CN112852843A - 黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用 - Google Patents

黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112852843A
CN112852843A CN202110144900.3A CN202110144900A CN112852843A CN 112852843 A CN112852843 A CN 112852843A CN 202110144900 A CN202110144900 A CN 202110144900A CN 112852843 A CN112852843 A CN 112852843A
Authority
CN
China
Prior art keywords
flavonol
gene
mrugt78d2
leu
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110144900.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112852843B (zh
Inventor
李鲜
任传宏
赵志康
解林峰
邢梦云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN202110144900.3A priority Critical patent/CN112852843B/zh
Publication of CN112852843A publication Critical patent/CN112852843A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112852843B publication Critical patent/CN112852843B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开一种黄酮醇3‑O‑半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用。该基因从杨梅果实中分离获得，所述基因为MrUGT78D2，其核苷酸序列如SEQ:NO.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ:NO.2所示。本发明首次克隆并验证了杨梅黄酮醇3‑O‑半乳糖苷合成相关的MrUGT78D2基因的功能，通过构建重组质粒，实现MrUGT78D2基因在大肠杆菌中的重组表达，提供转基因工程菌和纯化的重组蛋白。在体外，重组蛋白可以高效地将槲皮素转化成槲皮素3‑O‑半乳糖苷。本发明可用于生物合成大量植物黄酮醇糖苷，应用于提高植物黄酮醇含量和组分改良的基因工程中，并为实现黄酮醇糖苷类物质商品化生产提供代谢工程基础。

Description

黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用
技术领域
本发明属于植物分子生物技术和基因工程领域，涉及黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用，是一种参与杨梅黄酮醇3-O-半乳糖苷生物合成的转移酶MrUGT78D2基因及其编码蛋白和应用。
背景技术
黄酮醇是类黄酮化合物的一类，通常以糖苷衍生物形式存在于植物液泡中。黄酮醇广泛存在于植物根、茎、叶、花、果实和种子中，对植物生长发育和抵抗逆境等发挥着重要作用，包括调控生长素转运、促进侧根形成、影响花粉发育、抗紫外线等。近些年，植物黄酮醇抗氧化、抗肿瘤、预防心血管疾病、消炎等医药学活性被大量报道，黄酮醇生物合成与代谢调控研究引发大量关注。
杨梅(Morella rubra)属于我国特色水果，富含黄酮醇化合物，具有良好的医药学活性。杨梅中的黄酮醇主要有杨梅素、槲皮素及其糖苷化合物，包括杨梅素3-O-鼠李糖苷、槲皮素3-O-半乳糖苷、槲皮素3-O-葡萄糖苷、槲皮素3-O-鼠李糖苷等。其中槲皮素3-O-半乳糖苷具有抗炎、降压、降糖以及对心、脑血管的保护作用等多种生理活性。黄酮醇糖基化主要发生在细胞质中，在糖基转移酶(glycosyltransferase,GT,EC 2.4.x.y)的催化下，将活化的糖供体分子转移到受体分子上。糖基化可以改变黄酮醇化合物的亲水性，增加其溶解度和化学稳定性，影响其生物活性，有助于其在细胞内和生物体内的储存和转运等。
杨梅果实中含有大量黄酮醇糖苷，是决定杨梅生物学活性的重要组成成分，因此鉴别出杨梅黄酮醇糖苷生物合成相关的糖基转移酶，阐明杨梅黄酮醇糖苷生物合成途径具有重要意义。此外，也可用于其他植物基于分子育种、基因工程技术的品种改良工作，应用于代谢工程工业化生产黄酮醇糖苷，对提高食物中的黄酮醇含量，增加食物的保健功能，提高药品产量，具有重要的应用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白，所述基因为MrUGT78D2，所述MrUGT78D2基因的核苷酸序列如SEQ:NO.1所示，编码序列全长为1410个核苷酸，其氨基酸序列如SEQ:NO.2所示，可编码一个含469个氨基酸的蛋白。
