CN112763721A - 风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒制备技术领域。该试剂盒包括风疹病毒抗原包被的磁微粒、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和中间相试剂。本发明还提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法。本发明的风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒为全自动的测量样本，并直接给出浓度数值，减少人为操作误差，并且实现无人值守，有效地提高效率，且节约了成本。

Description

风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明属于试剂盒制备技术领域，具体涉及一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
风疹病毒(Rubella virus)是披膜病毒科，风疹病毒属的唯一成员，人是其唯一的自然宿主。风疹疾病本身并不严重，但风疹病毒对公众健康最大的威胁是它的致畸性。孕妇感染风疹病毒可对婴儿产生先天性损害，尤其是妊娠前3个月若感染风疹病毒，病毒可经血液感染胎儿，导致自发流产、死产或胎儿感染，从而引起胎儿严重的出生缺陷：包括白内障、耳聋、心脏病和智力低下等，称为先天性风疹综合征(Congenital rubella syndromes,CRS)。风疹病毒可以通过接种疫苗得到一定程度的预防，但一旦感染，目前尚无特效的治疗方式，因此在临床上对风疹病毒的感染、实验室诊断及其流行特征极为重视。
风疹特异抗体检测可用于判定个体免疫状态，有助于提示个体既往感染的血清学状况和诊断及预防急性风疹感染。风疹病毒IgG抗体存在提示以往免疫过风疹病毒(接种疫苗或风疹感染)，风疹病毒IgG抗体含量较低提示可能存在感染风疹病毒的风险，育龄妇女接种疫苗可明显降低急性风疹感染和CRS的发病率，对确保优生优育具有重要意义。
目前测定风疹病毒IgG抗体的方法有酶联免疫吸附法、免疫印迹法(WB)、胶体金、PCR等方法。酶联免疫吸附法定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，结果受人为因素影响结果较大；免疫印迹法存在操作步骤复杂，操作不易掌控的缺点；金标方法灵敏度较低，只能定性，不能定量；PCR对检测条件和技术等方面要求较高，故临床常规检测中不适用。而化学发光免疫分析法具有灵敏度高、准确定量、操作简单、检测时间短等优点，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测；另一方面，风疹病毒IgG抗体化学发光免疫测定试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，试剂、样本的添加及检测任务均由仪器自动完成，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒与仪器配套，缩短了临床检测所需的时间，且检测精度较高。
本发明首先提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒包括风疹病毒抗原包被的磁微粒、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和中间相试剂。
优选的是，所述的风疹病毒抗原包被的磁微粒中，包被的磁微粒为带有Tosyl官能团的磁颗粒，抗原包被质量比为0.2％～5.0％，试剂质量比为0.01～1％，磁颗粒的粒径是1.0～3.0μm。
优选的是，所述的化学发光标记物标记的抗人IgG抗体中，抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例是1:3～10，缓冲液为50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8，抗体终浓度为0.1～1.0μg/mL。
优选的是，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。
优选的是，所述的抗人IgG抗体为鼠抗人IgG抗体。
优选的是，所述的中间相试剂为50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8的缓冲液。
优选的是，所述的试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；其中所述化学发光底物液A为过氧化氢和硝酸溶液，B为氢氧化钠溶液。
优选的是，所述的试剂盒还包括风疹病毒IgG抗体校准品。
优选的是，所述的风疹病毒IgG抗体的校准品浓度为0IU/mL、10IU/mL、25IU/mL、50IU/mL、100IU/mL、250IU/mL和500IU/mL的风疹病毒IgG抗体蛋白溶液。
本发明还提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
步骤一：风疹病毒抗原包被的磁微粒的制备
取带有Tosyl官能团的磁颗粒，用清洗液清洗，加入风疹病毒抗原后，室温下混悬4-12小时，磁分离，去上清，用缓冲液清洗后加入BSA进行封闭，混悬4-6小时，磁分离，清洗后，在缓冲液中配成固相R1试剂；
步骤二：化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的制备
将抗人IgG抗体放入离心管中离心，与溶解于DMF中的化学发光标记物进行标记，标记反应结束后，经纯化、收集得到化学发光标记物标记的抗人IgG抗体。
本发明的有益效果
本发明提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒具有如下优点：
1、选择吖啶酯等为化学发光免疫分析系统的标记材料，该材料有激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要酶的参与，节约时间及成本。
2、风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒为全自动的测量样本，并直接给出浓度数值，减少人为操作误差，并且实现无人值守，有效地提高效率，且节约了成本。
3、吖啶酯的化学发光免疫分析系统线性范围宽。
4、试剂与仪器组成封闭系统，系统误差小。
5、本发明的化学发光免疫检测试剂盒在准确度方面可以替代市面上的酶联免疫法等试剂盒，为客户提供更加快速、准确的测量数据。
附图说明
图1为实施例5得到的风疹病毒IgG抗体标准曲线图。
具体实施方式
为了使本发明的优点、目的和方法更加详实易懂，下面结合附图和具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了诸多细节以便于理解，但本发明可以以不同与描述的其他方式来实施。
本发明首先提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒包括风疹病毒抗原包被的磁微粒、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和中间相试剂。
按照本发明，所述的风疹病毒抗原包被的磁微粒中，包被的磁微粒为带有Tosyl官能团的磁颗粒，来源为商购，抗原包被质量比优选为0.2％～5.0％，试剂质量比优选为0.01～1％，磁颗粒的粒径优选是1.0～3.0μm。
按照本发明，所述的化学发光标记物标记的抗人IgG抗体中，抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例优选是1:3～10，缓冲液优选为50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8，抗体终浓度优选为0.1～1.0μg/mL。所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌，优选为吖啶酯，结构式如下：
Figure BDA0002853366240000041
按照本发明，所述的抗人IgG抗体优选为鼠抗人IgG抗体。
按照本发明，所述的中间相试剂为50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8的缓冲液。
按照本发明，所述的试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；其中所述化学发光底物液A为过氧化氢和硝酸溶液，B为氢氧化钠溶液。
按照本发明，所述的试剂盒还包括风疹病毒IgG抗体校准品。所述的风疹病毒IgG抗体的校准品浓度为0IU/mL、10IU/mL、25IU/mL、50IU/mL、100IU/mL、250IU/mL和500IU/mL的风疹病毒IgG抗体蛋白溶液。
本发明还提供一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
步骤一：风疹病毒抗原包被的磁微粒的制备
取带有Tosyl官能团的磁颗粒，用清洗液清洗，加入风疹病毒抗原后，室温下混悬4-12小时，磁分离，去上清，用缓冲液清洗后加入BSA进行封闭，混悬4-6小时，磁分离，清洗后，在缓冲液中配成固相R1试剂；
所述的带有Tosyl官能团的磁颗粒的浓度优选为10mg/mL，来源为商购，BSA的浓度优选为5％，其中用于清洗的缓冲液优选为10～100mM PB，PH6～10；用于配制固相R1试剂的缓冲液优选为25Mm Tris、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300和0.02％迭氮钠，pH7.2的缓冲液；所述的固相R1试剂的浓度优选为0.02％～1％；
步骤二：化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的制备
将抗人IgG抗体放入离心管中离心，与溶解于DMF中的化学发光标记物进行标记，所述的标记温度优选为室温，标记时间优选为2-4小时，标记反应结束后，经AKTA蛋白纯化仪纯化标记抗人IgG抗体经纯化，将收集到的吖啶酯标记的抗人IgG抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8的缓冲液稀释抗体终浓度为0.1～1.0μg/mL，即为R2试剂。
本发明的风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒用于检测风疹病毒IgG抗体时，利用全自动化学发光免疫分析仪(CM180)对风疹病毒IgG抗体校准品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件；然后根据需求测试临床样本，根据样本的光量子数计算风疹病毒IgG抗体的浓度；最后对风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒进行性能(线性、灵敏度、重复性、检测限等)的评价。
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，实施例中涉及到的原料均为商购。
实施例1:风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备：
(1)磁颗粒工艺：
取浓度是10mg/mL的带有Tosyl官能团的磁颗粒(粒径为1.0um)，加入5mL的自带清洗液清洗后，加入0.5％风疹病毒抗原后，室温下混悬4小时，磁分离，去上清，用10mM PB，pH6.0的缓冲液清洗后加入5％的BSA进行封闭，混悬4小时，磁分离，清洗后，用25Mm Tris、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300和0.02％迭氮钠，pH7.2的缓冲液中配成磁珠浓度为0.02％的固相试剂，2～8℃保存。
(2)化学发光标记物标记的抗人IgG抗体标记工艺：
用超滤离心管将抗人IgG抗体缓冲液置换为PBS(抗体量为500μg)，按照标记比例为1：3加入吖啶酯DMF溶液，充分混匀，室温放置2小时后，AKTA蛋白纯化仪纯化标记抗人IgG抗体。将收集到的吖啶酯标记的抗人IgG抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用pH6.5的100mM Bistris丙烷，0.05％吐温、0.05％Proclin300和0.02％的迭氮钠、0.05％吐温-20，0.5％BGG的缓冲液稀释抗体终浓度为0.5μg/mL，即为R2试剂。
(3)中间相试剂
中间相试剂为pH6.5的100mM Bistris丙烷，0.05％吐温、0.05％Proclin300和0.02％的迭氮钠、0.05％吐温-20，0.5％BGG的缓冲液。
实施例2
(1)磁颗粒工艺：
取浓度是10mg/mL的带有Tosyl官能团的磁颗粒(粒径为2.8um)，加入5mL的自带清洗液清洗后，加入2％风疹病毒抗原后，室温下混悬8小时，磁分离，去上清，用50mM PB，pH8.0的缓冲液清洗后加入5％的BSA进行封闭，混悬5小时，磁分离，清洗后，用25Mm Tris、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300和0.02％迭氮钠，pH7.2的缓冲液中配成磁珠浓度为0.05％的固相试剂，2～8℃保存。
(2)化学发光标记物标记的抗人IgG抗体标记工艺：
用超滤离心管将抗人IgG抗体缓冲液置换为PBS(抗体量为500μg)，按照标记比例为1:5加入吖啶酯DMF溶液，充分混匀，室温放置3小时后，AKTA蛋白纯化仪纯化标记抗人IgG抗体。将收集到的吖啶酯标记的抗人IgG抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用pH6.5的100mM Bistris丙烷，0.05％吐温、0.05％Proclin300和0.02％的迭氮钠、0.05％吐温-20，0.5％BGG的缓冲液稀释抗体终浓度为0.5μg/mL，即为R2试剂。
(3)中间相试剂
中间相试剂为pH 7.0的100mM Bistris丙烷，0.05％吐温、0.05％Proclin300和0.02％的迭氮钠、0.05％吐温-20，0.5％BGG的缓冲液。
实施例3
(1)磁颗粒工艺：
取浓度是10mg/mL的带有Tosyl官能团的磁颗粒(粒径为3.0um)，加入5mL的自带清洗液清洗后，加入5％风疹病毒抗原后，室温下混悬12小时，磁分离，去上清，用100mM PB，pH10的缓冲液清洗后加入5％的BSA进行封闭，混悬6小时，磁分离，清洗后，用25Mm Tris、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300和0.02％迭氮钠，pH7.2的缓冲液中配成磁珠浓度为1％的固相试剂，2～8℃保存。
(2)化学发光标记物标记的抗人IgG抗体标记工艺：
用超滤离心管将抗人IgG抗体缓冲液置换为PBS(抗体量为500μg)，按照标记比例为1：10加入吖啶酯DMF溶液，充分混匀，室温放置4小时后，AKTA蛋白纯化仪纯化标记抗人IgG抗体。将收集到的吖啶酯标记的抗人IgG抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用pH6.5的100mM Bistris丙烷，0.05％吐温、0.05％Proclin300和0.02％的迭氮钠、0.05％吐温-20，0.5％BGG的缓冲液稀释抗体终浓度为0.5μg/mL，即为R2试剂。
(3)中间相试剂
中间相试剂为pH 8.0的100mM Bistris丙烷，0.05％吐温、0.05％Proclin300和0.02％的迭氮钠、0.05％吐温-20，0.5％BGG的缓冲液。
实施例4：风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒检测方法：
以全自动化学发光免疫分析仪(CM180)为检测工具，方法学模式为间接法，样本量20μL，磁珠包被的抗原试剂量40μL，中间相试剂量50μL，吖啶酯标记的抗人IgG抗体试剂量50μL。即仪器依次加入20μL的样本，磁珠包被的抗原R1溶液和中间相试剂R3共同孵育18min，洗涤，再加入吖啶酯标记抗体R2试剂孵育5min，形成磁微球-风疹病毒抗原-风疹病毒抗体-抗人IgG抗体-吖啶酯复合物，通过磁分离器分离免疫复合物，洗掉游离的成分。仪器将反应物送入暗室，一次加入发光底物液A液(HNO3+H2O2溶液)和B液(NaOH溶液)进行反应，记录相对光单位(RLU)，在线性范围内，样本中风疹病毒IgG抗体的含量与相对光单位成正比。
实施例5：风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒(实施例2)性能评价
(注：试剂性能验证用风疹病毒IgG抗体国家参考品采购自中国食品药品检定研究院，批号：360005-201702)
1)线性的检测：将校准品浓度为0IU/mL、10IU/mL、25IU/mL、50IU/mL、100IU/mL、250IU/mL和500IU/mL与光量子数作标准曲线(如图1)，得到线性相关系数r＝0.9997，线性范围为2～500IU/mL。如表1：
表1线性的检测数据
浓度(IU/mL) 光量子数(RLU)
0 170
10 10965
25 37929
50 95900
100 188787
250 527702
500 1037237
2)灵敏度检测：灵敏度的定义为对零值校准品进行20次测定光量子数，取其平均值加两倍标准差，带入零值校准品及相邻的校准所成直线所得即为灵敏度；计算风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的灵敏度为0.0257IU/mL。如表2所示：
表2灵敏度检测数据
Figure BDA0002853366240000091
3)阳性参考品符合率
对国家阳性参考品或企业阳性参考品进行检测，结果应符合要求。即：P1～P10要求检测结果均为风疹病毒IgG抗体阳性，阳性符合率(+/+)为10/10，阳性参考品符合率测试结果合格。如表3：
表3阳性参考品符合率数据
Figure BDA0002853366240000092
4)阴性参考品符合率
对国家阴性参考品或企业阴性参考品进行检测，结果应符合要求。
即：N1～N5要求检测结果均为风疹病毒IgG抗体阴性，阴性符合率(-/-)为5/5，阴性参考品符合率测试结果合格。如表4：
表4阴性参考品符合率测定结果
Figure BDA0002853366240000101
5)重复性检测：对国家重复性参考品进行检测，重复测试10次，要求检测结果均为风疹病毒IgG抗体阳性，且其浓度的变异系数不大于15.0％，测定结果合格。如表5：
表5重复性检测结果
Figure BDA0002853366240000102
6)检测限
对国家检测限参考品进行检测1次，要求其检测结果应为阳性。如表6：
表6检测限检测结果
Figure BDA0002853366240000103
通过上述结果可以看出本发明研制的检测风疹病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测范围广、稳定性好等优点，可广泛用于临床检测。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，但这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括风疹病毒抗原包被的磁微粒、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和中间相试剂。
2.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的风疹病毒抗原包被的磁微粒中，包被的磁微粒为带有Tosyl官能团的磁颗粒，抗原包被质量比为0.2％～5.0％，试剂质量比为0.01～1％，磁颗粒的粒径是1.0～3.0μm。
3.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的化学发光标记物标记的抗人IgG抗体中，抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例是1:3～10，缓冲液为50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8，抗体终浓度为0.1～1.0μg/mL。
4.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。
5.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的抗人IgG抗体为鼠抗人IgG抗体。
6.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的中间相试剂为50～200mM PB、Bistris丙烷或MES，0.05％～0.1％PC300或0.02％～0.05％的迭氮钠及0.05％～0.1％吐温-20，0.5％BGG，PH6～8的缓冲液。
7.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；其中所述化学发光底物液A为过氧化氢和硝酸溶液，B为氢氧化钠溶液。
8.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括风疹病毒IgG抗体校准品。
9.根据权利要求8所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的风疹病毒IgG抗体的校准品浓度为0IU/mL、10IU/mL、25IU/mL、50IU/mL、100IU/mL、250IU/mL和500IU/mL的风疹病毒IgG抗体蛋白溶液。
10.根据权利要求1所述的一种风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：风疹病毒抗原包被的磁微粒的制备
取带有Tosyl官能团的磁颗粒，用清洗液清洗，加入风疹病毒抗原后，室温下混悬4-12小时，磁分离，去上清，用缓冲液清洗后加入BSA进行封闭，混悬4-6小时，磁分离，清洗后，在缓冲液中配成固相R1试剂；
步骤二：化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的制备
将抗人IgG抗体放入离心管中离心，与溶解于DMF中的化学发光标记物进行标记，标记反应结束后，经纯化、收集得到化学发光标记物标记的抗人IgG抗体。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101368959A (zh) * 2008-03-25 2009-02-18 北京科美东雅生物技术有限公司 风疹病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
CN101769926A (zh) * 2008-12-30 2010-07-07 上海裕隆生物科技有限公司 优生优育五项指标集成检测反应板及试剂盒
CN109112114A (zh) * 2018-09-18 2019-01-01 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN111007249A (zh) * 2019-11-27 2020-04-14 迪瑞医疗科技股份有限公司 单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN111007248A (zh) * 2019-11-22 2020-04-14 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种检测风疹病毒IgM抗体的化学发光免疫分析试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101368959A (zh) * 2008-03-25 2009-02-18 北京科美东雅生物技术有限公司 风疹病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
CN101769926A (zh) * 2008-12-30 2010-07-07 上海裕隆生物科技有限公司 优生优育五项指标集成检测反应板及试剂盒
CN109112114A (zh) * 2018-09-18 2019-01-01 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN111007248A (zh) * 2019-11-22 2020-04-14 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种检测风疹病毒IgM抗体的化学发光免疫分析试剂盒
CN111007249A (zh) * 2019-11-27 2020-04-14 迪瑞医疗科技股份有限公司 单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

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