CN101430329A - 免疫球蛋白g检测试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种免疫球蛋白G检测试剂，成分包括一种能使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂和一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂。所述抗IgG抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。IgG反应剂和抗IgG抗体试剂可以作为两个单独的试剂构成产品的双试剂形式，也可以按一定比例混合构成产品的单试剂形式。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于测定人体体液成份的试剂组合，特别是测定人体血清中的免疫球蛋白G(IgG)的检测试剂，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。
背景技术
免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白(γ-球蛋白)中。可分为五类，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。IgG是最主要的免疫球蛋白，约占人血浆丙种球蛋白的70％，分子量约15万，含糖2～3％。IgG分子由4条肽链组成。其中分子量为2.5万的肽链，称轻链，分子量为5万的肽链，称重链。轻链与重链之间通过二硫键(—S—S—)相连接。免疫球蛋白是机体受抗原(如病原体)刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去致病作用。另一方面，免疫球蛋白有时也有致病作用。临床上的过敏症状如花粉引起的支气管痉挛，青霉素导致全身过敏反应，皮肤荨麻疹(俗称风疹块)等都是由免疫球蛋白制剂能增强人体抗病毒的能力，可作药用。如注射人血清或人胎盘中提取的丙种球蛋白制剂可防治麻疹、传染性肝炎等传染病。
已知测定免疫球蛋白G(IgG)的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法、这些方法都存在着操作繁琐，需要特殊的设备，样品需要预处理，不能进行批量样本分析和不能直接上全自动生化分析仪检测等缺点。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种IgG检测试剂，其具有样本无需稀释、操作简单、采用血清型液体恒定值校准剂后不需每批更改参数、准确度高、重复性好、抗干扰能力强、并且适用于各种类型的全自动生化分析仪的优点。
为了达到上述目的，本发明公开了一种免疫球蛋白G检测试剂，主要包括以下成分：
a、一种使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，包括占其质量百分比为：0.01-1％防腐剂、0.05-1％稳定剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂和0.1-0.5％反应促进剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；
b、一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂，包括占其质量百分比为：5-50％抗IgG抗体、0.001-0.5％抗氧化剂和0.05-20％稳定剂，还包括0.01-1％防腐剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；
c、一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括占其质量百分比为：0.01-1％防腐剂和0.1-1％稳定剂、0.3～6.0％IgA抗原和0.05-0.1％防霉剂，还包括20-100mmol/L缓冲剂。
本发明中的抗IgG抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。
本发明中的抗IgG抗体试剂中的稳定剂可以由乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛或人血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇、海藻糖中的一种或多种构成。
本发明中的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、
PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液，PH值为5-10。
本发明中的缓冲液优选磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为7.4-8.1。
本发明中的表面活性剂选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂。
本发明中的表面活性剂优选非离子表面活性剂。
本发明中的电解质可以是阴离子或阳离子。
本发明中的电解质优选阳离子中的氯化钠。
本发明中的防腐剂选自叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、广谱杀菌剂。
本发明的原理是利用抗原抗体反应，加入反应剂，即样品稀释液，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露，然后加入抗IgG抗体试剂；高特异反应性的抗IgG抗体试剂与样本中相应的IgG抗原反应，形成不溶性的抗原-抗体复合物，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的IgG含量成正比，在规定波长下测定该不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知恒定的校准剂比较，通过公式
式中：ΔAU为以空白管吸光度为对照的样品管吸光度
ΔAS为以空白管吸光度为对照的校准管吸光度
CS为校准剂中IgG的浓度
可计算出样本中IgG的含量。
本发明方法及试剂操作简单、样本不用预稀释，采用血清型液体恒定值校准液后不需每批更改参数，准确度高、重复性好、抗干扰能力强。并且还适用于各种类型的全自动生化分析仪。
具体实施方式
本发明所提供一种免疫球蛋白G检测试剂，包括：
a、一种使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，包括占其质量百分比为：0.01-1％防腐剂、0.05-1％稳定剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂和0.1-0.5％反应促进剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；
缓冲剂可以是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液等，本发明优选磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为5-10，本发明优选PH值为7.4-8.1，在此范围内反应效果最好；
防腐剂可以是叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚或广谱杀菌剂，本发明从环保角度考虑，优选广谱杀菌剂；
稳定剂的可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛或人血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇或海藻糖；
电解质的可以是阴离子或阳离子，本发明优选阳离子中的氯化钠(NaCl)；
加速剂可以是聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000，本发明优选聚乙二醇6000；
表面活性剂可以是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂，本发明优选非离子表面活性剂，包括：Theist、Tween系列、聚氧乙烯月桂醚系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚等，这些表面活性剂可以单独使用，也可以两种或两种以上混合使用；
反应促进剂可以是溴化己二甲胺或聚凝胺；
b、一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂，包括占其质量百分比为：5-50％抗IgG抗体、0.001-0.5％抗氧化剂和0.05-20％稳定剂，还包括0.01-1％防腐剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；
抗IgG抗体可以是羊抗人IgG抗血清、马抗人IgG抗血清、鼠抗人IgG抗血清、兔抗人IgG抗血清等，这些血清均可外购获得，也可自制；
抗氧化剂可以是丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物、磷脂等。抗氧化剂可以先溶解在10-100ml丙二醇或乙醇中，然后加入到抗IgG抗体试剂中；
缓冲剂可以是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液等，本发明优选磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为5-10，本发明优选PH值为7.4-8.1，在此范围内反应效果最好；
防腐剂可以是叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚或广谱杀菌剂，本发明从环保角度考虑，优选广谱杀菌剂；
稳定剂的可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛(人)血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇或海藻糖；
电解质的可以是阴离子或阳离子，本发明优选阳离子中的氯化钠(NaCl)；
加速剂可以是聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000，本发明优选聚乙二醇6000；
表面活性剂可以是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂，本发明优选非离子表面活性剂，包括：Theist、Tween系列、聚氧乙烯月桂醚系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚等，这些表面活性剂可以单独使用，也可以两种或两种以上混合使用；
c、一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括占其质量百分比为：0.01-1％防腐剂和0.1-1％稳定剂、0.3～6.0％IgG抗原和0.05-0.1％防霉剂，还包括20-100mmol/L缓冲剂。
缓冲剂可以是PBS、Tris、TAPS、、HEPPS、CHES、CAPS、CAPSO、POPSO、Tricie、甘氨酸、双甘氨肽、二甘氨酸、硼酸盐等；
防腐剂可以是叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、广谱杀菌剂等，可以单独使用或几种混合使用；
防霉剂可以是丙酸钠、脱氧乙酸等，也可单独使用或几种混合使用；
稳定剂可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛(人)血清白蛋白、丙三醇、单糖、多糖等，可以单独使用或几种混合使用。
以上所述的所有生化原料和试剂均可外购获得。作为双试剂使用时，IgG反应剂和抗IgG抗体试剂可以按3：1的体积比例进行组合搭配，也可以是4：1、5：1、或7：1。
本发明中IgG浓度值有以下几个选择：
第1点为0mg/L，用生理盐代替；
第2点为3.0-8.0g/L，本发明优选6.0g/L；
第3点10.0-15.0g/L，本发明优选12.0g/L；
第4点15.0-30.0g/L，本发明优选20.0g/L；
第5点25.0-60.0g/L；本发明优选30.0g/L。
液体血清型IgG恒定值校准剂按照上述不同的IgG浓度值加入相应的的IgG抗原。IgG抗原可直接外购，或者自制。本发明的标准配置为每个上述双试剂和/或单试剂配置有4瓶IgG浓度相异的校准剂。
以下是本发明中IgG检测试剂的制备方法，产品在2～8℃避光条件下有效期为一年。
实施例一：
1、IgG反应剂(R1)
磷酸盐(缓冲剂) 100mmol/L
聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂) 5％
NaCL(电解质) 20％
PEG-6000(高分子加速剂) 4％
广谱杀菌剂(防腐剂) 3％
溴化己二甲胺(反应促进剂) 0.3％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 0.5％
2、抗IgG抗体试剂(R2)
磷酸盐(缓冲剂) 100mmol/L
聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂) 5％
NaCL(电解质) 10％
PEG-6000(高分子加速剂) 4％
广谱杀菌剂(防腐剂) 0.4％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 0.05％
兔抗人IgG抗血清 5％
丁基羟基茴香醚(抗氧化剂) 0.01％
甘露糖醇(稳定剂) 5％
3、液体血清型IgG恒定值校准剂
CAPSO(缓冲剂) 100mmol/L
广谱杀菌剂(防腐剂) 0.06％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 0.5％
牛血清白蛋白(稳定剂) 0.5％.
丙酸钠(防霉剂) 0.8％
将IgG抗原按照第1点为0g/L，第2点为6.0g/L；第3点为12.0g/L；第4点为20.0g/L；第5点为30.0g/L加入上述溶液中，然后用0.22μm的滤膜抽滤除菌，放2-8℃保存。
也可将(R1)与(R2)按3：1的比例混合，以作为单一试剂使用。
实施例二：
1、IgG反应剂(R1)
磷酸盐缓冲液 5mmol/L
聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂) 0.1％
NaCL(电解质) 0.1％
PEG-6000(高分子加速剂) 20％
广谱杀菌剂(防腐剂) 0.1％
聚凝胺(反应促进剂) 0.1％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 0.1％
2、抗IgG抗体试剂(R2)
磷酸盐(缓冲剂) 10mmol/L
聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂) 0.1％
NaCL(电解质) 0.1％
PEG-6000(高分子加速剂) 7％
广谱杀菌剂(防腐剂) 0.01％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 2％
羊抗人IgG抗血清 40％
丁基羟基茴香醚(抗氧化剂) 0.5％
氯化镁(稳定剂) 1％
3、液体血清型恒定值IgG校准剂
CAPSO(缓冲剂) 100mmol/L
广谱杀菌剂(防腐剂) 0.01％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 0.1％
牛血清白蛋白(稳定剂) 0.5％.
丙酸钠(防霉剂) 0.05％
将IgG抗原按照第1点为0g/L，第2点为6.0g/L；第3点为12.0g/L；第4点为20.0g/L；第5点为30.0g/L加入上述溶液中，然后用0.22μm的滤膜抽滤除菌，放2-8℃保存。
也可将(R1)与(R2)按3：1的比例混合，以作为单一试剂使用。
实施例三：
1、IgG反应剂(R1)
磷酸盐缓冲液 200mmol/L
聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂) 10％
NaCL(电解质) 40％
PEG-6000(高分子加速剂) 80％
广谱杀菌剂(防腐剂) 5％
聚凝胺(反应促进剂) 0.5％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 1％
2、抗IgG抗体试剂(R2)
磷酸盐(缓冲剂) 200mmol/L
聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂) 10％
NaCL(电解质) 5％
PEG-6000(高分子加速剂) 2％
广谱杀菌剂(防腐剂) 1％
乙二胺四乙酸二钠(稳定剂) 0.05％
马抗人IgG抗血清 20％
二丁基羟基甲苯(抗氧化剂) 0.3％
丙三醇(稳定剂) 10％
3、液体血清型恒定值IgG校准剂
CAPSO(缓冲剂) 20mmol/L
广谱杀菌剂(防腐剂) 1％
丙三醇(稳定剂) 1％
牛血清白蛋白(稳定剂) 1％
脱氧乙酸(防霉剂) 0.1％
将IgG抗原按照第1点为0g/L，第2点为6.0g/L；第3点为12.0g/L；第4点为20.0g/L；第5点为30.0g/L加入上述溶液中，然后用0.22μm的滤膜抽滤除菌，放2-8℃保存。
也可将(R1)与(R2按3：1的比例混合，以作为单一试剂使用。
以下描述测定的具体操作步骤：
一、双试剂基本操作：
(仪器：具有340nm波长，37℃恒温装置的生化分析仪)
结果计算：
式中：ΔAU以空白管吸光度为对照的样品管吸光度
ΔAS以空白管吸光度为对照的校准管吸光度
CS校准液中IgG的浓度
二、单试剂基本操作：
(仪器：具有340nm波长，37℃恒温装置的生化分析仪)
结果计算：
式中：ΔAU以空白管吸光度为对照的样品管吸光度
ΔAS以空白管吸光度为对照的校准管吸光度
CS校准液中IgG的浓度。
Claims (10)
1.一种免疫球蛋白G检测试剂，包括：
a、一种使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，包括占其质量百分比为：0.01-1％防腐剂、0.05-1％稳定剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂和0.1-0.5％反应促进剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；
b、一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂，包括占其质量百分比为：5-50％抗IgG抗体、0.001-0.5％抗氧化剂和0.05-20％稳定剂，还包括0.01-1％防腐剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；
c、一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括占其质量百分比为：0.01-1％防腐剂和0.1-1％稳定剂、0.3～6.0％IgG抗原和0.05-0.1％防霉剂，还包括20-100mmol/L缓冲剂。
2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述抗IgG抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。
3.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述抗IgG抗体试剂中的稳定剂可以由乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛或人血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇、海藻糖中的一种或多种构成。
4.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液，PH值为5-10。
5.根据权利要求4所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为7.4-8.1。
6.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述表面活性剂选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂。
7.根据权利要求6所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述表面活性剂为非离子表面活性剂。
8.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述电解质可以是阴离子或阳离子。
9.根据权利要求8所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述电解质为阳离子中的氯化钠。
10.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为：所述防腐剂选自叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、广谱杀菌剂。
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