本发明提供的一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MrUGT78D2基因，是从杨梅果实中分离获得，为一种尿苷二磷酸半乳糖依赖的黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶。
本发明的另一个目的是提供所述黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MrUGT78D2基因及其编码蛋白在合成黄酮醇3-O-半乳糖苷中的应用。将上述黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MrUGT78D2基因连接到pET-32a(+)载体的多克隆位点中构建获得重组质粒，命名为pET-32a(+)-MrUGT78D2。在大肠杆菌中表达pET-32a(+)-MrUGT78D2，得到MrUGT78D2重组蛋白，可利用UDP-半乳糖苷作为糖供体将黄酮醇转化成黄酮醇3-O-半乳糖苷。
本发明相比现有技术具有以下优点：本发明提供了一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MrUGT78D2基因及其编码蛋白和应用，首次克隆并验证了杨梅黄酮醇3-O-半乳糖苷生物合成相关糖基转移酶MrUGT78D2基因的功能，在体外，MrUGT78D2重组蛋白可以高效地将槲皮素转化成槲皮素3-O-半乳糖苷。本发明还提供了含有MrUGT78D2基因的重组质粒和转基因工程菌，为通过代谢工程方法大量合成黄酮醇3-O-半乳糖苷提供靶基因。本发明提供了一种能大量合成黄酮醇3-O-半乳糖苷的途径，进一步开展黄酮醇糖苷生物合成调控研究奠定基础。
附图说明
图1：杨梅果实发育阶段过程中槲皮素3-O-半乳糖苷含量变化。
图2：杨梅MrUGT78D2蛋白与其他植物UGT系统发育树分析。AtUGT78D1(AAF19756),AtUGT78D2(CAC01718),VvGT1(AAB81683),VvGT5(AB499074),VvGT6(AB499075),FaGT1(AAU09442),Ph3GT(BAA89008),Perilla 3GT(BAA19659),PhF3GalT(AAD55985),CsUGT78A14(ALO19888),CsUGT78A15(KP682361),PpUGT78B(ONI25885),Iris 5GT(BAD06874),Gt5GT7(BAG32255),Perilla 5GT(AB013596),Verbena 5GT(AB013598),Ph5GT(AB027455),Torenia 5GT(AB076698),AtUGT89C1(AAM13132),AtUGT73B1(AEE86330),AtUGT73C6(AEC09298),SbUBGT(BAA83484),LeABRT2(LC131336),LeABRT4(LC131337),Petunia 3RT(CAA50376),Cs16RhaT(ABA18631),GmF3G6Rt(BAN91401),Ip3GGT(BAD95881),AtUGT79B1(AED96443),AtUGT79B6(AED96438).
图3：MrUGT78D2氨基酸序列SEQ:NO.2比对结果；VvGT6(AB499075)，PhF3GalT(AAD55985)，CsUGT78A15(KP682361)。
图4：杨梅MrUGT78D2重组蛋白SEQ:NO.2的SDS-PAGE凝胶电泳分析图。
图5：重组蛋白MrUGT78D2对槲皮素体外酶活性分析HPLC图谱。
图6：黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MrUGT78D2催化模式图；以UDP-半乳糖为糖供体，槲皮素为糖受体，经MrUGT78D2催化生成槲皮素3-O-半乳糖苷。
具体实施方式
下面对本发明的实施例和附图作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：
一、材料
1、杨梅品种：以‘荸荠’杨梅果实为材料，设置三个生物学重复，每个重复4-6个果实，取果实果肉组织，迅速用液氮冻透，放至-80℃冰箱中保存。
2、大肠杆菌BL21(DE3)PlysS表达宿主菌株：购于上海普洛麦格生物产品有限公司。
3、pET-32a(+)载体：购于长沙优宝生物科技有限公司。
4、槲皮素3-O-半乳糖苷标准品：购于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。使用时用甲醇溶液溶解。
5、UDP-半乳糖溶液：购于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。配置10mg/mL的UDP-半乳糖溶液。称取10mg UDP-半乳糖，融于超纯水，定容至1mL，-20℃保存。
6、氨苄青霉素母液(Amp+，500mM)：称取9.3mg氨苄青霉素钠Amp，溶于50mL灭菌超纯水，过滤除菌，分装小管，-20℃保存。
7、500mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)：称取5.95g IPTG，溶于灭菌超纯水，定容至50mL，过滤除菌，分装小管，-20℃保存。
8、蛋白纯化试剂盒：Clontech HisTALON试剂盒购于Takara宝生物工程有限公司。
9、Tris-HCl缓冲液：购于上海生工生物工程有限公司，pH7.5，浓度为1M，使用时稀释1/10至0.1M。
二、杨梅槲皮素3-O-半乳糖苷含量的检测
1、杨梅果实黄酮醇糖苷提取：所有样品用样品研磨仪磨成粉末，称取0.1g样品粉末加入1mL 50％甲醇水溶液中，超声30min，然后11000rpm离心15min，吸取上清液至新管中，用0.22μm滤膜过滤除去杂质，用于HPLC检测。
2、HPLC检测黄酮醇糖苷含量：检测体系为：流动相：A：水(0.1％甲酸)，B：乙腈：水(0.1％甲酸)＝1：1；进样体积：10μl；流速：1mL/min；HPLC程序如下：0-45min，23％-50％B；45-50min，50％-100％B；50-55min，100％B；55-56min，100％-23％B；56-60min，23％B。
3、结果显示(图1)，随着杨梅果实发育，槲皮素3-O-半乳糖苷含量逐渐积累，在S4成熟阶段达到40.82±11.77μg/g FW。
三、杨梅RNA提取与MrUGT78D2基因的克隆
1、利用CTAB法提取杨梅果肉的RNA，按照PrimeScriptTMRT reagent Kit withgDNA Eraser(Takara)试剂说明书操作合成cDNA。以反转录产物cDNA为模板，用SEQ:NO.3和SEQ:NO.4所示引物进行PCR扩增，PCR反应体系为50μL，成分分别为：2×Phanta Max Buffer25μL，dNTP Mix(10mM each)1μL，DNA polymerse(1U/μL)1μL，上下游引物(10μM)各2μL，cDNA1μL，H2O 18μL。PCR程序为：95℃预变性3min，35个循环的95℃15s，58℃15s和72℃1min40s，72℃5min，4℃hold。得到扩增产物。
2、将PCR扩增产物连接到T-easy载体，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行菌落PCR验证，获得阳性菌落进行测序。
四、MrUGT78D2基因序列及编码蛋白分析
1、测序结果返还之后经过比对分析得到与转录组数据库相匹配的MrUGT78D2基因序列SEQ:NO.1，如SEQ：NO.1所示含有1410个核苷酸，编码467个氨基酸的蛋白质，如SEQ:NO.2所示。将SEQ:NO.2与已报道其他植物UGT进行系统发育树分析，得到图2所示结果。图中红色圆点标注的即为MrUGT78D2，MrUGT78D2聚类到3GT分支，预示着其具有在3-OH位置催化生成3-O糖苷化合物功能。
2、利用MrUGT78D2氨基酸序列与部分已发表具有黄酮醇3-OH半乳糖基转移功能的糖基转移酶比对，结果如图3所示。他们共同含有UDP糖基转移酶保守序列PSPG-box。
五、MrUGT78D2基因的原核表达
1、设计带有表达载体pET-32a(+)载体的多克隆酶切位点的特异引物，其引物序列如SEQ:NO.5和SEQ:NO.6所示。
2、以测序正确T载体为模板，用SEQ:NO.5和SEQ:NO.6所示引物进行PCR扩增，PCR反应体系为50μL，成分分别为：2×Phanta Max Buffer 25μL，dNTP Mix(10mM each)1μL，DNApolymerse(1U/μL)1μL，上下游引物(10μM)各2μL，cDNA1μL，H2O 18μL。PCR程序为：95℃预变性3min，35个循环的95℃15s，58℃15s和72℃1min 40s，72℃5min，4℃hold。
3、将PCR扩增产物连接到用限制性内切酶Xho I和BamH I双酶切过的线性pET-32a(+)载体，获得pET-32a(+)-MrUGT78D2重组质粒。
4、将pET-32a(+)-MrUGT78D2重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)PlysS表达宿主菌中，经菌落PCR验证，挑取阳性菌落接种到500mL LB(Amp+)液体培养基，37℃培养，直至OD600为0.6～1.0，获得转基因工程菌。
5、在上述转基因的工程菌中加入IPTG至终浓度为0.5mM，16℃诱导24h，收集菌体，500mL收集到1管中，加入20mL 1×PBS缓冲液，充分重悬浮菌体，-80℃放置12h以上。将菌体置于30℃水浴锅解冻后，用超声破碎仪破碎5min。在4℃温度下，10000rpm离心30min，收集上清液。用Clontech HisTALON重力纯化试剂盒进一步纯化，获得目的蛋白。利用SDS-PAGE方法检测蛋白表达和纯化效果，结果如图4所示。
6、图4中可看出，pET-32a(+)-MrUGT78D2重组质粒转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)PlysS，经IPTG诱导，上清蛋白经Clontech HisTALON重力纯化试剂盒纯化后得到较纯的重组蛋白，且重组蛋白条带大小与预测的一致，加上重组标签后在69.84kDa左右有明显的重组蛋白条带。纯化的蛋白可用于进一步的酶学分析。
六、MrUGT78D2重组蛋白的酶学活性检测分析
1、对于黄酮醇底物的酶活检测，是在100μL，0.1M pH 7.5的Tris-HCl缓冲液包含5mM UDP-半乳糖作为糖基供体，200uM槲皮素作为糖基受体，5μg纯化后的重组蛋白和0.1％的DTT。
2、所有酶反应体系在37℃反应5min后加入等量甲醇停止反应，反应均以空载蛋白作为对照，获得酶反应产物。
3、酶反应产物经产物标准品结合HPLC进行检测鉴定，所述HPLC检测条件如下：Waters 2695-2996DAD检测器，ODS C18柱(4.6×250mm)色谱柱。以含0.1％甲酸水溶液(溶液A)和含0.1％甲酸的100％乙腈(溶液B)为流动相，洗脱梯度为：0-7min，10％-50％B；7-10min，50％B；10-15min，50％-100％B；15-15.1min，100％-10％B；15.1-20min，10％B。检测波长为370nm，柱温为25℃，流速为1mL/min，进样体积为10μL。
4、结果如图5所示，可以看出MrUGT78D2重组蛋白以UDP-半乳糖作为糖基供体，可选择性地催化槲皮素3-OH糖基化，生成槲皮素3-O-半乳糖苷与标准品一致，催化流程如图6所示，说明MrUGT78D2重组蛋白具有黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶活性。
序列表
<110> 浙江大学
<120> 黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1410
<212> DNA
<213> 杨梅(Morella rubra)
<400> 1
atggctggga cggaaagttc tgatccggga aaacatgtgg ctgtcttggc tttcccgttc 60
ggcagccacc ccatgccttt gctgaatctg gtccgcaagc tagcacacgc cgctccgaat 120
gtgcgcttct cattcttcag cacggcaaag tccaaccact cgctcttctc cgctgcgaaa 180
gtcgacgagt cgttccccca caacgtgaaa agttataatg tggaggatgg gatgcccgcg 240
ggtcatgtgc tttcagggca tccagtggag gctgtagacc ttttcctcaa tgtctctacc 300
gagaacttca aaaggggcgt agacgtagca gtggcggaga atgggaagag aatcacttgt 360
ttgctctccg acgcattctt gacatctgcc ggggacgtgg cggagtattt ccacgttgcg 420
tgggtcccgg tgtgggtgtc ttttccatgc tcgctctctg ctcatattca tactgacctc 480
atccggaagc gttgtgccat taatggtaca aaggttggtg ctggaagtag agacggaaat 540
gaaacactgg aatttgttcc agggttgtct tcaatgcgtg tttcggactt accggaggag 600
gtggtctccg gaagggatga cgagtcactt ttctcactca cgctgagcca agttgggttg 660
gtgctaccac gagttactgc tttagcgatt ggcttttgta aagagctaaa cccgcctctt 720
ctcaaccacg atcttgaaaa aaggtgtcgc aaagtgctaa atgtgggttt tcttacccta 780
cctctgccac caccgccttt gccgccgtca gattccgatt tgacgggctg cctatcctgg 840
ttagatgaaa gaaaagctag gtccgtcgca tatgtcagct ttggaactgt ggcttcccct 900
ccccgtgaag agctattagc aactgcggag gcactggagg cgagtggaat tccatttctg 960
tggtctctta aggacaatat aaaggagctc ctgcctagag agtttcttga aaagacaagc 1020
tcgcaaggga aaatagtgcc atggacaaat cagacccaag tactcgcaca tacttcaata 1080
ggtgtctttg tgacacactg tggttgcaac tctgtgtacg agagtattgc gtatggggtg 1140
ccaatgatct gcaggccgtt ctttggtgac caacgaatga ctggacggat ggtagaggaa 1200
gtatggagga ttggtctcct ggctgagggt ggaatactga ataagaacgg gctgctgaat 1260
agcttggaac tcattctgga acatggaaga ggggaggaga tgaggaagaa ggcccacgag 1320
ctcaaagatc tcgtacacaa cgctgcaagc cccaatggca gtgctacacg agatttgata 1380
gatctggtgg acttaatatc tacgtcttaa 1410
<210> 2
<211> 469
<212> PRT
<213> 杨梅(Morella rubra)
<400> 2
Met Ala Gly Thr Glu Ser Ser Asp Pro Gly Lys His Val Ala Val Leu
1 5 10 15
Ala Phe Pro Phe Gly Ser His Pro Met Pro Leu Leu Asn Leu Val Arg
20 25 30
Lys Leu Ala His Ala Ala Pro Asn Val Arg Phe Ser Phe Phe Ser Thr
35 40 45
Ala Lys Ser Asn His Ser Leu Phe Ser Ala Ala Lys Val Asp Glu Ser
50 55 60
Phe Pro His Asn Val Lys Ser Tyr Asn Val Glu Asp Gly Met Pro Ala
65 70 75 80
Gly His Val Leu Ser Gly His Pro Val Glu Ala Val Asp Leu Phe Leu
85 90 95
Asn Val Ser Thr Glu Asn Phe Lys Arg Gly Val Asp Val Ala Val Ala
100 105 110
Glu Asn Gly Lys Arg Ile Thr Cys Leu Leu Ser Asp Ala Phe Leu Thr
115 120 125
Ser Ala Gly Asp Val Ala Glu Tyr Phe His Val Ala Trp Val Pro Val
130 135 140
Trp Val Ser Phe Pro Cys Ser Leu Ser Ala His Ile His Thr Asp Leu
145 150 155 160
Ile Arg Lys Arg Cys Ala Ile Asn Gly Thr Lys Val Gly Ala Gly Ser
165 170 175
Arg Asp Gly Asn Glu Thr Leu Glu Phe Val Pro Gly Leu Ser Ser Met
180 185 190
Arg Val Ser Asp Leu Pro Glu Glu Val Val Ser Gly Arg Asp Asp Glu
195 200 205
Ser Leu Phe Ser Leu Thr Leu Ser Gln Val Gly Leu Val Leu Pro Arg
210 215 220
Val Thr Ala Leu Ala Ile Gly Phe Cys Lys Glu Leu Asn Pro Pro Leu
225 230 235 240
Leu Asn His Asp Leu Glu Lys Arg Cys Arg Lys Val Leu Asn Val Gly
245 250 255
Phe Leu Thr Leu Pro Leu Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Ser Asp Ser
260 265 270
Asp Leu Thr Gly Cys Leu Ser Trp Leu Asp Glu Arg Lys Ala Arg Ser
275 280 285
Val Ala Tyr Val Ser Phe Gly Thr Val Ala Ser Pro Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Leu Leu Ala Thr Ala Glu Ala Leu Glu Ala Ser Gly Ile Pro Phe Leu
305 310 315 320
Trp Ser Leu Lys Asp Asn Ile Lys Glu Leu Leu Pro Arg Glu Phe Leu
325 330 335
Glu Lys Thr Ser Ser Gln Gly Lys Ile Val Pro Trp Thr Asn Gln Thr
340 345 350
Gln Val Leu Ala His Thr Ser Ile Gly Val Phe Val Thr His Cys Gly
355 360 365
Cys Asn Ser Val Tyr Glu Ser Ile Ala Tyr Gly Val Pro Met Ile Cys
370 375 380
Arg Pro Phe Phe Gly Asp Gln Arg Met Thr Gly Arg Met Val Glu Glu
385 390 395 400
Val Trp Arg Ile Gly Leu Leu Ala Glu Gly Gly Ile Leu Asn Lys Asn
405 410 415
Gly Leu Leu Asn Ser Leu Glu Leu Ile Leu Glu His Gly Arg Gly Glu
420 425 430
Glu Met Arg Lys Lys Ala His Glu Leu Lys Asp Leu Val His Asn Ala
435 440 445
Ala Ser Pro Asn Gly Ser Ala Thr Arg Asp Leu Ile Asp Leu Val Asp
450 455 460
Leu Ile Ser Thr Ser
465
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknow)
<400> 3
atggctggga cggaaagttc tgat 24
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknow)
<400> 4
ttaagacgta gatattaagt ccaccagatc 30
<210> 5
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknow)
<400> 5
gccatggctg atatcggatc catggctggg acggaaagtt ctgat 45
<210> 6
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknow)
<400> 6
gtggtggtgg tggtgctcga gagacgtaga tattaagtcc accagatc 48

Claims (4)

1.一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因，其特征在于，所述基因为MrUGT78D2，其核苷酸序列如SEQ:NO.1所示。
2.一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因，其特征在于，所述基因MrUGT78D2编码蛋白的氨基酸序列如SEQ:NO.2所示。
3.根据权利要求1或2所述的一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶基因在合成黄酮醇3-O-半乳糖苷中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过将构建的重组质粒pET-32a(+)-MrUGT78D2转化到工程菌中表达，得到MrUGT78D2重组蛋白，将黄酮醇转化成黄酮醇3-O-半乳糖苷。
CN202110144900.3A 2021-02-02 2021-02-02 黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用 Active CN112852843B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110144900.3A CN112852843B (zh) 2021-02-02 2021-02-02 黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110144900.3A CN112852843B (zh) 2021-02-02 2021-02-02 黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112852843A true CN112852843A (zh) 2021-05-28
CN112852843B CN112852843B (zh) 2023-08-01

Family

ID=75986764

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110144900.3A Active CN112852843B (zh) 2021-02-02 2021-02-02 黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112852843B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113462703A (zh) * 2021-07-22 2021-10-01 贵州师范大学 植物花色苷代谢相关基因Rd3GTs及其编码蛋白和应用
CN115109762A (zh) * 2022-04-01 2022-09-27 浙江大学 一种黄酮醇3-o-半乳糖苷生物合成相关的半乳糖基转移酶及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102292441A (zh) * 2009-01-21 2011-12-21 三得利控股株式会社 类黄酮3-o-葡萄糖醛酸基转移酶及编码该酶的多核苷酸
CN108559755A (zh) * 2018-04-02 2018-09-21 浙江大学 黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用
CN109609523A (zh) * 2019-01-21 2019-04-12 浙江大学 两种催化桃udp-鼠李糖生物合成的基因及编码蛋白和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102292441A (zh) * 2009-01-21 2011-12-21 三得利控股株式会社 类黄酮3-o-葡萄糖醛酸基转移酶及编码该酶的多核苷酸
CN108559755A (zh) * 2018-04-02 2018-09-21 浙江大学 黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用
CN109609523A (zh) * 2019-01-21 2019-04-12 浙江大学 两种催化桃udp-鼠李糖生物合成的基因及编码蛋白和应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113462703A (zh) * 2021-07-22 2021-10-01 贵州师范大学 植物花色苷代谢相关基因Rd3GTs及其编码蛋白和应用
CN115109762A (zh) * 2022-04-01 2022-09-27 浙江大学 一种黄酮醇3-o-半乳糖苷生物合成相关的半乳糖基转移酶及其应用
CN115109762B (zh) * 2022-04-01 2023-09-22 浙江大学 一种黄酮醇3-o-半乳糖苷生物合成相关的半乳糖基转移酶及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112852843B (zh) 2023-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109750071A (zh) 一种生物催化合成莱鲍迪苷m的方法
CN106754595B (zh) 一株重组菌及其在催化莱鲍迪甙a生成莱鲍迪甙d中的应用
CN107641621B (zh) 一种糖苷酶组合物及酶法制备淫羊藿苷元的方法
CN112852843B (zh) 黄酮醇3-o-半乳糖基转移酶基因及其编码蛋白和应用
CN115109763B (zh) 一种黄酮醇3-o-葡萄糖苷生物合成相关的黄酮醇3-o-葡萄糖基转移酶及其应用
CN110804597B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其应用
CN104312996B (zh) α‑L‑鼠李糖苷酶Rha1及其表达基因和应用
CN108486136B (zh) 黄酮醇3-O-葡萄糖基转移酶MdUGT71B1基因及其编码蛋白和应用
CN108467858A (zh) 一种α-L-鼠李糖苷酶及其应用
TW200920844A (en) UDP-glucuronosyltransferase and polynucleotide encoding the same
CN108559755B (zh) 黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用
CN108753748B (zh) 大黄素糖基转移酶蛋白FtUGT75R2及其编码基因与应用
CN111424020B (zh) 淫羊藿来源半乳糖基转移酶及其在制备金丝桃苷中的应用
CN110029118A (zh) 一种合成槲皮素-4’-葡萄糖苷的方法
CN107267478A (zh) 一种淀粉蔗糖酶及其用于转化生产α‑熊果苷的方法
CN110982830B (zh) 糖基转移酶基因RyUGT3A及其编码蛋白与应用
CN106916838A (zh) 催化UDP‑鼠李糖生物合成的基因CsRHMb及其编码蛋白和应用
CN111500601B (zh) 杨梅黄酮醇3-o-鼠李糖基转移酶基因及编码蛋白和应用
CN113174376B (zh) 多酚氧化酶的应用及合成黄酮的方法
CN113736762B (zh) 一种α-L-鼠李糖苷酶突变体及其在制备普鲁宁中的应用
CN109337882A (zh) 一种α-1,2-岩藻糖基转移酶及制备人乳寡糖中的应用
CN114231545B (zh) 一种鼠李糖转移酶基因、制备方法及其表达和应用
CN110343681B (zh) 合成呋喃酮及其衍生物葡萄糖苷的糖基转移酶突变体蛋白
CN117867058A (zh) 枇杷黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶EjUGT78T4基因及其编码蛋白和应用
Wang et al. Multi-omics analysis reveals promiscuous O-glycosyltransferases involved in the diversity of flavonoid glycosides in Periploca forrestii (Apocynaceae)

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant