CN116239697B - 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116239697B
CN116239697B CN202310045532.6A CN202310045532A CN116239697B CN 116239697 B CN116239697 B CN 116239697B CN 202310045532 A CN202310045532 A CN 202310045532A CN 116239697 B CN116239697 B CN 116239697B
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
seq
heavy chain
acid sequences
light chain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202310045532.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116239697A (zh
Inventor
刘川
王玉芳
沈涛
钱丹青
胡泽慧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Baiying Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Baiying Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Baiying Biotechnology Co ltd filed Critical Shanghai Baiying Biotechnology Co ltd
Priority to CN202310045532.6A priority Critical patent/CN116239697B/zh
Publication of CN116239697A publication Critical patent/CN116239697A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116239697B publication Critical patent/CN116239697B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
    • C12N5/0686—Kidney cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域。本发明的抗小鼠IgG的兔单克隆抗体至少具有重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3之一。该抗体可用于制备鼠IgG二抗。本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向小鼠IgG的兔单克隆抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别小鼠的IgG、小鼠IgG2a和IgG3，且与Human IgG没有交叉反应，具有重要的应用价值。

Description

一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域。
技术背景
由小鼠作为第一来源的抗体被称为第一抗体，第二抗体是能和第一抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗在间接酶联免疫、免疫层析等实验中发挥了巨大作用。
传统二抗的制备是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白，具有制备周期长，操作繁琐的缺点。
抗体库技术是一种将某种动物的所有抗体可变区基因克隆在质粒或噬菌体中表达，利用不同的抗原或抗体筛选出携带特异抗体基因的克隆，从而获得相应的特异性抗体的技术。相对于传统二抗的制备技术，抗体库技术不仅可以模拟动物免疫系统产生抗体的过程，还具有许多独特的优点，抗体库技术无需免疫，从理论上讲，10～10的库容就可能包容所有的抗体。利用抗原或抗体即可直接从非免疫动物抗体库中筛选出特异性抗体，并能筛选到针对该物种自身抗原的抗体，同时后期大量制备抗体时不再需要免疫动物，避免了不同批次免疫效果的差异对抗体的质量带来的影响。
曹飞婷等在抗小鼠IgG纳米抗体的制备及应用中，以小鼠IgG为靶点，构建纳米抗体文库，利用噬菌体筛选技术对纳米抗体文库进行筛选，筛选出抗小鼠IgG纳米抗体(曹飞婷,邹阳,方利.抗小鼠IgG纳米抗体的制备及应用[J].中国生物制品学杂志,2022(008):035.)，该项技术中没有筛选去除与人IgG有交叉结合的抗体，也没有验证筛选出的抗体与人IgG是否有交叉结合。本发明利用噬菌体筛选技术对兔抗体文库进行筛选，筛选出特异性识别小鼠IgG，且与人IgG没有交叉的兔单克隆抗体。
发明内容
本发明的主要目的是：提供一种抗小鼠IgG，且与人IgG没有交叉的兔单克隆抗体，同时还提供该抗体的应用。
本发明解决其技术问题的技术方案如下：
在本发明的第一方面，提供了一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体，所述兔单克隆抗体由重链与轻链构成，其包含选自以下任意一组的CDR区序列：
ⅰ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2第31-35、50-65、96-103位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4第24-36、52-58、91-103位氨基酸序列所示；
或ⅱ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:6第31-35、50-65、96-108位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:8第24-36、52-58、91-103位氨基酸序列所示；
或ⅲ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10第30-34、49-64、95-104位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:12第24-36、52-58、91-101位氨基酸序列所示；
或ⅳ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14第31-35、50-65、96-105位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16第24-36、52-58、91-101位氨基酸序列所示；
或ⅴ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18第31-35、50-65、96-106位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20第24-34、50-56、89-102位氨基酸序列所示；
