CN108559755A

CN108559755A - 黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用

Info

Publication number: CN108559755A
Application number: CN201810283033.XA
Authority: CN
Inventors: 李鲜; 解林峰; 曹运琳; 赵志康; 邢梦云; 张波; 徐昌杰
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2018-04-02
Filing date: 2018-04-02
Publication date: 2018-09-21
Anticipated expiration: 2038-04-02
Also published as: CN108559755B

Abstract

本发明公开了一种黄酮醇3‑O‑半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因，该基因从苹果果皮中分离获得，其核苷酸序列如SEQ:NO.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ:NO.2所示。本发明首次克隆并验证了苹果黄酮醇3‑O‑半乳糖苷合成相关的MdUGT75B1基因的功能。通过构建重组质粒，实现了MdUGT75B1基因在大肠杆菌中的重组表达，并得到纯化的重组蛋白。在体外，重组蛋白可以高效地将槲皮素转化成槲皮素3‑O‑半乳糖苷。本发明可用于植物黄酮醇糖苷的生物合成调控，应用于植物黄酮醇含量和组分改良的基因工程中，并为实现黄酮醇糖苷类物质商品化生产提供了代谢工程基础。

Description

黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用

技术领域

本发明属于植物分子生物技术和基因工程领域，涉及一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

苹果(Malus×domestica)系蔷薇科李属果树，是世界五大栽培果树之一，因果实的甘甜风味及其保健功效而受广大消费者喜爱。黄酮醇是苹果果实中富含的一类重要的黄酮类化合物，具有消炎，抗肿瘤，抗氧化，保护神经系统，预防心血管疾病和糖尿病等医药学活性，且在植物生长发育和抵抗逆境等方面具有重要作用。

黄酮醇通常以糖苷的形式存在于植物细胞的液泡中，苹果中的黄酮醇主要为槲皮素及其糖苷，包括槲皮素3-O-半乳糖苷、槲皮素3-O-芸香糖苷和槲皮素3-O-鼠李糖苷等。糖基化主要发生在细胞质中，在糖基转移酶的催化下，将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上，是一种广泛存在的化合物修饰方式，也是许多次生代谢产物合成反应的最后一步。糖基化可以改变黄酮醇化合物的亲水性，增加其溶解度和化学稳定性，影响其生物活性，有助于其在细胞内和生物体内的储存和转运等。

糖基转移酶(glycosyltransferase,GT,E.C.2.4.x.y)是负责催化生物体内糖基化反应的酶类，它们将活性糖基从活化的糖基供体转移到糖基受体，形成糖苷键。其中的GT1家族，由于其C末端含有1个由44个氨基酸组成的保守序列，该保守序列被认为是糖基化过程中与UDP-糖的结合的区域，所以被称为PSPG-box，据此将GT1单独归类为一个尿苷二磷酸糖基依赖的转移酶超家族(UGTs)，其成员主要以UDP-葡萄糖，UDP-半乳糖，UDP-鼠李糖和UDP-葡糖醛酸为糖基供体。

由于糖苷化产物具有潜在的药用价值以及对植物生命活动调节的重要性，现在已受到人们的广泛关注。因此鉴别出苹果黄酮醇糖苷生物合成相关的糖基转移酶，对于阐明苹果黄酮醇糖苷生物合成途径有重要意义，也可用于其他植物基于基因工程技术的黄酮醇组分改良，对提高食物中的黄酮醇含量，增加食物的保健功能，具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因，其核苷酸序列如SEQ:NO.1所示的，该基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ:NO.2所示。

本发明提供的一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因，是从苹果果皮中分离获得，为一种尿苷二磷酸半乳糖依赖的黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因。

本发明的另一个目的是提供所述黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白在合成黄酮醇3-O-半乳糖苷中的应用。将上述黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因连接到pET-32a(+)载体的多克隆位点中构建获得重组质粒，命名为pET-32a(+)-MdUGT75B1。在大肠杆菌中表达pET-32a(+)-MdUGT75B1，得到MdUGT75B1重组蛋白，可将黄酮醇转化成黄酮醇3-O-半乳糖苷。

本发明相比现有技术具有以下优点：本发明提供了一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用，首次克隆并验证了苹果黄酮醇3-O-半乳糖苷生物合成相关糖基转移酶MdUGT75B1基因的功能，在体外，MdUGT75B1重组蛋白可以高效地将槲皮素转化成槲皮素3-O-半乳糖苷。本发明还提供了含有MdUGT75B1基因的重组质粒，为通过生物工程方法大量合成黄酮醇3-O-半乳糖苷，本发明提供了一种能大量合成黄酮醇3-O-半乳糖苷的途径，进一步开展黄酮醇糖苷生物合成调控研究奠定基础。

