CN112826886A - 一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗粒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗粒及其制备方法，涉及民族药技术领域。本发明所述壮药组合物由肿节风、粉萆薢、车前草、虎杖、徐长卿、透骨草、忍冬藤、甘草八味药组成，临床应用结果证明，该方具有清热毒、除湿毒、祛风毒、消肿痛，调水道及通龙路、火路之功效，对于治疗风湿热毒所致隆芡(痛风)，症见关节疼痛、红肿、灼热、屈伸不利，血尿酸增高，痛风石等均有很好疗效，尤其是所述壮药组合物及基于所述壮药组合物的壮药颗粒可用于治疗MSU晶体诱导的痛风性关节炎，具有多靶点、低毒的特点。

Description

一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗 粒及其制备方法
技术领域
本发明属于民族药技术领域，具体涉及一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗粒及其制备方法。
背景技术
痛风(Gout)由嘌呤代谢紊乱，尿酸合成增多和/或排出减少引起，临床主要以高尿酸血症、单钠尿酸盐沉积在骨关节、肾脏和皮下等部位，引发的急、慢性炎症和组织损伤的一种代谢性疾病。
前瞻性流行病学研究的证据已证实饮食因素(动物嘌呤，酒精和果糖)，肥胖，代谢综合征，高血压，利尿剂和慢性肾脏疾病是高尿酸血症和痛风的临床相关危险因素。目前，尽管研究人员已对该疾病进行了各种研究，但尚无有效的药物用于痛风患者。如今，控制高尿酸血症和消炎治疗是痛风性关节炎的主要治疗方法，相关药物分为降尿酸药物(别嘌呤醇、苯溴马隆等)和抗炎药物(秋水仙碱、非甾体抗炎药和糖皮质激素)。虽然这些药物在短期内显示出很好的效果，但长期使用时，会发生胃肠道反应，皮疹，甚至肾功能衰竭等不良反应。因此，寻找更为安全有效的治疗痛风和高尿酸血症的药物成为药物研究的热点之一。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗粒及其制备方法，所述壮药组合物和壮药颗粒可减轻关节组织病变，降低血液中炎性细胞因子水平，下调TLRs/NF-κB/NLRP3炎症信号通路，从而对MSU诱导的大鼠急性痛风性关节炎有较强的保护作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物，所述壮药组合物由以下重量份的原料药制成：肿节风30份、虎杖20份、忍冬藤20份、车前草15份、粉萆薢15份、徐长卿12份、透骨草12份和甘草6份。
本发明还提供了上述壮药组合物的制备方法，由以下步骤组成：将所述壮药组合物的原料药混合后与水混合，浸泡30min后煎煮3次，过滤后将滤液浓缩为相对密度为1.25～1.30的浸膏，减压干燥后粉碎，得所述壮药组合物的干膏粉；
所述原料药的总质量与水的质量比为1:12。
优选的，每次所述煎煮的时间为40min。
优选的，所述浸膏的相对密度为60℃时的相对密度。
本发明还提供了上述壮药组合物或上述制备方法制备得到的壮药组合物在制备对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药颗粒中的应用。
本发明还提供了一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药颗粒，所述壮药颗粒以上述壮药组合物或上述制备方法制备得到的壮药组合物为有效成分，还包括乙醇和糊精。
本发明还提供了上述壮药颗粒的制备方法，由以下步骤组成：将所述壮药组合物的干膏粉与乙醇和糊精混合，得所述壮药颗粒。
优选的，所述干膏粉的粒径为24目。
优选的，所述干膏粉、乙醇和糊精的质量比为1:1:0.25。
本发明提供了一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物，由肿节风、粉萆薢、车前草、虎杖、徐长卿、透骨草、忍冬藤、甘草八味药组成，是中国西南少数民族地区的壮医临床经验方，临床应用结果证明，该方具有清热毒、除湿毒、祛风毒、消肿痛，调水道及通龙路、火路之功效，对于治疗风湿热毒所致隆芡(痛风)，症见关节疼痛、红肿、灼热、屈伸不利，血尿酸增高，痛风石等均有很好疗效，尤其是所述壮药组合物及基于所述壮药组合物的壮药颗粒可用于治疗MSU晶体诱导的痛风性关节炎，具有多靶点、低毒的特点。
本发明实施例中，对注射MSU晶体的痛风性关节炎大鼠利用所述壮药颗粒(痛风立安颗粒，简称TFLA)进行治疗，TFLA能改善急性痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀。病理结果显示，MSU晶体可导致大鼠右后踝关节滑膜增生、炎性细胞浸润和血管扩张，不同剂量的TFLA可明显改善炎症渗出、滑膜肿胀和增殖TFLA对MSU诱导的大鼠急性痛风性关节炎有较强的保护作用，其机制与减轻关节组织病变，降低血液中炎性细胞因子水平，下调TLRs/NF-κB/NLRP3炎症信号通路有关。TFLA降低尿酸的机制为通过促进肾组织OAT1的表达，抑制GLUT9和URAT1的表达，从而促进尿酸排泄，抑制肾小管重吸收。
附图说明
图1为各药物处理对踝关节肿胀的抑制作用；
图2为TFLA对血清中炎症细胞因子的表达水平的影响；
图3为TFLA对急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织病理学病变的改善作用，其中A表示正常对照组，B表示模型对照组，C表示阳性对照组，D表示痛风立安颗粒低剂量组(4.5g/kg)，E表示痛风立安颗粒中剂量组(9.0g/kg)，F表示痛风立安颗粒高剂量组(18.0g/kg)；
图4为TFLA对滑膜组织中TLR2，TLR4和NF-κB的蛋白表达水平的影响；
图5为TFLA对滑膜组织中TLR2，TLR4和NF-κB基因表达水平的影响；
图6为TFLA对血清尿酸水平及XOD活性的影响；
图7为TFLA对肾脏组织OAT3、GLUT9和URAT1蛋白表达的影响；
图8为TFLA对肾脏组织mOAT3、mGLUT9和mURAT1表达的影响。
具体实施方式
本发明提供了一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物，所述壮药组合物由以下重量份的原料药制成：肿节风30份、虎杖20份、忍冬藤20份、车前草15份、粉萆薢15份、徐长卿12份、透骨草12份和甘草6份。
壮医认为，本发明所述壮药组合物具有清热利湿、祛风通络之作用，用于风湿热痹阻所致的痛风。方中肿节风味苦、辣、性平，清热解毒，祛风通络，活血散结，为主药。虎杖味微苦、性微寒，祛风除湿，清热解毒；忍冬藤味甜、性寒。清热解毒，祛风除；二药共为帮药，加强主药清热解毒，祛风除湿之功。萆薢味苦、性平，利湿化浊，祛风除湿；车前草味甘，性寒，清热利湿，利水通淋；徐长卿味辣、性热，祛风除湿；透骨草味辣、苦、性热，祛风除湿，软坚散结；四药合用清热利湿，活血通络止痛，促进主、帮药清热利湿之功，合为引药；甘草调和诸药而解百毒，为解毒药。全方共奏清热利湿、祛风通络之功。壮医认为本方具有清热毒、除湿毒、祛风毒、消肿痛，调水道，通龙路、火路之作用，适用于风湿热毒所致的隆芡(痛风)。症见：关节疼痛、红肿、灼热、屈伸不利等。本发明对所述原料药的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。
本发明还提供了上述壮药组合物的制备方法，由以下步骤组成：将所述壮药组合物的原料药混合后与水混合，浸泡30min后煎煮3次，过滤后将滤液浓缩为相对密度为1.25～1.30的浸膏，减压干燥后粉碎，得所述壮药组合物的干膏粉；所述原料药的总质量与水的质量比为1:12。
本发明每次所述煎煮的时间优选为40min，且所述浸膏的相对密度优选为60℃时的相对密度。
本发明还提供了上述壮药组合物或上述制备方法制备得到的壮药组合物在制备对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药颗粒(痛风立安颗粒，简称TFLA)中的应用。
本发明还提供了一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药颗粒(痛风立安颗粒，简称TFLA)，所述壮药颗粒以上述壮药组合物或上述制备方法制备得到的壮药组合物为有效成分，还包括乙醇和糊精。
本发明所述壮药颗粒以上述壮药组合物为有效成分，以乙醇和糊精为辅料。
本发明还提供了上述壮药颗粒(痛风立安颗粒，简称TFLA)的制备方法，由以下步骤组成：将所述壮药组合物的干膏粉与乙醇和糊精混合，得所述壮药颗粒。
本发明所述干膏粉的粒径优选为24目；所述干膏粉、乙醇和糊精的质量比优选为1:1:0.25。
下面结合实施例对本发明提供的一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗粒及其制备方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
痛风立安颗粒的制备：
处方：肿节风30g，虎杖20g，忍冬藤20g，车前草15g，粉萆薢15g，徐长卿12g，透骨草12g，甘草6g
将以上八味药加12倍量水浸泡30min后，煎煮3次，每次40min，滤过，滤液浓缩至相对密度1.25-1.30(60℃)稠膏，减压干膏，粉碎，过2号筛，得到干膏粉，按干膏粉：糊精：95％乙醇为1:1:0.25的比例加糊精、95％乙醇，混匀，制粒，干燥，整粒，装袋，15g/袋，即得。
实施例2
1、高尿酸血症合并急性痛风性关节炎动物模型的建立及分组给药
60只雄性SD大鼠分笼饲养，适应性喂养1周，自由饮食和饮水。随机分为：正常组、模型组、阳性组及痛风立安颗粒低、中、高剂量组，每组10只。各组造模与给药同时进行。痛风立安颗粒低、中、高剂量组分别灌胃给予痛风立安颗粒4.5、9、18g/(kg.d)，阳性组灌胃给予别嘌醇(27mg/kg)+秋水仙碱(0.27mg/kg)，空白组及模型组灌胃给予10ml/kg纯水。各组连续灌胃给药14d。除空白组给予纯水外，其余各组于给药后8h灌胃给予氧嗪酸钾(1.5g/kg)+腺嘌呤(0.05g/kg)溶液建立高尿酸血症模型。给药第12d，于大鼠左踝关节腔内注射尿酸钠溶液诱导急性痛风性关节炎模型。
2、炎症评估
2.1关节肿胀度
注射MSU晶体0、6、12、24、48h，用缚线法测量大鼠右侧后肢踝关节同一部位的周长，计算肿胀率，肿胀率(％)＝(致炎后踝关节周长-致炎前踝关节周长)/致炎前踝关节周长×100％，式I。
应用SPSS 19.0进行统计学处理。数值用
Figure BDA0002995122940000051
表示。两两比较，符合正态性时采用Independent-Samples T检验；多组间比较先进行方差齐和正态性比较，方差齐且符合正态性时采用LSD-t或Dunnett-t检验，不符合正态性时采用Nonparametric T检验，符合正态性但方差不齐时采用Dunnett’s T3或Tamhane’s T2检验。P≤0.05表示有统计学意义，P≤0.01表示所检验的差别有非常显著性意义，下同。
结果如表1和图1所示，注射MSU晶体后6h，大鼠踝关节出现明显的红肿和畸形，模型组踝关节红肿程度大于药物处理组。缚线法测量不同时间点大鼠踝关节周长并计算关节肿胀度，与对照组相比，注射MSU后大鼠右脚踝关节肿胀度明显增加(6、12、24和48h分别增加16.5％、20.7％、16.5％和10.5％；p<0.01)。各药物处理对踝关节肿胀具有不同程度的抑制作用，TFLA在注射MSU初期就展现出较好的抑制作用。
表1关节肿胀度
Figure BDA0002995122940000061
#p≤0.05,##p≤0.01与正常组相比；*p≤0.05,**p≤0.01与模型组相比；下同
2.2血清炎症指标的检测
Elisa法检测血清中肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factorα，TNF-α)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)。
结果如表2和图2所示，TFLA治疗组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平均不同程度的低于模型组，其中高剂量组(18g/kg)的IL-1β水平与模型对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)。由于TFLA降低了血清炎症因子水平，说明TFLA具有抗炎作用。
表2血清炎症相关指标
Figure BDA0002995122940000062
Figure BDA0002995122940000071
2.3大鼠踝关节滑膜形态学观察
手术切除右踝关节，4％多聚甲醛溶液固定，20％的乙二胺四乙酸溶液脱钙，乙醇梯度脱水，石蜡包埋，切片后，行HE染色，显微镜下观察关节滑膜组织炎性细胞浸润、水肿、滑膜增生、血管充血等情况。
结果如图3所示，模型对照组大鼠踝关节滑膜可见明显的病理改变，表现为滑膜增生、水肿、血管充血、毛细血管增生、炎细胞增多等。TFLA治疗可剂量依赖性地改善滑膜增生，减少炎症细胞向滑膜的浸润。说明TFLA可减轻关节损伤。
2.4免疫组织化学法检测大鼠踝关节滑膜组织TLR2、TLR4、NF-κB表达量
另取上述组织切片，采用SABC方法，进行免疫组化染色。分别以抗NLRP3、TLR2、TLR4、NF-κB为一抗，其他操作按照试剂盒(即用型SABC-POD试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司)说明书进行。用新配的DAB显色，显微镜下控制染色程度。用PBS替代一抗做阴性对照。每张切片随机选取5个不同视野，利用Image-Pro plus 6.0图像分析软件测量AOI面积(area ofAOI)及阳性染色积分光密度(integrated optical density,IOD)，计算平均光密度(IOD/AOI)评价区域染色程度。
结果如表3和图4所示，与正常对照组比较，模型组大鼠踝关节滑膜组织中TLR2，TLR4和NF-κB阳性染色区域IOD/AOI值显著增加(p<0.01)。与模型(MSU)组相比，所有剂量的TFLA均显着降低TLR2，TLR4和NF-κB的IOD/AOI值(分别为p<0.01)，其中，TLR2，TLR4的表达IOD/AOI值呈现出良好的剂量依懒性。因此，可以推断，TFLA可能通过调节TLR/NF-κB通路参与急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用。
表3 NF-κB、TLR2、TLR4的蛋白表达水平
Figure BDA0002995122940000072
Figure BDA0002995122940000081
2.5RT-qPCR检测大鼠踝关节滑膜组织TLR2、TLR4、NF-κB基因表达水平
利用TRNzol Universal试剂(购自TIANGEN公司)常规提取滑膜组织总RNA，infinite TECAN酶标仪(型号：M200PRO)测定OD260/OD280，若为1.8～2.0则保存备用。取1μg总RNA合成cDNA(Fast Reverse TranscriptionMaster Mix购自BIOTECHINC公司)；反应体系先在42℃下5min去除残留DNA，然后在42℃下15min进行逆转录，95℃下5min灭活逆转录酶。取1.2μl逆转录反应产物进行实时荧光PCR反应，按照AB HS GreenqPCRMix试剂盒(购自BIOTECH INC公司)，采用两步法热循环，反应条件为：95℃×3min预变性1循环，95℃×10s变性、60℃×30s退火，重复40循环；所有样品加样于96孔PCR板中，每一样品重复3孔，所有反应在Roche LightCycler Sequence Detection System中进行。引物序列见表4，相对定量的方法采用比较Ct法，以GAPDH为内参，采用△Ct(Ct目的-Ct内参)法进行相对定量分析，以2-△△Ct作为目的RNA的相对表达量。
表4 RT-PCR引物信息
Figure BDA0002995122940000082
结果如表5和图5所示，与正常对照组相比，模型组TLR2，TLR4和NF-κB mRNA表达显著增加(p<0.01)；与模型组相比，TFLA组TLR2，TLR4和NF-κB mRNA表达显著降低(p<0.01)，其中TLR2和NF-κB mRNA表达的降低具有剂量依懒性。证实TFLA的抗炎作用与TLR/NF-κB通路有关。
表5NF-κB、TLR2、TLR4基因表达水平
Figure BDA0002995122940000091
3、尿酸相关指标评估
3.1血清尿酸、黄嘌呤氧化酶检测
末次给药后1h，大鼠腹主动脉取血，离心10min(3000r/min)，取上清液，按照试剂盒(尿酸测试盒，黄嘌呤氧化酶测试盒，南京建成生物工程研究所)说明书检测血清尿酸水平及黄嘌呤氧化酶活性。
结果如表6和图6所示，与空白组比较，模型组大鼠血清UA水平显著升高(p<0.05)；与模型组比较，阳性组及TFLA高、中剂量组可显著降低大鼠血清UA水平(p<0.01)(图6中A)；与正常对照组比较，模型组大鼠血清XOD活性显著升高(p<0.05)，与模型组比较，阳性组组显著降低大鼠血清XOD活性(p<0.01)，SLAB各剂量组大鼠血清XOD活性均在不同程度上显示出降低趋势(图6中B)。
表6血清尿酸及次黄嘌呤氧化酶活性
Figure BDA0002995122940000092
Figure BDA0002995122940000101
3.2肾功能检测
血样4℃静置1h，离心(3000rpm，15min)，分离血清，用迈瑞全自动分析仪测定血清总胆固醇(T-CHO)、肌酐(Cre)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)和血尿素氮(BUN)。
结果如表7所示，腹腔注射PO+腺嘌呤使血清T-CHO、Cre和TG水平升高，而给予秋水仙碱和TFLA后血清T-CHO和Cre水平降低。与对照组相比，TFLA组的ALB和BUN水平无明显变化，但TFLA组的ALB和BUN水平明显高于对照组，这可能与其药理作用的放大有关。
表7肾功能检测结果
Figure BDA0002995122940000102
3.3westernblot检测大鼠肾脏组织OAT3、GLUT9、URAT1蛋白表达
消化收集经上述药物处理的细胞，按照蛋白质抽提试剂盒说明提取蛋白，所得提取物以BCA法测定蛋白浓度后储存于-80℃备用。取适量蛋白样品，经10％SDS-PAGE电泳后，按照免疫印迹方法将胶内蛋白转移至PVDF膜上，用5％脱脂奶粉溶液4℃封闭过夜，次日分别加入OAT3、GLUT9、URAT1及GADPH抗体室温孵育4h，TBST洗膜3次，加入相应的辣根过氧化物酶标记的二抗，室温孵育1h，TBST洗膜3次后即可按照ECL的方法依次加入发光底物、曝光、显影定影，并用Image软件分析条带。
结果如表8和图7所示，与对照组相比，模型组大鼠肾组织中OAT3蛋白表达明显降低，而TFLA各剂量组肾组织中OAT3蛋白表达均升高，其中高剂量组与模型组比较有显著性差异。模型组GLUT9、URAT1蛋白表达水平明显高于对照组(p<0.01，p<0.05)，TFLA高剂量组GLUT9、URAT1蛋白表达水平明显低于模型组(p<0.01)。
表8 OAT3、GLUT9和URAT1的蛋白表达水平
Figure BDA0002995122940000111
3.4RT-qPCR检测大鼠肾脏组织OAT3、GLUT9、URAT1基因表达水平
利用TRNzol Universal试剂(购自TIANGEN公司)常规提取肾脏组织总RNA，infinite TECAN酶标仪(型号：M200PRO)测定OD260/OD280，若为1.8～2.0则保存备用。取1μg总RNA合成cDNA(Fast Reverse Transcription Master Mix购自BIOTECHINC公司)；反应体系先在42℃下5min去除残留DNA，然后在42℃下15min进行逆转录，95℃下5min灭活逆转录酶。取1.2μl逆转录反应产物进行实时荧光PCR反应，按照AB HS Green qPCR Mix试剂盒(购自BIOTECH INC公司)，采用两步法热循环，反应条件为：95℃×3min预变性1循环，95℃×10s变性、60℃×30s退火，重复40循环；所有样品加样于96孔PCR板中，每一样品重复3孔，所有反应在Roche LightCycler Sequence Detection System中进行。引物序列见表9，相对定量的方法采用比较Ct法，以GAPDH为内参，采用△Ct(Ct目的-Ct内参)法进行相对定量分析，以2-△△Ct作为目的RNA的相对表达量。
表9 RT-PCR引物信息
Figure BDA0002995122940000112
Figure BDA0002995122940000121
结果如表10和图8所示，与对照组相比，模型组大鼠肾组织中OAT3mRNA的表达明显降低，而GLUT9和URAT1 mRNA的表达明显增加。相反，TFLA各剂量组均可增加大鼠肾组织OAT3 mRNA的表达，降低GLUT9和URAT1 mRNA的表达。上述结果进一步证实了TFLA通过调节尿酸转运蛋白而起到降低尿酸的作用。
表10 OAT3、GLUT9和URAT1的基因表达水平
Figure BDA0002995122940000122
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 广西国际壮医医院
<120> 一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物、壮药颗粒及其制备方法
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 1
gcaaacctgg gaatacttca tgtgactaag 30
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 2
ataggcaagg tcagaatgca ccagaagtcc 30
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 3
gtacgcagtg agtggtgcaa gt 22
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 4
ggccgcgtca ttgttctc 18
<210> 5
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 5
aatccctgca tagaggtact tcctaat 27
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 6
ctcagatcta ggttcttggt tgaataag 28
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 7
agtgccagcc tcgtctcata 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 8
accagcttcc cattctcagc 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 9
aacggcaaga aggaggaagg 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 10
acacgacgaa ggatggacac 20
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 11
ttctacacca acagcatctt cg 22
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 12
aagccaccaa tgaggagagg 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 13
ctgcctctgc tggtgtatgg 20
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 14
ctggatgtct tggatggtgt ca 22

Claims (9)

1.一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药组合物，其特征在于，所述壮药组合物由以下重量份的原料药制成：肿节风30份、虎杖20份、忍冬藤20份、车前草15份、粉萆薢15份、徐长卿12份、透骨草12份和甘草6份。
2.权利要求1所述壮药组合物的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：将所述壮药组合物的原料药混合后与水混合，浸泡30min后煎煮3次，过滤后将滤液浓缩为相对密度为1.25～1.30的浸膏，减压干燥后粉碎，得所述壮药组合物的干膏粉；
所述原料药的总质量与水的质量比为1:12。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，每次所述煎煮的时间为40min。
4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述浸膏的相对密度为60℃时的相对密度。
5.权利要求1所述壮药组合物或权利要求2～4任一项所述制备方法制备得到的壮药组合物在制备对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药颗粒中的应用。
6.一种对急性痛风性关节炎有治疗作用的壮药颗粒，其特征在于，所述壮药颗粒以权利要求1所述壮药组合物或权利要求2～4任一项所述制备方法制备得到的壮药组合物为有效成分，还包括乙醇和糊精。
7.权利要求6所述壮药颗粒的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：将所述壮药组合物的干膏粉与乙醇和糊精混合，得所述壮药颗粒。
8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述干膏粉的粒径为24目。
9.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述干膏粉、乙醇和糊精的质量比为1:1:0.25。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114088820A (zh) * 2021-05-26 2022-02-25 广西国际壮医医院 一种治疗痛风药物的指纹图谱的建立方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102240372A (zh) * 2011-06-21 2011-11-16 武汉市中医医院 一种治疗痛风性关节炎和高尿酸血症的药物及制备方法
CN109820943A (zh) * 2019-03-25 2019-05-31 广西国际壮医医院 一种治疗痛风的壮药制剂及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102240372A (zh) * 2011-06-21 2011-11-16 武汉市中医医院 一种治疗痛风性关节炎和高尿酸血症的药物及制备方法
CN109820943A (zh) * 2019-03-25 2019-05-31 广西国际壮医医院 一种治疗痛风的壮药制剂及其制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114088820A (zh) * 2021-05-26 2022-02-25 广西国际壮医医院 一种治疗痛风药物的指纹图谱的建立方法
CN114088820B (zh) * 2021-05-26 2023-06-16 广西国际壮医医院 一种治疗痛风药物的指纹图谱的建立方法

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