或ⅵ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:22第31-35、50-65、96-105位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:24第24-36、52-58、91-101位氨基酸序列所示。
作为本发明的一种优选，所述的抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示，轻链氨基酸序列如SEQID NO：20所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：22所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示。
在本发明的第二方面，提供了编码如第一方面所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的核酸。
作为本发明的一种优选，所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链DNA序列如SEQ IDNO：1所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：3所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：5所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：7所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：9所示，轻链DNA序列如SEQ IDNO：11所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：13所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：15所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：17所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：19所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：21所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：23所示。
在本发明的第三方面，提供了一种含有如第二方面所述核酸的哺乳系统表达载体。
作为本发明的一种优选，哺乳系统表达载体可以为pcDNA3.4。
在本发明的第四方面，提供了一种含有如第三方面所述表达载体的宿主细胞。
作为本发明的一种优选，所述的宿主细胞可以为293F细胞。
在本发明的第五方面，提供了一种标记的抗小鼠IgG的兔抗体，其中所述抗体为第一方面所述的抗小鼠IgG的兔单克隆抗体。
作为本发明的一种优选，所述标记可以为辣根过氧化物酶或生物素。
在本发明的第六方面，提供了第一方面所述的单克隆抗体在制备特异性小鼠IgG二抗或制备小鼠IgG检测试剂中的应用。
作为本发明的一种优选，应用时，可以采用如第五方面所述的标记的抗小鼠IgG的兔抗体制备特异性小鼠IgG二抗或制备小鼠IgG检测试剂。
本发明具有如下有益效果：
1)本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向小鼠IgG的兔单克隆抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别小鼠IgG，且与人IgG没有交叉。该抗体能够用于制备小鼠IgG二抗，具有重要的应用价值。
2)在本发明的实施例4中，HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG二抗特异性识别小鼠IgG，且与人IgG没有交叉，该抗体能够用于制备识别小鼠IgG且不识别人IgG的二抗，具有重要的应用价值。
附图说明
图1和图2分别为实施例1中ELISA检测每轮淘选富集噬菌体对小鼠IgG的结合和Human IgG的结合情况图。
图3为实施例1中ELISA检测单克隆噬菌体对抗原蛋白的结合情况图。
图4为实施例1中ELISA检测阳性克隆噬菌体对抗原蛋白的结合情况图。
图5为实施例1的单克隆富集率分析图。
图6为实施例2哺乳系统表达质粒示意图。
其中，质粒Unique1-H和Unique1-L分别为哺乳系统表达兔抗体Unique1所需的重链和轻链质粒，质粒Unique2-H和Unique2-L分别为哺乳系统表达兔抗体Unique2所需的重链和轻链质粒，质粒Unique14-H和Unique14-L分别为哺乳系统表达兔抗体Unique14所需的重链和轻链质粒，质粒Unique15-H和Unique15-L分别为哺乳系统表达兔抗体Unique15所需的重链和轻链质粒，质粒Unique16-H和Unique16-L分别为哺乳系统表达兔抗体Unique16所需的重链和轻链质粒，质粒Unique17-H和Unique17-L分别为哺乳系统表达兔抗体Unique17所需的重链和轻链质粒。
图7为实施例2哺乳系统表达的山羊抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测图。
1：Unique1哺乳系统表达抗体
2：Unique2哺乳系统表达抗体
3：Unique14哺乳系统表达抗体
4：Unique15哺乳系统表达抗体
5：Unique16哺乳系统表达抗体
6：Unique17哺乳系统表达抗体
图8为实施例3中哺乳系统表达的兔抗体Unique1的结合ELISA结果图。
其中,Bio-Mouse IgG1与Bio-Mouse IgG2a的ELISA曲线重合。
图9为实施例3中哺乳系统表达的兔抗体Unique2的结合ELISA结果图。
其中,Bio-Mouse IgG1与Bio-Mouse IgG2a的ELISA曲线重合。
图10为实施例3中哺乳系统表达的兔抗体Unique14的结合ELISA结果图。
图11为实施例3中哺乳系统表达的兔抗体Unique15的结合ELISA结果图。
图12为实施例3中哺乳系统表达的兔抗体Unique16的结合ELISA结果图。
图13为实施例3中哺乳系统表达的兔抗体Unique17的结合ELISA结果图。
图14为实施例4中的ELISA检测HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG1二抗(Unique1)的结果图。
图15为实施例4中的ELISA检测HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG二抗(Unique2)的结果图。
图16为实施例4中的ELISA检测HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG二抗(Unique14)的结果图。
图17为实施例4中的ELISA检测HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG二抗(Unique15)的结果图。
图18为实施例4中的ELISA检测HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG二抗(Unique16)的结果图。
图19为实施例4中的ELISA检测HRP标记的哺乳系统表达的小鼠IgG二抗(Unique17)的结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。所用方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂和材料如无特别说明均为市售品。
实施例1筛选抗小鼠IgG的兔抗体
分别以Mouse IgG1，Mouse IgG2a，Mouse IgG3为正筛抗原，以Human IgG为负筛抗原，应用噬菌体展示技术从兔抗体噬菌体文库(文库大小为8.1x109)中筛淘抗小鼠IgG，且与Human IgG没有交叉的兔抗体。
采用固相淘选的方法，将Human IgG包被到ELISA板条上，每孔100uL，4℃过夜包被。PBST洗三遍，每孔加入200uL的酪蛋白，37℃封闭2小时。PBST洗三遍后加入噬菌体展示库(约有1x1012 CFU)，37℃孵育1小时，收集未结合的噬菌体，重复负筛三次以去除与HumanIgG结合的噬菌体。将负筛后的噬菌体加到封闭好的包被了Mouse IgG1的ELISA板条上，37℃孵育1小时。吸出未结合的噬菌体，PBST洗10遍。每孔加100uL的甘氨酸-盐酸溶液，37℃反应7分钟，轻轻吹打板孔将吸附的噬菌体洗脱下来，然后加入Tris-HCl溶液中和至中性。洗脱的噬菌体感染对数生长期的TG1细胞，扩增回收后的噬菌体，用于下一轮淘选，第二轮淘选正筛抗原更换为Mouse IgG2a，第三轮淘选正筛抗原更换为Mouse IgG3。
经过三轮淘选后，用Phage-ELISA进行验证是否特异性富集。分别将Mouse IgG1，Mouse IgG2a和Mouse IgG3包被到ELISA板条上，4℃过夜包被。PBST洗三遍后用酪蛋白37℃封闭2小时。PBST洗5遍后加入三轮淘选的噬菌体展示库，首孔约1x1012CFU，4倍梯度稀释，末孔空白，37℃结合1小时。PBST洗5遍后加入HRP标记的小鼠抗M13的二抗，37℃孵育1小时。PBST洗5遍后加TMB显色液室温避光显色5-10分钟，最后用2M硫酸终止显色，用酶标仪(厂家为ThermFisher，型号为FC)读取450nm波长下的吸光值并做Phage-ELISA结合曲线。
ELISA检测结果如图1所示，以辅助噬菌体为阴性对照，在三轮富集后，噬菌体群对Mouse IgG1，Mouse IgG2a和Mouse IgG3的亲和力逐轮升高，ELISA检测结果如图2所示，以辅助噬菌体为阴性对照，在三轮富集后，噬菌体群对Human IgG的亲和力逐轮降低。
对第三轮富集的噬菌体单克隆进行抗原结合分析，具体过程为：
用第三轮富集的噬菌体库感染TG1细胞，并从中随机挑取704个单克隆，扩增并回收噬菌体。将Mouse IgG1，Mouse IgG2a，Mouse IgG3和Human IgG分别包被到ELISA板条上，4℃过夜包被。PBST洗三遍后用酪蛋白37℃封闭2小时。将704个扩增后的单克隆噬菌体以1:1比例与酪蛋白溶液室温孵育1小时，将孵育好的噬菌体加到封闭好的酶标板中，37℃孵育1小时。PBST洗5遍后加入HRP标记的小鼠抗M13的二抗，37℃孵育1小时。PBST洗5遍后加TMB室温避光显色5-10分钟，最后用2M硫酸终止显色，用酶标仪读取450nm波长下的吸光值，吸光值在阴性对照(辅助噬菌体)两倍以上的为阳性克隆。分析单克隆噬菌体对Mouse IgG1，Mouse IgG2a，Mouse IgG3和Human IgG的结合能力，检测结果如图3所示。704单克隆噬菌体中有71个与Mouse IgG有结合,且与Human IgG没有结合的克隆，如图4所示。
对这71个阳性克隆进行测序分析，得到20个Unique sequence，其中Unique1，Unique2，Unique14，Unique15，Unique16和Unique17为优势富集克隆(如图5所示)。
Unique1的抗体重链DNA序列为SEQ ID NO：1，氨基酸序列为SEQ ID NO：2。在氨基酸序列中，第31-35位氨基酸残基(即SYYMS)为重链CDR1，第50-65位氨基酸残基(即FISSSGGRYYASWAKG)为重链CDR2，第96-103氨基酸残基(即GAYISDNL)为重链CDR3。
Unique1的抗体轻链DNA序列为SEQ ID NO：3，氨基酸序列为SEQ ID NO：4。在氨基酸序列中，第24—36位氨基酸残基(即QSSQSVYNNNRLS)为轻链CDR1，第52—58位氨基酸残基(即SASTLAS)为轻链CDR2，第91-103位氨基酸残基(即LGSYACNSADCAA)为轻链CDR3。
Unique2的抗体重链DNA序列为SEQ ID NO：5，氨基酸序列为SEQ ID NO：6。在氨基酸序列中，第31-35位氨基酸残基(即SYYMS)为重链CDR1，第50-65位氨基酸残基(即FISYSGGTYYASWAKG)为重链CDR2，第96-108氨基酸残基(即AQYVDSIYYGMDL)为重链CDR3。
Unique2的抗体轻链DNA序列为SEQ ID NO：7，氨基酸序列为SEQ ID NO：8。在氨基酸序列中，第24—36位氨基酸残基(即QSSQSVYKNSYLS)为轻链CDR1，第52—58位氨基酸残基(即QASTLAS)为轻链CDR2，第91-103位氨基酸残基(即QGEFSCSSGDCIG)为轻链CDR3。
Unique14的抗体重链DNA序列为SEQ ID NO：9，氨基酸序列为SEQ ID NO：10。在氨基酸序列中，第30-34位氨基酸残基(即DYDMS)为重链CDR1，第49-64位氨基酸残基(即IIWSGGNTDYANWASG)为重链CDR2，第95-104氨基酸残基(即SRDKSGAFGL)为重链CDR3。
Unique14的抗体轻链DNA序列为SEQ ID NO：11，氨基酸序列为SEQ ID NO：12。在氨基酸序列中，第24—36位氨基酸残基(即QSSKSVYNSNWLS)为轻链CDR1，第52—58位氨基酸残基(即ETSKLES)为轻链CDR2，第91-101位氨基酸残基(即AGGYSSSSDTT)为轻链CDR3。
Unique15的抗体重链DNA序列为SEQ ID NO：13，氨基酸序列为SEQ ID NO：14。在氨基酸序列中，第31-35位氨基酸残基(即DYDMS)为重链CDR1，第50-65位氨基酸残基(即IIWSGANTDYANWTKG)为重链CDR2，第96-105氨基酸残基(即SGDKSGAFGL)为重链CDR3。
Unique15的抗体轻链DNA序列为SEQ ID NO：15，氨基酸序列为SEQ ID NO：16。在氨基酸序列中，第24—36位氨基酸残基(即QSSKSVFNNNWLS)为轻链CDR1，第52—58位氨基酸残基(即RASTLAS)为轻链CDR2，第91-101位氨基酸残基(即AGGYSDDSDNA)为轻链CDR3。
Unique16的抗体重链DNA序列为SEQ ID NO：17，氨基酸序列为SEQ ID NO：18。在氨基酸序列中，第31-35位氨基酸残基(即NYAVS)为重链CDR1，第50-65位氨基酸残基(即IMPGGGNTYYPSWAEG)为重链CDR2，第96-106氨基酸残基(即GYSSGFSHFDL)为重链CDR3。
