CN112779171B - 一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法 - Google Patents
一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112779171B CN112779171B CN202110034771.2A CN202110034771A CN112779171B CN 112779171 B CN112779171 B CN 112779171B CN 202110034771 A CN202110034771 A CN 202110034771A CN 112779171 B CN112779171 B CN 112779171B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- saccharomyces cerevisiae
- survival rate
- drying
- vat
- direct
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 100
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 title claims abstract description 100
- 238000001035 drying Methods 0.000 title claims abstract description 97
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 title claims abstract description 66
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 69
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 67
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 41
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 38
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 229940026314 red yeast rice Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000034994 death Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims abstract description 12
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000019991 rice wine Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000010802 sludge Substances 0.000 claims description 32
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 18
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 12
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 12
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 8
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 8
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 8
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 8
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 8
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 claims description 7
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 claims description 7
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 claims description 7
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 claims description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims description 4
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 2
- 238000009461 vacuum packaging Methods 0.000 claims description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 12
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 abstract description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 238000011160 research Methods 0.000 description 11
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 9
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 9
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 7
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 7
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 241000228347 Monascus <ascomycete fungus> Species 0.000 description 6
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 238000007602 hot air drying Methods 0.000 description 6
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008642 heat stress Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 235000007189 Oryza longistaminata Nutrition 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229940057059 monascus purpureus Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010057040 Temperature intolerance Diseases 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008543 heat sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物技术领域，更具体地涉及一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法。本发明筛选酿酒酵母适宜抗热保护剂组合为红曲糟多肽、酪蛋白，实现干制过程菌细胞抗热损伤保护；通过绘制不同温度等温干燥曲线，计算菌存活率与含水量的相关性，确定菌剂干制过程快速死亡的水分临界值，通过调控干燥条件将菌剂含水量控制在菌干制过程快速死亡临界值与国家标准限定值(5.5％)之间，可使其存活率维持在较高水平且含水量达到国标要求。本发明提供的提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂可使能够使热干燥过程酿酒酵母菌剂的存活率提高1.5倍以上，制备的菌剂产品生物量达1×1010cfu/g以上，为酿酒酵母的产业化应用提供坚实的技术支持，并有助于耐热性低酿酒酵母实现推广应用，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，更具体地涉及一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法。
背景技术
酿酒酵母是影响酿造质量的重要菌株，用于产业化生产需将鲜酵母干燥脱水制备成直投式菌剂，可使酵母菌能在常温下长期贮存而不失去活性，同时也便于运输和规范使用。目前，常用的菌剂干燥方法有冷冻干燥、喷雾干燥、沸腾炉干燥等。冷冻干燥技术存在菌体存活率高的优点，但其生产成本较高、干燥时间较长，不适宜产业化应用。喷雾干燥、沸腾炉干燥等热干燥技术存在高效、低耗能和可连续生产的特点，是产业化生产的常用方式。但干燥过程中高温和结合水失水会对微生物产生破坏作用，降低菌体活力，影响菌剂在生产上的使用效果。首先，细胞内多种生物组成物质具有热敏性，如DNA、RNA、蛋白质(包括酶类)、细胞膜和核糖体，关键组分被高温破坏会直接导致细胞死亡。其次，申请人前期研究结果表明，在热风干燥过程中不可避免的产生由结合水脱水引起的细胞失活。因此，如何在高温干燥时延缓结合水失水、实现抗热保护是酿酒酵母菌剂制备的核心技术难点。
针对以上技术难点，国内外通常采用以下方式进行研究：(1)对于大部分微生物来说，添加热保护剂能够改变其在热风干燥过程中的物理、化学环境，降低热风干燥对细胞的伤害，尽可能的保持微生物原有的生物活性和生理生化特性。不同菌种因耐热性存在差异，适宜的保护剂类型也存在差异。因此，很有必要针对酿酒酵母筛选其适宜保护剂组合。(2)不同菌种不同保护剂组合其适宜干燥工艺也存在差异。目前研究多集中于干燥温度、时间等工艺优化提高菌存活率，尚未见菌热干燥过程存活率与水分含量变化相关性的研究报道。申请人前期研究结果表明，通过控制热干燥过程菌剂含水量实现高活力菌剂的制备，是提高菌存活率的有效方式之一，目前鲜有见相关研究报道。
申请人前期发明了“一种酵母高密度增殖酒糟多肽糖蜜培养剂及制备方法”(申请号201910961088.6)，可通过高密度培养技术使酿酒酵母的菌量达到1×108cfu/mL以上。本项目进一步通过筛选适宜热保护剂，通过降低干燥过程细胞结合水逃逸速率，减缓细胞膜热胁迫损伤，提高菌存活率；提出菌剂干制过程快速死亡的水分临界值，通过调控干燥条件将菌剂含水量控制在菌干制过程快速死亡临界值与国家标准限定值(5.5％)之间，使其存活率维持在较高水平且含水量达到国标要求；研发出提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备技术，为酿酒酵母的产业化应用提供坚实的技术支持，并有助于耐热性低酿酒酵母实现推广应用，具有广阔的应用前景。
发明内容
鉴于背景技术存在的上述技术问题，需要提供一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及其制备方法，所述提高热干燥过程存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法能够使热干燥过程酿酒酵母菌剂的存活率提高1.5倍以上，菌剂生物量得到大大提升。
为实现上述目的，在本发明的第一方面，发明人提供了一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，包括以下步骤：
步骤一：将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；
步骤二：将所述菌泥沉淀用0℃冰水混合液悬浮，调节pH值为6.4-6.6，然后再次离心；
步骤三：重复步骤二，直至上清液中可溶性固形物的含量为0％，得到酿酒酵母菌悬液；
步骤四：将所述酿酒酵母菌悬液固液分离，得到酿酒酵母菌泥；
步骤五：往所述酿酒酵母菌泥中添加抗热保护剂，混合均匀，造粒，得到直投式菌颗粒；
步骤六：将所述直投式菌颗粒进行干燥，控制其含水量在菌热干燥过程快速死亡临界值至5.5％之间，得到直投式菌剂；
步骤七：将所述直投式菌剂过200目筛，真空包装。
本发明步骤一高密度酿酒酵母的增殖培养采用专利申请201910961088.6中所述方法。步骤二中将所述菌泥沉淀用0℃冰水混合液悬浮可以降低酵母在离心和固液分离过程中的死亡率。步骤四中的固液分离为采用压榨机压榨，当然，本领域技术人员所熟知的其他菌种培养过程中常见的固液分离方法也适用。在本发明中创新性地采用了包含红曲糟多肽的抗热保护剂。步骤六中干燥采用的设备是沸腾炉。
优选地，以质量百分比计，所述抗热保护剂包含红曲糟多肽0.1-3.0％、酪蛋白0.1-1.0％。通过添加抗热保护剂，可降低干燥过程细胞结合水逃逸速率，减缓细胞膜热胁迫损伤，从而提高菌存活率。
优选地，所述红曲糟多肽的制备工艺包括如下步骤：
取新鲜红曲糟烘干，超微粉碎，然后加入蒸馏水搅拌均匀，调节悬浊液的pH值为3.8-4.2，添加纤维素酶酶解，然后调节pH值为5.8-6.2，添加淀粉酶酶解，调节pH值为7.5-9.5，添加复合蛋白酶酶解，离心，取上清液浓缩后进行冷冻干燥，所得干粉即为红曲糟多肽。
更优选地，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶以重量份比值(405-495)：(315-385)：(180-220)配制而成。
根据本发明，所述添加纤维素酶步骤为：添加1-4g/L纤维素酶于50-70℃酶解1-4h。
根据本发明，所述添加淀粉酶步骤为：添加1-4g/L淀粉酶于70-100℃酶解1-4h。
根据本发明，所述添加复合蛋白酶步骤为：添加1-15g/L复合蛋白酶于45-55℃酶解2-4h。
在本发明更优选的实施方式中，所述步骤六中热干燥的温度为45-55℃。
根据本发明，所述菌热干燥过程快速死亡临界值通过以下方法得出：将酿酒酵母置于沸腾炉中，分别在40℃、45℃、50℃、55℃、60℃下干燥30min，每2min取样检测酿酒酵母的存活率和含水量，绘制等温干燥曲线，计算存活率与含水量的相关性，将存活率出现快速下降拐点的水分含量定义为菌热干燥过程快速死亡率水分临界值。
在本发明的第二方面，发明人提供了一种酿酒酵母高活力菌剂，采用本发明第一方面所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法制备得到，所述酿酒酵母高活力菌剂的生物量达到1×1010cfu/g以上。
区别于现有技术，上述技术方案至少具有以下有益效果：
本发明筛选出酿酒酵母适宜抗热保护剂组合为红曲糟多肽、酪蛋白，可通过降低干燥过程细胞结合水逃逸速率，减缓细胞膜热胁迫损伤，提高菌存活率，实现干制过程菌细胞抗热损伤保护。采用沸腾炉分别在40℃、45℃、50℃、55℃、60℃下干燥30min，绘制等温干燥曲线，计算菌存活率与含水量的相关性，确定菌剂热干燥过程快速死亡的水分临界值，阐明临界值影响因素，通过调控干燥条件将菌剂含水量控制在菌干制过程快速死亡临界值与国家标准限定值(5.5％)之间，可使其存活率维持在较高水平且含水量达到国标要求。菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，可以降低酵母在离心、压榨过程中的死亡率，提高菌存活率；而将菌悬液pH值调节为6.4-6.6，可降低菌泥中的酸度，有利于降低菌剂产品总酸使其符合国家标准要求。本发明技术方案提供的提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法可使菌种存活率提高1.5倍以上，制备的菌剂产品生物量达1×1010cfu/g以上，可望为酿酒酵母的产业化应用提供坚实的技术支持，并有助于耐热性低的酿酒酵母实现推广应用，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为具体实施方式所述不同温度干燥过程酵母菌含水量的变化示意图；
图2为具体实施方式所述不同温度干燥过程酵母菌存活率的变化示意图；
图3为具体实施方式所述干燥过程菌存活率与含水量的相关性示意图；
图4为具体实施方式所述不同抗热保护剂添加量对干燥过程酵母菌存活率的影响示意图；
图5为具体实施方式所述添加抗热保护剂对干燥过程水分分布的影响示意图。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。
本发明所用酿酒酵母菌种为酿酒酵母JH301，于2015年4月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2015226。
实施例1具有高抗热损伤能力红曲糟多肽的制备
通过单因素、Scheffe单纯型格子设计及正交试验等多种方法，以菌60℃干制30min存活率为指标，筛选获得具有高抗热损伤能力的红曲糟多肽粉。其制备工艺如下：取适量新鲜红曲糟烘干，然后进行超微粉碎，加入其10倍重量的蒸馏水，搅拌均匀，调节悬浊液pH值为4.0，添加4g/L纤维素酶酶解；接着调节pH值为6.0，添加4g/L淀粉酶酶解；调节pH值为7.0，添加6g/L复合蛋白酶酶解，复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶以重量份比例4.5：3.5：2配制而成；离心，取上清液浓缩后进行冷冻干燥，所得干粉即为红曲糟多肽。其5000Da以下多肽含量85％以上，氨基酸成分中的天冬氨酸、谷氨酸占比最高，分别为10.3％、14.3％。
在其他不同的实施方式中，可调节悬浊液pH值为3.8-4.2中的任意值，纤维素酶添加量为1-4g/L的任意值，淀粉酶添加量为1-4g/L的任意值，复合蛋白酶添加量为1-15g/L的任意值，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶以重量份比值(405-495)：(315-385)：(180-220)配制而成。所得红曲糟多肽干粉的5000Da以下多肽含量、天冬氨酸和谷氨酸的占比都与上述实施方式相近。
实施例2适宜抗热保护剂的筛选
取红曲黄酒加工副产物制备的红曲糟多肽15-30g/L、大米糖化液25-50g/L、葡萄糖10-20g/L和糖蜜培养基50-120g/L，调节pH值到4.5±0.2，以此培养剂培养酿酒酵母菌，可使酿酒酵母的菌量达到1×108cfu/mL以上。将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；为降低酵母在离心和固液分离过程中的死亡率，将所述菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，调节pH值为6.5(其他不同的实施方式中，此pH值也可以是6.4或6.6)，通过压榨机压榨后取菌泥沉淀。
以红曲糟多肽、海藻糖和酪蛋白为因素，以酵母菌剂的含水率和存活率为考察指标，建立三因素三水平的正交试验表并进行试验，该正交试验表如表1所示，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。
表1因素水平表
表2正交试验结果
注：CK菌存活率为13.45％。
表3方差分析
在试验参数范围内，红曲糟多肽A、海藻糖B及酪蛋白C对热风干燥过程菌存活率的影响均达极显著水平(P<0.01)，极差分析结果表明影响大小顺序为A(红曲糟多肽)>C(酪蛋白)>B(海藻糖)。最佳处理组合为A3B1C1，即红曲糟多肽2.0％、海藻糖0％、酪蛋白1.0％。结果表明，酿酒酵母适宜保护剂配方包含红曲糟多肽、酪蛋白，再辅以干燥保护助剂微晶纤维素和司盘60。
实施例3沸腾炉热风干燥过程菌快速死亡临界值的确定
取红曲黄酒加工副产物制备的红曲糟多肽15-30g/L、大米糖化液25-50g/L、葡萄糖10-20g/L和糖蜜培养基50-120g/L，调节pH值到4.5±0.2，以此培养剂培养酿酒酵母菌，可使酿酒酵母的菌量达到1×108cfu/mL以上。将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；将所述菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，调节pH值为6.5，通过压榨机压榨后取菌泥沉淀。以重量百分比计，将所述菌泥沉淀与2.0％红曲糟多肽、0.5％微晶纤维素和0.1％司盘60混合均匀后造粒，得到酿酒酵母高活力菌剂。
采用沸腾炉将含有上述酿酒酵母高活力菌剂的酿酒酵母菌分别在40℃、45℃、50℃、55℃、60℃下干燥30min，每2min取样检测菌存活率和含水量，绘制酿酒酵母等温干燥曲线图，结果见图1、2。结果表明，干燥温度越高，酵母菌失水越快，菌存活率也越低。当干燥温度为40℃时，菌剂最终含水量>6.5％，不符合GB/T 20886-2007《食品加工用酵母》对菌剂含水量<5.5％的要求。考察45℃、50℃、55℃、60℃干燥过程菌存活率与含水量的相关性，结果见图3。结果表明，热风干燥过程中，菌剂含水量呈先快速下降后趋于平缓的趋势，菌存活率先平缓下降、干燥到一定水分含量后快速下降，定义该拐点为快速死亡率水分临界值。当水分高于拐点值时，菌存活率仍保持在较高的水平；当水分低于拐点时，随着干燥过程水分的降低，菌存活率快速下降。对菌存活率与含水量的相关性进行分析，得出各干燥温度下含水量与存活率的拐点值，结果见表4。结果表明，干燥温度越低，到达拐点的含水量也越低，菌存活率越高。适宜的干燥温度为45℃，控制的菌剂含水量为4.95％以上。
采用核磁共振技术考察45℃、50℃、55℃、60℃干燥过程水分分布的变化(见表5)，发现干燥温度越低，结合水逃逸速率越低，相同含水量时菌存活率越高；而干燥温度对束缚水和自由水的变化无显著影响。结果表明，细胞结合水的逃逸速率与菌快速死亡率水分临界值率负相关，是酵母菌干燥过程热损伤的主要影响因素。
表4不同干燥温度的菌快速死亡临界值
表5热干燥过程菌细胞水分分布的变化
实施例4红曲糟多肽的抗热保护剂机制
取红曲黄酒加工副产物制备的的红曲糟多肽15-30g/L、大米糖化液25-50g/L、葡萄糖10-20g/L和糖蜜培养基50-120g/L，调节pH值到4.5±0.2，以此培养剂培养酵母菌，可使酿酒酵母的菌量达到1×108cfu/mL以上。将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；将所述菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，调节pH值为6.5，通过压榨机压榨后取菌泥沉淀。
菌泥分别添加以下3种保护剂配方：(1)1.0％红曲糟多肽；(2)3.0％红曲糟多肽；(3)不添加红曲糟多肽；另加0.5％的微晶纤维素和0.1％的司盘60。各处理混合均匀后造粒，在60℃下干燥30min，考察干燥过程菌存活率、含水量，结果见图4、5。采用核磁共振技术考察干燥过程水分分布的变化，采用荧光技术考察不同保护剂添加量对菌细胞膜损伤的影响，结果见表6。表6表明添加红曲糟多肽可有效延缓菌细胞结合水失水，并且含有3％红曲糟多肽抗热保护剂的酿酒酵母菌细胞膜完整的数量显著增多，细胞损伤的酿酒酵母菌数量显著减少。上述结果表明，添加热保护剂可降低干燥过程细胞结合水逃逸速率，减缓细胞膜热胁迫损伤，实现干制过程菌细胞抗热损伤保护，从而提高菌存活率。
表6添加红曲糟多肽对菌细胞干燥过程水分分布的影响
实施例5酿酒酵母高活力菌剂制备技术的应用
以酿酒酵母JH301为研究对象，前期试验研究获得JH301在45℃的菌快速死亡临界值为含水量4.95％。
取红曲黄酒加工副产物制备的的红曲糟多肽15-30g/L、大米糖化液25-50g/L、葡萄糖10-20g/L和糖蜜培养基50-120g/L，调节pH值到4.5±0.2，以此培养剂培养酿酒酵母JH301，可使JH301的菌量达到1.08×108cfu/mL。将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；将所述菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，调节pH值为6.5，通过压榨机压榨后取菌泥沉淀，与1.0％红曲糟多肽、0.5％酪蛋白、0.5％微晶纤维素和0.1％司盘60混合均匀后造粒，在45℃干燥至菌剂含水量达5.10％，此时菌存活率达51.47％，比不添加保护剂和控制水分含量的处理(含水量4.23％，菌存活率20.40％)相比，菌存活率提高1.51倍。菌剂生物量达1.18×1010cfu/g，理化指标均符合GB/T 20886-2007《食品加工用酵母》要求。
实施例6酿酒酵母高活力菌剂制备技术的应用
以酿酒酵母JJ4为研究对象，前期试验研究获得JH301在45℃的菌快速死亡临界值为含水量4.80％。
取红曲黄酒加工副产物制备的的红曲糟多肽15-30g/L、大米糖化液25-50g/L、葡萄糖10-20g/L和糖蜜培养基50-120g/L，调节pH值到4.5±0.2，以此培养剂培养酿酒酵母JJ4，可使酿酒酵母JJ4的菌量达到1.32×108cfu/mL。将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；将所述菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，调节pH值为6.5，通过压榨机压榨后取菌泥沉淀，与1.0％红曲糟多肽、0.5％酪蛋白、0.5％微晶纤维素和0.1％司盘60混合均匀后造粒，在45℃干燥至菌剂含水量达4.85％，此时菌存活率达60.81％，比不添加保护剂和控制水分含量的处理(含水量3.92％，菌存活率22.03％)相比，菌存活率提高1.76倍。菌剂生物量达1.93×1010cfu/g，理化指标均符合GB/T 20886-2007《食品加工用酵母》要求。
实施例7酿酒酵母高活力菌剂制备技术的应用
以酿酒酵母JP2为研究对象，前期试验研究获得JP2在45℃的菌快速死亡临界值为含水量5.02％。
红曲黄酒加工副产物制备的的红曲糟多肽15-30g/L、大米糖化液25-50g/L、葡萄糖10-20g/L和糖蜜培养基50-120g/L，调节pH值到4.5±0.2，以此培养剂培养酿酒酵母JP2，可使酿酒酵母JP2的菌量达到1.01×108cfu/mL。将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；将所述菌泥沉淀用0℃冰水悬浮，调节pH值为6.5，通过压榨机压榨后取菌泥沉淀，与1.0％红曲糟多肽、0.5％酪蛋白、0.5％微晶纤维素和0.1％司盘60混合均匀后造粒，在45℃干燥至菌剂含水量达5.21％，此时菌存活率达43.77％，比不添加保护剂和控制水分含量的处理(含水量3.46％，菌存活率15.36％)相比，菌存活率提高1.85倍。菌剂生物量达1.93×1010cfu/g，理化指标均符合GB/T 20886-2007《食品加工用酵母》要求。
需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。
Claims (7)
1.一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：将增殖培养后的高密度酿酒酵母离心，得到菌泥沉淀；
步骤二：将所述菌泥沉淀用0℃冰水混合液悬浮，调节pH值为6.4-6.6，然后再次离心；
步骤三：重复步骤二，直至上清液中可溶性固形物的含量为0%，得到酿酒酵母菌悬液；
步骤四：将所述酿酒酵母菌悬液固液分离，得到酿酒酵母菌泥；
步骤五：往所述酿酒酵母菌泥中添加抗热保护剂，混合均匀，造粒，得到直投式菌颗粒，以质量百分比计，所述抗热保护剂包含红曲糟多肽1.0-2.0%、酪蛋白0.5-1.0%，再辅以干燥保护助剂微晶纤维素和司盘60，所述红曲糟多肽的制备工艺包括如下步骤：
取新鲜红曲糟烘干，超微粉碎，然后加入蒸馏水搅拌均匀，调节悬浊液的pH值为3.8-4.2，添加纤维素酶酶解，然后调节pH值为5.8-6.2，添加淀粉酶酶解，调节pH值为7.5-9.5，添加复合蛋白酶酶解，离心，取上清液浓缩后进行冷冻干燥，所得干粉即为红曲糟多肽；
步骤六：将所述直投式菌颗粒进行热干燥，控制其含水量在菌热干燥过程快速死亡临界值至5.5%之间，得到直投式菌剂，所述菌热干燥过程快速死亡临界值通过以下方法得出：将酿酒酵母置于沸腾炉中，分别在40℃、45℃、50℃、55℃、60℃下干燥30min，每2min取样检测酿酒酵母的存活率和含水量，绘制等温干燥曲线，计算存活率与含水量的相关性，将存活率出现快速下降拐点的水分含量定义为菌热干燥过程快速死亡率水分临界值；
步骤七：将所述直投式菌剂过200目筛，真空包装。
2.根据权利要求1所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，其特征在于，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶以重量份比值为（405-495）：（315-385）：（180-220）配制而成。
3.根据权利要求1所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，其特征在于，所述添加纤维素酶步骤为：添加1-4g/L纤维素酶于50-70℃酶解1-4h。
4.根据权利要求1所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，其特征在于，所述添加淀粉酶步骤为：添加1-4g/L淀粉酶于70-100℃酶解1-4h。
5.根据权利要求1所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，其特征在于，所述添加复合蛋白酶步骤为：添加1-15g/L复合蛋白酶于45-55℃酶解2-4h。
6.根据权利要求1所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤六中热干燥的温度为45-55℃。
7.一种酿酒酵母高活力直投式菌剂，其特征在于，采用权利要求1-6任一项所述提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂制备方法制备得到，所述酿酒酵母高活力直投式菌剂的生物量达到1×1010 cfu/g以上。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110034771.2A CN112779171B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110034771.2A CN112779171B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112779171A CN112779171A (zh) | 2021-05-11 |
| CN112779171B true CN112779171B (zh) | 2022-09-30 |
Family
ID=75757092
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110034771.2A Active CN112779171B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112779171B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101715815A (zh) * | 2009-11-20 | 2010-06-02 | 润盈生物工程（上海）有限公司 | 一种含耐热保护剂的直投式发酵剂的生产方法 |
| CN104004670A (zh) * | 2014-05-29 | 2014-08-27 | 广东省农业科学院动物科学研究所 | 一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂及其制备方法与应用 |
| CN109136013A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-04 | 福建省农业科学院农业工程技术研究所 | 一种基于控酸发酵的红曲黄酒酿造方法 |
| CN110150670A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-08-23 | 湖南化工职业技术学院 | 枯草芽孢杆菌益生菌菌粉的喷雾干燥制备工艺及优化方法 |
| CN110305793A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-10-08 | 湖南化工职业技术学院 | 枯草芽孢杆菌益生菌复合抗热保护剂及其配方的优化方法 |
| CN110607246A (zh) * | 2019-10-11 | 2019-12-24 | 福建省农业科学院农业工程技术研究所 | 一种酵母高密度增殖酒糟多肽糖蜜培养剂及制备方法 |
-
2021
- 2021-01-12 CN CN202110034771.2A patent/CN112779171B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101715815A (zh) * | 2009-11-20 | 2010-06-02 | 润盈生物工程（上海）有限公司 | 一种含耐热保护剂的直投式发酵剂的生产方法 |
| CN104004670A (zh) * | 2014-05-29 | 2014-08-27 | 广东省农业科学院动物科学研究所 | 一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂及其制备方法与应用 |
| CN109136013A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-04 | 福建省农业科学院农业工程技术研究所 | 一种基于控酸发酵的红曲黄酒酿造方法 |
| CN110150670A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-08-23 | 湖南化工职业技术学院 | 枯草芽孢杆菌益生菌菌粉的喷雾干燥制备工艺及优化方法 |
| CN110305793A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-10-08 | 湖南化工职业技术学院 | 枯草芽孢杆菌益生菌复合抗热保护剂及其配方的优化方法 |
| CN110607246A (zh) * | 2019-10-11 | 2019-12-24 | 福建省农业科学院农业工程技术研究所 | 一种酵母高密度增殖酒糟多肽糖蜜培养剂及制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 酵母热干燥法及其活性提高途径;张鸿雁等;《食品与机械》;20170228(第02期);第205-210页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112779171A (zh) | 2021-05-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hu et al. | Thermotolerant Kluyveromyces marxianus and Saccharomyces cerevisiae strains representing potentials for bioethanol production from Jerusalem artichoke by consolidated bioprocessing | |
| Wu et al. | Features of sweet sorghum juice and their performance in ethanol fermentation | |
| Sree et al. | Isolation of thermotolerant, osmotolerant, flocculating Saccharomyces cerevisiae for ethanol production | |
| Hacking et al. | Selection of yeast able to produce ethanol from glucose at 40 C | |
| CN111808757B (zh) | 一株产高蛋白酶活的米曲霉及其在豆酱发酵中的应用 | |
| Ado et al. | Bioconversion of cassava starch to ethanol in a simultaneous saccharification and fermentation process by co-cultures of Aspergillus niger and Saccharomyces cerevisiae. | |
| Clementi et al. | Effect of drying and storage conditions on survival of Leuconostoc oenos | |
| CN103160444B (zh) | 一种酿酒酵母菌株及其在制备耐热超氧化物歧化酶中的应用 | |
| CN112779171B (zh) | 一种提高热干燥存活率的酿酒酵母直投式菌剂及制备方法 | |
| CN102226142A (zh) | 一种用于固态酿造食醋发酵过程的生物强化技术 | |
| CN106578348A (zh) | 一种溶菌酶饲料添加剂的制备方法及应用 | |
| CN113528361B (zh) | 一株适于液化法酿造米酒的酿酒酵母及其应用 | |
| Rosa et al. | Improvements in ethanol tolerance of Kluyveromyces fragilis in Jerusalem artichoke juice | |
| CN112522114B (zh) | 蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用 | |
| CN114874925A (zh) | 一种利用克鲁维毕赤酵母菌半固态发酵产蛋白饲料的方法 | |
| Bechem et al. | Characterization of palm wine yeasts using osmotic, ethanol tolerance and the isozyme polymorphism of alcohol dehydrogenase | |
| CN113215007B (zh) | 一株高耐酸粟酒裂殖酵母及在酱香型白酒酿造中的应用 | |
| Gough et al. | Continuous ethanol production from molasses at 45 C using alginate-immobilized Kluyveromyces marxianus IMB3 in a continuous-flow bioreactor | |
| SOMDA et al. | Optimization of Saccharomyces cerevisiae SKM10 single cell protein production from mango (Magnifera indica L.) waste using response surface methodology | |
| CN102746998A (zh) | 一株用于快速发酵生产绍兴黄酒的酵母菌 | |
| CN109401998B (zh) | 一株降解生物胺的明登乳杆菌及其应用 | |
| Layfield et al. | Characterization of hybrid strains of Saccharomyces pastorianus for desiccation tolerance | |
| CN107460126B (zh) | 一种养殖微藻的方法和微藻养殖系统 | |
| CN114908134B (zh) | 含有苹果渣酶解液的发酵培养基及生产布拉迪酵母的方法 | |
| CN109401990B (zh) | 一株具有抑菌活性的酿酒酵母菌hkb-36及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20210511 Assignee: NINGDE HUANGJIA WINE Co.,Ltd. Assignor: INSTITUTE OF AGRICULTURAL ENGINEERING TECHNOLOGY, FUJIAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES Contract record no.: X2023350000155 Denomination of invention: A direct delivery yeast inoculum and preparation method for improving thermal drying survival rate of brewing yeast Granted publication date: 20220930 License type: Common License Record date: 20230329 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20210511 Assignee: Fujian Lingshuo Blueberry Technology Development Co.,Ltd. Assignor: INSTITUTE OF AGRICULTURAL ENGINEERING TECHNOLOGY, FUJIAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES Contract record no.: X2023350000286 Denomination of invention: Saccharomyces cerevisiae direct drop inoculum and its preparation method for improving the survival rate of hot drying Granted publication date: 20220930 License type: Common License Record date: 20230616 |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No. 248 Wusi North Road, Fuzhou City, Fujian Province, 350003 Patentee after: Fujian Academy of Agricultural Sciences Agricultural Product Processing Research Institute Address before: 350000 No. 54, 247 Gulou District, Fujian, Fuzhou Patentee before: INSTITUTE OF AGRICULTURAL ENGINEERING TECHNOLOGY, FUJIAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES |