CN107955067A - 参与桃黄酮醇生物合成调控的两个myb转录因子及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子PpMYB15和PpMYBF1，具有SEQ:NO.5和SEQ:NO.6所示的核苷酸序列。在它们的氨基酸序列中，均存在一个保守的SG7[K/R][R/x][R/K]xGRT[S/x][R/G]xx[M/x]K和SG7‑2([W/x][L/x]LS)基序。两个MYB转录因子基因表达在果实发育过程中呈下调趋势，与黄酮醇的积累呈正向相关，可显著增强黄酮醇合成相关基因PpCHS、PpCHI、PpF3H和PpFLS1启动子活性，可强烈诱导烟草叶片黄酮醇的积累。本发明可用于植物黄酮醇生物合成的转录调控，并应用于植物黄酮醇含量和组分改良的基因工程中。

Description

参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子及其应用

技术领域

本发明属于植物分子生物技术和基因工程领域，涉及参与桃黄酮醇生物合成转录调 控的两个MYB转录因子(PpMYB15和PpMYBF1)及其应用。

背景技术

桃(Prunus persica)系蔷薇科果树，原产中国，至今已有4000余年栽培历史，因果实风味浓郁而受广大消费者喜爱。我国桃的地理分布范围广，种植面积大且产量高，种质资源丰富，为桃天然产物的研究提供了重要基础。黄酮醇及其糖苷主要存在于果皮中，果肉中含量较少。其中，槲皮素、山柰酚和异鼠李素是组成桃果实黄酮醇糖苷的主要苷元。

黄酮醇具有消炎，抗肿瘤，抗氧化，保护神经系统，预防心血管疾病和糖尿病等医药学活性，且在植物生长发育和抵抗逆境等方面具有重要作用，包括抗紫外线、影响花粉发育、促进侧根形成、调控生长素转运、调节叶片气孔开度等。因此，富含黄酮醇的作物既可以作为膳食来源满足人体的摄入需求，也可用于生产药品、保健食品，具有广阔的开发应用前景。

黄酮醇的生物合成起始于苯丙氨酸途径，由多个酶参与催化，编码这些酶的基因转 录水平主要受到MYB转录因子的调控。鉴别出参与桃黄酮醇生物合成调控的MYB转录因子， 对于阐明桃果实黄酮醇生物合成的转录调控模式具有重要意义，且可用于其他植物基于基因 工程技术的黄酮醇组分改良，对提高食物中的黄酮醇含量，增加食物的保健功能，具有重要 的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供两个参与桃黄酮醇生物合成调控的MYB转录因子，所述两个转 录因子是PpMYB15和PpMYBF1，其CDS序列如SEQ:NO.5和SEQ:NO.6所示。具体特征如 下：

1.序列特征：

PpMYB15和PpMYBF1的编码序列全长分别为1596、1134个核苷酸，可分别编码一个含532和378个氨基酸的蛋白。其蛋白序列中含有保守的R2R3-MYB结构域，在MYB转录因 子大家族中属于R2R3亚组。在PpMYB15和PpMYBF1的蛋白序列中，均存在一个保守的 SG7[K/R][R/x][R/K]xGRT[S/x][R/G]xx[M/x]K和SG7-2([W/x][L/x]LS)基序，该基序存在于 许多参与黄酮醇生物合成调控的MYB转录因子序列中。

2.基因功能

在桃果实的发育过程中，PpMYB15和PpMYBF1的基因表达均呈下降趋势，与黄酮醇含 量的减少呈良好正向相关性。PpMYB15和PpMYBF1均可显著诱导黄酮醇合成关键基因 PpFLS1启动子活性，进而增强黄酮醇的积累。

本发明的另一个目的是提供所述的参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子 (PpMYB15和PpMYBF1)在植物黄酮醇的生物合成的转录调控中的应用，尤其在植物黄酮醇含量和组分改良的基因工程中的应用。具体是在提高植物来源的食物中黄酮醇等生物活性 物质含量和保健功能中应用。

PpMYB15和PpMYBF1分别在烟草叶片瞬时过量表达时，可强烈诱导黄酮醇的积累，使得叶片中富集大量黄酮醇。基于此，PpMYB15和PpMYBF1可用于植物黄酮醇生物合成的 转录调控，进而提高其黄酮醇含量。

PpMYB15和PpMYBF1是桃中首例报道的可调控黄酮醇生物合成的MYB成员。

本发明以‘湖景蜜露’桃品种为试材，应用基因克隆、实时定量PCR、双荧光素酶 系统和瞬时表达等生物学技术，分离鉴定出参与‘湖景蜜露’黄酮醇生物合成调控的MYB成 员PpMYB15和PpMYBF1。研究发现，随着‘湖景蜜露’果实中黄酮醇含量的减少，PpMYB15 和PpMYBF1表达均下调，与其呈良好正向相关；在烟草中瞬时过量表达PpMYB15和 PpMYBF1，显著提高叶片中黄酮醇含量；PpMYB15和PpMYBF1均可显著增强黄酮醇合成关 键基因PpFLS1启动子的活性。本发明利用基因克隆、实时定量PCR、双荧光素酶系统技术 和烟草瞬时表达技术，分离并鉴定出桃PpMYB15和PpMYBF1对黄酮醇生物合成具有转录调 控效应，可应用到植物黄酮醇生物合成的基因工程中。

附图说明

图1：桃果实发育过程中黄酮醇糖苷含量及基因表达模式分析。

图2：桃不同组织部位黄酮醇糖苷含量及基因表达模式分析。

图3：在烟草中瞬时过表达PpMYB15黄酮醇含量检测及类黄酮途径相关基因表达模式分析。

图4：在烟草中瞬时过表达PpMYBF1黄酮醇含量检测及类黄酮途径相关基因表达模式分析。

图5：PpMYB15和PpMYBF1对类黄酮生物合成相关基因的调控效应分析。

具体实施方式

下面结合实施例和附图，以具有此功能的基因PpMYB15和PpMYBF1为例，对本发 明做进一步阐述，但实施例不限制本发明的保护范围。在下述实施例中常规的基因操作方法参照《分子克隆实验指南》(第三版)。

实施例1：桃PpMYB15和PpMYBF1基因克隆

(一)实验方法

以拟南芥中具有调控黄酮醇生物合成的AtMYB12氨基酸序列为参考序列，应用blastp算法在桃基因组数据库Peach Genome V1.0中，查找桃的同源序列，筛选出两个可能参与桃黄酮醇生物合成调控的MYB转录因子PpMYB15(SEQ:NO.5)和PpMYBF1(SEQ:NO.6)。根 据CDS序列，设计特异引物对SEQ:NO.1和SEQ:NO.2及SEQ:NO.3和SEQ:NO.4，进行PCR 扩增获得PpMYB15和PpMYBF1全长序列，并进行测序验证。PCR反应体系为50μl，成分 分别为：2×Phanta Max Buffer 25μl，dNTP Mix(10mM each)1μl，DNApolymerse(1U/μl)1μl， 上下游引物(10μM)各2μl，cDNA1μl，H₂O 18μl。PCR程序为：90℃预变性3min，35个 循环的95℃15s，58℃15s和72℃1min 40s，72℃5min，4℃hold。

(二)实验结果

经测序验证，获得与桃基因组数据库相匹配的PpMYB15序列SEQ:NO.5和PpMYBF1序 列SEQ:NO.6。

实施例2：桃黄酮醇含量检测以及PpMYB15，PpMYBF1和PpFLS1基因表达模式分 析

(一)实验方法

桃果实发育时期：花后50d为S1，花后71d为S2，花后110d为S3，花后130d为S4。 桃果实每个发育时期设置3个生物学重复，每个重复3个果实。桃叶片取同一枝上2种不同 生长程度的叶片分别为幼叶和老叶，每个时期设置3个生物学重复，每个重复3片叶。桃嫩 茎为春季采的一年生枝条，设置3个生物学重复。所有材料液氮冻存后放于-80℃待用。

所有样品用磨样罐磨成粉末，称取0.1g样品粉末加入1ml 50％甲醇水溶液中，超声 30min，然后11000rpm离心15min，吸取上清液至新管中用于HPLC检测。HPLC检测体系为：流动相：A：水(0.1％甲酸)，B：乙腈：水(0.1％甲酸)＝1：1；进样体积：10μl；流 速：1ml/min；HPLC程序如下：0-45min，23％-50％B；45-50min，50％-100％B；50-55min， 100％B；55-56min，100％-23％B；56-60min，23％B。

利用CTAB法提取桃果皮、叶片和嫩茎的RNA，按照PrimeScript^TMRT reagent Kitwith gDNAEraser(Takara)试剂说明书操作合成cDNA。

以桃PpTEF2(SEQ:NO.18)为内参基因，引物为SEQ:NO.7和SEQ:NO.8，PpMYB15 引物为SEQ:NO.9和SEQ:NO.10，PpMYBF1引物为SEQ:NO.11和SEQ:NO.12，PpFLS1引物 为SEQ:NO.13和SEQ:NO.14。qPCR反应体系包括10μl Ssofast EvaGreen Supermix(Bio-Rad)， 上下游引物(10μM)各1μl，2μl cDNA，6μl H₂O。反应程序为：95℃反应3min；95℃反 应10s，60℃反应30s，循环45次；95℃反应10s；溶解曲线65℃to 95℃，每5s上升0.5℃； 结束。所用仪器为Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪，每次检测都包括以H₂O作反应模 版的阴性对照。

(二)实验结果

基因表达分析和黄酮醇含量分析结果表明，PpMYB15和PpMYBF1的基因表达均与桃不同组织部位和果实发育时期黄酮醇含量以及PpFLS1基因表达呈良好正向相关(附图1和2)。

实施例3：调控靶基因活性分析

(一)实验方法

应用引物组合SEQ:NO.15和SEQ:NO.16及SEQ:NO.17和SEQ:NO.18，分别扩增PpMYB15(SEQ:NO.5)和PpMYBF1(SEQ:NO.6)的全长序列，搭载到pGreenⅡ0029 62-SK表达载 体上，构建重组表达载体PpMYB15-SK或PpMYBF1-SK。另外，应用引物组合SEQ:NO.19和 SEQ:NO.20、SEQ:NO.21和SEQ:NO.22、SEQ:NO.23和SEQ:NO.24、SEQ:NO.25和SEQ:NO.26、 SEQ:NO.27和SEQ:NO.28、SEQ:NO.29和SEQ:NO.30及SEQ:NO.31和SEQ:NO.32，分别扩 增PpCHS(SEQ:NO.33)、PpCHI(SEQ:NO.34)、PpF3H(SEQ:NO.35)、PpF3’H(SEQ:NO.36)、 PpDFR(SEQ:NO.37)、PpFLS1(SEQ:NO.38)和PpUFGT(SEQ:NO.39)的启动子序列，搭 载到pGreen II0800-LUC表达载体上，构建重组表达载体PpCHS-LUC、PpCHI-LUC、 PpF3H-LUC、PpF3’H-LUC、PpDFR-LUC、PpFLS1-LUC或PpUFGT-LUC。此PCR反应体系 同实施例1中的PCR反应体系。将最终确认正确构建的表达载体电转化入GV3101::pSoup 农杆菌感受态细胞中，挑取3个阳性克隆，用25％灭菌甘油保存，放于-80℃。

将保存于-80℃的甘油菌划线接种于含25μg/ml庆大霉素和50μg/ml卡那霉素的LB固体培养基上，28℃培养48h，选取少量菌落涂布到新的相同LB固体培养基上，28℃培养12h。刮取生长良好的菌落，用渗透液(10mM MES，10mM MgCl₂，150mM乙酰丁香酮， pH 5.6)悬浮，并调整OD₆₀₀到0.75左右。

利用双荧光素酶系统，分析不同MYB转录因子与桃类黄酮合成基因PpCHS、PpCHI、PpF3H、PpF3’H、PpDFR、PpFLS1和PpUFGT启动子之间是否存在调控效应，将含有 PpMYB15-SK或Green SK-PpMYBF1的农杆菌菌株分别与含有PpCHS-LUC、PpCHI-LUC、 PpF3H-LUC、PpF3’H-LUC、PpDFR-LUC、PpFLS1-LUC或PpUFGT-LUC的农杆菌菌株按照 10:1比例混合。农杆菌菌株混合后，分别注射到本式烟草叶片中，每株烟草注射3片真叶。 每个基因的3个阳性克隆各重复一次上述操作，构成3个生物学重复。

注射后的烟草于16h：8h光暗周期、25℃和75％空气湿度的条件下培养3天，应用Dual-Luciferase Reporter Assay System(Promega，USA)和Modulus Luminometer(Promega，USA)检测叶片中两种荧光素酶(LUC和REN)的比值，据此分析转录因子与目标基因启动 子之间的调控效应。

(二)实验结果

双荧光素酶瞬时表达分析结果显示，PpMYB15和PpMYBF1均具有激活桃黄酮醇合成相关基因PpCHS、PpCHI、PpF3H和PpFLS1启动子的效应，而对花青苷和原花青素合成基因PpDFR启动子没有效应。

实施例4：诱导黄酮醇积累分析

(一)实验方法

选取一株长势优良普通烟草的3片嫩叶，以叶片中心叶脉为分界线，用无针头注射器在叶片左侧分别注射PpMYB15-SK或PpMYBF1-SK的GV3101::pSoup农杆菌菌液，右侧注射pGreenⅡ0029 62-SK农杆菌菌液作为阴性对照。注射部位为远离叶片中心叶脉的表皮细胞内， 烟草于16h:8h光暗周期、25℃和75％空气湿度的条件下培养5天，取注射的叶片冻于液氮 中用于后续的黄酮醇含量检测和基因表达分析。NtCHS引物为SEQ:NO.40和SEQ:NO.41，NtCHI引物为SEQ:NO.42和SEQ:NO.43，NtF3H引物为SEQ:NO.44和SEQ:NO.45,NtF3’H 引物为SEQ:NO.45和SEQ:NO.47，NtDFR引物为SEQ:NO.48和SEQ:NO.49，NtFLS引物为 SEQ:NO.50和SEQ:NO.51，NtUFGT引物为SEQ:NO.52和SEQ:NO.53。每个基因的3个阳性 克隆各重复一次上述操作，构成3个生物学重复。

(二)实验结果

分析结果显示，注射含PpMYB15-SK或PpMYBF1-SK农杆菌的烟草叶片显著高于注射pGreenⅡ0029 62-SK农杆菌的阴性对照，而且，黄酮醇生物合成相关基因NtCHS、NtCHI、NtF3H和NtFLS的表达量也显著上升(附图5)。

本发明利用实时定量PCR、双荧光素酶系统技术和烟草瞬时表达技术，分离并鉴定出桃PpMYB15和PpMYBF1对黄酮醇生物合成具有转录调控效应，可应用于植物黄酮醇含量和组分改良的基因工程中。

对于本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改 进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

序列表

<110> 浙江大学

<120> 参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子及其应用

<160> 53

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 1

atggggaggg cttcatgctg taac 24

<210> 2

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 2

tcaagacaga agccaagcca ccatc 25

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 3

atgggaagag caccatgctg tgag 24

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 4

ttagtgtcct tcaccagtac ttccac 26

<210> 5

<211> 1596

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 5

atggggaggg cttcatgctg taacaagatt gggctgaaga aggggaggtg gacagcagag 60

gaggatcaaa tcttaatcaa ctatatccag accaatgggg aaggctcctg gaggtcatta 120

cccaagaatg cagggttact gcggtgtggt aaaagttgca gactaagatg gattaattat 180

ttgagagccg acttgaagag gggaaatata tctgcccaag aggaagatat catcatcaaa 240

ttgcatgctt ctctgggaaa taggtggtct ttgatagcaa gtcaattacc aggaagaacg 300

gataatgaaa tcaagaacta ctggaactct catttgagta ggaaaattga caccttcaga 360

aggcctacta ctactactag tgatcaaatg agtagcctac cagcagctgc tagtaataat 420

attccttcca agcgaagagg cggtagaacc agtcgctggg ccatgaagaa gagcaaaaca 480

tacaccacta ctcattctac taattatacc caacgtcaca acaagcgaca gaaggacatt 540

acaaatattg ctgctgatga tgatgaggcg attgccctgg agacgaagac gcccttgcct 600

gggcctaatg ataatattga tactatgcac cacgattaca tggtattaat gactgaccca 660

gttgctgatg atcatgatca tcatcctcat cacatggacg actgcagggt cgacaacctt 720

gttaatcatg atcatgatca tcagcggcag gaggaagcag gaggactagc aatgccagcg 780

gtcctcatga gctcaactac tactattact gaggaggagg aggaggaggt ggaggtggag 840

aagaaggaga ctcgtgatca tgatgggcta tgccctgtca atattgatca gtgtcagaag 900

gaaagtcacg aaatgctttt aggaccacat ccacataacg acgagaacaa ggacgatgac 960

ttggatgaat ctggcggcat tgaatttgat ggtgggttgt tgggtacatt taatgaattg 1020

attgacaatg ttgagttact gcagaaggat ccaaattcaa atggggtttt gactttaagt 1080

gaccatcaac atgatcatgc catgggcgtt actcatgagg tagatcaggt agagactact 1140

actacttgtg gtcatttgag ctcgtcatca aacgaacaag tatgcttttc ttcaataatg 1200

tcaatgactg ctacttcaag tagttcagct tcagcttcag cagctgctgg tagttattat 1260

tttgatatgg aggatggtca agctgctgct gctgcaaatg gaaatgatcg tgatcataac 1320

aatcatatat tatgggattg ggagagtgtt gtcgaagcag ggcatgagtt atgggatcat 1380

gatgatgata aagaaaatat gctttcttgg ttgtgggagg agggtacttg ttcttcttct 1440

actactagta atactactgc tgctgctgct gctgcttcta ccattgatcg tcatcttaac 1500

tgggaaggag acactaccac tgatgataca tcgatgatga gaaaggccgt ggaccctgac 1560

aaacaaaatg cgatggtggc ttggcttctg tcttga 1596

<210> 6

<211> 1134

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 6

atgggaagag caccatgctg tgagaaactt gggctcaaaa gaggaagatg gacagctgaa 60

gaagacgaaa tcttgaccaa ctacattcaa cttcatggag aaggctcttg gagatcttta 120

cccaataatg caggattgct gaggtgtggg aaaagttgca gactgaggtg gataaattat 180

ctgagggctg acttgaagag agggaacatc actgctgagg aggaagaaac cattgttaag 240

ttacacactg ctttgggtaa taggtggtca ttcatagccg ctcatttacc aggaagaaca 300

gacaacgaga taaagaacta ctggaactct catttgagta gaaaaattta cacctttacc 360

aatctgggaa acgattatct gcccaccatt acgaatgttg ggaagaagac agctgcttca 420

ttcaaggacc gtagagctgc tgctcgagca aacagatcat ctatcatgaa caagaacaag 480

aatgtattgg ccccatctcc ccagagatca caagcaaagc ctcagcagag tggtaccaat 540

attgctgatc atgtagtgct tcaacttgag ccatcagcca gggaaaacca gaaaggagat 600

gaggcaataa gaatgttggg tttgaaaggt tcttgtttgg acagtacaga aaggattaat 660

ttggaccatt gtggtgatca gaaagagggt gcagaattat gccttgggaa taaagtaaac 720

attactagtt caactgtttt aagtggagat aataatggag aaaaggaggt cttgggtcta 780

tgtgaatgtg tagaaagtga aattaggggg cttgagagtg gggttgtgga tccaagtggg 840

aatgttggat ttaaggagca gagggaagat gggatcatca tggagggtag tattacagat 900

gaagtgacca agagtgaggg taggaagagt acaagtctct ggagctcaaa tgcagaaagt 960

ggcagtggag agttgtactc tttctcatca tcaatgaatt caacctttga tgatgaatgg 1020

ctcagttggg gttgggcagg tggctttgag tgtcacaatg aattggaatt atgggatgaa 1080

ggggagagga tagcttggtt atgggaaagt ggaagtactg gtgaaggaca ctaa 1134

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 7

ggtgtgacga tgaagagtga tg 22

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 8

tgaaggagag ggaaggtgaa ag 22

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 9

tgggaggagg gtacttgttc t 21

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 10

ggtccacggc ctttctcatc 20

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 11

gctcaaatgc agaaagtggc a 21

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 12

caaccccaac tgagccattc 20

<210> 13

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 13

gttttctgac ggcaacgtta cgaa 24

<210> 14

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 14

cccaacccta gcgataggag cc 22

<210> 15

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 15

cgctctagaa ctagtggatc catggggagg gcttcatgct gtaac 45

<210> 16

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 16

gataagcttg atatcgaatt ctcaagacag aagccaagcc accatc 46

<210> 17

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 17

cgctctagaa ctagtggatc catgggaaga gcaccatgct gtgag 45

<210> 18

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 18

gataagcttg atatcgaatt cttagtgtcc ttcaccagta cttccac 47

<210> 19

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 19

ctatagggcg aattgggtac cgctccttag tccgatgacc tctcc 45

<210> 20

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 20

tgtttttggc gtcttccatg ggctcagctt tgtgctcact gttggt 46

<210> 21

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 21

ctatagggcg aattgggtac cgagaaagct tcagtctctc gacctctct 49

<210> 22

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 22

tgtttttggc gtcttccatg gctgaagtcc ggtgagattt ggtagtgc 48

<210> 23

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 23

ctatagggcg aattgggtac ctgactatga atgttactct tgcatctgc 49

<210> 24

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 24

tgtttttggc gtcttccatg ggatttcatt gctgaagttg ttgtaggc 48

<210> 25

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 25

ctatagggcg aattgggtac cggttccgtg accgacatat aaagagac 48

<210> 26

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 26

tgtttttggc gtcttccatg ggcgaagacg acggtgatga atatgag 47

<210> 27

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 27

ctatagggcg aattgggtac cggataaaat tttcgattgc cacgtgtgc 49

<210> 28

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 28

tgtttttggc gtcttccatg gtcgaacagt gtaaccgcgc tctaag 46

<210> 29

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 29

ctatagggcg aattgggtac cccatacttg tcccaaacga tgtccagg 48

<210> 30

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 30

tgtttttggc gtcttccatg gcaatggttg ggacctcaag gaccttc 47

<210> 31

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 31

ctatagggcg aattgggtac cccttggctc ttccgattct ctctctg 47

<210> 32

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 32

tgtttttggc gtcttccatg ggagaagaga gtgttgggag aggcag 46

<210> 33

<211> 2027

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 33

gctccttagt ccgatgacct ctcccttatg tatacagatg tatagagata cttatataat 60

tctctgtctt caattatagt cattttgtac atagttctct ctttctttca acaaaatttt 120

catccctcta tctcaaaaaa ataaataaat aaagtaccct ctgaaatttc tgtcaaatat 180

gaatttaccc ctcaactccc ccaaagttaa agtggcccac ttaaccccac atctattaac 240

tattaaaatc cacaaaaagt acatgataaa taaaatatgg aggttcctca aattaggaca 300

aggaagttgc gatgtagata cttataacct aacatttcaa gtgccccctt tttttatttt 360

tgcagcaagc aatggatttc attcattgaa tagagaaaat gattacaaag ccccactgtg 420

tatagagtga cctcattaaa accttcacgg agaaaaccac gtgggacaaa accctagagt 480

aaaaaagagt accacacaca cccatataga aaattaaaac tgaaatacag ttaatagaga 540

atcctgcact agagtatcaa gaagccaccc aggaggtgct cccatccatt catacaacac 600

agaacctcca tgagacgaca aagcaaagtg agcaaatttg tcagccactc cattcgcttt 660

ccgataatgg agagaaggac tgttgtgcac atggtttttc acgtgcattt tgagttacaa 720

atatatcaca cttgtggcat attgatatcc cattaaataa caaattcgtt cgaacttgtt 780

tcaaagtgat gcatttagcc aaaatctgca ataaggatgg aattttgatc actcacaatc 840

actcaacaca ttgagtgaga aagcatatat agttcgccag aattcaaagt ttaattgtct 900

gaactttgaa tattgatagt tgtaccttgg agatagatgc ctaaagaact acaaaataca 960

tatgtaagga gtgaatttct gtgtgcgaat attggacatt gcatatgcaa acctctatca 1020

tacttgaagt gagttattta aactcattca tttactttga ttctatgaat tgaattgtta 1080

attacttttg ttattataaa gttgagtatc tgatttataa tttatgttat catatattca 1140

catattgatt gtttccaata aatttgagaa agttgttcat tattgtccta tatcgtttta 1200

tcagcgtgac tttattacta attttgaatc agttattatt ctcaacgtaa ctattgaaaa 1260

cgccaaaatt taaaagccct atttcattca tcatggatga cgttttgtct caaatagttt 1320

caatgctgta acgtgttata gatatatgta tttttcatgt aatgtgggcg aagaccaatt 1380

caatattctc acttatggct ttgatggctt ccatgatcca cttagtcgca tggcctcaac 1440

catacatttt tcatgcctag ctacttaatt tcttgtcagc ttcaaagtga tagtacgtaa 1500

gatagaaata gatttcacat gttggtgatg cgaatgtttg atgggcaaag cagccacgcc 1560

aaactcagaa gacacacacg tgccagccgg ctctctaaac tctaaaaact aaaaggctta 1620

aggttggttg aggagggtgc ttccactgag gcattggtca agcacgtgat tctcagctac 1680

cctcttctct cttcaggcct cttttccttc ttttcctcct cattatataa atacaaccat 1740

ttgtctcagc cttttgtcac accctccctc cctctctctc tctctctcca ctgcgtctgc 1800

aacaattata caacctctct ctctctctct ctctctctct gatatatctt ttgtttgagt 1860

tgatcagttg aaaatggtga ccgtggagga agttcgcaag gctcaaaggg ctgagggtcc 1920

tgccactgtg ttggccattg ggacagcaac tcctcccaat tgtgttgatc aggccaccta 1980

ccctgactac tactttcgta tcaccaacag tgagcacaaa gctgagc 2027

<210> 34

<211> 1988

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 34

gagaaagctt cagtctctcg acctctctga gcaaaatcac ccaccttctc agtatctcaa 60

gtctttcagc tcccctgcag gacacagctg cttcttccaa tctctggata ctcttcttaa 120

cacttttaaa actacgagtt ccctgtaaat cagatgaaga gaaaatgtac ttgtaatttt 180

ttattttttc ggtgttgaat gaggaaactg gtggaaattt tgaaattacc atacggtcct 240

gaaagcgttt ggcgccttca gctacggctt ggccggcgtg ttggacgacg gagtcggcat 300

agttcttgac ggtccgagtg aggttgttct tgttcccagc ctccacggct ttgctcacag 360

ccgatcttat ccacgacatt ttctcttgac tttttttttc tcagcccaaa aatattcaga 420

aattttctaa aacaaagctg aaagtttctg gttttggttt tttttggaga gagagagaga 480

tcgatgaagg cttagggttt gggtttgggg agtttggggt ttggggttta ggagaaatgg 540

gggaaggatt ggggattgtt tgggagagcc atttccagtt gccacagaga agaagagagg 600

acgaaacagt aagcgttacg ttgccacgtt tctggattta agcgccgtcg ttttgatgca 660

tttgggtggt gtccttggtt taaatgtacc agtccagaca aactaccagt ctacttctag 720

cttaacacat tatttctttt attttctttt tttctggagt ttattactta ttttctattt 780

gagtttttta tttgcaaagt caattgagta attgcctttt acattgacgt aacttatcaa 840

agtcaatgag tttaattgtt ttgatttgca aagttaagtg gttgaagagt agttactttg 900

tattgacaac aacaaaaaag agtaattact cgagtaatac tattcttatc acattcttat 960

ataaggcaga tgcagtgaac atcaacatca attaaaaagt gtcaataaat cattaaaaaa 1020

aatatatata ttaaatcaat tttaattgat gtggatgtcc acctcattta tcacataaaa 1080

taatatgaga atgtgataaa aatagcatta ttctaattac tctgcatccg aaatatgttt 1140

tcgaacattc atcctttgat actgcttgta taaaataata ttttatttta tcggatatta 1200

aaaaggttta tggaaaggta ggggtaaggt gcaatggacc tgtctgaatt tttattagcc 1260

tattctttgg aagtttgata gacggcgggc caccgctatc aacttataaa gcaaagtcca 1320

attcttttat tgggctgaaa aagaaaaaga tcttttatag tactgagaaa tagtaaaggg 1380

cccaaacacg atctgcctgc ccaaccgtaa ctctacattt actcaggaca cccagaacta 1440

tttctaaagc aaaattacaa aaaaacctcc tcatcctctt catacgtgtt tctcctaaca 1500

taattacatg gagaagtgag tctctataaa aaataactat atccataatc acttccaaat 1560

gaagattttc taccaacgca aacataagtg ttttttattg agagaaactg tttttaacca 1620

tttcataacc actctcaacc aaaccctaaa ctatatttga agtggacacc aaagagttgg 1680

tatgagttgt ggtgacttgc cctcttgaat gaccggtaaa acttccctcc acgttttgag 1740

actctgagct ttcccacgtg cacatctaca ctccctgacc tttctactta accacccaac 1800

cttgtcctaa cgacaccaaa ctctctacaa aaaccccctc tgaagaactc ctccaatcct 1860

tcactggtcc cccaaccctc ccaatttaaa cgcaccgttt cgtacaacaa atccatctcc 1920

gtcgccacac aaaagcttaa caaagactac ccaatatggc tgcactacca aatctcaccg 1980

gacttcag 1988

<210> 35

<211> 2221

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 35

tgactatgaa tgttactctt gcatctgcag aaaaaagttt ttcaaaatta aaattattaa 60

aatcatactt gcgatcaact atgtcgcaag aaatattaaa cggactagct ttgatttcaa 120

ttgaaagtga acttctagaa aaagttgatt atgaaccttt gattgatgat ttctcttcta 180

aaaattcaag aagatcaatt ttcagacatt aggattgtaa tggctgtgtt tttttttttt 240

tcttttgggg aaaaagctct tgtaatagtt ttaattcttc aaataaagat agcaaataca 300

atgtgaatga ttttttggta gtcaggtatg tttttgttgt tgcttttgta tttaatgcaa 360

tataatctaa tttgttaatg acatatgtat gcaactactc tttaatttgt gattgccaaa 420

ttttttaatt aaacaaattg cttattggag acagaaagga ccttataggg gcacaaggag 480

attatttttg taccaaacat ttaaccttat caaatgaaaa tatttaaatt tttatgaatt 540

tgatttctaa ttgtcattac atatttattg atggtgactt ttagttataa aaaaattgtt 600

tatgacatta agttaggaca aatttttatt tatagtattt tcgtattaga ttatgtgagg 660

ctccaattta aatttcgcat ggagccctta aaatttcaga gacaaccctg ttcgcaggaa 720

aaaaaagtat ctccttacca gtaagaagac aagcaatatc catcaagtaa tgacactttg 780

gtgagtcaaa gtggggttcc gtccaaggaa tgacagtcaa aacaatagct taaaaggcaa 840

tggaatagca atacttacat ggaaatccag ctacctatga tattcaaaga gaaagcgcac 900

tcctctattt attctcacaa gaagaagagc tagtgaaatg gaccatttct tcatgttagc 960

agaggaaaga aaagaggccc actgtgagaa gagagagtaa ttcagttgct aacaagcgca 1020

ggtttttcgt taaatggttg gtgactgact ggtgggtgag aagtgggaca aaaccaaagt 1080

catatatcat gattcatcat gaccaccatt gcaatattat tgtatgtaac acaacaaagt 1140

ggtgggtagg cacgtgcatg gctagctcat acatactatt acatacataa gagtcttatg 1200

acaacactag ttaggtgaag atcacgtgac gcgacttcag cccacacaac ctgttgcttt 1260

ttctcaattc taattcttca attaaatctt cttttcatat attttattat atttagttta 1320

gtttatcaag tggcggtcaa atcttcccat cggattttat gttctcttgc tccattttcc 1380

acttttgtca gctgaatgct caaccaatct actcccaatg gtttgattga ccacaccaaa 1440

atcccctttc ccttgctcct ctgtgaacgg aacttgcaca tctgctgaaa aattcttgag 1500

tttacagacg tatataatta agatgtcgcc aaaaaagttt tactcataat tattatttat 1560

tattagaatg gctcccttta taatttccgt aaaaaactca atacaaaatt ggctacacag 1620

ccatcattgc atttaatatt tacccccaag aaagattgtg acattctatt tcggtccaag 1680

gccttgtatg gtttgtacaa gtgacgcgat gcatgatttt taaaacaact ccaaatctcc 1740

atacatggac gcatcaaatt actttatata catataataa aatgaattaa tttgtacaaa 1800

attcttctga aattatgtac aatctgtgtg cttgaaacct cctaataaaa aaattaaaac 1860

aaagaaagcc aaaagggttt ggtagctgtg cagctaatga gactgtaaga gctcactcac 1920

gagccatgag gtagttggag cggtcccctt aattttaaca cttaaaaact caatttttat 1980

tttttttgtc aataaaaact caatatataa atcacacgcc ctaaacaaca atttaaacat 2040

caaattcctt ttctctccaa caccaaaacc acacaaacaa acagacctaa cacattgaac 2100

aagcatggct cctgctacta ctctcacctc catagcaggg gagaaaaccc tgcaacaaaa 2160

atttgtccgg gacgaagatg agcgccccaa ggttgcctac aacaacttca gcaatgaaat 2220

c 2221

<210> 36

<211> 2084

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 36

ggttccgtga ccgacatata aagagacaga gttaatttgt tgcagtaacg ttaaaagata 60

tttaatcata cactcaatag ttggtgattg taaacaagct gatacatttg atttgatttc 120

gaggggttag tttcattgca ttcaagttaa attcaaaggt tccttcaccg acacataaag 180

agacatagtt aacttgttac attaacgtta agagatattt agtaatatat ccaatcttag 240

cacaaaaaat ataaataaac cctacaccat ttaatttcta taaacaaagt aaaaaaaaaa 300

ctcaaaaaat aacagctgac tttatttaat ttaattttga ttattaaatt actttgatgc 360

cctattgagt gttttgagtt ttttttaatg agtttttagg gttaggcttg ttttaagaaa 420

tatattgcag ttttgtaatt tataaaaagt taaaaacctt tttattatgt tgtaaataaa 480

ctttagatat ttttctaaaa tccattttat atatgatatt tttataattt atacccctat 540

agtaaatctc ctttatgtta attatactct ctcatatata tatatatata tatacgtaga 600

gagtgtttca gttaaggaat cttgacattg tattttataa tccgatatat atatatctgg 660

aagaagtagg tccgtgtgaa tttccgtgca caatcaaaat tccaattgct atacacgtgt 720

caaccccaac ttccctaatg aattatgtgt atattctttt tcatcagctg tatgtataat 780

attggatcct ttaattacct acaaatcaaa gtgaacttca gtctttgaat acctagaagg 840

aagagtgtca tatataggaa tcacggtctc attctcacct aattaaataa tcaatataaa 900

gtaagtgaat atatgacgtg aacatgaaaa cgttgaaagg taagcaaagg ttaggaccct 960

caggatagca cctttgggag agaaattgtt gctatttttg atcaataata caataatacg 1020

tcttgacttt taagagtatc ttcaaccaat atgttaaaaa tgttacatag atatttaacg 1080

gctagaaata atatatcata ttactccagt cgaattgtca aaactgatgt agaatgagag 1140

ttggaggttc agtcattatt tttgacattc caaaaacaat acgttaaata aatattttat 1200

tattttttaa aggcttctaa cagtacttcc atttattatt ttattattta ttttgaatga 1260

tttgacggtt aaaaattgaa cttttgtaaa gattcgatga acttatatgg gttggaaatg 1320

aagccacgtg ccttcatctc aatctcagtt taagtaacgc attattaata cggaacttag 1380

atacgggttc attgacattg tgcaaccacc tcacctcacc tgactgtaaa ttttacagct 1440

tcataagaat tgcgatgctc tgctccagcc aatatacaat caatacaaga gattttggtt 1500

cacttttctt agtgtagttt gaatttgtaa ggccaccatt gcacattttt cgcgtataga 1560

agaagaatat ttagaattgt ccacaccgaa atagattctg gctgaaaaat gtaattcgca 1620

tgtaaaccag ctaatacaac tatcgttatc atatgtaatt tcttaggtag gtagctagct 1680

acctagctat cattatctta tacacaaatt acaattaatt tacttaatat taattgatta 1740

cttaatttac cattttgtcc cccctcccca aaaagagata aatgacaagg aggaggggtt 1800

ggaagacaat tctgcgcact tagcatcttc catcacatca ttctccgtaa ttaacaaacc 1860

ttcaaatacg tatctaccat tcgttgatat attatcatcc caaaaaccaa aacctaaata 1920

ataaaaaact caacctaacc cacccaacag agcaaacacg ttccaaccta ctaaacgcac 1980

cccaaccccc acttttctcc ctatctatat atgatctcca acacataatc ttgtaaactc 2040

gaacataaaa tgtttattct catattcatc accgtcgtct tcgc 2084

<210> 37

<211> 2155

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 37

ggataaaatt ttcgattgcc acgtgtgcat atttattata aaattcacat ctcactcatc 60

ataccattac ctactcaatc atcatacaat tgaaatacct acccactcat catacaattg 120

aaatattctc ggtcctcata gtccgacata atcgagtaca aggacgactc aatcattggt 180

ggaggcggtt ccaccggatc acgacgtggg gaagtatttt ccttcgaggg atgtaacagt 240

gtcattattt ctgacacgga atgcactact ggaaccgact gcgggcattg ttcacttgaa 300

gagccatgtg taatggtttt cctctttttt gttttgcctt gaataatcta ttttaaaaaa 360

atgaaattgg aaatgcaaga aatatataaa taaataaaaa tatattaaat tgaataaaat 420

gacaattttt ttaatggcaa tttttttttt tttacctcgt tgccaagatt ttgacctctt 480

cgaatattta tccacgaccc ttcgactttg atggaagagg ccatttgaat ttttgtagta 540

aaaaatttgg tgtggaaagt gaaaaatatt ggaataagat gaatttgtat gaatatttgg 600

tgtggaaagt gaataatatt ggtaggtatt tatagaaaaa atttctagaa ttttttgata 660

tttttttagc caaaaattgg acagccgttg gattgggcaa gattttttga tcagaggctc 720

caagagaagc catgtggctt gtagccattg ggttatgtag gctggtgggt tagtgctgac 780

atcagcagct gattttcaaa tttttatacg gttggcgcgt gtattccatg cacaaacagc 840

aaaaaaaaat tgaaaaacag ccgctgacgt cagcagcctt taggcaacaa cccaatctag 900

aattgctcgt gggcttgcca ggttggtggg tctcatgcct tgctcgagct gccttttgcg 960

cgctggaggt ccaaaatgga cctggggggg cctgttgcaa tggttgggtg cgctgcactt 1020

gctcttatgt ttcttgattc tggtagcata taaatatagg tgtactttta tttttatgca 1080

tataagtgat ttaaaaataa agggatgtta atccttgttt agttcacata aaatgtgagt 1140

caatcaaata ccagtgagag tgtgagaggg atgagagttt agcaggactg gttctgagat 1200

tttgagagtc atgtgcgaaa tttcaactag agctctcaca tagtctaata tgaaaatatt 1260

aaataaaaaa tttgccagaa cttaatatca taaaataatt ttttttataa ctaaaattca 1320

ttaattagca tgcaataaca atcacaaatc agattcaatt tttttataat aaagttaaat 1380

attagtatgt atggtaaaaa aataagagct caagagaaaa aagaatgaca tgaatttttg 1440

ttttgatttt gttttgagag aaagaaagta cttttttatt tattttttta tttatatata 1500

atgttgttaa tttaggtgga tctccccttt tttttttttc ttttcacgtg cttatacttt 1560

taaaaaaaaa ctattttaaa ttttattgtt ataatgaaaa aagaagaaaa atataaatag 1620

aataacatca ctaagactca aacttgggcc ttgtaccaag tgatgtgcca ccaaatacac 1680

ttttataata ttaatatata atataaagta aaaaaagttt ggacagtggc gccacttgca 1740

ccattccaga acagaacggg cactaaagtt gaccaggtaa aacaaaacga gaaatgaatc 1800

aactaccacg cacgtgcacc aaccgttagg aaagcacgtg atggcccgga agctgagctg 1860

aaacagaaaa agcgggtgtg agggggtgtt aggctgcgaa ttgttagctg gggtcgtagg 1920

aaactccaac tagtcagtcc ccccattggt aagtatttat aaggttaaca tttgggaaag 1980

ttgagcatcc acttttgttc gttttgtcat atataaattg aataagcaag cagtacatac 2040

ttgatttgat tcaaatatgg ggccagagtc tgaatctgtt tgtgtgacgg gcgcttccgg 2100

tttcatcggc tcatggctcg tcatgagact cttagagcgc ggttacactg ttcga 2155

<210> 38

<211> 2176

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 38

ccatacttgt cccaaacgat gtccagggcc tacaggcttg cagagatggc caatggtacg 60

atgtgaggta catccctaat gccctggtca tccacattgg tgatcagatg gaggttagga 120

ccttctcttt atattatcta tattattatt aagataaacc ttgcgttaat cttaatgatt 180

ttaataacgt actaacttaa ttaagtgata ataactttgt ggtagattat gagcaatgga 240

aagtacaaga gtgtcctcca tagaagcact gtgaataaag agaagacgag actctcgtgg 300

ccggttttca ttgagcctcc acaagaccgc gtagttggcc ctctcccaca gcttgtgaag 360

gaggacaatc cacctaaata caaagccaag aagttcggag attattgtta ttgcaagctc 420

aacaagattc cccagtaaag ctatatagcc agctttctct cactctcggg gctctcaaca 480

actttcacat tcgttcttaa atttaaggcc gtgttggtgt aattaactct tttaattgtc 540

agacatcatc gtcttgactc tgttaatagt aacaatagtt tcgacttttt catttaaata 600

tgttaacttt gacagttgat tttgtgtatg taacttctaa aaggaaagtg tgttttgtaa 660

ttatataaga tctataggtg ttcgtcttat taactttgtg taaaatcgtg ggtctcttta 720

acgattacta gttgatttta actagatacg attgaatatt gaattctata acttatgttc 780

taatatggtg cagaaaaacc cacgtgaaga aatgtgttaa aatataaaat gattattaac 840

gcttcgtaat aataaagatg tctctcaaat aagataccca acaaaaattt ataacattca 900

acacaaagct aattgatatt gatgcaaaga catcaactag gtgacgtggg ccttttatat 960

tctcaaactc atgcccccaa aaattaatgt gaacatacgt aatggtctgt ggaggtaggt 1020

gcatcctagt atttctacag tttctactct ctcgccccac agcgatcttc aacaaccaac 1080

ccaatctttt tttcatttgt ccctcttcct cattttaaat ttaacgacaa atcaagagta 1140

catgcaaaat gttgtaccaa ttaaggagct ggattgttag aacttggagg tatttaaagg 1200

agtgagagtt ggaaatctat tatttttatt tgagcattag ttgggttaat ccgactgaaa 1260

aacactcaaa agacactgag tgctatcagt tctttttaat tcttttaggt accgaaaata 1320

gtgtttattg ttgtattaaa gaccgttata tatcacgcgg aatataaatt ttcgagactt 1380

attttcgtaa tgagtctcac aattataaat tgtcgtgaga ctttcgtgag aaattgtatg 1440

tcatactcat acatcaagtt gtataccctc ctccaaccaa acgaaaaagg atatttttgg 1500

aaagttggat ttggaatttc tgtttttttt ttaactttag tgagagctgg gaaagcaatt 1560

ggatggagtg aagtgatgac agcggtagaa ctggaaaacg atatctaccc aaatttattt 1620

atttatttat ttattttaaa tttaatcctt gatggatctt gtaaaagggg gcagttgaac 1680

tattaagcga aaaggaatga gccacgtccc ctacatgtac atggcatggc catcagatct 1740

accttcttct gaaaaccatt ttttcttgca caaggaatga gccacgtccc ctacatgtac 1800

atggcatggg catcatacct accttcttct gaaaacgatt tttcttgcac aataaatagt 1860

cactgccatt ctgcccccaa agaaaaaaat tggtcacttg ccttttggca ctaatataaa 1920

tatacacttc acgcaaaggg agtgagagac aaatcaagaa gctccaaatt cctctaaaca 1980

cgctttgttt taatttgctc atcttctcag cccttaggct gtagggtttt ttttctttca 2040

aaaatggggg tagagagagt cgaggtcatt gccccaaaac ccgagggcac tatcccagac 2100

gagttcatta ggtcagagaa tgagcaacct gggatcacga ccgttcatgg gaaggtcctt 2160

gaggtcccaa ccattg 2176

<210> 39

<211> 2158

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 39

ccttggctct tccgattctc tctctgtcca aggaatcaac cacgtaaatc tgcatatgga 60

aaaaaaaaaa ttatatatat gataaggcac aaacaggaaa gaaactaaaa gagggacaac 120

tgactagcaa cattcgagaa ccagaatcca gtagaacaag actagagaaa gttcgattac 180

cagtccgtcc gtgttattga agtaatgcct ccagagtggc cttagtttct cttgtccacc 240

aacatcccaa acagtgaaca tgacattctt atactgaact ttctccacat tgaaacctgt 300

tgagacaaag aaatgcctta aaataaaaat ctaaacaacc tataatacta caagtccaat 360

tgtagatatg agagaggccc acctatggta ggcacagttg ataaaacttc tccaatgtgc 420

agcttgtaaa ggatggttgt tttaccagct gcgtcgaggc caagcattac aacctatggc 480

accaccgcaa atgaaaatgg caaataagga aagtgaagta aatatcatgc tcttaaatta 540

aaggtcagca acagaagaac aaaaagaaga agcaagaagt caagtattta gaatttaatg 600

aataagccac ttttccatca cttttccatt acaggtaagt agaaacctat aaaacttatt 660

ggggagggta aggtattaat gtgatcatac aatattatat aatcactgag aatttgagaa 720

tcaaatggta aatatgctgg aattacactg tcccccaata actgataatg aaagagagta 780

aaaaaaaacg aaagaggcaa gagagaggtg agcaaattca gaaaacgata ttaaatatgc 840

atatgattat aatgacaata tgaagtccgg cctcctatat atcacaatat tcaaaagagc 900

aattgaaaat tttaaccagt aaaagctaaa agaaaggcaa gaaagaaacc attacgacat 960

gagccctaca tatccctggc agctacaatt gtcaaaccac agaaaaggga aaataatgaa 1020

aatgctacaa aattggtacg aaaaaaaaaa agaaaaagaa aaaaaaaaca gagagagaga 1080

gggagagagg gagtactctc atctcagtgt ttccgaagaa ggtatcgaag agcttccgaa 1140

aagcttgacc catgacggca agcaaaatac ttgaacaaga gaaaaagaaa agctcgatct 1200

ctttcttcct ttctttctct ctctgtgtct gtgtgggtgt cgaagtgatt gtgaacttca 1260

cgagctcatc gactaataag aaagagaaat cagctgagtt atgatttgat ggatcgattg 1320

gggttgggtt gatcgatatt tagagagaga aacaaccacc cgcgtgatgt gtgagagaaa 1380

gaaataaaaa tcagaaacaa aggtagcgtt tttctttctt ttctgctaag actaaaacga 1440

acctgaattt ttatttttat tttttatttt attttatttt atgaaacaaa aacaaaaaag 1500

gaaaagaaag aagaaagtaa attggggagg aattagaata ttgggtgttt ctttcatttc 1560

tttttcactc ctcagctcag tcagaattga catttagtgg tggagtttgt tttggtgggc 1620

ccatattgaa tgggctggta ctgggtactg ggtactgggt actgggtact gggttggcag 1680

gcgggctgaa ttgggcttag aagagacagc ccaaaaaaga agaagtggcc tggcctcgtg 1740

ggcgtggcgg gggttatcac gtgcattgtt catcttcaaa ggaggctaag cagccagtct 1800

ctctagagtc atgtttgtgt tccattccat gaagaagagt agaggaaata ataataataa 1860

tatgaatgat aggctgattt tctggtgagt tgagcattgt cttgtgacaa cccccactcc 1920

tttgccacta tcactatacc tatataaaat ccaatccaat ctcatccaaa tccctcctca 1980

tcccactcca attagtctta ttagctcata catatatggc accacaaccg attgatgatg 2040

atcatattgt gtatgagcat catgtggcgg ccctagcctt ccctttctcc acccatgcca 2100

gtcccacctt ggccctcgtc cgccgcctag ccgctgcctc tcccaacact ctcttctc 2158

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 40

agaaaagcct tgtggaagca 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 41

acttggtcca aaattgcagg 20

<210> 42

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 42

gaaatcctcc gatccagtga 20

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 43

caacgttgac aacatcaggc 20

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 44

acagggtgaa gtggtccaag 20

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 45

ccttggttaa ggcctccttc 20

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 46

tccaagaata ctggcccaag 20

<210> 47

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 47

ctcacaactc tcggatgcaa 20

<210> 48

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 48

tcccatcatg cgatcatcta 20

<210> 49

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 49

atggcttctt tgtcacgtcc 20

<210> 50

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 50

gaacttgaag ggaaaagggg 20

<210> 51

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 51

tccctgtagg agggaggatt 20

<210> 52

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 52

gagtgcattg gatgcctttt 20

<210> 53

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 53

ccagctccat taggtccttg 20

Claims (5)

1.参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子，其特征在于，所述两个转录因子是PpMYB15和PpMYBF1，其核苷酸序列如SEQ:NO.5和SEQ:NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子，其特征在于，所述转录因子PpMYB15的编码序列全长为1596个核苷酸，转录因子PpMYBF1的编码序列全长为1134个核苷酸，分别编码一个含532和378氨基酸的蛋白，它们蛋白序列中含有R2R3MYB结构域，在MYB转录因子大家族中属于R2R3亚组，在PpMYB15和PpMYBF1的氨基酸序列中，均存在一个保守的SG7[K/R][R/x][R/K]xGRT[S/x][R/G]xx[M/x]K和SG7-2([W/x][L/x]LS)基序。

3.根据权利要求2所述的参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子，其特征在于，所述氨基酸序列中含有一个保守的SG7和SG7-2基序，该基序存在于许多参与植物黄酮醇生物合成调控的MYB转录因子序列中。

4.权利要求1所述的参与桃黄酮醇生物合成调控的两个MYB转录因子在植物黄酮醇的生物合成的转录调控中的应用，其特征在于，在植物黄酮醇含量和组分改良的基因工程中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在提高植物来源的食物中黄酮醇生物活性物质含量和保健功能中的应用。