CN112755053A - 一种中药天龙的加工工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种中药天龙的加工工艺，包括以下步骤：S1.将天龙杀死，晒干，磨粉，过筛，得到天龙粉；S2.将天龙粉加入纯水中，超声波辅助常温提取，过滤，收集滤液，滤渣留用；S3.将步骤S2得到的滤渣经过超临界流体萃取得到萃取液，渣滓留用；S4.将步骤S3得到的渣滓与纯水混合，调节条件，加入胰蛋白酶，酶解后，调节条件，加入胃蛋白酶，酶解后，灭酶，加入碳酸氢钠调节pH值，过滤，得到酶解液；S5.合并步骤滤液，萃取液和酶解液，混合均匀，浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到天龙冻干粉。本发明制备工艺简单，制得的天龙冻干粉不仅具有抗肿瘤的效果，同时具有良好的治疗不孕症的作用，可以进一步制备相应的药物。

Description

一种中药天龙的加工工艺
技术领域
本发明涉及中药加工技术领域，具体涉及一种中药天龙的加工工艺。
背景技术
中药天龙又名壁虎，为壁虎科动物无蹼壁虎或多疣壁虎的干燥全体，性寒， 有小毒，具有止咳平喘、解毒散结、祛风定惊、通络止痛等功效。大量临床研究 发现，天龙对多种恶性肿瘤都具有一定抑制作用，包括肝癌、食道癌、胃癌、肺 癌、甲状腺癌等。天龙含有蛋白质、多糖、组织胺类、脂肪酸、核苷等多种化学 成分，天龙体内的抗肿瘤活性成分及药理作用机制的研究一直是天龙研究的热 点。研究表明，天龙抗肿瘤的药理机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和分化，抑制 肿瘤新生血管生成，增强细胞免疫活性等相关，但是其抗肿瘤活性成分与天龙的 加工方法有关，尚没有较好的加工方法能够促进天龙的活性成分大量溶出，并发 现其具有的其他活性。
发明内容
本发明提供一种中药天龙的加工工艺，其目的在于，提供一种中药天龙的全 新的加工工艺，得到的天龙冻干粉具有预防和治疗不孕症的活性。
本发明提供一种中药天龙的加工工艺，包括以下步骤：
S1.将天龙杀死，晒干，磨粉，过筛，得到天龙粉；
S2.将天龙粉加入纯水中，超声波辅助常温提取1-2h，过滤，收集滤液，滤 渣留用；
S3.将步骤S2得到的滤渣经过超临界流体萃取得到萃取液，加入食品级乳 化剂高速乳化，得到均匀的萃取液，渣滓留用；
S4.将步骤S3得到的渣滓与纯水混合，调节为第一条件，加入胰蛋白酶， 酶解1-2h后，调节为第二条件，加入胃蛋白酶，酶解1-2h后，灭酶，加入碳酸 氢钠调节pH值，过滤，得到酶解液；
S5.合并步骤S2得到的滤液，步骤S3得到萃取液和步骤S4得到的酶解液， 混合均匀后，陶瓷膜超滤浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到天龙冻干粉。
作为本发明进一步的改进，步骤S1所述过筛的筛网为100-200目。
作为本发明进一步的改进，步骤S2所述天龙粉和纯水的质量体积比为1： (5-10)，所述超声波功率为1000-1500W。
作为本发明进一步的改进，步骤S3所述超临界流体萃取条件为：萃取压力： 6-12MPa；萃取温度：30-35℃；CO2流量：5-10L/h；萃取时间：1-2h；夹带剂： 乙醇。
作为本发明进一步的改进，所述超临界流体萃取条件为：萃取压力：10MPa； 萃取温度：33℃；CO2流量：7L/h；萃取时间：1.5h；夹带剂：乙醇。
作为本发明进一步的改进，步骤S4所述渣滓与纯水的质量体积比为1： (3-5)，所述胰蛋白酶的添加量为1000U/kg,所述胃蛋白酶的添加量为1200U/kg。
作为本发明进一步的改进，步骤S4所述第一条件：pH＝7.8-8.5，温度为37℃； 所述第二条件：pH＝1.5-5，温度为37-39℃；所述调节pH值为6.8-7.2。
作为本发明进一步的改进，步骤S5所述陶瓷膜超滤浓缩的条件：陶瓷膜的 孔径为0.10-0.50μm，操作条件为：跨膜压差为0.20-0.25MPa，过滤温度为 35-40℃，膜面流速为7m/s-10m/s；所述冷冻干燥的条件为-10℃冷冻20min后-35℃ 冷冻10-15h。
本发明进一步保护一种上述中药天龙的加工工艺制备得到的天龙冻干粉。
本发明进一步保护一种上述的天龙冻干粉在制备预防或治疗不孕症的药物 中的应用。
本发明具有如下有益效果：本发明采用水提法、超临界流体法和酶解法结合 加工中药天龙，有效提取其有效成分，且制备工艺简单，制得的天龙冻干粉不仅 具有抗肿瘤的效果，同时具有良好的治疗不孕症的作用，可以进一步制备相应的 药物。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显 然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施 例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性 劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种中药天龙的加工工艺，包括以下步骤：
S1.将天龙杀死，晒干，磨粉，过100目筛，得到天龙粉；
S2.将10g天龙粉加入50mL纯水中，功率为1000W超声波辅助常温提取 1h，过滤，收集滤液，滤渣留用；
S3.将步骤S2得到的滤渣经过超临界流体萃取得到萃取液，加入食品级乳 化剂高速乳化，得到均匀的萃取液，渣滓留用；
所述超临界流体萃取条件为：萃取压力：6MPa；萃取温度：30℃；CO2流量： 5L/h；萃取时间：1h；夹带剂：乙醇；
S4.将步骤S3得到的17g渣滓与51g纯水混合，加1mol/L的NaOH溶液调 节为pH＝7.8，温度为37℃，加入胰蛋白酶，添加量为1000U/kg，酶解1h后，加 1mol/L的HCl溶液调节为pH＝1.5，温度为37℃，加入胃蛋白酶，添加量为 1200U/kg，酶解1h后，灭酶，加入碳酸氢钠调节pH值，过滤，得到酶解液；
S5.合并步骤S2得到的滤液，步骤S3得到萃取液和步骤S4得到的酶解液， 混合均匀后，陶瓷膜超滤浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到天龙冻干粉；
陶瓷膜超滤浓缩的条件：陶瓷膜的孔径为0.10μm，操作条件为：跨膜压差 为0.20MPa，过滤温度为35℃，膜面流速为7m/s；
冷冻干燥的条件为-10℃冷冻20min后-35℃冷冻10h。
实施例2
一种中药天龙的加工工艺，包括以下步骤：
S1.将天龙杀死，晒干，磨粉，过200目筛，得到天龙粉；
S2.将10g天龙粉加入100mL纯水中，功率为1500W超声波辅助常温提取 2h，过滤，收集滤液，滤渣留用；
S3.将步骤S2得到的滤渣经过超临界流体萃取得到萃取液，加入食品级乳 化剂高速乳化，得到均匀的萃取液，渣滓留用；
所述超临界流体萃取条件为：萃取压力：12MPa；萃取温度：35℃；CO2流量： 10L/h；萃取时间：2h；夹带剂：乙醇；
S4.将步骤S3得到的17g渣滓与85g纯水混合，加1mol/L的NaOH溶液调 节为pH＝8.5，温度为37℃，加入胰蛋白酶，添加量为1000U/kg，酶解2h后，加 1mol/L的HCl溶液调节为pH＝5，温度为39℃，加入胃蛋白酶，添加量为1200U/kg， 酶解2h后，灭酶，加入碳酸氢钠调节pH值，过滤，得到酶解液；
S5.合并步骤S2得到的滤液，步骤S3得到萃取液和步骤S4得到的酶解液， 混合均匀后，陶瓷膜超滤浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到天龙冻干粉；
陶瓷膜超滤浓缩的条件：陶瓷膜的孔径为0.50μm，操作条件为：跨膜压差 为0.25MPa，过滤温度为40℃，膜面流速为10m/s；
冷冻干燥的条件为-10℃冷冻20min后-35℃冷冻15h。
实施例3
一种中药天龙的加工工艺，包括以下步骤：
S1.将天龙杀死，晒干，磨粉，过150目筛，得到天龙粉；
S2.将10g天龙粉加入70mL纯水中，功率为1250W超声波辅助常温提取 1.5h，过滤，收集滤液，滤渣留用；
S3.将步骤S2得到的滤渣经过超临界流体萃取得到萃取液，加入食品级乳 化剂高速乳化，得到均匀的萃取液，渣滓留用；
所述超临界流体萃取条件为：萃取压力：10MPa；萃取温度：33℃；CO2流量： 7L/h；萃取时间：1.5h；夹带剂：乙醇；
S4.将步骤S3得到的17g渣滓与75g纯水混合，加1mol/L的NaOH溶液调 节为pH＝8.1，温度为37℃，加入胰蛋白酶，添加量为1000U/kg，酶解1.5h后， 加1mol/L的HCl溶液调节为pH＝3，温度为38℃，加入胃蛋白酶，添加量为 1200U/kg，酶解1.5h后，灭酶，加入碳酸氢钠调节pH值，过滤，得到酶解液；
S5.合并步骤S2得到的滤液，步骤S3得到萃取液和步骤S4得到的酶解液， 混合均匀后，陶瓷膜超滤浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到天龙冻干粉；
陶瓷膜超滤浓缩的条件：陶瓷膜的孔径为0.30μm，操作条件为：跨膜压差 为0.22MPa，过滤温度为37℃，膜面流速为8m/s；
冷冻干燥的条件为-10℃冷冻20min后-35℃冷冻12h。
测试例1对雄激素致不孕大鼠排卵作用的影响
1.材料与方法
1.1实验材料
1.1.1动物
新生SD大鼠，清洁级，雄性，由昆明医科大学实验动物中心提供，动物合格 证号：SCXK滇K2017-0005。常规饲养，每日光照12h，21d龄断乳，给予标准 大鼠颗粒饲料。
1.1.2药物与试剂
本发明的实施例3制备的天龙冻干粉；丙酸睾丸酮注射液；卵泡雌激素(FSH)； 黄体生成素(LH)；睾酮(T)、雌激素(E2)；脱氢表雄酮(DHA)兔抗大鼠试剂盒。
1.1.3仪器
台式高速冷冻离心机；多功能酶标仪；荧光倒置显微镜及图像分析系统；超 声波细胞粉碎机、
1.2动物模型的建立
取9d龄SD雌性大鼠，于颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮1.25mg，第70 天起每日下午4点进行阴道脱落细胞涂片检查，连续11d；若阴道上皮细胞持续 角化者，提示大鼠处于无动情周期，表明雌激素致不孕大鼠(ASR)模型建立。
1.3分组及给药
选取ASR模型大鼠，随机分为模型组与给药组，每组20只，另设未经造模 的同批SD雌性大鼠为正常对照组。给药组大鼠给予灌胃给药。其中低剂量组、 中剂量组和高剂量组大鼠分别给予实施例3制备的天龙冻干粉，给药量分别为 5mg/kg、10mg/kg，20mg/kg。模型组与正常对照组每日灌胃等量蒸馏水，均每天 1次，连续30d。给药结束，连续每日阴道脱落细胞涂片，以连续出现2个动情 周期为排卵标准。
1.4观察指标
1.4.1动情周期测定
每天下午4点取阴道脱落细胞做巴氏染色和脱落细胞学检查。根据大鼠阴道 脱落细胞涂片组织学特点不同判断大鼠的动情周期，通过大鼠动情周期变化情况 来判断大鼠排卵情况。
1.4.2卵巢组织形态学观察
取大鼠卵巢组织，经10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，常规HE染色，光 学显微镜下观察卵巢组织形态学改变。
1.4.3生殖内分泌激素测定
大鼠腹主动脉取血，分离血清，按照ELISA试剂盒说明书操作要求，进行 FSH、LH、T、E2、DHA测定。
1.5统计学方法
实验数据采用SPSS 22.0以及Prism 5.0生物医学统计软件分析和作图。多组 数据两两比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1阴道脱落细胞涂片
正常大鼠阴道脱落细胞涂片呈现正常动情周期；模型组大鼠动情间期明显延 长，阴道脱落细胞呈现持续角化状态，完全丧失正常性周期，出现无动情周期， 提示造模成功；给药组大鼠动情周期仍然出现周期性变化，提示存在自发性排卵。
2.2大鼠排卵情况
低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠治疗后分别有12只、15只和19只恢复 生理周期，提示自发性排卵，排卵恢复率为60％-95％；模型组大鼠均未恢复性 周期，提示无排卵。
2.3不同给药对ASR大鼠FSH、LH、E2、DHA、T含量的影响
测定结果如表1所示，模型组大鼠FSH、LH和E2、含量明显低于正常组 (P<0.05)，DHA、T含量明显高于正常组(P<0.05)；与模型组比较，治疗组大鼠 FSH、LH和E2含量明显升高(P<0.05)，DHA、T含量明显降低(P<0.05)。
表1各组大鼠FSH、LH、E2、DHA、T含量比较
组别 n FSH(U/L) E<sub>2</sub>(ng/L) DHA(μg/L) T(ng/L) LH(U/L)
正常组 20 2.92±0.11 69.52±9.37 0.60±0.18 355.12±33.23 4.02±0.42
低剂量组 20 2.52±0.17<sup>#</sup> 62.34±8.44<sup>#</sup> 0.59±0.12<sup>#</sup> 397.24±19.62<sup>#</sup> 3.17±0.37<sup>#</sup>
中剂量组 20 2.74±0.08<sup>##</sup> 65.57±10.12<sup>##</sup> 0.60±0.17<sup>##</sup> 375.32±21.33<sup>##</sup> 3.49±0.32<sup>##</sup>
高剂量组 20 2.90±0.04<sup>##</sup> 69.12±11.24<sup>##</sup> 0.62±0.09<sup>##</sup> 352.43±17.24<sup>##</sup> 4.03±0.36<sup>##</sup>
模型组 20 1.82±0.12<sup>**</sup> 57.47±15.12<sup>*</sup> 0.92±0.21<sup>**</sup> 547.21±25.34<sup>*</sup> 2.67±0.29<sup>**</sup>
注：与正常组比较*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
研究结果表明：本发明实施例1-3制备的天龙冻干粉能明显提高雄激素致不 孕大鼠的排卵率，改善大鼠生殖内分泌功能(P<0.05)。
典型病例1
王某，女，28岁，初诊：2017年2月5日
主诉：结婚未孕3年伴经期错乱1年余，月经量时多时少。每次月经均错后10-15天，色紫黑有小血块，腹痛下坠，头晕，出冷汗。末次月经2017.2.1。
查体：脉两尺弦大而疾，关尺俱沉弱；舌苔黄腻。西医辅助检查：性激素六 项提示：LH、P明显偏低；E2、T明显偏高；B超提示：子宫附件未见明显异常， 宫内膜薄，结合临床。
中医诊断：月经不调，不孕，西医诊断：异常子宫出血
治疗方案：温阳益气、调经助孕
服用本发明实施例3制备的天龙冻干粉，每日三次，每次20g。
连续服用两个月后，服药后月经量较前稳定，色红，腹部已不痛。月经第五 日即净，血色正常，腹不痛，头痛不明显，在经期第三天复查性激素六项提示“LH 略偏低，其余各级激素均已恢复正常”，续疗三个月，于2017年10月来电告知 已怀孕。
典型病例2
胡某，女，34岁，初诊：2018年9月9日，
主诉：婚后4年余，夫妻同居，不避孕而未孕。月事不调，经行乳胀，小腹 冷胀痛，经色紫黯有块，形体肥胖；
经孕史：月经紊乱近3年，末次月经时间2015年7月3日，未生育；
中医诊断：不孕症；
西医诊断：不孕症；
治疗方案：补肾益气，温阳助孕；
服用本发明实施例3制备的天龙冻干粉，每日三次，每次20g。
连续服用两个月后，神疲、恶寒等证虽有好转、行经、服用两个月后每月经 期28天、经期第10天，继续服用，并夫妻同房2日一次，三个月后月经逾期 未行，查尿HCG呈阳性，已告怀孕。
与现有技术相比，本发明采用水提法、超临界流体法和酶解法结合加工中药 天龙，有效提取其有效成分，且制备工艺简单，制得的天龙冻干粉不仅具有抗肿 瘤的效果，同时具有良好的治疗不孕症的作用，可以进一步制备相应的药物。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明 的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。

Claims (10)

1.一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将天龙杀死，晒干，磨粉，过筛，得到天龙粉；
S2.将天龙粉加入纯水中，超声波辅助常温提取1-2h，过滤，收集滤液，滤渣留用；
S3.将步骤S2得到的滤渣经过超临界流体萃取得到萃取液，渣滓留用；
S4.将步骤S3得到的渣滓与纯水混合，调节为第一条件，加入胰蛋白酶，酶解1-2h后，调节为第二条件，加入胃蛋白酶，酶解1-2h后，灭酶，加入碳酸氢钠调节pH值，过滤，得到酶解液；
S5.合并步骤S2得到的滤液，步骤S3得到萃取液和步骤S4得到的酶解液，混合均匀后，陶瓷膜超滤浓缩，浓缩液冷冻干燥，得到天龙冻干粉。
2.根据权利要求1所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，步骤S1所述过筛的筛网为100-200目。
3.根据权利要求1所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，步骤S2所述天龙粉和纯水的质量体积比为1：(5-10)，所述超声波功率为1000-1500W。
4.根据权利要求1所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，步骤S3所述超临界流体萃取条件为：萃取压力：6-12MPa；萃取温度：30-35℃；CO2流量：5-10L/h；萃取时间：1-2h；夹带剂：乙醇。
5.根据权利要求4所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，所述超临界流体萃取条件为：萃取压力：10MPa；萃取温度：33℃；CO2流量：7L/h；萃取时间：1.5h；夹带剂：乙醇。
6.根据权利要求1所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，步骤S4所述渣滓与纯水的质量体积比为1：(3-5)，所述胰蛋白酶的添加量为1000U/kg,所述胃蛋白酶的添加量为1200U/kg。
7.根据权利要求1所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，步骤S4所述第一条件：pH＝7.8-8.5，温度为37℃；所述第二条件：pH＝1.5-5，温度为37-39℃；所述调节pH值为6.8-7.2。
8.根据权利要求1所述一种中药天龙的加工工艺，其特征在于，步骤S5所述陶瓷膜超滤浓缩的条件：陶瓷膜的孔径为0.10-0.50μm，操作条件为：跨膜压差为0.20-0.25MPa，过滤温度为35-40℃，膜面流速为7m/s-10m/s；所述冷冻干燥的条件为-10℃冷冻20min后-35℃冷冻10-15h。
9.一种如权利要求1-8任一项权利要求所述中药天龙的加工工艺制备得到的天龙冻干粉。
10.一种如权利要求9所述的天龙冻干粉在制备预防或治疗不孕症的药物中的应用。
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