ile Lys Asn Glu Glu Glu Glu Gln Thr Leu Thr Ile Leu Ile Arg
1430 1435 1440
Thr Gly Leu Leu Val Ile Ser Gly Leu Phe Pro Val Ser Ile Pro
1445 1450 1455
Ile Thr Ala Ala Ala Trp Tyr Leu Trp Glu Val Lys Lys Gln Arg
1460 1465 1470
Ala Gly Val Leu Trp Asp Val Pro Ser Pro Pro Pro Met Gly Lys
1475 1480 1485
Ala Glu Leu Glu Asp Gly Ala Tyr Arg Ile Lys Gln Lys Gly Ile
1490 1495 1500
Leu Gly Tyr Ser Gln Ile Gly Ala Gly Val Tyr Lys Glu Gly Thr
1505 1510 1515
Phe His Thr Met Trp His Val Thr Arg Gly Ala Val Leu Met His
1520 1525 1530
Lys Gly Lys Arg Ile Glu Pro Ser Trp Ala Asp Val Lys Lys Asp
1535 1540 1545
Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Lys Leu Glu Gly Glu Trp Lys
1550 1555 1560
Glu Gly Glu Glu Val Gln Val Leu Ala Leu Glu Pro Gly Lys Asn
1565 1570 1575
Pro Arg Ala Val Gln Thr Lys Pro Gly Leu Phe Lys Thr Asn Ala
1580 1585 1590
Gly Thr Ile Gly Ala Val Ser Leu Asp Phe Ser Pro Gly Thr Ser
1595 1600 1605
Gly Ser Pro Ile Ile Asp Lys Lys Gly Lys Val Val Gly Leu Tyr
1610 1615 1620
Gly Asn Gly Val Val Thr Arg Ser Gly Ala Tyr Val Ser Ala Ile
1625 1630 1635
Ala Gln Thr Glu Lys Ser Ile Glu Asp Asn Pro Glu Ile Glu Asp
1640 1645 1650
Asp Ile Phe Arg Lys Arg Arg Leu Thr Ile Met Asp Leu His Pro
1655 1660 1665
Gly Ala Gly Lys Thr Lys Arg Tyr Leu Pro Ala Ile Val Arg Glu
1670 1675 1680
Ala Ile Lys Arg Gly Leu Arg Thr Leu Ile Leu Ala Pro Thr Arg
1685 1690 1695
Val Val Ala Ala Glu Met Glu Glu Ala Leu Arg Gly Leu Pro Ile
1700 1705 1710
Arg Tyr Gln Thr Pro Ala Ile Arg Ala Val His Thr Gly Arg Glu
1715 1720 1725
Ile Val Asp Leu Met Cys His Ala Thr Phe Thr Met Arg Leu Leu
1730 1735 1740
Ser Pro Val Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Ile Met Asp Glu
1745 1750 1755
Ala His Phe Thr Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly Tyr Ile
1760 1765 1770
Ser Thr Arg Val Glu Met Gly Glu Ala Ala Gly Ile Phe Met Thr
1775 1780 1785
Ala Thr Pro Pro Gly Ser Arg Asp Pro Phe Pro Gln Ser Asn Ala
1790 1795 1800
Pro Ile Ile Asp Glu Glu Arg Glu Ile Pro Glu Arg Ser Trp Asn
1805 1810 1815
Ser Gly His Glu Trp Val Thr Asp Phe Lys Gly Lys Thr Val Trp
1820 1825 1830
Phe Val Pro Ser Ile Lys Ala Gly Asn Asp Ile Ala Ala Cys Leu
1835 1840 1845
Arg Lys Asn Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys Thr Phe
1850 1855 1860
Asp Ser Glu Tyr Val Lys Thr Arg Thr Asn Asp Trp Asp Phe Val
1865 1870 1875
Val Thr Thr Asp Ile Ser Glu Met Gly Ala Asn Phe Lys Ala Glu
1880 1885 1890
Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Met Lys Pro Val Ile Leu Thr
1895 1900 1905
Asp Gly Glu Glu Arg Val Ile Leu Ala Gly Pro Met Pro Val Thr
1910 1915 1920
His Ser Ser Ala Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg Asn Pro
1925 1930 1935
Lys Asn Glu Asn Asp Gln Tyr Ile Tyr Met Gly Glu Pro Leu Glu
1940 1945 1950
Asn Asp Glu Asp Cys Ala His Trp Lys Glu Ala Lys Met Leu Leu
1955 1960 1965
Asp Asn Ile Asn Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Ser Met Phe Glu
1970 1975 1980
Pro Glu Arg Glu Lys Val Asp Ala Ile Asp Gly Glu Tyr Arg Leu
1985 1990 1995
Arg Gly Glu Ala Arg Lys Thr Phe Val Asp Leu Met Arg Arg Gly
2000 2005 2010
Asp Leu Pro Val Trp Leu Ala Tyr Arg Val Ala Ala Glu Gly Ile
2015 2020 2025
Asn Tyr Ala Asp Arg Arg Trp Cys Phe Asp Gly Val Lys Asn Asn
2030 2035 2040
Gln Ile Leu Glu Glu Asn Val Glu Val Glu Ile Trp Thr Lys Glu
2045 2050 2055
Gly Glu Arg Lys Lys Leu Lys Pro Arg Trp Leu Asp Ala Arg Ile
2060 2065 2070
Tyr Ser Asp Pro Leu Ala Leu Lys Glu Phe Lys Glu Phe Ala Ala
2075 2080 2085
Gly Arg Lys Ser Leu Thr Leu Asn Leu Ile Thr Glu Met Gly Arg
2090 2095 2100
Leu Pro Thr Phe Met Thr Gln Lys Ala Arg Asp Ala Leu Asp Asn
2105 2110 2115
Leu Ala Val Leu His Thr Ala Glu Ala Gly Gly Arg Ala Tyr Asn
2120 2125 2130
His Ala Leu Ser Glu Leu Pro Glu Thr Leu Glu Thr Leu Leu Leu
2135 2140 2145
Leu Thr Leu Leu Ala Thr Val Thr Gly Gly Ile Phe Leu Phe Leu
2150 2155 2160
Met Ser Ala Arg Gly Ile Gly Lys Met Thr Leu Gly Met Cys Cys
2165 2170 2175
Ile Ile Thr Ala Ser Ile Leu Leu Trp Tyr Ala Gln Ile Gln Pro
2180 2185 2190
His Trp Ile Ala Ala Ser Ile Ile Leu Glu Phe Phe Leu Ile Val
2195 2200 2205
Leu Leu Ile Pro Glu Pro Glu Lys Gln Arg Thr Pro Gln Asp Asn
2210 2215 2220
Gln Leu Thr Tyr Val Val Ile Ala Ile Leu Thr Val Val Ala Ala
2225 2230 2235
Thr Met Ala Asn Glu Met Gly Phe Leu Glu Lys Thr Lys Lys Asp
2240 2245 2250
Leu Gly Leu Gly Ser Ile Ala Thr Gln Gln Pro Glu Ser Asn Ile
2255 2260 2265
Leu Asp Ile Asp Leu Arg Pro Ala Ser Ala Trp Thr Leu Tyr Ala
2270 2275 2280
Val Ala Thr Thr Phe Val Thr Pro Met Leu Arg His Ser Ile Glu
2285 2290 2295
Asn Ser Ser Val Asn Val Ser Leu Thr Ala Ile Ala Asn Gln Ala
2300 2305 2310
Thr Val Leu Met Gly Leu Gly Lys Gly Trp Pro Leu Ser Lys Met
2315 2320 2325
Asp Ile Gly Val Pro Leu Leu Ala Ile Gly Cys Tyr Ser Gln Val
2330 2335 2340
Asn Pro Ile Thr Leu Thr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Val Ala His
2345 2350 2355
Tyr Ala Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr Arg Glu
2360 2365 2370
Ala Gln Lys Arg Ala Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Pro Thr Val
2375 2380 2385
Asp Gly Ile Thr Val Ile Asp Leu Asp Pro Ile Pro Tyr Asp Pro
2390 2395 2400
Lys Phe Glu Lys Gln Leu Gly Gln Val Met Leu Leu Val Leu Cys
2405 2410 2415
Val Thr Gln Val Leu Met Met Arg Thr Thr Trp Ala Leu Cys Glu
2420 2425 2430
Ala Leu Thr Leu Ala Thr Gly Pro Ile Ser Thr Leu Trp Glu Gly
2435 2440 2445
Asn Pro Gly Arg Phe Trp Asn Thr Thr Ile Ala Val Ser Met Ala
2450 2455 2460
Asn Ile Phe Arg Gly Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Gly Leu Leu Phe
2465 2470 2475
Ser Ile Met Lys Asn Thr Thr Asn Thr Arg Arg Gly Thr Gly Asn
2480 2485 2490
Ile Gly Glu Thr Leu Gly Glu Lys Trp Lys Ser Arg Leu Asn Ala
2495 2500 2505
Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Lys Ser Gly Ile Gln
2510 2515 2520
Glu Val Asp Arg Thr Leu Ala Lys Glu Gly Ile Lys Arg Gly Glu
2525 2530 2535
Thr Asp His His Ala Val Ser Arg Gly Ser Ala Lys Leu Arg Trp
2540 2545 2550
Phe Val Glu Arg Asn Met Val Thr Pro Glu Gly Lys Val Val Asp
2555 2560 2565
Leu Gly Cys Gly Arg Gly Gly Trp Ser Tyr Tyr Cys Gly Gly Leu
2570 2575 2580
Lys Asn Val Arg Glu Val Lys Gly Leu Thr Lys Gly Gly Pro Gly
2585 2590 2595
His Glu Glu Pro Ile Pro Met Ser Thr Tyr Gly Trp Asn Leu Val
2600 2605 2610
Arg Leu Gln Ser Gly Val Asp Val Phe Phe Ile Pro Pro Glu Lys
2615 2620 2625
Cys Asp Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Pro Asn Pro
2630 2635 2640
Thr Val Glu Ala Gly Arg Thr Leu Arg Val Leu Asn Leu Val Glu
2645 2650 2655
Asn Trp Leu Asn Asn Asn Thr Gln Phe Cys Ile Lys Val Leu Asn
2660 2665 2670
Pro Tyr Met Pro Ser Val Ile Glu Lys Met Glu Ala Leu Gln Arg
2675 2680 2685
Lys Tyr Gly Gly Ala Leu Val Arg Asn Pro Leu Ser Arg Asn Ser
2690 2695 2700
Thr His Glu Met Tyr Trp Val Ser Asn Ala Ser Gly Asn Ile Val
2705 2710 2715
Ser Ser Val Asn Met Ile Ser Arg Met Leu Ile Asn Arg Phe Thr
2720 2725 2730
Met Arg Tyr Lys Lys Ala Thr Tyr Glu Pro Asp Val Asp Leu Gly
2735 2740 2745
Ser Gly Thr Arg Asn Ile Gly Ile Glu Ser Glu Ile Pro Asn Leu
2750 2755 2760
Asp Ile Ile Gly Lys Arg Ile Glu Lys Ile Lys Gln Glu His Glu
2765 2770 2775
Thr Ser Trp His Tyr Asp Gln Asp His Pro Tyr Lys Thr Trp Ala
2780 2785 2790
Tyr His Gly Ser Tyr Glu Thr Lys Gln Thr Gly Ser Ala Ser Ser
2795 2800 2805
Met Val Asn Gly Val Val Arg Leu Leu Thr Lys Pro Trp Asp Val
2810 2815 2820
Val Pro Met Val Thr Gln Met Ala Met Thr Asp Thr Thr Pro Phe
2825 2830 2835
Gly Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg Thr Gln
2840 2845 2850
Glu Pro Lys Glu Gly Thr Lys Lys Leu Met Lys Ile Thr Ala Glu
2855 2860 2865
Trp Leu Trp Lys Glu Leu Gly Lys Lys Lys Thr Pro Arg Met Cys
2870 2875 2880
Thr Arg Glu Glu Phe Thr Arg Lys Val Arg Ser Asn Ala Ala Leu
2885 2890 2895
Gly Ala Ile Phe Thr Asp Glu Asn Lys Trp Lys Ser Ala Arg Glu
2900 2905 2910
Ala Val Glu Asp Ser Arg Phe Trp Glu Leu Val Asp Lys Glu Arg
2915 2920 2925
Asn Leu His Leu Glu Gly Lys Cys Glu Thr Cys Val Tyr Asn Met
2930 2935 2940
Met Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Gly Glu Phe Gly Lys Ala Lys
2945 2950 2955
Gly Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg Phe Leu
2960 2965 2970
Glu Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp Phe Ser
2975 2980 2985
Arg Glu Asn Ser Leu Ser Gly Val Glu Gly Glu Gly Leu His Lys
2990 2995 3000
Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Val Ser Lys Lys Glu Gly Gly Ala
3005 3010 3015
Met Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile Thr Leu
3020 3025 3030
Glu Asp Leu Lys Asn Glu Glu Met Val Thr Asn His Met Glu Gly
3035 3040 3045
Glu His Lys Lys Leu Ala Glu Ala Ile Phe Lys Leu Thr Tyr Gln
3050 3055 3060
Asn Lys Val Val Arg Val Gln Arg Pro Thr Pro Arg Gly Thr Val
3065 3070 3075
Met Asp Ile Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly Gln Val
3080 3085 3090
Gly Thr Tyr Gly Leu Asn Thr Phe Thr Asn Met Glu Ala Gln Leu
3095 3100 3105
Ile Arg Gln Met Glu Gly Glu Gly Val Phe Lys Ser Ile Gln His
3110 3115 3120
Leu Thr Ile Thr Glu Glu Ile Ala Val Gln Asn Trp Leu Ala Arg
3125 3130 3135
Val Gly Arg Glu Arg Leu Ser Arg Met Ala Ile Ser Gly Asp Asp
3140 3145 3150
Cys Val Val Lys Pro Leu Asp Asp Arg Phe Ala Ser Ala Leu Thr
3155 3160 3165
Ala Leu Asn Asp Met Gly Lys Ile Arg Lys Asp Ile Gln Gln Trp
3170 3175 3180
Glu Pro Ser Arg Gly Trp Asn Asp Trp Thr Gln Val Pro Phe Cys
3185 3190 3195
Ser His His Phe His Glu Leu Ile Met Lys Asp Gly Arg Val Leu
3200 3205 3210
Val Val Pro Cys Arg Asn Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg Ala Arg
3215 3220 3225
Ile Ser Gln Gly Ala Gly Trp Ser Leu Arg Glu Thr Ala Cys Leu
3230 3235 3240
Gly Lys Ser Tyr Ala Gln Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe His Arg
3245 3250 3255
Arg Asp Leu Arg Leu Ala Ala Asn Ala Ile Cys Ser Ala Val Pro
3260 3265 3270
Ser His Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile His Ala
3275 3280 3285
Lys His Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Thr Val Trp Asn
3290 3295 3300
Arg Val Trp Ile Gln Glu Asn Pro Trp Met Glu Asp Lys Thr Pro
3305 3310 3315
Val Glu Ser Trp Glu Glu Ile Pro Tyr Leu Gly Lys Arg Glu Asp
3320 3325 3330
Gln Trp Cys Gly Ser Leu Ile Gly Leu Thr Ser Arg Ala Thr Trp
3335 3340 3345
Ala Lys Asn Ile Gln Ala Ala Ile Asn Gln Val Arg Ser Leu Ile
3350 3355 3360
Gly Asn Glu Glu Tyr Thr Asp Tyr Met Pro Ser Met Lys Arg Phe
3365 3370 3375
Arg Arg Glu Glu Glu Glu Ala Gly Val Leu Trp
3380 3385
<210> 7
<211> 10723
<212> DNA
<213> 嵌合登革热血清型2/4 (MVS)(chimeric dengue seroytpe 2/4 (MVS))
<220>
<221> r
<222> (3773)..(3773)
<223> a或g
<400> 7
agttgttagt ctacgtggac cgacaaagac agattctttg agggagctaa gctcaatgta 60
gttctaacag ttttttaatt agagagcaga tctctgatga ataaccaacg gaaaaaggcg 120
aaaaacacgc ctttcaatat gctgaaacgc gagagaaacc gcgtgtcgac tgtgcaacag 180
ctgacaaaga gattctcact tggaatgctg cagggacgag gacctttaaa actgttcatg 240
gccctggtgg cgttccttcg tttcctaaca atcccaccaa cagcagggat attgaagaga 300
tggggaacaa ttaaaaaatc aaaagctatt aatgttttga gagggttcag gaaagagatt 360
ggaaggatgc tgaacatctt gaataggaga cgcagctctg caggcatgat cattatgctg 420
attccaacag tgatggcgtt ccatttaacc acgcgtgatg gcgaacccct catgatagtg 480
gcaaaacatg aaagggggag acctctcttg tttaagacaa cagaggggat caacaaatgc 540
actctcattg ccatggactt gggtgaaatg tgtgaggaca ctgtcacgta taaatgcccc 600
ttactggtca ataccgaacc tgaagacatt gattgctggt gcaatctcac gtctacctgg 660
gtcatgtatg ggacatgcac ccagagcgga gaacggagac gagagaagcg ctcagtagct 720
ttaacaccac attcaggaat gggattggaa acaagagctg agacatggat gtcatcggaa 780
ggggcttgga agcatgctca gagagtagag agctggatac tcagaaaccc aggattcgcg 840
ctcttggcag gatttatggc ttatatgatt gggcaaacag gaatccagcg aactgtcttc 900
tttgtcctaa tgatgctggt cgccccatcc tacggaatgc gatgcgtagg agtaggaaac 960
agagactttg tggaaggagt ctcaggtgga gcatgggtcg atctggtgct agaacatgga 1020
ggatgcgtca caaccatggc ccagggaaaa ccaaccttgg attttgaact gactaagaca 1080
acagccaagg aagtggctct gttaagaacc tattgcattg aagcctcaat atcaaacata 1140
accacggcaa caagatgtcc aacgcaagga gagccttatc taaaagagga acaagaccaa 1200
cagtacattt gccggagaga tgtggtagac agagggtggg gcaatggctg tggcttgttt 1260
ggaaaaggag gagttgtgac atgtgcgaag ttttcatgtt cggggaagat aacaggcaat 1320
ttggtccaaa ttgagaacct tgaatacaca gtggttgtaa cagtccacaa tggagacacc 1380
catgcagtag gaaatgacac gtccaatcat ggagttacag ccacgataac tcccaggtca 1440
ccatcggtgg aagtcaaatt gccggactat ggagaactaa cactcgattg tgaacccagg 1500
tctggaattg actttaatga gatgattctg atgaaaatga aaaagaaaac atggcttgtg 1560
cataagcaat ggtttttgga tctacctcta ccatggacag caggagcaga cacatcagag 1620
gttcactgga attacaaaga gagaatggtg acatttaagg ttcctcatgc caagagacag 1680
gatgtgacag tgctgggatc tcaggaagga gccatgcatt ctgccctcgc tggagccaca 1740
gaagtggact ccggtgatgg aaatcacatg tttgcaggac atctcaagtg caaagtccgt 1800
atggagaaat tgagaatcaa gggaatgtca tacacgatgt gttcaggaaa gttctcaatt 1860
gacaaagaga tggcagaaac acagcatggg acaacagtgg tgaaagtcaa gtatgaaggt 1920
gctggagctc cgtgtaaagt ccccatagag ataagagatg tgaacaagga aaaagtggtt 1980
gggcgtatca tctcatccac ccctttggct gagaatacca acagtgtaac caacatagag 2040
ttagaacccc cctttgggga cagctacata gtgataggtg ttggaaacag tgcattaaca 2100
ctccattggt tcaggaaagg gagttccatt ggcaagatgt ttgagtccac atacagaggt 2160
gcaaaacgaa tggccattct aggtgaaaca gcttgggatt ttggttccgt tggtggactg 2220
ttcacatcat tgggaaaggc tgtgcaccag gtttttggaa gtgtgtatac aaccctgttt 2280
ggaggagtct catggatgat tagaatccta attgggttcc tagtgttgtg gattggcacg 2340
aactcaagga acacttcaat ggctatgacg tgcatagctg ccggcattgt gacactgtat 2400
ttgggggtca tggtgcaggc cgatagtggt tgcgttgtga gctggaaaaa caaagaactg 2460
aaatgtggca gtgggatttt catcacagac aacgtgcaca catggacaga acaatacaag 2520
ttccaaccag aatccccttc aaaactagct tcagctatcc agaaagccca tgaagaggac 2580
atttgtggaa tccgctcagt aacaagactg gagaatctga tgtggaaaca aataacacca 2640
gaattgaatc acattctatc agaaaatgag gtgaagttaa ctattatgac aggagacatc 2700
aaaggaatca tgcaggcagg aaaacgatct ctgcggcctc agcccactga gctgaagtat 2760
tcatggaaaa catggggcaa agcaaaaatg ctctctacag agtctcataa ccagaccttt 2820
ctcattgatg gccccgaaac agcagaatgc cccaacacaa atagagcttg gaattcgttg 2880
gaagttgaag actatggctt tggagtattc accaccaata tatggctaaa attgaaagaa 2940
aaacaggatg tattctgcga ctcaaaactc atgtcagcgg ccataaaaga caacagagcc 3000
gtccatgccg atatgggtta ttggatagaa agtgcactca atgacacatg gaagatagag 3060
aaagcctctt tcattgaagt taaaaactgc cactggccaa aatcacacac cctctggagc 3120
aatggagtgc tagaaagtga gatgataatt ccaaagaatc tcgctggacc agtgtctcaa 3180
cacaactata gaccaggcta ccatacacaa ataacaggac catggcatct aggtaagctt 3240
gagatggact ttgatttctg tgatggaaca acagtggtag tgactgagga ctgcggaaat 3300
agaggaccct ctttgagaac aaccactgcc tctggaaaac tcataacaga atggtgctgc 3360
cgatcttgca cattaccacc gctaagatac agaggtgagg atgggtgctg gtacgggatg 3420
gaaatcagac cattgaagga gaaagaagag aatttggtca actccttggt cacagctgga 3480
catgggcagg tcgacaactt ttcactagga gtcttgggaa tggcattgtt cctggaggaa 3540
atgcttagga cccgagtagg aacgaaacat gcaatactac tagttgcagt ttcttttgtg 3600
acattgatca cagggaacat gtcctttaga gacctgggaa gagtgatggt tatggtaggc 3660
gccactatga cgggtgacat aggtatgggc gtgacttatc ttgccctact agcagccttc 3720
aaagtcagac caacttttgc agctggacta ctcttgagaa agctgacctc carggaattg 3780
atgatgacta ctataggaat tgtactcctc tcccagagca ccataccaga gaccattctt 3840
gagttgactg atgcgttagc cttaggcatg atggtcctca aaatggtgag aaatatggaa 3900
aagtatcaat tggcagtgac tatcatggct atcttgtgcg tcccaaacgc agtgatatta 3960
caaaacgcat ggaaagtgag ttgcacaata ttggcagtgg tgtccgtttc cccactgttc 4020
ttaacatcct cacagcaaaa aacagattgg ataccattag cattgacgat caaaggtctc 4080
aatccaacag ctatttttct aacaaccctc tcaagaacca gcaagaaaag gagctggcca 4140
ttaaatgagg ctatcatggc agtcgggatg gtgagcattt tagccagttc tctcctaaaa 4200
aatgatattc ccatgacagg accattagtg gctggagggc tcctcactgt gtgctacgtg 4260
ctcactggac gatcggccga tttggaactg gagagagcag ccgatgtcaa atgggaagac 4320
caggcagaga tatcaggaag cagtccaatc ctgtcaataa caatatcaga agatggtagc 4380
atgtcgataa aaaatgaaga ggaagaacaa acactgacca tactcattag aacaggattg 4440
ctggtgatct caggactttt tcctgtatca ataccaatca cggcagcagc atggtacctg 4500
tgggaagtga agaaacaacg ggccggagta ttgtgggatg ttccttcacc cccacccatg 4560
ggaaaggctg aactggaaga tggagcctat agaattaagc aaaaagggat tcttggatat 4620
tcccagatcg gagccggagt ttacaaagaa ggaacattcc atacaatgtg gcatgtcaca 4680
cgtggcgctg ttctaatgca taaaggaaag aggattgaac catcatgggc ggacgtcaag 4740
aaagacctaa tatcatatgg aggaggctgg aagttagaag gagaatggaa ggaaggagaa 4800
gaagtccagg tattggcact ggagcctgga aaaaatccaa gagccgtcca aacgaaacct 4860
ggtcttttca aaaccaacgc cggaacaata ggtgctgtat ctctggactt ttctcctgga 4920
acgtcaggat ctccaattat cgacaaaaaa ggaaaagttg tgggtcttta tggtaatggt 4980
gttgttacaa ggagtggagc atatgtgagt gctatagccc agactgaaaa aagcattgaa 5040
gacaacccag agatcgaaga tgacattttc cgaaagagaa gactgaccat catggacctc 5100
cacccaggag cgggaaagac gaagagatac cttccggcca tagtcagaga agctataaaa 5160
cggggtttga gaacattaat cttggccccc actagagttg tggcagctga aatggaggaa 5220
gcccttagag gacttccaat aagataccag accccagcca tcagagctgt gcacaccggg 5280
cgggagattg tggacctaat gtgtcatgcc acatttacca tgaggctgct atcaccagtt 5340
agagtgccaa actacaacct gattatcatg gacgaagccc atttcacaga tccagcaagt 5400
atagcagcta gaggatacat ctcaactcga gtggagatgg gtgaggcagc tgggattttt 5460
atgacagcca ctcccccggg aagcagagac ccatttcctc agagcaatgc accaatcata 5520
gatgaagaaa gagaaatccc tgaacgctcg tggaattccg gacatgaatg ggtcacggat 5580
tttaaaggga agactgtttg gttcgttcca agtataaaag caggaaatga tatagcagct 5640
tgcctgagga aaaatggaaa gaaagtgata caactcagta ggaagacctt tgattctgag 5700
tatgtcaaga ctagaaccaa tgattgggac ttcgtggtta caactgacat ttcagaaatg 5760
ggtgccaatt tcaaggctga gagggttata gaccccagac gctgcatgaa accagtcata 5820
ctaacagatg gtgaagagcg ggtgattctg gcaggaccta tgccagtgac ccactctagt 5880
gcagcacaaa gaagagggag aataggaaga aatccaaaaa atgagaatga ccagtacata 5940
tacatggggg aacctctgga aaatgatgaa gactgtgcac actggaaaga agctaaaatg 6000
ctcctagata acatcaacac gccagaagga atcattccta gcatgttcga accagagcgt 6060
gaaaaggtgg atgccattga tggcgaatac cgcttgagag gagaagcaag gaaaaccttt 6120
gtagacttaa tgagaagagg agacctacca gtctggttgg cctacagagt ggcagctgaa 6180
ggcatcaact acgcagacag aaggtggtgt tttgatggag tcaagaacaa ccaaatccta 6240
gaagaaaacg tggaagttga aatctggaca aaagaagggg aaaggaagaa attgaaaccc 6300
agatggttgg atgctaggat ctattctgac ccactggcgc taaaagaatt taaggaattt 6360
gcagccggaa gaaagtctct gaccctgaac ctaatcacag aaatgggtag gctcccaacc 6420
ttcatgactc agaaggtaag agacgcactg gacaacttag cagtgctgca cacggctgag 6480
gcaggtggaa gggcgtacaa ccatgctctc agtgaactgc cggagaccct ggagacattg 6540
cttttactga cacttctggc tacagtcacg ggagggatct ttttattctt gatgagcgca 6600
aggggcatag ggaagatgac cctgggaatg tgctgcataa tcacggctag catcctccta 6660
tggtacgcac aaatacagcc acactggata gcagcttcaa taatactgga gttttttctc 6720
atagttttgc ttattccaga acctgaaaaa cagagaacac cccaagacaa ccaactgacc 6780
tacgttgtca tagccatcct cacagtggtg gccgcaacca tggcaaacga gatgggtttc 6840
ctagaaaaaa cgaagaaaga tctcggattg ggaagcattg caacccagca acccgagagc 6900
aacatcctgg acatagatct acgtcctgca tcagcatgga cgctgtatgc cgtggccaca 6960
acatttgtta caccaatgtt gagacatagc attgaaaatt cctcagtgaa tgtgtcccta 7020
acagccatag ccaaccaagc cacagtgtta atgggtctcg ggaaaggatg gccattgtca 7080
aagatggaca tcggagttcc ccttctcgcc attggatgct actcacaagt caaccccata 7140
actctcacag cagctctttt cttattggta gcacattatg ccatcatagg gccaggactc 7200
caagcaaaag caaccagaga agctcagaaa agagcagcgg cgggcatcat gaaaaaccca 7260
actgtcgatg gaataacagt gattgaccta gatccaatac cttatgatcc aaagtttgaa 7320
aagcagttgg gacaagtaat gctcctagtc ctctgcgtga ctcaagtatt gatgatgagg 7380
actacatggg ctctgtgtga ggctttaacc ttagctaccg ggcccatctc cacattgtgg 7440
gaaggaaatc cagggaggtt ttggaacact accattgcgg tgtcaatggc taacattttt 7500
agagggagtt acttggccgg agctggactt ctcttttcta ttatgaagaa cacaaccaac 7560
acaagaaggg gaactggcaa cataggagag acgcttggag agaaatggaa aagccgattg 7620
aacgcattgg gaaaaagtga attccagatc tacaagaaaa gtggaatcca ggaagtggat 7680
agaaccttag caaaagaagg cattaaaaga ggagaaacgg accatcacgc tgtgtcgcga 7740
ggctcagcaa aactgagatg gttcgttgag agaaacatgg tcacaccaga agggaaagta 7800
gtggacctcg gttgtggcag aggaggctgg tcatactatt gtggaggact aaagaatgta 7860
agagaagtca aaggcctaac aaaaggagga ccaggacacg aagaacccat ccccatgtca 7920
acatatgggt ggaatctagt gcgtcttcaa agtggagttg acgttttctt catcccgcca 7980
gaaaagtgtg acacattatt gtgtgacata ggggagtcat caccaaatcc cacagtggaa 8040
gcaggacgaa cactcagagt ccttaactta gtagaaaatt ggttgaacaa caacactcaa 8100
ttttgcataa aggttctcaa cccatatatg ccctcagtca tagaaaaaat ggaagcacta 8160
caaaggaaat atggaggagc cttagtgagg aatccactct cacgaaactc cacacatgag 8220
atgtactggg tatccaatgc ttccgggaac atagtgtcat cagtgaacat gatttcaagg 8280
atgttgatca acagatttac aatgagatac aagaaagcca cttacgagcc ggatgttgac 8340
ctcggaagcg gaacccgtaa catcgggatt gaaagtgaga taccaaacct agatataatt 8400
gggaaaagaa tagaaaaaat aaagcaagag catgaaacat catggcacta tgaccaagac 8460
cacccataca aaacgtgggc ataccatggt agctatgaaa caaaacagac tggatcagca 8520
tcatccatgg tcaacggagt ggtcaggctg ctgacaaaac cttgggacgt cgtccccatg 8580
gtgacacaga tggcaatgac agacacgact ccatttggac aacagcgcgt ttttaaagag 8640
aaagtggaca cgagaaccca agaaccgaaa gaaggcacga agaaactaat gaaaataaca 8700
gcagagtggc tttggaaaga attagggaag aaaaagacac ccaggatgtg caccagagaa 8760
gaattcacaa gaaaggtgag aagcaatgca gccttggggg ccatattcac tgatgagaac 8820
aagtggaagt cggcacgtga ggctgttgaa gatagtaggt tttgggagct ggttgacaag 8880
gaaaggaatc tccatcttga aggaaagtgt gaaacatgtg tgtacaacat gatgggaaaa 8940
agagagaaga agctagggga attcggcaag gcaaaaggca gcagagccat atggtacatg 9000
tggcttggag cacgcttctt agagtttgaa gccctaggat tcttaaatga agatcactgg 9060
ttctccagag agaactccct gagtggagtg gaaggagaag ggctgcacaa gctaggttac 9120
attctaagag acgtgagcaa gaaagaggga ggagcaatgt atgccgatga caccgcagga 9180
tgggatacaa gaatcacact agaagaccta aaaaatgaag aaatggtaac aaaccacatg 9240
gaaggagaac acaagaaact agccgaggcc attttcaaac taacgtacca aaacaaggtg 9300
gtgcgtgtgc aaagaccaac accaagaggc acagtaatgg acatcatatc gagaagagac 9360
caaagaggta gtggacaagt tggcacctat ggactcaata ctttcaccaa tatggaagcc 9420
caactaatca gacagatgga gggagaagga gtctttaaaa gcattcagca cctaacaatc 9480
acagaagaaa tcgctgtgca aaactggtta gcaagagtgg ggcgcgaaag gttatcaaga 9540
atggccatca gtggagatga ttgtgttgtg aaacctttag atgacaggtt cgcaagcgct 9600
ttaacagctc taaatgacat gggaaagatt aggaaagaca tacaacaatg ggaaccttca 9660
agaggatgga atgattggac acaagtgccc ttctgttcac accatttcca tgagttaatc 9720
atgaaagacg gtcgcgtact cgttgttccc tgtagaaacc aagatgaact gattggcaga 9780
gcccgaatct cccaaggagc agggtggtct ttgcgggaga cggcctgttt ggggaagtct 9840
tacgcccaaa tgtggagctt gatgtacttc cacagacgcg acctcaggct ggcggcaaat 9900
gctatttgct cggcagtacc atcacattgg gttccaacaa gtcgaacaac ctggtccata 9960
catgctaaac atgaatggat gacaacggaa gacatgctga cagtctggaa cagggtgtgg 10020
attcaagaaa acccatggat ggaagacaaa actccagtgg aatcatggga ggaaatccca 10080
tacttgggga aaagagaaga ccaatggtgc ggctcattga ttgggttaac aagcagggcc 10140
acctgggcaa agaacatcca agcagcaata aatcaagtta gatcccttat aggcaatgaa 10200
gaatacacag attacatgcc atccatgaaa agattcagaa gagaagagga agaagcagga 10260
gttctgtggt agaaagcaaa actaacatga aacaaggcta gaagtcaggt cggattaagc 10320
catagtacgg aaaaaactat gctacctgtg agccccgtcc aaggacgtta aaagaagtca 10380
ggccatcata aatgccatag cttgagtaaa ctatgcagcc tgtagctcca cctgagaagg 10440
tgtaaaaaat ccgggaggcc acaaaccatg gaagctgtac gcatggcgta gtggactagc 10500
ggttagagga gacccctccc ttacaaatcg cagcaacaat gggggcccaa ggcgagatga 10560
agctgtagtc tcgctggaag gactagaggt tagaggagac ccccccgaaa caaaaaacag 10620
catattgacg ctgggaaaga ccagagatcc tgctgtctcc tcagcatcat tccaggcaca 10680
gaacgccaga aaatggaatg gtgctgttga atcaacaggt tct 10723
<210> 8
<211> 3391
<212> PRT
<213> 嵌合登革热血清型2/4 (MVS)(chimeric dengue serotype 2/4 (MVS))
<220>
<221> Xaa
<222> (1226)..(1226)
<223> Arg或Lys
<400> 8
Met Asn Asn Gln Arg Lys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Phe Asn Met Leu
1 5 10 15
Lys Arg Glu Arg Asn Arg Val Ser Thr Val Gln Gln Leu Thr Lys Arg
20 25 30
Phe Ser Leu Gly Met Leu Gln Gly Arg Gly Pro Leu Lys Leu Phe Met
35 40 45
Ala Leu Val Ala Phe Leu Arg Phe Leu Thr Ile Pro Pro Thr Ala Gly
50 55 60
Ile Leu Lys Arg Trp Gly Thr Ile Lys Lys Ser Lys Ala Ile Asn Val
65 70 75 80
Leu Arg Gly Phe Arg Lys Glu Ile Gly Arg Met Leu Asn Ile Leu Asn
85 90 95
Arg Arg Arg Ser Ser Ala Gly Met Ile Ile Met Leu Ile Pro Thr Val
100 105 110
Met Ala Phe His Leu Thr Thr Arg Asp Gly Glu Pro Leu Met Ile Val
115 120 125
Ala Lys His Glu Arg Gly Arg Pro Leu Leu Phe Lys Thr Thr Glu Gly
130 135 140
Ile Asn Lys Cys Thr Leu Ile Ala Met Asp Leu Gly Glu Met Cys Glu
145 150 155 160
Asp Thr Val Thr Tyr Lys Cys Pro Leu Leu Val Asn Thr Glu Pro Glu
165 170 175
Asp Ile Asp Cys Trp Cys Asn Leu Thr Ser Thr Trp Val Met Tyr Gly
180 185 190
Thr Cys Thr Gln Ser Gly Glu Arg Arg Arg Glu Lys Arg Ser Val Ala
195 200 205
Leu Thr Pro His Ser Gly Met Gly Leu Glu Thr Arg Ala Glu Thr Trp
210 215 220
Met Ser Ser Glu Gly Ala Trp Lys His Ala Gln Arg Val Glu Ser Trp
225 230 235 240
Ile Leu Arg Asn Pro Gly Phe Ala Leu Leu Ala Gly Phe Met Ala Tyr
245 250 255
Met Ile Gly Gln Thr Gly Ile Gln Arg Thr Val Phe Phe Val Leu Met
260 265 270
Met Leu Val Ala Pro Ser Tyr Gly Met Arg Cys Val Gly Val Gly Asn
275 280 285
Arg Asp Phe Val Glu Gly Val Ser Gly Gly Ala Trp Val Asp Leu Val
290 295 300
Leu Glu His Gly Gly Cys Val Thr Thr Met Ala Gln Gly Lys Pro Thr
305 310 315 320
Leu Asp Phe Glu Leu Thr Lys Thr Thr Ala Lys Glu Val Ala Leu Leu
325 330 335
Arg Thr Tyr Cys Ile Glu Ala Ser Ile Ser Asn Ile Thr Thr Ala Thr
340 345 350
Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Pro Tyr Leu Lys Glu Glu Gln Asp Gln
355 360 365
Gln Tyr Ile Cys Arg Arg Asp Val Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly
370 375 380
Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Gly Val Val Thr Cys Ala Lys Phe Ser
385 390 395 400
Cys Ser Gly Lys Ile Thr Gly Asn Leu Val Gln Ile Glu Asn Leu Glu
405 410 415
Tyr Thr Val Val Val Thr Val His Asn Gly Asp Thr His Ala Val Gly
420 425 430
Asn Asp Thr Ser Asn His Gly Val Thr Ala Thr Ile Thr Pro Arg Ser
435 440 445
Pro Ser Val Glu Val Lys Leu Pro Asp Tyr Gly Glu Leu Thr Leu Asp
450 455 460
Cys Glu Pro Arg Ser Gly Ile Asp Phe Asn Glu Met Ile Leu Met Lys
465 470 475 480
Met Lys Lys Lys Thr Trp Leu Val His Lys Gln Trp Phe Leu Asp Leu
485 490 495
Pro Leu Pro Trp Thr Ala Gly Ala Asp Thr Ser Glu Val His Trp Asn
500 505 510
Tyr Lys Glu Arg Met Val Thr Phe Lys Val Pro His Ala Lys Arg Gln
515 520 525
Asp Val Thr Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Met His Ser Ala Leu
530 535 540
Ala Gly Ala Thr Glu Val Asp Ser Gly Asp Gly Asn His Met Phe Ala
545 550 555 560
Gly His Leu Lys Cys Lys Val Arg Met Glu Lys Leu Arg Ile Lys Gly
565 570 575
Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser Ile Asp Lys Glu Met
580 585 590
Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys Val Lys Tyr Glu Gly
595 600 605
Ala Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile Arg Asp Val Asn Lys
610 615 620
Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr Pro Leu Ala Glu Asn
625 630 635 640
Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser
645 650 655
Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asn Ser Ala Leu Thr Leu His Trp Phe
660 665 670
Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys Met Phe Glu Ser Thr Tyr Arg Gly
675 680 685
Ala Lys Arg Met Ala Ile Leu Gly Glu Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser
690 695 700
Val Gly Gly Leu Phe Thr Ser Leu Gly Lys Ala Val His Gln Val Phe
705 710 715 720
Gly Ser Val Tyr Thr Thr Leu Phe Gly Gly Val Ser Trp Met Ile Arg
725 730 735
Ile Leu Ile Gly Phe Leu Val Leu Trp Ile Gly Thr Asn Ser Arg Asn
740 745 750
Thr Ser Met Ala Met Thr Cys Ile Ala Ala Gly Ile Val Thr Leu Tyr
755 760 765
Leu Gly Val Met Val Gln Ala Asp Ser Gly Cys Val Val Ser Trp Lys
770 775 780
Asn Lys Glu Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ile Phe Ile Thr Asp Asn Val
785 790 795 800
His Thr Trp Thr Glu Gln Tyr Lys Phe Gln Pro Glu Ser Pro Ser Lys
805 810 815
Leu Ala Ser Ala Ile Gln Lys Ala His Glu Glu Asp Ile Cys Gly Ile
820 825 830
Arg Ser Val Thr Arg Leu Glu Asn Leu Met Trp Lys Gln Ile Thr Pro
835 840 845
Glu Leu Asn His Ile Leu Ser Glu Asn Glu Val Lys Leu Thr Ile Met
850 855 860
Thr Gly Asp Ile Lys Gly Ile Met Gln Ala Gly Lys Arg Ser Leu Arg
865 870 875 880
Pro Gln Pro Thr Glu Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala
885 890 895
Lys Met Leu Ser Thr Glu Ser His Asn Gln Thr Phe Leu Ile Asp Gly
900 905 910
Pro Glu Thr Ala Glu Cys Pro Asn Thr Asn Arg Ala Trp Asn Ser Leu
915 920 925
Glu Val Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Val Phe Thr Thr Asn Ile Trp Leu
930 935 940
Lys Leu Lys Glu Lys Gln Asp Val Phe Cys Asp Ser Lys Leu Met Ser
945 950 955 960
Ala Ala Ile Lys Asp Asn Arg Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp
965 970 975
Ile Glu Ser Ala Leu Asn Asp Thr Trp Lys Ile Glu Lys Ala Ser Phe
980 985 990
Ile Glu Val Lys Asn Cys His Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Ser
995 1000 1005
Asn Gly Val Leu Glu Ser Glu Met Ile Ile Pro Lys Asn Leu Ala
1010 1015 1020
Gly Pro Val Ser Gln His Asn Tyr Arg Pro Gly Tyr His Thr Gln
1025 1030 1035
Ile Thr Gly Pro Trp His Leu Gly Lys Leu Glu Met Asp Phe Asp
1040 1045 1050
Phe Cys Asp Gly Thr Thr Val Val Val Thr Glu Asp Cys Gly Asn
1055 1060 1065
Arg Gly Pro Ser Leu Arg Thr Thr Thr Ala Ser Gly Lys Leu Ile
1070 1075 1080
Thr Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Leu Pro Pro Leu Arg Tyr
1085 1090 1095
Arg Gly Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Leu
1100 1105 1110
Lys Glu Lys Glu Glu Asn Leu Val Asn Ser Leu Val Thr Ala Gly
1115 1120 1125
His Gly Gln Val Asp Asn Phe Ser Leu Gly Val Leu Gly Met Ala
1130 1135 1140
Leu Phe Leu Glu Glu Met Leu Arg Thr Arg Val Gly Thr Lys His
1145 1150 1155
Ala Ile Leu Leu Val Ala Val Ser Phe Val Thr Leu Ile Thr Gly
1160 1165 1170
Asn Met Ser Phe Arg Asp Leu Gly Arg Val Met Val Met Val Gly
1175 1180 1185
Ala Thr Met Thr Gly Asp Ile Gly Met Gly Val Thr Tyr Leu Ala
1190 1195 1200
Leu Leu Ala Ala Phe Lys Val Arg Pro Thr Phe Ala Ala Gly Leu
1205 1210 1215
Leu Leu Arg Lys Leu Thr Ser Xaa Glu Leu Met Met Thr Thr Ile
1220 1225 1230
Gly Ile Val Leu Leu Ser Gln Ser Thr Ile Pro Glu Thr Ile Leu
1235 1240 1245
Glu Leu Thr Asp Ala Leu Ala Leu Gly Met Met Val Leu Lys Met
1250 1255 1260
Val Arg Asn Met Glu Lys Tyr Gln Leu Ala Val Thr Ile Met Ala
1265 1270 1275
Ile Leu Cys Val Pro Asn Ala Val Ile Leu Gln Asn Ala Trp Lys
1280 1285 1290
Val Ser Cys Thr Ile Leu Ala Val Val Ser Val Ser Pro Leu Phe
1295 1300 1305
Leu Thr Ser Ser Gln Gln Lys Thr Asp Trp Ile Pro Leu Ala Leu
1310 1315 1320
Thr Ile Lys Gly Leu Asn Pro Thr Ala Ile Phe Leu Thr Thr Leu
1325 1330 1335
Ser Arg Thr Ser Lys Lys Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Ala Ile
1340 1345 1350
Met Ala Val Gly Met Val Ser Ile Leu Ala Ser Ser Leu Leu Lys
1355 1360 1365
Asn Asp Ile Pro Met Thr Gly Pro Leu Val Ala Gly Gly Leu Leu
1370 1375 1380
Thr Val Cys Tyr Val Leu Thr Gly Arg Ser Ala Asp Leu Glu Leu
1385 1390 1395
Glu Arg Ala Ala Asp Val Lys Trp Glu Asp Gln Ala Glu Ile Ser
1400 1405 1410
Gly Ser Ser Pro Ile Leu Ser Ile Thr Ile Ser Glu Asp Gly Ser
1415 1420 1425
Met Ser Ile Lys Asn Glu Glu Glu Glu Gln Thr Leu Thr Ile Leu
1430 1435 1440
Ile Arg Thr Gly Leu Leu Val Ile Ser Gly Leu Phe Pro Val Ser
1445 1450 1455
Ile Pro Ile Thr Ala Ala Ala Trp Tyr Leu Trp Glu Val Lys Lys
1460 1465 1470
Gln Arg Ala Gly Val Leu Trp Asp Val Pro Ser Pro Pro Pro Met
1475 1480 1485
Gly Lys Ala Glu Leu Glu Asp Gly Ala Tyr Arg Ile Lys Gln Lys
1490 1495 1500
Gly Ile Leu Gly Tyr Ser Gln Ile Gly Ala Gly Val Tyr Lys Glu
1505 1510 1515
Gly Thr Phe His Thr Met Trp His Val Thr Arg Gly Ala Val Leu
1520 1525 1530
Met His Lys Gly Lys Arg Ile Glu Pro Ser Trp Ala Asp Val Lys
1535 1540 1545
Lys Asp Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Lys Leu Glu Gly Glu
1550 1555 1560
Trp Lys Glu Gly Glu Glu Val Gln Val Leu Ala Leu Glu Pro Gly
1565 1570 1575
Lys Asn Pro Arg Ala Val Gln Thr Lys Pro Gly Leu Phe Lys Thr
1580 1585 1590
Asn Ala Gly Thr Ile Gly Ala Val Ser Leu Asp Phe Ser Pro Gly
1595 1600 1605
Thr Ser Gly Ser Pro Ile Ile Asp Lys Lys Gly Lys Val Val Gly
1610 1615 1620
Leu Tyr Gly Asn Gly Val Val Thr Arg Ser Gly Ala Tyr Val Ser
1625 1630 1635
Ala Ile Ala Gln Thr Glu Lys Ser Ile Glu Asp Asn Pro Glu Ile
1640 1645 1650
Glu Asp Asp Ile Phe Arg Lys Arg Arg Leu Thr Ile Met Asp Leu
1655 1660 1665
His Pro Gly Ala Gly Lys Thr Lys Arg Tyr Leu Pro Ala Ile Val
1670 1675 1680
Arg Glu Ala Ile Lys Arg Gly Leu Arg Thr Leu Ile Leu Ala Pro
1685 1690 1695
Thr Arg Val Val Ala Ala Glu Met Glu Glu Ala Leu Arg Gly Leu
1700 1705 1710
Pro Ile Arg Tyr Gln Thr Pro Ala Ile Arg Ala Val His Thr Gly
1715 1720 1725
Arg Glu Ile Val Asp Leu Met Cys His Ala Thr Phe Thr Met Arg
1730 1735 1740
Leu Leu Ser Pro Val Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Ile Met
1745 1750 1755
Asp Glu Ala His Phe Thr Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly
1760 1765 1770
Tyr Ile Ser Thr Arg Val Glu Met Gly Glu Ala Ala Gly Ile Phe
1775 1780 1785
Met Thr Ala Thr Pro Pro Gly Ser Arg Asp Pro Phe Pro Gln Ser
1790 1795 1800
Asn Ala Pro Ile Ile Asp Glu Glu Arg Glu Ile Pro Glu Arg Ser
1805 1810 1815
Trp Asn Ser Gly His Glu Trp Val Thr Asp Phe Lys Gly Lys Thr
1820 1825 1830
Val Trp Phe Val Pro Ser Ile Lys Ala Gly Asn Asp Ile Ala Ala
1835 1840 1845
Cys Leu Arg Lys Asn Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys
1850 1855 1860
Thr Phe Asp Ser Glu Tyr Val Lys Thr Arg Thr Asn Asp Trp Asp
1865 1870 1875
Phe Val Val Thr Thr Asp Ile Ser Glu Met Gly Ala Asn Phe Lys
1880 1885 1890
Ala Glu Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Met Lys Pro Val Ile
1895 1900 1905
Leu Thr Asp Gly Glu Glu Arg Val Ile Leu Ala Gly Pro Met Pro
1910 1915 1920
Val Thr His Ser Ser Ala Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg
1925 1930 1935
Asn Pro Lys Asn Glu Asn Asp Gln Tyr Ile Tyr Met Gly Glu Pro
1940 1945 1950
Leu Glu Asn Asp Glu Asp Cys Ala His Trp Lys Glu Ala Lys Met
1955 1960 1965
Leu Leu Asp Asn Ile Asn Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Ser Met
1970 1975 1980
Phe Glu Pro Glu Arg Glu Lys Val Asp Ala Ile Asp Gly Glu Tyr
1985 1990 1995
Arg Leu Arg Gly Glu Ala Arg Lys Thr Phe Val Asp Leu Met Arg
2000 2005 2010
Arg Gly Asp Leu Pro Val Trp Leu Ala Tyr Arg Val Ala Ala Glu
2015 2020 2025
Gly Ile Asn Tyr Ala Asp Arg Arg Trp Cys Phe Asp Gly Val Lys
2030 2035 2040
Asn Asn Gln Ile Leu Glu Glu Asn Val Glu Val Glu Ile Trp Thr
2045 2050 2055
Lys Glu Gly Glu Arg Lys Lys Leu Lys Pro Arg Trp Leu Asp Ala
2060 2065 2070
Arg Ile Tyr Ser Asp Pro Leu Ala Leu Lys Glu Phe Lys Glu Phe
2075 2080 2085
Ala Ala Gly Arg Lys Ser Leu Thr Leu Asn Leu Ile Thr Glu Met
2090 2095 2100
Gly Arg Leu Pro Thr Phe Met Thr Gln Lys Val Arg Asp Ala Leu
2105 2110 2115
Asp Asn Leu Ala Val Leu His Thr Ala Glu Ala Gly Gly Arg Ala
2120 2125 2130
Tyr Asn His Ala Leu Ser Glu Leu Pro Glu Thr Leu Glu Thr Leu
2135 2140 2145
Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ala Thr Val Thr Gly Gly Ile Phe Leu
2150 2155 2160
Phe Leu Met Ser Ala Arg Gly Ile Gly Lys Met Thr Leu Gly Met
2165 2170 2175
Cys Cys Ile Ile Thr Ala Ser Ile Leu Leu Trp Tyr Ala Gln Ile
2180 2185 2190
Gln Pro His Trp Ile Ala Ala Ser Ile Ile Leu Glu Phe Phe Leu
2195 2200 2205
Ile Val Leu Leu Ile Pro Glu Pro Glu Lys Gln Arg Thr Pro Gln
2210 2215 2220
Asp Asn Gln Leu Thr Tyr Val Val Ile Ala Ile Leu Thr Val Val
2225 2230 2235
Ala Ala Thr Met Ala Asn Glu Met Gly Phe Leu Glu Lys Thr Lys
2240 2245 2250
Lys Asp Leu Gly Leu Gly Ser Ile Ala Thr Gln Gln Pro Glu Ser
2255 2260 2265
Asn Ile Leu Asp Ile Asp Leu Arg Pro Ala Ser Ala Trp Thr Leu
2270 2275 2280
Tyr Ala Val Ala Thr Thr Phe Val Thr Pro Met Leu Arg His Ser
2285 2290 2295
Ile Glu Asn Ser Ser Val Asn Val Ser Leu Thr Ala Ile Ala Asn
2300 2305 2310
Gln Ala Thr Val Leu Met Gly Leu Gly Lys Gly Trp Pro Leu Ser
2315 2320 2325
Lys Met Asp Ile Gly Val Pro Leu Leu Ala Ile Gly Cys Tyr Ser
2330 2335 2340
Gln Val Asn Pro Ile Thr Leu Thr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Val
2345 2350 2355
Ala His Tyr Ala Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr
2360 2365 2370
Arg Glu Ala Gln Lys Arg Ala Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Pro
2375 2380 2385
Thr Val Asp Gly Ile Thr Val Ile Asp Leu Asp Pro Ile Pro Tyr
2390 2395 2400
Asp Pro Lys Phe Glu Lys Gln Leu Gly Gln Val Met Leu Leu Val
2405 2410 2415
Leu Cys Val Thr Gln Val Leu Met Met Arg Thr Thr Trp Ala Leu
2420 2425 2430
Cys Glu Ala Leu Thr Leu Ala Thr Gly Pro Ile Ser Thr Leu Trp
2435 2440 2445
Glu Gly Asn Pro Gly Arg Phe Trp Asn Thr Thr Ile Ala Val Ser
2450 2455 2460
Met Ala Asn Ile Phe Arg Gly Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Gly Leu
2465 2470 2475
Leu Phe Ser Ile Met Lys Asn Thr Thr Asn Thr Arg Arg Gly Thr
2480 2485 2490
Gly Asn Ile Gly Glu Thr Leu Gly Glu Lys Trp Lys Ser Arg Leu
2495 2500 2505
Asn Ala Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Lys Ser Gly
2510 2515 2520
Ile Gln Glu Val Asp Arg Thr Leu Ala Lys Glu Gly Ile Lys Arg
2525 2530 2535
Gly Glu Thr Asp His His Ala Val Ser Arg Gly Ser Ala Lys Leu
2540 2545 2550
Arg Trp Phe Val Glu Arg Asn Met Val Thr Pro Glu Gly Lys Val
2555 2560 2565
Val Asp Leu Gly Cys Gly Arg Gly Gly Trp Ser Tyr Tyr Cys Gly
2570 2575 2580
Gly Leu Lys Asn Val Arg Glu Val Lys Gly Leu Thr Lys Gly Gly
2585 2590 2595
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2600 2605 2610
Leu Val Arg Leu Gln Ser Gly Val Asp Val Phe Phe Ile Pro Pro
2615 2620 2625
Glu Lys Cys Asp Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Pro
2630 2635 2640
Asn Pro Thr Val Glu Ala Gly Arg Thr Leu Arg Val Leu Asn Leu
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Val Glu Asn Trp Leu Asn Asn Asn Thr Gln Phe Cys Ile Lys Val
2660 2665 2670
Leu Asn Pro Tyr Met Pro Ser Val Ile Glu Lys Met Glu Ala Leu
2675 2680 2685
Gln Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Leu Val Arg Asn Pro Leu Ser Arg
2690 2695 2700
Asn Ser Thr His Glu Met Tyr Trp Val Ser Asn Ala Ser Gly Asn
2705 2710 2715
Ile Val Ser Ser Val Asn Met Ile Ser Arg Met Leu Ile Asn Arg
2720 2725 2730
Phe Thr Met Arg Tyr Lys Lys Ala Thr Tyr Glu Pro Asp Val Asp
2735 2740 2745
Leu Gly Ser Gly Thr Arg Asn Ile Gly Ile Glu Ser Glu Ile Pro
2750 2755 2760
Asn Leu Asp Ile Ile Gly Lys Arg Ile Glu Lys Ile Lys Gln Glu
2765 2770 2775
His Glu Thr Ser Trp His Tyr Asp Gln Asp His Pro Tyr Lys Thr
2780 2785 2790
Trp Ala Tyr His Gly Ser Tyr Glu Thr Lys Gln Thr Gly Ser Ala
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Asp Val Val Pro Met Val Thr Gln Met Ala Met Thr Asp Thr Thr
2825 2830 2835
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2840 2845 2850
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Ala Glu Trp Leu Trp Lys Glu Leu Gly Lys Lys Lys Thr Pro Arg
2870 2875 2880
Met Cys Thr Arg Glu Glu Phe Thr Arg Lys Val Arg Ser Asn Ala
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Ala Leu Gly Ala Ile Phe Thr Asp Glu Asn Lys Trp Lys Ser Ala
2900 2905 2910
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Glu Arg Asn Leu His Leu Glu Gly Lys Cys Glu Thr Cys Val Tyr
2930 2935 2940
Asn Met Met Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Gly Glu Phe Gly Lys
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Ala Lys Gly Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg
2960 2965 2970
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His Lys Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Val Ser Lys Lys Glu Gly
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Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Ile Met Lys Asp Gly Arg
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Val Leu Val Val Pro Cys Arg Asn Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg
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Cys Leu Gly Lys Ser Tyr Ala Gln Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
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Val Pro Ser His Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile
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His Ala Lys His Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Thr Val
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Leu Ile Gly Asn Glu Glu Tyr Thr Asp Tyr Met Pro Ser Met Lys
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Arg Phe Arg Arg Glu Glu Glu Glu Ala Gly Val Leu Trp
3380 3385 3390
<210> 9
<211> 10735
<212> DNA
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 9
agttgttagt ctacgtggac cgacaagaac agtttcgaat cggaagcttg cttaacgtag 60
ttctaacagt tttttattag agagcagatc tctgatgatc aaccaacgaa aaaagacggg 120
tcgaccgtct ttcaatatgc tgaaacgcgc gagaaaccgc gtgtcaactg tttcacagtt 180
ggcgaagaga ttctcaaaag gattgctctc aggccaagga cccatgaaat tggtgatggc 240
tttcatagca ttcttaagat ttctagccat acccccaaca gcaggaattt tggctagatg 300
gggctcattc aagaagaatg gagcgattaa agtgttacgg ggtttcaaga gagaaatctc 360
aaacatgcta aacataatga acaggaggaa aagatccgtg accatgctcc ttatgctgct 420
gcccacagcc ctggcgttcc atctgacgac acgaggggga gagccgcata tgatagttag 480
caagcaggaa agaggaaagt cacttttgtt caagacctct gcaggtgtca acatgtgcac 540
cctcattgcg atggatttgg gagagttgtg tgaggacacg atgacctaca aatgcccccg 600
gatcactgag gcggaaccag atgacgttga ctgttggtgc aatgccacgg acacatgggt 660
gacctatgga acgtgctctc aaactggcga acaccgacga gacaaacgtt ccgtcgcatt 720
ggccccacac gtggggcttg gcctagaaac aagagccgaa acgtggatgt cctctgaagg 780
tgcttggaaa cagatacaaa aagtagagac ttgggctctg agacatccag gattcacggt 840
gatagccctt tttctagcac atgccatagg aacatccatc acccagaaag ggatcatttt 900
cattttgctg atgctggtaa caccatctat ggccatgcga tgcgtgggaa taggcaacag 960
agacttcgtg gaaggactgt caggagcaac atgggtggat gtggtactgg agcatggaag 1020
ttgcgtcacc accatggcaa aaaacaaacc aacactggac attgaactct tgaagacgga 1080
ggtcacaaac cctgcagttc tgcgtaaatt gtgcattgaa gctaaaatat caaacaccac 1140
caccgattcg agatgtccaa cacaaggaga agccacactg gtggaagaac aagacgcgaa 1200
ctttgtgtgc cgacgaacgt tcgtggacag aggctggggc aatggctgtg ggctattcgg 1260
aaaaggtagt ctaataacgt gtgccaagtt taagtgtgtg acaaaactag aaggaaagat 1320
agttcaatat gaaaacctaa aatattcagt gatagtcacc gtccacactg gagatcagca 1380
ccaggtggga aatgagacta cagaacatgg aacaactgca accataacac ctcaagctcc 1440
tacgtcggaa atacagctga ccgactacgg aacccttaca ttagattgtt cacctaggac 1500
agggctagat tttaacgaga tggtgttgct gacaatgaaa gaaagatcat ggcttgtcca 1560
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gacttggaac agacaagatt tactggtcac atttaagaca gctcatgcaa agaagcagga 1680
agtagtcgta ctaggatcac aagaaggagc aatgcacact gcgctgactg gagcgacaga 1740
aatccaaacg tcaggaacga caacaatttt cgcaggacac ctaaaatgca gactaaaaat 1800
ggacaaacta actttaaaag ggatgtcata tgtgatgtgc acaggctcat tcaagttaga 1860
gaaagaagtg gctgagaccc agcatggaac tgttctggtg caggttaaat atgaaggaac 1920
agacgcacca tgcaagattc ccttttcgac ccaagatgag aaaggagcaa cccagaatgg 1980
gagattaata acagccaacc ccatagtcac tgacaaagaa aaaccagtca atattgaggc 2040
agaaccaccc tttggtgaga gctacatcgt ggtaggagca ggtgaaaaag ctttgaaact 2100
aagctggttc aagaaaggaa gcagcatagg gaaaatgttt gaagcaactg cccgaggagc 2160
acgaaggatg gccattctgg gagacaccgc atgggacttc ggttctatag gaggagtgtt 2220
cacgtctatg ggaaaactgg tacaccaggt ttttggaact gcatatggag ttttgtttag 2280
cggagtttct tggaccatga aaataggaat agggattctg ctgacatggc taggattaaa 2340
ttcaaggaac acgtcccttt cgatgatgtg catcgcagtt ggcatggtca cactgtacct 2400
aggagtcatg gttcaggcag attcgggatg tgtaatcaac tggaaaggca gagaacttaa 2460
atgtggaagc ggcatttttg tcactaatga agttcacact tggacagagc aatacaaatt 2520
ccaggctgac tcccccaaga gactatcagc agccattggg aaggcatggg aggagggtgt 2580
gtgtggaatc cgatcagcca ctcgtctcga gaacatcatg tggaaacaaa tatcaaatga 2640
attgaaccac atcctacttg aaaatgacat gaaatttaca gtggtcgtgg gagatgttag 2700
tggaatcttg gcccaaggga aaaaaatgat taggccacaa cccatggaac acaaatactc 2760
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catcgacggc ccaaacaccc cagaatgccc tgacaatcaa agagcatgga atatttggga 2880
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ctacacccaa gtatgtgacc accggctgat gtcagctgcc attaaggaca gcaaggcagt 3000
ccatgctgac atggggtact ggatagaaag tgaaaagaac gagacatgga agttggcgag 3060
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tggagttctg gaaagtgaaa tgataattcc aaagatatat ggaggaccaa tatctcagca 3180
caactacaga ccaggatatt tcacacaaac agcagggccg tggcacctag gcaagttgga 3240
actagatttc gatttttgtg aaggtaccac agttgttgtg gatgaacatt gtggaaatcg 3300
aggaccatct ctcagaacca caacagtcac aggaaagata atccatgaat ggtgctgcag 3360
atcttgtacg ctaccccccc tacgtttcaa aggggaagac gggtgttggt acggcatgga 3420
aatcagacca gtgaaggaca aggaagagaa cctggtcaag tcaatggtct ctgcagggtc 3480
aggagaagtg gacagctttt cactaggact gctatgcata tcaataatga ttgaagaagt 3540
gatgagatcc agatggagca aaaaaatgct gatgactgga acactggctg tgttcctcct 3600
tcttataatg ggacaattga catggagtga tctgatcagg ttatgtatta tggttggagc 3660
caacgcttca gacaagatgg ggatgggaac aacgtaccta gctttaatgg ccactttcaa 3720
aatgagacca atgttcgccg tcgggctatt atttcgcaga ctaacatcta gagaagttct 3780
tcttcttaca attggcttga gcctggtggc atccgtggag ctaccaagtt ccctagagga 3840
gctgggggat ggacttgcaa taggcatcat gatgttgaaa ttattgactg attttcagtc 3900
acaccagcta tgggctactc tgctatcctt gacatttatt aaaacaactt tttcattgca 3960
ctatgcatgg aagacaatgg ctatggtact gtcaattgta tctctcttcc ctttatgcct 4020
gtccacgacc tctcaaaaaa caacatggct tccggtgctg ttgggatctc ttggatgcaa 4080
accactaccc atgtttctta taacagaaaa caaaatctgg ggaaggaaga gttggcccct 4140
caatgaagga attatggctg ttggaatagt tagtattcta ctaagttcac ttttaaaaaa 4200
tgatgtgccg ctagccggcc cattaatagc tggaggcatg ctaatagcat gttatgtcat 4260
atccggaagc tcagctgatt tatcactgga gaaagcggct gaggtctcct gggaggaaga 4320
agcagaacac tcaggcgcct cacacaacat actagtagag gttcaagatg atggaaccat 4380
gaagataaaa gatgaagaga gagatgacac gctcaccatt ctccttaaag caactctgct 4440
ggcagtctca ggggtgtacc caatgtcaat accagcgacc ctttttgtgt ggtatttttg 4500
gcagaaaaag aaacagagat caggagtgct atgggacaca cccagccccc cagaagtgga 4560
aagagcagtt cttgatgatg gcatctatag aattttgcaa agaggactgt tgggcaggtc 4620
ccaagtagga gtaggagttt tccaagaagg cgtgttccac acaatgtggc acgtcactag 4680
gggagctgtc ctcatgtatc aaggaaaaag gctggaacca agctgggcca gtgtcaaaaa 4740
agacttgatc tcatatggag gaggttggag gtttcaagga tcctggaaca cgggagaaga 4800
agtacaggtg attgctgttg aaccgggaaa aaaccccaaa aatgtacaaa caacgccggg 4860
taccttcaag acccctgaag gcgaagttgg agccatagcc ttagacttta aacctggcac 4920
atctggatct cccatcgtaa acagagaggg aaaaatagta ggtctttatg gaaatggagt 4980
ggtgacaaca agcggaactt acgttagtgc catagctcaa gctaaggcat cacaagaagg 5040
gcctctacca gagattgagg acgaggtgtt taggaaaaga aacttaacaa taatggacct 5100
acatccagga tcgggaaaaa caagaagata ccttccagcc atagtccgtg aggccataaa 5160
aaggaagctg cgcacgctaa tcctagctcc cacaagagtt gtcgcttctg aaatggcaga 5220
ggcactcaag ggagtgccaa taaggtatca gacaacagca gtgaagagtg aacacacagg 5280
aaaggagata gttgacctta tgtgccacgc cactttcacc atgcgcctcc tgtctcccgt 5340
gagagttccc aattataaca tgattatcat ggatgaagca cacttcaccg atccagccag 5400
catagcagcc agagggtaca tctcaacccg agtgggtatg ggtgaagcag ctgcgatctt 5460
tatgacagcc actcccccag gatcggtgga ggcctttcca cagagcaatg caattatcca 5520
agatgaggaa agagacattc ctgagagatc atggaactca ggctatgact ggatcactga 5580
ttttccaggt aaaacagtct ggtttgttcc aagcatcaaa tcaggaaatg acattgccaa 5640
ctgtttaaga aaaaacggga aacgggtgat ccaattgagc agaaaaacct ttgacactga 5700
gtaccagaaa acaaaaaaca acgactggga ctatgtcgtc acaacagaca tttccgaaat 5760
gggagcaaat ttccgggccg acagggtaat agacccaagg cggtgtctga aaccggtaat 5820
actaaaagat ggtccagagc gcgtcattct agccggaccg atgccagtga ctgtggccag 5880
tgccgcccag aggagaggaa gaattggaag gaaccaaaac aaggaaggtg atcagtatat 5940
ttacatggga cagcctttaa acaatgatga ggaccacgct cattggacag aagcaaagat 6000
gctccttgac aatataaaca caccagaagg gattatccca gccctctatg agccggagag 6060
agaaaagagt gcagctatag acggggaata cagactgcgg ggtgaagcaa ggaaaacgtt 6120
cgtggagctc atgagaagag gggatctacc agtctggcta tcctacaaag ttgcctcaga 6180
aggcttccag tactccgaca gaaggtggtg cttcgatggg gaaaggaaca accaggtgtt 6240
ggaggagaac atggacgtgg agatctggac aaaagaagga gaaagaaaga aactacgacc 6300
tcgctggttg gacgccagaa catactctga cccactggct ctgcgcgagt ttaaagagtt 6360
tgcagcagga agaagaagcg tctcaggtga cctaatatta gaaataggga aacttccaca 6420
acatttgacg caaagggccc agaatgcttt ggacaacttg gtcatgttgc acaattccga 6480
acaaggagga aaagcctata gacatgctat ggaagaactg ccagacacaa tagaaacgtt 6540
gatgctccta gccttgatag ctgtgttgac tggtggagtg acgctgttct tcctatcagg 6600
aagaggtcta ggaaaaacat ctatcggctt actctgcgtg atggcctcaa gcgcactgtt 6660
atggatggcc agtgtggagc cccattggat agcggcctcc atcatactgg agttctttct 6720
gatggtactg cttattccag agccagacag acagcgcact ccacaggaca accagctagc 6780
atatgtggtg ataggtctgt tattcatgat attgacagtg gcagccaatg agatgggatt 6840
attggaaacc acaaagaaag acctggggat tggccatgta gctgctgaaa accaccacca 6900
tgctacaatg ctggacgtag acctacatcc agcttcagcc tggaccctct atgcagtggc 6960
cacaacaatc atcactccta tgatgagaca cacaattgaa aacacaacgg caaatatttc 7020
cctgacagcc atcgcaaacc aagcagctat attgatggga cttgacaagg gatggccaat 7080
atcgaagatg gacataggag ttccacttct cgccttgggg tgctattccc aagtgaatcc 7140
gctgacactg atagcggcag tattgatgct agtagctcat tacgccataa ttggacctgg 7200
actgcaagca aaagctacta gagaagctca aaaaagaaca gcggctggaa taatgaaaaa 7260
tccaactgtc gacgggattg ttgcaataga cttagatccc gtggtttacg atgcaaaatt 7320
tgaaaaacaa ctaggccaaa taatgttgtt gatactttgc acatcacaga ttcttttgat 7380
gcggactaca tgggccttgt gtgaatccat cacattggct actggacctc tgaccactct 7440
ttgggaggga tctccaggaa aattctggaa caccacaata gcggtatcca tggcaaacat 7500
tttcaggggg agttatctag caggagcagg tctggccttc tcattaatga aatctctagg 7560
aggaggtagg agaggcacgg gagcccaagg ggaaacactg ggagaaaaat ggaaaagaca 7620
actaaaccaa ctgagcaagt cagaattcaa tacttacaag aggagtggga ttatggaggt 7680
ggatagatcc gaagccaaag agggactgaa aagaggagaa acaaccaaac acgcagtatc 7740
gagaggaacg gccaaactga ggtggttcgt ggagaggaac cttgtgaaac cagaagggaa 7800
agtcatagac ctcggttgtg gaagaggtgg ctggtcatat tattgcgctg ggctgaagaa 7860
agtcacagaa gtgaaaggat acacaaaagg aggacctgga catgaggaac caatcccaat 7920
ggcgacctat ggatggaacc tagtaaagct gcactccgga aaagatgtat tttttatacc 7980
acctgagaaa tgtgacaccc ttttgtgtga tattggtgag tcctctccga acccaactat 8040
agaggaagga agaacgttac gtgttctgaa aatggtggaa ccatggctca gaggaaacca 8100
attttgcata aaaattctaa atccctatat gccgagcgtg gtagaaactc tggaacaaat 8160
gcaaagaaaa catggaggaa tgctagtgcg aaacccactc tcaagaaatt ccacccatga 8220
aatgtactgg gtttcatgtg gaacaggaaa cattgtgtca gcagtaaaca tgacatctag 8280
aatgttgcta aatcggttca caatggctca caggaagcca acatatgaaa gagacgtgga 8340
cttaggcgct ggaacaagac atgtggcagt agaaccagag gtagccaacc tagatatcat 8400
tggccagagg atagagaata taaaaaatga acataagtca acatggcatt atgatgagga 8460
caatccatac aaaacatggg cctatcatgg atcatatgag gttaagccat caggatcggc 8520
ctcatccatg gtcaatggcg tggtgagatt gctcaccaaa ccatgggatg ttatccccat 8580
ggtcacacaa atagccatga ctgataccac accctttgga caacagaggg tgtttaaaga 8640
gaaagttgac acgcgcacac caaaagcaaa acgtggcaca gcacaaatta tggaagtgac 8700
agccaggtgg ttatggggtt tcctttctag aaacaaaaaa cccagaattt gcacaagaga 8760
ggagtttaca agaaaagtta ggtcaaacgc agctattgga gcagtgttcg ttgatgaaaa 8820
tcaatggaac tcggcaaaag aagcagtgga agacgaacgg ttctgggaac ttgtccacag 8880
agagagggag cttcataaac aggggaaatg tgccacgtgt gtctacaata tgatggggaa 8940
gagagagaaa aaattaggag agttcggaaa ggcaaaagga agtcgtgcaa tatggtacat 9000
gtggttggga gcacgcttcc tagagtttga agcccttggt ttcatgaatg aagatcactg 9060
gttcagtaga gagaattcac tcagtggagt ggaaggagaa ggactccaca aacttggata 9120
catactcaga gacatatcaa ggattccagg ggggaacatg tatgcagatg acacagccgg 9180
atgggacaca agaataacag aggatgatct ccagaatgag gctaaaatca ctgacatcat 9240
ggagcccgaa catgccctgc tggctacgtc aatctttaag ctgacctacc aaaataaggt 9300
ggtaagggtg cagagaccag caaaaaatgg aaccgtgatg gatgttatat ccagacgtga 9360
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aatggcaatc agcggagatg actgtgtggt gaaaccaatt gatgacaggt tcgcaacagc 9600
cttaacagct ttgaatgaca tgggaaaagt aagaaaagac ataccacaat gggaaccttc 9660
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tatgaaggat gggagggaga tagtggtgcc atgccgcaac caagatgaac ttgtggggag 9780
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atatgcacaa atgtggcagc tgatgtattt ccacaggaga gacctgagac tggcggctaa 9900
cgctatttgt tcagccgttc cagttgattg ggtcccaacc agccgcacca cctggtcgat 9960
ccatgcccat caccaatgga tgacaacaga agacatgtta tcagtatgga atagggtctg 10020
gatagaggaa aacccatgga tggaggataa gactcatgtg tccagttggg aagaagttcc 10080
atacctagga aagagggaag atcagtggtg tggatccctg ataggcttaa cagcaagggc 10140
cacctgggcc actaatatac aagtggccat aaaccaagtg agaaggctca ttgggaatga 10200
gaattatcta gattacatga catcaatgaa gagattcaag aatgagagtg atcccgaagg 10260
ggcactctgg taagtcaaca cattcacaaa ataaaggaaa ataaaaaatc aaatgaggca 10320
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attccaggca cagaacgcca gaaaatggaa tggtgctgtt gaatcaacag gttct 10735
<210> 10
<211> 3392
<212> PRT
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 10
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1 5 10 15
Lys Arg Ala Arg Asn Arg Val Ser Thr Val Ser Gln Leu Ala Lys Arg
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Phe Ser Lys Gly Leu Leu Ser Gly Gln Gly Pro Met Lys Leu Val Met
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Ala Phe Ile Ala Phe Leu Arg Phe Leu Ala Ile Pro Pro Thr Ala Gly
50 55 60
Ile Leu Ala Arg Trp Gly Ser Phe Lys Lys Asn Gly Ala Ile Lys Val
65 70 75 80
Leu Arg Gly Phe Lys Arg Glu Ile Ser Asn Met Leu Asn Ile Met Asn
85 90 95
Arg Arg Lys Arg Ser Val Thr Met Leu Leu Met Leu Leu Pro Thr Ala
100 105 110
Leu Ala Phe His Leu Thr Thr Arg Gly Gly Glu Pro His Met Ile Val
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Ser Lys Gln Glu Arg Gly Lys Ser Leu Leu Phe Lys Thr Ser Ala Gly
130 135 140
Val Asn Met Cys Thr Leu Ile Ala Met Asp Leu Gly Glu Leu Cys Glu
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Asp Thr Met Thr Tyr Lys Cys Pro Arg Ile Thr Glu Ala Glu Pro Asp
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Met Ser Ser Glu Gly Ala Trp Lys Gln Ile Gln Lys Val Glu Thr Trp
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Ala Leu Arg His Pro Gly Phe Thr Val Ile Ala Leu Phe Leu Ala His
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Ala Ile Gly Thr Ser Ile Thr Gln Lys Gly Ile Ile Phe Ile Leu Leu
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Met Leu Val Thr Pro Ser Met Ala Met Arg Cys Val Gly Ile Gly Asn
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Leu Asp Ile Glu Leu Leu Lys Thr Glu Val Thr Asn Pro Ala Val Leu
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Met Lys Glu Arg Ser Trp Leu Val His Lys Gln Trp Phe Leu Asp Leu
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Leu Met Ala Thr Phe Lys Met Arg Pro Met Phe Ala Val Gly Leu
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Leu Phe Arg Arg Leu Thr Ser Arg Glu Val Leu Leu Leu Thr Ile
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Leu Thr Phe Ile Lys Thr Thr Phe Ser Leu His Tyr Ala Trp Lys
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Met Ala Val Gly Ile Val Ser Ile Leu Leu Ser Ser Leu Leu Lys
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Asn Asp Val Pro Leu Ala Gly Pro Leu Ile Ala Gly Gly Met Leu
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Ile Ala Cys Tyr Val Ile Ser Gly Ser Ser Ala Asp Leu Ser Leu
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Leu Lys Ala Thr Leu Leu Ala Val Ser Gly Val Tyr Pro Met Ser
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Met Tyr Gln Gly Lys Arg Leu Glu Pro Ser Trp Ala Ser Val Lys
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Lys Asp Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Arg Phe Gln Gly Ser
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Leu Tyr Glu Pro Glu Arg Glu Lys Ser Ala Ala Ile Asp Gly Glu
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Leu Met Leu Leu Ala Leu Ile Ala Val Leu Thr Gly Gly Val Thr
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Leu Phe Phe Leu Ser Gly Arg Gly Leu Gly Lys Thr Ser Ile Gly
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2960 2965 2970
Arg Phe Leu Glu Phe Glu Ala Leu Gly Phe Met Asn Glu Asp His
2975 2980 2985
Trp Phe Ser Arg Glu Asn Ser Leu Ser Gly Val Glu Gly Glu Gly
2990 2995 3000
Leu His Lys Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Ile Ser Arg Ile Pro
3005 3010 3015
Gly Gly Asn Met Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg
3020 3025 3030
Ile Thr Glu Asp Asp Leu Gln Asn Glu Ala Lys Ile Thr Asp Ile
3035 3040 3045
Met Glu Pro Glu His Ala Leu Leu Ala Thr Ser Ile Phe Lys Leu
3050 3055 3060
Thr Tyr Gln Asn Lys Val Val Arg Val Gln Arg Pro Ala Lys Asn
3065 3070 3075
Gly Thr Val Met Asp Val Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser
3080 3085 3090
Gly Gln Val Gly Thr Tyr Gly Leu Asn Thr Phe Thr Asn Met Glu
3095 3100 3105
Ala Gln Leu Ile Arg Gln Met Glu Ser Glu Gly Ile Phe Leu Pro
3110 3115 3120
Ser Glu Leu Glu Thr Pro Asn Leu Ala Gly Arg Val Leu Asp Trp
3125 3130 3135
Leu Glu Lys Tyr Gly Val Glu Arg Leu Lys Arg Met Ala Ile Ser
3140 3145 3150
Gly Asp Asp Cys Val Val Lys Pro Ile Asp Asp Arg Phe Ala Thr
3155 3160 3165
Ala Leu Thr Ala Leu Asn Asp Met Gly Lys Val Arg Lys Asp Ile
3170 3175 3180
Pro Gln Trp Glu Pro Ser Lys Gly Trp Asn Asp Trp Gln Gln Val
3185 3190 3195
Pro Phe Cys Ser His His Phe His Gln Leu Ile Met Lys Asp Gly
3200 3205 3210
Arg Glu Ile Val Val Pro Cys Arg Asn Gln Asp Glu Leu Val Gly
3215 3220 3225
Arg Ala Arg Val Ser Gln Gly Ala Gly Trp Ser Leu Arg Glu Thr
3230 3235 3240
Ala Cys Leu Gly Lys Ser Tyr Ala Gln Met Trp Gln Leu Met Tyr
3245 3250 3255
Phe His Arg Arg Asp Leu Arg Leu Ala Ala Asn Ala Ile Cys Ser
3260 3265 3270
Ala Val Pro Val Asp Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser
3275 3280 3285
Ile His Ala His His Gln Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Ser
3290 3295 3300
Val Trp Asn Arg Val Trp Ile Glu Glu Asn Pro Trp Met Glu Asp
3305 3310 3315
Lys Thr His Val Ser Ser Trp Glu Glu Val Pro Tyr Leu Gly Lys
3320 3325 3330
Arg Glu Asp Gln Trp Cys Gly Ser Leu Ile Gly Leu Thr Ala Arg
3335 3340 3345
Ala Thr Trp Ala Thr Asn Ile Gln Val Ala Ile Asn Gln Val Arg
3350 3355 3360
Arg Leu Ile Gly Asn Glu Asn Tyr Leu Asp Tyr Met Thr Ser Met
3365 3370 3375
Lys Arg Phe Lys Asn Glu Ser Asp Pro Glu Gly Ala Leu Trp
3380 3385 3390
<210> 11
<211> 10723
<212> DNA
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 11
agttgttagt ctacgtggac cgacaaagac agattctttg agggagctaa gctcaacgta 60
gttctaacag ttttttaatt agagagcaga tctctgatga ataaccaacg gaaaaaggcg 120
aaaaacacgc ctttcaatat gctgaaacgc gagagaaacc gcgtgtcgac tgtgcaacag 180
ctgacaaaga gattctcact tggaatgctg cagggacgag gaccattaaa actgttcatg 240
gccctggtgg cgttccttcg tttcctaaca atcccaccaa cagcagggat attgaagaga 300
tggggaacaa ttaaaaaatc aaaagctatt aatgttttga gagggttcag gaaagagatt 360
ggaaggatgc tgaacatctt gaataggaga cgcagatctg caggcatgat cattatgctg 420
attccaacag tgatggcgtt ccatttaacc acacgtaacg gagaaccaca catgatcgtc 480
agcagacaag agaaagggaa aagtcttctg tttaaaacag aggatggcgt gaacatgtgt 540
accctcatgg ccatggacct tggtgaattg tgtgaagaca caatcacgta caagtgtccc 600
cttctcaggc agaatgagcc agaagacata gactgttggt gcaactctac gtccacgtgg 660
gtaacttatg ggacgtgtac caccatggga gaacatagaa gagaaaaaag atcagtggca 720
ctcgttccac atgtgggaat gggactggag acacgaactg aaacatggat gtcatcagaa 780
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atgatggcag caatcctggc atacaccata ggaacgacac atttccaaag agccctgatt 900
ttcatcttac tgacagctgt cactccttca atgacaatgc gttgcatagg aatgtcaaat 960
agagactttg tggaaggggt ttcaggagga agctgggttg acatagtctt agaacatgga 1020
agctgtgtga cgacgatggc aaaaaacaaa ccaacattgg attttgaact gataaaaaca 1080
gaagccaaac agcctgccac cctaaggaag tactgtatag aggcaaagct aaccaacaca 1140
acaacagaat ctcgctgccc aacacaaggg gaacccagcc taaatgaaga gcaggacaaa 1200
aggttcgtct gcaaacactc catggtagac agaggatggg gaaatggatg tggactattt 1260
ggaaagggag gcattgtgac ctgtgctatg ttcagatgca aaaagaacat ggaaggaaaa 1320
gttgtgcaac cagaaaactt ggaatacacc attgtgataa cacctcactc aggggaagag 1380
catgcagtcg gaaatgacac aggaaaacat ggcaaggaaa tcaaaataac accacagagt 1440
tccatcacag aagcagaatt gacaggttat ggcactgtca caatggagtg ctctccaaga 1500
acgggcctcg acttcaatga gatggtgttg ctgcagatgg aaaataaagc ttggctggtg 1560
cacaggcaat ggttcctaga cctgccgtta ccatggttgc ccggagcgga cacacaaggg 1620
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atggacaagc tacagctcaa aggaatgtca tactctatgt gcacaggaaa gtttaaagtt 1860
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ggtcgcctga ttacagtcaa cccaattgtg acagaaaaag atagcccagt caacatagaa 2040
gcagaacctc cattcggaga cagctacatc atcataggag tagagccggg acaactgaag 2100
ctcaactggt ttaagaaagg aagttctatc ggccaaatgt ttgagacaac aatgaggggg 2160
gcgaagagaa tggccatttt aggtgacaca gcctgggatt ttggatcctt gggaggagtg 2220
tttacatcta taggaaaggc tctccaccaa gtctttggag caatctatgg agctgccttc 2280
agtggggttt catggactat gaaaatcctc ataggagtca ttatcacatg gataggaatg 2340
aattcacgca gcacctcact gtctgtgaca ctagtattgg tgggaattgt gacactgtat 2400
ttgggagtca tggtgcaggc cgatagtggt tgcgttgtga gctggaaaaa caaagaactg 2460
aaatgtggca gtgggatttt catcacagac aacgtgcaca catggacaga acaatacaag 2520
ttccaaccag aatccccttc aaaactagct tcagctatcc agaaagccca tgaagagggc 2580
atttgtggaa tccgctcagt aacaagactg gagaatctga tgtggaaaca aataacacca 2640
gaattgaatc acattctatc agaaaatgag gtgaagttaa ctattatgac aggagacatc 2700
aaaggaatca tgcaggcagg aaaacgatct ctgcggcctc agcccactga gctgaagtat 2760
tcatggaaaa catggggcaa agcaaaaatg ctctctacag agtctcataa ccagaccttt 2820
ctcattgatg gccccgaaac agcagaatgc cccaacacaa atagagcttg gaattcgttg 2880
gaagttgaag actatggctt tggagtattc accaccaata tatggctaaa attgaaagaa 2940
aaacaggatg tattctgcga ctcaaaactc atgtcagcgg ccataaaaga caacagagcc 3000
gtccatgccg atatgggtta ttggatagaa agtgcactca atgacacatg gaagatagag 3060
aaagcctctt tcattgaagt taaaaactgc cactggccaa aatcacacac cctctggagc 3120
aatggagtgc tagaaagtga gatgataatt ccaaagaatc tcgctggacc agtgtctcaa 3180
cacaactata gaccaggcta ccatacacaa ataacaggac catggcatct aggtaagctt 3240
gagatggact ttgatttctg tgatggaaca acagtggtag tgactgagga ctgcggaaat 3300
agaggaccct ctttgagaac aaccactgcc tctggaaaac tcataacaga atggtgctgc 3360
cgatcttgca cattaccacc gctaagatac agaggtgagg atgggtgctg gtacgggatg 3420
gaaatcagac cattgaagga gaaagaagag aatttggtca actccttggt cacagctgga 3480
catgggcagg tcgacaactt ttcactagga gtcttgggaa tggcattgtt cctggaggaa 3540
atgcttagga cccgagtagg aacgaaacat gcaatactac tagttgcagt ttcttttgtg 3600
acattgatca cagggaacat gtcctttaga gacctgggaa gagtgatggt tatggtaggc 3660
gccactatga cggatgacat aggtatgggc gtgacttatc ttgccctact agcagccttc 3720
aaagtcagac caacttttgc agctggacta ctcttgagaa agctgacctc caaggaattg 3780
atgatgacta ctataggaat tgtactcctc tcccagagca ccataccaga gaccattctt 3840
gagttgactg atgcgttagc cttaggcatg atggtcctca aaatggtgag aaatatggaa 3900
aagtatcaat tggcagtgac tatcatggct atcttgtgcg tcccaaacgc agtgatatta 3960
caaaacgcat ggaaagtgag ttgcacaata ttggcagtgg tgtccgtttc cccactgctc 4020
ttaacatcct cacagcaaaa aacagattgg ataccattag cattgacgat caaaggtctc 4080
aatccaacag ctatttttct aacaaccctc tcaagaacca gcaagaaaag gagctggcca 4140
ttaaatgagg ctatcatggc agtcgggatg gtgagcattt tagccagttc tctcctaaaa 4200
aatgatattc ccatgacagg accattagtg gctggagggc tcctcactgt gtgctacgtg 4260
ctcactggac gatcggccga tttggaactg gagagagcag ccgatgtcaa atgggaagac 4320
caggcagaga tatcaggaag cagtccaatc ctgtcaataa caatatcaga agatggtagc 4380
atgtcgataa aaaatgaaga ggaagaacaa acactgacca tactcattag aacaggattg 4440
ctggtgatct caggactttt tcctgtatca ataccaatca cggcagcagc atggtacctg 4500
tgggaagtga agaaacaacg ggccggagta ttgtgggatg ttccttcacc cccacccatg 4560
ggaaaggctg aactggaaga tggagcctat agaattaagc aaaaagggat tcttggatat 4620
tcccagatcg gagccggagt ttacaaagaa ggaacattcc atacaatgtg gcatgtcaca 4680
cgtggcgctg ttctaatgca taaaggaaag aggattgaac catcatgggc ggacgtcaag 4740
aaagacctaa tatcatatgg aggaggctgg aagttagaag gagaatggaa ggaaggagaa 4800
gaagtccagg tattggcact ggagcctgga aaaaatccaa gagccgtcca aacgaaacct 4860
ggtcttttca aaaccaacgc cggaacaata ggtgctgtat ctctggactt ttctcctgga 4920
acgtcaggat ctccaattat cgacaaaaaa ggaaaagttg tgggtcttta tggtaatggt 4980
gttgttacaa ggagtggagc atatgtgagt gctatagccc agactgaaaa aagcattgaa 5040
gacaacccag agatcgaaga tgacattttc cgaaagagaa gactgaccat catggacctc 5100
cacccaggag cgggaaagac gaagagatac cttccggcca tagtcagaga agctataaaa 5160
cggggtttga gaacattaat cttggccccc actagagttg tggcagctga aatggaggaa 5220
gcccttagag gacttccaat aagataccag accccagcca tcagagctga gcacaccggg 5280
cgggagattg tggacctaat gtgtcatgcc acatttacca tgaggctgct atcaccagtt 5340
agagtgccaa actacaacct gattatcatg gacgaagccc atttcacaga cccagcaagt 5400
atagcagcta gaggatacat ctcaactcga gtggagatgg gtgaggcagc tgggattttt 5460
atgacagcca ctcccccggg aagcagagac ccatttcctc agagcaatgc accaatcata 5520
gatgaagaaa gagaaatccc tgaacgttcg tggaattccg gacatgaatg ggtcacggat 5580
tttaaaggga agactgtttg gttcgttcca agtataaaag caggaaatga tatagcagct 5640
tgcctgagga aaaatggaaa gaaagtgata caactcagta ggaagacctt tgattctgag 5700
tatgtcaaga ctagaaccaa tgattgggac ttcgtggtta caactgacat ttcagaaatg 5760
ggtgccaatt tcaaggctga gagggttata gaccccagac gctgcatgaa accagtcata 5820
ctaacagatg gtgaagagcg ggtgattctg gcaggaccta tgccagtgac ccactctagt 5880
gcagcacaaa gaagagggag aataggaaga aatccaaaaa atgagaatga ccagtacata 5940
tacatggggg aacctctgga aaatgatgaa gactgtgcac actggaaaga agctaaaatg 6000
ctcctagata acatcaacac gccagaagga atcattccta gcatgttcga accagagcgt 6060
gaaaaggtgg atgccattga tggcgaatac cgcttgagag gagaagcaag gaaaaccttt 6120
gtagacttaa tgagaagagg agacctacca gtctggttgg cctacagagt ggcagctgaa 6180
ggcatcaact acgcagacag aaggtggtgt tttgatggag tcaagaacaa ccaaatccta 6240
gaagaaaacg tggaagttga aatctggaca aaagaagggg aaaggaagaa attgaaaccc 6300
agatggttgg atgctaggat ctattctgac ccactggcgc taaaagaatt taaggaattt 6360
gcagccggaa gaaagtctct gaccctgaac ctaatcacag aaatgggtag gctcccaacc 6420
ttcatgactc agaaggcaag agacgcactg gacaacttag cagtgctgca cacggctgag 6480
gcaggtggaa gggcgtacaa ccatgctctc agtgaactgc cggagaccct ggagacattg 6540
cttttactga cacttctggc tacagtcacg ggagggatct ttttattctt gatgagcgga 6600
aggggcatag ggaagatgac cctgggaatg tgctgcataa tcacggctag catcctccta 6660
tggtacgcac aaatacagcc acactggata gcagcttcaa taatactgga gttttttctc 6720
atagttttgc ttattccaga acctgaaaaa cagagaacac cccaagacaa ccaactgacc 6780
tacgttgtca tagccatcct cacagtggtg gccgcaacca tggcaaacga gatgggtttc 6840
ctagaaaaaa cgaagaaaga tctcggattg ggaagcattg caacccagca acccgagagc 6900
aacatcctgg acatagatct acgtcctgca tcagcatgga cgctgtatgc cgtggccaca 6960
acatttgtta caccaatgtt gagacatagc attgaaaatt cctcagtgaa tgtgtcccta 7020
acagctatag ccaaccaagc cacagtgtta atgggtctcg ggaaaggatg gccattgtca 7080
aagatggaca tcggagttcc ccttctcgcc attggatgct actcacaagt caaccccata 7140
actctcacag cagctctttt cttattggta gcacattatg ccatcatagg gccaggactc 7200
caagcaaaag caaccagaga agctcagaaa agagcagcgg cgggcatcat gaaaaaccca 7260
actgtcgatg gaataacagt gattgaccta gatccaatac cttatgatcc aaagtttgaa 7320
aagcagttgg gacaagtaat gctcctagtc ctctgcgtga ctcaagtatt gatgatgagg 7380
actacatggg ctctgtgtga ggctttaacc ttagctaccg ggcccatctc cacattgtgg 7440
gaaggaaatc cagggaggtt ttggaacact accattgcgg tgtcaatggc taacattttt 7500
agagggagtt acttggccgg agctggactt ctcttttcta ttatgaagaa cacaaccaac 7560
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aacgcattgg gaaaaagtga attccagatc tacaagaaaa gtggaatcca ggaagtggat 7680
agaaccttag caaaagaagg cattaaaaga ggagaaacgg accatcacgc tgtgtcgcga 7740
ggctcagcaa aactgagatg gttcgttgag agaaacatgg tcacaccaga agggaaagta 7800
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acatatgggt ggaatctagt gcgtcttcaa agtggagttg acgttttctt catcccgcca 7980
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ctcggaagcg gaacccgtaa catcgggatt gaaagtgaga taccaaacct agatataatt 8400
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cacccataca aaacgtgggc ataccatggt agctatgaaa caaaacagac tggatcagca 8520
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gtgacacaga tggcaatgac agacacgact ccatttggac aacagcgcgt ttttaaagag 8640
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gcagagtggc tttggaaaga attagggaag aaaaagacac ccaggatgtg caccagagaa 8760
gaattcacaa gaaaggtgag aagcaatgca gccttggggg ccatattcac tgatgagaac 8820
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tgggatacaa gaatcacact agaagaccta aaaaatgaag aaatggtaac aaaccacatg 9240
gaaggagaac acaagaaact agccgaggcc attttcaaac taacgtacca aaacaaggtg 9300
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caaagaggta gtggacaagt tggcacctat ggactcaata ctttcaccaa tatggaagcc 9420
caactaatca gacagatgga gggagaagga gtctttaaaa gcattcagca cctaacaatc 9480
acagaagaaa tcgctgtgca aaactggtta gcaagagtgg ggcgcgaaag gttatcaaga 9540
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ttaacagctc taaatgacat gggaaagatt aggaaagaca tacaacaatg ggaaccttca 9660
agaggatgga atgattggac acaagtgccc ttctgttcac accatttcca tgagttaatc 9720
atgaaagacg gtcgcgtact cgttgttcca tgtagaaacc aagatgaact gattggcaga 9780
gcccgaatct cccaaggagc agggtggtct ttgcgggaga cggcctgttt ggggaagtct 9840
tacgcccaaa tgtggagctt gatgtacttc cacagacgcg acctcaggct ggcggcaaat 9900
gctatttgct cggcagtacc atcacattgg gttccaacaa gtcgaacaac ctggtccata 9960
catgctaaac atgaatggat gacaacggaa gacatgctga cagtctggaa cagggtgtgg 10020
attcaagaaa acccatggat ggaagacaaa actccagtgg aatcatggga ggaaatccca 10080
tacttgggga aaagagaaga ccaatggtgc ggctcattga ttgggttaac aagcagggcc 10140
acctgggcaa agaacatcca agcagcaata aatcaagtta gatcccttat aggcaatgaa 10200
gaatacacag attacatgcc atccatgaaa agattcagaa gagaagagga agaagcagga 10260
gttctgtggt agaaagcaaa actaacatga aacaaggcta gaagtcaggt cggattaagc 10320
catagtacgg aaaaaactat gctacctgtg agccccgtcc aaggacgtta aaagaagtca 10380
ggccatcata aatgccatag ctggagtaaa ctatgcagcc tgtagctcca cctgagaagg 10440
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agctgtagtc tcgctggaag gactagaggt tagaggagac ccccccgaaa caaaaaacag 10620
catattgacg ctgggaaaga ccagagatcc tgctgtctcc tcagcatcat tccaggcaca 10680
gaacgccaga aaatggaatg gtgctgttga atcaacaggt tct 10723
<210> 12
<211> 3391
<212> PRT
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 12
Met Asn Asn Gln Arg Lys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Phe Asn Met Leu
1 5 10 15
Lys Arg Glu Arg Asn Arg Val Ser Thr Val Gln Gln Leu Thr Lys Arg
20 25 30
Phe Ser Leu Gly Met Leu Gln Gly Arg Gly Pro Leu Lys Leu Phe Met
35 40 45
Ala Leu Val Ala Phe Leu Arg Phe Leu Thr Ile Pro Pro Thr Ala Gly
50 55 60
Ile Leu Lys Arg Trp Gly Thr Ile Lys Lys Ser Lys Ala Ile Asn Val
65 70 75 80
Leu Arg Gly Phe Arg Lys Glu Ile Gly Arg Met Leu Asn Ile Leu Asn
85 90 95
Arg Arg Arg Arg Ser Ala Gly Met Ile Ile Met Leu Ile Pro Thr Val
100 105 110
Met Ala Phe His Leu Thr Thr Arg Asn Gly Glu Pro His Met Ile Val
115 120 125
Ser Arg Gln Glu Lys Gly Lys Ser Leu Leu Phe Lys Thr Glu Asp Gly
130 135 140
Val Asn Met Cys Thr Leu Met Ala Met Asp Leu Gly Glu Leu Cys Glu
145 150 155 160
Asp Thr Ile Thr Tyr Lys Cys Pro Leu Leu Arg Gln Asn Glu Pro Glu
165 170 175
Asp Ile Asp Cys Trp Cys Asn Ser Thr Ser Thr Trp Val Thr Tyr Gly
180 185 190
Thr Cys Thr Thr Met Gly Glu His Arg Arg Glu Lys Arg Ser Val Ala
195 200 205
Leu Val Pro His Val Gly Met Gly Leu Glu Thr Arg Thr Glu Thr Trp
210 215 220
Met Ser Ser Glu Gly Ala Trp Lys His Val Gln Arg Ile Glu Thr Trp
225 230 235 240
Ile Leu Arg His Pro Gly Phe Thr Met Met Ala Ala Ile Leu Ala Tyr
245 250 255
Thr Ile Gly Thr Thr His Phe Gln Arg Ala Leu Ile Phe Ile Leu Leu
260 265 270
Thr Ala Val Thr Pro Ser Met Thr Met Arg Cys Ile Gly Met Ser Asn
275 280 285
Arg Asp Phe Val Glu Gly Val Ser Gly Gly Ser Trp Val Asp Ile Val
290 295 300
Leu Glu His Gly Ser Cys Val Thr Thr Met Ala Lys Asn Lys Pro Thr
305 310 315 320
Leu Asp Phe Glu Leu Ile Lys Thr Glu Ala Lys Gln Pro Ala Thr Leu
325 330 335
Arg Lys Tyr Cys Ile Glu Ala Lys Leu Thr Asn Thr Thr Thr Glu Ser
340 345 350
Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Pro Ser Leu Asn Glu Glu Gln Asp Lys
355 360 365
Arg Phe Val Cys Lys His Ser Met Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly
370 375 380
Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Gly Ile Val Thr Cys Ala Met Phe Arg
385 390 395 400
Cys Lys Lys Asn Met Glu Gly Lys Val Val Gln Pro Glu Asn Leu Glu
405 410 415
Tyr Thr Ile Val Ile Thr Pro His Ser Gly Glu Glu His Ala Val Gly
420 425 430
Asn Asp Thr Gly Lys His Gly Lys Glu Ile Lys Ile Thr Pro Gln Ser
435 440 445
Ser Ile Thr Glu Ala Glu Leu Thr Gly Tyr Gly Thr Val Thr Met Glu
450 455 460
Cys Ser Pro Arg Thr Gly Leu Asp Phe Asn Glu Met Val Leu Leu Gln
465 470 475 480
Met Glu Asn Lys Ala Trp Leu Val His Arg Gln Trp Phe Leu Asp Leu
485 490 495
Pro Leu Pro Trp Leu Pro Gly Ala Asp Thr Gln Gly Ser Asn Trp Ile
500 505 510
Gln Lys Glu Thr Leu Val Thr Phe Lys Asn Pro His Ala Lys Lys Gln
515 520 525
Asp Val Val Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Met His Thr Ala Leu
530 535 540
Thr Gly Ala Thr Glu Ile Gln Met Ser Ser Gly Asn Leu Leu Phe Thr
545 550 555 560
Gly His Leu Lys Cys Arg Leu Arg Met Asp Lys Leu Gln Leu Lys Gly
565 570 575
Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys Val Val Lys Glu Ile
580 585 590
Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg Val Gln Tyr Glu Gly
595 600 605
Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile Met Asp Leu Glu Lys
610 615 620
Arg His Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn Pro Ile Val Thr Glu
625 630 635 640
Lys Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser
645 650 655
Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu Lys Leu Asn Trp Phe
660 665 670
Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Gln Met Phe Glu Thr Thr Met Arg Gly
675 680 685
Ala Lys Arg Met Ala Ile Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser
690 695 700
Leu Gly Gly Val Phe Thr Ser Ile Gly Lys Ala Leu His Gln Val Phe
705 710 715 720
Gly Ala Ile Tyr Gly Ala Ala Phe Ser Gly Val Ser Trp Thr Met Lys
725 730 735
Ile Leu Ile Gly Val Ile Ile Thr Trp Ile Gly Met Asn Ser Arg Ser
740 745 750
Thr Ser Leu Ser Val Thr Leu Val Leu Val Gly Ile Val Thr Leu Tyr
755 760 765
Leu Gly Val Met Val Gln Ala Asp Ser Gly Cys Val Val Ser Trp Lys
770 775 780
Asn Lys Glu Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ile Phe Ile Thr Asp Asn Val
785 790 795 800
His Thr Trp Thr Glu Gln Tyr Lys Phe Gln Pro Glu Ser Pro Ser Lys
805 810 815
Leu Ala Ser Ala Ile Gln Lys Ala His Glu Glu Gly Ile Cys Gly Ile
820 825 830
Arg Ser Val Thr Arg Leu Glu Asn Leu Met Trp Lys Gln Ile Thr Pro
835 840 845
Glu Leu Asn His Ile Leu Ser Glu Asn Glu Val Lys Leu Thr Ile Met
850 855 860
Thr Gly Asp Ile Lys Gly Ile Met Gln Ala Gly Lys Arg Ser Leu Arg
865 870 875 880
Pro Gln Pro Thr Glu Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala
885 890 895
Lys Met Leu Ser Thr Glu Ser His Asn Gln Thr Phe Leu Ile Asp Gly
900 905 910
Pro Glu Thr Ala Glu Cys Pro Asn Thr Asn Arg Ala Trp Asn Ser Leu
915 920 925
Glu Val Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Val Phe Thr Thr Asn Ile Trp Leu
930 935 940
Lys Leu Lys Glu Lys Gln Asp Val Phe Cys Asp Ser Lys Leu Met Ser
945 950 955 960
Ala Ala Ile Lys Asp Asn Arg Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp
965 970 975
Ile Glu Ser Ala Leu Asn Asp Thr Trp Lys Ile Glu Lys Ala Ser Phe
980 985 990
Ile Glu Val Lys Asn Cys His Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Ser
995 1000 1005
Asn Gly Val Leu Glu Ser Glu Met Ile Ile Pro Lys Asn Leu Ala
1010 1015 1020
Gly Pro Val Ser Gln His Asn Tyr Arg Pro Gly Tyr His Thr Gln
1025 1030 1035
Ile Thr Gly Pro Trp His Leu Gly Lys Leu Glu Met Asp Phe Asp
1040 1045 1050
Phe Cys Asp Gly Thr Thr Val Val Val Thr Glu Asp Cys Gly Asn
1055 1060 1065
Arg Gly Pro Ser Leu Arg Thr Thr Thr Ala Ser Gly Lys Leu Ile
1070 1075 1080
Thr Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Leu Pro Pro Leu Arg Tyr
1085 1090 1095
Arg Gly Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Leu
1100 1105 1110
Lys Glu Lys Glu Glu Asn Leu Val Asn Ser Leu Val Thr Ala Gly
1115 1120 1125
His Gly Gln Val Asp Asn Phe Ser Leu Gly Val Leu Gly Met Ala
1130 1135 1140
Leu Phe Leu Glu Glu Met Leu Arg Thr Arg Val Gly Thr Lys His
1145 1150 1155
Ala Ile Leu Leu Val Ala Val Ser Phe Val Thr Leu Ile Thr Gly
1160 1165 1170
Asn Met Ser Phe Arg Asp Leu Gly Arg Val Met Val Met Val Gly
1175 1180 1185
Ala Thr Met Thr Asp Asp Ile Gly Met Gly Val Thr Tyr Leu Ala
1190 1195 1200
Leu Leu Ala Ala Phe Lys Val Arg Pro Thr Phe Ala Ala Gly Leu
1205 1210 1215
Leu Leu Arg Lys Leu Thr Ser Lys Glu Leu Met Met Thr Thr Ile
1220 1225 1230
Gly Ile Val Leu Leu Ser Gln Ser Thr Ile Pro Glu Thr Ile Leu
1235 1240 1245
Glu Leu Thr Asp Ala Leu Ala Leu Gly Met Met Val Leu Lys Met
1250 1255 1260
Val Arg Asn Met Glu Lys Tyr Gln Leu Ala Val Thr Ile Met Ala
1265 1270 1275
Ile Leu Cys Val Pro Asn Ala Val Ile Leu Gln Asn Ala Trp Lys
1280 1285 1290
Val Ser Cys Thr Ile Leu Ala Val Val Ser Val Ser Pro Leu Leu
1295 1300 1305
Leu Thr Ser Ser Gln Gln Lys Thr Asp Trp Ile Pro Leu Ala Leu
1310 1315 1320
Thr Ile Lys Gly Leu Asn Pro Thr Ala Ile Phe Leu Thr Thr Leu
1325 1330 1335
Ser Arg Thr Ser Lys Lys Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Ala Ile
1340 1345 1350
Met Ala Val Gly Met Val Ser Ile Leu Ala Ser Ser Leu Leu Lys
1355 1360 1365
Asn Asp Ile Pro Met Thr Gly Pro Leu Val Ala Gly Gly Leu Leu
1370 1375 1380
Thr Val Cys Tyr Val Leu Thr Gly Arg Ser Ala Asp Leu Glu Leu
1385 1390 1395
Glu Arg Ala Ala Asp Val Lys Trp Glu Asp Gln Ala Glu Ile Ser
1400 1405 1410
Gly Ser Ser Pro Ile Leu Ser Ile Thr Ile Ser Glu Asp Gly Ser
1415 1420 1425
Met Ser Ile Lys Asn Glu Glu Glu Glu Gln Thr Leu Thr Ile Leu
1430 1435 1440
Ile Arg Thr Gly Leu Leu Val Ile Ser Gly Leu Phe Pro Val Ser
1445 1450 1455
Ile Pro Ile Thr Ala Ala Ala Trp Tyr Leu Trp Glu Val Lys Lys
1460 1465 1470
Gln Arg Ala Gly Val Leu Trp Asp Val Pro Ser Pro Pro Pro Met
1475 1480 1485
Gly Lys Ala Glu Leu Glu Asp Gly Ala Tyr Arg Ile Lys Gln Lys
1490 1495 1500
Gly Ile Leu Gly Tyr Ser Gln Ile Gly Ala Gly Val Tyr Lys Glu
1505 1510 1515
Gly Thr Phe His Thr Met Trp His Val Thr Arg Gly Ala Val Leu
1520 1525 1530
Met His Lys Gly Lys Arg Ile Glu Pro Ser Trp Ala Asp Val Lys
1535 1540 1545
Lys Asp Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Lys Leu Glu Gly Glu
1550 1555 1560
Trp Lys Glu Gly Glu Glu Val Gln Val Leu Ala Leu Glu Pro Gly
1565 1570 1575
Lys Asn Pro Arg Ala Val Gln Thr Lys Pro Gly Leu Phe Lys Thr
1580 1585 1590
Asn Ala Gly Thr Ile Gly Ala Val Ser Leu Asp Phe Ser Pro Gly
1595 1600 1605
Thr Ser Gly Ser Pro Ile Ile Asp Lys Lys Gly Lys Val Val Gly
1610 1615 1620
Leu Tyr Gly Asn Gly Val Val Thr Arg Ser Gly Ala Tyr Val Ser
1625 1630 1635
Ala Ile Ala Gln Thr Glu Lys Ser Ile Glu Asp Asn Pro Glu Ile
1640 1645 1650
Glu Asp Asp Ile Phe Arg Lys Arg Arg Leu Thr Ile Met Asp Leu
1655 1660 1665
His Pro Gly Ala Gly Lys Thr Lys Arg Tyr Leu Pro Ala Ile Val
1670 1675 1680
Arg Glu Ala Ile Lys Arg Gly Leu Arg Thr Leu Ile Leu Ala Pro
1685 1690 1695
Thr Arg Val Val Ala Ala Glu Met Glu Glu Ala Leu Arg Gly Leu
1700 1705 1710
Pro Ile Arg Tyr Gln Thr Pro Ala Ile Arg Ala Glu His Thr Gly
1715 1720 1725
Arg Glu Ile Val Asp Leu Met Cys His Ala Thr Phe Thr Met Arg
1730 1735 1740
Leu Leu Ser Pro Val Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Ile Met
1745 1750 1755
Asp Glu Ala His Phe Thr Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly
1760 1765 1770
Tyr Ile Ser Thr Arg Val Glu Met Gly Glu Ala Ala Gly Ile Phe
1775 1780 1785
Met Thr Ala Thr Pro Pro Gly Ser Arg Asp Pro Phe Pro Gln Ser
1790 1795 1800
Asn Ala Pro Ile Ile Asp Glu Glu Arg Glu Ile Pro Glu Arg Ser
1805 1810 1815
Trp Asn Ser Gly His Glu Trp Val Thr Asp Phe Lys Gly Lys Thr
1820 1825 1830
Val Trp Phe Val Pro Ser Ile Lys Ala Gly Asn Asp Ile Ala Ala
1835 1840 1845
Cys Leu Arg Lys Asn Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys
1850 1855 1860
Thr Phe Asp Ser Glu Tyr Val Lys Thr Arg Thr Asn Asp Trp Asp
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1880 1885 1890
Ala Glu Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Met Lys Pro Val Ile
1895 1900 1905
Leu Thr Asp Gly Glu Glu Arg Val Ile Leu Ala Gly Pro Met Pro
1910 1915 1920
Val Thr His Ser Ser Ala Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg
1925 1930 1935
Asn Pro Lys Asn Glu Asn Asp Gln Tyr Ile Tyr Met Gly Glu Pro
1940 1945 1950
Leu Glu Asn Asp Glu Asp Cys Ala His Trp Lys Glu Ala Lys Met
1955 1960 1965
Leu Leu Asp Asn Ile Asn Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Ser Met
1970 1975 1980
Phe Glu Pro Glu Arg Glu Lys Val Asp Ala Ile Asp Gly Glu Tyr
1985 1990 1995
Arg Leu Arg Gly Glu Ala Arg Lys Thr Phe Val Asp Leu Met Arg
2000 2005 2010
Arg Gly Asp Leu Pro Val Trp Leu Ala Tyr Arg Val Ala Ala Glu
2015 2020 2025
Gly Ile Asn Tyr Ala Asp Arg Arg Trp Cys Phe Asp Gly Val Lys
2030 2035 2040
Asn Asn Gln Ile Leu Glu Glu Asn Val Glu Val Glu Ile Trp Thr
2045 2050 2055
Lys Glu Gly Glu Arg Lys Lys Leu Lys Pro Arg Trp Leu Asp Ala
2060 2065 2070
Arg Ile Tyr Ser Asp Pro Leu Ala Leu Lys Glu Phe Lys Glu Phe
2075 2080 2085
Ala Ala Gly Arg Lys Ser Leu Thr Leu Asn Leu Ile Thr Glu Met
2090 2095 2100
Gly Arg Leu Pro Thr Phe Met Thr Gln Lys Ala Arg Asp Ala Leu
2105 2110 2115
Asp Asn Leu Ala Val Leu His Thr Ala Glu Ala Gly Gly Arg Ala
2120 2125 2130
Tyr Asn His Ala Leu Ser Glu Leu Pro Glu Thr Leu Glu Thr Leu
2135 2140 2145
Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ala Thr Val Thr Gly Gly Ile Phe Leu
2150 2155 2160
Phe Leu Met Ser Gly Arg Gly Ile Gly Lys Met Thr Leu Gly Met
2165 2170 2175
Cys Cys Ile Ile Thr Ala Ser Ile Leu Leu Trp Tyr Ala Gln Ile
2180 2185 2190
Gln Pro His Trp Ile Ala Ala Ser Ile Ile Leu Glu Phe Phe Leu
2195 2200 2205
Ile Val Leu Leu Ile Pro Glu Pro Glu Lys Gln Arg Thr Pro Gln
2210 2215 2220
Asp Asn Gln Leu Thr Tyr Val Val Ile Ala Ile Leu Thr Val Val
2225 2230 2235
Ala Ala Thr Met Ala Asn Glu Met Gly Phe Leu Glu Lys Thr Lys
2240 2245 2250
Lys Asp Leu Gly Leu Gly Ser Ile Ala Thr Gln Gln Pro Glu Ser
2255 2260 2265
Asn Ile Leu Asp Ile Asp Leu Arg Pro Ala Ser Ala Trp Thr Leu
2270 2275 2280
Tyr Ala Val Ala Thr Thr Phe Val Thr Pro Met Leu Arg His Ser
2285 2290 2295
Ile Glu Asn Ser Ser Val Asn Val Ser Leu Thr Ala Ile Ala Asn
2300 2305 2310
Gln Ala Thr Val Leu Met Gly Leu Gly Lys Gly Trp Pro Leu Ser
2315 2320 2325
Lys Met Asp Ile Gly Val Pro Leu Leu Ala Ile Gly Cys Tyr Ser
2330 2335 2340
Gln Val Asn Pro Ile Thr Leu Thr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Val
2345 2350 2355
Ala His Tyr Ala Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr
2360 2365 2370
Arg Glu Ala Gln Lys Arg Ala Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Pro
2375 2380 2385
Thr Val Asp Gly Ile Thr Val Ile Asp Leu Asp Pro Ile Pro Tyr
2390 2395 2400
Asp Pro Lys Phe Glu Lys Gln Leu Gly Gln Val Met Leu Leu Val
2405 2410 2415
Leu Cys Val Thr Gln Val Leu Met Met Arg Thr Thr Trp Ala Leu
2420 2425 2430
Cys Glu Ala Leu Thr Leu Ala Thr Gly Pro Ile Ser Thr Leu Trp
2435 2440 2445
Glu Gly Asn Pro Gly Arg Phe Trp Asn Thr Thr Ile Ala Val Ser
2450 2455 2460
Met Ala Asn Ile Phe Arg Gly Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Gly Leu
2465 2470 2475
Leu Phe Ser Ile Met Lys Asn Thr Thr Asn Thr Arg Arg Gly Thr
2480 2485 2490
Gly Asn Ile Gly Glu Thr Leu Gly Glu Lys Trp Lys Ser Arg Leu
2495 2500 2505
Asn Ala Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Lys Ser Gly
2510 2515 2520
Ile Gln Glu Val Asp Arg Thr Leu Ala Lys Glu Gly Ile Lys Arg
2525 2530 2535
Gly Glu Thr Asp His His Ala Val Ser Arg Gly Ser Ala Lys Leu
2540 2545 2550
Arg Trp Phe Val Glu Arg Asn Met Val Thr Pro Glu Gly Lys Val
2555 2560 2565
Val Asp Leu Gly Cys Gly Arg Gly Gly Trp Ser Tyr Tyr Cys Gly
2570 2575 2580
Gly Leu Lys Asn Val Arg Glu Val Lys Gly Leu Thr Lys Gly Gly
2585 2590 2595
Pro Gly His Glu Glu Pro Ile Pro Met Ser Thr Tyr Gly Trp Asn
2600 2605 2610
Leu Val Arg Leu Gln Ser Gly Val Asp Val Phe Phe Ile Pro Pro
2615 2620 2625
Glu Lys Cys Asp Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Pro
2630 2635 2640
Asn Pro Thr Val Glu Ala Gly Arg Thr Leu Arg Val Leu Asn Leu
2645 2650 2655
Val Glu Asn Trp Leu Asn Asn Asn Thr Gln Phe Cys Ile Lys Val
2660 2665 2670
Leu Asn Pro Tyr Met Pro Ser Val Ile Glu Lys Met Glu Ala Leu
2675 2680 2685
Gln Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Leu Val Arg Asn Pro Leu Ser Arg
2690 2695 2700
Asn Ser Thr His Glu Met Tyr Trp Val Ser Asn Ala Ser Gly Asn
2705 2710 2715
Ile Val Ser Ser Val Asn Met Ile Ser Arg Met Leu Ile Asn Arg
2720 2725 2730
Phe Thr Met Arg Tyr Lys Lys Ala Thr Tyr Glu Pro Asp Val Asp
2735 2740 2745
Leu Gly Ser Gly Thr Arg Asn Ile Gly Ile Glu Ser Glu Ile Pro
2750 2755 2760
Asn Leu Asp Ile Ile Gly Lys Arg Ile Glu Lys Ile Lys Gln Glu
2765 2770 2775
His Glu Thr Ser Trp His Tyr Asp Gln Asp His Pro Tyr Lys Thr
2780 2785 2790
Trp Ala Tyr His Gly Ser Tyr Glu Thr Lys Gln Thr Gly Ser Ala
2795 2800 2805
Ser Ser Met Val Asn Gly Val Val Arg Leu Leu Thr Lys Pro Trp
2810 2815 2820
Asp Val Val Pro Met Val Thr Gln Met Ala Met Thr Asp Thr Thr
2825 2830 2835
Pro Phe Gly Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg
2840 2845 2850
Thr Gln Glu Pro Lys Glu Gly Thr Lys Lys Leu Met Lys Ile Thr
2855 2860 2865
Ala Glu Trp Leu Trp Lys Glu Leu Gly Lys Lys Lys Thr Pro Arg
2870 2875 2880
Met Cys Thr Arg Glu Glu Phe Thr Arg Lys Val Arg Ser Asn Ala
2885 2890 2895
Ala Leu Gly Ala Ile Phe Thr Asp Glu Asn Lys Trp Lys Ser Ala
2900 2905 2910
Arg Glu Ala Val Glu Asp Ser Arg Phe Trp Glu Leu Val Asp Lys
2915 2920 2925
Glu Arg Asn Leu His Leu Glu Gly Lys Cys Glu Thr Cys Val Tyr
2930 2935 2940
Asn Met Met Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Gly Glu Phe Gly Lys
2945 2950 2955
Ala Lys Gly Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg
2960 2965 2970
Phe Leu Glu Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp
2975 2980 2985
Phe Ser Arg Glu Asn Ser Leu Ser Gly Val Glu Gly Glu Gly Leu
2990 2995 3000
His Lys Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Val Ser Lys Lys Glu Gly
3005 3010 3015
Gly Ala Met Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile
3020 3025 3030
Thr Leu Glu Asp Leu Lys Asn Glu Glu Met Val Thr Asn His Met
3035 3040 3045
Glu Gly Glu His Lys Lys Leu Ala Glu Ala Ile Phe Lys Leu Thr
3050 3055 3060
Tyr Gln Asn Lys Val Val Arg Val Gln Arg Pro Thr Pro Arg Gly
3065 3070 3075
Thr Val Met Asp Ile Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly
3080 3085 3090
Gln Val Gly Thr Tyr Gly Leu Asn Thr Phe Thr Asn Met Glu Ala
3095 3100 3105
Gln Leu Ile Arg Gln Met Glu Gly Glu Gly Val Phe Lys Ser Ile
3110 3115 3120
Gln His Leu Thr Ile Thr Glu Glu Ile Ala Val Gln Asn Trp Leu
3125 3130 3135
Ala Arg Val Gly Arg Glu Arg Leu Ser Arg Met Ala Ile Ser Gly
3140 3145 3150
Asp Asp Cys Val Val Lys Pro Leu Asp Asp Arg Phe Ala Ser Ala
3155 3160 3165
Leu Thr Ala Leu Asn Asp Met Gly Lys Ile Arg Lys Asp Ile Gln
3170 3175 3180
Gln Trp Glu Pro Ser Arg Gly Trp Asn Asp Trp Thr Gln Val Pro
3185 3190 3195
Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Ile Met Lys Asp Gly Arg
3200 3205 3210
Val Leu Val Val Pro Cys Arg Asn Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg
3215 3220 3225
Ala Arg Ile Ser Gln Gly Ala Gly Trp Ser Leu Arg Glu Thr Ala
3230 3235 3240
Cys Leu Gly Lys Ser Tyr Ala Gln Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
3245 3250 3255
His Arg Arg Asp Leu Arg Leu Ala Ala Asn Ala Ile Cys Ser Ala
3260 3265 3270
Val Pro Ser His Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile
3275 3280 3285
His Ala Lys His Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Thr Val
3290 3295 3300
Trp Asn Arg Val Trp Ile Gln Glu Asn Pro Trp Met Glu Asp Lys
3305 3310 3315
Thr Pro Val Glu Ser Trp Glu Glu Ile Pro Tyr Leu Gly Lys Arg
3320 3325 3330
Glu Asp Gln Trp Cys Gly Ser Leu Ile Gly Leu Thr Ser Arg Ala
3335 3340 3345
Thr Trp Ala Lys Asn Ile Gln Ala Ala Ile Asn Gln Val Arg Ser
3350 3355 3360
Leu Ile Gly Asn Glu Glu Tyr Thr Asp Tyr Met Pro Ser Met Lys
3365 3370 3375
Arg Phe Arg Arg Glu Glu Glu Glu Ala Gly Val Leu Trp
3380 3385 3390
<210> 13
<211> 10696
<212> DNA
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 13
agttgttagt ctacgtggac cgacaagaac agtttcgact cggaagcttg cttaacgtag 60
tgctgacagt tttttattag agagcagatc tctgatgaac aaccaacgga aaaagacggg 120
aaaaccgtct atcaatatgc tgaaacgcgt gagaaaccgt gtgtcaactg gatcacagtt 180
ggcgaagaga ttctcaagag gattgctgaa cggccaagga ccaatgaaat tggttatggc 240
atttatagct ttcctcagat ttctagccat tccaccgaca gcaggagtct tggctagatg 300
gggtaccttt aagaagtcgg gggctattaa ggtcttaaaa ggcttcaaga aggagatctc 360
aaacatgctg agcattatca acaaacggaa aaagacatcg ctctgtctca tgatgatgtt 420
accagcaaca cttgctttcc acttaacttc acgagatgga gagccgcgca tgattgtggg 480
gaagaatgaa agaggaaaat ccctactttt caagacagcc tctggaatca acatgtgcac 540
actcatagcc atggatctgg gagagatgtg tgatgacacg gtcacttaca aatgccccca 600
cattaccgaa gtggagcctg aagacattga ctgctggtgc aaccttacat cgacatgggt 660
gacttatgga acatgcaatc aagctggaga gcatagacgc gataagagat cagtggcgtt 720
agctccccat gttggcatgg gactggacac acgcactcaa acctggatgt cggctgaagg 780
agcttggaga caagtcgaga aggtagagac atgggccctt aggcacccag ggtttaccat 840
actagcccta tttcttgccc attacatagg cacttccttg acccagaaag tggttatttt 900
tatactatta atgctggtta ccccatccat gacaatgaga tgtgtaggag taggaaacag 960
agattttgtg gaaggcctat cgggagctac gtgggttgac gtggtgctcg agcacggtgg 1020
gtgtgtgact accatggcta agaacaagcc cacgctggac atagagcttc agaagaccga 1080
ggccacccaa ctggcgaccc taaggaagct atgcattgag ggaaaaatta ccaacataac 1140
aaccgactca agatgtccca cccaagggga agcgatttta cctgaggagc aggaccagaa 1200
ctacgtgtgt aagcatacat acgtggacag aggctgggga aacggttgtg gtttgtttgg 1260
caagggaagc ttggtgacat gcgcgaaatt tcaatgttta gaatcaatag agggaaaagt 1320
ggtgcaacat gagaacctca aatacaccgt catcatcaca gtgcacacag gagaccaaca 1380
ccaggtggga aatgaaacgc agggagtcac ggctgagata acaccccagg catcaaccgc 1440
tgaagtcatt ttacctgaat atggaaccct cgggctagaa tgctcaccac ggacaggttt 1500
ggatttcaat gaaatgatct cattgacaat gaagaacaaa gcatggatgg tacatagaca 1560
atggttcttt gacttacccc taccatggac atcaggagct acagcagaaa caccaacttg 1620
gaacaggaaa gagcttcttg tgacatttaa aaatgcacat gcaaaaaagc aagaagtagt 1680
tgttcttgga tcacaagagg gagcaatgca tacagcactg acaggagcta cagagatcca 1740
aacctcagga ggcacaagta tctttgcggg gcacttaaaa tgtagactca agatggacaa 1800
attggaactc aaggggatga gctatgcaat gtgcttgagt agctttgtgt tgaagaaaga 1860
agtctccgaa acgcagcatg ggacaatact cattaaggtt gagtacaaag gggaagatgc 1920
accctgcaag attcctttct ccacggagga tggacaagga aaagctcaca atggcagact 1980
gatcacagcc aatccagtgg tgaccaagaa ggaggagcct gtcaacattg aggctgaacc 2040
tccttttgga gaaagtaaca tagtaattgg aattggagac aaagccctga aaatcaactg 2100
gtacaagaag ggaagctcga ttgggaagat gttcgaggcc actgccagag gtgcaaggcg 2160
catggccatc ttgggagaca cagcctggga ctttggatca gtgggtggtg ttttgaattc 2220
attagggaaa atggtccacc aaatatttgg gagtgcttac acagccctat ttggtggagt 2280
ctcctggatg atgaaaattg gaataggtgt cctcttaacc tggatagggt tgaactcaaa 2340
aaatacttct atgtcatttt catgcatcgc gataggaatc attacactct atctgggagc 2400
cgtggtgcaa gctgacatgg ggtgtgtcat aaactggaaa ggcaaagaac tcaaatgtgg 2460
aagtggaatt ttcgtcacta atgaggtcca cacctggaca gagcaataca aatttcaagc 2520
agactccccc aagagactgg caacagccat tgcaggcgct tgggaaaatg gagtgtgcgg 2580
aattaggtca acaaccagaa tggagaacct cttgtggaag caaatagcca atgaactgaa 2640
ttacatatta tgggaaaaca acattaaatt aacggtagtt gtaggcgaca taactggggt 2700
cttagagcaa gggaaaagaa cactaacacc acaacccatg gagctaaaat attcttggaa 2760
aacatgggga aaggcaaaaa tagtgacagc tgaaacacaa aattcctctt tcataataga 2820
tgggccaagc acaccggagt gtccaagtgc ctcaagagca tggaatgtgt gggaggtgga 2880
ggattacggg ttcggagttt tcacaaccaa catatggctg aaactccgag aggtgtacac 2940
ccaactatgt gaccataggc taatgtcggc agccgtcaag gatgagaggg ctgtacatgc 3000
cgacatgggc tattggatag aaagccaaaa gaatgggagt tggaagctag aaaaagcatc 3060
cttcatagag gtgaaaacct gcacatggcc aaaatcacac actctctgga gcaatggtgt 3120
gctagagagt gacatgatta tcccaaagag tctagctggt cccatttcgc aacacaacca 3180
caggcccggg taccacaccc aaacggcagg accctggcac ttaggaaaat tggagctgga 3240
cttcaactat tgtgaaggaa caacagttgt catctcagaa aactgtggga caagaggccc 3300
atcattgaga acaacaacgg tgtcagggaa gttgatacac gaatggtgct gccgctcgtg 3360
cacacttcct cccctacgat acatgggaga agacggctgc tggtatggca tggaaatcag 3420
acccattaat gagaaagaag agaatatggt aaagtctcta gcctcagcag ggagtggaaa 3480
ggtggacaac ttcacaatgg gtgtcttgtg tttggcaatc ctctttgaag aggtgatgag 3540
aggaaaattt gggaaaaaac acatgattgc aggggttctc ttcacgtttg tgctcctcct 3600
ctcagggcaa ataacatgga gagacatggc gcacacactc ataatgattg ggtccaacgc 3660
ctctgacaga atggggatgg gcgtcactta cctagctcta attgcaacat ttaaaattca 3720
gccattcctg gctttgggat tcttcctgag gaaactgaca tctagagaaa atttattgct 3780
gggagttggg ttggccatgg cagcaacgtt acgactgcca gaggacattg aacagatggc 3840
gaatggaatt gctttggggc tcatggctct taaactgata acacaatttg aaacatacca 3900
actatggacg gcattagttt ccctaacgtg ttcaaataca attttcacgt tgactgttgc 3960
ctggagaaca gccactctga ttttagccgg aatttcgctt ttgccagtgt gccagtcttc 4020
gagcatgagg aaaacagatt ggctcccaat gactgtggca gctatgggag ctcaacccct 4080
accacttttt attttcagtc tgaaagatac actcaaaagg agaagctggc cactgaatga 4140
gggggtgatg gcagttggac ttgtgagcat tctagctagt tctctcctta ggaatgatgt 4200
gcctatggct ggaccattag tggctggggg cttgctgata gcgtgctacg tcataactgg 4260
cacgtcagca gacctcactg tagaaaaagc agcagatgta acatgggagg aagaggccga 4320
gcaaacagga gtgtcccaca atttaatggt cacagttgat gatgatggaa caatgagaat 4380
aaaagatgac gagactgaga acatcttaac agtgctttta aaaacagcac tactaatagt 4440
atcaggcatc tttccatact ccatacccgc aacactgttg gtctggcata cttggcaaaa 4500
gcaaacccaa agatccggcg tcctatggga cgtacccagc cccccagaga cacagaaagc 4560
ggaactggaa gaaggggtct ataggatcaa acagcaagga atttttggga aaacccaagt 4620
gggggttgga gtacagaaag aaggagtttt ccacaccatg tggcatgtca caagaggggc 4680
agtgttgaca cacaatggga aaagactgga accaaactgg gctagcgtga aaaaagatct 4740
gatttcatac ggaggaggat ggagattgag tgcacaatgg caaaaggggg aggaggtgca 4800
ggttattgcc gtagagcctg ggaagaaccc aaagaacttt caaaccatgc caggcatttt 4860
tcagacaaca acaggggaaa taggagcaat tgcactggat ttcaagcctg gaacttcagg 4920
atctcccatc ataaacagag agggaaaggt agtgggactg tatggcaatg gagtggttac 4980
aaagaatgga ggctatgtca gtggaatagc gcaaacaaat gcagaaccag atggaccgac 5040
accagagttg gaagaagaga tgttcaaaaa gcgaaatcta accataatgg atctccatcc 5100
tgggtcagga aagacgcgga aatatcttcc agctattgtt agagaggcaa tcaagagacg 5160
cttaaggact ctaattttgg caccaacaag ggtagttgca gctgagatgg aagaagcatt 5220
gaaagggctc ccaataaggt atcaaacaac tgcaacaaaa tctgaacaca caggaagaga 5280
gattgttgat ctaatgtgtc acgcaacgtt cacaatgcgc ttgctgtcac cagtcagggt 5340
tccaaactac aacttgataa taatggatga ggcccatttc acagacccag ccagtatagc 5400
ggctagaggg tacatatcaa ctcgtgtagg aatgggagag gcagccgcaa ttttcatgac 5460
agcaacaccc cctggaacag ctgatgcctt tcctcagagc aacgctccaa ttcaagatga 5520
agagagagac ataccggaac gctcatggaa ttcaggcaat gaatggatta ctgactttgt 5580
tgggaagaca gtgtggtttg tccctagcat caaagccgga aatgacatag caaactgctt 5640
gcggaaaaat ggaaaaaagg ttattcaact cagcaggaag acctttgaca cagaatatca 5700
aaagaccaaa ctgaatgatt gggactttgt ggtgacaaca gacatttcag aaatgggagc 5760
caatttcaaa gcagatagag tgatcgaccc aagaagatgt ctcaagccgg tgattttgac 5820
agatggaccc gagcgggtga tcctggctgg accaatgcca gtcaccgtag cgagcgctgc 5880
gcaaaggaga gggagagttg gcaggaaccc acaaaaagaa aatgaccagt acatattcat 5940
gggccagcct ctcaacaatg atgaagacca tgctcactgg acagaagcaa aaatgctgct 6000
ggacaacatc aacacaccag aagggattat accagctctc tttgaaccag aaagggagaa 6060
gtcagccgcc atagacggcg aataccgcct gaagggtgag tccaggaaga ctttcgtgga 6120
actcatgagg aggggtgacc tcccagtttg gctagcccat aaagtagcat cagaagggat 6180
caaatataca gatagaaaat ggtgctttga tggagaacgt aataatcaaa ttttagagga 6240
gaatatggat gtggaaatct ggacaaagga aggagaaaag aaaaaactga gacctaggtg 6300
gcttgatgcc cgcacttatt cagatccttt agcactcaaa gaattcaagg attttgcagc 6360
tggcagaaag tcaatcgccc ttgatcttgt gacagaaata ggaagagtgc cttcacactt 6420
agcccacaga acgagaaacg ccctggataa tttggtgatg ctgcacacgt cagaacatgg 6480
cggtagggcc tacaggcatg cagtggagga actaccagaa acgatggaaa cactcttact 6540
cctgggactg atgatcttgt taacaggtgg agcaatgctc ttcttgatat caggtaaagg 6600
gattggaaag acttcaatag gactcatttg tgtaattgct tccagcggca tgttatggat 6660
ggctgatgtc ccactccaat ggatcgcatc ggctatagtc ctggagtttt ttatgatggt 6720
gttgctcata ccagaaccag aaaagcagag aactccccaa gacaaccaac tcgcatatgt 6780
cgtgataggc atacttacat tggctgcaat agtagcggcc aatgaaatgg gactgttgga 6840
aactacaaag agagatttag gaatgtctaa agaaccaggt gttgtttctc caaccagcta 6900
tttggatgtg gacttgcacc cagcatcagc ctggacattg tacgccgtgg ccacaacagt 6960
aataacacca atgttgagac acaccataga gaattccaca gcaaatgtgt ctctggcagc 7020
catagctaac caggcagtgg tcctgatggg tttagacaaa ggatggccga tatcgaaaat 7080
ggacttgggc gtaccactat tggcactggg ttgctattca caagtgaacc cactaactct 7140
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ggatggaata atgacaatag acctagatcc tgtaatatat gattcaaaat ttgaaaagca 7320
actaggacag gtcatgctcc tggttctgtg tgcagtccaa cttttattga tgagaacatc 7380
atgggccttg tgtgaagttc taaccctagc cacaggacca ataacaacac tctgggaagg 7440
atcacctggg aagttctgga acaccacgat agctgtttcc atggcgaaca tctttagagg 7500
gagctattta gcaggagctg ggcttgcttt ttctatcatg aaatcagttg gaacaggaaa 7560
gagaggaaca gggtcacaag gtgaaacctt aggagaaaag tggaaaaaga aattaaatca 7620
gttatcccgg aaagagtttg acctttacaa gaaatccgga atcaccgaag tggatagaac 7680
agaagccaaa gaagggttaa aaagaggaga aataacacac catgccgtgt ccagaggcag 7740
cgcaaaactt caatggttcg tggagagaaa catggtcatt cctgaaggaa gagtcataga 7800
cctaggctgt ggaagaggag gctggtcata ttactgtgca ggactgaaaa aagttacaga 7860
agtgcgagga tacacaaaag gcggcccagg acacgaagaa ccagtaccta tgtctacata 7920
cggatggaac atagtcaagt taatgagtgg aaaggatgtt ttttatctgc cacctgaaaa 7980
gtgtgatacc ctattgtgtg acattggaga atcttcacca agcccaacag tggaagaaag 8040
cagaaccata agagttttga agatggttga accatggcta aagaacaacc agttttgcat 8100
taaagtattg aacccataca tgccaactgt gattgagcac ttagaaagac tacaaaggaa 8160
acatggagga atgcttgtga gaaatccact ctcacgaaac tccacgcacg aaatgtattg 8220
gatatccaat ggtacaggca atatcgtctc ttcagtcaac atggtatcca gattgctact 8280
gaacagattc acaatgacac acaggagacc caccatagag aaagatgtgg atctaggagc 8340
aggaacccga catgtcaatg cggaaccaga aacacccaac atggatgtca ttggggaaag 8400
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caaaacgtgg gcttaccatg gatcctatga agtaaaagcc acaggctcag cctcctccat 8520
gataaatgga gtcgtgaaac tcctcacaaa accatgggat gtggtgccca tggtgacaca 8580
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cagtgcgaga gctgctgttg aggacgaaga attttggaaa cttgtggaca gagaacgtga 8880
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agatatttcc aagatacccg gaggagccat gtatgctgat gacacagccg gttgggacac 9180
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acacaggcag ctagcgaacg ctatattcaa gctcacatac caaaacaaag tggtcaaagt 9300
ccaacgacca actccaaagg gcacggtaat ggacatcata tctaggaaag accaaagagg 9360
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catcagcggg gatgattgcg ttgtgaaacc aatcgacgac agattcgcca atgccctgct 9600
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agatggaaga aagttggtag ttccctgcag accccaggac gaactaatag gaagagcgag 9780
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tcaaatgtgg gctctcatgt attttcacag aagagatctt agactagcat ccaacgccat 9900
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cacaacgcag cagcggggcc cgagcactga gggaagctgt acctccttgc aaaggactag 10560
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tcctgctgtc tcctcagcat cattccaggc acagaacgcc agaaaatgga atggtgctgt 10680
tgaatcaaca ggttct 10696
<210> 14
<211> 3390
<212> PRT
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 14
Met Asn Asn Gln Arg Lys Lys Thr Gly Lys Pro Ser Ile Asn Met Leu
1 5 10 15
Lys Arg Val Arg Asn Arg Val Ser Thr Gly Ser Gln Leu Ala Lys Arg
20 25 30
Phe Ser Arg Gly Leu Leu Asn Gly Gln Gly Pro Met Lys Leu Val Met
35 40 45
Ala Phe Ile Ala Phe Leu Arg Phe Leu Ala Ile Pro Pro Thr Ala Gly
50 55 60
Val Leu Ala Arg Trp Gly Thr Phe Lys Lys Ser Gly Ala Ile Lys Val
65 70 75 80
Leu Lys Gly Phe Lys Lys Glu Ile Ser Asn Met Leu Ser Ile Ile Asn
85 90 95
Lys Arg Lys Lys Thr Ser Leu Cys Leu Met Met Met Leu Pro Ala Thr
100 105 110
Leu Ala Phe His Leu Thr Ser Arg Asp Gly Glu Pro Arg Met Ile Val
115 120 125
Gly Lys Asn Glu Arg Gly Lys Ser Leu Leu Phe Lys Thr Ala Ser Gly
130 135 140
Ile Asn Met Cys Thr Leu Ile Ala Met Asp Leu Gly Glu Met Cys Asp
145 150 155 160
Asp Thr Val Thr Tyr Lys Cys Pro His Ile Thr Glu Val Glu Pro Glu
165 170 175
Asp Ile Asp Cys Trp Cys Asn Leu Thr Ser Thr Trp Val Thr Tyr Gly
180 185 190
Thr Cys Asn Gln Ala Gly Glu His Arg Arg Asp Lys Arg Ser Val Ala
195 200 205
Leu Ala Pro His Val Gly Met Gly Leu Asp Thr Arg Thr Gln Thr Trp
210 215 220
Met Ser Ala Glu Gly Ala Trp Arg Gln Val Glu Lys Val Glu Thr Trp
225 230 235 240
Ala Leu Arg His Pro Gly Phe Thr Ile Leu Ala Leu Phe Leu Ala His
245 250 255
Tyr Ile Gly Thr Ser Leu Thr Gln Lys Val Val Ile Phe Ile Leu Leu
260 265 270
Met Leu Val Thr Pro Ser Met Thr Met Arg Cys Val Gly Val Gly Asn
275 280 285
Arg Asp Phe Val Glu Gly Leu Ser Gly Ala Thr Trp Val Asp Val Val
290 295 300
Leu Glu His Gly Gly Cys Val Thr Thr Met Ala Lys Asn Lys Pro Thr
305 310 315 320
Leu Asp Ile Glu Leu Gln Lys Thr Glu Ala Thr Gln Leu Ala Thr Leu
325 330 335
Arg Lys Leu Cys Ile Glu Gly Lys Ile Thr Asn Ile Thr Thr Asp Ser
340 345 350
Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Ala Ile Leu Pro Glu Glu Gln Asp Gln
355 360 365
Asn Tyr Val Cys Lys His Thr Tyr Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly
370 375 380
Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Ser Leu Val Thr Cys Ala Lys Phe Gln
385 390 395 400
Cys Leu Glu Ser Ile Glu Gly Lys Val Val Gln His Glu Asn Leu Lys
405 410 415
Tyr Thr Val Ile Ile Thr Val His Thr Gly Asp Gln His Gln Val Gly
420 425 430
Asn Glu Thr Gln Gly Val Thr Ala Glu Ile Thr Pro Gln Ala Ser Thr
435 440 445
Ala Glu Val Ile Leu Pro Glu Tyr Gly Thr Leu Gly Leu Glu Cys Ser
450 455 460
Pro Arg Thr Gly Leu Asp Phe Asn Glu Met Ile Ser Leu Thr Met Lys
465 470 475 480
Asn Lys Ala Trp Met Val His Arg Gln Trp Phe Phe Asp Leu Pro Leu
485 490 495
Pro Trp Thr Ser Gly Ala Thr Ala Glu Thr Pro Thr Trp Asn Arg Lys
500 505 510
Glu Leu Leu Val Thr Phe Lys Asn Ala His Ala Lys Lys Gln Glu Val
515 520 525
Val Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Met His Thr Ala Leu Thr Gly
530 535 540
Ala Thr Glu Ile Gln Thr Ser Gly Gly Thr Ser Ile Phe Ala Gly His
545 550 555 560
Leu Lys Cys Arg Leu Lys Met Asp Lys Leu Glu Leu Lys Gly Met Ser
565 570 575
Tyr Ala Met Cys Leu Ser Ser Phe Val Leu Lys Lys Glu Val Ser Glu
580 585 590
Thr Gln His Gly Thr Ile Leu Ile Lys Val Glu Tyr Lys Gly Glu Asp
595 600 605
Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr Glu Asp Gly Gln Gly Lys Ala
610 615 620
His Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Val Thr Lys Lys Glu
625 630 635 640
Glu Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro Pro Phe Gly Glu Ser Asn Ile
645 650 655
Val Ile Gly Ile Gly Asp Lys Ala Leu Lys Ile Asn Trp Tyr Lys Lys
660 665 670
Gly Ser Ser Ile Gly Lys Met Phe Glu Ala Thr Ala Arg Gly Ala Arg
675 680 685
Arg Met Ala Ile Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly
690 695 700
Gly Val Leu Asn Ser Leu Gly Lys Met Val His Gln Ile Phe Gly Ser
705 710 715 720
Ala Tyr Thr Ala Leu Phe Gly Gly Val Ser Trp Met Met Lys Ile Gly
725 730 735
Ile Gly Val Leu Leu Thr Trp Ile Gly Leu Asn Ser Lys Asn Thr Ser
740 745 750
Met Ser Phe Ser Cys Ile Ala Ile Gly Ile Ile Thr Leu Tyr Leu Gly
755 760 765
Ala Val Val Gln Ala Asp Met Gly Cys Val Ile Asn Trp Lys Gly Lys
770 775 780
Glu Leu Lys Cys Gly Ser Gly Ile Phe Val Thr Asn Glu Val His Thr
785 790 795 800
Trp Thr Glu Gln Tyr Lys Phe Gln Ala Asp Ser Pro Lys Arg Leu Ala
805 810 815
Thr Ala Ile Ala Gly Ala Trp Glu Asn Gly Val Cys Gly Ile Arg Ser
820 825 830
Thr Thr Arg Met Glu Asn Leu Leu Trp Lys Gln Ile Ala Asn Glu Leu
835 840 845
Asn Tyr Ile Leu Trp Glu Asn Asn Ile Lys Leu Thr Val Val Val Gly
850 855 860
Asp Ile Thr Gly Val Leu Glu Gln Gly Lys Arg Thr Leu Thr Pro Gln
865 870 875 880
Pro Met Glu Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala Lys Ile
885 890 895
Val Thr Ala Glu Thr Gln Asn Ser Ser Phe Ile Ile Asp Gly Pro Ser
900 905 910
Thr Pro Glu Cys Pro Ser Ala Ser Arg Ala Trp Asn Val Trp Glu Val
915 920 925
Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Val Phe Thr Thr Asn Ile Trp Leu Lys Leu
930 935 940
Arg Glu Val Tyr Thr Gln Leu Cys Asp His Arg Leu Met Ser Ala Ala
945 950 955 960
Val Lys Asp Glu Arg Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp Ile Glu
965 970 975
Ser Gln Lys Asn Gly Ser Trp Lys Leu Glu Lys Ala Ser Phe Ile Glu
980 985 990
Val Lys Thr Cys Thr Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Ser Asn Gly
995 1000 1005
Val Leu Glu Ser Asp Met Ile Ile Pro Lys Ser Leu Ala Gly Pro
1010 1015 1020
Ile Ser Gln His Asn His Arg Pro Gly Tyr His Thr Gln Thr Ala
1025 1030 1035
Gly Pro Trp His Leu Gly Lys Leu Glu Leu Asp Phe Asn Tyr Cys
1040 1045 1050
Glu Gly Thr Thr Val Val Ile Ser Glu Asn Cys Gly Thr Arg Gly
1055 1060 1065
Pro Ser Leu Arg Thr Thr Thr Val Ser Gly Lys Leu Ile His Glu
1070 1075 1080
Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Leu Pro Pro Leu Arg Tyr Met Gly
1085 1090 1095
Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Ile Asn Glu
1100 1105 1110
Lys Glu Glu Asn Met Val Lys Ser Leu Ala Ser Ala Gly Ser Gly
1115 1120 1125
Lys Val Asp Asn Phe Thr Met Gly Val Leu Cys Leu Ala Ile Leu
1130 1135 1140
Phe Glu Glu Val Met Arg Gly Lys Phe Gly Lys Lys His Met Ile
1145 1150 1155
Ala Gly Val Leu Phe Thr Phe Val Leu Leu Leu Ser Gly Gln Ile
1160 1165 1170
Thr Trp Arg Asp Met Ala His Thr Leu Ile Met Ile Gly Ser Asn
1175 1180 1185
Ala Ser Asp Arg Met Gly Met Gly Val Thr Tyr Leu Ala Leu Ile
1190 1195 1200
Ala Thr Phe Lys Ile Gln Pro Phe Leu Ala Leu Gly Phe Phe Leu
1205 1210 1215
Arg Lys Leu Thr Ser Arg Glu Asn Leu Leu Leu Gly Val Gly Leu
1220 1225 1230
Ala Met Ala Ala Thr Leu Arg Leu Pro Glu Asp Ile Glu Gln Met
1235 1240 1245
Ala Asn Gly Ile Ala Leu Gly Leu Met Ala Leu Lys Leu Ile Thr
1250 1255 1260
Gln Phe Glu Thr Tyr Gln Leu Trp Thr Ala Leu Val Ser Leu Thr
1265 1270 1275
Cys Ser Asn Thr Ile Phe Thr Leu Thr Val Ala Trp Arg Thr Ala
1280 1285 1290
Thr Leu Ile Leu Ala Gly Ile Ser Leu Leu Pro Val Cys Gln Ser
1295 1300 1305
Ser Ser Met Arg Lys Thr Asp Trp Leu Pro Met Thr Val Ala Ala
1310 1315 1320
Met Gly Ala Gln Pro Leu Pro Leu Phe Ile Phe Ser Leu Lys Asp
1325 1330 1335
Thr Leu Lys Arg Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Gly Val Met Ala
1340 1345 1350
Val Gly Leu Val Ser Ile Leu Ala Ser Ser Leu Leu Arg Asn Asp
1355 1360 1365
Val Pro Met Ala Gly Pro Leu Val Ala Gly Gly Leu Leu Ile Ala
1370 1375 1380
Cys Tyr Val Ile Thr Gly Thr Ser Ala Asp Leu Thr Val Glu Lys
1385 1390 1395
Ala Ala Asp Val Thr Trp Glu Glu Glu Ala Glu Gln Thr Gly Val
1400 1405 1410
Ser His Asn Leu Met Val Thr Val Asp Asp Asp Gly Thr Met Arg
1415 1420 1425
Ile Lys Asp Asp Glu Thr Glu Asn Ile Leu Thr Val Leu Leu Lys
1430 1435 1440
Thr Ala Leu Leu Ile Val Ser Gly Ile Phe Pro Tyr Ser Ile Pro
1445 1450 1455
Ala Thr Leu Leu Val Trp His Thr Trp Gln Lys Gln Thr Gln Arg
1460 1465 1470
Ser Gly Val Leu Trp Asp Val Pro Ser Pro Pro Glu Thr Gln Lys
1475 1480 1485
Ala Glu Leu Glu Glu Gly Val Tyr Arg Ile Lys Gln Gln Gly Ile
1490 1495 1500
Phe Gly Lys Thr Gln Val Gly Val Gly Val Gln Lys Glu Gly Val
1505 1510 1515
Phe His Thr Met Trp His Val Thr Arg Gly Ala Val Leu Thr His
1520 1525 1530
Asn Gly Lys Arg Leu Glu Pro Asn Trp Ala Ser Val Lys Lys Asp
1535 1540 1545
Leu Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Arg Leu Ser Ala Gln Trp Gln
1550 1555 1560
Lys Gly Glu Glu Val Gln Val Ile Ala Val Glu Pro Gly Lys Asn
1565 1570 1575
Pro Lys Asn Phe Gln Thr Met Pro Gly Ile Phe Gln Thr Thr Thr
1580 1585 1590
Gly Glu Ile Gly Ala Ile Ala Leu Asp Phe Lys Pro Gly Thr Ser
1595 1600 1605
Gly Ser Pro Ile Ile Asn Arg Glu Gly Lys Val Val Gly Leu Tyr
1610 1615 1620
Gly Asn Gly Val Val Thr Lys Asn Gly Gly Tyr Val Ser Gly Ile
1625 1630 1635
Ala Gln Thr Asn Ala Glu Pro Asp Gly Pro Thr Pro Glu Leu Glu
1640 1645 1650
Glu Glu Met Phe Lys Lys Arg Asn Leu Thr Ile Met Asp Leu His
1655 1660 1665
Pro Gly Ser Gly Lys Thr Arg Lys Tyr Leu Pro Ala Ile Val Arg
1670 1675 1680
Glu Ala Ile Lys Arg Arg Leu Arg Thr Leu Ile Leu Ala Pro Thr
1685 1690 1695
Arg Val Val Ala Ala Glu Met Glu Glu Ala Leu Lys Gly Leu Pro
1700 1705 1710
Ile Arg Tyr Gln Thr Thr Ala Thr Lys Ser Glu His Thr Gly Arg
1715 1720 1725
Glu Ile Val Asp Leu Met Cys His Ala Thr Phe Thr Met Arg Leu
1730 1735 1740
Leu Ser Pro Val Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Ile Met Asp
1745 1750 1755
Glu Ala His Phe Thr Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly Tyr
1760 1765 1770
Ile Ser Thr Arg Val Gly Met Gly Glu Ala Ala Ala Ile Phe Met
1775 1780 1785
Thr Ala Thr Pro Pro Gly Thr Ala Asp Ala Phe Pro Gln Ser Asn
1790 1795 1800
Ala Pro Ile Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ile Pro Glu Arg Ser Trp
1805 1810 1815
Asn Ser Gly Asn Glu Trp Ile Thr Asp Phe Val Gly Lys Thr Val
1820 1825 1830
Trp Phe Val Pro Ser Ile Lys Ala Gly Asn Asp Ile Ala Asn Cys
1835 1840 1845
Leu Arg Lys Asn Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys Thr
1850 1855 1860
Phe Asp Thr Glu Tyr Gln Lys Thr Lys Leu Asn Asp Trp Asp Phe
1865 1870 1875
Val Val Thr Thr Asp Ile Ser Glu Met Gly Ala Asn Phe Lys Ala
1880 1885 1890
Asp Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Leu Lys Pro Val Ile Leu
1895 1900 1905
Thr Asp Gly Pro Glu Arg Val Ile Leu Ala Gly Pro Met Pro Val
1910 1915 1920
Thr Val Ala Ser Ala Ala Gln Arg Arg Gly Arg Val Gly Arg Asn
1925 1930 1935
Pro Gln Lys Glu Asn Asp Gln Tyr Ile Phe Met Gly Gln Pro Leu
1940 1945 1950
Asn Asn Asp Glu Asp His Ala His Trp Thr Glu Ala Lys Met Leu
1955 1960 1965
Leu Asp Asn Ile Asn Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Ala Leu Phe
1970 1975 1980
Glu Pro Glu Arg Glu Lys Ser Ala Ala Ile Asp Gly Glu Tyr Arg
1985 1990 1995
Leu Lys Gly Glu Ser Arg Lys Thr Phe Val Glu Leu Met Arg Arg
2000 2005 2010
Gly Asp Leu Pro Val Trp Leu Ala His Lys Val Ala Ser Glu Gly
2015 2020 2025
Ile Lys Tyr Thr Asp Arg Lys Trp Cys Phe Asp Gly Glu Arg Asn
2030 2035 2040
Asn Gln Ile Leu Glu Glu Asn Met Asp Val Glu Ile Trp Thr Lys
2045 2050 2055
Glu Gly Glu Lys Lys Lys Leu Arg Pro Arg Trp Leu Asp Ala Arg
2060 2065 2070
Thr Tyr Ser Asp Pro Leu Ala Leu Lys Glu Phe Lys Asp Phe Ala
2075 2080 2085
Ala Gly Arg Lys Ser Ile Ala Leu Asp Leu Val Thr Glu Ile Gly
2090 2095 2100
Arg Val Pro Ser His Leu Ala His Arg Thr Arg Asn Ala Leu Asp
2105 2110 2115
Asn Leu Val Met Leu His Thr Ser Glu His Gly Gly Arg Ala Tyr
2120 2125 2130
Arg His Ala Val Glu Glu Leu Pro Glu Thr Met Glu Thr Leu Leu
2135 2140 2145
Leu Leu Gly Leu Met Ile Leu Leu Thr Gly Gly Ala Met Leu Phe
2150 2155 2160
Leu Ile Ser Gly Lys Gly Ile Gly Lys Thr Ser Ile Gly Leu Ile
2165 2170 2175
Cys Val Ile Ala Ser Ser Gly Met Leu Trp Met Ala Asp Val Pro
2180 2185 2190
Leu Gln Trp Ile Ala Ser Ala Ile Val Leu Glu Phe Phe Met Met
2195 2200 2205
Val Leu Leu Ile Pro Glu Pro Glu Lys Gln Arg Thr Pro Gln Asp
2210 2215 2220
Asn Gln Leu Ala Tyr Val Val Ile Gly Ile Leu Thr Leu Ala Ala
2225 2230 2235
Ile Val Ala Ala Asn Glu Met Gly Leu Leu Glu Thr Thr Lys Arg
2240 2245 2250
Asp Leu Gly Met Ser Lys Glu Pro Gly Val Val Ser Pro Thr Ser
2255 2260 2265
Tyr Leu Asp Val Asp Leu His Pro Ala Ser Ala Trp Thr Leu Tyr
2270 2275 2280
Ala Val Ala Thr Thr Val Ile Thr Pro Met Leu Arg His Thr Ile
2285 2290 2295
Glu Asn Ser Thr Ala Asn Val Ser Leu Ala Ala Ile Ala Asn Gln
2300 2305 2310
Ala Val Val Leu Met Gly Leu Asp Lys Gly Trp Pro Ile Ser Lys
2315 2320 2325
Met Asp Leu Gly Val Pro Leu Leu Ala Leu Gly Cys Tyr Ser Gln
2330 2335 2340
Val Asn Pro Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Leu Leu Leu Val Thr
2345 2350 2355
His Tyr Ala Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr Arg
2360 2365 2370
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2375 2380 2385
Val Asp Gly Ile Met Thr Ile Asp Leu Asp Pro Val Ile Tyr Asp
2390 2395 2400
Ser Lys Phe Glu Lys Gln Leu Gly Gln Val Met Leu Leu Val Leu
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Cys Ala Val Gln Leu Leu Leu Met Arg Thr Ser Trp Ala Leu Cys
2420 2425 2430
Glu Val Leu Thr Leu Ala Thr Gly Pro Ile Thr Thr Leu Trp Glu
2435 2440 2445
Gly Ser Pro Gly Lys Phe Trp Asn Thr Thr Ile Ala Val Ser Met
2450 2455 2460
Ala Asn Ile Phe Arg Gly Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Gly Leu Ala
2465 2470 2475
Phe Ser Ile Met Lys Ser Val Gly Thr Gly Lys Arg Gly Thr Gly
2480 2485 2490
Ser Gln Gly Glu Thr Leu Gly Glu Lys Trp Lys Lys Lys Leu Asn
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Gln Leu Ser Arg Lys Glu Phe Asp Leu Tyr Lys Lys Ser Gly Ile
2510 2515 2520
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Glu Ile Thr His His Ala Val Ser Arg Gly Ser Ala Lys Leu Gln
2540 2545 2550
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2570 2575 2580
Leu Lys Lys Val Thr Glu Val Arg Gly Tyr Thr Lys Gly Gly Pro
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2780 2785 2790
Tyr His Gly Ser Tyr Glu Val Lys Ala Thr Gly Ser Ala Ser Ser
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Leu Gly Tyr Ile Leu Arg Asp Ile Ser Lys Ile Pro Gly Gly Ala
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Arg Arg Asp Leu Arg Leu Ala Ser Asn Ala Ile Cys Ser Ala Val
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Pro Val His Trp Val Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile His
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Ile Gly Asn Glu Glu Phe Leu Asp Tyr Met Pro Ser Met Lys Arg
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Phe Arg Lys Glu Glu Glu Ser Glu Gly Ala Ile Trp
3380 3385 3390
<210> 15
<211> 10648
<212> DNA
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 15
agttgttagt ctgtgtggac cgacaaggac agttccaaat cggaagcttg cttaacacag 60
ttctaacagt ttgtttgaat agagagcaga tctctggaaa aatgaaccaa cgaaaaaagg 120
tggttagacc acctttcaat atgctgaaac gcgagagaaa ccgcgtatca acccctcaag 180
ggttggtgaa gagattctca accggacttt tttctgggaa aggaccctta cggatggtgc 240
tagcattcat cacgtttttg cgagtccttt ccatcccacc aacagcaggg attctgaaaa 300
gatggggaca gttgaagaaa aataaggcca tcaggatact gattggattc aggaaggaga 360
taggccgcat gctgaacatc ttgaacggga gaaaaaggtc aacgataaca ttgctgtgct 420
tgattcccac cgtaatggcg tttcacttgt caacaagaga tggcgaaccc ctcatgatag 480
tggcaaaaca tgaaaggggg agacctctct tgtttaagac aacagagggg atcaacaaat 540
gcactctcat tgccatggac ttgggtgaaa tgtgtgagga cactgtcacg tataaatgcc 600
ccttactggt caataccgaa cctgaagaca ttgattgctg gtgcaatctc acgtctacct 660
gggtcatgta tgggacatgc acccagagcg gagaacggag acgagagaag cgctcagtag 720
ctttaacacc acattcagga atgggattgg aaacaagagc tgagacatgg atgtcatcgg 780
aaggggcttg gaagcatgct cagagagtag agagctggat actcagaaac ccaggattcg 840
cgctcttggc aggatttatg gcttatatga ttgggcaaac aggaatccag cgaactgtct 900
tctttgtcct aatgatgctg gtcgccccat cctacggaat gcgatgcgta ggagtaggaa 960
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gaggatgcgt cacaaccatg gcccagggaa aaccaacctt ggattttgaa ctgactaaga 1080
caacagccaa ggaagtggct ctgttaagaa cctattgcat tgaagcctca atatcaaaca 1140
taaccacggc aacaagatgt ccaacgcaag gagagcctta tctaaaagag gaacaagacc 1200
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atttggtcca aattgagaac cttgaataca cagtggttgt aacagtccac aatggagaca 1380
cccatgcagt aggaaatgac acatccaatc atggagttac agccacgata actcccaggt 1440
caccatcggt ggaagtcaaa ttgccggact atggagaact aacactcgat tgtgaaccca 1500
ggtctggaat tgactttaat gagatgattc tgatgaaaat gaaaaagaaa acatggcttg 1560
tgcataagca atggtttttg gatctacctc taccatggac agcaggagca gacacatcag 1620
aggttcactg gaattacaaa gagagaatgg tgacatttaa ggttcctcat gccaagagac 1680
aggatgtgac agtgctggga tctcaggaag gagccatgca ttctgccctc gctggagcca 1740
cagaagtgga ctccggtgat ggaaatcaca tgtttgcagg acatctcaag tgcaaagtcc 1800
gtatggagaa attgagaatc aagggaatgt catacacgat gtgttcagga aagttctcaa 1860
ttgacaaaga gatggcagaa acacagcatg ggacaacagt ggtgaaagtc aagtatgaag 1920
gtgctggagc tccgtgtaaa gtccccatag agataagaga tgtgaacaag gaaaaagtgg 1980
ttgggcgtat catctcatcc acccctttgg ctgagaatac caacagtgca accaacatag 2040
agttagaacc cccctttggg gacagctaca tagtgatagg tgttggaaac agtgcattaa 2100
cactccattg gttcaggaaa gggagttcca ttggcaagat gtttgagtcc acatacagag 2160
gtgcaaaacg aatggccatt ctaggtgaaa cagcttggga ttttggttcc gttggtggac 2220
tgttcacatc attgggaaag gctgtgcacc aggtttttgg aagtgtgtat acaaccatgt 2280
ttggaggagt ctcatggatg attagaatcc taattgggtt cctagtgttg tggattggca 2340
cgaactcaag gaacacttca atggctatga cgtgcatagc tgttggagga atcactctgt 2400
ttctgggctt cacagttcaa gcagacatgg gttgtgtggt gtcatggagt gggaaagaat 2460
tgaagtgtgg aagcggaatt tttgtggttg acaacgtgca cacttggaca gaacagtaca 2520
aatttcaacc ggagtcccca gcgagactag cgtctgcaat attgaatgcc cacaaagatg 2580
gggtctgtgg aattagatca accacgaggc tggaaaatgt catgtggaag caaataacca 2640
acgagctaaa ttatgttctc tgggaaggag gacatgacct cactgtagtg gctggggatg 2700
tgaagggggt gttgaccaaa ggcaagagag cactcacacc cccagtgaat gatctgaaat 2760
attcatggaa gacatgggga aaagcaaaaa tcttcacccc agaagcaaga aatagcacat 2820
ttttaataga cggaccagac acctccgaat gccccaatga acgaagagca tggaactttc 2880
ttgaggtgga agactatgga tttggcatgt tcacgaccaa catatggatg aaattccgag 2940
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ctgtgcatgc tgacatgggt tattggatag agagctcaaa aaaccagacc tggcagatag 3060
agaaagcatc tcttattgaa gtgaaaacat gtctgtggcc caagacccac acattgtgga 3120
gcaatggagt gctggaaagc cagatgctca ttccaaaatc atatgcgggc cctttttcac 3180
agcacaatta ccgccagggc tatgccacgc aaaccgtggg cccatggcac ttaggcaaat 3240
tagagataga ctttggagaa tgccccggaa caacagtcgc aattcaggag gattgtgacc 3300
atagaggccc atctttgagg accaccactg catctggaaa actagtcacg caatggtgct 3360
gccgctcctg cacgatgcct cccttaaggt tcttgggaga agatgggtgc tggtatggga 3420
tggagattag gcccttgagt gaaaaagaag agaacatggt caaatcacag gtaacggccg 3480
gacagggcac atcagaaact ttttctatgg gtctgttgtg cctgaccttg tttgtggaag 3540
aatgcttgag gagaagagtc actaggaaac acatgatatt ggttgtggtg atcactcttt 3600
gtgccatcat cctaggaggc ctcacatgga tggacttact acgagccctc atcatgttgg 3660
gggacactat gtctggtaga ataggaggac agatccacct agccatcatg gcagtgttca 3720
agatgtcacc aggatacgtg ctgggtgtgt ttttaaggaa actcacttca agagagacag 3780
cactaatggt aataggaatg gccatgacaa cggtgctttc aattccacat gaccttatgg 3840
aactcattga tggaatatca ctggggctaa ttttgctaaa aatagtgaca cattttgaca 3900
acacccaagt gggaacctta gccctttcct tgaccttcat aagatcaaca atgccattgg 3960
tcatggcttg gaggaccatt atggctgtgt tgtttgtggt cacactcatt cctttgtgca 4020
ggacaagctg tcttcaaaaa cagtctcatt gggtagaaat aacagcactc atcctaggag 4080
cccaagctct gccagtgtac ctaatgactc ttatgaaagg agcctcaaga agatcttggc 4140
ctcttaacga gggcataatg gctgtgggtt tggttagtct cttaggaagc gctcttttaa 4200
agaatgatgt ccctttagct ggcccaatgg tggcaggagg cttacttctg gcggcttacg 4260
tgatgagtgg tagctcagca gatctgtcac tagagaaggc cgccaatgtg cagtgggatg 4320
aaatggcaga cataacaggc tcaagcccaa tcatagaagt gaagcaggat gaagatggct 4380
ctttctccat acgggacgtc gaggaaacca atatgataac ccttttggtg aaactggcac 4440
tgataacagt gtcaggtctc taccccttgg caattccagt cacaatgacc ttatggtaca 4500
tgtggcaagt gaaaacacaa agatcaggag ccctgtggga cgtcccctca cccgctgcca 4560
ctcaaaaagc cgcactgtct gaaggagtgt acaggatcat gcaaagaggg ttatttggga 4620
aaactcaggt tggagtaggg atacacatgg aaggtgtatt tcacacaatg tggcatgtaa 4680
caagaggatc agtgatctgc catgagactg ggagattgga gccatcttgg gctgacgtca 4740
ggaatgacat gatatcatac ggtgggggat ggagacttgg agacaaatgg gacaaagaag 4800
aagatgttca ggtcctcgcc atagaaccag gaaaaaatcc taaacatgtc caaacgaaac 4860
ccggcctttt caagacccta actggagaaa ttggagcagt aacattagat ttcaaacccg 4920
gaacgtctgg ttctcccatc atcaacagga aaggaaaagt catcggactc tatggaaatg 4980
gagtagttac caaatcaggt gattacgtca gtgccataac gcaagccgaa agaattggag 5040
agccagatta tgaagtggat gaggacattt ttcgaaagaa aagattaact ataatggact 5100
tacaccccgg agctggaaag acaaaaagaa ttcttccatc aatagtgaga gaagccttaa 5160
aaaggaggct gcgaaccttg attttggctc ccacgagagt ggtggcggcc gagatggaag 5220
aggccctacg tggactgcca atccgttatc agaccccagc tgtgaaatca gaacacacag 5280
gaagagagat tgtagacctc atgtgtcatg caaccttcac aacaagactt ttgtcatcaa 5340
ccagagttcc aaattacaac ctcatagtga tggatgaagc acatttcacc gatccttcta 5400
gtgtcgcggc tagaggatac atctcgacca gggtggaaat gggagaggca gcagccatct 5460
tcatgaccgc aacccctccc ggagcgacag atccctttcc ccagagcaac agcccaatag 5520
aagacatcga gagggaaatt ccggaaaggt catggaacac agggttcgac tggataacag 5580
actaccaagg gaaaactgtg tggtttgttc ccagcataaa agctggaaat gacattgcaa 5640
attgtttgag aaagtcggga aagaaagtta tccagttgag taggaaaacc tttgatacag 5700
agtatccaaa aacgaaactc acggactggg attttgtggt cactacagac atatctgaaa 5760
tgggggccaa ttttagagct gggagagtga tagaccctag gagatgcctc aagccagtta 5820
tcctaacaga tgggccagag agagtcattt tagcaggtcc tattccagtg actccagcaa 5880
gcgctgctca gagaagaggg cgaataggaa ggaacccagc acaagaagac gaccaatacg 5940
ttttctccgg agacccacta aaaaatgatg aagatcatgc ccactggaca gaagcaaaga 6000
tgctgcttga caatatctac accccagaag ggatcattcc aacattgttt ggtccggaaa 6060
gggaaaaaac ccaagccatt gatggagagt ttcgcctcag aggggaacaa aggaagactt 6120
ttgtggaatt aatgaggaga ggagaccttc cggtgtggct gagctataag gtagcttctg 6180
ctggcatttc ttacaaagat cgggaatggt gcttcacagg ggaaaggaat aaccaaattt 6240
tagaagaaaa catggaggtt gaaatttgga ctagagaggg agaaaagaaa aagctaaggc 6300
caagatggtt agatgcacgt gtatacgctg accccatggc tttgaaggat tttaaggagt 6360
ttgctagtgg aaggaagagc ataactctcg acatcctaac agagattgcc agtttgccaa 6420
cttacctttc ctctagggcc aagctcgccc ttgataacat agtcatgctc cacacaacag 6480
aaagaggagg gagggcctac caacacgccc tgaacgaact cccggagtca ctggaaacac 6540
ttatgcttgt agctttacta ggtgctatga cagcaggtat cttcctgttt ttcatgcaag 6600
ggaaaggaat agggaaattg tcaatgggtt tgataaccat tgcggtggct agtggcttgc 6660
tctgggtagc agaaattcaa ccccagtgga tagcggcctc aatcatacta gagttttttc 6720
tcatggtact gttgataccg gaaccagaaa aacaaaggac cccacaagac aatcaattga 6780
tctacgtcat attgaccatt ctcaccatta ttggtctcat agcagccaac gagatggggc 6840
tgattgaaaa aacaaaaacg gattttgggt tttaccaggt aaaaacagaa accaccatcc 6900
tcgatgtgga cttgagacca gcttcagcat ggacgctcta tgcagtagcc accacaattc 6960
tgactcccat gctgagacac accatagaaa acacgtcggc caacctatct ctagcagcca 7020
ttgccaacca ggcggccgtc ctaatggggc ttggaaaagg atggccgctc cacagaatgg 7080
acctcggtgt gccgctgtta gcaatgggat gctattctca agtgaaccca acaactttga 7140
cagcatcctt agtcatgctt ttagtccatt atgcaataat aggtccagga ttgcaggcaa 7200
aagccacaag agaggcccag aaaaggacag ctgctgggat catgaaaaac cccacggtgg 7260
acgggataac agtaatagat ctagaaccaa tatcctatga cccaaaattt gaaaagcaat 7320
tagggcaggt catgctactc gtcttgtgtg ctggacaact actcttgatg agaacaacat 7380
gggctttctg tgaagtcttg actttggcca caggaccaat cttgaccttg tgggagggca 7440
acccgggaag gttttggaac acgaccatag ccgtatccac cgccaacatt ttcaggggaa 7500
gttacctggc gggagctgga ctggcttttt cactcataaa gaatgtacaa acccctagga 7560
ggggaactgg gaccacagga gagacactgg gagagaagtg gaagagacag ctaaactcat 7620
tagacagaaa agagtttgaa gagtataaaa gaagtggaat actagaagtg gacaggactg 7680
aagccaagtc tgccctgaaa gatgggtcta aaatcaagca tgcagtatct agagggtcca 7740
gtaagattag atggattgtt gagagaggga tggtaaagcc aaaagggaaa gttgtagatc 7800
ttggctgtgg gagaggagga tggtcttatt acatggcgac gctcaagaac gtgactgaag 7860
tgaaagggta tacaaaagga ggtccaggac atgaagaacc gattcccatg gctacttatg 7920
gctggaattt ggtcaaactc cattcagggg ttgacgtgtt ctacaaaccc acagagcaag 7980
tggacaccct gctctgtgat attggggagt catcttctaa tccaacaata gaggaaggaa 8040
gaacattaag agttttgaag atggtggagc catggctctc ttcaaaacct gaattctgca 8100
tcaaagtcct taacccctac atgccaacag tcatagaaga gctggagaaa ctgcagagaa 8160
aacatggtgg gaaccttgtc agatgcccgc tgtccaggaa ctccacccat gagatgtatt 8220
gggtgtcagg agcgtcggga aacattgtga gctctgtgaa cacaacatca aagatgttgt 8280
tgaacaggtt cacaacaagg cataggaaac ccacttatga gaaggacgta gatcttgggg 8340
caggaacgag aagtgtctcc actgaaacag aaaaaccaga catgacaatt attgggagaa 8400
ggcttcagcg attgcaagag gagcacaaag aaacctggca ttatgatcag gaaaacccat 8460
acagaacctg ggcgtatcat ggaagctatg aagctccttc gacaggctct gcatcctcca 8520
tggtgaacgg ggtagtaaaa ctgctaacaa aaccttggga tgtggttcca atggtgaccc 8580
agttagccat gacagacaca accccttttg ggcaacaaag agtgttcaaa gagaaggtgg 8640
ataccagaac accacaacca aaacccggta cacgaatggt tatgaccacg acagccaatt 8700
ggctgtgggc cctccttggg aagaagaaaa atcccagact gtgcacaagg gaagagttca 8760
tctcaaaagt tagatcaaac gcagccatag gcgcagtctt tcaggaagaa cagggatgga 8820
catcagccag tgaagctgtg aatgacagcc ggttttggga actggttgac aaagaaaggg 8880
ccctacacca ggaagggaaa tgtgaatcgt gtgtctacaa catgatggga aaacgtgaga 8940
aaaagttagg agagtttggc agagccaagg gaagccgagc aatctggtac atgtggctgg 9000
gagcgcggtt tctggaattt gaagccctgg gttttttgaa tgaagatcac tggtttggca 9060
gagaaaattc atggagtgga gtggaagggg aaggtctgca cagattggga tatatcctgg 9120
aggagataga caagaaggat ggagacctaa tgtatgctga tgacacagca ggctgggaca 9180
caagaatcac tgaggatgac cttcaaaatg aagaactgat cacggaacag atggcccccc 9240
accacaagat cctagccaaa gccattttca aactaaccta tcaaaacaaa gtggtgaaag 9300
tcctcagacc cacaccgaga ggagcggtga tggatatcat atccaggaaa gaccaaagag 9360
gtagtggaca agttggaaca tatggtttga acacattcac caacatggaa gttcaactca 9420
tccgccaaat ggaagctgaa ggagtcatca cacaagatga catgcagaac ccaaaagggt 9480
tgaaagaaag agttgagaaa tggctgaaag agtgtggtgt cgacaggtta aagaggatgg 9540
caatcagtgg agacgattgc gtggtgaagc ccctggatga gaggtttggc acttccctcc 9600
tcttcttgaa cgacatggga aaggtgagga aagacattcc gcagtgggaa ccatctaagg 9660
gatggaaaaa ctggcaagag gttccttttt gctcccacca ctttcacaag atcttcatga 9720
aggatggccg ctcactagtt gttccatgta gaaaccagga tgaactgata gggagagcca 9780
gaatctcgca gggggctgga tggagcttaa gagaaacagc ctgcctgggc aaagcttacg 9840
cccagatgtg gtcgctcatg tacttccaca gaagggatct gcgtttagcc tccatggcca 9900
tatgctcagc agttccaacg gaatggtttc caacaagcag aacaacatgg tcaatccacg 9960
ctcatcatca gtggatgacc actgaagata tgctcaaagt gtggaacaga gtgtggatag 10020
aagacaaccc taatatgact gacaagactc cagtccattc gtgggaagat ataccttacc 10080
tagggaaaag agaggatttg tggtgtggat ccctgattgg actttcttcc agagccacct 10140
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acgtggatta catgccagta atgaaaagat acagcgctcc ttcagagagt gaaggagttc 10260
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gagcaaaccg tgctgcctgt agctccgcca ataatgggag gcgtgaaatc cctagggagg 10380
ccatgcgcca cggaagctgt acgcgtggca tattggacta gcggttagag gagacccctc 10440
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tggaaggact agaggttaga ggagaccccc ccaacacaaa aacagcatat tgacgctggg 10560
aaagaccaga gatcctgctg tctctgcaac atcaatccag gcacagagcg ccgcaagatg 10620
gattggtgtt gttgatccaa caggttct 10648
<210> 16
<211> 3387
<212> PRT
<213> 登革热病毒(dengue virus)
<400> 16
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1 5 10 15
Arg Glu Arg Asn Arg Val Ser Thr Pro Gln Gly Leu Val Lys Arg Phe
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Ser Thr Gly Leu Phe Ser Gly Lys Gly Pro Leu Arg Met Val Leu Ala
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Phe Ile Thr Phe Leu Arg Val Leu Ser Ile Pro Pro Thr Ala Gly Ile
50 55 60
Leu Lys Arg Trp Gly Gln Leu Lys Lys Asn Lys Ala Ile Arg Ile Leu
65 70 75 80
Ile Gly Phe Arg Lys Glu Ile Gly Arg Met Leu Asn Ile Leu Asn Gly
85 90 95
Arg Lys Arg Ser Thr Ile Thr Leu Leu Cys Leu Ile Pro Thr Val Met
100 105 110
Ala Phe His Leu Ser Thr Arg Asp Gly Glu Pro Leu Met Ile Val Ala
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Lys His Glu Arg Gly Arg Pro Leu Leu Phe Lys Thr Thr Glu Gly Ile
130 135 140
Asn Lys Cys Thr Leu Ile Ala Met Asp Leu Gly Glu Met Cys Glu Asp
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Thr Val Thr Tyr Lys Cys Pro Leu Leu Val Asn Thr Glu Pro Glu Asp
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Ile Asp Cys Trp Cys Asn Leu Thr Ser Thr Trp Val Met Tyr Gly Thr
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Cys Thr Gln Ser Gly Glu Arg Arg Arg Glu Lys Arg Ser Val Ala Leu
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Ser Ser Glu Gly Ala Trp Lys His Ala Gln Arg Val Glu Ser Trp Ile
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Leu Arg Asn Pro Gly Phe Ala Leu Leu Ala Gly Phe Met Ala Tyr Met
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Ile Gly Gln Thr Gly Ile Gln Arg Thr Val Phe Phe Val Leu Met Met
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Leu Val Ala Pro Ser Tyr Gly Met Arg Cys Val Gly Val Gly Asn Arg
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Asp Phe Val Glu Gly Val Ser Gly Gly Ala Trp Val Asp Leu Val Leu
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Asp Phe Glu Leu Thr Lys Thr Thr Ala Lys Glu Val Ala Leu Leu Arg
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Thr Tyr Cys Ile Glu Ala Ser Ile Ser Asn Ile Thr Thr Ala Thr Arg
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Tyr Ile Cys Arg Arg Asp Val Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys
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Ser Val Glu Val Lys Leu Pro Asp Tyr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Cys
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Glu Pro Arg Ser Gly Ile Asp Phe Asn Glu Met Ile Leu Met Lys Met
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Lys Lys Lys Thr Trp Leu Val His Lys Gln Trp Phe Leu Asp Leu Pro
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Leu Pro Trp Thr Ala Gly Ala Asp Thr Ser Glu Val His Trp Asn Tyr
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Lys Glu Arg Met Val Thr Phe Lys Val Pro His Ala Lys Arg Gln Asp
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Val Thr Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Met His Ser Ala Leu Ala
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Gly Ala Thr Glu Val Asp Ser Gly Asp Gly Asn His Met Phe Ala Gly
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His Leu Lys Cys Lys Val Arg Met Glu Lys Leu Arg Ile Lys Gly Met
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Lys Arg Met Ala Ile Leu Gly Glu Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val
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Gly Gly Leu Phe Thr Ser Leu Gly Lys Ala Val His Gln Val Phe Gly
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Leu Ile Gly Phe Leu Val Leu Trp Ile Gly Thr Asn Ser Arg Asn Thr
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Ser Met Ala Met Thr Cys Ile Ala Val Gly Gly Ile Thr Leu Phe Leu
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Gly Phe Thr Val Gln Ala Asp Met Gly Cys Val Val Ser Trp Ser Gly
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Gly Asp Val Lys Gly Val Leu Thr Lys Gly Lys Arg Ala Leu Thr Pro
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Pro Val Asn Asp Leu Lys Tyr Ser Trp Lys Thr Trp Gly Lys Ala Lys
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Asp Thr Ser Glu Cys Pro Asn Glu Arg Arg Ala Trp Asn Phe Leu Glu
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Val Glu Asp Tyr Gly Phe Gly Met Phe Thr Thr Asn Ile Trp Met Lys
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Phe Arg Glu Gly Ser Ser Glu Val Cys Asp His Arg Leu Met Ser Ala
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Ala Ile Lys Asp Gln Lys Ala Val His Ala Asp Met Gly Tyr Trp Ile
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Gln Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Met Pro Pro Leu Arg Phe Leu
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Gly Glu Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile Arg Pro Leu Ser
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Phe Val Glu Glu Cys Leu Arg Arg Arg Val Thr Arg Lys His Met
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Ile Leu Val Val Val Ile Thr Leu Cys Ala Ile Ile Leu Gly Gly
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Leu Thr Trp Met Asp Leu Leu Arg Ala Leu Ile Met Leu Gly Asp
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Thr Met Ser Gly Arg Ile Gly Gly Gln Ile His Leu Ala Ile Met
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Ala Val Phe Lys Met Ser Pro Gly Tyr Val Leu Gly Val Phe Leu
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Arg Lys Leu Thr Ser Arg Glu Thr Ala Leu Met Val Ile Gly Met
1220 1225 1230
Ala Met Thr Thr Val Leu Ser Ile Pro His Asp Leu Met Glu Leu
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Ile Asp Gly Ile Ser Leu Gly Leu Ile Leu Leu Lys Ile Val Thr
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His Phe Asp Asn Thr Gln Val Gly Thr Leu Ala Leu Ser Leu Thr
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Phe Ile Arg Ser Thr Met Pro Leu Val Met Ala Trp Arg Thr Ile
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Met Ala Val Leu Phe Val Val Thr Leu Ile Pro Leu Cys Arg Thr
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Ile Leu Gly Ala Gln Ala Leu Pro Val Tyr Leu Met Thr Leu Met
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Lys Gly Ala Ser Arg Arg Ser Trp Pro Leu Asn Glu Gly Ile Met
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Ala Val Gly Leu Val Ser Leu Leu Gly Ser Ala Leu Leu Lys Asn
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Asp Val Pro Leu Ala Gly Pro Met Val Ala Gly Gly Leu Leu Leu
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Ala Ala Tyr Val Met Ser Gly Ser Ser Ala Asp Leu Ser Leu Glu
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Lys Ala Ala Asn Val Gln Trp Asp Glu Met Ala Asp Ile Thr Gly
1400 1405 1410
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Ser Ile Arg Asp Val Glu Glu Thr Asn Met Ile Thr Leu Leu Val
1430 1435 1440
Lys Leu Ala Leu Ile Thr Val Ser Gly Leu Tyr Pro Leu Ala Ile
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Pro Val Thr Met Thr Leu Trp Tyr Met Trp Gln Val Lys Thr Gln
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Lys Ala Ala Leu Ser Glu Gly Val Tyr Arg Ile Met Gln Arg Gly
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1520 1525 1530
His Glu Thr Gly Arg Leu Glu Pro Ser Trp Ala Asp Val Arg Asn
1535 1540 1545
Asp Met Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Trp Arg Leu Gly Asp Lys Trp
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1580 1585 1590
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Ser Gly Ser Pro Ile Ile Asn Arg Lys Gly Lys Val Ile Gly Leu
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Ile Thr Gln Ala Glu Arg Ile Gly Glu Pro Asp Tyr Glu Val Asp
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Glu Asp Ile Phe Arg Lys Lys Arg Leu Thr Ile Met Asp Leu His
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Ile Arg Tyr Gln Thr Pro Ala Val Lys Ser Glu His Thr Gly Arg
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Leu Ser Ser Thr Arg Val Pro Asn Tyr Asn Leu Ile Val Met Asp
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1760 1765 1770
Ile Ser Thr Arg Val Glu Met Gly Glu Ala Ala Ala Ile Phe Met
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Ser Pro Ile Glu Asp Ile Glu Arg Glu Ile Pro Glu Arg Ser Trp
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Asn Thr Gly Phe Asp Trp Ile Thr Asp Tyr Gln Gly Lys Thr Val
1820 1825 1830
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Leu Arg Lys Ser Gly Lys Lys Val Ile Gln Leu Ser Arg Lys Thr
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Phe Asp Thr Glu Tyr Pro Lys Thr Lys Leu Thr Asp Trp Asp Phe
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Gly Arg Val Ile Asp Pro Arg Arg Cys Leu Lys Pro Val Ile Leu
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Pro Ala Gln Glu Asp Asp Gln Tyr Val Phe Ser Gly Asp Pro Leu
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Leu Asp Asn Ile Tyr Thr Pro Glu Gly Ile Ile Pro Thr Leu Phe
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Gly Pro Glu Arg Glu Lys Thr Gln Ala Ile Asp Gly Glu Phe Arg
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Gly Asp Leu Pro Val Trp Leu Ser Tyr Lys Val Ala Ser Ala Gly
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Ile Ser Tyr Lys Asp Arg Glu Trp Cys Phe Thr Gly Glu Arg Asn
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Ser Gly Arg Lys Ser Ile Thr Leu Asp Ile Leu Thr Glu Ile Ala
2090 2095 2100
Ser Leu Pro Thr Tyr Leu Ser Ser Arg Ala Lys Leu Ala Leu Asp
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Asn Ile Val Met Leu His Thr Thr Glu Arg Gly Gly Arg Ala Tyr
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Leu Val Ala Leu Leu Gly Ala Met Thr Ala Gly Ile Phe Leu Phe
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Phe Met Gln Gly Lys Gly Ile Gly Lys Leu Ser Met Gly Leu Ile
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Leu Ile Ala Ala Asn Glu Met Gly Leu Ile Glu Lys Thr Lys Thr
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Ser Ala Asn Leu Ser Leu Ala Ala Ile Ala Asn Gln Ala Ala Val
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Leu Met Gly Leu Gly Lys Gly Trp Pro Leu His Arg Met Asp Leu
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Gly Val Pro Leu Leu Ala Met Gly Cys Tyr Ser Gln Val Asn Pro
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Ile Ile Gly Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ala Thr Arg Glu Ala Gln
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Arg Lys Glu Phe Glu Glu Tyr Lys Arg Ser Gly Ile Leu Glu Val
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Asp Arg Thr Glu Ala Lys Ser Ala Leu Lys Asp Gly Ser Lys Ile
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Lys His Ala Val Ser Arg Gly Ser Ser Lys Ile Arg Trp Ile Val
2540 2545 2550
Glu Arg Gly Met Val Lys Pro Lys Gly Lys Val Val Asp Leu Gly
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Cys Gly Arg Gly Gly Trp Ser Tyr Tyr Met Ala Thr Leu Lys Asn
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Val Thr Glu Val Lys Gly Tyr Thr Lys Gly Gly Pro Gly His Glu
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Glu Pro Ile Pro Met Ala Thr Tyr Gly Trp Asn Leu Val Lys Leu
2600 2605 2610
His Ser Gly Val Asp Val Phe Tyr Lys Pro Thr Glu Gln Val Asp
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Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Ser Asn Pro Thr Ile
2630 2635 2640
Glu Glu Gly Arg Thr Leu Arg Val Leu Lys Met Val Glu Pro Trp
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Leu Ser Ser Lys Pro Glu Phe Cys Ile Lys Val Leu Asn Pro Tyr
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Met Pro Thr Val Ile Glu Glu Leu Glu Lys Leu Gln Arg Lys His
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Val Phe Gln Glu Glu Gln Gly Trp Thr Ser Ala Ser Glu Ala Val
2900 2905 2910
Asn Asp Ser Arg Phe Trp Glu Leu Val Asp Lys Glu Arg Ala Leu
2915 2920 2925
His Gln Glu Gly Lys Cys Glu Ser Cys Val Tyr Asn Met Met Gly
2930 2935 2940
Lys Arg Glu Lys Lys Leu Gly Glu Phe Gly Arg Ala Lys Gly Ser
2945 2950 2955
Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg Phe Leu Glu Phe
2960 2965 2970
Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp Phe Gly Arg Glu
2975 2980 2985
Asn Ser Trp Ser Gly Val Glu Gly Glu Gly Leu His Arg Leu Gly
2990 2995 3000
Tyr Ile Leu Glu Glu Ile Asp Lys Lys Asp Gly Asp Leu Met Tyr
3005 3010 3015
Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile Thr Glu Asp Asp
3020 3025 3030
Leu Gln Asn Glu Glu Leu Ile Thr Glu Gln Met Ala Pro His His
3035 3040 3045
Lys Ile Leu Ala Lys Ala Ile Phe Lys Leu Thr Tyr Gln Asn Lys
3050 3055 3060
Val Val Lys Val Leu Arg Pro Thr Pro Arg Gly Ala Val Met Asp
3065 3070 3075
Ile Ile Ser Arg Lys Asp Gln Arg Gly Ser Gly Gln Val Gly Thr
3080 3085 3090
Tyr Gly Leu Asn Thr Phe Thr Asn Met Glu Val Gln Leu Ile Arg
3095 3100 3105
Gln Met Glu Ala Glu Gly Val Ile Thr Gln Asp Asp Met Gln Asn
3110 3115 3120
Pro Lys Gly Leu Lys Glu Arg Val Glu Lys Trp Leu Lys Glu Cys
3125 3130 3135
Gly Val Asp Arg Leu Lys Arg Met Ala Ile Ser Gly Asp Asp Cys
3140 3145 3150
Val Val Lys Pro Leu Asp Glu Arg Phe Gly Thr Ser Leu Leu Phe
3155 3160 3165
Leu Asn Asp Met Gly Lys Val Arg Lys Asp Ile Pro Gln Trp Glu
3170 3175 3180
Pro Ser Lys Gly Trp Lys Asn Trp Gln Glu Val Pro Phe Cys Ser
3185 3190 3195
His His Phe His Lys Ile Phe Met Lys Asp Gly Arg Ser Leu Val
3200 3205 3210
Val Pro Cys Arg Asn Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg Ala Arg Ile
3215 3220 3225
Ser Gln Gly Ala Gly Trp Ser Leu Arg Glu Thr Ala Cys Leu Gly
3230 3235 3240
Lys Ala Tyr Ala Gln Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe His Arg Arg
3245 3250 3255
Asp Leu Arg Leu Ala Ser Met Ala Ile Cys Ser Ala Val Pro Thr
3260 3265 3270
Glu Trp Phe Pro Thr Ser Arg Thr Thr Trp Ser Ile His Ala His
3275 3280 3285
His Gln Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Lys Val Trp Asn Arg
3290 3295 3300
Val Trp Ile Glu Asp Asn Pro Asn Met Thr Asp Lys Thr Pro Val
3305 3310 3315
His Ser Trp Glu Asp Ile Pro Tyr Leu Gly Lys Arg Glu Asp Leu
3320 3325 3330
Trp Cys Gly Ser Leu Ile Gly Leu Ser Ser Arg Ala Thr Trp Ala
3335 3340 3345
Lys Asn Ile His Thr Ala Ile Thr Gln Val Arg Asn Leu Ile Gly
3350 3355 3360
Lys Glu Glu Tyr Val Asp Tyr Met Pro Val Met Lys Arg Tyr Ser
3365 3370 3375
Ala Pro Ser Glu Ser Glu Gly Val Leu
3380 3385
Claims (54)
1.一种登革热疫苗组合物的单位剂量，其包含：
四价病毒组合物，所述四价病毒组合物包括四种活的减毒登革热病毒血清型，其中所述单位剂量经冻干并且在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10 pfu/0.5ml的登革热血清型1，诸如嵌合登革热血清型2/1毒株，
(ii)浓度为至少2.7log10 pfu/0.5ml的登革热血清型2，诸如登革热血清型2毒株，
(iii)浓度为至少4.0log10 pfu/0.5ml的登革热血清型3，诸如嵌合登革热血清型2/3毒株，和
(IV)浓度为至少4.5log10 pfu/0.5ml的登革热血清型4，诸如嵌合登革热血清型2/4毒株。
2.根据权利要求1所述的单位剂量，其中所述登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-2 16681并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53 Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250 Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
其中所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
3.根据权利要求1或2所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于pfu/0.5mL的所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％。
4.根据权利要求3所述的单位剂量，其中(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少10％。
5.根据权利要求1或2所述的单位剂量，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％。
6.四价登革热病毒组合物，所述四价登革热病毒组合物包括代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，在为受试者接种预防病毒学上可确认的登革热病的方法中使用。
7.根据权利要求6使用的四价登革热病毒组合物，其中所述四价登革热病毒组合物包括嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株以及嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株。
8.根据权利要求7使用的四价登革热病毒组合物，其中所述登革热血清型2毒株源自所述野生型病毒株DEN-2 16681并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53 Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250 Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
其中所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
9.根据权利要求6至8中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述四价登革热病毒组合物是单位剂量的形式，所述单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10 pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10 pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10 pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10 pfu/0.5ml的登革热血清型4。
10.根据权利要求6至8中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中四价登革热病毒组合物是冻干单位剂量的形式，所述冻干单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10 pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10 pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10 pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10 pfu/0.5ml的登革热血清型4。
11.根据权利要求6至10中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法包括仅两次施用所述单位剂量进行的初次疫苗接种，所述初次疫苗接种包括以下步骤：
向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，和
在所述第一单位剂量施用的3个月内，向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
12.根据权利要求6至11中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法不包括在所述单位剂量施用之前确定所述受试者中是否存在早先登革热感染的步骤，或其中在所述单位剂量施用之前所述受试者的血清状态未知。
13.根据权利要求6至12中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法不包括在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间确定所述受试者中是否存在早先登革热感染的步骤，或其中在所述施用步骤之前、期间或之后的任何时间所述受试者的血清状态未知。
14.根据权利要求11或13中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法不包括在所述第一和第二单位剂量施用后，就发热性疾病，优选连续3天中的任意2天≥38℃的发烧，对受试者进行主动监测。
15.根据权利要求11或13中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法不包括在所述第一和第二单位剂量施用后的疫苗免疫原性分析，包括针对登革热中和抗体的GMT。
16.根据权利要求11或13中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法不包括与诱发的局部和/或全身不良事件有关的反应原性分析。
17.根据权利要求6至10中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定是否存在早先登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
18.根据权利要求6至17中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述受试者来自于其中血清阳性率未知并且/或者其中所述血清阳性率低于80％，或低于70％，或低于60％的区域。
19.根据权利要求6至18中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述受试者暴露于登革热暴发。
20.根据权利要求19使用的四价登革热病毒组合物，其中所述暴发是由于登革热血清型2，和/或由于登革热血清型1引起的。
21.根据权利要求6至18中任一项使用的四价登革热病毒组合物，所述受试者暴露于登革热血清型1和/或登革热血清型2。
22.根据权利要求6至18中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述病毒学上可确认的登革热病是由于登革热血清型2，和/或由于登革热血清型1引起的。
23.根据权利要求6至22中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中所述受试者是9岁以下、4至5岁、6至11岁或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至19岁，或18至60岁，18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
24.根据权利要求6至23中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且其中所述受试者为2至17岁或4至16岁。
25.根据权利要求6至23中任一项使用的四价登革热病毒组合物，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％，其中所述受试者为18至60岁。
26.一种为受试者接种四价登革热病毒组合物以预防病毒学上可确认的登革热病的方法，所述四价登革热病毒组合物包括代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述四价登革热病毒组合物包括嵌合登革热血清型2/1毒株和登革热血清型2毒株以及嵌合登革热血清型2/3毒株和嵌合登革热血清型2/4毒株。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述登革热血清型2毒株源自野生型病毒株DEN-2 16681并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53 Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250 Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
其中所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述四价登革热病毒组合物是单位剂量的形式，所述单位剂量包含：
(i)浓度为至少3.3log10 pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10 pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10 pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10 pfu/0.5ml的登革热血清型4。
30.根据权利要求28所述的方法，其中四价登革热病毒组合物是冻干单位剂量的形式，所述冻干单位剂量在用0.5mL药学上可接受的稀释剂重构后包含：
(i)浓度为至少3.3log10 pfu/0.5ml的登革热血清型1，
(ii)浓度为至少2.7log10 pfu/0.5ml的登革热血清型2，
(iii)浓度为至少4.0log10 pfu/0.5ml的登革热血清型3，和
(iv)浓度为至少4.5log10 pfu/0.5ml的登革热血清型4。
31.根据权利要求28所述的方法，其中所述方法包括仅两次施用所述单位剂量进行的初次疫苗接种，所述初次疫苗接种包括以下步骤：
向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，和
在所述第一单位剂量施用的3个月内，向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述方法不包括在所述单位剂量施用之前确定所述受试者中是否存在早先登革热感染的步骤，或其中在所述单位剂量施用之前所述受试者的血清状态未知。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述方法不包括在所述单位剂量施用之前、期间或之后的任何时间确定所述受试者中是否存在早先登革热感染的步骤，或其中在所述单位剂量施用之前、期间或之后所述受试者的血清状态未知。
34.根据权利要求28所述的方法，其中所述方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定是否存在早先登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
35.根据权利要求28所述的方法，其中所述受试者来自于其中所述血清阳性率未知并且/或者其中所述血清阳性率低于80％，或低于70％，或低于60％的区域。
36.根据权利要求28所述的方法，其中所述受试者暴露于登革热暴发。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述暴发是由于登革热血清型2，和/或由于登革热血清型1引起的。
38.根据权利要求28所述的方法，其中所述病毒学上可确认的登革热病是由于登革热血清型2，和/或由于登革热血清型1引起的。
39.根据权利要求28所述的方法，其中所述受试者是9岁以下、4至5岁、6至11岁或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至19岁，或18至60岁，或18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
40.一种为受试者接种四价登革热病毒组合物以预防病毒学上可确认的登革热病的方法，所述四价登革热病毒组合物包括代表血清型1、血清型2、血清型3和血清型4的四种活的减毒登革热病毒株，所述登革热血清型2毒株源自所述野生型病毒株DEN-2 16681并且与所述野生型有如下至少三个核苷酸不同：
a)5’-非编码区(NCR)-57(核苷酸57C变为T)
b)NS1-53 Gly变为Asp(核苷酸2579G变为A)
c)NS3-250 Glu变为Val(核苷酸5270A变为T)；并且
所述三种嵌合登革热毒株源自所述血清型2毒株，方法是用来自其它登革热血清型的相应结构蛋白置换来自血清型2毒株的结构蛋白prM和E，得到以下嵌合登革热毒株：
-DENV-2/1嵌合体，
-DENV-2/3嵌合体和
-DENV-2/4嵌合体，
所述方法包括由以下步骤组成的初次疫苗接种：
(A)选择需要施用所述四价登革热病毒组合物的单位剂量以防护登革热感染的受试者，而无需确定是否存在早先登革热感染，和
(B)向所述受试者施用第一单位剂量的所述四价登革热病毒组合物，以及
(C)在所述第一单位剂量施用的3个月内向所述受试者施用第二单位剂量的所述四价登革热病毒组合物。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述受试者来自于其中所述血清阳性率未知并且/或者其中所述血清阳性率低于80％，或低于70％，或低于60％的区域。
42.根据权利要求40所述的方法，其中所述受试者是9岁以下、4至5岁、6至11岁或12至16岁，或6至16岁，或4至16岁，或2至17岁，或9岁，或9岁以上，或9至19岁，或18至60岁，18至45岁，或46至60岁，或60岁以上。
43.根据权利要求40所述的方法，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于10％，并且(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，并且(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少8％，或至少10％，或至少12％，或至少14％，或至少16％，或至少18％，并且其中优选所述受试者为2至17岁或4至16岁。
44.根据权利要求40所述的方法，其中在用药学上可接受的稀释剂重构后，(i)、(ii)、(iii)和(iv)提供pfu/0.5mL的总浓度并且基于所述总浓度，(ii)以pfu/0.5mL计的浓度小于2％，(iv)以pfu/0.5mL计的浓度为至少50％，(i)以pfu/0.5mL计的浓度为至少1％，并且(iii)以pfu/0.5mL计的浓度为至少6％，其中优选所述受试者为18至60岁。
45.根据权利要求40所述的方法，其是安全的。
46.根据权利要求45所述的方法，其针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，从施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。
47.根据权利要求40所述的方法，其是有效的。
48.根据权利要求47所述的方法，其在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从施用计划的第一次施用到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
49.根据权利要求47所述的方法，其在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少1,500名或至少2,000名在基线时针对所有血清型均为血清阴性且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从施用计划的第二次施用后30天到所述施用计划的第二次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过45％。
50.根据权利要求28所述的方法，其是安全的。
51.根据权利要求50所述的方法，其针对住院治疗的病毒学上确认的登革热提供针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何的4至16岁健康受试者的受试者群体中，从施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后12至18个月相对于安慰剂测量时，下限超过65％。
52.根据权利要求28所述的方法，其是有效的。
53.根据权利要求52所述的方法，其在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少5,000名不管基线时的血清状态如何且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从施用计划的第一次施用到所述施用计划的最后一次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过60％。
54.根据权利要求52所述的方法，其在预防病毒学上可确认的登革热病中提供了针对所有四种血清型的联合疫苗功效，所述联合疫苗功效具有2侧95％置信区间，其中当在至少1,500名或至少2,000名在基线时针对所有血清型均为血清阴性且14至16岁的健康受试者的受试者群体中，从所述施用计划的最后一次施用后30天到所述施用计划的最后一次施用后18个月相对于安慰剂测量时，下限超过45％。
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