附图说明

图1：光照处理实验中苹果果皮中槲皮素3-O-半乳糖苷含量检测和MdUGT75B1基因表达分析。

图2：MdUGT75B1氨基酸序列比对结果；CsUGT78A15(KP682361)，F3GT(AAD55985)，VVGT6(AB499075)。

图3：MdUGT75B1重组蛋白SDS-Page凝胶图。

图4：重组蛋白MdUGT75B1对槲皮素体外酶活分析HPLC图谱。

图5：黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶的催化流程图与化学结构式；以槲皮素为糖受体，UDP-半乳糖为糖供体，经MdUGT75B1催化生成槲皮素3-O-半乳糖苷。

具体实施方式

下面对本发明的实施例和附图作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：

一、材料

1、苹果品种：红富士(Malus pumila Mill)，以果实为材料，开展了蓝光(BL)加UV-B处理。设置三个生物学重复，每个重复4个果实，取果实样品外果皮1mm厚的皮层组织，迅速用液氮冻透，然后放至-80℃冰箱中保存。

2、pET-32a(+)载体：购于长沙优宝生物科技有限公司。

3、大肠杆菌BL21(DE3)PlysS表达宿主菌株：购于上海普洛麦格生物产品有限公司。

4、LB培养基：称取20g LB broth(上海生工生物工程)，加入500mL超纯水溶解，用1M的KOH调pH至7.0，高压蒸汽灭菌15min。

5、UDP-半乳糖溶液(10mg/mL)：称取10mg UDP-半乳糖，融于超纯水，定容至1mL，-20℃保存。

6、氨苄青霉素母液(Amp+，500mM)：称取9.3mg氨苄青霉素钠Amp，溶于50mL灭菌超纯水，过滤除菌，分装小管，-20℃保存。

7、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷IPTG(500mM)：称取5.95g IPTG，溶于灭菌超纯水，定容至50mL，过滤除菌，分装小管，-20℃保存。

8、蛋白纯化试剂盒：Clontech HisTALON试剂盒，购于Takara宝生物工程有限公司。

9、Tris-HCl缓冲液(pH 7.5，100mM)：称取1.1214g Tris加水至90mL搅拌溶解均匀，加HCl调pH至7.5，补水定容至100mL。

二、MdUGT75B1的基因表达和黄酮醇糖苷含量的检测

1、利用CTAB法提取苹果果皮的RNA，按照PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNAEraser(Takara)试剂说明书操作合成cDNA。

2、以苹果MdActin为内参基因，序列如SEQ:NO.3所示，引物为SEQ:NO.4和SEQ:NO.5，MdUGT75B1基因的引物为SEQ:NO.6和SEQ:NO.7，进行实时定量PCR分析其基因表达。反应体系包括10μL Ssofast EvaGreen Supermix(Bio-Rad)，上下游引物(10μM)各1μL，2μLcDNA，6μL H₂O。反应程序为：95℃反应3min；95℃反应10s，60℃反应30s，循环45次；95℃反应10s；溶解曲线65℃to 95℃，每5s上升0.5℃；结束。所用仪器为Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪，每次检测都包括以H₂O作反应模版的阴性对照。

3、苹果黄酮醇糖苷的含量检测，所有样品用磨样罐磨成粉末，称取0.1g样品粉末加入1mL 50％甲醇水溶液中，超声30min，然后11000rpm离心15min，吸取上清液至新管中用于HPLC检测。HPLC检测体系为：流动相：A：水(0.1％甲酸)，B：乙腈：水(0.1％甲酸)＝1：1；进样体积：10μl；流速：1mL/min；HPLC程序如下：0-45min，23％-50％B；45-50min，50％-100％B；50-55min，100％B；55-56min，100％-23％B；56-60min，23％B。

结果显示蓝光加UV-B处理可以显著诱导MdUGT75B1基因的表达以及槲皮素3-O-半乳糖苷的积累(图1)。在苹果果皮中，MdUGT75B1基因的表达和槲皮素3-O-半乳糖苷的积累呈正相关关系。

三、MdUGT75B1基因的克隆

1、以反转录产物cDNA为模板，用SEQ:NO.8和SEQ:NO.9所示引物进行PCR扩增，PCR反应体系为50μL，成分分别为：2×Phanta Max Buffer 25μL，dNTP Mix(10mM each)1μL，DNApolymerse(1U/μL)1μL，上下游引物(10μM)各2μL，cDNA 1μL，H2O 18μL。PCR程序为：95℃预变性3min，35个循环的95℃15s，58℃15s和72℃1min 40s，72℃5min，4℃hold。

2、将PCR扩增产物连接到T载体，转化大肠杆菌DH5α，进行菌落PCR验证，获得阳性菌落进行测序。

四、MdUGT75B1基因序列及编码蛋白分析

测序结果返还之后Blast比对发现核苷酸序列与数据库中一致，获得的MdUGT75B1基因序列如SEQ：NO.1所示含有1425个核苷酸，编码474个氨基酸的蛋白，如SEQ：NO.2所示。利用MdUGT75B1氨基酸序列与已发表具有黄酮醇3-OH半乳糖基催化功能的糖基转移酶比对，结果如图2所示。

五、MdUGT75B1基因的原核表达

1、设计带有表达载体pET-32a(+)载体的多克隆酶切位点的特异引物，其引物序列如SEQ:NO.10和SEQ:NO.11所示。

2、以测序正确返还T载体为模板，用SEQ:NO.10和SEQ:NO.11所示引物进行PCR扩增，PCR反应体系为50μL，成分分别为：2×Phanta Max Buffer 25μL，dNTP Mix(10mM each)1μL，DNA polymerse(1U/μL)1μL，上下游引物(10μM)各2μL，cDNA 1μL，H2O 18μL。PCR程序为：95℃预变性3min，35个循环的95℃15s，58℃15s和72℃1min 40s，72℃5min，4℃hold。

3、将PCR扩增产物连接到用Xho I和BamH I双酶切过的pET-32a(+)载体，获得pET-32a(+)-MdUGT75B1重组质粒。

4、将pET-32a(+)-MdUGT75B1重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)PlysS表达宿主菌中，经菌落PCR验证，挑取阳性菌落接种到500mL LB液体培养基，37℃摇菌，直至OD₆₀₀约为0.8，获得转基因工程菌。

5、在上述转基因的工程菌中加入IPTG至终浓度为1mM，16℃诱导24h，收集菌体，500mL收集1管，加入20mL 1×PBS缓冲液，充分悬浮菌体，-80℃放置48h以上，将菌体置于30℃水浴锅解冻后，超声破碎20min，10000rpm离心30min，收集上清液即为粗蛋白。用Clontech HisTALON试剂盒进一步纯化目的蛋白。利用SDS-PAGE方法检测蛋白表达和纯化效果，结果如图3所示。

图3中可看出，pET-32a(+)-MdUGT75B1重组质粒转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)PlysS，经IPTG诱导后，有重组蛋白的表达，上清蛋白经Clontech HisTALON试剂盒纯化后得到较纯的重组蛋白，且重组蛋白条带大小与预测的一致，加上重组标签后在75kDa左右有明显的重组蛋白条带。纯化的蛋白可用于进一步的酶学分析。

六、MdUGT75B1重组蛋白的酶学活性检测分析

对于黄酮醇底物的酶活检测，是在在100μL，100mM pH 7.5的Tris-HCl缓冲液包含5mM UDP-半乳糖作为糖基供体，200uM槲皮素作为糖基受体，5μg纯化后的重组蛋白和0.1％的DTT。

所有酶反应体系在30℃反映30min后停止反应，反应均以空载蛋白作为对照，获得酶反应产物。酶反应产物经产物标准品结合HPLC进行检测鉴定，所述HPLC检测条件如下：Waters 2695-2996DAD检测器，ODS C18柱(4.6×250mm)色谱柱。以含0.1％甲酸水溶液(溶液A)和含0.1％甲酸的100％乙腈(溶液B)为流动相，洗脱梯度为：0-45min，23％-50％B；45-50min，50％-100％B；50-55min，100％B；55-56min，100％-23％B；56-60min，23％B。检测波长为280nm-520nm，柱温为25℃，流速为1mL/min，进样体积为10μL。

结果如图4所示，可以看出MdUGT75B1重组蛋白以UDP-半乳糖作为糖供体，可选择性地催化槲皮素3-OH上的糖基化，生成槲皮素3-O-半乳糖苷，与标准品一致，催化流程如图5所示，说明MdUGT75B1重组蛋白具有黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶活性。

序列表

<110> 浙江大学

<120> 黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白和应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1425

<212> DNA

<213> Malus × domestica

<400> 1

atggtgcaac accgctttct acttgtcaca tatccggctc aaggccacat caacccttcc 60

ctccaattcg ccaagcgcct tatcaacact acaggtgcgc acgtcacctt cgttaccagt 120

ttctcagccc atcatcgcat aggcaatggc tcaattccag atggattgac ttatgcgccc 180

ttctctgatg ggtacgacga cgggtttaag cccggcgaca acatcgacca ctactggtcg 240

gagttgcggc gccgcggagc acaagccatc accgaccttg tagtctcaag tgcaaacgag 300

ggtcaccctt atacttgcct agtctacaca atacttctcc cttgggccgc ggacgtggca 360

catgaacttc acctcccaaa tgtgctgctt tggattcaac cagccacggt tttcgacatc 420

tactactatt actttaacgg gtacaaagat ctcatccggg ataatactag ttctggtacg 480

aacgatgccc ttccatgtgc aatagagtta ccaggtttgc cattatctct tacaagccaa 540

gaccttccct ccttcatggt ggatacaaat ccgtacactt tcgtcctccc gttgcttcaa 600

gaacatatgg atctgctgga gagagaaacc cacccgacca ttctagtgaa cacgttcgat 660

gcactagagc cggaagcctt aaaagcaatt gaaaagtaca atttgattgg agtcgggcca 720

ttgattccga ccactttctt ggacggcaag gatccatcgg acaagtcatc tggaggcgat 780

cttttccaaa aatcaaagga ctctccgtac ctggagtggc tgaacttgaa gccggaaggg 840

tcggtgattt atgtgtcctt cggaagcatt tctgtgttgg aaaaggccca aatggaggaa 900

atcgccaaag ggttgttgga ttgcggccgt ccgttcttgt gggttattag agaaaaagtc 960

gataagaagg gagacgataa tgagtcgaag gaagaagaag agatgttgag ttgcagagag 1020

gaattggaaa agctagggag gatagtgccg tggtgtagtc aagtggaggt tctgtcaagt 1080

ccttcgttgg gttgctttgt gacacattgt gggtggaatt caagtttgga aagcatggct 1140

tcgggggtgc cagtcgtggc gtttcctcag tggacggacc aaggaacgaa tgccaagttg 1200

atagaggacg cttggaagac aggagtgagg gtgacaccaa atgagaaggg gattgttacg 1260

ggtgaggagc tcaaaaggtg tttggagttg gtcatgggaa gtggggagat tggtgaagag 1320

atgagaagga atgctaagaa atggaaagat ttggcaagag aggctgtgag tgaaggtggg 1380

tcttcggaca agaatctaag ggctttcttg gatcggatag attga 1425

<210> 2

<211> 474

<212> PRT

<213> Malus × domestica

<400> 2

Met Val Gln His Arg Phe Leu Leu Val Thr Tyr Pro Ala Gln Gly His

1 5 10 15

Ile Asn Pro Ser Leu Gln Phe Ala Lys Arg Leu Ile Asn Thr Thr Gly

20 25 30

Ala His Val Thr Phe Val Thr Ser Phe Ser Ala His His Arg Ile Gly

35 40 45

Asn Gly Ser Ile Pro Asp Gly Leu Thr Tyr Ala Pro Phe Ser Asp Gly

50 55 60

Tyr Asp Asp Gly Phe Lys Pro Gly Asp Asn Ile Asp His Tyr Trp Ser

65 70 75 80

Glu Leu Arg Arg Arg Gly Ala Gln Ala Ile Thr Asp Leu Val Val Ser

85 90 95

Ser Ala Asn Glu Gly His Pro Tyr Thr Cys Leu Val Tyr Thr Ile Leu

100 105 110

Leu Pro Trp Ala Ala Asp Val Ala His Glu Leu His Leu Pro Asn Val

115 120 125

Leu Leu Trp Ile Gln Pro Ala Thr Val Phe Asp Ile Tyr Tyr Tyr Tyr

130 135 140

Phe Asn Gly Tyr Lys Asp Leu Ile Arg Asp Asn Thr Ser Ser Gly Thr

145 150 155 160

Asn Asp Ala Leu Pro Cys Ala Ile Glu Leu Pro Gly Leu Pro Leu Ser

165 170 175

Leu Thr Ser Gln Asp Leu Pro Ser Phe Met Val Asp Thr Asn Pro Tyr

180 185 190

Thr Phe Val Leu Pro Leu Leu Gln Glu His Met Asp Leu Leu Glu Arg

195 200 205

Glu Thr His Pro Thr Ile Leu Val Asn Thr Phe Asp Ala Leu Glu Pro

210 215 220

Glu Ala Leu Lys Ala Ile Glu Lys Tyr Asn Leu Ile Gly Val Gly Pro

225 230 235 240

Leu Ile Pro Thr Thr Phe Leu Asp Gly Lys Asp Pro Ser Asp Lys Ser

245 250 255

Ser Gly Gly Asp Leu Phe Gln Lys Ser Lys Asp Ser Pro Tyr Leu Glu

260 265 270

Trp Leu Asn Leu Lys Pro Glu Gly Ser Val Ile Tyr Val Ser Phe Gly

275 280 285

Ser Ile Ser Val Leu Glu Lys Ala Gln Met Glu Glu Ile Ala Lys Gly

290 295 300

Leu Leu Asp Cys Gly Arg Pro Phe Leu Trp Val Ile Arg Glu Lys Val

305 310 315 320

Asp Lys Lys Gly Asp Asp Asn Glu Ser Lys Glu Glu Glu Glu Met Leu

325 330 335

Ser Cys Arg Glu Glu Leu Glu Lys Leu Gly Arg Ile Val Pro Trp Cys

340 345 350

Ser Gln Val Glu Val Leu Ser Ser Pro Ser Leu Gly Cys Phe Val Thr

355 360 365

His Cys Gly Trp Asn Ser Ser Leu Glu Ser Met Ala Ser Gly Val Pro

370 375 380

Val Val Ala Phe Pro Gln Trp Thr Asp Gln Gly Thr Asn Ala Lys Leu

385 390 395 400

Ile Glu Asp Ala Trp Lys Thr Gly Val Arg Val Thr Pro Asn Glu Lys

405 410 415

Gly Ile Val Thr Gly Glu Glu Leu Lys Arg Cys Leu Glu Leu Val Met

420 425 430

Gly Ser Gly Glu Ile Gly Glu Glu Met Arg Arg Asn Ala Lys Lys Trp

435 440 445

Lys Asp Leu Ala Arg Glu Ala Val Ser Glu Gly Gly Ser Ser Asp Lys

450 455 460

Asn Leu Arg Ala Phe Leu Asp Arg Ile Asp

465 470

<210> 3

<211> 689

<212> DNA

<213> Malus × domestica

<400> 3

ccgccagtca cgtcctcgcc tttattgttt tttgtttcca tttcgaacca acaccaaagg 60

ccctcaaggc gggcagcatc actaccatct gcaactcatc cgaacctcaa accccatatc 120

tcgaattttc tagggtttcg agaaacagga agtagaagat ggcggacagc gaggacattc 180

agcctcttgt ctgtgataat ggaacgggaa tggttaaggc tggatttgct ggagatgatg 240

ctccaagagc cgtgttccct agcattgttg gccgcccacg acacactggt gttatggttg 300

gaatgggtca gaaagatgca tatgttgggg atgaggctca gtccaagcgt ggtatcttaa 360

ccctcaagta cccaattgag cacggaattg tgagcaattg ggatgacatg gagaagattt 420

ggcatcatac cttctataat gaactgcgtg ttgcacccga agagcaccca attctcctca 480

ctgaagcacc tctcaaccct aaagcaaatc gtgaaaagat gacccagatc atgtttgaga 540

ccttcaatgc tccagctatg tatgtagcca tccaggccgt gctttccctc tatgccagtg 600

gtcgtactac tggtatcgtt cttgactctg gagatggtgt cagccacacg gtccctattt 660

atgaagggta tgctctccca catgccatc 689

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 4

tgaccgaatg agcaaggaaa ttact 25

<210> 5

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 5

tactcagctt tggcaatcca catc 24

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 6

ttcaagtttg gaaagcatgg c 21

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 7

cctgtcttcc aagcgtcctc 20

<210> 8

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 8

atggtgcaac accgctttct acttg 25

<210> 9

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 9

cgttaggata acgtcaatct atccgatcc 29

<210> 10

<211> 50

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 10

gccatggctg atatcggatc catggtgcaa caccgctttc tacttgtcac 50

<210> 11

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 11

gtggtggtgg tggtgctcga gatctatccg atccaagaaa gcccttagat t 51

Claims

1.一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因，其特征在于，该基因的核苷酸序列如SEQ:NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因，其特征在于，该基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ:NO.2所示。

3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为将黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因连接到pET-32a(+)载体的多克隆位点中构建获得，命名为pET-32a(+)-MdUGT75B1。

4.根据权利要求1或2所述的黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶MdUGT75B1基因及其编码蛋白在合成黄酮醇3-O-半乳糖苷中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，通过在大肠杆菌中的表达pET-32a(+)-MdUGT75B1，得到MdUGT75B1重组蛋白，将黄酮醇转化成黄酮醇3-O-半乳糖苷。