CN112813060B - 一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种磁性纳米核‑壳结构载蛋白酶的光酶催化剂及其制备方法和应用。该催化剂光酶催化剂以醛基改性氨基化核‑壳结构Fe3O4@CeO2为基底，以蛋白酶为活性成分；所述基底以纳米Fe3O4为核，醛基改性氨基化CeO2为壳。其制备方法包括如下步骤：先以硫酸亚铁和氯化铁合成纳米Fe3O4核，再与硝酸铈或氯化铈反应得到核‑壳结构Fe3O4@CeO2基底，用3‑氨基丙基‑三乙氧基硅烷和戊二醛修饰，得到醛基改性氨基化核‑壳结构Fe3O4@CeO2基底，再加入蛋白酶，冷冻干燥获得磁性核‑壳结构载蛋白酶光酶催化剂。该光酶催化剂用5～100W白炽灯光照10～30min，可显著提高底物蛋白水解为多肽的产率。

Description

一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂及其制备方 法和应用
技术领域
本发明属于光酶催化剂领域，具体涉及一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂及其制备方法和应用。
背景技术
肽分子量比蛋白质小，而其又是构成蛋白质的部分。活性肽对机体功能有积极影响并可能最终影响健康。在蛋白质片段中活性肽的生物活性具有潜伏性，直到它们从蛋白质中释放出来后，可以具有类激素活性的生理调节功能。生物活性肽表现出特定的生物功能属性，例如具有抗癌特性的Lunasin；某些肽具有多功能特性，如酪蛋白磷酸肽、乳汁衍生肽等具有矿物质结合以及细胞调节作用，并抑制癌细胞生长或刺激具有免疫活性的细胞和新生儿肠道细胞；活性肽还会影响主要的人体系统，例如心血管、消化、神经和免疫系统。因此活性肽以其低分子量、易吸收、多活性和相对高稳定性的特点引起了人们的广泛关注。
活性肽通常通过蛋白酶酶解、酸处理、碱处理或微生物发酵等途径得到。其中蛋白酶具有选择性的可以将蛋白质中特定的肽键断裂，得到具有特定生物功能属性的活性多肽。但游离的蛋白酶通常易失活，稳定性差，反应过程中蛋白酶不能回收利用造成浪费；而将蛋白酶固定化后可提高蛋白酶稳定性、活性。其中将蛋白酶固定到磁性载体上，通过外源磁场可以简单、快速地将蛋白酶与反应物分离出来。中国专利CN102108353A公开了一种磁性纳米颗粒固定化碱性蛋白酶，可以实现生物催化反应后的快速回收，但磁性材料或其他固定化材料的添加会减弱酶的活性。
以磁性纳米颗粒作为核结构，光催化剂作为壳，在表面修饰特定的基团作为蛋白酶的固定化基质材料，可以实现光活化固定化蛋白酶，使其催化活性提高并易于分离，从而形成一种新型光酶催化剂。此类研究未见报道。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂。
本发明的另一目的在于提供所述磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供所述磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂在蛋白多肽制备的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现。
一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂，所述光酶催化剂以醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2为基底，以蛋白酶为活性成分，基底与蛋白酶质量比为100:(1～10)；所述基底以纳米Fe3O4为核，醛基改性氨基化CeO2为壳，核壳质量比1:(10～100)。
优选的，所述的蛋白酶为碱性蛋白酶、风味酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或一种以上。
以上所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将纳米Fe3O4分散于乙醇溶液中，加入硝酸铈或氯化铈，再加入浓氨水，反应获得黑色沉淀，干燥、焙烧得到核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；
(2)将所述核-壳结构Fe3O4@CeO2基底分散于乙醇溶液中，超声，再加入3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，反应后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底分散于磷酸缓冲液中，加入戊二醛水溶液，搅拌，离心，分离沉淀，冷冻干燥获得醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；
(3)将所述醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底分散于磷酸缓冲溶液中，加入蛋白酶，搅拌，离心，分离固体，冷冻干燥获得磁性核-壳结构载蛋白酶光酶催化剂。
优选的，步骤(1)中，将纳米Fe3O4以质量体积比1g:1～5mL分散于乙醇溶液中，再加入10～100倍纳米Fe3O4质量的硝酸铈或氯化铈、1～4倍纳米Fe3O4质量的浓氨水；在40～50℃下反应12～24h获得黑色沉淀，30～60℃干燥8～12h；再以2～10℃/min的升温速率在400～450℃下焙烧2～4h；所述乙醇溶液的体积浓度为60～80％。
优选的，步骤(2)中，将核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1g:1～10mL分散于乙醇溶液中，在频率20～40KHz、功率50～100W超声0.5～1h，再加入1～10倍Fe3O4@CeO2基底质量的3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，50～60℃反应5～6h后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以1g:10-100mL分散于磷酸缓冲液中，加入氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底质量0.2～1倍的戊二醛水溶液，室温下50～500rpm搅拌2～4h，8000～20000rpm离心15～30min；所述乙醇溶液的体积浓度为60～80％；所述磷酸缓冲液的pH＝6.5～8；所述戊二醛水溶液的质量浓度为15～25％。
优选的，步骤(3)中，将醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1g:1～10mL分散于磷酸缓冲溶液中，加入醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底1～10％质量的蛋白酶，0～4℃50～500rpm搅拌4～8h,8000～20000rpm离心15～30min；所述磷酸缓冲溶液的pH＝6.5～8。
优选的，步骤(1)所述纳米Fe3O4的制备包括以下步骤：
称取摩尔比为1:(1～3)的硫酸亚铁和氯化铁，在氮气保护条件下配置成铁离子浓度为0.1～0.5M的溶液，在频率20～40KHz，功率50～100W超声0.5～1h；加热到80～90℃后，以0.25～0.5倍溶液中铁的质量的浓氨水加入到混合物中，500-1500rpm搅拌1～3h后8000～20000rpm离心15～30min，分离沉淀，获得纳米Fe3O4核。
以上所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂在蛋白水解为多肽中的应用。
优选的，所述的应用包括以下步骤：
将磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂加入底物蛋白磷酸缓冲液中，5～100W白炽灯光照10～30min，可将底物蛋白水解为多肽；所述底物蛋白磷酸缓冲液的质量体积比为1g:1～10mL；所述底物蛋白磷酸缓冲液的pH＝7～8；所述磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂的加入量为底物蛋白质量的1～10％。
本发明的原理：通过醛基和氨基对磁性纳米核-壳结构的Fe3O4@CeO2基质进行表面修饰，再通过共价键方式将蛋白酶固定到基质表面，得到具有磁性的核-壳结构Fe3O4@CeO2载蛋白酶的光催化剂。以CeO2作为壳，在可见光的条件下，CeO2能吸收可见光产生电子空穴对(h+,e-)，光激发电子迁移并被修饰的CeO2表面吸附的电子供体基团(如NH2 +)、电子受体基团(COO-)捕获，可通过光激发电子实现强化电子转移来提高蛋白酶的催化活性。因此，可通过光激发电子实现强化电子转移协同作用来提高蛋白酶的催化活性。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明对蛋白酶共价固定后，相比于非共价键，在加热和高速搅拌条件下，蛋白酶不易从载体上因键断裂而脱落，所以其稳定性提高，为后续的均相反应奠定基础。
(2)本发明以磁性Fe3O4纳米粒子为核，在外磁场的作用下可以方便、快速地将蛋白酶分离。
(3)本发明以CeO2为壳，将光催化与酶催化结合，两者协同作用不仅不会降低酶活性，还可提高其催化活性。
附图说明
图1a为Fe3O4纳米颗粒的透射电镜图；
图1b为Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶的粒径分布图；
图1c为核-壳结构的Fe3O4@CeO2基质；
图1d为Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶的透射电镜图；
图2为Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶无光照、游离蛋白酶、光照下的Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶和Fe3O4@CeO2水解杏仁蛋白水解度图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)称取摩尔比为1:1的硫酸亚铁和氯化铁，在氮气保护条件下配置成铁离子浓度为0.1M的溶液，在频率20KHz，功率100W超声0.5h；加热到80℃后，以0.25倍溶液中铁的质量比的浓氨水加入到混合物中，1500rpm搅拌1h后8000rpm离心30min，分离沉淀，获得纳米Fe3O4核。将Fe3O4核纳米颗粒以质量体积比1:1g/mL分散于乙醇溶液(80％体积分数)中，加入10倍Fe3O4核纳米颗粒质量的硝酸铈、1倍Fe3O4核纳米颗粒质量的浓氨水；在40℃下反应24h获得黑色沉淀，30℃干燥12h；再以2℃/min的升温速率在400℃下焙烧2h得到核-壳结构Fe3O4@CeO2基底。
(2)核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1:1g/mL分散于乙醇溶液(80％体积分数)中，频率20KHz，功率100W超声0.5h，加入1倍Fe3O4@CeO2基底质量的3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，50℃反应6h后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以1:10g/mL分散于磷酸缓冲液(pH＝8)中，加入氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底质量0.2倍的戊二醛水溶液(质量分数25％)，室温下50rpm搅拌4h，8000rpm离心30min，分离沉淀，冷冻干燥获得醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底。
(3)醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1:1g/mL分散于磷酸缓冲溶液(pH＝8)中，加入醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底1％质量的碱性蛋白酶，0℃50rpm搅拌8h,8000rpm离心30min，分离固体，冷冻干燥获得磁性核-壳结构载蛋白酶光酶催化剂。
(4)上述光酶催化剂1g，杏仁蛋白100g，加入100mL磷酸缓冲液(pH＝8)中，5W白炽灯光照30min，可获得杏仁多肽。
实施例2
(1)称取摩尔比为1:3的硫酸亚铁和氯化铁，在氮气保护条件下配置成铁离子浓度为0.5M的溶液，在频率40KHz，功率50W超声1h；加热到90℃后，以0.5倍溶液中铁的质量比的浓氨水加入到混合物中，500rpm搅拌3h后20000rpm离心15min，分离沉淀，获得纳米Fe3O4核。将Fe3O4核纳米颗粒以质量体积比1:5(g/mL)分散于乙醇溶液(60％体积分数)中，加入100倍Fe3O4核纳米颗粒质量的氯化铈、4倍Fe3O4核纳米颗粒质量的浓氨水；在50℃下反应12h获得黑色沉淀，60℃干燥8h；再以10℃/min的升温速率在450℃下焙烧2h得到核-壳结构Fe3O4@CeO2基底。
(2)核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1:10(g/mL)分散于乙醇溶液(60％体积分数)中，频率40KHz，功率50W超声1h，加入10倍Fe3O4@CeO2基底质量的3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，60℃反应5h后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以1:100(g/mL)分散于磷酸缓冲液(pH＝6.5)中，加入氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底质量1倍的戊二醛水溶液(质量分数15％)，室温下500rpm搅拌2h，20000rpm离心15min，分离沉淀，冷冻干燥获得醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底。
(3)醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1:10(g/mL)分散于磷酸缓冲溶液(pH＝6.5)中，加入醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底5％质量的风味酶和5％质量的胰蛋白酶，4℃500rpm搅拌4h,20000rpm离心15min，分离固体，冷冻干燥获得磁性核-壳结构载蛋白酶光酶催化剂。
(4)上述光酶催化剂1g，板栗蛋白10g，加入10mL磷酸缓冲液(pH＝7)中，100W白炽灯光照10min，可获得板栗多肽。板栗蛋白的水解度为16.5％。
实施例3
(1)称取摩尔比为1:2的硫酸亚铁和氯化铁，在氮气保护条件下配置成铁离子浓度为0.3M的溶液，在频率30KHz，功率80W超声0.5h；加热到85℃后，以0.4倍溶液中铁的质量比的浓氨水加入到混合物中，1000rpm搅拌2h后10000rpm离心20min，分离沉淀，获得纳米Fe3O4核。将Fe3O4核纳米颗粒以质量体积比1:3(g/mL)分散于乙醇溶液(70％体积分数)中，加入50倍Fe3O4核纳米颗粒质量的硝酸铈、3倍Fe3O4核纳米颗粒质量的浓氨水；在45℃下反应16h获得黑色沉淀，50℃干燥10h；再以5℃/min的升温速率在450℃下焙烧3h得到核-壳结构Fe3O4@CeO2基底。
(2)核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1:5(g/mL)分散于乙醇溶液(70％体积分数)中，频率30KHz，功率80W超声0.5h，加入5倍Fe3O4@CeO2基底质量的3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，55℃反应5.5h后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以1:50(g/mL)分散于磷酸缓冲液(pH＝7)中，加入氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底质量0.5倍的戊二醛水溶液(质量分数20％)，室温下200rpm搅拌3h，10000rpm离心20min，分离沉淀，冷冻干燥获得醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底。
(3)醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1:5(g/mL)分散于磷酸缓冲溶液(pH＝7)中，加入醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底3％质量的中性蛋白酶和4％质量的木瓜蛋白酶，2℃100rpm搅拌5h,10000rpm离心20min，分离固体，冷冻干燥获得磁性核-壳结构载蛋白酶光酶催化剂。
(4)上述光酶催化剂1g，木瓜蛋白50g，加入50mL磷酸缓冲液(pH＝7)中，50W白炽灯光照20min，可获得木瓜多肽。木瓜蛋白的水解度为19.4％。
测试1
实施例1制得的磁性核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂的形貌观察。
方法：将实验例1-3制得的磁性核-壳结构Fe3O4@CeO2载蛋白酶光催化剂分散于水中，在马尔文粒度仪上测定其粒径分布。将其置入透射电镜观察其形貌。
结果：实验结果见图1。图1a为Fe3O4纳米颗粒的透射电镜图，图1b为Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶的粒径分布图，平均粒径为150nm；图1c为核-壳结构的Fe3O4@CeO2基质，图1d为Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶的透射电镜图。可以看到其粒径较小且均匀，有明显的两层结构，表明已经成功合成了具有核壳结构的Fe3O4@CeO2载蛋白酶的光酶催化剂。
测试2
实施例1制得的磁性核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂在杏仁蛋白的催化降解活性。
方法：称取杏仁蛋白1g，加入10mL磷酸缓冲液(pH＝8)中，加入0.04g实施例1制得的磁性核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂,25W白炽灯光照10min，10000rpm离心20min；上清液用茚三酮试剂测定氨基酸含量并计算水解度。
水解度(％)＝C上清液/CHCl×100
式中，C上清液为上清液中氨基酸浓度，CHCl代表的是相同的杏仁蛋白在6MHCl水解24h氨基酸浓度。
结果：如图2所示，图中自左向右1～4列分别是Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶无光照、游离蛋白酶、光照下的Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶和纯载体Fe3O4@CeO2水解杏仁蛋白水解度。可以发现在固定蛋白酶(第1条柱)后，比游离蛋白酶(第2条柱)催化杏仁蛋白的水解度明显提高了，光照条件下Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶(第3条柱)的活性又比未加光照的Fe3O4@CeO2载碱性蛋白酶(第1条柱)活性高，这就说明实施例1制得的磁性核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂具有蛋白酶与光催化的协同作用效果。
对比例1(加大蛋白酶用量)
本对比例与实施例1不同的是：步骤(3)中碱性蛋白酶用量占基底的20％。按测试2方法测定其对杏仁蛋白的水解度。
结果其催化生成产物杏仁多肽的水解度为13.5％，其产率降低是因为碱性蛋白酶用量过大，导致不能被完全固定，形成过多的游离蛋白酶。
对比例2(降低核壳结构中壳的比例)
本对比例与实施例1不同的是：步骤(1)中硝酸铈的质量为纳米Fe3O4核质量5倍。按测试2方法测定其对杏仁蛋白的水解度。
结果其催化生成产物杏仁多肽的水解度为14.3％，其产率降低是因为核壳结构中壳比例过低，导致光催化活性低，从而不能有效激活蛋白酶的作用。
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂，其特征在于，所述光酶催化剂以醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@ CeO2为基底，以蛋白酶为活性成分；所述基底以纳米Fe3O4为核，醛基改性氨基化CeO2为壳；所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将纳米Fe3O4分散于乙醇溶液中，加入硝酸铈或氯化铈，再加入浓氨水，反应获得黑色沉淀，干燥、焙烧得到核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；
（2）将所述核-壳结构Fe3O4@CeO2基底分散于乙醇溶液中，超声，再加入3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，反应后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底分散于磷酸缓冲液中，加入戊二醛水溶液，搅拌，离心，分离沉淀，冷冻干燥获得醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；
（3）将所述醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底分散于磷酸缓冲溶液中，加入蛋白酶，搅拌，离心，分离固体，冷冻干燥获得磁性核-壳结构载蛋白酶光酶催化剂；
所述基底与蛋白酶的质量比为100:（1~10）；所述基底的核壳质量比为1:（10~100）；
所述的蛋白酶为碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或一种以上。
2.根据权利要求1所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂，其特征在于，步骤（1）中，将纳米Fe3O4以质量体积比1 g:1~5mL分散于乙醇溶液中，再加入10~100倍纳米Fe3O4质量的硝酸铈或氯化铈、1~4倍纳米Fe3O4质量的浓氨水；在40~50℃下反应12~24h获得黑色沉淀，30~60℃干燥8~12h；再以2~10℃/min的升温速率在400~450℃下焙烧2~4h；所述乙醇溶液的体积浓度为60~80%。
3.根据权利要求2所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂，其特征在于，步骤（2）中，将核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1 g:1~10mL分散于乙醇溶液中，在频率20~40KHz、功率50~100W超声0.5~1h，再加入1~10倍Fe3O4@CeO2基底质量的3-氨基丙基-三乙氧基硅烷，50~60℃反应5~6h后过滤得到氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底；将氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以1 g:10-100mL分散于磷酸缓冲液中，加入氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底质量0.2~1倍的戊二醛水溶液，室温下50~500rpm搅拌2~4h，8000~20000rpm离心15~30min；所述乙醇溶液的体积浓度为60~80%；所述磷酸缓冲液的pH=6.5~8；所述戊二醛水溶液的质量浓度为15~25%。
4.根据权利要求3所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂，其特征在于，步骤（3）中，将醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底以质量体积比1 g:1~10mL分散于磷酸缓冲溶液中，加入醛基改性氨基化核-壳结构Fe3O4@CeO2基底1~10%质量的蛋白酶，0~4℃50~500rpm搅拌4~8h, 8000~20000rpm离心15~30min；所述磷酸缓冲溶液的pH=6.5~8。
5.根据权利要求4所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂，其特征在于，步骤（1）所述纳米Fe3O4的制备包括以下步骤：
称取摩尔比为1:（1~3）的硫酸亚铁和氯化铁，在氮气保护条件下配置成铁离子浓度为0.1~0.5M的溶液，在频率20~40KHz，功率50~100W超声0.5~1h；加热到80~90℃后，以0.25~0.5倍溶液中铁的质量的浓氨水加入到混合物中，500-1500rpm搅拌1~3h后8000~20000rpm离心15~30min，分离沉淀，获得纳米Fe3O4核。
6.权利要求1-5任一项所述的一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂在蛋白水解为多肽中的应用，其特征在于：将磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂加入底物蛋白磷酸缓冲液中，5~100W白炽灯光照10~30min。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：
所述底物蛋白水解为多肽；所述底物蛋白磷酸缓冲液的质量体积比为1 g:1~10mL；所述底物蛋白磷酸缓冲液的pH=7~8；所述磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂的加入量为底物蛋白质量的1~10%。
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