Unique16的抗体轻链DNA序列为SEQ ID NO：19，氨基酸序列为SEQ ID NO：20。在氨基酸序列中，第24—34位氨基酸残基(即QASENIYSSLA)为轻链CDR1，第50—56位氨基酸残基(即RASTLAS)为轻链CDR2，第89-102位氨基酸残基(即QSGHYGSPWSYGNG)为轻链CDR3。
Unique17的抗体重链DNA序列为SEQ ID NO：21，氨基酸序列为SEQ ID NO：22。在氨基酸序列中，第31-35位氨基酸残基(即SYDMS)为重链CDR1，第50-65位氨基酸残基(即IIWSGGNTDYANWTKG)为重链CDR2，第96-105氨基酸残基(即SGDKSGAFGL)为重链CDR3。
Unique17的抗体轻链DNA序列为SEQ ID NO：23，氨基酸序列为SEQ ID NO：24。在氨基酸序列中，第24—36位氨基酸残基(即QSSQSVYNNNWLG)为轻链CDR1，第52—58位氨基酸残基(即GASTLAS)为轻链CDR2，第91-101位氨基酸残基(即AGGYYFITDNA)为轻链CDR3。
SEQ ID NO：1：
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACA
GTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAA
TGGATCGGGTTCATTAGTAGTAGTGGTGGCAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATC
TCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTC
TGTGCCAGAGGTGCTTATATTTCTGATAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO：2：
QEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYYMSWVRQAPGKGLEWIGFISSSGGRYYASWAKGRFTI
SKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGAYISDNLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：3：
GACCCTATGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGC
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACCGCTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCC
AAGCAACTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCT
GGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACCTACTACTGTCTAGGT
AGTTATGCTTGTAATAGTGCTGATTGTGCTGCTTTCGGCGGAGGGACCATGGTGGAGATCAGT
SEQ ID NO：4：
DPMLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNNRLSWFQQKPGQPPKQLIYSASTLASGVSSRFKGSGS
GTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYACNSADCAAFGGGTMVEIS
SEQ ID NO：5：
CAGGAGCAGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACA
GCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTATTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAA
TGGATCGGATTCATTAGTTATAGTGGTGGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATC
TCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGGGAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTC
TGTGCCAGAGCGCAGTATGTTGATAGTATTTATTACGGCATGGACCTCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTC
ACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO：6：
QEQLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMSWVRQAPGKGLEWIGFISYSGGTYYASWAKGRFTI
SKTSTTVDLGITSPTTEDTATYFCARAQYVDSIYYGMDLWGPGTLVTVSS
SEQ ID NO：7：
GACCCTATGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGC
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAATAGCTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCC
AAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCCCGATTCAGCGCCAGTGGATCT
GGGACACAATTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTTCTGTCAAGGC
GAATTTAGTTGTAGTAGTGGTGATTGTATTGGTTTCGGCGGAGGGACCATGGTGGAGATCAGT
SEQ ID NO：8：
DPMLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQSSQSVYKNSYLSWYQQKPGQPPKLLIYQASTLASGVPSRFSASGS
GTQFTLTISGVQCDDAATYFCQGEFSCSSGDCIGFGGGTMVEIS
SEQ ID NO：9：
CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACCGTC
TCTGGATTCTCCCTCAGCGACTACGACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG
ATCGGAATCATTTGGAGTGGTGGTAACACGGACTACGCGAACTGGGCGAGTGGCCGATTCACCATCTCC
AAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAGTCACCCGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT
GCCAGATCTCGTGATAAAAGTGGTGCCTTTGGCTTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCTTCASEQ ID NO：10：
QSVEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGFSLSDYDMSWVRQAPGKGLEWIGIIWSGGNTDYANWASGRFTIS
KTSTTVDLKVTRPTTEDTATYFCARSRDKSGAFGLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：11：
GATGTCGTGATGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGC
CAGTCCAGTAAGAGTGTTTATAATAGCAACTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCC
AAGCTCCTGATCTACGAAACATCCAAACTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCT
GGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGC
GGTTATAGTAGTAGTAGTGATACTACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGAGATCAGT
SEQ ID NO：12：
DVVMTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSKSVYNSNWLSWYQQKPGQPPKLLIYETSKLESGVPSRFSGSGS
GTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGYSSSSDTTFGGGTEVEIS
SEQ ID NO：13：
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACC
GTCTCTGGATTCTCCCTCAGCGACTACGACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAG
TGGATCGGAATCATTTGGAGTGGTGCTAACACAGACTACGCGAATTGGACGAAAGGCCGATTCACCATC
TCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAGTCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTC
TGTGCCAGATCTGGTGATAAAAGCGGTGCCTTTGGCTTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCT
TCA
SEQ ID NO：14：
QEQLKESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGFSLSDYDMSWVRQAPGKGLEWIGIIWSGANTDYANWTKGRFTI
SKTSTTVDLKVTSPTTEDTATYFCARSGDKSGAFGLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：15：
GACCCTATGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGC
CAGTCCAGTAAGAGTGTTTTCAATAACAACTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCC
AAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCT
GGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGC
GGTTATAGTGATGATAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGCTGGAGATCAGT
SEQ ID NO：16：
DPMLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSKSVFNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGS
GTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGYSDDSDNAFGGGTELEIS
SEQ ID NO：17：
CAGAAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACA
GTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTATGCAGTGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAA
TGGATCGGAATCATGCCTGGTGGTGGTAACACATACTACCCGAGCTGGGCGGAAGGCCGATTCACCCTC
TCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGAATCTCCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTC
TGTGCCAGAGGGTATAGTAGTGGCTTCAGCCACTTTGACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTC
TCTTCA
SEQ ID NO：18：
QKQLVESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSNYAVSWVRQAPGKGLEWIGIMPGGGNTYYPSWAEGRFTL
SKTSTTVDLRISSPTTEDTATYFCARGYSSGFSHFDLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：19：
GACCCTATGCTGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTATGGGAGGCACAGTCACC
ATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTACAGCTCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCA
GGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC
GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTG
CCGATGGCGCCACTTATTACTGTCAAAGTGGTCATTATGGTAGTCCTTGGAGTTATGGGAA
TGGTTTCGGCGGAGGGACCGAGCTGGAGATCAGT
SEQ ID NO：20：
DPMLTQTPASVEAAMGGTVTIKCQASENIYSSLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGT
QFTLTISDLECADGATYYCQSGHYGSPWSYGNGFGGGTELEIS
SEQ ID NO：21：
CAGAAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGGGATCCCTGACACTCACCTGCACA
GCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACGACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAG
TGGATCGGAATCATTTGGAGTGGTGGTAATACGGACTACGCGAACTGGACGAAAGGCCGATTCACCATC
TCCAAAACCTCGACCACGGTGGAGTTGAAAGTCACCAGGCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTC
TGTGCCAGATCTGGTGATAAAAGTGGTGCCTTTGGCTTGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCT
TCA
SEQ ID NO：22：
QKQLVESGGRLVTPGGSLTLTCTASGFSLSSYDMSWVRQAPGKGLEWIGIIWSGGNTDYANWTKGRFTI
SKTSTTVELKVTRPTTEDTATYFCARSGDKSGAFGLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：23：
GACCCTATGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGC
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAATTGGTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCC
AAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCT
GGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGC
GGTTATTATTTTATTACTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCATGGTGGAGATCAGT
SEQ ID NO：24：
DPMLTQTPSSVSAAVGGTVTISCQSSQSVYNNNWLGWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGS
GTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGYYFITDNAFGGGTMVEIS
实施例2抗小鼠IgG的兔抗体哺乳系统表达纯化
以实施例1中获得的阳性克隆Unique1，Unique2，Unique14，Unique15，Unique16和Unique17为模板，利用聚合酶链式反应(PCR)技术大量扩增重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段，利用DNA重组技术将阳性克隆Unique1扩增出的重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段分别重组到重组载体中，构建图6中质粒Unique1-H和Unique1-L,利用DNA重组技术将阳性克隆Unique2扩增出的重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段分别重组到重组载体中，构建图6中质粒Unique2-H和Unique2-L,利用DNA重组技术将阳性克隆Unique14扩增出的重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段分别重组到重组载体中，构建图6中质粒Unique14-H和Unique14-L,利用DNA重组技术将阳性克隆Unique15扩增出的重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段分别重组到重组载体中，构建图6中质粒Unique15-H和Unique15-L,利用DNA重组技术将阳性克隆Unique16扩增出的重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段分别重组到重组载体中，构建图6中质粒Unique16-H和Unique16-L,利用DNA重组技术将阳性克隆Unique17扩增出的重链可变区DNA片段和轻链可变区DNA片段分别重组到重组载体中，构建图6中质粒Unique17-H和Unique17-L。
运用脂质体转染法将构建成功的重组载体转染293F细胞。取对数生长期293F细胞接种至6孔板中，细胞密度为1.5×106cell/mL，37℃、CO2培养箱中微孔板振荡器培养，1-3h后进行转染。将脂质体一载体混合液加入细胞孔，培养2、4、6天补料补液，第7天收样纯化。用20mL 1xPBS，1mL/min的流速平衡层析柱，1mL/min的流速上样，20mL 1xPBS，1mL/min的流速洗杂，用柠檬酸缓冲液(PH3.4)洗脱，流速1mL/min，分管收集，每管约500uL。共收集10管，使用NanoDrop仪器读取280nm吸光度值。将高浓度蛋白吸至透析袋放1XPBS的烧杯中透析。收集纯化好的抗体其还原条件下的SDS-PAGE结果如图7。
从图7可以看出，纯化好的抗体具有较高的纯度。
实施例3哺乳系统表达的兔抗体的结合ELSIA
用ELISA对哺乳系统表达的兔抗体进行验证。将实施例2中哺乳系统表达抗小鼠IgG的兔抗体稀释后分别包被到ELISA板条，4℃过夜，3％的酪蛋白37℃封闭1小时，将生物素标记的Mouse IgG1、Mouse IgG2a、Mouse IgG3稀释后作为首孔浓度，4倍梯度稀释，末孔为空白，37℃孵育1小时，PBST洗板5次后拍干，用SA-HRP做二抗，37℃孵育1小时，PBST洗板5次后拍干。每孔加100uL TMB室温避光反应5-10min，用2M硫酸终止显色，用酶标仪读取450nm波长下的吸光值。
结果如图8、图9、图10、图11、图12和图13所示，哺乳系统表达的兔抗体Unique1，Unique2，Unique14，Unique15，Unique16和Unique17都与Mouse IgG1、Mouse IgG2a和MouseIgG3呈现高亲和力结合，与Human IgG没有结合。
实施例4用哺乳系统表达的抗小鼠IgG兔抗体制备HRP标记的小鼠IgG二抗
按照抗体－HRP标记试剂盒操作说明书(厂家为广州华银医药科技有限公司)对哺乳表达的抗小鼠IgG1兔抗体进行标记，具体为实验前30分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(18～25℃)。配制CB(50mM碳酸盐缓冲液，pH 9.6，25℃)和PBS(10mM磷酸盐、0.9％NaCl缓冲液，pH 7.2，25℃)各1500mL。5mg/mL的哺乳系统表达的抗小鼠IgG1兔抗体溶液于50mM CB(pH 9.6)4℃透析过夜，换液2～3次。在避光条件下取0.4mL的超纯水加入HRP管中，充分混匀，取1mL超纯水加入过碘酸钠(NaIO3)管中，充分混匀。取溶好的NaIO3溶液45uL加入到溶好的HRP溶液中，边加边混匀，室温暗置反应20min。取乙二醇40uL加入到上述溶液中，充分混匀，室温暗置反应30min。将上述氧化好的HRP溶液加入到哺乳系统表达的抗小鼠IgG1兔抗体溶液中，充分混匀，室温透析交联2.5小时。交联透析液为50mM CB(pH 9.6)缓冲液。取0.5mL超纯水加入硼氢化钠(NaBH4)管，颠倒数次混匀。将交联完毕的抗体－HRP溶液从透析袋中取出置于棕色玻璃瓶中，加NaBH4溶液80uL，置4℃避光反应2小时，每隔30分钟轻轻摇匀一次。将还原完毕的抗体-HRP溶液置于10mM PBS(pH 7.2)溶液中4℃透析过夜(18小时以上)。换液3～4次，第一次换液时间间隔2小时。收获标记好的抗体－HRP溶液，备用(可加等量甘油或其他蛋白保护剂)。
分别用Mouse IgG和Human-IgG包被酶标板，首孔2.5ug/mL，四倍梯度稀释，末孔空白，4℃过夜。第二天用PBST洗3-5次，拍干后每孔加200uL 3％酪蛋白，37℃封闭1h，用PBST洗3-5次，拍干后每孔加100uL HRP标记的兔抗体(1mg/mL，1:2000稀释使用)，37℃孵育1h，用PBST洗3-5次，拍干后每孔加100uL TMB，37℃避光反应5-10min，最后每孔加50uL 2M硫酸终止显色，读取450nm处的吸光值。
结果如图14、图15、图16、图17、图18和图19所示，HRP标记的哺乳系统表达的抗小鼠IgG兔抗体与Mouse IgG有结合，与Human IgG都没有结合，可作为小鼠IgG二抗。
以上仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (8)

1.一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体，其特征在于，其包含选自以下任意一组的CDR区序列：
ⅰ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2第31-35、50-65、96-103位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4第24-36、52-58、91-103位氨基酸序列所示；
或ⅱ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:6第31-35、50-65、96-108位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:8第24-36、52-58、91-103位氨基酸序列所示；
或ⅲ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10第30-34、49-64、95-104位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:12第24-36、52-58、91-101位氨基酸序列所示；
或ⅳ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14第31-35、50-65、96-105位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16第24-36、52-58、91-101位氨基酸序列所示；
或ⅴ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18第31-35、50-65、96-106位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20第24-34、50-56、89-102位氨基酸序列所示；
或ⅵ)所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:22第31-35、50-65、96-105位氨基酸序列所示，轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:24第24-36、52-58、91-101位氨基酸序列所示。
2.根据权利要求1所述的抗小鼠IgG的兔单克隆抗体，其特征在于，所述的抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示；或重链氨基酸序列如SEQ IDNO：18所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示；或重链氨基酸序列如SEQ ID NO：22所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示。
3.编码如权利要求1或2所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的核酸。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，所述抗小鼠IgG的兔单克隆抗体的重链DNA序列如SEQ ID NO：1所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：3所示；或者重链DNA序列如SEQ IDNO：5所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：7所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：9所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：11所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：13所示，轻链DNA序列如SEQID NO：15所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：17所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：19所示；或者重链DNA序列如SEQ ID NO：21所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO：23所示。
5.一种含有如权利要求3或4所述核酸的哺乳系统表达载体。
6.一种含有如权利要求5所述表达载体的宿主细胞。
7.一种标记的抗小鼠IgG的兔抗体，其特征在于，所述抗体为如权利要求1或2所述的抗小鼠IgG的兔单克隆抗体。
8.如权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备特异性小鼠IgG二抗或制备小鼠IgG检测试剂中的应用。
CN202310045532.6A 2023-01-30 2023-01-30 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用 Active CN116239697B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310045532.6A CN116239697B (zh) 2023-01-30 2023-01-30 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310045532.6A CN116239697B (zh) 2023-01-30 2023-01-30 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116239697A CN116239697A (zh) 2023-06-09
CN116239697B true CN116239697B (zh) 2023-08-22

Family

ID=86628981

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310045532.6A Active CN116239697B (zh) 2023-01-30 2023-01-30 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116239697B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109085366A (zh) * 2018-09-14 2018-12-25 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司 一种超灵敏检测小鼠IgG的ELISA方法
CN109112114A (zh) * 2018-09-18 2019-01-01 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
WO2019072977A1 (en) * 2017-10-11 2019-04-18 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. NANOCORPS ANTI-IGG
CN112812190A (zh) * 2020-05-15 2021-05-18 泰州市百英生物科技有限公司 一种抗小鼠和家兔IgG的羊驼单重链纳米抗体及应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019072977A1 (en) * 2017-10-11 2019-04-18 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. NANOCORPS ANTI-IGG
CN109085366A (zh) * 2018-09-14 2018-12-25 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司 一种超灵敏检测小鼠IgG的ELISA方法
CN109112114A (zh) * 2018-09-18 2019-01-01 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN112812190A (zh) * 2020-05-15 2021-05-18 泰州市百英生物科技有限公司 一种抗小鼠和家兔IgG的羊驼单重链纳米抗体及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN116239697A (zh) 2023-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111704666A (zh) 新型冠状病毒n蛋白的配对单克隆抗体及其应用
US20200088722A1 (en) Pivka-ii measurement method, measurement reagent, and measurement kit
EP3376226A1 (en) Method and kit for preparing antibody pair and use of kit, and system for preparing antibody pair
CN116375856A (zh) 一种抗Tau蛋白的单克隆抗体1A5-47H7和基于其的产品以及应用
CN111018971B (zh) 柯萨奇病毒a6型实心病毒的单克隆抗体及其应用
CN114702578A (zh) 新型冠状病毒Omicron突变株特异性抗体及其应用
CN112812190B (zh) 一种抗小鼠和家兔IgG的羊驼单重链纳米抗体及应用
CN115286712A (zh) 新型冠状病毒Delta突变株特异性抗体及其应用
CN117720650A (zh) 抗人呼吸道合胞病毒抗体及其应用
CN116239697B (zh) 一种抗小鼠IgG的兔单克隆抗体及其应用
CN115772223A (zh) 一种抗小鼠IgG1的山羊抗体及其应用
CN110938141A (zh) 柯萨奇病毒a6型空心病毒的单克隆抗体及其应用
CN116284384A (zh) 孕酮重组单克隆抗体制备方法及应用
WO2018074533A1 (ja) 抗ヒトｂｎｐ断片（４－３２）抗体を用いた免疫測定方法
CN115960216A (zh) 抗呼吸道合胞病毒抗体及其相关应用
WO2021128948A1 (zh) 抗mHIN2蛋白抗体及其应用和包含其的试剂盒
CN115925909A (zh) 抗呼吸道合胞病毒抗体及其相关应用
CN114686441A (zh) 一种能分泌tPAI-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
JPH0572207A (ja) 非交差反応性ｃｅａ遺伝子系統群員抗体を用いる免疫検定方法
CN115772224A (zh) 一种抗小鼠IgG2a的山羊抗体及其应用
CN110724671A (zh) 杂交瘤细胞株1g8、抗体及其应用
CN117343171B (zh) 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用
CN116284363B (zh) 新型冠状病毒OmicronBA.2/4/5突变株特异性抗体及其应用
WO2023238821A1 (ja) 抗ミオグロビンモノクローナル抗体
JP5448424B2 (ja) ヒトＩｇＧのＦｃを含有するタンパク質の測定試薬

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant