CN109112114A - 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 - Google Patents

抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109112114A
CN109112114A CN201811085465.6A CN201811085465A CN109112114A CN 109112114 A CN109112114 A CN 109112114A CN 201811085465 A CN201811085465 A CN 201811085465A CN 109112114 A CN109112114 A CN 109112114A
Authority
CN
China
Prior art keywords
kit
antibody
monoclonal antibody
cell strain
hybridoma cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811085465.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109112114B (zh
Inventor
舒川
黄家菊
李岚敏
王磊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Maccura Biological New Material Technology Co ltd
Original Assignee
Sichuan Maccura Biological New Material Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Maccura Biological New Material Technology Co ltd filed Critical Sichuan Maccura Biological New Material Technology Co ltd
Priority to CN201811085465.6A priority Critical patent/CN109112114B/zh
Publication of CN109112114A publication Critical patent/CN109112114A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109112114B publication Critical patent/CN109112114B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
    • C07K16/4216—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-viral Ig
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体，所述抗体能与人IgG特异性结合。本发明还涉及包括所述杂交瘤细胞株或单克隆抗体的试剂盒。本发明的单克隆抗体在抗体纯度、可重复性、抗体效价和稳定性方面均展现出很好的性能。

Description

抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
技术领域
本发明涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人IgG的单克隆抗体，分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及所述单克隆抗体的应用。
背景技术
风疹病毒属于披膜病毒科，具单股正链RNA，直径为60nm，仅有一个血清型。风疹病毒的抗原结构相当稳定，是一种最危险的致畸因素。风疹病毒与巨细胞病毒、弓形虫病毒、疱疹病毒1型和2型共同命名为TORCH，TORCH检测对于优生优育至关重要。
风疹是由风疹病毒引起的。风疹在我国已列入法定报告的传染病。80年代以来日本、美国、印度、墨西哥、澳大利亚等均有较大的流行。孕妇属易感人群，为避免孕早期受到风疹病毒感染，在孕前必须检查风疹IgG抗体，若IgG抗体阳性则表示曾经感染过风疹病毒，并有终生免疫力，不会再受感染。若IgG抗体阴性则表示无抵抗力，容易受到风疹病毒感染，因此必须立即注射风疹疫苗，使体内产生抗体。
当前检测风疹IgG抗体的诊断技术有金标、ELISA、PCR等方法。金标试剂操作简单，快速，但肉眼观察有一定误差，准确率低；PCR具有灵敏度极高的特点，直接检测病原体基因，但操作繁琐、需要先进的仪器设备和较高的费用，不适用于基层推广；而ELISA检测方法，具有灵敏度高、特异性强的特点，目前临床应用比较普遍，但存在漏检、假阳性等问题。因此研发出经系统性评价结果较好的抗人IgG单克隆抗体在体外诊断试剂领域具有非常广泛的应用。
然而，筛选用于制备体外诊断试剂的单克隆抗体是一个复杂的过程，首先要获得很好的抗原，来制备足够多的抗体，然后对抗体进行系统的评价，获得具有临床相关性的候选抗体，再开发成检测试剂。其中，抗体效价、交叉反应性、稳定性和临床效果等均是重要的评价因素，如抗体效价高低反映了一定浓度下与抗原反应的最低滴度，滴度越低效价越高；抗体交叉反应性可影响该抗体的特异性；抗体的稳定性会直接影响最终结果的可靠性，而稳定性较差的抗体对保存条件、操作条件要求更高，从而降低了其作为诊断试剂的实用性及结果的可靠性，并不可避免地引起成本的上升；临床试验则用来说明抗体在诊断相应疾病或病毒感染时的实际效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗人IgG单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株、含上述单克隆抗体或杂交瘤细胞株的试剂盒以及它们在检测人IgG中的用途。通过系统性评价，所述抗体在各方面均有较佳表现，从而适合作为免疫诊断试剂用于制备体外诊断试剂盒。
为此，本发明人进行了大量研究，通过人IgG来免疫小鼠，细胞融合后经有限稀释法克隆至少4次，直到达到单克隆，从得到的众多克隆中筛选到1株能稳定分泌抗体的新型杂交瘤细胞株(Hybridoma)，此杂交瘤细胞株记作杂交瘤细胞株4G10，并于2018年8月23日将其保藏于中国典型培养物保藏中心，中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2018174，从而完成了本发明。
在第一个方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2018174。
在第二个方面，本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与人IgG特异性结合。
在一个实施方式中，所述单克隆抗体不与人IgG、鼠IgG、兔IgG、牛IgG或人IgM结合。
在另一个实施方式中，所述单克隆抗体在反复冻融、长期保存、热加速恶劣条件下具有更优的稳定性和可靠性。
在一个优选的实施方式中，所述单克隆抗体是由本发明的杂交瘤细胞株分泌的抗体。
在第三个方面，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明的杂交瘤细胞株或单克隆抗体。
在一个具体实施方式中，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒。
在一个优选的实施方式中，所述试剂盒为酶联免疫试剂盒。
在另一个实施方式中，所述试剂盒为微流体芯片。
在第四个方面，提供了本发明的杂交瘤细胞株或单克隆抗体在制备试剂盒中的用途。
在一个实施方式中，所述试剂盒是基于免疫检测的试剂盒，优选的，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒。
在一个优选的实施方式中，所述试剂盒为酶联免疫试剂盒。
在另一个实施方式中，所述试剂盒是微流体芯片，优选的，所述微流体芯片所基于免疫检测的。
在一个实施方式中，所述试剂盒用于检测人IgG。
在一个优选的实施方式中，所述人IgG为风疹病毒IgG。
此外，还提供了本发明的杂交瘤细胞株或本发明的单克隆抗体在制备用于风疹病毒检测的试剂盒中的用途。
本发明的单克隆抗体的有益效果在于，首先，其抗体效价比体外诊断中通常使用的商购人IgG抗体至少高一个数量级，有着更佳的免疫效果；其次，本发明的抗体与人IgG、鼠IgG、兔IgG、牛IgG或人IgM无交叉反应，具有很好的特异性结合能力；再次，其具有比商购的人IgG抗体更优的长期与热稳定性，也就是说延长了使用期限并能接受相对宽松的储存条件和操作条件，从而大大节约了成本；最后，临床实验表明本发明的单克隆抗体可用于制备风症病毒IgG抗体检测的酶联免疫试剂盒，检测灵敏度可达100％，检测特异性可达100％。
也就是说，本发明的单克隆抗体在抗体效价、交叉反应性、稳定性和检测效果等多个方面均展现出了很好的性能，从而本发明提供了一种经系统性评价可用于体外诊断且综合能力突出的抗人IgG单克隆抗体。
附图说明
图1示出了本发明的抗体人IgG-Ab的纯化后SDS-PAGE电泳图；
图2示出了本发明的抗体人IgG-Ab的纯度检测图；
图3示出了本发明的抗体人IgG-Ab的效价检测图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术人员的一本理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
抗体
如本文所使用的，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体、CDR移植抗体和抗体构建体，如单链Fv(scFv)或抗体融合蛋白；此外，还涉及重组地或合成地产生/合成的抗体。
在优选的实施方式中，抗体是指产生自保藏编号为CCTCC NO:C2018174的杂交瘤细胞株的抗体。
“抗体片段”通常包括亲代抗体的抗原结合区，轻链和/或重链可变区，一个或多个(如六个)CDR的至少一部分，其保留亲代抗体的至少一定的结合特异性。特别地，在本文中亲代抗体是指产生自保藏编号为CCTCC NO:C2018174的杂交瘤细胞株的抗体。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双体分子；线性抗体；但链抗体分子，例如，sc-Fv；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。通常，当基于摩尔来表达活性时，片段保留至少50％的对C-反应蛋白的结合活性。优选地，和亲代抗体相比，片段保留至少60％、70％、80％、90％、95％或100％的风疹病毒的结合活性。
优选的，抗体片段是指抗体的抗原结合区、轻链和重链可变区或六个CDR。
“抗体衍生物”指抗原包括抗体的保守氨基酸替代物(称为“保守变异体”)，它的生物学活性与亲代抗体相比基本不发生改变。
本发明提供了抗体的单克隆形式。
如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”是指获自基本上通知抗体的群体的抗体，即，除可能的可以少量存在的自然发生的突变之外，构成群体的个体抗体是相同的。针对单抗原位点，单克隆抗体是高度特异的。单克隆抗体是有利的，因为它们可以通过杂交瘤细胞朱培养获得，并且基本上不受其他免疫球蛋白的污染。
试剂盒
本发明的检测试剂盒可采用多种形式，例如，试纸、含有各种测试所需试剂的试剂盒、微流体芯片等，可以按照本领域技术人员已知的标准步骤来制造试剂盒。
本发明的试剂盒根据需要可包括容器、芯片、使用说明书、缓冲剂、免疫助剂和/或用于进行诊断/检测所需的其他材料、结构和/或试剂。
实施例中采用荧光免疫测定为例对本发明的试剂盒进行说明，但不应理解为本发明的试剂盒仅限于酶联免疫测定。
本发明的试剂盒包括产生自保藏编号为CCTCC NO:C2018174的杂交瘤细胞株的抗体，其可以以本领域常规的方式存在，例如，以溶解或干燥形式存在于容器中，包被在固相载体上(例如，膜、板、珠、粒子(如磁粒子)等)，以溶解或干燥形式存在于芯片的腔室中，但本发明不限于此。
由于运输及使用地点等客观因素，试剂盒往往需要适合在各类复杂环境中进行现场检测，因此，原料的稳定性是制约试剂盒结果的重要因素之一。如下文实施例10、实施例11中所示出的，本发明的抗体抗人IgG单克隆抗体作为荧光免疫试剂盒的原料在极端条件下较常规抗人IgG单克隆抗体拥有更好的稳定性，从而使试剂盒的结果可靠性增强并变相地降低了成本。
本发明的抗体可以0.5～10μg/ml的浓度来使用，优选为1～5μg/ml，更优选为2.5μg/ml。
本发明的试剂盒中用于进行诊断/检测所需的其他材料包括但不限于，除本发明的抗体外的其他抗人IgG抗体、与人IgG抗体结合的抗原和/或人IgG。上述其他材料可以以本领域常规的方式存在，例如，以溶解或干燥形式存在于容器中，包被在固相载体上(例如，膜、板、珠、粒子(如磁粒子)等)，以溶解或干燥形式存在于芯片的腔室中，但本发明不限于此。
本发明的试剂盒中用于进行诊断/检测所需的其他结构包括但不限于用于取样结构、用于进行对照结构和/或用于观察检测过程或结构的结果。
本发明的试剂盒中用于进行诊断/检测所需的其他试剂包括但不限于洗涤剂、显色剂和/或终止剂。
在一个实施方式中，在本发明试剂盒中的抗体是可检测地标记的。可以使用本领域技术人员已知的任何标记物和标记方法。例如，在本发明中可以使用的标记物包括酶、放射性同位素、胶态金属、荧光化合物、化学发光化合物和生物发光化合物，但本发明不限于此。
常用的标记物可包括酶(如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶等)、放射性同位素(如32P或125I)等、生物素、地高辛、胶态金属(如胶体金等)、荧光染料(如荧光素、罗丹明、德克萨斯红等)、化学发光化合物或生物发光化合物(如二氧杂环丁烷、鲁米诺或吖啶鎓等)。可以使用任何本领域众所周知的标记步骤，如酶或生物素基团的共价偶联、碘化、磷酸化、生物素化等。
在一些实施方式中，用于进行诊断/检测所需的其他材料中的一种或多种也可以为可检测地标记的。
在一个优选的实施方式中，本发明的试剂盒是用于检测风疹病毒的试剂盒。
用途
本发明的抗人IgG单克隆抗体或杂交瘤细胞株可用于与人IgG的特异性反应相关的任何目的。优选的，本发明的抗体或杂交瘤细胞株可用于检测风疹病毒。
本发明的抗体或杂交瘤细胞株可对来源于人类的生物样品进行检测。
如本文中所使用的，“生物样品”是指精液、淋巴、血清、血浆、尿、滑液或脊髓液。在优选的实施方式中，生物样品是指血清或血浆。
可以使用免疫测定的方法定量或定性检测人IgG的存在，所述免疫测定通常包括将生物样品与本发明的抗体和/或检测所需的其他材料一同孵育或依次接触，并通过多种本领域熟知的技术检测结合的抗原。
检测方法包括但不限于放射自显影、荧光显微镜检术、直接和间接的酶促反应、放射性同位素法或非放射性同位素法等。这些方法尤其包括Western印迹、重叠测定、RIA(放射免疫测定)和IRMA(免疫放射免疫测定)、GIA(胶体金免疫测定)、EIA(酶免疫测定)、ELISA(酶联免疫吸附测定)、FIA(荧光免疫测定)、以及CLIA(化学发光免疫测定)。
在一个实施方式中，本发明的抗体或杂交瘤细胞株适用于检测人IgG，从而诊断个体是否感染风疹病毒。
下面将结合实施例对本发明的实施方式进行详细描述，实施例中未注明具体条件的，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商的，为可以通过商购获得的常规产品。
实施例1小鼠的免疫
将人血源IgG抗原(四川迈克生物新材料技术有限公司，批号091416)用生理盐水稀释到3mg/ml，与弗氏完全佐剂(Sigma公司，货号SLBF-9338V)等体积混合(100μg/只BALB/c小鼠)，用1ml注射器乳化为油状乳液，直至滴入水中的油状乳液不分散方可停止乳化，将该乳液以100μl/只的剂量四肢腋窝皮下施给BALB/c小鼠(成都达硕实验动物中心，5周龄雌性，3只)第一次免疫14天后增强免疫，取人IgG与弗氏不完全佐剂(Sigma公司，货号SLBM9367V)等体积混合(50μg/只BALB/c小鼠)后乳化，免疫剂量为100μl/只，以后每隔一周增强免疫一次，每次免疫之前采尾血，分离血清，用间接ELISA法测定效价。免疫3次后，所有小鼠血清效价大于1：106，即可用于融合。融合前3天，取人IgG用生理盐水稀释到3.0mg/ml，再与生理盐水等体积混合(200μg/只BALB/c小鼠)尾静脉追加免疫，剂量为100μl/只。免疫3次后小鼠的血清效价见表1，3只小鼠血清效价均大于1：106。
表1 免疫血清效价检测
实施例2杂交瘤细胞系的制备
2-1饲养细胞的制备
以正常的12周龄BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。在融合前1天，BALB/c取眼血拉颈处死，0.1％新洁尔灭浸泡1分钟，转入75％酒精浸泡1分钟，于超净台内用消毒剪镊从后腹掀起腹部皮肤，暴露腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜消毒。用注射器注射2mlRPMI1640培养液至腹腔，注意避免穿入肠管。右手固定注射器，使针头留置在腹腔内，左手持酒精棉球轻轻按摩腹部1分钟，随后吸出注入的培养液。1000r/min离心5-10分钟，弃上清。用已加入20％新生牛血清、1％双抗的RPMI1640培养液重悬，调整细胞浓度为2-5×105个/ml，加入96孔板，100μl/孔，37℃、5％CO2培养。
2-2免疫脾细胞的制备
取实施例1中免疫血清效价达到1：106的BALB/c小鼠摘除眼球采血，并分离血清作为抗体检测时的阳性对照血清。同时通过颈脱位致死小鼠，0.1％新洁尔灭浸泡1分钟，转入75％酒精浸泡1分钟，在超净台内，于无菌的平皿上掀开左侧腹部皮肤，可看到脾脏，换剪镊，用无菌剪剪开腹膜，取出脾脏置于已盛有10ml RPMI1640培养液的平皿中，轻轻洗涤，并细心剥去周围结缔组织。将脾脏移入另一盛有10ml RPMI1640培养液的平皿中，用弯头镊子或装在1ml注射器上的弯针头轻轻挤压脾脏(也可用注射器内芯挤压脾脏)，使脾细胞进入平皿中的RPMI1640培养液。用吸管吹打数次，制成单细胞悬液。为了除去脾细胞悬液中的大团块，可用200目铜网过滤。收获脾细胞悬液，1000r/min离心5-10分钟，用RPMI1640培养液离心洗涤1-2次，然后将细胞重悬于10mlRPMI1640培养液混匀，取上述悬液，加台酚蓝染液作活细胞计数后备用。通常每只小鼠1×108-2.5×108个脾细胞。
2-3骨髓瘤细胞的制备
融合前骨髓瘤细胞维持的方式，对成功地得到杂交瘤细胞是至关重要。目标是使细胞处于对数生长的时间尽可能长，融合前肯定不能少于1周。冻存的细胞在复苏后要2周时间才能处于适合于融合的状态，长过了的骨髓瘤细胞至少5天才可能恢复。在培养过程中处于对数生长的骨髓瘤细胞维持在含10％小牛血清的培养基中，方法是用6个装5ml培养基的培养瓶，接种10倍系列稀释的骨髓瘤细胞。1周后到细胞相当密而又未长过的一瓶重新分瓶培养。典型的倍增时间为14-16小时。骨髓瘤细胞悬液制备方法：于融合前48-36小时，将骨髓瘤细胞扩大培养(一般按一块96孔板的融合实验约需2-3瓶25cm2培养瓶培养的细胞进行准备)。融合当天，用玻璃滴管将细胞从瓶壁轻轻吹下，收集于50ml离心管内。1000r/min离心5-10分钟，弃去上清。加入30mlRPMI1640培养液，同法离心洗涤一次。然后将细胞重悬浮于10mlRPMI1640培养液，混匀。取骨髓瘤细胞悬液，加0.4％胎酚蓝作活细胞计数后备用。细胞计数时，取细胞悬液0.1ml加入0.9ml中，混匀，用血球计数板计数。细胞密度(个/ml)＝(4大格细胞总数÷4)×104×稀释倍数。
2-4细胞融合及杂交瘤细胞株的选择性培养
将脾细胞与骨髓瘤细胞按1：10的比例混合于50ml离心管中，补加RPMI1640培养液至30ml，充分混匀。1000r/min离心5-10分钟，将上清尽量吸净。在手掌上轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀；置37℃水浴中预热。用1ml吸管在1分钟左右(最佳时间为45秒)加预热至40℃的50％PEG(PH 7.4)1ml，边加边轻轻晃动混匀。用玻璃滴管在90秒内加20-30ml预热至37℃的RPMI1640培养液；20-37℃静置10分钟。700r/min离心5-10分钟，弃上清。重悬于含有1％HAT与20％新生牛血清的RPMI1640培养液中，平均分装入10个96孔细胞培养板。37℃，5％CO2培养，次日补加含有1％HAT与20％新生牛血清的RPMI1640培养液至孔体积的90％。5天后用HAT培养基换出孔内1/2培养基，7天后再次换出孔内1/2培养基。
2-5阳性杂交瘤细胞株的筛选
用0.06M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释人血源IgG至2ug/ml，96孔酶标板中每孔包被100μl，用于检测融合后细胞培养上清。放置于2-8℃冰箱中过夜，第二天弃去孔中液体，ELISA洗液洗板三次，拍干，用含10％小牛血清的0.01MpH7.2的PBS，150μl/孔，37℃封闭2小时，拍干，真空封装待用。细胞融合后第九天，取细胞上清100μl于上述96孔酶标检测板中，37℃孵育40min，ELISA洗液洗板五次后加入10000倍稀释的辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG(四川迈克生物新材料技术有限公司生产，批号081419)100μL/孔，37℃孵育30min同上洗板后，每孔加入100μL含0.1％(M/V)邻苯二胺，0.1％(V/V)双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃孵育10min，每孔加入50μl 2M硫酸溶液终止反应，多功能读数仪检测450nm吸收值。以融合时小鼠血清稀释至100倍为阳性对照，RPMI 1640完全培养液作为阴性对照，阴性对照OD值＜0.2，阳性对照OD值＞2.0为检测系统有效，样本OD值≥2×阴性对照OD值时，为阳性，反之为阴性。
2-6阳性杂交瘤细胞株的克隆化
按照实施例2 2-1中制备饲养细胞的方法铺板饲养细胞，制备阳性杂交瘤细胞悬液，用含20％血清的HT培养基稀释至每毫升含1个细胞的稀释度，筛选阳性孔同同实施例22-5方法连续克隆4次及以上，直至达到100％单克隆。
2-7阳性杂交瘤细胞株的冻存
将实施例2 2-6中克隆到100％单克隆且间接法检测为阳性的细胞，转入24孔继续培养，待细胞长满80％时转入细胞瓶扩大培养后，待细胞长满细胞瓶80％时分瓶传代，传代的细胞生长至对数期时，用适量无血清RPMI-1640培养基分散细胞瓶内细胞，收集细胞悬液于锥形离心管中，记录细胞悬液体积V，取适量细胞悬液进行细胞计数，得到细胞悬液密度(个/ml)，其余1000rpm离心5min后弃上清液，根据细胞密度和离心前体积算出沉淀的细胞数，向细胞沉淀中加入适量冻存液调整细胞密度至4-8×106个/ml(取适量进行计数确认，如果细胞数未在范围内，则重新离心按照细胞计数总量，重新加入适量冻存液，最终使细胞浓度在4-8×106个/ml)，然后分装于无菌冻存管中，每只冻存管分装重悬细胞冻存液0.5ml。细胞融合一次共获得1株能稳定分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，记作杂交瘤细胞株4G10，于2018年8月23日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO.C2018174。
实施例3单克隆抗体的制备
选12-14周健康的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射0.5mL液体石蜡(天津科密欧)，7天后每只小鼠腹腔注射2×106个杂交瘤细胞。接种细胞7-10天后可产生腹水，每天观察小鼠腹水产生情况，如腹部明显膨大，以手触摸时，皮肤有紧张感，即可拉颈处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中，一只小鼠可获1-5mL腹水。收集的腹水离心取上清，取小样放于-20℃冰箱保存。腹水分别用硫酸氨饱和沉淀后，再用蛋白A亲合层析柱纯化，SDS-PAGE检测抗体(本发明抗体记作人IgG-Ab)纯度大于90％。
实施例4单克隆抗体的纯化
将-20℃以下冻存人IgG-Ab腹水提前一天置于2-8℃冰箱中解冻过夜。第二天，将腹水混合，2-8℃、12000rpm离心20分钟，去油脂和沉淀，上清用MabLoading Buffer稀释5-10倍，再用0.22μm滤膜过滤。将上述滤后液上样5mL-mabselectsure介质，使用AKTA纯化仪，收集穿透。上样完成后用平衡液平衡层析柱至基线平稳，使用洗脱液洗脱目的蛋白，收集大于100mAu的洗脱峰，洗脱完成后层析柱用0.1M氢氧化钠进行清洗，然后保存层析柱。对洗脱的目的蛋白进行中和，每ml洗脱液滴加0.1mL中和液。混匀中和后，将蛋白置于5L透析液中透析，每两个小时换一次液，换液3次。将透析好的目的蛋白12000rpm离心20分钟，上清即为最终成品，并进行电泳，电泳结果如图1所示。
实施例5单克隆抗体的纯度检测
组装好电泳玻璃板，配制下层12％的分离胶和上层5％的浓缩胶的SDS-PAGE胶。组装好凝胶电泳槽，加入适量的1×电泳缓冲液。在测定抗体浓度后，取少量抗体用20mM PBS稀释到大约1mg/mL浓度，取40μl稀释后的抗体加入10μl的5×样品缓冲液，混匀后煮沸10分钟，再以5000rpm离心10分钟，备用。去上清10μl上样，先以70V电泳至浓缩胶与分离胶分界线处(约15分钟)，以140V电泳直至溴酚蓝即将跑出凝胶停止电泳。电泳完成后，从电泳玻璃板上将SDS-PAGE胶剥离下来，放入染色液中，清洗玻璃板，晾干备用。现用考马斯亮蓝染液浸染SDS-PAGE胶30分钟，再用考马斯亮蓝脱色液将胶洗脱至背景无色(可适当热脱色)。用凝胶成像仪对PAGE胶进行拍照，通过软件对图像灰度进行分析，估算抗体纯度。检测抗体电泳图各条带的分子量和蛋白带型是否正确。电泳如图2所示。
实施例6杂交瘤细胞株培养上清效价检测
用0.06M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释人血源IgG(四川迈克生物新材料技术有限公司，批号150716)至2μg/ml，96孔酶标板中每孔包被100μl。放置于冰箱中2-8℃过夜，第二天弃掉孔中液体，ELISA洗板机洗三次，拍干，用含10％小牛血清的0.01M pH7.2的PBS，150μl/孔，37℃封闭2h弃液体，拍干，用于检测细胞培养上清、腹水及抗体效价。细胞上清效价检测，从第1孔至第10孔以0.01M pH7.2的PBS缓冲液2倍逐级稀释。第11孔以融合时小鼠血清稀释至100倍作阳性对照，第12孔以RPMI 1640完全培养液作阴性对照，阴性对照OD值＜0.2，阳性对照OD值＞1.8为检测系统有效，当OD值≥2×阴性对照OD值时，为阳性，反之为阴性。检测值最低阳性孔所对应的稀释比例即为细胞培养上清效价，此杂交瘤细胞株培养上清效价可达1：2048。检测结果见表2
表2细胞上清效价检测
实施例7腹水效价检测
ELISA检测方法同实施例6。具体方法为：第1孔为原倍腹水，以0.01M pH7.2的PBS缓冲液从第2孔至第7孔10倍逐级稀释，从第8孔至第10孔以2倍逐级稀释。第11孔以融合时小鼠血清稀释至100倍作阳性对照，第12孔以RPMI1640完全培养液作阴性对照，阴性对照OD值＜0.2，阳性对照OD值＞1.8为检测系统有效，当OD值≥2×阴性对照OD值时，为阳性，反之为阴性。检测值最低阳性孔所对应的稀释比例即为腹水效价，此杂交瘤细胞株(记作4G10)所制备的抗人IgG单克隆抗体(记作人IgG-Ab)腹水效价可达1：4×106。检测结果见表3
表3 腹水抗体效价检测
实施例8抗体效价检测
先将实施例4中制备的纯化后的抗体以0.01M pH7.2的PBS缓冲液统一稀释为1mg/ml，后再稀释100倍作为初始第1孔，从第2孔开始至第11孔做3倍逐级稀释。抗体效价判定标准：以log(稀释度)为横坐标，以OD值为纵坐标作曲线，曲线方程为y＝min+(max-min)/(1+10^((logEC50-x)×Hillslope))，采用sigmaplot软件拟合曲线，取效价＝10logEC50。结果显示此杂交瘤细胞株(4G10)所分泌的抗体效价大于4×105。以同样方法对照检测两种商业化抗人IgG单克隆抗体B和C，通过拟合，中值效价均低于1×104，低于本发明的杂交瘤细胞分泌的抗体。图3与表4列出了效价测定结果。
表4 抗体效价检测
实施例9交叉反应性检测
(1)HRP标记人IgG-Ab
溶液配制：
a.2mg/ml HRP:1mgHRP溶于0.5ml纯化水中(现配现用)
b.60mM偏高碘酸钠：80.2mg偏高碘酸钠溶于6.25ml纯化水中(现配现用)
c.160mM乙二醇：8.93ul乙二醇加入1ml纯化水中(现配现用)
d.1mg/ml硼氢化钠：1mg硼氢化钠溶于1ml纯化水(现配现用)
e.饱和硫酸铵
f.0.05M碳酸盐缓冲液(pH9.6)：碳酸钠1.59g/L，碳酸氢钠2.93g/L
取0.5ml偏高碘酸钠缓慢滴加入0.5ml HRP中，边加边混匀，2-8度避光放置30min，取0.5ml乙二醇缓慢低加入上述溶液，边加边混匀，室温避光反应30min，活化的HRP缓慢加入0.5mg抗体中(标记比为1：2)，0.05M CB透析过夜，期间换液一次，取出透析带中的抗体，计算体积，每毫克抗体加入0.2ml硼氢化钠(硼氢化钠与水反应开始产生气泡时加入)，2-8度反应2h，上述溶液中加入等体积的饱和硫酸铵溶液，2-8度放置2h，10000rpm离心10min，弃去上清，沉淀用20mM PBS复溶，20mM PBS透析过夜，取出标记好的人IgG-Ab-HRP，根据体积计算相应浓度，加入等体积甘油保存。
(2)包被人IgG，鼠IgG，兔IgG，牛IgG和人IgM(2.5ug/ml)每孔100ul，4度过夜。10mMTris-HCl(7.4)+0.5％酪蛋白封闭，每孔150ul，37度2h。按上述方法标记抗人IgG-Ab，将标记好的酶标抗体分别进行1000，2000，4000倍稀释，分别与五种包被抗原进行反应，酶标抗体加量为50ul，37度孵育30min，洗板，显色，检测结果见表5，结果显示人IgG-Ab与五种抗原均无交叉反应。
表5 交叉反应性检测
酶标稀释倍数 1000倍 2000倍 4000倍
人IgG 3.31 2.78 1.92
鼠IgG 0.061 0.059 0.048
兔IgG 0.201 0.153 0.112
牛IgG 0.076 0.064 0.067
人IgM 0.021 0.031 0.042
实施例10稳定性验证
本发明单克隆抗体在恶劣环境下的稳定性将本发明的单克隆抗体人IgG-Ab在以下条件下处理：a-20℃反复冻融2次；b-20℃反复冻融3次；c-20℃反复冻融4次；d-20℃反复冻融5次；e-20℃保存7个月；f 37℃热加速7天；g 37℃热加速14天，其他条件不变，按上述方法制备成检测试剂分别检验15份阳性参考品与15份阴性参考品，符合率均为100％。表明本抗体稳定性良好，且利用本抗体制备的检测试剂精密性良好。选取效价较高的商业化抗人IgG-Ab单克隆抗体B(厦门波生)，以上述同样条件处理后制备成检测试剂分别检测15份阳性参考品与15份阴性参考品，结果显示其反复冻融5次或-20℃保存7个月37℃热加速14天后已开始部分降解，检验结果与参考品不完全符合。在表6中列出了检测结果。
表6 稳定性结果
实施例11临床诊断
(1)试剂盒制备
试剂盒采用酶联免疫吸附法，利用捕获法原理。
用0.06M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释本发明的抗体人IgG-Ab至5μg/ml，96孔酶标板中每孔包被100μl。放置于冰箱中2～8℃过夜，第二天抛弃孔中液体，ELISA洗板机洗三次，拍干，用含10％小牛血清的0.01M pH7.2的PBS，150μl/孔，37℃封闭2小时弃液体，拍干备用。将样本以0.01M pH7.2的PBS缓冲液稀释10倍，加入上述包被好的酶标孔中，以健康人血清过滤除菌后用含10％小牛血清的0.01M pH7.2的PBS缓冲液稀释100倍作阴性对照，以风症病毒IgG抗体阳性人血清灭活后用含10％小牛血清的0.01M pH7.2的PBS缓冲液稀释100倍作阳性对照，设置阴阳性对照各2孔与空白1孔，加样体积为100μl。37℃孵育60分钟，ELISA洗板机洗五次，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的重组腮腺炎病毒抗原(四川迈克生物新材料技术有限公司生产)100μL，37℃孵育30分钟同上洗板后，每孔加入100μL含0.1％(M/V)邻苯二胺，0.1％(V/V)双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃孵育10分钟，每孔加入50μL 2M硫酸溶液终止反应，测450nm吸收值(多功能读数仪，厂商Thermo，型号VarioskanFlas)。计算cut off值，(cut off＝0.10+阴性对照平均OD值)，样品OD值≥cut off值为阳性，反之为阴性。
(2)灵敏度检测
用上述方法制备的检测试剂盒分别检400例阳性样品与400例阴性样品。表6列出了本发明的单克隆抗体人IgG-Ab制备的试剂盒与商业化试剂盒(北京贝尔生物工程有限公司)的比较实验，检验结果表明本发明的单克隆抗体人IgG-Ab制备的检测试剂盒其灵敏度及特异性均高于商业化试剂盒，在表7中列出了检测结果。
表7 阳性与阴性样品检验
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

Claims (10)

1.一种杂交瘤细胞株4G10，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2018174。
2.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株所分泌。
3.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒，或者所述试剂盒是微流体芯片；优选为酶联免疫试剂盒。
5.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体在制备试剂盒中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，所述试剂盒是基于免疫检测的试剂盒。
7.根据权利要求6所述的用途，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒，或者所述试剂盒是微流体芯片；优选为酶联免疫试剂盒。
8.根据权利要求5所述的用途，所述试剂盒用于检测人IgG。
9.根据权利要求8所述的用途，所述人IgG为风疹病毒IgG。
10.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体在制备用于风疹病毒检测的试剂盒中的用途。
CN201811085465.6A 2018-09-18 2018-09-18 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 Active CN109112114B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811085465.6A CN109112114B (zh) 2018-09-18 2018-09-18 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811085465.6A CN109112114B (zh) 2018-09-18 2018-09-18 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109112114A true CN109112114A (zh) 2019-01-01
CN109112114B CN109112114B (zh) 2023-02-17

Family

ID=64859604

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811085465.6A Active CN109112114B (zh) 2018-09-18 2018-09-18 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109112114B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112010981A (zh) * 2020-09-10 2020-12-01 南京妙迪生物科技有限公司 一种小鼠抗人IgG单克隆抗体
CN112763721A (zh) * 2020-12-23 2021-05-07 迪瑞医疗科技股份有限公司 风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN116239697A (zh) * 2023-01-30 2023-06-09 上海百英生物科技股份有限公司 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0107528A2 (en) * 1982-09-10 1984-05-02 Research Corporation Human nonsecretory plasmacytoid cell line
CN1431509A (zh) * 2003-01-24 2003-07-23 湖州瑞泽生物技术有限公司 检测风疹病毒抗体IgM的免疫胶体金试剂及制备方法
WO2008014390A1 (en) * 2006-07-28 2008-01-31 Idexx Laboratories, Inc. Identification of leucocytes bearing diagnostic markers for transmissible spongiform encephalopathies
CN101430329A (zh) * 2008-09-24 2009-05-13 王贤理 免疫球蛋白g检测试剂
WO2011048043A1 (en) * 2009-10-19 2011-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag NON-CROSS-REACTIVE ANTI IgG ANTIBODIES
CN102353777A (zh) * 2011-07-05 2012-02-15 深圳市卫武光明生物制品有限公司 人巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒和检测方法
CN107012127A (zh) * 2017-04-01 2017-08-04 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗b型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体、其用途以及分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞
CN107635581A (zh) * 2015-02-13 2018-01-26 赛诺菲 用于单克隆抗体的稳定液体制剂
CN108517315A (zh) * 2018-03-30 2018-09-11 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0107528A2 (en) * 1982-09-10 1984-05-02 Research Corporation Human nonsecretory plasmacytoid cell line
CN1431509A (zh) * 2003-01-24 2003-07-23 湖州瑞泽生物技术有限公司 检测风疹病毒抗体IgM的免疫胶体金试剂及制备方法
WO2008014390A1 (en) * 2006-07-28 2008-01-31 Idexx Laboratories, Inc. Identification of leucocytes bearing diagnostic markers for transmissible spongiform encephalopathies
CN101430329A (zh) * 2008-09-24 2009-05-13 王贤理 免疫球蛋白g检测试剂
WO2011048043A1 (en) * 2009-10-19 2011-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag NON-CROSS-REACTIVE ANTI IgG ANTIBODIES
CN102656460A (zh) * 2009-10-19 2012-09-05 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 非交叉反应性抗IgG抗体
CN102353777A (zh) * 2011-07-05 2012-02-15 深圳市卫武光明生物制品有限公司 人巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒和检测方法
CN107635581A (zh) * 2015-02-13 2018-01-26 赛诺菲 用于单克隆抗体的稳定液体制剂
CN107012127A (zh) * 2017-04-01 2017-08-04 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗b型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体、其用途以及分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞
CN108517315A (zh) * 2018-03-30 2018-09-11 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAOLIN LIU等: "A Rapid Method to Characterize Mouse IgG Antibodies and Isolate Native Antigen Bingding IgG B Cell Hybridoma", 《PLOSONE》 *
R S TEDDER等: "rubella", 《J HYG.》 *
李文等: "抗人IgG（Fc特异性）单克隆抗体的制备、鉴定及应用", 《空军总医院学报》 *
段春光等: "抗人免疫球蛋白G多克隆荧光抗体的制备及在肾活检中的应用", 《医学研究生学报》 *
王香菊等: "抗人免疫球蛋白IgG单克隆抗体制备及其特性鉴定", 《中国法医学杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112010981A (zh) * 2020-09-10 2020-12-01 南京妙迪生物科技有限公司 一种小鼠抗人IgG单克隆抗体
CN112763721A (zh) * 2020-12-23 2021-05-07 迪瑞医疗科技股份有限公司 风疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN116239697A (zh) * 2023-01-30 2023-06-09 上海百英生物科技股份有限公司 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用
CN116239697B (zh) * 2023-01-30 2023-08-22 上海百英生物科技股份有限公司 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109112114B (zh) 2023-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109112114A (zh) 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN112877296B (zh) 一种抗非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株ad及其制备方法与应用
CN104357401B (zh) 可分泌抗ii型登革病毒ns1单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用
CN105112398A (zh) 一种杂交瘤细胞的制备及其分泌的单抗与应用
CN109187967B (zh) 一种检测并区分o型、a型口蹄疫病毒的双联快速检测卡及其制备方法
CN109082413A (zh) 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN109112113A (zh) 抗人IgG的单克隆抗体、杂交瘤细胞株、试剂盒及其应用
CN109734803A (zh) 抗人myo抗体及其在检测试剂盒中的应用
CN108517315B (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN105753981B (zh) 抗人呼吸道合胞病毒n蛋白抗体及应用该抗体的免疫层析试剂盒
CN109280644A (zh) 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN106636004A (zh) 一种tmv‑cmv‑pvy三重病毒胶体金快速检测试纸条
CN108330104B (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN108588031B (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN111505289A (zh) 小反刍兽疫检测试剂盒
CN109266620A (zh) 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN108588030A (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN108330105A (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN105585633B (zh) 抗人流感嗜血杆菌p6蛋白抗体及应用该抗体的免疫层析试剂盒
CN111748528B (zh) 一株分泌抗氟虫腈及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
CN109055319B (zh) 抗c-反应蛋白单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN106479984A (zh) 一种cmv‑pvy双重病毒胶体金快速检测试纸条
CN108330106A (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN108531460A (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN108384761A (zh) 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 611731 1st floor, block B, building 1, No.8, Anhe 2nd Road, high tech Zone, Chengdu, Sichuan

Applicant after: Sichuan ankerei New Material Technology Co.,Ltd.

Address before: 611730 building 3, No.16, Baichuan Road, high tech Zone (West District), Chengdu City, Sichuan Province

Applicant before: SICHUAN MACCURA BIOLOGICAL NEW MATERIAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant